CN102573822B - 包含植物来源的含多胺提取物用作活性组分的应激减轻剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于预防或抑制细胞水平的应激的组合物，其包含植物来源的含多胺提取物并具有应激缓和活性、抗应激活性、应激减轻活性、应激预防活性、应激防止活性和应激保护活性等。此外，公开了一种包括所述组合物的化妆品、准药品、医疗用品、卫生用品、药品、食品或饮品。具体地，公开了一种应激缓和剂，其特征在于包括植物来源的含多胺提取物作为活性成分。

Description

包含植物来源的含多胺提取物用作活性组分的应激减轻剂

技术领域

本发明涉及增强各种细胞中的应激减轻作用的物质以及此类物质的应用。 

背景技术

人类和动物受各种应激(stress)的影响。此类应激强烈涉及环境因素。环境因素可能为天然因素如环境温度(温度)、湿度(干度)或紫外线；以及涉及营养、生活环境或生活方式的因素。人类和动物通常由于天然因素而经受应激，且各种所得疾病等强烈涉及细胞***速度的降低或细胞功能的下降。例如，皮肤由表皮细胞、成纤维细胞以及在表皮细胞和成纤维细胞外侧支持皮肤结构的胞外基质如弹性蛋白或胶原蛋白组成。在年轻皮肤中，皮肤组织之间的相互作用保持恒定，结果确保了保湿性、柔韧性和弹性；皮肤显现弹性和光泽；并且保持皮肤新鲜。然而，温度(热或冷)应激、干度应激和紫外线应激等特别会引起胞外基质或成纤维细胞的功能下降。结果，皮肤的柔韧性和保湿性功能下降；而皮肤失去其弹性和光泽度并具有如粗糙表面、皱纹或暗淡的症状。 

为了防止或抑制细胞水平的应激，已研究了应激抑制剂、应激减轻剂和应激预防剂。例如，已知蛋白质如丝蛋白、角蛋白和胶原蛋白的分解产物(专利文献1)；用于中药和生药的原始动物和植物来源的精华(专利文献2)；忍冬科植物精华(专利文献3)；尿苷酸、尿苷和尿嘧啶的核酸相关物质(专利文献4)；和C₃至C₆糖醇和/或此类化合物的衍生物的二糖醇磷酸酯(专利文献5)；等。然而，此类物质不提供充分作用或效力。因此，没有 提供充分作用和效力的抗应激剂或应激减轻剂。 

多胺为具有两个以上的伯氨基的脂族烃的通用名，其为普遍存在于生物中的天然物质。多胺的生理作用已受到关注。已知多胺主要具有以下生理作用：(1)由于多胺与核酸之间的相互作用而稳定和改变核酸结构；(2)促进各种核酸合成***的作用；(3)激活蛋白质合成***；(4)稳定细胞膜并增强物质的膜通透性；(5)消除活性氧；和(6)促进细胞增殖。然而，根本不知道多胺是否提供特别针对皮肤细胞(成纤维细胞)的抗应激作用或应激减轻作用。 

专利文献1：日本未审查专利申请公开2003-81868号 

专利文献2：日本未审查专利申请公开2001-187725号 

专利文献3：日本未审查专利申请公开2001-213795号 

专利文献4：日本未审查专利申请公开2005-330213号 

专利文献5：日本未审查专利申请公开(PCT申请译文)2005-506676号 

附图说明

[图1]图1说明低温应激条件下在实施例中制备的大豆提取物对正常人类皮肤成纤维细胞的细胞赋活(cell vitalization)作用。 

[图2]图2说明高温应激条件下在实施例中制备的大豆提取物对正常人类皮肤成纤维细胞的细胞赋活作用。 

[图3]图3说明低温应激条件下在实施例中制备的小麦提取物对正常人类皮肤成纤维细胞的细胞赋活作用。 

[图4]图4说明高温应激条件下在实施例中制备的小麦提取物对正常人类皮肤成纤维细胞的细胞赋活作用。 

[图5]图5说明低温应激条件下，合成多胺、实施例中制备 的大豆提取物和实施例中制备的小麦提取物对正常人类皮肤成纤维细胞的赋活作用间的比较。 

[图6]图6说明高温应激条件下，合成多胺、实施例中制备的大豆提取物和实施例中制备的小麦提取物对正常人类皮肤成纤维细胞的赋活作用间的比较。 

发明内容

发明要解决的问题

提供对哺乳动物、特别是人类的抗应激作用或应激减轻作用的目的是相当重要的。已发现几种源自动物和植物的抗应激剂和应激减轻剂。然而，这些试剂实际上并未提供工业应用的充分或稳定的效力。因此，将研究新的抗应激剂和应激减轻剂。 

为了预防或抑制细胞水平的应激，本发明的目的为提供包含植物来源的含多胺提取物的组合物，其克服上述问题并具有应激减轻作用、抗应激作用、应激抑制作用、应激预防作用、应激防止作用或应激保护作用等。本发明的另一目的为提供各自包含此类组合物的化妆品、准药品、医疗用品、卫生用品、药品、食品或饮品。 

用于解决问题的方案

本发明的发明人已对如何实现该目的进行了彻底研究。结果，本发明人已发现含多胺的植物提取物充分地提供对皮肤细胞(特别地，成纤维细胞)的应激减轻作用、抗应激作用、应激抑制作用、应激预防作用、应激防止作用和应激保护作用。因此，完成了本发明。 

具体地，本发明包含以下发明(1)至(15)。 

(1)应激减轻剂，其包括植物来源的含多胺提取物用作活性组分。 

(2)根据(1)所述的应激减轻剂，其用作温度应激减轻剂。 

(3)根据(2)所述的应激减轻剂，其中所述温度应激减轻剂为低温应激减轻剂。 

(4)根据(2)所述的应激减轻剂，其中所述温度应激减轻剂为高温应激减轻剂。 

(5)根据(2)至(4)任一项所述的应激减轻剂，其中所述植物来源的含多胺提取物为源自选自由大豆种子、大豆胚芽、大豆胚、大豆芽、小麦种子、小麦胚芽、小麦胚、小麦芽、豆乳和***组成的组中的至少一种材料的提取物。 

(6)根据(1)至(5)任一项所述的应激减轻剂，其中所述多胺包括具有两个以上的伯氨基的脂族烃化合物。 

(7)根据(1)至(6)任一项所述的应激减轻剂，其中所述多胺为选自由1，3-二氨基丙烷、腐胺、尸胺、卡胺(cardine)、亚精胺、高精脒(homospermidine)、氨丙基尸胺、终胺(termine)、精胺、热精胺、刀豆氨酸(canavalmine)、氨戊基降精胺(aminopentylnorspermidine)、N，N-双(氨丙基)尸胺、高精胺、嗜热性五胺(caldopentamine)、均嗜热性五胺(homocaldopentamine)、嗜热性六胺(caldohexamine)和均嗜热性六胺(aminopentylnorspermidine)组成的组中的至少一种化合物。 

(8)根据(1)至(7)任一项所述的应激减轻剂，其中所述多胺为选自由腐胺、亚精胺和精胺组成的组中的至少一种化合物。 

(9)一种化妆品组合物，其包括作为活性组分的根据权利要求1至8任一项所述的应激减轻剂。 

(10)一种食品组合物，其包括作为活性组分的根据权利要求1至8任一项所述的应激减轻剂。 

(11)一种用于减轻皮肤应激的方法，所述方法包括使植物 来源的含多胺提取物与动物皮肤相接触的步骤。 

(12)根据(11)所述的减轻应激的方法，其中所述植物来源的含多胺提取物为源自选自由大豆种子、大豆胚芽、大豆胚、大豆芽、小麦种子、小麦胚芽、小麦胚、小麦芽、豆乳和***组成的组中的至少一种材料的提取物。 

(13)根据(11)或(12)所述的减轻应激的方法，其中所述多胺包括具有两个以上的伯氨基的脂族烃化合物。 

(14)根据(11)至(13)任一项所述的减轻应激的方法，其中所述多胺选自由1，3-二氨基丙烷、腐胺、尸胺、卡胺、亚精胺、高精脒、氨丙基尸胺、终胺、精胺、热精胺、刀豆氨酸、氨戊基降精胺、N，N-双(氨丙基)尸胺、高精胺、嗜热性五胺、均嗜热性五胺、嗜热性六胺和均嗜热性六胺组成的组中的至少一种化合物。 

(15)根据(11)至(14)任一项所述的减轻应激的方法，其中所述多胺为选自由腐胺、亚精胺和精胺组成的组中的至少一种化合物。 

发明的效果

本发明可提供应激减轻剂，期望其为细胞提供优异的应激减轻作用、抗应激作用、应激抑制作用、应激预防作用、应激防止作用或应激保护作用等，并包含植物来源的含多胺提取物用作活性组分。可提供各自包含此类应激减轻剂的化妆品、准药品、医疗用品、卫生用品、药品、食品或饮品。 

具体实施方式

在本发明中，“应激减轻作用”表示减轻在各种应激下动物细胞中所引起的细胞功能的下降，具体地表示，例如，减轻各自在各种应激下动物或人类细胞中所引起的细胞***功能的下 降、细胞激活功能的下降、细胞赋活功能的下降或细胞免疫功能的下降。“抗应激作用和应激减轻作用”表示，例如，皮肤细胞中，减轻由于应激引起的基底膜结构变化的累积而造成的皮肤细胞的功能的下降，从而，例如，预防并改善皮肤的皱纹、松弛或硬化等并保持弹性、年轻和健康的皮肤状态；以及表示，例如，毛乳突细胞或毛基质细胞中，减轻由于应激造成的毛乳突细胞或毛基质细胞的功能的下降，从而，例如，保持毛发周期(hair cycle)并抑制脱毛。“应激减轻作用”还表示抗应激作用、应激抑制作用、应激预防作用、应激防止作用或应激保护作用。 

在本发明中，“应激减轻剂”是指具有应激减轻作用的试剂，还表示抗应激剂、应激抑制剂、应激预防剂、应激防止剂或应激保护剂。 

在本发明中，“应激”表示由于高温(热)、低温(冷)、紫外线、干燥、强光、空气污染、低pH、氧化、药品或过敏等引起的应激。 

在本发明中，“植物提取物”表示通过从植物和/或植物加工物提取所获得的物质。 

在本发明中，具有应激减轻作用的试剂还是抗应激剂、应激抑制剂、应激预防剂、应激防止剂或应激保护剂。 

在本发明中，“植物来源的含多胺提取物”表示从植物和/或植物加工物所获得的含(天然)多胺的植物提取物。在本发明中，“植物来源的含多胺提取物”有时称作“含多胺的植物提取物和/或含多胺作为活性组分的植物提取物”。在本发明中，“植物提取物”表示通过从植物和/或植物加工物提取所获得的物质。包含于植物来源的含多胺提取物的多胺的浓度，以M(摩尔/升)计，通常为0.000001至5M，优选0.000005至3M，和更优选0.00001至2M；以重量％计，通常为0.0001至95重量％，优选0.001至75 重量％，并更优选0.005至50重量％ 

“植物来源的含多胺提取物”可为并非为了增加多胺浓度而纯化的低纯度产物或已用离子交换树脂等纯化并具有相当高的多胺浓度的高纯度产物。大豆/小麦胚芽提取物粉末的低纯度产物具有约0.1至0.2％的多胺浓度。已用离子交换树脂纯化的大豆/小麦胚芽提取物粉末的高纯度产物可具有约30至50重量％的高多胺浓度。当此类提取物为水溶液的形式时，浓度为上述浓度的1/10至1/100。 

本发明中的“多胺”为具有两个以上的伯氨基的脂族烃的通用名，其为普遍存在于生物中的天然物质。已发现二十种以上的多胺：例如，1，3-二氨基丙烷、腐胺、尸胺、卡胺、亚精胺、高精脒、氨丙基尸胺、终胺、精胺、热精胺、刀豆氨酸、氨戊基降精胺、N，N-双(氨丙基)尸胺、高精胺、嗜热性五胺、均嗜热性五胺、嗜热性六胺和均嗜热性六胺。代表性的多胺为腐胺、亚精胺和精胺。 

“腐胺”为代表性多胺之一，为普遍存在于生物中的一般天然物质，并为具有两个伯氨基的脂族烃化合物。“亚精胺”为代表性多胺之一，为普遍存在于生物中的一般天然物质，并为具有三个伯氨基的脂族烃化合物。“精胺”为代表性多胺之一，为普遍存在于生物中的一般天然物质，并为具有四个伯氨基的脂族烃化合物。 

从其中获得含多胺的植物提取物和/或含多胺作为活性组分的植物提取物的植物的非限制性实例包括：双子叶植物、单子叶植物、草本植物、乔木植物、葫芦科植物、茄科植物、禾本科植物、十字花科植物、豆科植物、锦葵属植物、菊科(Compositous)植物、藜科植物、前述的植物提取物以及前述的植物精华。具体实例包括：甘薯、西红柿、黄瓜、南瓜、甜瓜、 西瓜、烟草、拟南芥(Arabidopsis thaliana)、甜椒、茄子、豆、天南星科植物(aroid)、菠菜、胡萝卜、草莓、马铃薯、水稻、玉米、苜蓿、小麦、大麦、大豆、油菜、高梁、尤加利(eucalyptus)、山杨(aspen)、洋麻(kenaf)、杜仲(Eucommia ulmoides)、甘蔗、甜菜、木薯、西谷椰子、藜科植物(chenopod)、百合、兰花、康乃馨、玫瑰、菊花、矮牵牛、蝴蝶草属植物(torenia)、金鱼草、仙客来、满天星、天竺葵、向日葵、草坪草、棉花、金针菇(velvet shank)、玉蕈离褶伞(Lyophyllum shimeji)、松茸(Tricholoma matsutake)、椎茸(shiitake mushroom)、蘑菇、人参、落叶松蕈、姜黄、亚洲人参、柑橘、绿茶、红茶、乌龙茶、香蕉、猕猴桃、发酵豆(纳豆)、豆乳、大豆精华、小麦精华、胚芽精华、胚精华、果汁、***(豆渣(okara))、水稻胚芽、小麦胚芽、大麦胚芽、大豆胚芽、玉米胚芽、蜀黍胚芽和向日葵胚芽。 

优选的植物为单子叶植物和双子叶植物，更优选地为禾本科植物和豆科植物。特别优选的植物和植物加工物为玉米、蘑菇、大豆、小麦、发酵豆(纳豆)、豆乳、***(豆渣)、小麦胚芽、大豆胚芽、玉米胚芽、大豆精华、小麦精华、胚芽精华和胚精华，并更优选大豆种子、大豆胚芽、大豆胚、大豆芽、小麦种子、小麦胚芽、小麦胚、小麦芽、豆乳和***(豆渣)。 

从其中获得含多胺的植物提取物和/或含多胺作为活性组分的植物提取物的植物组织不特别限定。此类植物组织优选以种子的形式或处于生长期。在植物处于生长期的情况下，根据本发明的植物提取物可从植物的全部或部分组织中获得。此类提取部分的非限制性实例包括整个植株、花、花芽、子房、果实、叶、子叶、茎、芽、根、种子、干种子、胚和胚芽；优选地，果实、叶、茎、芽、种子、干种子、胚芽和胚；特别优选地，种子、干种子、胚芽和胚。 

从其中获得含多胺的植物提取物和/或含多胺作为活性组分的植物提取物的植物可为植物加工物。此类植物加工物通过以下步骤加工：在低温、室温或高温的条件下，通过浸渍法、蒸馏法、压榨法、超声法、超临界流体法或亚临界流体法等用水、有机溶剂或水和有机溶剂的混合物等从植物中收集提取物。此外，例如，可使用通过使植物或从植物中收集的提取物进行如发酵的过程而获得的加工产物：例如，植物精华、豆乳、***(豆渣)、面粉、发酵精华或发酵豆(纳豆)等。 

通过其获得含多胺的植物提取物和/或含多胺作为活性组分的方法可为其中通过添加酸性溶液至植物和/或植物加工物以便实现酸性条件从而进行提取的方法。“酸性条件”表示其中pH为6以下的条件。通过实现满足提取中的酸性条件的pH，多胺组合物可从植物组织中有效并稳定地收集。该优势可在6以下的pH范围内一致地实现；然而，pH优选4以下，特别优选2以下。相应于所使用的酸性溶液的未稀释溶液的pH的pH下限不特别限定；然而，pH的下限优选0至2。 

与用有机溶剂如乙醇或甲醇收集的植物提取物相比较，通过在酸性条件(含酸性水溶液)下获得植物提取物，多胺量收集率高；特别地，可使难溶于水的化合物多胺在酸性条件下溶解于水中；还增加了用有机溶剂低效提取的游离多胺的含量。多胺在酸性条件下显示优异的稳定性并且增强植物提取物中多胺和其他活性组分的稳定性。此外，通过在酸性条件(用酸性水溶液)下获得植物提取物，还收集除多胺以外的天然活性组分。天然活性组分的实例包括糖类如单糖和寡糖；肽和蛋白质。多胺和除多胺以外的天然活性组分的存在进一步增强抗应激作用和应激减轻作用。此外，所收集的植物提取物为水溶液的形式，因而与有机溶剂相比期望高度安全的优点。 

用于实现酸性条件所添加的酸性溶液可为无机酸如盐酸、硫酸或磷酸；有机酸如乙酸、丙酸、丁酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、苹果酸、乳酸、酒石酸、柠檬酸或苯甲酸；或酸性水。此类酸性溶液优选，例如无机酸或有机酸如0.01N至6N盐酸、硫酸、硝酸、乙酸、磷酸、三氯乙酸、磺基水杨酸、甲酸、柠檬酸、乳酸或0.1至10％高氯酸；特别优选0.0625至1N盐酸、0.25至5％高氯酸或0.1至1N硫酸等。 

在提取步骤中，可添加多元酚吸附剂。多元酚吸附剂的添加可促进含多胺的植物提取物和/或含多胺作为活性组分的植物提取物的收集。多元酚吸附剂不特别限定，只要多元酚吸附剂可吸附多元酚即可。然而，多元酚吸附剂优选聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)或聚乙二醇(PEG)等；并特别优选聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)。此类多元酚吸附剂可为商购可得产品：例如POLYCLAR(注册商标)(由ISP Inc.制造)、Divergan(注册商标)(由BASF制造)、Dowex(注册商标)-1或PVP-40等。通过在将酸性溶液添加到植物和/或植物加工物后添加多元酚吸附剂，期望收集量、产率或含多胺的植物提取物和/或含多胺作为活性组分的植物提取物的纯度增加。此外，多元酚吸附剂的添加可抑制多元酚等进入植物提取物，多元酚等负面影响细胞和皮肤细胞中的赋活、抗氧化、抗老化、胶原蛋白产物、透明质酸产物或应激减轻作用。所添加的此类多元酚吸附剂的量优选0.1至30％(w/v)、更优选0.5至20％(w/v)、并仍更优选1至10％(w/v)。 

含多胺的植物提取物和/或含多胺作为活性组分的植物提取物的收集量可通过添加酸性溶液到植物和/或植物加工物以便实现酸性条件而增加，如必要，添加多元酚吸附剂，然后粉碎、研磨并混合植物和/或植物加工物。特别地，在具有细胞壁 的植物组织的情况下，细胞壁期望地破坏。在不具有细胞壁的植物加工物或植物精华的情况下，不需要用于破坏细胞壁的粉碎或研磨。粉碎或研磨可通过例如其中采用混合器(mixer)、混合机(blender)、共混均质机、研钵或超声波粉碎机等的方法来进行。 

包含于植物和/或植物加工物中的多胺充分提取到酸性溶液(液体级分(fractionation))，然后进行液体级分从残留物或沉淀的分离，如离心分离或过滤分离。收集的液体级分包含大量多胺，并获得“含多胺的植物提取物和/或含多胺作为活性组分的植物提取物”。如必要，含多胺的植物提取物可通过离子交换法、膜分级法、凝胶过滤法或电渗析法进行去离子化处理或纯化处理。通过进行这些方法的至少之一，可获得多胺纯度更高的植物提取物。在离子交换法的情况下，植物提取溶液经过填充有离子交换树脂的柱，从而从杂质如氨基酸、肽、蛋白质和糖类分离用作活性组分的多胺。在所使用的离子交换树脂中，离子交换基团可为磺酸基、磺丙基、磷酸基、羧甲基、氨乙基、二乙氨基、季氨乙基或季铵基等。可使用阳离子交换树脂或阴离子交换树脂。当使用阳离子交换树脂时，阳离子交换树脂吸附用作活性组分的多胺。因此，充分分离非吸附物质，然后用酸性溶液如硫酸或盐酸或盐如氯化钠溶液洗脱活性组分。当使用阴离子交换树脂时，阴离子交换树脂不吸附用作活性组分的多胺，因此收集含活性组分的非吸附馏分。在膜分级法的情况下，植物提取物通过UF膜进行超滤(UF)，所述UF膜为纤维素类膜、醋酸纤维素类膜、聚砜类膜、聚酰胺类膜、聚丙烯腈类膜、聚四氟乙烯类膜、聚酯类膜或聚丙烯类膜等，并具有1,000至100,000的级分分子量范围，从而收集包含用作活性组分的多胺的滤液。此外，通过盐阻断(salt blocking)百分比为30至80％的 NF膜进行纳滤(NF)而使活性组分溶液去离子化。在凝胶过滤法的情况下，中和植物提取物并通过填充有凝胶过滤载体的柱以根据分子量分级。因此，收集用作活性组分的多胺。此类凝胶过滤载体为葡聚糖类载体、丙烯酰胺类载体、琼脂糖类载体、纤维素类载体、聚乙烯类载体、玻璃类载体或聚苯乙烯类载体等，并具有100至100,000的分级分子量范围。在电渗析法的情况下，在植物提取物和盐溶液交替供应至阳离子交换膜和阴离子交换膜之间的截面的同时进行电渗析。用于电渗析的条件包括初始电流密度0.5至15A/dm²和电压0.1至1.5V/容器。 

本身可用作应激减轻剂的多胺，含多胺的植物提取物和/或含多胺作为活性组分的植物提取物，优选以混合物的形式用作化妆品、准药品(皮肤外用制剂、浴用试剂或生发剂等)、医疗用品、卫生用品、药品、食品或饮品。 

应当以提供植物来源的含多胺提取物的作用的量向化妆品组合物添加植物来源的含多胺提取物。通常，该量优选0.001至50质量％，更优选0.01至30质量％，仍更优选0.1至10质量％，并特别优选0.5至5质量％。 

多胺的混合浓度(M：摩尔/升)根据，例如吸收度、作用度、产物形式或使用频率来测定，并且不特别限定：然而，混合浓度通常为0.00001至100mM，优选0.00005至75mM和更优选0.0001至50mM。在直接施用到人类皮肤的皮肤外用制剂如液态制剂、化妆品(如，霜、乳剂、洗液、化妆水或软膏)或药品的情况下，浓度通常为0.01至10,000μM，优选0.05至1,000μM，更优选0.1至100μM，特别优选1至10μM。在固体制剂如口服制剂的情况下，单一剂量通常为0.01至10,000μM，优选0.05至1,000μM，更优选0.1至100μM，并特别优选1至10μM。 

根据本发明的“植物来源的含多胺提取物”源自天然植物， 因此比化学合成产物更安全。此外，植物来源的含多胺提取物由植物制备，这是方便的。此外，植物来源的含多胺提取物包含至少三种多胺：腐胺、亚精胺和精胺，因此，消除了单独制备这些多胺的必要性。在植物来源的含多胺提取物的情况下，应使用种植或商购可得的植物材料；特别地，小麦种子和大豆种子在植物材料中是以低价销售的，还可大量获得，此类含多胺提取物的生产成本比化学合成产物的生产成本低。就化妆品而言，需要天然物质、特别是植物来源的物质。此外，植物来源的提取物包含除多胺以外的天然组分，各天然组分的作用或天然组分之间的相互作用可增强多胺的作用。此外，期望除多胺以外的天然组分(例如，糖类如单糖和寡糖、肽和蛋白质)起活性组分(应激减轻作用)的作用。因此，根据本发明包含植物来源的含多胺提取物用作活性组分的应激减轻剂是高度有利的。 

由于根据本发明的植物来源的含多胺提取物在提取物中包含除多胺以外的天然组分，所以该提取物具有较少的多胺特有的气味和比多胺更高的稳定性。因此，该提取物可应用于化妆品、准药品、医疗用品、卫生用品、药品、食品或饮品，而不降低其品质。 

在根据本发明的应激减轻剂中，如必要，用作必要组分的多胺可与用于化妆品、准药品、食品、饮品或药品等的组分或添加剂混合，只要不降低本发明的优点即可。 

油和脂的实例包括鳄梨油、杏仁油、小茴香油、紫苏油、橄榄油、橙油、新西兰红鱼油(orange roughy oil)、芝麻油、可可油、春黄菊油、胡萝卜油、黄瓜油、牛脂(beef tallow)、牛脂酸、桐树油、红花油、大豆油、山茶油、玉米油、菜油、桃仁油、蓖麻油、棉籽油、花生油、甲鱼油、貂油、蛋黄油、可可 油、棕榈油、棕榈仁油、日本蜡、椰子油、牛脂、猪油、氢化油和氢化蓖麻油。 

蜡的实例包括蜂蜡、巴西棕榈蜡、鲸蜡、羊毛脂、液体羊毛脂、还原羊毛脂(reduced lanolin)、硬羊毛脂、小烛树蜡、褐煤蜡和虫胶蜡(shellac wax)。 

矿物油的实例包括液体石蜡、凡士林、石蜡、地蜡(ozokerite)、纯地蜡(ceresin)、微晶蜡、聚乙烯粉末、角鲨烯、角鲨烷和姥鲛烷(pristane)。 

脂肪酸的实例包括天然脂肪酸如月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、二十二烷酸、油酸、12-羟基硬脂酸、十一碳烯酸、妥尔油和羊毛酸；以及合成脂肪酸如异壬酸、己酸、2-乙基丁酸、异戊酸、2-甲基戊酸、2-乙基己酸和异戊酸。 

醇的实例包括天然醇如乙醇、异丙醇、月桂醇、鲸蜡醇、硬脂醇、油醇、羊毛脂醇、胆固醇和植物甾醇；合成醇如2-己基癸醇、异硬脂醇和2-辛基十二醇；以及多元醇如环氧乙烷、乙二醇、二甘醇、三甘醇、乙二醇单***、乙二醇丁醚、二甘醇单甲醚、二甘醇单***、聚乙二醇、环氧丙烷、丙二醇、聚丙二醇、1，3-丁二醇、甘油、鲨肝醇、季戊四醇、山梨醇、甘露醇、葡萄糖和蔗糖。 

酯的实例包括肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸丁酯、月桂酸己酯、肉豆蔻酸十四醇酯、油酸油酯、油酸癸酯、肉豆蔻酸辛基十二醇酯、二甲基辛酸己基癸酯、乳酸十六醇酯、乳酸肉豆蔻酯、邻苯二甲酸二乙酯(diethyl phtalate)、邻苯二甲酸二丁酯、醋酸羊毛脂、乙二醇单硬脂酸酯、丙二醇单硬脂酸酯和丙二醇二油酸酯。 

金属皂的实例包括硬脂酸铝、硬脂酸镁、硬脂酸锌、硬脂酸钙、棕榈酸锌、肉豆蔻酸镁、月桂酸锌和十一碳烯酸锌。 

胶质物质(gummy matter)和水溶性聚合物化合物的实例包括***胶、安息香胶、但马胶(gum dammar)、愈创木脂、爱尔兰藓、刺梧桐胶、黄芪胶、槐树豆胶(gum carob)、榅桲籽(quince seeds)、琼脂、酪蛋白、葡聚糖、明胶、果胶、淀粉、角叉菜胶、羧烷基几丁质、壳聚糖、羟烷基几丁质、低分子量壳聚糖、壳聚糖盐、硫酸化几丁质、磷酸化几丁质、藻酸、藻酸盐、透明质酸、透明质酸盐、硫酸软骨素、肝素、乙基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羧乙基纤维素、羧乙基纤维素钠、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、硝化纤维素、结晶纤维素、聚乙烯醇、聚乙烯甲醚、聚乙烯吡咯烷酮、聚甲基丙烯酸乙烯酯、聚丙烯酸酯、聚环氧烷如聚环氧乙烷和聚环氧丙烷、聚环氧烷的交联聚合物、羧乙烯聚合物和聚乙烯亚胺。 

表面活性剂的实例包括阴离子表面活性剂(羧酸盐、磺酸盐、硫酸盐和磷酸盐)、阳离子表面活性剂(胺盐和季铵盐)、两性表面活性剂(羧酸两性表面活性剂、硫酸两性表面活性剂、磺酸两性表面活性剂和磷酸两性表面活性剂)、非离子表面活性剂(醚非离子表面活性剂、醚-酯非离子表面活性剂、酯非离子表面活性剂、嵌段共聚物非离子表面活性剂和含氮非离子表面活性剂)以及其他表面活性剂(天然表面活性剂、蛋白水解产物的衍生物、聚合表面活性剂、含钛-硅的表面活性剂和氟碳化合物表面活性剂)。 

维生素的实例包括：维生素A族中的视黄醇、视黄醛(维生素A1)、脱氢视黄醛(维生素A2)、胡萝卜素和番茄红素(维生素A原)；维生素B族中的硫胺素盐酸盐、硫胺素硫酸盐(维生素B1)、核黄素(维生素B2)、吡哆醇(维生素B 6)、氰钴胺(维生素B12)、叶酸、烟酸、泛酸、生物素、胆碱和肌醇；维生素C族中的抗坏血酸和抗坏血酸的衍生物；维生素D族中的麦角钙化醇(维生素 D2)、胆钙化醇(维生素D3)和二氢速甾醇；维生素E族中的生育酚、生育酚的衍生物和泛醌；以及维生素K族中的植物甲萘醌(phytonadione)(维生素K1)、甲基萘醌类(menaquinone)(维生素K2)、甲萘醌(menadione)(维生素K3)和甲萘氢醌(menadiol)(维生素K4)。 

氨基酸的实例包括：缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸、苯基丙氨酸、色氨酸、赖氨酸、甘氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、酪氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、羟赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸和组氨酸；以及氨基酸衍生物如前述的硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、柠檬酸盐以及吡咯烷酮羧酸盐。 

亮肤剂的实例包括抗坏血酸、抗坏血酸衍生物、硫磺、胎盘水解产物、鞣花酸、鞣花酸衍生物、曲酸、曲酸衍生物、葡糖胺、葡糖胺衍生物、熊果苷、熊果苷衍生物、羟基肉桂酸、羟基肉桂酸衍生物、谷胱甘肽、山金车精华、黄芩属(Scutellaria)根精华、桑树皮精华、柴胡属(Bupleurum)根精华、防风属(Saposhnikovia)根精华、灵芝属(Ganoderma)菌丝体培养物、灵芝菌丝体培养提取物、椴木精华、桃叶精华、玫瑰果精华、槐属根精华、地榆(Sanguisorba officinalis)精华、日本当归根精华、薏苡仁精华、东方柿叶精华、大黄精华、牡丹皮精华、金缕梅属精华、栗子树精华、小连翘(Hypericum erectum)精华和油溶性甘草属(Glycyrrhiza)精华。 

保湿剂的实例包括透明质酸、多聚谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、苏氨酸、丙氨酸、胶原蛋白、水解胶原蛋白、紧肤糖蛋白(hydronection)、纤连蛋白、角蛋白、弹性蛋白、蜂王浆、肝素硫酸软骨素、甘油磷酸脂、甘油糖脂、鞘磷脂、鞘糖脂、亚油酸、亚油酸盐、二十碳五烯酸、二十碳五烯酸酯、果胶、双岐 乳杆菌(Lactobacillus bifidus)发酵产物、乳酸发酵产物、酵母提取物、赤灵芝(Ganoderma lucidum)菌丝体培养物、赤灵芝菌丝体培养提取物、小麦胚芽油、鳄梨油、水稻胚芽油、荷荷巴油、大豆磷脂、γ-谷维素、药用蜀葵精华、薏苡仁精华、地黄属根精华、枣精华、虾蛄精华、木立芦荟(Aloe arborescens)精华、牛蒡属精华、迷迭香精华、山金车精华和麦麸。 

生发剂的实例包括十五烷酸甘油酯、锦紫苏属(Coleus)精华、龙胆精华、松果精华、蜂王浆精华、维氏熊竹(Sasa veitchii)精华、t-黄烷酮、6-苄基氨基嘌呤、日本獐牙菜(Swertia japonica)精华、卡普氯铵、米诺地尔、非那雄胺、腺苷、烟酰胺、桑树根精华、地黄属根精华和5-氨基乙酰丙酸。 

来自动物、植物和生药的提取物和精华的实例包括来自以下的那些：儿茶钩藤(Uncaria gambir)(黑儿茶(gambir))、明日叶(Angelica keiskei)、金虎尾(acerola)、蜀葵属(althea)、山金车(arnica)、鳄梨、八仙桂(Hydrangea macrophylla Seringe var.thunbergii Makino)(甜八仙花叶)、芦荟(aloe)、库拉索芦荟(aloe vera)、荨麻(nettle)、银杏(Ginkgo biloba)(银杏叶和银杏果)、茴香、姜黄、细辛(Asarum sieboldii)(萍叶细辛属根)、日本杏(Japanese apricot)、白背栎(Quercus salicina)、熊果(Arctostaphylos uva-ursi)、多花蔷薇(Rosa multiflora)(玫瑰果)、香茶菜(Isodonis Japonicus)、紫云英属(astragalus)根、黄芩(Scutellaria baicalensis)(黄芩根)、大山樱(Prunus sargentii)(樱桃树皮)、黄柏(Phellodendron amurense)(黄柏树皮)、日本黄连(Coptis japonica)(黄连根茎)、人参(Panax ginseng)(人参)、小连翘(Hypericum erectum)、短柄野芝麻(Lamium album)、豆瓣菜(Nasturtium officinale)、柑桔(orange)、远志(Polygala tenuifolia)(远志根)、夏枯草(Prunella vulgaris)、何首乌 (Polygonum multiflorum)(何首乌根)、槐属(sophora)(槐属花)、艾草(Artemisia Princeps)(艾叶)、白莪术(Curcuma zedoaria)(莪术)、葛藤(Pueraria lobata)(葛藤根(Pueraria root))、缬草(缬草根)、白花春黄菊(Anthemis nobilis)、栝楼(Trichosanthes kirilowii)(栝楼根)、茵陈蒿(Artemisia capillaris)(茵陈蒿花)、甘草属(Glycyrrhiza)、款冬(Tussilago fara)(款冬花和款冬叶)、覆盆子(Rubus idaeus)、猕猴桃(kivi fruit)、桔梗(platycodon)(桔梗根)、菊花(chrysanthemum)(菊花花)、梓树(Catalpa ovata)(梓树果)、柑橘(citrus)(不成熟的柑桔)、立花橘(Citrus tachibana)(立花橘皮)、黄瓜、土当归(Aralia cordata)和羌活属(羌活根和楤木根)、杏仁油(Prunus armeniaca)(杏仁)、枸杞(Lycium chinense)(枸杞根皮、枸杞果和枸杞叶)、苦参(Sophora flavescens)(苦参根)、香樟(Cinnamomum camphora)、维氏熊竹(Sasa veitchii)、葡萄柚(Citrus paradisi)果、锡兰肉桂(Cinnamomum zeylanicum)(肉桂皮)、荆芥(Schizonepeta tenuifolia)(芥穗)、决明(Cassia obtusifolia)(决明子)、圆叶牵牛(Ipomoea purpurea)和牵牛(Ipomoea nil)(牵牛子)、红花(Carthamus tinctorius)(红花)、五倍子、康复力花、柯拜巴脂、栀子花(栀子花果)、龙胆草、日本厚朴(Magnolia obovata)(木兰皮)、牛膝(Achyranthes bidentata)(牛膝根)、吴茱萸(吴茱萸果)、牛蒡属、五味子(Schizandra chinensis)(五味子果)、水稻、米糠、小麦、狭叶柴胡(Bupleurum scorzonerifolium)(柴胡根)、藏红花、肥皂草(Saponaria officinalis)、野山楂(Crataegus cuneata)(山楂果)、花椒(Zanthoxylum piperitum)(花椒果)、鼠尾草、田七(Panax notoginseng)(田七根)、香菇(Lentinus edodes)(椎茸)、地黄(Rehmannia glutinosa)(地黄根)、使君子(Quisqualis indica)(使君子籽)、紫草(Lithospermum erythrorhizon)(紫草根)、紫苏(Perilla  ocymoides)(紫苏叶和紫苏子)、东方柿子(柿子粉末)、芍药(Paenoia albiflora)(芍药根)、车前草(Plantago asiatica)(车前草籽和车前草药草)、生姜(Zingiber officinale)(姜)、菖蒲(Acorus calamus)(菖蒲)、尖叶女贞(Ligustrum lucidum)(尖叶女贞果)、榆绣线菊(Spiraea ulmaria)、垂枝桦(Betula alba)、金银花(Lonicera japonica)(金银花和金银花叶和茎)、英国长春藤、蓍草、欧洲接骨木、红豆(赤豆)、接骨木(无梗接骨木(Sambucus sieboldiana))、锦葵、日本川芎(川芎根)、日本獐牙菜(獐牙菜药草)、桑树(桑树根皮和桑树叶)、枣、大豆、黄斑高(Aralia elata)、竹节参(Panax japonicus)(竹节参根茎)、知母(Anemarrhena asphodeloides)(知母根茎)、地榆、鱼腥草(Ho uttuynia cordata)(鱼腥草药草)、冬虫夏草(Cordyceps sinensis)(冬虫夏草(plant worm))、胡椒、酸浆(Physalis alkekengi)(酸浆根)、百里香、绿茶、红茶、丁香、蜜柑(Citrus unshiu)(蜜柑皮)、山茶、积雪草(Centella asiatica)、辣椒、东当归(Angelica acutiloba)(日本当归根)、金盏花(Calendula officinalis)、酸橙(Citrus aurantium)(酸橙皮)、地榆、玉米(玉米乳)、杜仲(Eucommia ulmoides)(杜仲皮和杜仲叶)、西红柿、南天竺(Nandina domestica)(南天竺果)、大蒜、大麦(麦芽)、白藓属(白藓根皮)、麦冬(Ophiopogon japonicus)(麦冬块茎)、荷兰芹、白薯、薄荷(Mentha arvensis)(薄荷药草)、金缕梅、玫瑰、枇杷(Eriobotrya japonica)叶(枇杷叶(loquat leaf))、茯苓(poria cocos)(茯苓菌核)、葡萄、葡萄叶、搌布瓜、椴树、牡丹(牡丹皮)、蛇麻、黄刺玫(Rosa rugosa)(黄刺玫花)、松针、栗子树(marronnier)、迷迭香、无患子、蜜蜂花、草木犀、皱皮木瓜(Chaenomeles speciosa)、豆芽、桃(桃仁和桃叶)、射干(Belamcanda chinensis)、槟榔(槟榔子)、益母草(益母草皮)、矢车菊、虎耳草(strawberry geranium)、杨梅(bayberry，myrica)、 日本桤木(Alnus firma)、薏苡(Coix lacryma-jobi var.ma-yuen)(薏苡子)、蒙古蒿(Artemisia mongolia)、山地蒿(Artemisia montata)、薰衣草、苹果果实、赤灵芝(Ganoderma lucidum)(Leyss.ex.Fr.)Karst、柠檬果、连翘(连翘果)、黄芪、天竺葵药草、莨菪属(莨菪根)、鸡冠(comb of cock)、牛/人胎盘提取物、猪/牛胃/十二指肠/肠的提取物/已分解的提取物、水溶性胶原蛋白、水溶性胶原蛋白衍生物、水解胶原蛋白、弹性蛋白、水解弹性蛋白、水溶性弹性蛋白衍生物、丝蛋白、丝蛋白的分解产物和牛血细胞蛋白质的分解产物。 

微生物培养代谢物的实例包括酵母精华、含锌酵母精华、含锗酵母精华、含硒酵母精华、含镁酵母精华、酒酿精华、裸藻属提取物和非脂肪干乳的乳酸发酵产物。 

α-羟基酸的实例包括乙醇酸、柠檬酸、苹果酸、酒石酸和乳酸。 

无机色素的实例包括无水硅酸、硅酸镁、滑石、高岭土、膨润土、云母、云母钛、氯氧化铋、氧化锆、氧化镁、氧化锌、氧化钛、碳酸钙、碳酸镁、氧化铁黄、铁红、氧化铁黑、群青蓝、氧化铬、氢氧化铬、炭黑和炉甘石。 

紫外吸收剂的实例包括对氨基苯甲酸衍生物、水杨酸衍生物、邻氨基苯甲酸衍生物、香豆素衍生物、氨基酸化合物、苯并***衍生物、四唑衍生物、咪唑啉衍生物、嘧啶衍生物、二噁烷衍生物、樟脑衍生物、呋喃衍生物、吡酮衍生物、核酸衍生物、尿囊素衍生物、烟酸衍生物、维生素B6衍生物、氧苯酮、苯甲酮、愈创蓝油烃、紫草醌、黄芩苷、黄芩黄素和黄连素。 

收敛剂的实例包括乳酸、酒石酸、琥珀酸、柠檬酸、尿囊素、氯化锌、硫酸锌、氧化锌、炉甘石、对苯酚磺酸锌、硫酸钾铝、间苯二酚、氯化铁和鞣酸。 

抗氧化剂的实例包括抗坏血酸、抗坏血酸盐、硬脂酸盐、生育酚、生育酚酯衍生物、去甲二氢愈创木酸、丁羟甲苯(BHT)、丁基羟基茴香醚(BHA)、对羟基苯甲醚、没食子酸丙酯、芝麻酚、芝麻酚林和棉酚。 

抗炎剂的实例包括鱼石脂、茚甲新(indomethacin)、高岭土、水杨酸、水杨酸钠、水杨酸甲酯、乙酰水杨酸、盐酸苯海拉明、d/dl樟脑、氢化可的松、愈创蓝油烃、母菊奥(chamazulene)、马来酸氯苯那敏、甘草酸、甘草酸盐、甘草次酸和甘草次酸盐。 

稳定剂的实例包括利凡诺、硫磺、苯扎氯铵、苄索氯铵、氯化甲基蔷薇苯胺、甲酚、葡萄糖酸钙、葡萄糖酸氯己定、磺酰胺、红药水、乳铁蛋白和水解乳铁蛋白。 

护发剂包括二硫化硒、烷基异喹啉氮鎓溴化物(alkyl isoquinolinium bromide)溶液、吡啶硫酮锌(zinc pyrithione)、苯柳胺酯(biphenamine)、二甲噻蒽(thianthol)、海狸酊、姜酊、辣椒酊、盐酸奎宁、强氨水、溴酸钾、溴酸钠和巯基乙醇酸。 

香料的实例包括天然动物香料如麝香、麝猫香、海狸香和龙涎香；植物香料如八角(anisie)精油、当归精油、香水树伊兰精油、鸢尾草精油、茴香精油、柑橘精油、依兰精油、香菜精油、小豆蔻精油、愈创木精油、小茴香精油、山胡椒精油、桂皮精油、肉桂精油、天竺葵精油、苦配巴香脂(copaiba balsam)精油、胡荽精油、紫苏精油、雪松精油、香茅精油、茉莉精油、姜草精油、西洋杉精油、绿薄荷精油、薄荷精油、大茴香精油、晚香玉精油、丁香精油、橙花精油、白珠树精油、妥卢香脂精油、广藿香精油、玫瑰精油、玫瑰草精油、柏树精油、金钟柏精油、檀香精油、苦橙叶精油、月桂精油、香根草精油、佛手柑精油、秘鲁香脂精油、玫瑰黑黄檀精油、樟树精油、柑桔精油、桉树精油、酸橙精油、薰衣草精油、伽罗木精油、柠檬草 精油、柠檬精油、迷迭香精油和日本薄荷精油；以及其他合成香料。 

色素/着色剂的实例包括卷心菜红色素、赤色米色素、茜草色素、胭脂树色素、乌贼墨色素、姜黄色素、苦参色素、磷虾色素、柿树色素、焦糖、金、银、栀子花色素、玉米色素、洋葱色素、罗望子色素、螺旋藻色素、荞麦整株植物色素、樱桃色素、紫菜色素、木槿色素、葡萄汁色素、金盏花色素、紫甘薯色素、香芋色素、紫胶色素和芸香苷。 

甜味剂的实例包括糖、甜八仙花叶、果糖、***糖、半乳糖、木糖、甘露糖、麦芽糖、蜂蜜、葡糖糖、神奇果素和莫内林(monellin)。 

营养性添加剂的实例包括煅烧壳钙、氰钴胺、酵母、小麦胚芽、大豆胚芽、蛋黄粉、半纤维素和血氧基红素。 

此外，还有激素、金属-离子封闭剂、pH调节剂、螯合剂、防腐/抗真菌剂、冷冻剂、稳定剂、乳化剂、动物/植物蛋白、分解的动物/植物蛋白、动物/植物多糖、分解的动物/植物多糖、动物/植物糖蛋白、分解的动物/植物糖蛋白、血流增加剂、抗炎剂、抗过敏剂、细胞赋活剂、角质软化剂、创口愈合剂、发泡剂、增稠剂、口腔护理剂、除臭剂、苦味剂、调味品和酶等。 

根据本发明的试剂可以任何期望的剂型使用，并可共混以提供准药物、皮肤/头发护理化妆品、浴用试剂、食品、饮品或药品；以安瓿、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、丸剂、片剂、固体、液体、凝胶、泡状物、乳剂、霜、软膏、薄片或摩丝等形式。 

化妆品和准药品的具体实例包括内用/外用药物制剂；基础化妆品、洁面剂和皮肤清洁剂如化妆水、乳剂、霜、软膏、洗液、油和面膜；头发化妆品如香波、漂洗剂(rinse)、头发护理、发乳、发蜡、发胶、理发剂(hair dressing)、烫发溶液(permanent  solution)、生发油、染发剂和生发剂；化妆用化妆品(makeup cosmetics)如粉底霜、白粉(white powder)、面部粉(face powder)、口红、腮红、眼影、眼线膏(液)、睫毛膏、眉笔和假睫毛；定妆化妆品如修指甲剂；香水；浴用试剂、洁牙剂；口气清新剂/漱口剂；液体气味抑制剂/除臭剂；卫生用品；卫生棉和湿巾纸。 

食品和饮品的实例包括饮品如清凉饮料、碳酸饮料、营养补充饮料、果汁饮料和乳酸饮料；冰点如冰淇淋、冰冻果子露和刨冰；面条如荞麦面、小麦面、粉丝、饺子(饺子和烧卖)皮、中式面条和速食面；糖果糕点(confectionery)如水果硬糖(drop)、糖果(candies)、口香糖、巧克力、压片糖果、零食、饼干、果冻、果酱、奶油、烤焙物和面包；水产品如螃蟹、鲑鱼、短颈蛤蜊、金枪鱼、沙丁鱼、虾、鲣鱼、鲭鱼、鲸鱼、牡蛎、秋刀鱼、鱿鱼、赤贝、扇贝、鲍鱼、海胆、大马哈鱼子酱和鲍壳；渔业/牲畜加工食品如鱼肉香肠、火腿和香肠；乳制品如奶粉、加工牛奶和发酵牛奶；油/脂肪和加工油/脂肪食品如色拉油、煎炸油、人造黄油、蛋黄酱、起酥油、生奶油和调味汁；调味品如酱油和沙司(dip)；蒸煮袋食品如咖喱、炖汤、烧鸡滑蛋饭、粥、含蔬菜或鱼等的粥、炒杂烩饭、酥炸猪排饭、炸鱼或蔬菜等饭、烤鳗鱼饭、肉酱饭、日本杂烩(关东煮)、麻婆豆腐、调味牛肉饭、肉羹、鸡蛋汤、煎蛋卷调味饭、饺子(饺子和烧卖)、汉堡扒和肉丸；各种形式的保健/营养补充食品；促进健康食品；片剂；胶囊剂；营养补充饮品和锭剂。 

根据本发明的应激减轻剂适用于人类。然而，只要期望此类应激减轻剂提供其作用和优势，此类应激减轻剂还可用于除人类以外的动物。 

实施例 

将与以下实施例一起进一步详细地描述本发明。然而，本 发明不受限于实施例。 

(多胺分析方法) 

样品中多胺的含量可通过以下方法测定。植物中的多胺为游离多胺、复合多胺和结合多胺。尽管通过不同方法提取这些多胺，但可分析所有这些多胺(Plant Cell Physiol.，43(2)，196-206，2002，J.Nutr.Biochem.，4，66-70，1993，Biosci.Biotech.Biochem.，61(9)，1582-1584，1997)。作为具体实施例将详细描述植物种子中游离多胺的分析方法。将稀释的内标溶液(1，6-己二胺或1，7-二氨基庚烷；内标量＝7.5或12nmol)和5％高氯酸水溶液(5至20mL相对于1.0g样品鲜重)添加到约0.1至1.0g大豆种子中。充分研磨该样品以便在室温下用Polytron混合器进行提取。使通过研磨所提供的溶液在4℃和35,000×g下进行离心分离20分钟并收集作为游离多胺溶液的上清液。用100至400μL的游离多胺溶液(植物提取物、纯化的植物提取物)填充带有螺帽的微管、将200μL碳酸钠的饱和水溶液和200μL丹磺酰氯/丙酮溶液(10mg/mL)与这些溶液轻柔混合。用螺帽盖紧该管，然后用铝箔覆盖，并在60℃水浴中加热1小时从而进行丹磺酰化。在使该管冷却后，将200μL脯氨酸水溶液(100mg/mL)添加到该管中并混合。用铝箔覆盖该管并再次水浴加热30分钟。使溶液冷却，然后经受氮气流，从而除去丙酮，随后与600μL甲苯混合并强烈混合。使该管静置以提供两个分离相。收集上方甲苯层至300μL微管中。氮气吹扫至收集的甲苯从而完全除去甲苯。向该管中添加200μL甲醇以便溶解丹磺酰化的游离多胺。通过用与荧光检测器相连的高效液相色谱***(激发波长：365nm，发射波长：510nm)根据内标法分析来测定腐胺、亚精胺和精胺的游离多胺的量。HPLC柱为μBondapak C18(由Waters Corporation制造，027324，3.9×300mm，粒径：10μm)。通过由标准溶液和 样品的HPLC曲线测定多胺和内标的峰面积来计算样品中多胺的含量。 

(实施例1A：大豆来源的含多胺提取物的制备) 

将稀释的内标溶液(1，7-二氨基庚烷；内标量＝1200nmol)和500mL 5％高氯酸水溶液添加到100g大豆胚芽(由FOR YOU corporation制造)中并在室温下静置1小时。然后将所得溶液与16g用作多元酚吸附剂的Polyclar VT(由ISP Inc.制造)混合。用混料机(blender mixer)充分粉碎大豆胚芽，然后通过在室温下静置30分钟而在酸性条件下进行提取。粉碎的物质在2℃和22,000×g下进行离心分离20分钟，并收集液体级分。用30％氢氧化钠溶液中和液体级分。将所得溶液定义为植物提取物(大豆胚芽提取物；LGS)。植物提取物总计包含57.1mg多胺：23.5mg腐胺、24.0mg亚精胺和9.6mg精胺。所收集的植物提取物穿过填充有阳离子交换树脂的柱(AG 50W-X4，200-400目，H⁺型，由Bio-Rad Laboratories，Inc.制造)以使树脂吸附多胺。通过连续流动0.7NNaCl/0.1M磷酸钠溶液(pH 8.0)、水和1N盐酸来洗涤柱。除去杂质后，用6N盐酸洗脱多胺并用30％氢氧化钠中和。将所得溶液定义为纯化的植物提取物(纯化的大豆胚芽提取物；HGS)。纯化的植物提取物总计包含50.4mg多胺：20.4mg腐胺、22.3mg亚精胺和7.7mg精胺。用电渗析器(ACILYZER，由ASTOm Corporation制造)使植物提取物(大豆胚芽提取物；LGS)和纯化的植物提取物(纯化的大豆胚芽提取物；HGS)去离子化，通过冷冻干燥浓缩并用于各种评价。 

(实施例1B：大豆来源的含多胺提取物的制备) 

将大豆胚芽样品(各1kg，大豆胚芽粉末由FOR YOU corporation制造)与0.1N、0.5N和1N盐酸溶液(各6L)混合。然后将各所得溶液与80g用作多元酚吸附剂的Divergan F(由BASF制 造)混合并通过用Three-one Motor在室温下搅拌2小时在酸性条件下进行提取。使所搅拌的物质在4℃和12,000×g下进行离心分离30分钟并收集液体级分。用30％氢氧化钠溶液中和液体级分。然后使所得溶液在4℃和12,000×g下进行离心分离30分钟并收集液体级分。将该溶液定义为植物提取物(大豆胚芽提取物；LGS)。 

根据0.1N盐酸的植物提取物总计包含416.1mg多胺：217.9mg腐胺、163.5mg亚精胺和34.7mg精胺。根据0.5N盐酸的植物提取物总计包含433.0mg多胺：226.5mg腐胺、170.0mg亚精胺和36.5mg精胺。根据1N盐酸的植物提取物总计包含446.76mg多胺：232.4mg腐胺、174.4mg亚精胺和39.96mg精胺。用电渗析器(ACILYZER，由ASTOM Corporation制造)使植物提取物(大豆胚芽提取物；LGS)去离子化，通过冷冻干燥浓缩并用于各种评价。 

从结果来看，已证实可用浓度为0.1N、0.5N和1N的盐酸收集包含多胺的植物提取物和/或包含多胺作为活性组分的植物提取物。因此，发现制备方法在稳定性和操作性上优异。 

(实施例1C：大豆来源的含多胺提取物的制备) 

将大豆胚芽样品(各1kg，大豆胚芽粉末由FOR YOU corporation制造)与0.1N、0.5N和1N硫酸溶液(各6L)混合。然后将各所得溶液与80g用作多元酚吸附剂的Divergan F(由BASF制造)混合并通过用Three-one Motor在室温下搅拌2小时在酸性条件下进行提取。使所搅拌的物质在4℃和12,000×g下进行离心分离30分钟并收集液体级分。用30％氢氧化钠溶液中和液体级分。然后使所得溶液在4℃和12,000×g下进行离心分离30分钟并收集液体级分。将该溶液定义为植物提取物(大豆胚芽提取物；LGS)。 

根据0.1N硫酸的植物提取物总计包含421.6mg多胺：220.8mg腐胺、165.7mg亚精胺和35.1mg精胺。根据0.5N硫酸的植物提取物总计包含427.1mg多胺：223.7mg腐胺、167.9mg亚精胺和35.5mg精胺。根据1N硫酸的植物提取物总计包含438.1mg多胺：229.4mg腐胺、172.2mg亚精胺和36.5mg精胺。用电渗析器(ACILYZER，由ASTOM Corporation制造)使植物提取物(大豆胚芽提取物；LGS)去离子化，通过冷冻干燥浓缩并用于各种评价。 

从结果来看，已证实可用浓度为0.1N、0.5N和1N的硫酸收集包含多胺的植物提取物和/或包含多胺作为活性组分的植物提取物。因此，发现制备方法在稳定性和操作性上优异。 

(实施例2A：小麦来源的含多胺提取物的制备) 

将稀释的内标溶液(1，7-二氨基庚烷；内标量＝1200nmol)和500mL 5％高氯酸水溶液添加到100g小麦胚芽(烘烤型，由Nisshin Pharma Inc.制造)中并在室温下静置1小时。然后将所得溶液与16g用作多元酚吸附剂的Polyclar VT(由ISP Inc.制造)混合。用混料机充分粉碎大豆胚芽，然后通过在室温下静置30分钟而在酸性条件下进行提取。粉碎的物质在2℃和22,000×g下进行离心分离20分钟，并收集液体级分。用30％氢氧化钠溶液中和液体级分。将所得溶液定义为植物提取物(小麦胚芽提取物；LGW)。植物提取物总计包含44.6mg多胺：6.4mg腐胺、23.9mg亚精胺和14.3mg精胺。所收集的植物提取物进一步通过填充有阳离子交换树脂的柱(AG 50W-X4，200-400目，H⁺型，由Bio-Rad Laboratories，Inc.制造)以使树脂吸附多胺。通过连续流动0.7NNaCl/0.1M磷酸钠溶液(pH 8.0)、水和1N盐酸来洗涤柱。除去杂质后，用6N盐酸洗脱多胺并用30％氢氧化钠中和。将所得溶液定义为纯化的植物提取物(纯化的小麦胚芽提取物；HGW)。纯 化的植物提取物总计包含4.01mg多胺：5.7mg腐胺、21.5mg亚精胺和12.9mg精胺。用电渗析器(ACILYZER，由ASTOM Corporation制造)使植物提取物(小麦胚芽提取物；LGW)和纯化的植物提取物(纯化的小麦胚芽提取物；HGW)去离子化，通过冷冻干燥浓缩并用于各种评价。 

(实施例2B：小麦来源的含多胺提取物的制备) 

将小麦胚芽样品(各1kg，由Nisshin Pharma Inc.制造的特别脱脂的小麦胚芽微粉末(20kg))与0.1N、0.5N和1N盐酸溶液(各4L)混合。然后将各所得溶液与80g用作多元酚吸附剂的Divergan F(由BASF制造)混合并通过用Three-one Motor在室温下搅拌2小时在酸性条件下进行提取。使所搅拌的物质在4℃和12,000×g下进行离心分离30分钟并收集液体级分。用30％氢氧化钠溶液中和液体级分。然后使所得溶液在4℃和12,000×g下进行离心分离30分钟并收集液体级分。将该溶液定义为植物提取物(小麦胚芽提取物；LGW)。根据0.1N盐酸的植物提取物总计包含296mg多胺：48.4mg腐胺、201.6mg亚精胺和46mg精胺。根据0.5N盐酸的植物提取物总计包含282.8mg多胺：48.4mg腐胺、183.6mg亚精胺和50.8mg精胺。根据1N盐酸的植物提取物总计包含312.2mg多胺：51.2mg腐胺、204.4mg亚精胺和56.6mg精胺。用电渗析器(ACILYZER，由ASTOM Corporation制造)使植物提取物(小麦胚芽提取物；LGW)去离子化，通过冷冻干燥浓缩并用于各种评价。 

从结果来看，已证实可用浓度为0.1N、0.5N和1N的盐酸收集包含多胺的植物提取物和/或包含多胺作为活性组分的植物提取物。因此，发现制备方法在稳定性和操作性上优异。 

(实施例2C：小麦来源的含多胺提取物的制备) 

将小麦胚芽样品(各1kg，由Nisshin Pharma Inc.制造特别脱 脂的小麦胚芽微粉末(20kg))与0.1N、0.5N和1N硫酸溶液(各4L)混合。然后将各所得溶液与80g用作多元酚吸附剂的DiverganF(由BASF制造)混合并通过用Three-one Motor在室温下搅拌2小时在酸性条件下进行提取。使所搅拌的物质在4℃和12,000×g下进行离心分离30分钟并收集液体级分。用30％氢氧化钠溶液中和液体级分。然后使所得溶液在4℃和12,000×g下进行离心分离30分钟并收集液体级分。将该溶液定义为植物提取物(小麦胚芽提取物；LGW)。根据0.1N硫酸的植物提取物总计包含292mg多胺：50mg腐胺、195.6mg亚精胺和46.4mg精胺。根据0.5N盐酸的植物提取物总计包含308.2mg多胺：50mg腐胺、201.6mg亚精胺和56.6mg精胺。根据1N盐酸的植物提取物总计包含308.4mg多胺：52.8mg腐胺、197.2mg亚精胺和58.4mg精胺。用电渗析器(ACILYZER，由ASTOM Corporation制造)使植物提取物(小麦胚芽提取物；LGW)去离子化，通过冷冻干燥浓缩并用于各种评价。 

从结果来看，已证实可用浓度为0.1N、0.5N和1N的硫酸收集包含多胺的植物提取物和/或包含多胺作为活性组分的植物提取物。因此，发现制备方法在稳定性和操作性上优异。 

(实施例3A：大豆胚芽来源的含多胺的植物提取物的应激减轻(抗应激)作用的评价(低温应激)) 

实施例1B中所述的植物提取物(大豆胚芽提取物；LGS)用作包含大豆胚芽来源的多胺的植物提取物和/或包含大豆胚芽来源的多胺作为活性组分的植物提取物。通过以下步骤进行评价。在T-75烧瓶中培养成纤维细胞(106-05，由Cell Applications，Inc.制造)。当成纤维细胞达到70至80％融合度(confluency)时，吸出培养基。用10ml PBS洗涤成纤维细胞两次。通过添加500μl胰蛋白酶/PBS来游离细胞并通过添加500μl含10％FCS的DMEM (11995-073，由GIBCO制造)来终止反应。将细胞与10ml PBS混合并收集到50ml管中。将细胞与另外的10ml PBS混合并收集。在1,000rpm下5分钟收集细胞并吸出上清液。将所得溶液溶解在3ml含1％FCS的DMEM中并计算细胞数目。用含1％FCS的DMEM将溶液调整为4×10⁴细胞/ml(1×10⁴细胞/250μl)，将250μl所得溶液各自注入到48孔板的孔中。在设置为37℃的CO₂培养箱中过夜培养细胞。然后，将样品(2.5μl每孔)添加到孔中，并在设置为37℃(在无应激的条件下)和设置在32℃(低温应激条件)的CO₂培养箱中培养细胞3天。进行实验，N＝4。用抽吸器除去培养基后，用PBS洗涤孔两次。在将200μl含5％FCS的DMEM(21063-029，由GIBCO制造)添加到各孔后，添加20μl活细胞计数试剂SF(07553-54，由NACALAI TESQUE，INC.制造)，并允许反应在CO₂培养箱中发生5小时。测量Abs 490/630并用下式计算细胞赋活百分比。 

细胞赋活百分比＝(As-Ab)/(Ac-Ab)×100 

此处，As表示样品的Abs 490/630；Ac表示对照(水)的Abs490/630；Ab表示不接种细胞但加入含5％FCS的DMEM和活细胞计数试剂SF的孔的Abs 490/630。图1以相对于对照(添加水)中细胞赋活能力的相对值说明评价结果。在图1的左侧纵轴中，细胞赋活能力定义为100从而以仅反映增加的多胺浓度的尺度示出百分比。在图1的右侧纵轴中，如下所述，由于细胞赋活能力降低到37℃无应激条件下的细胞赋活能力的75％，所以将对照的细胞赋活能力定义为75。因此，右侧纵轴的百分比进一步反映了与37℃(室温)无应激条件下的细胞赋活能力的比较。示出的浓度为多胺的浓度。 

32℃低温应激条件下在添加水(对照)中的细胞赋活能力减少到37℃(室温)无应激条件下的细胞赋活能力的75％。从图1中 清楚地看到，在所有添加了大豆胚芽提取物的培养基中，与添加水的对照相比，观察到显著(显著水平：1％或5％)高的细胞赋活能力。因此，已证实样品提供优异的应激减轻(抗应激)作用。可选地，当使用实施例1A和1C中所述的植物提取物(大豆胚芽提取物；LGS)时，也获得了与使用实施例1B所述的植物提取物的情况相类似的结果。总之，通过将多胺施用到皮肤，减轻(抑制)由于低温应激造成的成纤维细胞的下降，因而可期望改善皮肤的感觉。 

(实施例3B：大豆胚芽来源的含多胺的植物提取物的应激减轻(抗应激)作用的评价(高温应激)) 

实施例1B中所述的植物提取物(大豆胚芽提取物；LGS)用作包含大豆胚芽来源的多胺的植物提取物和/或包含大豆胚芽来源的多胺作为活性组分的植物提取物。通过以下步骤进行评价。在T-75烧瓶中培养成纤维细胞(106-05，由Cell Applications，Inc.制造)。当成纤维细胞达到70至80％融合度时，吸出培养基。用10ml PBS洗涤成纤维细胞两次。通过添加500μl胰蛋白酶/PBS来游离细胞并通过添加500μl含10％FCS的DMEM(11995-073，由GIBCO制造)来终止反应。将细胞与10ml PBS混合并收集到50ml管中。将细胞与另外的10ml PBS混合并收集。在1,000rpm下5分钟收集细胞并吸出上清液。将所得溶液溶解在3ml含1％FCS的DMEM中并计算细胞数目。用含1％FCS的DMEM将溶液调整为4×10⁴细胞/ml(1×10⁴细胞/250μl)，将250μl所得溶液各自注入到48孔板的孔中。在设置为37℃的CO₂培养箱中过夜培养细胞。然后，将样品(2.5μl每孔)添加到孔中，并在设置为37℃(在无应激的条件下)和设置在42℃(高温应激条件)的CO₂培养箱中培养细胞3天。进行实验，N＝4。用抽吸器除去培养基后，用PBS洗涤孔两次。在将200μl含5％FCS的DMEM(21063-029， 由GIBCO制造)添加到各孔后，添加20μl活细胞计数试剂SF(07553-54，由NACALAI TESQUE，INC.制造)，并允许反应在CO₂培养箱中发生5小时。测量Abs 490/630并用下式计算细胞赋活百分比。 

细胞赋活百分比＝(As-Ab)/(Ac-Ab)×100 

此处，As表示样品的Abs 490/630；Ac表示对照(水)的Abs490/630；Ab表示不接种细胞但加入含5％FCS的DMEM和活细胞计数试剂SF的孔的Abs 490/630。图2以相对于对照(添加水)中细胞赋活能力的相对值说明评价结果。在图2的左侧纵轴中，细胞赋活能力定义为100从而以仅反映增加的多胺浓度的尺度示出百分比。在图2的右侧纵轴中，如下所述，由于细胞赋活能力降低到37℃无应激条件下的细胞赋活能力的70％，所以将对照的细胞赋活能力定义为70。因此，右侧纵轴的百分比进一步反映了与37℃(室温)无应激条件下的细胞赋活能力的比较。示出的浓度为多胺的浓度。 

42℃高温应激条件下在添加水(对照)中的细胞赋活能力减少到37℃(室温)无应激条件下的细胞赋活能力的70％。从图2中清楚地看到，在所有添加了大豆胚芽提取物的培养基中，与添加水的对照相比，观察到显著(显著水平：1％或5％)高的细胞赋活能力。因此，已证实样品提供优异的应激减轻(抗应激)作用。可选地，当使用实施例1A和1C中所述的植物提取物(大豆胚芽提取物；LGS)时，也获得了与使用实施例1B所述的植物提取物的情况相类似的结果。总之，通过将多胺施用到皮肤，减轻(抑制)由于高温应激造成的成纤维细胞的下降，因而可期望改善皮肤感觉。 

(实施例4A：小麦胚芽来源的含多胺的植物提取物的应激减轻(抗应激)作用的评价(低温应激)) 

实施例2B中所述的植物提取物(小麦胚芽提取物；LGW)用作包含小麦胚芽来源的多胺的植物提取物和/或包含小麦胚芽来源的多胺作为活性组分的植物提取物。通过以下步骤进行评价。在T-75烧瓶中培养成纤维细胞(106-05，由Cell Applications，Inc.制造)。当成纤维细胞达到70至80％融合度(confluency)时，吸出培养基。用10ml PBS洗涤成纤维细胞两次。通过添加500μl胰蛋白酶/PBS来游离细胞并通过添加500μl含10％FCS的DMEM(11995-073，由GIBCO制造)来终止反应。将细胞与10ml PBS混合并收集到50ml管中。将细胞与另外的10ml PBS混合并收集。在1,000rpm下5分钟收集细胞并吸出上清液。将所得溶液溶解在3ml含1％FCS的DMEM中并计算细胞数目。用含1％FCS的DMEM将溶液调整为4×10⁴细胞/ml(1×10⁴细胞/250μl)，将250μl所得溶液各自注入到48孔板的孔中。在设置为37℃的CO₂培养箱中过夜培养细胞。然后，将样品(2.5μl每孔)添加到孔中，并在设置为37℃(在无应激的条件下)和设置在32℃(低温应激条件)的CO₂培养箱中培养细胞3天。进行实验，N＝4。用抽吸器除去培养基后，用PBS洗涤孔两次。在将200μl含5％FCS的DMEM(21063-029，由GIBCO制造)添加到各孔后，添加20μl活细胞计数试剂SF(07553-54，由NACALAI TESQUE，INC.制造)，并允许反应在CO₂培养箱中发生5小时。测量Abs 490/630并用下式计算细胞赋活百分比。 

细胞赋活百分比＝(As-Ab)/(Ac-Ab)×100 

此处，As表示样品的Abs 490/630；Ac表示对照(水)的Abs490/630；Ab表示不接种细胞但加入含5％FCS的DMEM和活细胞计数试剂SF的孔的Abs 490/630。图3以相对于对照(添加水)中的细胞赋活能力的相对值说明评价结果。在图3的左侧纵轴中，细胞赋活能力定义为100从而以仅反映增加的多胺浓度的尺 度示出百分比。在图3的右侧纵轴中，如下所述，由于细胞赋活能力降低到37℃无应激条件下的细胞赋活能力的75％，所以将对照的细胞赋活能力定义为75。因此，右侧纵轴的百分比进一步反映了与37℃(室温)无应激条件下的细胞赋活能力的比较。示出的浓度为多胺的浓度。 

32℃低温应激条件下在添加水(对照)中的细胞赋活能力减少到37℃(室温)无应激条件下的细胞赋活能力的75％。从图3中清楚地看到，在所有添加了小麦胚芽提取物的培养基中，与添加水的对照相比，观察到显著(显著水平：1％或5％)高的细胞赋活能力。因此，已证实样品提供优异的应激减轻(抗应激)作用。可选地，当使用实施例2A和2C中所述的植物提取物(小麦胚芽提取物；LGW)时，也获得了与使用实施例2B所述的植物提取物的情况相类似的结果。总之，通过将多胺施用到皮肤，减轻(抑制)由于低温应激造成的成纤维细胞的下降，因而可期望改善皮肤感觉。 

(实施例4B：小麦胚芽来源的含多胺的植物提取物的应激减轻(抗应激)作用的评价(高温应激)) 

实施例2B中所述的植物提取物(小麦胚芽提取物；LGW)用作包含小麦胚芽来源的多胺的植物提取物和/或包含小麦胚芽来源的多胺作为活性组分的植物提取物。通过以下步骤进行评价。在T-75烧瓶中培养成纤维细胞(106-05，由Cell Applications，Inc.制造)。当成纤维细胞达到70至80％融合度(confluency)时，吸出培养基。用10ml PBS洗涤成纤维细胞两次。通过添加500μl胰蛋白酶/PBS来游离细胞并通过添加500μl含10％FCS的DMEM(11995-073，由GIBCO制造)来终止反应。将细胞与10ml PBS混合并收集到50ml管中。将细胞与另外的10ml PBS混合并收集。在1,000rpm下5分钟收集细胞并吸出上清液。将所得溶液溶解在 3ml含1％FCS的DMEM中并计算细胞数目。用含1％FCS的DMEM将溶液调整为4×10⁴细胞/ml(1×10⁴细胞/250μl)，将250μl所得溶液各自注入到48孔板的孔中。在设置为37℃的CO₂培养箱中过夜培养细胞。然后，将样品(2.5μl每孔)添加到孔中，并在设置为37℃(在无应激的条件下)和设置在42℃(高温应激条件)的CO₂培养箱中培养细胞3天。进行实验，N＝4。用抽吸器除去培养基后，用PBS洗涤孔两次。在将200μl含5％FCS的DMEM(21063-029，由GIBCO制造)添加到各孔后，添加20μl活细胞计数试剂SF(07553-54，由NACALAI TESQUE，INC.制造)，并允许反应在CO₂培养箱中发生5小时。测量Abs 490/630并用下式计算细胞赋活百分比。 

细胞赋活百分比＝(As-Ab)/(Ac-Ab)×100 

此处，As表示样品的Abs 490/630；Ac表示对照(水)的Abs490/630；Ab表示不接种细胞但加入含5％FCS的DMEM和活细胞计数试剂SF的孔的Abs 490/630。图4以相对于对照(添加水)中的细胞赋活能力的相对值说明评价结果。在图4的左侧纵轴中，细胞赋活作用定义为100从而以仅反映增加的多胺浓度的尺度示出百分比。在图4的右侧纵轴中，如下所述，由于细胞赋活能力降低到37℃无应激条件下的细胞赋活能力的70％，所以将对照的细胞赋活能力定义为70。因此，右侧纵轴的百分比进一步反映了与37℃(室温)无应激条件下的细胞赋活能力的比较。示出的浓度为多胺的浓度。 

42℃高温应激条件下在添加水(对照)中的细胞赋活能力减少到37℃(室温)无应激条件下的细胞赋活能力的70％。从图4中清楚地看到，在所有添加了小麦胚芽提取物的培养基中，与添加水的对照相比，观察到显著(显著水平：1％或5％)高的细胞赋活能力。因此，已证实样品提供优异的应激减轻(抗应激)作用。 可选地，当使用实施例2A和2C中所述的植物提取物(小麦胚芽提取物；LGW)时，也获得了与使用实施例2B所述的植物提取物的情况相类似的结果。总之，通过将多胺施用到皮肤，减轻(抑制)由于高温应激造成的成纤维细胞的下降，因而可期望改善皮肤感觉。 

(实施例5A：含大豆胚芽提取物的美容液(cosmetic lotion)的生产) 

以标准方式生产具有以下组成的美容液。还以标准方式生产不包含任何大豆胚芽提取物的另外的美容液作为对照。 

(实施例5B：包含大豆胚芽提取物的乳剂的生产) 

以标准方式生产具有以下组成的乳剂。还以标准方式生产不包含任何大豆胚芽提取物的另外的乳剂作为对照。 

(实施例5C：包含大豆胚芽提取物的霜的生产) 

以标准方式生产具有以下组成的霜。还以标准方式生产不包含任何大豆胚芽提取物的另外的霜作为对照。 

(实施例6：包含大豆胚芽提取物的化妆品的感官评价(冬季：低温应激)) 

用实施例5A至5C进行感官评价。还评价其中不包含大豆胚芽提取物的比较例。在感官评价中，要求各自由20位40至60岁的并经受与粗糙度、干燥度或光泽度等相关的皮肤症状的受试者组成的组在冬季连续三个月每日两次使用实施例和比较例(从12月至2月的三个月)，期间这些人可能处于低温应激下；三个月后通过使用关于皮肤感觉(粗糙、光泽、肌理、湿度感觉、光滑感觉、以及湿度和弹性的感觉)的提问的问卷进行感官评价。从表1的结果来看，已证实大豆胚芽来源的含多胺提取物与比较例相比提供改善皮肤感觉的优异的效果。 

[表1] 

(实施例7：含大豆胚芽提取物的化妆品的感官评价(夏季：高温应激)) 

用实施例5A至5C进行感官评价。还评价其中不包含大豆胚芽提取物的比较例。在感官评价中，要求各自由20位40至60岁的并经受涉及弹性、油腻或光泽度等的皮肤症状的受试者组成的组在夏季连续三个月每日两次使用实施例和比较例(从7月至9月的三个月)，期间这些人可能处于高温应激下；三个月后通过使用关于皮肤感觉(油腻、光泽度、肌理、湿度感觉、光滑感觉以及湿度和弹性的感觉)的提问的问卷进行感官评价。从表2的结果来看，已证实大豆胚芽来源的含多胺提取物与比较例相比提供改善皮肤感觉的优异的效果。 

[表2] 

(实施例8A：包含小麦胚芽提取物的美容液的生产) 

以标准方式生产具有以下组成的美容液。还以标准方式生 产不包含任何小麦胚芽提取物的另外的美容液作为对照。 

(实施例8B：包含小麦胚芽提取物的乳剂的生产) 

以标准方式生产具有以下组成的乳剂。还以标准方式生产不包含任何小麦胚芽提取物的另外的乳剂作为对照。 

(实施例8C：包含小麦胚芽提取物的霜的生产) 

以标准方式生产具有以下组成的霜。还以标准方式生产不包含任何小麦胚芽提取物的另外的霜作为对照。 

(实施例9：包含小麦胚芽提取物的化妆品的感官评价(冬季：低温应激)) 

用实施例8A至8C进行感官评价。还评价其中不包含小麦胚芽提取物的比较例。在感官评价中，要求各自由20位40至60岁的并经受与粗糙度、干燥度或光泽度等相关的皮肤症状的受试者组成的组在冬季连续三个月每日两次使用实施例和比较例(从12月至2月的三个月)，期间这些人可能处于低温应激下；三个月后通过使用关于皮肤感觉(粗糙、光泽、肌理、湿度感觉、光滑感觉、以及湿度和弹性的感觉)的提问的问卷进行感官评价。从表1的结果来看，已证实小麦胚芽来源的含多胺提取物与比较例相比提供改善皮肤感觉的优异的效果。 

[表3] 

(实施例10：含小麦胚芽提取物的化妆品的感官评价(夏季：高温应激)) 

用实施例8A至8C进行感官评价。还评价其中不包含大豆胚芽提取物的比较例。在感官评价中，要求各自由20位40至60岁的并经受涉及弹性、油腻或光泽度等的皮肤症状的受试者组成的组在夏季连续三个月每日两次使用实施例和比较例(从7月至9月的三个月)，期间人们可能处于高温应激下；三个月后通过使用关于皮肤感觉(油腻、光泽度、肌理、湿度感觉、光滑感觉以及湿度和弹性的感觉)的提问的问卷进行感官评价。从表2的结果来看，已证实小麦胚芽来源的含多胺提取物与比较例相比提供改善皮肤感觉的优异的效果。 

[表4] 

(实施例11：合成多胺、大豆胚芽来源的含多胺的植物提取物和小麦胚芽来源的含多胺的植物提取物的应激减轻(抗应激)作用的比较评价(低温应激)) 

关于多胺，使用腐胺、亚精胺和精胺。实施例1B中描述的植物提取物(大豆胚芽提取物；LGS)用作包含大豆胚芽来源的多胺的植物提取物。实施例2B中描述的植物提取物(小麦胚芽提取物；LGW)用作包含小麦胚芽来源的多胺的植物提取物。 

通过以下步骤进行评价。在T-75烧瓶中培养成纤维细胞(106-05，由Cell Applications，Inc.制造)。当成纤维细胞达到70至80％融合度(confluency)时，吸出培养基。用10ml PBS洗涤成纤维细胞两次。通过添加500μl胰蛋白酶/PBS来游离细胞并通过 添加500μl含10％FCS的DMEM(11995-073，由GIBCO制造)来终止反应。将细胞与10ml PBS混合并收集到50ml管中。将细胞与另外的10ml PBS混合并收集。在1,000rpm下收集细胞5分钟并吸出上清液。将所得溶液溶解在3ml含1％FCS的DMEM中并计算细胞数目。用含1％FCS的DMEM将溶液调整为4×10⁴细胞/ml(1×10⁴细胞/250μl)，将250μl所得溶液各自注入到48孔板的孔中。在设置为37℃的CO₂培养箱中过夜培养细胞。然后，将样品(2.5μl每孔)添加到孔中，并在设置为37℃(在无应激的条件下)和设置在32℃(低温应激条件)的CO₂培养箱中培养细胞3天。进行实验，N＝4。用抽吸器除去培养基后，用PBS洗涤孔两次。在将200μl含5％FCS的DMEM(21063-029，由GIBCO制造)添加到各孔后，添加20μl活细胞计数试剂SF(07553-54，由NACALAI TESQUE，INC.制造)，并允许反应在CO₂培养箱中发生5小时。测量Abs490/630并用下式计算细胞赋活百分比。 

细胞赋活百分比＝(As-Ab)/(Ac-Ab)×100 

此处，As表示样品的Abs 490/630；Ac表示对照(水)的Abs490/630；Ab表示不接种细胞但加入含5％FCS的DMEM和活细胞计数试剂SF的孔的Abs 490/630。图5以相对于对照(水添加)中细胞赋活能力的相对值说明评价结果。在图5的左侧纵轴中，细胞赋活能力定义为100从而以仅反映增加的多胺浓度的尺度示出百分比。在图5的右侧纵轴中，如下所述，由于细胞赋活能力降低到37℃无应激条件下的细胞赋活能力的75％，所以将对照的细胞赋活能力定义为75。因此，右侧纵轴的百分比进一步反映了与37℃(室温)无应激条件下的细胞赋活能力的比较。示出的浓度为多胺的浓度。 

32℃低温应激条件下在添加水(对照)中的细胞赋活能力减少到37℃(室温)无应激条件下的细胞赋活能力的75％。从图5中 清楚地看到，在所有添加了大豆胚芽来源的含多胺的植物提取物和小麦胚芽来源的含多胺的植物提取物的培养基中，与添加腐胺、亚精胺和精胺的对照相比，观察到显著(显著水平：1％或5％)高的细胞赋活能力。因此，已证实样品提供优异的应激减轻(抗应激)作用。可选地，当使用实施例1A和1C中所述的植物提取物(大豆胚芽提取物；LGS)和实施例2A和2C中所述的植物提取物(小麦胚芽提取物；LGW)时，也获得了与使用实施例1B和2B所述的植物提取物的情况相类似的结果。总之，通过将多胺施用到皮肤，减轻(遏制)由于低温应激造成的成纤维细胞的下降，因而可期望改善皮肤感觉。 

(实施例12：合成多胺、大豆胚芽来源的含多胺的植物提取物和小麦胚芽来源的含多胺的植物提取物的应激减轻(抗应激)作用的比较评价(高温应激)) 

关于多胺，使用腐胺、亚精胺和精胺。实施例1B中描述的植物提取物(大豆胚芽提取物；LGS)用作包含大豆胚芽来源的多胺的植物提取物。实施例2B中描述的植物提取物(小麦胚芽提取物；LGW)用作包含小麦胚芽来源的多胺的植物提取物。 

通过以下步骤进行评价。在T-75烧瓶中培养成纤维细胞(106-05，由Cell Applications，Inc.制造)。当成纤维细胞达到70至80％融合度(confluency)时，吸出培养基。用10ml PBS洗涤成纤维细胞两次。通过添加500μl胰蛋白酶/PBS来游离细胞并通过添加500μl含10％FCS的DMEM(11995-073，由GIBCO制造)来终止反应。将细胞与10ml PBS混合并收集到50ml管中。将细胞与另外的10ml PBS混合并收集。在1,000rpm下收集细胞5分钟并吸出上清液。将所得溶液溶解在3ml含1％FCS的DMEM中并计算细胞数目。用含1％FCS的DMEM将溶液调整为4×10⁴细胞/ml(1×10⁴细胞/250μl)，将250μl所得溶液各自注入到48孔板的孔中。在设 置为37℃的CO₂培养箱中过夜培养细胞。然后，将样品(2.5μl每孔)添加到孔中，并在设置为37℃(在无应激的条件下)和设置在42℃(高温应激条件)的CO₂培养箱中培养细胞3天。进行实验，N＝4。用抽吸器除去培养基后，用PBS洗涤孔两次。在将200μl含5％FCS的DMEM(21063-029，由GIBCO制造)添加到各孔后，添加20μl活细胞计数试剂SF(07553-54，由NACALAI TESQUE，INC.制造)，并允许反应在CO₂培养箱中发生5小时。测量Abs490/630并用下式计算细胞赋活百分比。 

细胞赋活百分比＝(As-Ab)/(Ac-Ab)×100 

此处，As表示样品的Abs 490/630；Ac表示对照(水)的Abs490/630；Ab表示不接种细胞但加入含5％FCS的DMEM和活细胞计数试剂SF的孔的Abs 490/630。图6以相对于对照(添加水)中细胞赋活能力的相对值说明评价结果。在图6的左侧纵轴中，细胞赋活能力定义为100从而以仅反映增加的多胺浓度的尺度示出百分比。在图6的右侧纵轴中，如下所述，由于细胞赋活能力降低到37℃无应激条件下的细胞赋活能力的70％，所以将对照的细胞赋活能力定义为70。因此，右侧纵轴的百分比进一步反映了与37℃(室温)无应激条件下的细胞赋活能力的比较。示出的浓度为多胺的浓度。 

42℃高温应激条件下在水添加(对照)中细胞赋活能力减少到37℃(室温)无应激条件下的细胞赋活能力的75％。从图6中清楚地看到，在所有添加了大豆胚芽来源的含多胺的植物提取物和小麦胚芽来源的含多胺的植物提取物的培养基中，与添加腐胺、亚精胺和精胺的对照相比，观察到显著(显著水平：1％或5％)高的细胞赋活能力。因此，已证实样品提供优异的应激减轻(抗应激)作用。可选地，当使用实施例1A和1C中所述的植物提取物(大豆胚芽提取物；LGS)和实施例2A和2C中所述的植物 提取物(小麦胚芽提取物；LGW)时，也获得了与使用实施例1B和2B所述的植物提取物的情况相类似的结果。总之，通过将多胺施用到皮肤，减轻(抑制)由于高温应激造成的成纤维细胞的下降，因而可期望皮肤感觉的改善。 

产业上的可利用性

本发明可提供一种组合物，期望其为细胞提供优异的抗应激作用、应激抑制作用、应激减轻作用、应激预防作用、应激防止作用或应激保护作用等，并且其包含植物来源的含多胺提取物。可提供各自包含此组合物的化妆品、准药品(皮肤外用制剂、浴用试剂、护发剂或生发剂)、医疗用品、卫生用品、药品、食品或饮品。此外，由于该组合物可以较低材料成本和大规模生产，所以能够充分经受长期使用，该组合物期望非常有助于工业。 

Claims (12)

1.含有天然产生的多胺的植物来源的提取物在制备应激减轻剂中的用途，其中：

所述应激减轻剂用于向需要减轻细胞水平应激的动物或人施用以减轻应激，

所述应激为温度应激，

所述植物来源的提取物为源自选自由大豆种子、大豆胚芽、大豆胚、大豆芽、小麦种子、小麦胚芽、小麦胚、小麦芽、豆乳和***组成的组中的至少一种材料的提取物，

所述天然产生的多胺选自由腐胺、亚精胺和精胺组成的组中的至少一种化合物。

2.根据权利要求1所述的用途，其中所述温度应激为低温应激。

3.根据权利要求1所述的用途，其中所述温度应激为高温应激。

4.根据权利要求1所述的用途，其中所述施用包括施用包括所述试剂的化妆品组合物。

5.根据权利要求1所述的用途，其中所述施用包括施用包括所述试剂的食品组合物。

6.根据权利要求1所述的用途，其中所述施用包括将所述试剂向动物或人的皮肤细胞施用以减轻与皮肤细胞相关的应激并改善皮肤感觉效果。

7.一种用于减轻应激以改善皮肤感觉的非治疗性方法，其包括：

将试剂向需要减轻细胞水平应激的动物或人施用，其中：

所述试剂包括含有天然产生的多胺的植物来源的提取物；

所述应激为温度应激，

所述植物来源的提取物为源自选自由大豆种子、大豆胚芽、大豆胚、大豆芽、小麦种子、小麦胚芽、小麦胚、小麦芽、豆乳和***组成的组中的至少一种材料的提取物，

所述天然产生的多胺选自由腐胺、亚精胺和精胺组成的组中的至少一种化合物。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述温度应激为低温应激。

9.根据权利要求7所述的方法，其中所述温度应激为高温应激。

10.根据权利要求7所述的方法，其中所述施用包括施用包括所述试剂的化妆品组合物。

11.根据权利要求7所述的方法，其中所述施用包括施用包括所述试剂的食品组合物。

12.根据权利要求7所述的方法，其中所述施用包括将所述试剂向动物或人的皮肤细胞施用以减轻与皮肤细胞相关的应激并改善皮肤感觉效果。