CN102552888B - 一种用于治疗哺乳动物子***的栓剂 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，具体的说涉及一种用于治疗哺乳动物子***的栓剂。本发明公开的制剂组成及其重量百分含量包括溶葡萄球菌酶0.004～0.01％，溶菌酶0.1～4％，半合成脂肪酸甘油酯10～80％，泊洛沙姆188(F68)1～20％，HPMC1～20％，碳酸氢钠5～50％，磷酸二氢钠5～50％。本发明制剂通过给药进入哺乳动物子宫后，能够在体液的作用下泡腾崩解，使药物混合于泡沫中快速释放，药物与子宫黏膜的接触面积更大，使药物能渗入粘膜褶皱深部，延长药物与粘膜作用时间，提高局部组织药物浓度，进而增强治疗效果，有效杀灭引起子***的各种病原菌。

Description

一种用于治疗哺乳动物子***的栓剂

技术领域

本发明涉及一种药物制剂，具体地说，涉及一种用于治疗哺乳动物子***的栓剂。

背景技术

子***是哺乳动物如奶牛、猪等的常见病。病因复杂，发病率高。奶牛子***的发病率在15％-20％之间，而猪场该病的发病率在30％左右。子***可造成子宫复旧时间延长，使发情周期紊乱。炎性渗出物可改变子宫内环境的酸碱度，不利于***和卵子的生存，使受胎率下降，导致***，同时还可长期刺激子宫内壁感受器，通过反射，使激素调节失调，引起卵巢疾病。另外还可继发***炎等。

目前世界上治疗子***均使用抗生素，但是抗生素治疗存在许多不利因素。如(1)容易使细菌产生耐药性；(2)单一药物抗菌谱不广；(3)容易造成抗生素残留；(4)其它副作用。近年来由于抗生素的大量使用，耐药菌株不断出现，尤其是金黄色葡萄球菌对多种抗生素产生耐药性，且耐药性呈明显上升趋势，难于治疗。欧美国家早在40多年前就投入大量人力、物力研究替代抗生素的药物但至今尚无明确结果。

溶葡萄球菌酶是一种革兰氏阳性菌的溶菌素，能够迅速裂解细菌杀死细菌，作用时间短，细菌不容易产生耐药性，同时杀菌效果好，对耐甲氧苯青霉素(MRSA)的金黄色葡萄球菌同样有较强的杀菌能力。

1991年，美国普林斯顿Cyanamid公司农业研究所的Oldham ER等用溶葡萄球菌酶治疗耐药性金黄色葡萄球菌引起的奶牛乳腺炎，证明了溶葡萄球菌酶对于治疗此病的有效性。次年他们又研究了局部使用重组溶葡萄球菌酶治疗奶牛乳腺炎时引起体内的免疫反应，认为重组溶葡萄球菌酶作为体内注射剂是有效和安全的，并提出溶葡萄球菌酶可以替代传统的抗生素。

溶菌酶是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1，4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。能专一性的作用于目地微生物的细胞壁，对革兰氏阳性菌、好气性孢子形成菌、枯草杆菌、地衣芽孢杆菌等都有抗菌作用。

将溶菌酶和溶葡萄球菌酶按一定比例混合后制成复合酶，具有更广的杀菌谱，抑杀菌效果优于单酶。中国专利ZL03142299.3(一种用于预防和治疗奶牛子***的制剂及其制备方法)，公开了用溶葡萄球菌酶、溶菌酶、抑菌肽和医学上可以接受的载体制成的制剂，可以预防和治疗奶牛子***。

中国专利ZL200510028617.5(一种用于防治牛子***的溶葡萄球菌酶冻干粉剂)，公开了采用溶葡萄球菌酶冻干粉剂治疗奶牛子***及其制备方法。然而冻干粉剂在给药前需要临时以水复溶，给药较为不便。而且以水溶液方式给药，药液黏度小，不易与子宫黏膜作用，在短时间内即被排出体外。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种用于哺乳动物子***的生物杀菌泡腾栓剂，以克服现有技术存在的使用不便，治疗中用药物多次过量冲洗子宫致子宫复原受到影响，子宫内药物分布面积小，留存时间短，与黏膜液化的相互作用弱，不利于渗入到子宫黏膜的缺点。

本发明的构思是这样的：

泡腾栓属于栓剂中的一种特殊剂型，由药物与基质、适量辅料、表面活性剂及酸碱***(泡腾崩解剂)混合制成。泡腾栓遇体液或水，其中的酸和碱起化学反应产生二氧化碳气体而使泡腾栓泡腾崩解，溶解释药，并与表面活性剂作用形成泡沫。起初在栓剂表面浅层发生中和反应，产生的二氧化碳气体逸出使其形成很多孔洞，以利于水分深入栓剂内层，使酸碱***继续反应产生大量二氧化碳。一方面形成一定的压力，令其他崩解剂膨胀使栓剂胀裂，另一方面二氧化碳气体逸出，有利于水分继续进入栓剂内部，促使整个栓剂在较短时间内泡腾崩解、溶解释药。

栓剂的基质分为水溶性和油溶性。在基质筛选方面，考虑到无水环境有利于酶活性的长期保持，而水溶性基质在制备过程中或多或少需加入水分，本发明选择了对酶活性长期保持更为有利的油溶性基质。半合成脂肪酸甘油酯作为最常用的栓剂油溶性基质具有成本较低，熔点恒定等优点，因此被选用。

在对复合酶泡腾栓酸碱***进行筛选时发现，大多数常用的酸碱对酶的活性有抑制作用，可能是盐析作用或者是发泡过程过于剧烈导致蛋白质结构发生改变引起酶的失活。而表面活性剂也是影响蛋白质的因素之一。吐温-80是泡腾制剂最常用的表面活性剂，具有用量少，起泡迅速，泡沫细腻持久的优点。但在对辅料进行筛选的过程中发现，吐温-80会降低复合酶的活性。为保持泡腾过程中酶的活性，保证药效，本发明对崩解***和表面活性剂进行了考察并引入了HPMC和F68这两种目前在泡腾制剂中较少应用的辅料。

羟丙基甲基纤维素(HPMC)为纤维素衍生物，应用于食品及药剂已有40年以上的历史，收载于美国药典19-23版，是具有较为广泛的优良性能的药用高分子材料。HPMC在药剂中已普遍用作增稠剂、薄膜包衣剂、缓释制剂致孔材料、亲水凝胶剂，也可作固体分散剂材料，以提高药品的稳定性和难溶性药物的生物利用度等。在泡腾制剂的生产上，HPMC常被用作泡腾片崩解剂以加快药物释放，在泡腾栓中则鲜有使用。本发明中HPMC除了作为辅助崩解剂加快栓剂的崩解释放外，其作为表面活性剂还能够促进药物的吸收，增加泡沫的体积和细腻程度，从而增加其与子宫黏膜的接触面积，并使其更易渗入普通制剂不易到达的褶皱深处。HPMC作为一种高分子材料，具有一定的保持蛋白质稳定的作用，有助于保持酶的活性。而其具有的黏性能够使有效成分在更长的时间内粘附于子宫内壁，避免过快地被排出体外。

泊洛沙姆188(F68)在制药领域常用作乳剂、软膏剂和混悬剂的润滑剂，片剂或胶囊的增溶剂和分散剂，也可作为固体分散剂的载体，并且是目前应用于静脉注射的唯一人工的乳化剂，平均分子量为7680-9510。F68作为一种表面活性剂，在细胞保护方面也显示出独特的作用。F68的HLB值为29，具有较强的表面活性作用。在本发明中，其作为表面活性剂能够产生更多的泡沫，不仅能增加药物与黏膜的接触面积，而且可以增强制剂向子宫内膜的渗透，增强其杀菌作用的发挥，同时增强酶的稳定性。另外F68具有一定形成凝胶的做用，与HPMC共同作用形成的凝胶能够延长复合酶在子宫内保留的时间。

本发明的技术方案如下：

一种治疗哺乳动物子***的栓剂，其组成及重量百分含量包括，溶葡萄球菌酶0.004～0.01％，溶菌酶0.1～4％，半合成脂肪酸甘油酯10～80％，泊洛沙姆188(F68)1～20％，HPMC1～20％，碳酸氢钠5～50％，磷酸二氢钠5～50％。

所述及的治疗哺乳动物子***的栓剂，其优选配方的组成及重量百分比包括溶葡萄球菌酶0.004～0.008％，溶菌酶2～4％，半合成脂肪酸甘油酯20～70％，泊洛沙姆188(F68)2～10％，HPMC2～10％，碳酸氢钠10～30％，磷酸二氢钠10～30％。

具体制法如下：

按上述比例称取溶葡萄球菌酶、溶菌酶、F68、HPMC、碳酸氢钠、磷酸二氢钠。所有物料均粉碎，过80目筛，混匀，加入到50℃熔融的半合成脂肪酸甘油酯中，迅速倒入栓剂模型中成型即可。

将溶葡萄球菌酶和溶菌酶复合制备成泡腾栓剂，子宫内给药。不仅给药方便，而且复合酶泡腾栓能够在体液的作用下泡腾崩解，使药物混合于泡沫中快速释放。与冻干粉剂及普通栓剂相比，泡腾栓中药物与黏膜的接触面积更大，而其中添加的表面活性剂及高分子材料有助于增加药物与黏膜的接触，使药物能渗入粘膜褶皱深部，延长药物与粘膜作用时间，提高局部组织药物浓度，进而增强治疗效果，有效杀灭引起子***的各种病原菌。此外，泡腾栓剂含有的酸性成份，可形成抑制厌氧菌生长的偏酸性环境，更有利于杀灭厌氧菌。HPMC和F68崩解后形成凝胶，能维持酶活的稳定并延长有效成分在子宫内的保留时间，最大限度发挥药物的作用，获得更好的治疗效果。

本发明公开的溶葡萄球菌酶栓剂具有如下特点：

1、释放迅速，37℃下15min释放完全。所产生的气泡细小而持久，使药物均匀分布在大量泡沫中很快打散分布在子宫内膜各空隙处，使药物迅速发挥疗效。

2、克服了酶遇常规崩解剂和表面活性剂失去活性的情况，杀菌效果强。该制剂对哺乳动物子***病菌具有很强的杀菌作用。体外实验可以有效杀灭革兰氏阳性菌和阴性菌。

3、稳定性好。本品在25℃常温保存2年，生物活性基本没有改变。在制剂的储存和运输方面优于冻干粉。

4、本发明为生物制剂，克服了传统化学类制剂对子宫黏膜具有刺激性，细菌容易产生耐药性的缺点。易被机体所接受，无毒副作用。

5、采用局部给药的方式，给药方便。与冻干粉相比不需要另外溶解，给药方便。

具体实施方式

实施例1复合酶栓剂制备方法1(配方1)

1、组成和配比

溶葡萄球菌酶0.007％、溶菌酶0.1％、F6820％、HPMC 10％、碳酸氢钠10％、磷酸二氢钠30％、半合成脂肪酸甘油酯29.893％。

2、配制

称取溶葡萄球菌酶0.007g、溶菌酶0.1g、F6820g、HPMC 10g、碳酸氢钠10g％、磷酸二氢钠30g。以上原料粉碎过80目筛，混匀，与29.893g熔融半合成脂肪酸甘油酯均匀混合，迅速倒入栓剂模具中成型即可。

实施例2复合酶栓剂制备方法2(配方2)

1、组成和配比

溶葡萄球菌酶0.004％、溶菌酶2％、F6810％、HPMC 20％、碳酸氢钠20％、磷酸二氢钠10％、半合成脂肪酸甘油酯37.996％。

2、配制

称取溶葡萄球菌酶0.004g、溶菌酶2g、F6810g、HPMC 20g、碳酸氢钠20g％、磷酸二氢钠10g。以上原料粉碎过80目筛，混匀，与37.996g熔融半合成脂肪酸甘油酯均匀混合，迅速倒入栓剂模具中成型即可。

实施例3复合酶栓剂制备方法3(配方3)

1、组成和配比

溶葡萄球菌酶0.01％、溶菌酶4％、F681％、HPMC 1％、碳酸氢钠30％、磷酸二氢钠20％、半合成脂肪酸甘油酯43.99％。

2、配制

称取溶葡萄球菌酶0.01g、溶菌酶4g、F681g、HPMC 1g、碳酸氢钠30g％、磷酸二氢钠20g。以上原料粉碎过80目筛，混匀，与43.99g熔融半合成脂肪酸甘油酯均匀混合，迅速倒入栓剂模具中成型即可。

实施例4栓剂的体外药效学实验

1、实验器材

实验菌株：金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)；大肠杆菌(ATCC 11229)；磷酸盐缓冲溶液(PBS 0.03mol/L pH7.2)

2、实验方法

取实施例1、实施例2、实施例3制备的栓剂各一枚，于37℃水浴释放。取出待冷却后弃去上层基质及泡沫，取下层水溶液以MH肉汤稀释成系列浓度，待测。

将实验菌24h斜面培养物用PBS洗下，制成0.5麦氏比浊标准的菌悬液，用MH肉汤将上述菌悬液进行1∶100稀释。将栓剂释放所得系列浓度溶液以1∶1的比例与菌悬液混合。最终每管溶葡萄球菌酶浓度为10、5、2.5、1.25、0.625、0.31、0.15U/mL，菌悬液浓度为5×105CFU/mL。置37℃培养18～24小时，观察澄清度。

3、实验结果

表1各配方复合酶泡腾栓剂体外抑菌效果

由表1可以看出，各配方复合酶泡腾栓剂均可以有效抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的生长。

实施例5复合酶栓剂的稳定性实验

1、实验器材

溶葡萄球菌酶标准品(90U/mL)；色源底物KNR-PG，用0.2mol/L Gly-NaOH缓冲液(pH10.0)1∶5(m/v)悬浊液备用；0.2mol/L Gly-NaOH缓冲液备用(pH10.0)；0.05mol/L Tris-HCL稀释液(pH7.5)；

2、实验方法

取复合酶泡腾栓剂于37℃水浴释放。取出待冷却后弃去上层基质及泡沫，取下层水溶液以水稀释成适当浓度，滤过后待以表2顺序加入试剂及样品。

表2复合酶活性测定方法

10000rpm离心10min，取上清液595nm处以0号管为空白对照测定吸光度，比色皿的光径为1cm。

根据测得的吸光度A值及相对应的标准酶浓度C(U/ml)，绘制标准曲线：A＝KC+B

其中K为标准曲线的斜率，B为标准曲线的截距，A为吸光度，C为酶的浓度(U/ml)。

3、实验结果

从表3可以看出复合酶泡腾栓剂在25℃存放24个月后的酶活性没有发生明显变化

表325℃存放24个月后复合酶泡腾栓的酶活定结果

实施例6复合酶栓剂对猪子***的作用效果

1、试验药物

复合酶栓剂；抗生素。

2、病例数及病例选择标准

(1)急性子***病例：24头，产后或流产后10天，临床症状为病猪体温升高减食或不食，不愿起立，伴有排尿动作，不时努责，随同努责从***内流出带臭味的红褐色黏液或脓性分泌物，有的夹有胎衣碎片。

(2)慢性子***病例：24头，病例来源与急性子***病例一样来自相同的养猪场；经抗生素治疗或其他药物治疗无效以及患病20天以上母猪。

3、试验分组

将48头患有子***的母猪随机分成4个组，每组12头(6头急性、6头慢性)，其中3个试验组(配方1、配方2、配方3)；1个药物对照组，对照组药物选择抗生素(青霉素160万单位，链霉素500万单位/头/次)。

4、给药方法

对受试母猪先用生理盐水冲洗子宫。其中试验组将要求剂量的复合酶泡腾栓投入子宫内。隔日投药1次，连用3次为1个疗程；药物对照组将青霉素160万单位、链霉素500万单位，生理盐水稀释成溶液注入，每日用药1次.连用3次为1个疗程。

5、疗效判定方法和标准

一个疗程后进行相关检查。

(1)治愈子宫炎症消失，子宫内无炎性分泌物和脓液排出，子宫恢复正常，分泌物透明清亮，按期发情，正常妊娠。

(2)有效子宫炎症明显缓解，子宫分泌物接近正常，细菌分离鉴定前后对照，主要或部分病原菌消除。

(3)无效用药后子宫炎症未见轻缓，子宫分泌物未见好转甚至恶化，细菌分离表明有其他病原菌感染。

6、实验结果

表4复合酶泡腾栓剂组与抗生素组治疗效果比较

从表4可以看出，用复合酶栓剂治疗猪子***效果较传统的抗生素治疗法有明显提高，治愈率前者较后者提高近20至30个百分点。

Claims (1)

1.一种用于治疗哺乳动物子***的栓剂，特征在于，以重量百分比计，其组成包括，溶葡萄球菌酶0.004～0.008％，溶菌酶2～4％，半合成脂肪酸甘油酯20～70％，泊洛沙姆188(F68)2～10％，HPMC2～10％，碳酸氢钠10～30％，磷酸二氢钠10～30％。