CN102596155A - 用于递送美容试剂的基于肽的*** - Google Patents

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Abstract

本发明涉及包含基于肽的试剂的组合物和***,用于将美容有益试剂递送给人毛发、人皮肤或人指甲。

Description

用于递送美容试剂的基于肽的***
相关申请的交叉引用
本申请要求于2009年3月30日申请的美国临时专利申请号61/164,533的权益,其全部内容结合到本文中。
技术领域
本发明涉及包含基于肽的试剂的组合物和***,其用于将美容有益试剂递送给人毛发、人皮肤和/或人指甲。
背景
许多美容护理产品都包含一种或多种粒子有益试剂,例如着色剂和调理剂,所述调理剂能改善含角蛋白的体表例如毛发、皮肤和指甲的美容性能。这些粒子有益试剂并不与这些体表持久结合。因此,就需要将这些产品经常反复地用于体表,以维持所需效果。
已经开发出多种基于蛋白质的试剂,以试图改善有益试剂对于目标表面的结合持久性或将有益试剂定向递送到目标表面。总的来说,这些都不实用,而且许多这样的“结合”蛋白又昂贵又难以制备,包括例如免疫球蛋白、免疫球蛋白来源的蛋白质和非免疫球蛋白结合蛋白,其需要复杂的支持支架用于有效结合(参见Binz,H.等(2005)NatureBiotechnology 23,1257-1268,综述了多种支架辅助方法)。
已经报道了单链肽和基于肽的试剂用于美容应用,例如用于毛发、皮肤和指甲的传统着色剂和调理剂(Huang等美国专利7,220,405和美国专利申请公布号US2005/0226839、US2007/0053837和US2008/0152600;Wang等美国专利申请公布号US2007/0196395和US2006/0199206;O′Brien等美国专利申请公布号US2006/0073111、美国专利号7,285264和已公布的PCT申请号WO2008/054746;Beck等美国专利申请公布号US2007/0065387;Fahnestock等美国专利申请公布号US2008/0107614;和Benson等美国专利申请号12/198358和12/198382)、基于碳纳米管的毛发着色剂(Huang等美国专利申请公布号US2005/0229335)、皮肤防晒剂(Buseman-Williams等美国专利7,309,482和Lowe等美国专利申请公布号US2007/0110686)、毛发防晒剂(Beck等美国专利申请公布号2008/0175798)、抗头皮屑剂(O′Brien等美国专利申请号12/273,753)和抗痤疮剂(O′Brien等美国专利申请号12/273,778)。
使用噬菌体展示,已经鉴定出对于毛发、皮肤和/或指甲具有强亲和力的某些单链结合肽(Huang等,出处同上;Estell等,已公布的PCT申请号WO01/79479;Murray等,美国专利申请公布号2002/0098524;Janssen等,美国专利申请公布号2003/0152976;和Janssen等,已公布的PCT申请号WO04/048399)。另外,已经报道了基于带正电荷氨基酸的凭经验产生的毛发和皮肤结合肽(Rothe等,WO 2004/000257)。这些方法说明缺乏复杂支架和/或免疫球蛋白样结构的短的线性肽对于毛发、皮肤和/或指甲的表面可具有强亲和力(即Kd<10-5M)。
然而,单个短肽的结合强度可能并不足以满足大多数美容应用所需的持久性。在这些应用中,可将两种以上已鉴定的表面结合肽可连接在一起,以制备对于目标表面(即皮肤、毛发或指甲)具有更高亲和力的线性结合结构域(在本文中也称为“手”)。通常,两种以上结合结构域可通过隔开单个目标表面结合肽的短肽间隔基(spacer)连接起来。
已经报道了具有多个合理设计的结合结构域的肽,其中各结构域经设计将至少2种基底偶联在一起,其中结合结构域的至少一个经设计对于至少一种含角蛋白的身体基底(例如毛发、皮肤和/或指甲)具有亲和力,而第二结合结构域经设计对于有益试剂具有亲和力(美国已公布的专利申请号US2007/0065387(Beck等)和美国专利7,285,264(O′Brien等);和美国专利申请公布号2003/0185870(Grinstaff等))。这些基于肽的试剂包括至少两个结合结构域(在本文中称为“两手肽(two-handed peptide)”或“基于两手肽的试剂(two-handed peptide-basedreagent)”),其中每个结合结构域经设计对于其各自基底具有亲和力。
需要能将有益试剂与人毛发、皮肤和/或指甲有效偶联起来并且不是“两手”(two-handed)的选择性线性肽和美容***。还需要可用温和条件将有益试剂从肽上解离下来的选择性肽。
概述
本发明涉及美容***,其包含:包含以10-5摩尔浓度以下的Kd或MB50值与人毛发、人皮肤或人指甲中的至少一种结合的至少一个结合结构域并且还包含亲和对的第一部分的肽成分;和平均粒度介于约0.01微米和约75微米之间并具有所述亲和对的第二部分的粒子有益试剂的稳定分散体;所述至少一个结合结构域对于人毛发、皮肤或指甲的结合亲和力大于其对于所述分散体颗粒的结合亲和力。还描述了使用本发明美容***的方法,包括有益试剂的施用和将所述有益试剂从人毛发、皮肤或指甲中的至少一种中去除。
附图简述
图1描绘了本发明的一个实施方案的荧光图,生物素化HCP5二聚体肽,将颗粒结合到毛发上。
图2是直方图,显示使用二氧化硅涂覆的氧化铁颜料的本发明某些实施方案的毛发着色能力。
图3A描绘了在最初暴露于已涂覆的氧化铁颗粒之后,按照实施例7所述方法处理的毛发束。
图3B描绘了按照实施例7所述方法处理的毛发束,随后用水洗涤。
图3C描绘了按照实施例7所述方法处理的毛发束,随后用0.25%SLES洗液洗涤。
图4A是用(HCP5)2-生物素和500nm链霉抗生物素涂覆的氧化铁颗粒处理的毛发电镜图。
图4B是用(HCP5)2-生物素和200nm链霉抗生物素涂覆的氧化铁颗粒处理的毛发电镜图。
序列描述
下列序列符合37C.F.R.1.821-1.825(“包含核苷酸序列和/或氨基酸序列公开的专利申请所必备的条件—序列条款”)并符合世界知识产权组织(WIPO)标准ST.25(1998)以及EPO和PCT(5.2条和49.5(a-bis)条,和使用说明208部分和附件C)的序列表要求。在核苷酸和氨基酸的序列数据中所使用的符号和格式均符合37C.F.R.§1.822所述的规定。
SEQ ID NO:1-184和186-189是含角蛋白的体表结合肽的氨基酸序列。SEQ ID NO:1-134和184是毛发结合肽的氨基酸序列。SEQ IDNO:130-134是与毛发和皮肤结合的凭经验产生的序列。SEQ ID NO:135-182是皮肤结合肽的氨基酸序列。SEQ ID NO:183-184是指甲结合肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO:185是与金属离子结合的肽(″HAT″)标签的氨基酸序列。
SEQ ID NO:186是具有C端赖氨酸残基的SEQ ID NO:76的氨基酸序列。
SEQ ID NO:187是具有C端赖氨酸残基的SEQ ID NO:82的氨基酸序列。
SEQ ID NO:188是具有C端赖氨酸残基的SEQ ID NO:86的氨基酸序列。
SEQ ID NO:189是具有C端赖氨酸残基的SEQ ID NO:110的氨基酸序列。
SEQ ID NO:190是包含SEQ ID NO:82的随机形式的肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO:191是包含SEQ ID NO:120的随机形式的肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO:192是包含SEQ ID NO:30的随机形式的肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO:193是颜料结合肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO:194是醋酸纤维素结合肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO:195是醋酸纤维素结合肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO:196是肽HC263的氨基酸序列。
SEQ ID NO:197是肽HC264的氨基酸序列。
SEQ ID NO:198是肽HC214的氨基酸序列。
SEQ ID NO:199是肽HC204的氨基酸序列。
SEQ ID NO:200是肽HC205的氨基酸序列。
SEQ ID NO:201是肽HC352的氨基酸序列。
SEQ ID NO:202是肽HC423的氨基酸序列。
SEQ ID NO:203是肽HC424的氨基酸序列。
SEQ ID NO:204是肽(HCP5)2的氨基酸序列,在本文中也称为“HCP5-二聚体”。
SEQ ID NO:205是具有C端赖氨酸的SEQ ID NO:204的肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO:206是链霉抗生物素结合肽标签的氨基酸序列。
SEQ ID NO:207是肽HC260的氨基酸序列。
SEQ ID NO:208是肽接头“tonB”的氨基酸序列。
SEQ ID NO:209是肽桥的氨基酸序列。
SEQ ID NO:210是肽HC353的氨基酸序列。
SEQ ID NO:211是肽HC634的氨基酸序列。
SEQ ID NO:212是肽HC635的氨基酸序列。
SEQ ID NO:213是肽HC636的氨基酸序列。
SEQ ID NO:214是肽HC637的氨基酸序列。
SEQ ID NO:215是肽HC638的氨基酸序列。
SEQ ID NO:216是肽HC639的氨基酸序列。
SEQ ID NO:217是肽HC640的氨基酸序列。
SEQ ID NO:218是肽HC641的氨基酸序列。
SEQ ID NO:219是肽HC642的氨基酸序列。
SEQ ID NO:220是肽HC643的氨基酸序列。
SEQ ID NO:221是肽HC644的氨基酸序列。
SEQ ID NO:222是肽HC645的氨基酸序列。
SEQ ID NO:223-234是设计用于与颜料表面静电缔合的肽的氨基酸序列。
SEQ ID No:235是肽HHHHHH的氨基酸序列。
SEQ ID NO:225是具有C端多聚赖氨酸嵌段的SEQ ID NO:212的氨基酸序列。
说明性实施方案的详述
已经开发出将有益试剂施用于人毛发、人皮肤或人指甲中的至少一种的改进的美容***并在本文中进行描述。还描述了制备和使用这些***的方法。本发明的美容***包含肽成分和在稳定粒子分散体中提供的粒子有益试剂。
肽成分
肽成分包含与人毛发、人皮肤或人指甲中的至少一种人体表结合的至少一个肽的结合结构域。本发明某些肽成分的长度为约500个氨基酸以下。可以例如水性溶液、粉剂、乳剂、混悬剂、分散剂、凝胶剂、乳膏剂或气溶胶的形式提供肽成分。可将肽成分施用于人毛发、皮肤或指甲中的至少一种,其浓度占组合物总重量的约0.01%至约10%,在一些实施方案中,约0.01%至约5%。
在本发明的范围之内,术语“肽”、“肽的”和“多肽”可互换使用,是指两个以上氨基酸通过肽键连接在一起的聚合物,其中的肽未指定长度。肽、寡肽和多肽都包括在本定义之内。一方面,该术语还包括肽的表达后修饰,例如糖基化、乙酰化、磷酸化等。该定义还包括例如含有一种或多种氨基酸类似物或带标记的氨基酸的肽和肽模拟物。在示例性的实施方案中,肽成分包含15-500、15-250或15-100个氨基酸。下列缩写用于确定特定的氨基酸。
Figure BPA00001479937000071
Figure BPA00001479937000081
本文所用的“结合结构域”是指包含1个、理想的是2个或更多的较短的肽(“亚结构域”)的肽,其经鉴定对于特定表面例如人毛发、皮肤和/或指甲具有亲和力。在某些实施方案中,结合结构域可包含2至约50个或2至约25个较短的肽。其它实施方案包括具有包含2至约10个较短的肽的结合结构域的那些。其它实施方案是那些包含2、3、4或5个较短的肽的结合结构域。
这些较短的肽可彼此直接连接而构成结合结构域或者可通过一个或多个短肽间隔基连接而构成结合结构域。在一些实施方案中,肽间隔基的长度为1-100或1-50个氨基酸。在其它实施方案中,肽间隔基的长度为约1至约25、3至约40、或3至约30个氨基酸。在另外的其它实施方案中是长度约5至约20个氨基酸的间隔基。
在某些实施方案中,本发明的结合结构域与人毛发、皮肤和指甲中的至少一种结合的结合亲和力值为10-5M(摩尔浓度)以下。在一些实施方案中,在至少约50-500mM盐存在下,肽的结合结构域的结合亲和力值为10-5以下。术语“结合亲和力”是指结合肽与其各自的基底(在此情况下是人毛发、皮肤或指甲)的相互作用强度。结合亲和力可用结合肽的离解常数(“Kd”)或“MB50”来定义或测定。
“Kd”对应于靶标上的结合位点半数被占据时的肽浓度,即当与肽结合的靶标浓度(结合靶标材料)等于未与肽结合的靶标浓度时。离解常数越小,肽结合就越紧密。例如,具有纳摩尔浓度(nM)离解常数的肽就比具有微摩尔浓度(μM)离解常数的肽结合得更紧。本发明的某些实施方案的Kd值为10-5以下。
“MB50”是指,当产生基于ELISA的结合测定中得到的最大信号的50%的信号时的结合肽的浓度。参见例如美国专利申请公布2005/022683的实施例3;通过引用结合到本文中。MB50指示复合物各组分的结合相互作用强度或亲和力。MB50值越低,肽与它相应基底的相互作用越强,即“越好”。例如,具有纳摩尔浓度(nM)MB50的肽比具有微摩尔浓度(μM)MB50的肽结合得更紧。本发明某些实施方案的MB50值在10-5以下。
在一些实施方案中,肽的结合结构域具有由Kd或MB50值测量的小于或等于约10-5M、小于或等于约10-6M、小于或等于约10-7M、小于或等于约10-8M、小于或等于约10-9M、或小于或等于约10-10M的结合亲和力。经鉴定能与至少人毛发结合的肽也称为“毛发结合肽(HBP)”。经鉴定能与至少人皮肤结合的肽也称为“皮肤结合肽(SBP)”。经鉴定能与至少人指甲结合的肽也称为“指甲结合肽(NBP)”。
在一些实施方案中,肽的结合结构域包含长度至多约60个氨基酸的肽的结合亚结构域。某个实施方案将具有长度为7至约60个氨基酸的肽的结合亚结构域。在其它实施方案中是那些长度为7-50或7-30个氨基酸的肽的结合亚结构域。在另外的其它实施方案中是那些长度为7-27个氨基酸的肽的结合亚结构域。
尽管包含单个毛发结合结构域、皮肤结合结构域和/或指甲结合结构域的肽成分是本发明的某些实施方案,但是在本发明的其它实施方案中,有利的是肽成分包含能与人毛发、人皮肤或人指甲中的至少一种结合的不止一个结合结构域。与那些包含单个结合结构域的肽成分相比,包含多个、即两个以上结合结构域可提供例如甚至更具有美容持久性的肽成分。在一些实施方案中,肽成分包含2至约50或2至约25个肽的结合结构域。其它实施方案包括那些包含2至约10或2-5个肽的结合结构域的肽成分。
多个结合结构域可直接连接在一起或者用肽间隔基将它们连接在一起。某些肽间隔基的长度为1-100或1-50个氨基酸。在一些实施方案中,肽间隔基的长度为约1至约25、3至约40、或3至约30个氨基酸。在其它实施方案中是长度为约5至约20个氨基酸的间隔基。
本发明的结合结构域对于人毛发、皮肤或指甲的结合亲和力也比它们对于分散体颗粒的大。与对于分散体颗粒相比,结合结构域对于人毛发、皮肤或指甲的这种更优先的亲和力,导致产生更大比例的结合结构域能够与人毛发、皮肤或指甲中的至少一种结合的美容***,与结合结构域对于人毛发、皮肤或指甲的结合亲和力并不大于对于分散体颗粒的结合亲和力的那些***相比。在一些实施方案中,结合结构域对于人毛发、皮肤或指甲的结合亲和力是它们对分散体颗粒的结合亲和力的至少约2倍(即约2倍)。在其它实施方案中,结合结构域对于人毛发、皮肤或指甲的结合亲和力是它们对分散体颗粒的结合亲和力的至少5倍(即约5倍)。在另外的其它实施方案中,结合结构域对于人毛发、皮肤或指甲的结合亲和力是它们对分散体颗粒的结合亲和力的至少10倍(即约10倍)。
可用本领域技术人员已知的多种方法鉴定肽的结合结构域以及它们所包含的较短肽,所述方法包括例如任何已知生物淘选(biopanning)技术,例如噬菌体展示、细菌展示、酵母菌展示、核糖体展示、mRNA展示及其组合。
肽的随机文库的产生是熟知的并可通过包括以下技术在内的各种技术来完成:细菌展示(Kemp,D.J.;Proc.Natl.Acad.Sci.USA78(7):4520-4524(1981),和Helfman等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA80(1):31-35,(1983)),酵母菌展示(Chien等,Proc Natl Acad Sci USA88(21):9578-82(1991)),组合固相肽合成(美国专利号5,449,754,美国专利号5,480,971,美国专利号5,585,275,美国专利号5,639,603)和噬菌体展示技术(美国专利号5,223,409,美国专利号5,403,484,美国专利号5,571,698,美国专利号5,837,500);核糖体展示(美国专利号5,643,768;美国专利号5,658,754;和美国专利号7,074,557),和mRNA展示技术(PROFUSIONTM;美国专利号6,258,558;美国专利号6,518,018;美国专利号6,281,344;美国专利号6,214,553;美国专利号6,261,804;美国专利号6,207,446;美国专利号6,846,655;美国专利号6,312,927;美国专利号6,602,685;美国专利号6,416,950;美国专利号6,429,300;美国专利号7,078,197;和美国专利号6,436,665)。产生这类生物肽文库的技术描述于Dani,M.,J.of Receptor & SignalTransduction Res.,21(4):447-468(2001)。
随机产生肽的一种方法是通过噬菌体展示。自从1985年引入噬菌体展示以来,它已广泛用于发现针对药物靶标的多种配体,包括肽、蛋白质和小分子(Dixit,J.of Sd.& Ind.Research,57:173-183(1998))。该用途已经扩展到其它领域,例如研究蛋白质折叠、新的催化活性、具有新特异性的DNA-结合蛋白和用于组织工程的新的基于肽的生物材料支架(Hoess,Chem.Rev.101:3205-3218(2001)和Holmes,TrendsBiotechnol.20:16-21(2002))。Whaley等(Nature 405:665-668(2000))公开了噬菌体展示筛选在鉴别肽序列中的用途,所述肽序列可与无机半导体基底的不同晶型特异性结合。
描述了一种改良的筛选方法,其包括将肽文库与抗靶标(anti-target)接触,以去掉结合到抗靶标上的肽,然后将未结合的肽与靶标接触(Estell等WO 01/079479,Murray等美国专利申请公布号2002/0098524,和Janssen等美国专利申请公布号2003/0152976)。采用靶标/抗靶标方法,可鉴定优先与毛发、而不与皮肤结合的肽序列以及优先与皮肤、而不是毛发结合的肽序列。采用同样的方法,Janssen等(WO 04/048399)鉴定了其它含角蛋白的体表结合肽(即皮肤结合肽和毛发结合肽)、以及若干其它结合基序。
噬菌体展示是一种选择技术,其中将肽或蛋白质遗传上地融合到噬菌体外壳蛋白上,从而在噬菌体病毒体的外部上展示融合肽,而编码融合体的DNA驻留在病毒体内。展示肽及其编码DNA之间的这种物理连接,允许通过称为“生物淘选”的简单体外选择程序,筛选大量肽变体,每个变体均与相应的DNA序列连接。本文所用的“生物淘选”可用于描述任何选择程序(噬菌体展示、核糖体展示、mRNA展示等),其中针对特定靶材料(例如毛发)来淘选展示的肽文库。在其最简单的形式中,噬菌体展示生物淘选如下进行:通过将噬菌体展示的变体库与已经固定化在板或珠上的目标靶一起温育,洗去未结合的噬菌体,并通过破坏噬菌体与靶标之间的结合相互作用,洗脱特异性结合的噬菌体。然后,体内扩增洗脱的噬菌体并重复该过程,得到逐步富集的有利于最紧密结合序列的噬菌体库。经过3轮或更多轮选择/扩增,通过DNA测序对单个克隆进行表征。
还可从经报道对于人毛发、皮肤或指甲中的至少一种具有亲和力的序列中凭经验产生肽的结合结构域。例如,对于人体表具有亲和力的肽描述于美国专利7,220,405和7,285,264;美国专利申请公布号US2005-0226839、US 2005-0249682、US 2007-0065387、US 2007-0067924、US 2007-0196305、US 2007-0110686、US 2006-0073111,和US2006-0199206;美国专利申请号11/877,692;美国专利申请公布号2008-0175798;和PCT专利申请公布号WO2004048399。人体表肽也如表1A-1F所示。
表1A
Figure BPA00001479937000131
Figure BPA00001479937000141
Figure BPA00001479937000151
Figure BPA00001479937000161
Figure BPA00001479937000171
Figure BPA00001479937000181
Figure BPA00001479937000191
Figure BPA00001479937000211
Figure BPA00001479937000221
表1B
  肽ID   结构   SEQ ID NO.
  肽ID   结构   SEQ ID NO.
  MEA4-生物素   HINKTNPHQGNHHSEKTQRQK-生物素   186
  Hair2-生物素   AQSQLPDKHSGLHERAPQRYK-生物素   187
  Hair4-生物素   TPPELAHTPHHLAQTRLTDRK-生物素   188
  HCP1-生物素   THSTHNHGSPRHTNADAGNPK-生物素   189
表1C
  肽ID   序列   SEQ ID NO:
  Hair2Rnd1   DRSKLYQSLEHRQPPGAHAQ   190
  Gray3Rnd4   AHDAKHEHRKQNHTQ   191
  F4Rnd   QTHVSQPFLFHD   192
  Rfe1   WAPEKDHMQLMK   193
  CA3   NGNNHTDIPNRSSYTGGSFA   194
  CA4   SDETGPQIPHRRPTW   195
表1D
Figure BPA00001479937000231
Figure BPA00001479937000241
表1E
表1F
Figure BPA00001479937000243
在一个实施方案中,肽的结合结构域包括SEQ ID NO:1-184、186-189、196-200、204-205和211-222所示的至少一种肽。在另一个实施方案中,肽的结合结构域包括选自SEQ ID NO:1-134、184、186-189、196-200和211-222的毛发结合肽。在又一个实施方案中,肽的结合结构域是选自SEQ ID NO:130-182的皮肤结合肽。在其它实施方案中,肽的结合结构域包括SEQ ID NO:196-200或SEQ ID NO:210-222中的至少一个。
在又一个实施方案中,肽的结合结构域包括选自SEQ ID NO:130-182的至少一种皮肤结合肽。在再一个实施方案中,肽的结合结构域是选自SEQ ID NO:183-184的指甲结合肽。
除了包含与人毛发、人皮肤或人指甲中的至少一种结合的至少一个结合结构域之外,本发明的肽成分还包含亲和对的第一部分。本文所用的“亲和对”是指彼此具有已知亲和力的一对试剂,其中亲和对的第一部分并非来源于生物淘选。亲和对是基于并非基于共价键的键合缔合,包括例如基于离子键(静电相互作用)、基于氢键、基于疏水键、基于螯合、基于生物亲和力,或者亲和对是基于其组合。
例如,本发明的亲和对可包括离子键对。“离子键”对是指一部分具有净正电荷、而另一部分具有净负电荷的两部分的缔合复合物。离子键,也称为静电相互作用,是其中最强的键,强度相当于共价键,并且具有约50nm的长距离(Isrealachvili,J.N.,Intermolecular andSurface Forces,第2版;Academic Press:New York,NY(1992)第32-34页)。
某些氨基酸含有可电离的侧链基团,例如天冬氨酸和谷氨酸的侧链羧基以及位于赖氨酸、精氨酸和组氨酸残基中的氨基。当任何带电荷氨基酸在肽序列中时,一些肽常含有净电荷(正或负)并且含有一定的电荷分布。肽分子的全部或部分的净电荷可诱导与有益试剂上的带相反电荷的亲和对的第二部分的静电吸引,或者诱导与有益试剂上的带相同电荷的亲和对的第二部分的静电排斥。
离子(静电)结合对的实例包括但不限于带负电荷的肽与带正电荷粒子有益试剂偶联,带负电荷的肽与包含或涂覆有带正电荷的涂层的粒子有益试剂(例如阴离子交换树脂)偶联,带正电荷的肽与带负电荷的粒子有益试剂(例如云母、二氧化硅)偶联,带正电荷的肽与包含能提供负电荷的涂层的粒子有益试剂(例如具有例如SO4 -2基团的阳离子交换树脂)偶联。
用适当的表面处理和pH条件可获得并调节粒子有益试剂上的亲和对的第二部分的电荷和电荷密度。电荷可源自:1)表面官能团例如氨基、羧基、磺酸基和羟基等的电离;2)来自溶液的离子的特定吸附。在本文中,“特定吸附(specific adsorption)”是指吸附是部分非电性的,使得所吸附离子可产生净表面电荷。对于惰性有益试剂,本领域的多种表面处理方法都可用于产生可电离的官能团:1)使用氧等离子体来氧化特种气体的表面或等离子聚合以产生表面羟基和其它基团(C.L.Rinsch等,Langmuir(1996),12(2995-3002);2)形成具有末端官能团的自我装配的单层,例如氨丙基甲硅烷在金属氧化物表面形成硅氧烷单层(Xia,Y.N.和Whitesides,G.M.,Angew.Chem.Int.Ed.(1998),37:551-575);3)使用分层装配工艺,以将聚电解质多层吸附到任何表面上,得到具有合乎需要的电荷符号和电荷密度的带电荷表面(Decher,G.,Science(1997),277:1232-1237);和4)带电荷聚合物或溶胶凝胶的沉淀-涂层。有益试剂的表面电荷可用其表面等电点(IEP)、净表面电荷为零时的pH值来表征。所以在pH低于其IEP时,有益试剂,尤其是粒子有益试剂上的亲和对的第二部分,带正电荷;而在pH大于其IEP时,有益试剂则带负电荷。
静电相互作用的范围可用离子强度进一步调节:较低的离子强度提供较长的相互作用范围,而较高的离子强度则提供较短的相互作用范围。对相互作用范围的调节可用于在低离子强度下获取稳定的肽-有益试剂加合物,而在较高离子强度下能增强有益试剂向体表的递送。
亲和对的第一部分的净电荷可以是负的或正的,这取决于***的pH。在一个实施方案中,亲和对的第一部分的净电荷在指定pH时是正的,其中pH范围可为3.0至约10。在另一个实施方案中,亲和对的第一部分的净电荷在指定pH时是负的,其中pH范围可为3.0至约10。
本发明的亲和对还可包括基于氢键的对。“氢键”对是指某一部分的相对电负性原子的氢原子与另一部分的电负性原子的缔合复合物。
“疏水键”对是指其中两部分具有疏水性结构域或具有能使其形成缔合复合物的特征的两个部分的缔合复合物。粒子有益试剂的表面可以是疏水性的。同样,可在肽成分中掺入包含有效数量的疏水性氨基酸残基的亲和对的第一部分。粒子有益试剂的表面可固有地为疏水性的或者可以经修饰具有疏水性表面,其能与另一疏水性部分缔合。例如,可使用多种熟知的涂覆技术,用疏水性聚合物涂覆粒子有益试剂。包含疏水性肽的亲和对的第一部分通常包含亲水指数(hydropathyindex)至少为1.5的疏水性氨基酸(Kyte和Doolittle,J.MoI. Biol.(1982)157(157):105-132)。在一个实施方案中,疏水性氨基酸选自异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸和丙氨酸。
“基于螯合”对是指路易斯酸和路易斯碱的配位共价结合复合物,其中路易斯碱将两个或更多个孤对电子供给路易斯酸。基于螯合对的实例是各种氨基酸侧链与金属离子的相互作用。用于基于螯合对的示例性金属包括二价金属,例如镍、铜、钴和锌。
“多组氨酸标签”常用于与固定化金属离子例如镍、铜、钴或锌结合。金属离子通常掺入到介质中,所述介质例如次氮基三乙酸(NTA)-琼脂糖、HisPur钴树脂、亚氨基二乙酸(IDA)树脂、羧甲基天冬氨酸酯(CMA)树脂、TALON
Figure BPA00001479937000281
(或任何其它固定化金属亲和色谱(IMAC)树脂IMAC)。金属亲和树脂可购自不同商家例如Thermo FisherScientific(Rockford,IL)、EMD BioSciences(Madison,WI)和Clontech(Palo Alto,CA)。多组氨酸标签可以是合成的或天然存在的组氨酸亲和力标签例如“HAT”(KDHLIHNVHKEFHAHAHNK(SEQ ID NO:185))。在一个实施方案中,多组氨酸标签的长度范围为6至约10、6约8、或约6个连续(“HHHHHH”)组氨酸残基。
在一个实施方案中,肽成分包括能与粒子有益试剂表面的固定化金属离子结合的至少一个多组氨酸标签。在另一个实施方案中,粒子有益试剂包括在颗粒表面上的有效量的合适介质。可将金属螯合树脂部分或完全涂覆在粒子有益试剂表面上。在另一个实施方案中,施用于粒子有益试剂表面的树脂包括四配位金属螯合剂(美国专利5,962,641;通过引用结合到本文中)。在另一个实施方案中,亲和对是这样的螯合对:其包括掺入到肽成分中的多聚组氨酸-标签即氨基酸基序,其包含有效数量的能够以微摩尔浓度亲和力与树脂固定化金属离子结合的组氨酸残基;和掺入到粒子有益试剂中的金属离子,其中所述金属离子选自镍、铜、钴、锌及其混合物。
本发明亲和对的其它实例包括但不限于生物素:抗生物素蛋白、生物素:链霉抗生物素、链霉抗生物素标签:链霉抗生物素、麦芽糖结合蛋白(MBP):麦芽糖或淀粉酶、谷胱甘肽S-转移酶(GST):谷胱甘肽。
亲和对还可以是基于生物亲和力的。本文所用的生物亲和力并不包括抗体-抗原的亲和力。抗体-抗原的亲和力被特别排除在本发明范围之外。在一个实施方案中,亲和对可包括表位标签:抗体对,其中基于肽的试剂包含表位序列,粒子有益试剂包含相应抗体。市售的表位标签的实例包括但不限于HA-标签、FLAG-标签、E-标签、S-标签和myc-标签。
在本发明的某些实施方案中,亲和对的第一部分选自多组氨酸标签、生物素、链霉抗生物素标签、麦芽糖结合蛋白、谷胱甘肽S-转移酶、表位标签、HA-标签、FLAG-标签、E-标签、S-标签、myc-标签和SEQ ID NO:185、206和223-234。在另一个实施方案中,亲和对的第一部分选自多组氨酸标签、生物素和SEQ ID NO:185、206和223-234。
任选地,本发明的结合结构域可表现出对于人毛发、皮肤或指甲中的至少一种的结合优于对其它材料的结合。例如,与羊毛、开士米或牦牛毛相比,本发明的结合结构域还可与人毛发、皮肤或指甲优先结合。在另一个实施方案中,与棉花或改性纤维素纤维相比,本发明的结合结构域还与人毛发、皮肤或指甲优先结合。在又一个实施方案中,与金属、陶瓷、瓷器、玻璃、丝、羊毛、聚酯或聚氯乙烯相比,本发明的结合结构域还与人毛发、皮肤或指甲优先结合。
有益试剂
本发明所用的术语“有益试剂”是指包含组合物或试剂的美容组合物,所述组合物或试剂当沉积在人毛发、皮肤和/或指甲上时,对其赋予有益的特性。本发明的有益试剂呈粒子形式,即有益试剂是以小的离散颗粒形式提供的。本发明的粒子有益试剂具有亲和对的第二部分并掺入到平均粒度介于约0.01微米(10nm)和约75微米(75,000nm)之间的稳定粒子分散体中。在一个实施方案中,平均粒度经光散射方法例如激光衍射和/或动态光散射测定为0.01微米至75微米。在一些实施方案中,平均粒度小于约60微米、小于约40微米、或小于约10微米。在其它实施方案中,平均粒度介于约0.2微米(200nm)和0.4微米(400nm)之间。在其它实施方案中,分散体颗粒是纳米粒,即平均粒度介于约10nm和约100nm之间。
本领域技术人员应当理解,本文所指的“粒度”是指使用光散射方法例如激光衍射(参见ISO 13320-1:1996;国际标准组织,Geneva,Switzerland)和/或动态光散射(参见ISO 13321:1996)方法测得的粒度,这两种方法都是本领域公知的。示例性的***可得自MalvernInstruments Ltd.Worcestershire,United Kingdom。
已经发现,提供平均粒度介于约0.01微米和约75微米之间的含粒子有益试剂的稳定粒子分散体,促使有益试剂与本发明美容***的肽成分偶联。
本发明的“粒子有益试剂的稳定分散体”是指分散在样品基质内的粒子有益试剂颗粒随时间变化是稳定的。
本文所用的术语“稳定”是指颗粒分散在样品基质内的分散体随时间变化是稳定的。当样品的平均粒度随时间变化仍然保持相当恒定时,就认为颗粒是稳定分散的。在一个实施方案中,如果在分散体形成后24小时内样品的平均粒度与粒子有益试剂的最初粒度相比并未增加超过100%,则样品就是稳定分散的。在另一个实施方案中,如果在分散体形成后2天内样品的平均粒度与粒子有益试剂的最初粒度相比并未增加超过50%,则样品可为稳定分散的。在某些实施方案中,在分散体形成后3天内平均粒度的增加不超过50%。在其它实施方案中,在分散体形成后5天内平均粒度的增加不超过50%。在再其它实施方案中,在分散体形成后7天内平均粒度的增加不超过50%。在一个实施方案中,当至少7天内平均粒度并未增加超过50%,颗粒分散体就是稳定的,检测不到大于50个原始颗粒的任何附聚体。本领域技术人员将会认识到,稳定粒子分散体可随时间变化而有些沉降,只要用极少能量,颗粒就可容易地再分散(例如用通常与手工混合/振摇相关的温和手工振摇/搅拌,以使美容组合物或美容***内颗粒重新形成均一分散体)。
本领域已经报道了形成稳定粒子分散体的方式,包括但不限于使用空间稳定的分散体、分散剂、离子型分散剂、非离子型分散剂和聚合物分散剂,仅举几个例子。
聚合物分散剂在涂料***(例如油漆和末道漆(finish))以及在喷墨印刷油墨中广泛用于稳定颜料(Reuter等,Progress in Organic Coatings37:161 167(1999),Schmitz等,Progress in Organic Coatings 35:191 196(1999)和Spinelli,Adv.Mater.10:1215 1218(1998))。分散剂用以在颜料颗粒即粒子有益试剂周围形成壳,防止絮凝和聚集。在水性***中,颜料分散体通常通过非离子或离子技术而得以稳定。在非离子技术中,颜料颗粒是由具有水溶性、能延伸到水中并提供熵的或立体稳定性的亲水部分的聚合物来稳定的。可用于该目的的代表性聚合物包括聚乙烯醇、纤维素衍生物和环氧乙烷改性的苯酚。虽然非离子技术对pH变化或离子污染不敏感,但是对于终产物是水敏感的许多应用而言是主要缺点。因此,如果用于油墨用途等,颜料在暴露于潮湿时就易于渗开(smear)。
在离子技术中,颜料颗粒是由含有离子的单体(例如中和丙烯酸、马来酸或乙烯基磺酸)聚合物来稳定的。聚合物通过带电荷的双层机制而提供稳定作用,离子排斥因此而阻碍颗粒絮凝。因为中和成分在应用后易于蒸发,所以聚合物具有减低的水溶性并且终产物不是水敏感的。提供立体稳定性和离子稳定性两者的聚合物分散剂,例如嵌段聚合物和接枝聚合物,构成最坚固的颜料分散体(Spinelli,出处同上)。
已经公开了具有无规结构和嵌段结构两者的聚合物分散剂。例如,Ohta等在美国专利4,597,794中公开了具有离子型亲水片段和芳族疏水片段的无规聚合物分散剂,所述片段附着在颜料表面。Ma等在美国专利5,085,698中公开了AB或BAB嵌段共聚物作为分散剂的用途,用于含水的喷墨油墨。A片段是疏水性均聚物或共聚物,其用以与颜料颗粒结合,而B片段是亲水性聚合物或其盐,其用以将颜料分散在水性介质中。Ma等在美国专利5,519,085中公开了ABC三嵌段聚合物分散剂,其中A片段是亲水性聚合物,其作用是促使颜料分散在水中;B片段是能与颜料结合的聚合物;C片段是亲水性或疏水性聚合物,其用以稳定分散体。聚合物分散剂的组合也可使用,参见Rose等GB 2349153。尽管这些无规和嵌段聚合物分散剂为所分散的颜料提供良好稳定性,但仍需要进一步改进,用于更高质量的涂层应用。例如,与颜料具有更强相互作用的分散剂将提高分散体的稳定性。此外,与涂层基底具有更强相互作用的分散剂将会得到更持久的涂层。这对于需要增强持久性的纺织品印染而言尤其重要。
自分散(self-dispersing)的颜料是已经由化学附着的可分散性赋予基团进行表面改性的颜料,其允许形成稳定分散体,而无需单独的分散剂。对于在水性载体介质中的分散体,表面改性包括添加亲水性基团和最典型的是可电离的亲水性基团。自分散的颜料可通过物理处理(例如真空等离子体)或通过化学处理(例如用臭氧、次氯酸等来氧化),通过将官能团或含有官能团的分子接枝到颜料表面上而制得。可将单一类型或多种类型的亲水性官能团键合到一个颜料颗粒上。自分散的颜料描述于例如以下文献:美国专利号5,571,311,美国专利号5,609,671,美国专利号5,968,243,美国专利号5,928,419,美国专利号6,323,257,美国专利号5,554,739,美国专利号5,672,198,美国专利号5,69,8016,美国专利号5,718,746,美国专利号5,749,950,美国专利号5,803,959,美国专利号5,837,045,美国专利号5,846,307,美国专利号5,895,522,美国专利号5,922,118,美国专利号6,123,759,美国专利号6,221,142,美国专利号6,221,143,美国专利号6,281,267,美国专利号6,329,446,美国专利号6,332,919,美国专利号6,375,317,美国专利号6,287,374,美国专利号6,398,858,U.S.6,402,825,美国专利号6,468,342,美国专利号6,503,311,美国专利号6,506,245和美国专利号6,852,156。上述参考文献的公开内容都通过引用结合到本文中。
ζ电位表示分散体中相邻的、带相似电荷的颗粒之间的排斥程度。具有高ζ电位(负或正)的胶体是电学上稳定的,而具有低ζ电位的胶体就易于聚集或絮凝(″Zeta Potential of Colloids in Water and WasteWater″,ASTM Standard D 4187-82,American Society for Testing andMaterials,1985)。在一个实施方案中,粒子有益试剂ζ电位的绝对值为至少25mV。在另一个实施方案中,肽试剂-粒子有益试剂复合物的ζ电位的绝对值为至少25mV。
亲和对的第二部分可以多种方式掺入到有益试剂中。例如,有益试剂的物理性能可包括亲和对的第二部分。亲和对的第二部分可固有地存在于有益试剂中或者有益试剂可经改性而包含亲和对的第二部分。例如,在一些实施方案中,有益试剂可以是带电荷的有色颜料或染料,电荷形成离子亲和对的第二部分。亲和对的第二部分可以是对于亲和对的第一成员(例如多组氨酸标签)具有亲和力的施用材料或涂料(例如金属螯合树脂)。在其它实施方案中,亲和对的第二部分可与有益试剂共价连接。
可用于本发明的粒子有益试剂的非限制性实例包括防晒剂、抗微生物剂、发泡颗粒(sparkling particle)、气味控制剂、调理剂、抗真菌剂、香料、抗溶剂(anti-lyses agent)、芳香治疗剂、驱虫剂等。
防晒剂的非限制性实例包括无机粒子,例如氧化锌和二氧化钛;和有机粒子,例如亚甲基双-苯并***基四甲基丁基酚(作为Bisoctrizole可得自Ciba Specialty Chemicals of Basel,Switzerland)。粒子抗微生物剂的非限制性实例包括基于银的颗粒和基于活性炭的颗粒。含微球体的粒子有益试剂的实例可包括包囊化或微囊化有益试剂,其在应用期间将有益试剂包在包囊内并允许有益试剂在含角蛋白的表面上沉积后的某个所需时间里从包囊中释放出来。气味控制剂的实例包括活性炭颗粒和沸石。
本发明的有益试剂还可以是有色粒子,包括有色颜料、有色颗粒,例如微粒或纳米粒,或它们的组合。
颜料,尤其是金属化合物或半金属化合物,可以离子形式、非离子形式或氧化形式用于本发明的组合物和方法。这种形式的颜料可以是单一或混合或单独混合氧化物或其混合物形式,包括混合氧化物和纯氧化物的混合物。实例是氧化钛(例如TiO2)、氧化锌(例如ZnO)、氧化铝(例如Al2O3)、氧化铁(例如Fe2O3)、氧化锰(例如MnO)、氧化硅(例如SiO2)、硅酸盐、氧化铈、氧化锆(例如ZrO2)、硫酸钡(BaSO4)或其混合物等。合适的颜料是市售的。实例是由Merck供应的HombitecL5(INCI名称:二氧化钛)。
颜料的其它实例包括以下:D&C Red No.36、D&C Red No.30、D&C Orange No.17、Green 3 Lake、Ext.Yellow 7 Lake、Orange 4 Lake、Red 28 Lake、D&C Red Nos.7、11、31和34的钙色淀、D&C Red No.12的钡色淀、D&C Red No.13的锶色淀、FD&C Yellow No.5和No.6的铝色淀、FD&C No.40的铝色淀、D&C Red Nos.21、22、27和28的铝色淀、FD&C Blue No.1的铝色淀、D&C Orange No.5的铝色淀、D&C Yellow No.10的铝色淀;D&C Red No.33的锆色淀、CROMOPHTHAL
Figure BPA00001479937000342
Yellow、SUNFAST
Figure BPA00001479937000343
Magenta、SUNFAST
Figure BPA00001479937000344
Blue、氧化铁、碳酸钙、氢氧化铝、硫酸钙、高岭土、氰亚铁酸铁铵、碳酸镁、胭脂红、硫酸钡、云母、氯氧化铋、硬脂酸锌、锰紫、氧化铬、二氧化钛、二氧化钛纳米粒、氧化锌、氧化钡、群青蓝、柠檬酸铋、羟基磷灰石、硅酸锆、炭黑颗粒等。
本发明的颜料或颗粒可以有或没有涂覆,并且涂覆的颗粒可以是阴离子型的、亲水的或疏水的。合适的阴离子涂料包括例如二氧化硅、铝硅酸盐、C14-16烯烃磺酸钠、硬脂酰谷氨酸二钠、硬脂酰谷氨酸钠/trideceth-6羧酸钠,和聚丙烯酸钠/氢化卵磷脂/氢氧化铝。适用于本发明的未涂覆的颜料的实例见下表2。
表2
Figure BPA00001479937000351
Figure BPA00001479937000361
阴离子涂覆的颜料的实例见下表3。
表3
Figure BPA00001479937000371
亲水涂覆的颜料的实例见下表4。
表4
Figure BPA00001479937000381
疏水涂覆的颜料的实例见下表5。
表5
Figure BPA00001479937000382
美容***
使用本发明美容***的示例性方法包括将肽成分施用于人毛发、皮肤或指甲中的至少一种。在足以使肽成分与毛发、皮肤或指甲结合的一段时间之后,将粒子有益试剂的稳定分散体施用于已与毛发、皮肤或指甲结合的肽成分。稳定分散体的施用时间段应当足以使肽成分的亲和对的第一部分与有益试剂的亲和对的第二部分偶联。
一旦有益试剂与肽成分偶联,亲和对可被破坏,导致肽成分与有益试剂解偶联。能破坏亲和对的试剂将基于用于美容***中的亲和对类型。这样的试剂通常是包含视需要具有高或低pH或者高或低的离子强度的缓冲液的水性溶液。
将有益试剂施用于人毛发、人皮肤或人指甲中的至少一种的某些方法包括:使所述人毛发、皮肤或指甲与组合物接触足以使结合结构域与人毛发、皮肤或指甲结合的时间,所述组合物包含以10-5摩尔浓度以下的Kd或MB50值与人毛发、皮肤或指甲中的至少一种结合的至少一个所述结合结构域并且还包含亲和对的第一部分的肽成分;和随后将所述人毛发、皮肤或指甲与平均粒度介于约0.01微米和约75微米之间并具有所述亲和对的第二部分的粒子有益试剂的稳定分散体接触;其中所述结合结构域对于人毛发、皮肤或指甲的结合亲和力大于其对于所述分散体颗粒的结合亲和力。
其它方法包括:从人毛发、人皮肤或人指甲中的至少一种中去除与亲和对的第二部分缔合的有益试剂,包括提供能破坏亲和对的水性溶液;和使人毛发、皮肤或指甲与水性溶液接触足以破坏亲和对的时间,其中人毛发、皮肤或指甲先前已经与组合物接触足以使结合结构域与人毛发、皮肤或指甲结合的时间,所述组合物包含以10-5摩尔浓度以下的Kd或MB50值与人毛发、皮肤或指甲结合的至少一个结合结构域并且还包含亲和对的第一部分的肽成分;和随后使所述人毛发、皮肤或指甲与平均粒度介于0.01微米和约75微米之间并具有所述亲和对的第二部分的粒子有益试剂的稳定分散体接触。
实施例
在下面的实施例中对本发明作进一步的详细说明。应当理解,这些实施例是本发明的优选实施方案,仅用作实例。根据上述讨论和这些实施例,本领域技术人员能够确定本发明的本质特征,在不脱离本发明精神和范围内,能够对本发明作出各种改动和修改,以适应各种应用和情况。
所用的缩略语的含义如下:“min”表示分钟,“h”表示小时,“μL”表示微升,“mL”表示毫升,“L”表示升,“nm”表示纳米,“mm”表示毫米,“cm”表示厘米,“μm”表示微米,“mM”表示毫摩尔浓度,“M”表示摩尔浓度,“mmol”表示毫摩尔,“μmole”表示微摩尔,“g”表示克,“μg”表示微克,“mg”表示毫克,“g”表示重力常数,“rpm”表示每分钟的转数。
一般方法
本文所用的标准重组DNA技术和分子克隆技术是本领域熟知的且描述于Sambrook,J.和Russell,D.,Molecular Cloning:A LaboratoryManual,第3版,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold SpringHarbor,NY(2001);和Silhavy,T.J.,Bennan,M.L.和Enquist,L.W.,Experiments with Gene Fusions,Cold Spring Harbor Laboratory ColdPress Spring Harbor,NY(1984);和Ausubel,F.M.等,Short Protocols inMolecular Biology,第5版.Current Protocols和John Wiley和Sons,Inc.,N.Y.,2002。
适用于细菌培养物的维持和生长的材料和方法也是本领域熟知的。适用于下列实施例的技术可参见:Manual of Methods for GeneralBacteriology,Phillipp Gerhardt,R.G.E.Murray,Ralph N.Costilow,Eugene W.Nester,Willis A.Wood,Noel R.Krieg和G.Briggs Phillips编著,American Society for Microbiology,Washington,DC,1994,或者Thomas D.Brock的Biotechnology:A Textbook of IndustrialMicrobiology,第2版,Sinauer Associates,Inc.,Sunderland,MA,1989。除非另有说明,所有试剂、限制酶和用于生长和维持细菌细胞的材料均得自Aldrich Chemicals(Milwaukee,WI),BD Diagnostic Systems(Sparks,MD),Life Technologies(Rockville,MD),或Sigma ChemicalCompany(St.Louis,MO)。
实施例1:用于选择肽的结合结构域的示例性方法
合适的噬菌体-肽文库用上述方法产生或者文库购自商业供应商。噬菌体-肽文库产生后,再使其接触合适量的基底。将噬菌体-肽文库溶于合适溶液中用于接触基底。可将试验基底悬浮在溶液中或可固定在板或珠上。示例性溶液是含表面活性剂的缓冲盐水溶液。合适的溶液可以是含0.05-0.5%TWEEN
Figure BPA00001479937000421
20的Tris缓冲盐水(TBS)。溶液可以另外通过任何方式进行搅拌,以增加肽至基底的传质速率,从而缩短达到最大结合所需的时间。
在接触后,许多随机产生的噬菌体-肽将与基底结合以形成噬菌体-肽-基底复合物。未结合的噬菌体-肽可通过洗涤去除。去除所有未结合的材料后,可通过在具有不同严格性的缓冲液中选择洗涤,将对基底具有不同程度的结合亲和力的噬菌体-肽进行分级分离。增加所用缓冲液的严格性增加在噬菌体-肽-基底复合物中的噬菌体-肽与基底之间的所需键强度。
多种物质可用于改变肽选择中的缓冲液的严格性,包括但不限于酸性pH(1.5-3.0);碱性pH(10-12.5);高盐浓度例如MgCl2(3-5M)和LiCl(5-10M);水;乙二醇(25-50%);二
Figure BPA00001479937000431
烷(5-20%);硫氰酸盐(1-5M);胍(2-5M);脲(2-8M);和各种浓度的不同表面活性剂例如SDS(十二烷基硫酸钠)、DOC(去氧胆酸钠)、Nonidet P-40、Triton X-100、TWEEN
Figure BPA00001479937000432
20,其中TWEEN
Figure BPA00001479937000433
20是示例性的。这些物质可在缓冲液中制备,包括但不限于Tris-HCl、Tris-缓冲盐水、Tris-硼酸、Tris-乙酸、三乙胺、磷酸缓冲液和甘氨酸-HCl,其中Tris-缓冲盐水溶液是示例性的。
应理解的是,对基底具有渐增的结合亲和力的噬菌体-肽可通过使用具有渐增严格性的缓冲液重复选择过程进行洗脱。洗脱的噬菌体-肽可通过本领域任何已知方式进行鉴定和测序。
在一个实施方案中,可采用产生含角蛋白的体表结合肽的以下方法。将组合产生的噬菌体-肽文库与基底(例如人毛发、皮肤或指甲)接触,从而产生噬菌体肽-基底复合物。将噬菌体-肽-基底复合物与未复合的肽和未结合的基底分离开来,并将来自噬菌体-肽-基底复合物的结合噬菌体-肽通过例如酸处理而从复合物上洗脱下来。然后,鉴定所洗脱的噬菌体-肽并进行测序。为了鉴定能与靶基底而非其它基底(例如非含角蛋白的基底)结合的肽序列,可添加递减淘选步骤。具体地讲,先将组合产生的噬菌体-肽文库与非靶标接触,以去除与之结合的噬菌体-肽。然后,将非结合的噬菌体-肽与靶基底接触并遵照上文方法。或者,可将组合产生的噬菌体-肽文库与非靶标和靶标同时接触。然后,将噬菌体-肽-基底复合物与噬菌体-肽-非靶标复合物分离开来,并遵循上文对于所需噬菌体-基底复合物所述的方法。
或者,可使用用于分离对于一种含角蛋白的体表(例如毛发)比另一种含角蛋白的表面(例如皮肤)具有更高亲和力的肽的改良的噬菌体展示筛选方法。在改良方法中,如上所述地形成噬菌体-肽-基底复合物。然后,将这些复合物用洗脱缓冲液处理。上述任何洗脱缓冲液都可使用。在一些实施方案中,洗脱缓冲液是酸性溶液。然后,剩余的洗脱抗性的噬菌体-肽-基底复合物用于直接感染/转染细菌宿主细胞,例如大肠杆菌(E.coli)ER2738。将受感染的宿主细胞在合适的生长培养基例如LB(Luria-Bertani)培养基中培养,再将该培养物涂布到含有合适生长培养基的琼脂上,所述生长培养基例如含有IPTG(异丙基β-D-硫代半乳糖苷)和S-GalTM的LB培养基。培养之后,挑选噬斑进行DNA分离和测序,以鉴定对于目标基底具有高结合亲和力的肽序列。或者,可使用PCR以鉴定来自如上所述的改良噬菌体展示筛选方法的洗脱抗性噬菌体-肽,即通过使用合适引物,直接在噬菌体-肽-基底复合物上进行PCR,如由Janssen等在美国专利申请公布号2003/0152976中所述。
实施例2:肽结合亲和力和特异性的测定
本实施例的目的是采用ELISA测定法来测定多种毛发结合肽对毛发和颜料表面的亲和力和特异性,测量为MB50值。每种短的线性肽最初是使用噬菌体展示而鉴定的。除非另有说明,实施例2中提供的序列包含生物素化的C端赖氨酸残基,用于检测目的。对各种含角蛋白材料(例如毛发、皮肤和指甲)具有亲和力的体表结合肽的实例参见上表1。
毛发结合肽的合成
毛发结合肽可使用标准固相噬菌体合成方法来合成并在其结合序列的C-端赖氨酸残基上生物素化,用于检测目的。所测试的肽的氨基酸序列见下表6。
表6.通过C端赖氨酸与生物素偶联的毛发结合肽
  肽ID   结构   SEQ ID NO.
  MEA4-生物素   HINKTNPHQGNHHSEKTQRQK-生物素   186
  Hair2-生物素   AQSQLPDKHSGLHERAPQRYK-生物素   187
  Hair4-生物素   TPPELAHTPHHLAQTRLTDRK-生物素   188
  HCP1-生物素   THSTHNHGSPRHTNADAGNPK-生物素   189
使用毛发束,进行生物素化肽与毛发和与红色氧化铁颗粒(Unipure Red来自Sensient Technologies,Milwaukee,WI)结合的MB50测定。将约1cm长的100根毛发在一端用细长带子绑在一起,组装成成束的毛发样品。将毛发束在SUPERBLOCK封闭缓冲液(PierceChemical Co.,Rockford,IL)中在室温下(约22℃)温育1小时,随后用TBST(含TBS的0.05%TWEEN
Figure BPA00001479937000452
20)洗涤3次。将含有不同浓度的生物素化肽的TBST的肽结合缓冲液和1mg/mL BSA加入到毛发束并在室温下温育1小时,随后用TBST洗涤6次。然后,将链霉抗生物素-辣根过氧化物酶(HRP)缀合物(Pierce Chemical Co.,Rockford,IL)加入到各孔(1.0μg/孔),在室温下温育1小时,随后用TBST洗涤6次。将所有毛发束转移至新管中并按照标准实验方案进行显色和吸光度测定。结果以A450对肽浓度作图,使用GraphPad Prism 4.0(GraphPadSoftware,Inc.,San Diego,CA)。根据Scatchard图计算MB50值并示于下表7。
表7所示的结果证明,毛发结合肽对毛发的结合亲和力优于对示例性颗粒表面(红色氧化铁颜料颗粒)的结合亲和力。
表7.毛发结合肽对于毛发和颗粒表面的MB50值的概述
Figure BPA00001479937000453
Figure BPA00001479937000461
实施例3:毛发护理肽263(HC263)介导Co-NTA磁珠与灰色毛发的结
将大约5mg的5mm长的毛发束(90%灰色,人的)转移至2-mL微量离心管。将大约1mL TBST0.1缓冲液(25mM Tris,150mM NaCl,pH7.2,含有0.1%TWEEN-20)或包含不同浓度HC263肽的相同缓冲液加入到毛发中。
肽试剂的毛发-结合结构域部分的通用设计通常包括短的N-末端,接着是被肽接头间隔开的至少2个毛发结合肽。再通过肽间隔基(任选在本文中称为“肽桥”)将毛发-结合结构域与对金属螯合树脂(例如钴-NTA树脂)具有缔合亲和力的C端多聚组氨酸区(“his-标签”)连接。用于装配基于肽的试剂的肽序列见下表8。
表8.用于制备实施例3和实施例4中的基于肽的试剂的肽。
  肽ID   序列   SEQ ID NO:
  Hair2   AQSQLPDKHSGLHERAPQRY   82
  Gray3   HDHKNQKETHQRHAA   120
  Hair2Rnd1   DRSKLYQSLEHRQPPGAHAQ   190
  Gray3Rnd4   AHDAKHEHRKQNHTQ   191
  F4Rnd   QTHVSQPFLFHD   192
  IB5A   TPPELLHGAPRS   89
  Rfe1   WAPEKDHMQLMK   193
  CA3   NGNNHTDIPNRSSYTGGSFA   194
  CA4   SDETGPQIPHRRPTW   195
在室温下(约22℃)将混合物在Nutator上振摇1小时。毛发用TBST0.5缓冲液(25mM Tris,150mM NaCl,pH 7.2,含0.5%TWEEN
Figure BPA00001479937000471
-20)洗涤3次。洗涤后,将毛发重悬于900μL Talon缓冲液(50mM磷酸钠,pH 8.0,300mM氯化钠,0.01%TWEEN
Figure BPA00001479937000472
-20)。在室温下在Nutator上将一部分毛发/肽缀合物另外再用1mL 0.25%SLES(月桂基醚硫酸钠)洗涤1次,进行5min,然后用1mL TBST0.1缓冲液洗涤2次。将大约0.2mg TALONTM珠(DYNABEADSTALONTM,Invitrogen,目录号101.01D)在D YNAL
Figure BPA00001479937000474
MPCTM磁铁上用TALONTM缓冲液洗涤2次并加入到100μL TALONTM缓冲液中的各反应物中。磁珠用Co-NTA涂覆,其与掺入到肽中的六个组氨酸残基(C端his标签)特异性结合。将毛发和珠在温和振摇下温育10分钟,随后将管置于磁铁上。
当管与磁铁作用后,与毛发结合的珠有望共同迁移到管的侧壁上。目测评价结合强度并用0(少量结合或未观察到结合)至5(所观察结合的最高量)的数值范围来分级。下表9概述了结果,显示在0.2μM和0.02μM HC263(SEQ ID NO:196)浓度时的最佳结合。在0.007μM时观察到结合减少。用SLES洗涤毛发并不会减少0.2μM肽的结合。
表9.肽介导的磁珠与毛发的结合.
Figure BPA00001479937000475
实施例4:肽-介导的Co-NTA磁珠与灰色毛发的结合
为了测定达到实施例3中所观察到的效果时肽的需要,测试了额外的肽(表10)。工程肽HC263、HC264、HC204、HC205和HC214,其各自都是本发明的示例性实施方案,各自具有多组氨酸标签,其允许与Co-NTA涂覆的磁珠结合。HC352、HC423和HC424具有如同HC263的两种以上的毛发-结合结构域,但没有多组氨酸标签并且用作对照。HC264具有与HC263相同的序列组成,除了随机毛发结合序列之外。
表10.肽测试以测定肽介导的磁珠与毛发的结合所需的结构域。
Figure BPA00001479937000491
粗体=按名称列举的式内的结合单元。
实施例3的毛发结合测定用于评价表10中的试验肽的结合强度。结果概述于下表11。
表11.肽-介导的磁珠与毛发的结合。
  肽ID   浓度(μM)   结合强度(5为最高,0为最低)
  HC205   0.2   0
  HC206   0.2   0
  HC214   0.2   0
  HC352   0.2   0
  HC352   0.02   0
  HC423   0.2   3
  肽ID   浓度(μM)   结合强度(5为最高,0为最低)
  HC423   0.02   0
  HC424   0.2   0
  HC424   0.02   0
  HC263   0.2   5
  HC263   0.02   5
  HC263   0.002   2
  HC264   0.2   5
  HC264   0.02   5
  HC264   0.002   2
无(对照) 0 0
实施例5:HC263-介导的磁珠与毛发的结合
测试肽HC263(SEQ ID NO:196)的肽介导的磁珠与以下不同表面的结合:人毛发、牦牛毛、羊毛、棉花、SONTARA
Figure BPA00001479937000501
(一种非织造、水刺(spunlaced)织物片,E.I.duPont de Nemours和Company,Inc.,Wilmington,DE)和纤维素(滤纸)。将大约5mg人毛发(90%灰色)、牦牛毛、羊毛、棉花、SONTARA或滤纸加入到2-mL微量离心管中。加入大约1mL含0.2μM HC263的TBST0.1缓冲液(25mM Tris,150mM NaCl,pH 7.2,含0.1%TWEEN
Figure BPA00001479937000503
-20)。在室温下(约22℃)将混合物在Nutator(BD Diagnostics,Franklin Lakes,NJ)上振摇30分钟。样品用TBST0.5缓冲液(25mM Tris,150mM NaCl,pH 7.2,含0.5%TWEEN
Figure BPA00001479937000504
-20)洗涤3次。洗涤后,将样品重悬于900μL TALONTM(Clontech,Mountain View,CA)缓冲液(50mM磷酸钠,pH 8.0,300mM氯化钠,0.01%TWEEN
Figure BPA00001479937000505
-20)。将大约0.2mg TALONTM珠(DYNABEADS
Figure BPA00001479937000506
TALONTM,Invitrogen,Carlsbad,CA;目录号101.01D)用TALONTM缓冲液在DYNAL
Figure BPA00001479937000507
MPCTM磁铁(Invitrogen)上洗涤2次并加入到100-μL TALONTM缓冲液中的各反应物中。
通过放大1000倍的扫描电镜(SEM)图像观察来评价磁珠与不同表面的结合强度。根据SEM图像,一种相对评分***用于对珠与不同表面的结合强度评分(0=没有或少量结合,5=强结合)。下表12显示由肽HC263介导的磁珠的强结合仅发生在人毛发。
表12:肽-介导的磁珠与不同表面的结合。
实施例6:使用生物素-肽和链霉抗生物素-聚苯乙烯颗粒的沉积
按照本发明的方法和组合物,生物素化肽和链霉抗生物素涂覆的珠***用于说明珠与毛发的偶联。通过以下方法达到连续沉积(sequential deposition):
将人毛发样品放入含有依照本文所述方法而得到20mM HCP5二聚体肽(SEQ ID NO:204)的水性溶液中。HCP5二聚体包括最初源自噬菌体展示文库的2个HCP5毛发结合肽(SEQ ID NO:112),其用短间隔基(HCP5-GGSGPGSGG-HCP5)偶联在一起。HCP5二聚体购自American Peptide Co.,Inc.(Sunnyvale,CA),其呈生物素化(SEQ ID NO:205)和非生物素化(SEQ ID NO:204)形式(单个赖氨酸残基加入到生物素化形式的C-端以促使生物素偶联)。
通过使毛发样品暴露于生物素化肽或非生物素化肽,对毛发样品进行预处理。10束天然棕黑色毛发(International Hair Importers),长度为3英寸,用2%SLES预洗涤30秒钟,再用去离子水充分清洗。再将毛发束浸入10mL 5-20微摩尔浓度的肽溶液中持续1小时。将10个毛发样品暴露于生物素化肽,并将10个毛发样品暴露于非生物素化肽。肽溶液在去离子水或pH 7.2的Tris-HCl缓冲液(离子强度范围为5mM-150mM)中制备持续1小时。肽处理步骤有望使肽沉积到毛发样品上。经肽处理的毛发样品随后通过浸入肽处理缓冲溶液中30秒钟而清洗,以去除过量肽。然后,将经肽处理的毛发样品与40nm荧光标记的链霉抗生物素包被的聚苯乙烯颗粒(Invitrogen,Carlsbad,CA)一起温育,以允许生物素与链霉抗生物素结合。在包含去离子水和pH 7.2的含多至0.1%TWEEN的Tris缓冲盐水缓冲液(离子强度范围为5mM-150mM)在内的不同介质中制成颗粒分散体。在长达24小时的温育期期间,在室温下(约22℃)在暗处,允许发生结合。在温育期期间不断上下翻转样品。
温育期结束后,用荧光显微镜观察40nm荧光标记的链霉抗生物素包被的聚苯乙烯颗粒与毛发的结合。图1显示,经所观察的荧光证实,生物素化HCP5二聚体肽使颗粒与毛发结合。
实施例7:使用生物素-肽和链霉抗生物素氧化铁的沉积
生物素化肽和链霉抗生物素-珠***用于给毛发着色。通过以下步骤达到连续沉积。
在室温下,将含100%未着色毛发的、长度大约1英寸的微型毛发束放入含20mM肽的水性溶液(在去离子水或Tris缓冲盐水中,pH7.2,5-150mM离子强度)持续1小时,其源自按照本文所述的方法。肽HC260是在大肠杆菌中重组产生的。用大肠杆菌生产宿主重组产生并分离肽试剂的方法是本领域已知的(例如美国专利7,285,264的实施例17-20;通过引用结合到本文中)。功能肽单元的序列用于产生HCP5二聚体(“(HCP5)2”),HC260见表13。肽试剂(即工程改造肽)的式见表14。HC260经工程改造而含有链霉抗生物素结合肽标签(SB33N)。
表13.用于制备表14中的基于肽的试剂的肽单元。
  肽ID   序列   SEQ ID NO:
  HCP5   HHGTHHNATKQKNHV   112
  Hair2   AQSQLPDKHSGLHERAPQRY   82
  Gray3   HDHKNQKETHQRHAA   120
  SB33N   MLSENWLTNHPQN   206
表14.肽试剂测试以测定肽介导的磁珠与毛发结合的所需结构域。
Figure BPA00001479937000531
粗体=按名称列举的式内的结合单元。
通过使毛发接触不同的肽,对毛发样品进行预处理。肽在毛发上形成层。毛发样品与肽层用SLES溶液清洗以去除过量的肽。然后,将经肽处理的毛发样品与链霉抗生物素标记的氧化铁颗粒(BangsLaboratories,Inc.,Fishers,IN;Ademtech,Inc.,Pessas,France)一起温育,以允许生物素与链霉抗生物素之间结合或者HC260中的链霉抗生物素-结合结构域与链霉抗生物素之间结合。购买的颗粒呈分散形式,通过加入指定量的去离子水或来自Ademtech的偶联缓冲液,将其稀释至0.025-1%重量。在长达24小时的温育期期间,在室温下(约22℃)在暗处,允许发生结合。在温育期期间在结合过程中不断上下翻转样品。
表15显示染色的链霉抗生物素涂覆的氧化铁珠(500nm)沉积在具有生物素化肽(HCP5)2的毛发样品上,但染色的链霉抗生物素涂覆的氧化铁珠(500nm)却不沉积在具有非生物素化肽(HCP5)2的毛发样品上。毛发样品#3用非生物素化(HCP5)2肽涂覆,而毛发样品#4用生物素化(HCP5)2肽涂覆。用于经氧化铁处理的毛发的缔合颜色强度的颜色数值范围定义为(0-5),其中0是无颜色沉积,而5是最深颜色。在表15中,毛发样品#3的缔合颜色强度值为0,而毛发样品#4的缔合颜色强度值为4。
表15.用链霉抗生物素涂覆的氧化铁珠和HCP5-二聚体肽(HCP5)2处理的毛发样品的目测颜色评价,比较生物素化形式和非生物素化形式。
表16显示使用连续处理方法用不同肽构建体和链霉抗生物素涂覆的氧化铁珠处理的毛发样品的目测颜色评价。当用染色的链霉抗生物素涂覆的氧化铁珠处理时,用含有链霉抗生物素-结合配偶体(即生物素或者链霉抗生物素结合肽基序)的肽构建体处理的毛发样品增强毛发着色。
HC260中的链霉抗生物素结合结构域是SB33N,其估计链霉抗生物素-结合Kd值为10-4M。表16显示经处理的毛发束。在颜色数值范围上,肽的评分如下:(HCP5)2=0,(HCP5)2-生物素=4,HC260=2。
表16.涂覆不同生物素化肽的毛发样品和随后链霉抗生物素涂覆的珠的目测颜色评价(连续着色方法)。
Figure BPA00001479937000551
表17-19显示使用链霉抗生物素涂覆的氧化铁颗粒,毛发着色的目测颜色评价。样品#3和#4分别对应于用500nm颗粒的HCP5-二聚体[(HCP5)2]的非生物素化和生物素化形式,而样品#1和#2分别对应于用200nm颗粒的肽(HCP5)2和(HCP5)2-生物素。此外,显示了水洗涤和0.25%SLES洗涤步骤。使用前述颜色数值范围,在原始数据中,在暴露于涂覆的肽之后,但在用水洗涤之前,颜色测量如下:样品1=0,样品2=0,样品3=0,和样品4=4(表17;图3A)。用水洗涤之后,颜色测量如下:样品1=0,样品2=0,样品3=0,和样品4=3(表18;图3B)。在0.25%SLES(月桂基醚硫酸钠)洗涤数据中:样品1=0,样品2=0,样品3=0,和样品4=2(表19;图3C)。
表17.用200nm或500nm链霉抗生物素涂覆的氧化铁颗粒,毛发着色的目测颜色评价(原始条件)
Figure BPA00001479937000561
表18.用200nm或500nm链霉抗生物素涂覆的氧化铁颗粒,毛发着色的目测颜色评价(水洗涤后)
Figure BPA00001479937000562
表19.用200nm或500nm链霉抗生物素涂覆的氧化铁颗粒,毛发着色的目测颜色评价(0.25%SLES洗涤后)
Figure BPA00001479937000563
实施例7证明粒度对于人对颜色的感知的影响。人可感知颜色的范围为约400nm至700nm。紫外线即200-400nm对于人是不可见的。如表17-19所示,只有用500nm珠处理的(HCP5)2-生物素处理的毛发显示出可感知的颜色。用200nm珠处理的(HCP5)2-生物素-处理的毛发却不能显示出可感知的颜色,即使200nm珠沉积在毛发上。参见图4A和图4B。
实施例8:用连续施用肽和颜料,对毛发的着色
天然白色毛发小束(0.5-1cm宽,1英寸长)得自International HairInc.,Florence,SC。将毛发束用2%月桂基醚硫酸钠(SLES,RhodapexES-2K)溶液手洗,再用去离子水清洗并风干,然后用于测试。将肽HC634、HC635、HC636、HC637、HC638、HC639、HC640、HC641、HC642、HC643、HC644和HC645各自称重并溶于浓度0.7mg/mL的pH 7.5的25mM Tris缓冲液中。毛发-结合结构域包括毛发结合肽HP2E(SEQ ID NO:84)和Gray3A(SEQ ID NO:77),其通过tonB接头(SEQ ID NO:208)连接。结合结构域通过桥肽(SEQ ID NO:209)与对颜料(即二氧化硅涂覆的红色氧化铁)具有亲和力的不同肽(即亲和对的第一部分)偶联。
表20.毛发着色肽与不同的颜料-结合手缀合
Figure BPA00001479937000581
1=肽试剂相应部分的净电荷。
在旋转器上,将各毛发束分别与1.7-mL微量离心管中的0.6mL肽溶液温育15分钟。对于每种肽溶液,使用一式两份的毛发束。再将毛发束从管中取出并用去离子水清洗,用纸巾吸干并放入新标记的管中,用于颜料施用。按照US 2,885,366中公开的方法制备二氧化硅涂覆的氧化铁颗粒,所述文献结合到本文中。用等电点2(IEP2)和5(IEP5)制备二氧化硅涂覆的红色氧化铁分散体。将含大约0.6mL 1%颜料分散体的pH 7.5,25mM Tris缓冲液加入到各管中并在旋转器上与经肽处理的毛发束温育10分钟。然后,取出毛发束并用自来水清洗,纸巾吸干并风干。使用X-Rite分光光度计(X-Rite Incorporated,Grand Rapids,MI),对于每个毛发束,在毛发样品两侧的4个不同点获取L*a*b*得分,平均L*a*b*得分用于颜色吸收(color uptake)deltaE计算(ΔE),对此,未经处理的天然白色毛发用作参考。按照相同方法,
通过将毛发束直接用于颜料分散体,测试无肽对照。
Delta E值可用下式(1)计算:
Delta E=((L* 1-L* 2)2+(a* 1-* 2)2+(b* 1-b* 2)2)1/2  (1)
其中L*=亮度变量,a*和b*是由国际照明委员会(InternationalCommission of Illumination,CIE)(Minolta,Precise ColorCommunication-Color Control From Feeling to Instrumentation,MinoltaCamera Co.,1996)定义的CIELAB色度空间的色度坐标。
肽介导的毛发着色结果概述于图2。没有肽,IEP2和IEP5二氧化硅涂覆的氧化铁颜料都产生约5-8deltaE(ΔE)单元背景颜色吸收,而肽介导的颜料沉积产生2-43deltaE(ΔE)单元颜色吸收(用IEP2颜料)和37-42deltaE单元颜色吸收(用IEP5颜料)。证明了肽-颜料***能给毛发有效着色。
实施例9:从肽成分中去除有益试剂
步骤1:将毛发束与含本发明肽成分例如(HCP5)2-生物素的肽溶液温育约15min,再用水清洗并吸干。温育后的毛发束再用本发明的粒子有益试剂的稳定分散体处理约10分钟。例如,温育后的毛发束用包含链霉抗生物素涂覆的氧化铁珠的稳定分散体处理,再用水清洗并吸干。
步骤2:按照本发明方法着色的毛发束可经处理,以去除本发明的粒子有益试剂。例如,如果有益试剂是着色剂,可去除该着色剂。毛发束可按照步骤1来制备。毛发束可用水性溶液处理,例如0.25%SLES洗涤,1次或多次,以破坏生物素与链霉抗生物素的亲和力并从毛发束中释放出链霉抗生物素涂覆的氧化铁珠。
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Claims (26)

1.一种美容***,其包含:
包含以10-5摩尔浓度以下的Kd或MB50值与人毛发、人皮肤或人指甲中的至少一种结合的至少一个结合结构域并且还包含亲和对的第一部分的肽成分;和
平均粒度介于约0.01微米和约75微米之间并具有所述亲和对的第二部分的粒子有益试剂的稳定分散体;
所述至少一个结合结构域对于人毛发、皮肤或指甲的结合亲和力大于其对于所述分散体颗粒的结合亲和力。
2.权利要求1的美容***,其中所述平均粒度介于约0.01微米和约75微米之间是通过选自动态光散射和激光衍射的方法而测定。
3.权利要求1的美容***,其中所述结合结构域包含多个亚结构域。
4.权利要求1的美容***,其中所述有益试剂与所述亲和对的第二部分之间的缔合是非共价的。
5.权利要求1的美容***,其中与羊毛、开士米或牦牛毛相比,所述结合结构域还与人毛发、皮肤或指甲优先结合。
6.权利要求1的美容***,其中与棉花或改性纤维素纤维相比,所述结合结构域还与人毛发、皮肤或指甲优先结合。
7.权利要求1的美容***,其中与金属、陶瓷、瓷器、玻璃、丝、羊毛、聚酯或聚氯乙烯相比,所述结合结构域还与人毛发、皮肤或指甲优先结合。
8.权利要求1的美容***,其中所述粒子是纳米粒。
9.权利要求1的美容***,其中所述亲和对是基于离子键、基于氢键、基于疏水键、基于螯合、基于生物亲和力,或者所述亲和对是基于其组合。
10.权利要求1的美容***,其中所述亲和对是基于生物素对于抗生物素蛋白的亲和力,生物素对于链霉抗生物素的亲和力,链霉抗生物素标签对于链霉抗生物素的亲和力,麦芽糖结合蛋白对于麦芽糖的亲和力,麦芽糖结合蛋白对于淀粉酶的亲和力,多组氨酸标签对于金属的亲和力,谷胱甘肽S-转移酶对于谷胱甘肽的亲和力,表位标签对于抗体的亲和力,或其组合。
11.权利要求10的美容***,其中所述金属是二价金属。
12.权利要求11的美容***,其中所述金属是钴、铜、镍、锌或其组合。
13.权利要求10的美容***,其中所述表位标签是HA-标签、FLAG-标签、E-标签、S-标签或myc-标签。
14.权利要求1的美容***,其中所述有益试剂是防晒剂、调理剂、包囊化香料、抗微生物剂、抗头皮屑剂、抗真菌剂、气味控制剂、包囊化生物活性剂、脱毛剂、抗痤疮剂或着色剂。
15.权利要求14的美容***,其中所述着色剂是有色颜料、有色颗粒或其组合。
16.权利要求1的美容***,其中所述结合结构域对于人毛发、皮肤或指甲的结合亲和力是对于所述分散体颗粒的结合亲和力的2倍。
17.权利要求1的美容***,其中所述稳定分散体是电荷稳定的。
18.权利要求1的美容***,其中所述颗粒有益成分的ζ电位的绝对值为至少25mV。
19.权利要求1的美容***,其中所述稳定分散体是空间稳定的。
20.权利要求1的美容***,其中所述稳定分散体包含分散剂。
21.权利要求20的美容***,其中所述分散剂是离子型分散剂或非离子型分散剂。
22.权利要求1的美容***,其中所述第一结合结构域使用生物淘选鉴定。
23.权利要求1的美容***,其中所述第一结合结构域采用噬菌体展示、细菌展示、酵母菌展示、核糖体展示、mRNA展示或其组合鉴定。
24.权利要求1的美容***,其中所述结合结构域对于人毛发、人皮肤或人指甲具有由Kd或MB50值测定的结合亲和力为约10-5摩尔浓度至约10-10摩尔浓度。
25.一种将有益试剂施用于人毛发、人皮肤或人指甲中的至少一种的方法,所述方法包括:
使所述人毛发、皮肤或指甲与组合物接触足以使结合结构域与人毛发、皮肤或指甲结合的时间,所述组合物包含以10-5M以下的Kd或MB50值与人毛发、皮肤或指甲中的至少一种结合的至少一个所述结合结构域并且还包含亲和对的第一部分的肽成分;和
随后将平均粒度介于约0.01微米和约75微米之间并具有所述亲和对的第二部分的粒子有益试剂的稳定分散体施用于所述人毛发、皮肤或指甲;
其中所述至少一个结合结构域对于人毛发、皮肤或指甲的结合亲和力大于其对于所述分散体颗粒的结合亲和力。
26.权利要求25的方法,所述方法还包括:使所述人毛发、皮肤或指甲与水溶液接触,随后使所述人毛发、皮肤或指甲与所述稳定粒子分散体接触。
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