CN102583777A - 一种用于防治罗非鱼链球菌病的微生物制剂、其制备方法及应用 - Google Patents

一种用于防治罗非鱼链球菌病的微生物制剂、其制备方法及应用 Download PDF

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吴伟
陈家长
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Abstract

本发明涉及一种用于防治罗非鱼链球菌病的微生物制剂、其制备方法及应用。其由红色诺卡氏菌ATCC11653和珊瑚色诺卡氏菌ACCC40100组成混合菌，采用氮源、碳源及无机盐组成发酵培养基进行发酵培养，在发酵培养完成后，加工成固体粉剂。具有降低罗非鱼养殖水体水质中的氨氮和亚硝酸氮的含量，拮抗罗非鱼链球菌病病原，减少养殖中后期有害物质的积累，提高罗非鱼机体的免疫力，达到生物防治罗非鱼链球菌病的目的，减轻病害所造成的经济损失，保证罗非鱼的养殖产量和质量。本发明的微生物制剂使用方便，使用量小，使用后效果稳定。

Description

一种用于防治罗非鱼链球菌病的微生物制剂、其制备方法及应用
技术领域
本发明涉及一种用于防治罗非鱼链球菌病的微生物制剂、其制备方法及应用，属于水产养殖技术领域。
背景技术
罗非鱼原产于非洲，为内陆热带性鱼类，隶属鲈形目、鲡鱼科、罗非鱼属。由于罗非鱼具有生长快、杂食性、病害少、抗病力强、适应性广等特点，使罗非鱼成为国际上被引种养殖最广泛的鱼种。中国于上世纪70年代引进罗非鱼后，罗非鱼产业得到迅猛发展。2008年我国罗非鱼的养殖产量达120万吨，占世界60%，成为我国主要创汇的出口鱼类品种之一。随着我国罗非鱼养殖密度的增大，养殖环境质量的下降，罗非鱼病害不断发生，且发病情况日趋严重。链球菌病是罗非鱼易患的主要细菌性疾病之一，其主要致病菌为海豚链球菌和无乳链球菌。国内研究者从患病罗非鱼中分离到的链球菌多被鉴定为海豚链球菌，近几年来所引发罗非鱼病害发生率不断增高，发病范围也逐渐扩大。尤其在2009年，我国华南地区大规模暴发的罗非鱼链球菌病，给我国造成了巨大的经济损失，也给我国罗非鱼产业带来严重的影响。因而，罗非鱼链球菌病已成为制约罗非鱼养殖产业可持续发展的重要因素。
目前防治水产动物疾病的主要方法有：化学防治、免疫防治和生态防治（微生态制剂）等。在防治水产动物病害的发生过程中，抗生素和化学药物的应用起到了一定的积极作用。但长期使用也带来一系列副作用，许多病原微生物通过突变和质粒的基因调节对抗生素产生耐药性，导致抗生素用量的增加，引起内源性感染和二重感染；同时破坏和干扰了机体正常菌群和养殖生态平衡，使水产动物产生免疫抑制作用，许多化学药物在水产动物体内积累造成药物残留，这不仅影响了产品质量和我国水产品的贸易出口，而且直接危害人类健康。渔用疫苗虽然具有安全、高效、无污染、无残留及不产生耐药性等优点，但在发展过程中仍面临着许多困难，疫苗其作用范围小、针对性强、成本较高、工作量大等问题在一定程度上制约了渔用疫苗的应用和发展。近年来，随着人们对食品安全、环境安全认识的深入，水产养殖必须向着环境友好和可持续发展战略的方向发展，这就需要寻找一条既能改善生态环境又能减少药物风险的新防治途径，而微生态制剂本身不仅具有优化水域环境、提高养殖生物机体的免疫力和抑制病原菌生长的功能，而且安全性高、无残留、不污染环境等优点，因此在众多防治方法中，微生态制剂作为综合防治水产病害的措施之一，在水产养殖业得到愈来愈多的关注。但目前的微生物制剂多以改良水质和增强机体消化为主，专门化的抑菌防病的微生物制剂尚不多见，因此开发一种集净化水质、抑制病原、提高免疫、安全有效的专门化的防治罗非鱼链球菌病的微生物制剂十分必要。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中存在的不足，提供一种用于防治罗非鱼链球菌病的微生物制剂、其制备方法及应用，其利用两种特异性微生物菌种经合理组配，混合培养后，形成微生态制剂，具有降低罗非鱼养殖水体水质中的氨氮和亚硝酸氮的含量，拮抗罗非鱼链球菌病病原，减少养殖中后期有害物质的积累，提高罗非鱼机体的免疫力，达到生物防治罗非鱼链球菌病的目的，减轻病害所造成的经济损失，保证罗非鱼的养殖产量和质量。
按照本发明提供的技术方案：一种用于防治罗非鱼链球菌病的微生物制剂，其特征在于：所述微生物制剂的活性成分为红色诺卡氏菌ATCC11653和珊瑚色诺卡氏菌ACCC40100。
一种用于防治罗非鱼链球菌病的微生物制剂的制备方法，其特征在于：由红色诺卡氏菌ATCC11653和珊瑚色诺卡氏菌ACCC40100组成混合菌，采用氮源、碳源及无机盐组成发酵培养基进行发酵培养，在发酵培养完成后，加工成固体粉剂, 制得具有降低养殖水体中的氨氮和亚硝酸氮的含量，拮抗罗非鱼链球菌病病原，提高罗非鱼机体的免疫力，防治罗非鱼链球菌病作用的固体粉剂型微生物制剂。
作为本发明的进一步改进，所述的制备方法具体包括以下步骤：
（1）微生物菌种：
菌种A：红色诺卡氏菌ATCC 11653；
菌种B：珊瑚色诺卡氏菌ACCC 40100；
混合菌：将菌种A和菌种B混合，以细菌细胞干重计配比比例，菌种A：菌种B为1：0.5～2；
（2）培养基：
获得大的生物量的通用培养基：以无机氮源和有机碳源作为营养物质；通用培养基配方为：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，可溶性淀粉25g/L，硫酸铵5g/L，磷酸氢二钾0.85g/L；具体配制方法为：先将马铃薯洗净去皮，再称取200g切成小块，加水煮烂（煮沸20～30分钟，能被玻璃棒戳破即可），用四层纱布过滤，滤液中加入葡萄糖和可溶性淀粉，继续加热搅拌混匀，稍冷却后再补加其它成分，并补足水分至1000毫升，调pH7.5；
检测菌种用的固体培养基是在上述通用培养基中加入2%重量百分比的的琼脂；无指明情况下均是采用通用培养基培养；
3）菌种发酵制备：
a）摇床培养：将斜面保存的菌种A和菌种B接入装有通用培养基的500mL或1000mL三角瓶中，通用培养基量为三角瓶容量的1/3，菌种A和菌种B的混合量按混合菌的配比配置，接种量以标准接种环挑满为准；摇床培养12～18h，控制培养温度30～35 ℃，pH 7.5～8.5，转速130～180rpm；
b）种子发酵：接种量6-20mL/L，从摇床培养的三角瓶中接种进50～200L种子发酵罐，采用通用培养基发酵培养，控制发酵温度30～35℃，pH7.5～8.5，种子发酵罐搅拌转速130～180rpm，发酵时间48～120小时，待活菌数在5×109～8×109个/mL时；发酵产物直接制备成制剂或作为种子进一步进行发酵罐发酵；
c）发酵罐发酵：种子发酵产物作为种子接种入500-2000L发酵罐，进行发酵罐发酵，仍然采用通用培养基，发酵条件同种子发酵罐发酵；
（4）固体粉剂的制备：发酵培养后的发酵液通过干燥制备成一定粒度的固体粉剂。
作为本发明的进一步改进，所述步骤（4）中，固体粉剂采用真空干燥方法制得，具体操作为：发酵培养后的发酵液添加吸附载体，发酵液：吸附载体重量比为1：2～5，吸附后进行干燥处理；根据干燥温度、通风情况和铺陈厚度，干燥时间为8～30 小时，得吸附粉；干燥后的吸附粉，根据对活菌数的要求添加同类型吸附载体进行稀释处理，吸附粉：吸附载体重量比为1：1～10，活菌含量在1×108～2×108个/g。
作为本发明的进一步改进，所述步骤（4）中，固体粉剂采用低温干燥方法制得，具体操作为：发酵培养后的发酵液采用离心机在5000～8000rpm下离心10～15min，收集离心后的沉淀菌体，添加保护剂后进行低温（-80℃）冷冻干燥处理，制备成冻干粉；冷冻干燥后的冻干粉，根据对活菌数的要求添加吸附载体进行稀释处理，冻干粉：吸附载体重量比为1：1～1000，活菌含量在1×108～2×108个/g。
作为本发明的进一步改进，所述吸附载体选用膨润土、麦麸、次粉或淀粉。
作为本发明的进一步改进，所述保护剂选用海藻糖、蔗糖、牛血清蛋白、牛奶中的一种或几种。
本发明的微生物制剂在防治罗非鱼链球菌病方面的应用，其用于罗非鱼养殖池塘，用量为0.5～1.0Kg/亩·米水深。
本发明中，在无指明情况下均是采用通用培养基培养。需要对本发明的产品进行检测时，采用加入2%重量百分比琼脂的通用培养基，即固体培养基。
本发明中各组分的作用原理如下：
1、红色诺卡氏菌：主要是净化罗非鱼养殖水质，去除氨氮和亚硝酸盐氮，提高罗非鱼的免疫力。实验室结果显示：水体中红色诺卡氏菌达105个/mL时，作用15天后，水中氨氮、亚硝酸盐含量降低了85.51%和54.38%；罗非鱼免疫力显著提高，其碱性磷酸酶（AKP）、补体C3活力提高50%以上。
2、珊瑚色诺卡氏菌：主要是分泌拮抗罗非鱼链球菌病病原的物质，抑制病原微生物。实验室结果显示：珊瑚色诺卡氏菌对海豚链球菌的拮抗主要来自其代谢产物，拮抗抑菌活力为8AU/ml。对珊瑚色诺卡氏菌抑菌物质的理化特性、分离等进行了初步的研究，研究表明：抑菌物质具有较好的热稳定性，100℃处理30min后保持完全的活性；对酸碱稳定，在pH值为4-11范围内的抑菌活性变化不大，pH值为11时抑菌活性仍保持94.08%；对蛋白酶K和胰蛋白酶敏感；对紫外光稳定；水溶性好，微溶于乙酸乙酯、正丁醇、石油醚中，不溶于***和氯仿；在紫外吸收光谱下具有蛋白质的特征吸收。上述说明抑菌物质可能是一种蛋白类物质。珊瑚色诺卡氏菌的过滤除菌上清液经40%饱和硫酸铵处理所得的沉淀物质具有抑菌活性，处理后的上清液无抑菌活性，进一步说明抑菌物质是一种大分子蛋白质。
3、本发明中的菌种A（红色诺卡氏菌）和菌种B（珊瑚色诺卡氏菌），配比比例（细菌细胞干重比例）为1：0.5～2，形成复合微生物产品，有效去除氨氮、亚硝酸盐氮，拮抗罗非鱼链球菌病病原，提高罗非鱼机体的免疫力。
本发明与已有技术相比，具有以下优点：
本发明利用对水产养殖生物无害、对自然水生态环境有益无害的两种诺卡氏放线菌，通过复合配比发酵培养后，利用其对氨氮和亚硝酸氮的转化作用，改善水体环境质量，并利用其所分泌产生的代谢产物拮抗并抑制罗非鱼链球菌病的病原，提高罗非鱼机体的免疫力，减轻罗非鱼链球菌病的发生和由此产生的经济损失。
本发明的防治罗非鱼链球菌病的微生物制剂使用方便，使用量小，每亩水面每米水深的最小用量仅为0.5kg；使用后效果稳定，可显著降低罗非鱼养殖水体中的氨氮、亚硝酸盐氮等有害物质的含量，减少罗非鱼链球菌病的病原微生物数量，增加水体溶氧，提高罗非鱼机体的免疫力，改善罗非鱼的生存条件，有效防止罗非鱼链球菌病的发生和突发性死亡，提高罗非鱼的养殖产量和质量。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
（1）将菌种A（红色诺卡氏菌ATCC 11653）和菌种B（珊瑚色诺卡氏菌ACCC 40100）混合，以细菌细胞干重计配比比例，菌种A：菌种B为1：1；
（2）培养基：
获得大的生物量的通用培养基：以无机氮源和有机碳源作为营养物质；通用培养基配方为：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，可溶性淀粉25g/L，硫酸铵5g/L，磷酸氢二钾0.85g/L；具体配制方法为：先将马铃薯洗净去皮，再称取200g切成小块，加水煮至能被玻璃棒戳破即可，用四层纱布过滤，滤液中加入葡萄糖和可溶性淀粉，继续加热搅拌混匀，稍冷却后再补加其它成分，并补足水分至1000毫升，调pH7.5；
3）菌种发酵制备：
a）摇床培养：将斜面保存的菌种A和菌种B接入装有通用培养基的1000mL三角瓶中，通用培养基量为三角瓶容量的1/3，菌种A和菌种B的混合量按混合菌的配比配置，接种量以标准接种环挑满为准；摇床培养12h，控制培养温度35 ℃，pH 8.5，转速180rpm；
b）种子发酵：接种量6mL/L，从摇床培养的三角瓶中接种进50L种子发酵罐，采用通用培养基发酵培养，控制发酵温度35℃，pH8.5，种子发酵罐搅拌转速180rpm，发酵时间72小时，待活菌数在5×109个/mL左右时；发酵产物直接制备成制剂；
（4）固体粉剂的制备：发酵培养后的发酵液通过真空干燥制备成一定粒度的固体粉剂，具体操作为：发酵培养后的发酵液添加膨润土作为吸附载体，发酵液：膨润土重量比为1：2，吸附后进行干燥处理，干燥时间为30 小时，得吸附粉；干燥后的吸附粉，根据对活菌数的要求添加同类型吸附载体进行稀释处理，吸附粉：膨润土重量比为1：2，活菌含量在1×108个/g左右。
该微生物制剂的实际使用效果如下：
在广东茂名一罗非鱼养殖池塘使用，面积15亩，水深1.5米，夏季高温（6～8月）时池塘水质过浓，水色不好，水质中氨氮、亚硝酸氮分别达到 2.20mg/L、0.45mg/L，超标严重，水体中海豚链球菌达5×105个/mL，影响罗非鱼的生长。在一晴天上午10点左右将上述配方的防治罗非鱼链球菌病的微生物制剂应用于养殖池塘中，用量为0.5Kg/亩·米水深。用后3天水色好转，由浓绿色转为浅黄绿色，透明度增大；水体中氨氮、亚硝酸氮含量降至0.50mg/L和0.12mg/L；5天后，海豚链球菌数量下降为8×103个/mL，罗非鱼摄食正常。
实施例2
（1）将菌种A（红色诺卡氏菌ATCC 11653）和菌种B（珊瑚色诺卡氏菌ACCC 40100）混合，以细菌细胞干重计配比比例，菌种A：菌种B为1：2；
（2）培养基：
获得大的生物量的通用培养基：以无机氮源和有机碳源作为营养物质；通用培养基配方为：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，可溶性淀粉25g/L，硫酸铵5g/L，磷酸氢二钾0.85g/L；具体配制方法为：先将马铃薯洗净去皮，再称取200g切成小块，加水煮至能被玻璃棒戳破即可，用四层纱布过滤，滤液中加入葡萄糖和可溶性淀粉，继续加热搅拌混匀，稍冷却后再补加其它成分，并补足水分至1000毫升，调pH7.5；
3）菌种发酵制备：
a）摇床培养：将斜面保存的菌种A和菌种B接入装有通用培养基的1000mL三角瓶中，通用培养基量为三角瓶容量的1/3，菌种A和菌种B的混合量按混合菌的配比配置，接种量以标准接种环挑满为准；摇床培养15h，控制培养温度32 ℃，pH 8.0，转速155rpm；
b）种子发酵：接种量6mL/L，从摇床培养的三角瓶中接种进50L种子发酵罐，采用通用培养基发酵培养，控制发酵温度32℃，pH8.0，种子发酵罐搅拌转速155rpm，发酵时间80小时，待活菌数在6×109个/mL左右时；发酵产物直接制备成制剂；
（4）固体粉剂的制备：发酵培养后的发酵液通过低温冷冻干燥制备成一定粒度的固体粉剂，具体操作为：发酵培养后的发酵液采用离心机在6000rpm下离心15min，收集离心后的沉淀菌体，添加海藻糖作为保护剂，然后进行低温（-80℃）冷冻干燥处理，制备成冻干粉；冷冻干燥后的冻干粉，根据对活菌数的要求添加次粉进行稀释处理，冻干粉：次粉重量比为1：500，活菌含量在1.5×108个/g左右。
该微生物制剂的实际使用效果如下：
在广东江门一罗非鱼养殖池塘使用，面积20亩，水深1.5米，夏季高温（6～8月）时池塘水质过浓，水色不好，水质中氨氮、亚硝酸氮分别达到 2.85mg/L、0.52mg/L，超标严重，水体中海豚链球菌达2×106个/mL，影响罗非鱼的生长，罗非鱼有20%左右的死亡率。在一晴天上午10点左右将上述配方的防治罗非鱼链球菌病的微生物固体粉剂应用于养殖池塘中，用量为1.0Kg/亩·米水深，连用3天。用后5天水色好转，由浓绿色转为浅黄绿色，透明度增大；水体中氨氮、亚硝酸氮含量降至0.42mg/L和0.10mg/L；5天后，海豚链球菌数量下降为3×104个/mL，罗非鱼死亡率下降60%，罗非鱼摄食恢复正常。
实施例3
（1）将菌种A（红色诺卡氏菌ATCC 11653）和菌种B（珊瑚色诺卡氏菌ACCC 40100）混合，以细菌细胞干重计配比比例，菌种A：菌种B为2：1；
（2）培养基：
获得大的生物量的通用培养基：以无机氮源和有机碳源作为营养物质；通用培养基配方为：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，可溶性淀粉25g/L，硫酸铵5g/L，磷酸氢二钾0.85g/L；具体配制方法为：先将马铃薯洗净去皮，再称取200g切成小块，加水煮至能被玻璃棒戳破即可，用四层纱布过滤，滤液中加入葡萄糖和可溶性淀粉，继续加热搅拌混匀，稍冷却后再补加其它成分，并补足水分至1000毫升，调pH7.5；
（3）菌种发酵制备：
a）摇床培养：将斜面保存的菌种A和菌种B接入装有通用培养基的1000mL三角瓶中（共接3瓶），通用培养基量为三角瓶容量的1/3，菌种A和菌种B的混合量按混合菌的配比配置，接种量以标准接种环挑满为准；摇床培养18h，控制培养温度30 ℃，pH 7.5，转速130rpm；
b）种子发酵：接种量10mL/L，从摇床培养的三角瓶中接种进100L种子发酵罐，采用通用培养基发酵培养，控制发酵温度30℃，pH7.5，种子发酵罐搅拌转速130rpm，发酵时间48小时，待活菌数在8×109个/mL左右时；发酵产物作为种子进一步进行发酵罐发酵；
c）发酵罐发酵：种子发酵产物作为种子接种入2000L发酵罐，进行发酵罐发酵，仍然采用通用培养基，发酵条件同种子发酵罐发酵；
（4）固体粉剂的制备：发酵培养后的发酵液通过真空干燥制备成一定粒度的固体粉剂，具体操作为：发酵培养后的发酵液添加膨润土作为吸附载体，发酵液：膨润土重量比为1：5，吸附后进行干燥处理，干燥时间为20 小时，得吸附粉；干燥后的吸附粉，根据对活菌数的要求添加同类型吸附载体进行稀释处理，吸附粉：膨润土重量比为1：5，活菌含量在2×108个/g左右。
该微生物制剂的实际使用效果如下：
在海南一罗非鱼养殖池塘使用，面积10亩，水深1.5米，夏季高温（6～8月）时池塘水质过浓，水色不好，水质中氨氮、亚硝酸氮分别达到3.18mg/L、0.48mg/L，超标严重，水体中海豚链球菌达1×106个/mL，影响罗非鱼的生长，罗非鱼有10%左右的死亡率。在一晴天上午10点左右将上述配方的防治罗非鱼链球菌病的微生物固体粉剂应用于养殖池塘中，用量为0.8Kg/亩·米水深。用后2天水色好转，由浓绿色转为浅黄绿色，透明度增大；水体中氨氮、亚硝酸氮含量降至0.62mg/L和0.08mg/L；5天后，海豚链球菌数量下降为1×104个/mL，罗非鱼死亡率下降50%，罗非鱼摄食恢复正常。
另外，上述实施例1～3中，菌种A和菌种B按比例混合发酵培养后，获得复合细菌细胞。在实验室条件下，细胞干重浓度为 2.0～3.0 g/L时，15天内对初始浓度为5.0mg/L的氨氮和0.6mg/L的亚硝酸盐氮的去除率达到62.31%～85.51%和21.07%～54.38%；对初始浓度为106个/mL的海豚链球菌的拮抗率达25.7%～65.3%；对由链球菌引发的罗非鱼死亡率可降低37.5%～48.2%。

Claims (8)

1. 一种用于防治罗非鱼链球菌病的微生物制剂，其特征在于：所述微生物制剂的活性成分为红色诺卡氏菌ATCC11653和珊瑚色诺卡氏菌ACCC40100。
2.一种用于防治罗非鱼链球菌病的微生物制剂的制备方法，其特征在于：由红色诺卡氏菌ATCC11653和珊瑚色诺卡氏菌ACCC40100组成混合菌，采用氮源、碳源及无机盐组成发酵培养基进行发酵培养，在发酵培养完成后，加工成固体粉剂, 制得具有降低养殖水体中的氨氮和亚硝酸氮的含量，拮抗罗非鱼链球菌病病原，提高罗非鱼机体的免疫力，防治罗非鱼链球菌病作用的固体粉剂型微生物制剂。
3.如权利要求2所述的用于防治罗非鱼链球菌病的微生物制剂的制备方法，其特征在于：具体包括以下步骤：
（1）微生物菌种：
菌种A：红色诺卡氏菌ATCC 11653；
菌种B：珊瑚色诺卡氏菌ACCC 40100；
混合菌：将菌种A和菌种B混合，以细菌细胞干重计配比比例，菌种A：菌种B为1：0.5～2；
（2）培养基：
获得大的生物量的通用培养基：以无机氮源和有机碳源作为营养物质；通用培养基配方为：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，可溶性淀粉25g/L，硫酸铵5g/L，磷酸氢二钾0.85g/L，pH7.5；
检测菌种用的固体培养基是在上述通用培养基中加入2%重量百分比的的琼脂；无指明情况下均是采用通用培养基培养；
（3）菌种发酵制备：
a）摇床培养：将斜面保存的菌种A和菌种B接入装有通用培养基的三角瓶中，通用培养基量为三角瓶容量的1/3，菌种A和菌种B的混合量按混合菌的配比配置，接种量以标准接种环挑满为准；摇床培养12～18h，控制培养温度30～35 ℃，pH 7.5～8.5，转速130～180rpm；
b）种子发酵：接种量6-20mL/L，从摇床培养的三角瓶中接种进50～200L种子发酵罐，采用通用培养基发酵培养，控制发酵温度30～35℃，pH7.5～8.5，种子发酵罐搅拌转速130～180rpm，发酵时间48～120小时，待活菌数在5×109～8×109个/mL时；发酵产物直接制备成制剂或作为种子进一步进行发酵罐发酵；
c）发酵罐发酵：种子发酵产物作为种子接种入500-2000L发酵罐，进行发酵罐发酵，仍然采用通用培养基，发酵条件同种子发酵罐发酵；
（4）固体粉剂的制备：发酵培养后的发酵液通过干燥制备成一定粒度的固体粉剂。
4.如权利要求3所述的用于防治罗非鱼链球菌病的微生物制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤（4）中，固体粉剂采用真空干燥方法制得，具体操作为：发酵培养后的发酵液添加吸附载体，发酵液：吸附载体重量比为1： 2～5，吸附后进行干燥处理；根据干燥温度、通风情况和铺陈厚度，干燥时间为8～30 小时，得吸附粉；干燥后的吸附粉，根据对活菌数的要求添加同类型吸附载体进行稀释处理，吸附粉：吸附载体重量比为1：1～10，活菌含量在1×108～2×108个/g。
5.如权利要求3所述的用于防治罗非鱼链球菌病的微生物制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤（4）中，固体粉剂采用低温干燥方法制得，具体操作为：发酵培养后的发酵液采用离心机在5000～8000rpm下离心10～15min，收集离心后的沉淀菌体，添加保护剂后进行低温冷冻干燥处理，制备成冻干粉，所述低温温度为-80℃；冷冻干燥后的冻干粉，根据对活菌数的要求添加吸附载体进行稀释处理，冻干粉：吸附载体重量比为1：1～1000，活菌含量在1×108～2×108个/g。
6.如权利要求4或5所述的用于防治罗非鱼链球菌病的微生物制剂的制备方法，其特征在于：所述吸附载体选用膨润土、麦麸、次粉或淀粉。
7.如权利要求5所述的用于防治罗非鱼链球菌病的微生物制剂的制备方法，其特征在于：所述保护剂选用海藻糖、蔗糖、牛血清蛋白、牛奶中的一种或几种。
8.一种按权利要求1所述的微生物制剂在防治罗非鱼链球菌病方面的应用，其特征在于：所述微生物制剂用于罗非鱼养殖池塘，用量为0.5～1.0Kg/亩·米水深。
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