CN102533699A - 一种低温酸性木聚糖酶xyn10b及其基因和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及基因工程领域,具体地,本发明涉及一种低温酸性木聚糖酶XYN10B及其基因和应用。本发明提供了一种新的低温酸性木聚糖酶XYN10B,其具有如SEQ ID NO.1或2所示氨基酸序列,且本发明还提供了编码上述低温酸性木聚糖酶XYN10B的基因,其核苷酸序列如SEQ ID NO.4或5所示,以及包含该基因的重组载体和重组菌株及其应用。本发明的木聚糖酶最适pH3.5,并在pH2.5~4.5范围内具有50%以上的酶活力;在酸性范围内具有很好的pH稳定性;最适温度40℃,在低温下具有很高的活性,在0℃仍具有16%的活力。此外,木聚糖酶XYN10B可有效降解各种不同类型的木聚糖。因此,本木聚糖酶将在饲料工业的应用中显示出其巨大的潜力。
Description
技术领域
本发明涉及基因工程领域,具体地,本发明涉及一种低温酸性木聚糖酶XYN10B及其基因和应用。
背景技术
植物细胞壁主要是由纤维素、半纤维素和木质素组成,三者通过共价键和非共价键结合形成一个紧密的结构。半纤维素主要存在于细胞壁的表面,约占细胞干重的30%~35%。其中木聚糖是植物半纤维素的主要组成成分之一,也是自然界中除纤维素之外重要的可再生资源。木聚糖的结构复杂,其完全降解需要多种酶协同作用来进行。其中木聚糖酶是木聚糖降解中的最关键酶,它能够有效地降解木聚糖主链的连接吡喃木糖的β-1,4糖苷键(Saha B.Hemicellulose bioconversion.J IndMicrobiol Biotechnol,2003,30:279-291.)。NCBI中数据库中收录的木聚糖酶基因的分布来看,来源于微生物的木聚糖酶最多,占所有序列的80%以上。而微生物来源的序列中,细菌和真菌来源的序列又占大多数。这可能因为木聚糖的降解终产物木糖可以作为微生物的碳源和能源,而微生物要利用木聚糖,就得合成能够降解木聚糖的酶。根据氨基酸序列同源性,木聚糖酶归类于糖苷水解酶家族10、11、39、43、52、62和67(Henrissat B,Bairoch A.New families in the classification of glycosylhydrolases based on amino acid sequence similarities.Biochem J,1993,293:781-788.)。
木聚糖酶在多个领域有着重要的应用。木聚糖酶用于纸浆漂白过程,并发现木聚糖处理后的纸浆需要的化学漂白剂的用量要比不用木聚糖酶处理少20%~40%。随后木聚糖酶在造纸工业上的研究越来越多。结果发现,用木聚糖酶预处理能够提高漂白效果、增强纸张的强度、优化和调整纸张的性能;木聚糖经木聚糖酶作用后的水解产物(低聚木糖)可用作增稠剂、脂肪替代物和抗冻食品添加剂等;木聚糖酶可以和β-葡聚糖酶协同作用,从而解决啤酒黏度问题,可提高酒液的流速和澄清度。饲料里添加酸性木聚糖酶可以有效地降低消化道中食糜的黏度、提高干物质的消化率和营养吸收,从而提高饲料的利用率和动物体的抗病性。
木聚糖酶在工业中有着广阔的应用前景。近几年,在单胃动物的日粮中添加含有木聚糖酶等的复合酶制剂,能有效消除其抗营养作用,提高饲料利用率和动物的生产性能。单胃动物胃肠道温度在38.5~40℃,pH在2.0~4.0,因此,需要添加的外源木聚糖酶应该在此条件下酶活力最好。本发明的木聚糖酶最适pH 3.5,并在pH2.5~4.5范围内具有很高的酶活性;最适温度40℃,能很好的满足胃肠道环境的要求。与中温和高温木聚糖酶相比,低温酶能在低温条件下有效发挥催化作用,加强其对底物的结合力,从而降低能耗,提高底物利用率,具有很好的应用前景。
发明内容
本发明的目的是提供一种低温酸性木聚糖酶XYN10B。
本发明的再一目的是提供编码上述低温酸性木聚糖酶的基因xyn10B。
本发明的另一目的是提供包含上述低温酸性木聚糖酶基因的重组载体。
本发明的另一目的是提供包含上述低温酸性木聚糖酶基因的重组菌株。
本发明的另一目的是提供一种制备上述低温酸性木聚糖酶的方法。
本发明的另一目的是提供上述低温酸性木聚糖酶的应用。
本发明分离筛选出一种生产上述低温酸性木聚糖酶XYN10B的青霉S10
本发明提供了一种低温酸性木聚糖酶XYN10B,其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示:
MVAFSSLFTA FTAIAGSLAA PADLVKNDNV PDLVSRGPSN FVIDSTNNTS
LARRSAINYD 60
QDYTTGGTVN YYSSSTGFEV TWNTQDDFVV GVGWNPGSTT PINFGGQFSV
SSGTGLLSVY 120
GWSTSPLVEY YIIEDYANPP SFGTQKGSLT SDGGTYIIWE NTRYNEPSIQ
GTSTFNQYIS 180
VRQSPRTEGT VTVQNHFNAW KNLGMNLGTL NFQVIAAEGW
GGSGSASYAV NNN 233
其中,该酶基因编码233个氨基酸,N端19个氨基酸为其预测的信号肽序列,如SEQ ID NO.3所示:
MVAFSSLFTAFTAIAGSLA 19
因此,成熟的低温酸性木聚糖酶XYN10B的理论分子量为23.1kDB,其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示:
APADLVKNDN VPDLVSRGPS NFVIDSTNNT SLARRSAINY DQDYTTGGTV
NYYSSSTGFE 60
VTWNTQDDFV VGVGWNPGST TPINFGGQFS VSSGTGLLSV YGWSTSPLVE
YYIIEDYANP 120
PSFGTQKGSL TSDGGTYIIW ENTRYNEPSI QGTSTFNQYI SVRQSPRTEG
TVTVQNHFNA 180
WKNLGMNLGT LNFQVIAAEG WGGSGSASYA VNNN 214
本发明的木聚糖酶XYN10B在酸性范围内具有优良的pH稳定性,而低温范围内均具有高活性。本发明的木聚糖酶,其最适pH值为3.5,在pH 2.5~4.5的范围内维持50%以上的酶活性;在pH 3.0~6.0之间,酶活很稳定;最适温度为40℃,在0℃仍具有16%的酶活性。
本发明提供了编码上述低温酸性木聚糖酶基因xyn10B。具体地,该基因的基因组序列如SEQ ID NO.4所示:
atggttgcat tctcaagctt attcactgcc ttcacagcca ttgccggctc actcgctgca 60
ccagcagatc tggtcaagaa cgataacgtc cctgacctcg tcagccgcgg cccatcaaac 120
ttcgtcatcg attcaacaaa caacacctcc ttggctcgtc gatccgcaat caactatgac 180
caggactata ccaccggcgg aacggtaaac tactattcct ccagcacggg gtttgaggtt 240
acctggaaca cgcaggacga cttcgtcgtt ggcgttggct ggaaccctgg atctaccaca 300
cccatcaact tcggcggcca attctccgtc tccagcggca caggcctcct ctccgtctac 360
ggctggtcca cctcccccct cgtcgaatac tacataatcg aagactacgc caacccaccc 420
agcttcggca cgcaaaaggg ttccctaacc agcgacggcg gcacttacat catctgggag 480
aatacgcgat acaacgaacc ttcgattcag ggtacgtcta ctttcaatca gtatatctct 540
gtgcgccaga gtccccggac ggagggcacg gttacggtgc agaatcattt taatgcttgg 600
aagaacttgg ggatgaattt ggggacgttg aattttcagg ttattgctgc tgaggggtgg 660
ggtgggagtg gttctgcttc gtatgctgtt aacaataact aa 702
本发明通过RT-PCR的方法分离克隆了木聚糖酶基因xyn10B,cDNA全序列分析结果表明,木聚糖酶XYN10B基因xyn10B全长702bp。其中,信号肽的碱基序列如SEQ ID NO.6所示:
atggttgcat tctcaagctt attcactgcc ttcacagcca ttgccggctc actcgct 57
因此,成熟的木聚糖酶XYN10B的基因序列如SEQ ID NO.5所示:
gcaccagcag atctggtcaa gaacgataac gtccctgacc tcgtcagccg cggcccatca 60
aacttcgtca tcgattcaac aaacaacacc tccttggctc gtcgatccgc aatcaactat 120
gaccaggact ataccaccgg cggaacggta aactactatt cctccagcac ggggtttgag 180
gttacctgga acacgcagga cgacttcgtc gttggcgttg gctggaaccc tggatctacc 240
acacccatca acttcggcgg ccaattctcc gtctccagcg gcacaggcct cctctccgtc 300
tacggctggt ccacctcccc cctcgtcgaa tactacataa tcgaagacta cgccaaccca 360
cccagcttcg gcacgcaaaa gggttcccta accagcgacg gcggcactta catcatctgg 420
gagaatacgc gatacaacga accttcgatt cagggtacgt ctactttcaa tcagtatatc 480
tctgtgcgcc agagtccccg gacggagggc acggttacgg tgcagaatca ttttaatgct 540
tggaagaact tggggatgaa tttggggacg ttgaattttc aggttattgc tgctgagggg 600
tggggtggga gtggttctgc ttcgtatgct gttaacaata ac 642
成熟蛋白理论分子量为23.1kDa,将木聚糖酶基因xyn10B序列及推导出的氨基酸序列在GenBank中进行BLBST比对,该基因与来源于Penicillium marneffei ATCC18224假设的第11家族木聚糖酶氨基酸序列一致性为83%,与发表的来源于Trichoderma reesei的木聚糖酶氨基酸序列一致性为67%。说明木聚糖酶基因xyn10B是一种新的木聚糖酶基因。
本发明还提供了包含上述低温酸性木聚糖酶基因xyn10B的重组载体,优选为pPIC9-xyn10B。将本发明的木聚糖酶基因***到表达载体合适的限制性酶切位点之间,使其核苷酸序列可操作的与表达调控序列相连接。作为本发明的一个最优选的实施方案,优选为将本发明的木聚糖酶基因***到质粒pPIC9上的EcoR I和NotI限制性酶切位点之间,使该核苷酸序列位于AOX1启动子的下游并受其调控,得到重组酵母表达质粒pPIC9-xyn10B。
本发明还提供了包含上述低温酸性木聚糖酶基因xyn10B的重组菌株,所述菌株为大肠杆菌、酵母菌、芽孢杆菌或乳酸杆菌,优选为重组毕赤酵母菌株GS115/xyn10B。
本发明还提供了一种制备上述低温酸性木聚糖酶XYN10B的方法,包括以下步骤:
1)用上述重组载体转化宿主细胞,得重组菌株;
2)培养重组菌株,诱导重组木聚糖酶XYN10B的表达;以及
3)回收并纯化所表达的木聚糖酶XYN10B。
其中,所述宿主细胞为毕赤酵母细胞、啤酒酵母细胞或多型逊酵母细胞,优选将重组酵母表达质粒转化毕赤酵母细胞(Pichia pastoris)GS115,得到重组菌株GS115/xyn10B。
本发明还提供了上述低温酸性木聚糖酶XYN10B的应用,优选其在水解木聚糖及其在饲料工业中的应用。
本发明首先所要解决的技术问题是克服现有技术的不足,提供一种性质优良的、适合于在造纸、纺织、饲料工业中应用的新的木聚糖酶。本发明的木聚糖酶最适pH3.5,并在pH 2.5~4.5范围内具有50%以上的酶活力;在酸性范围内具有很好的pH稳定性;最适温度40℃,在低温下具有很高的活性,在0℃仍具有16%的活力。此外,木聚糖酶XYN10B可有效降解各种不同类型的木聚糖。因此,本木聚糖酶将在饲料工业的应用中显示出其巨大的潜力。
附图说明
图1重组木聚糖酶的最适pH。
图2重组木聚糖酶的pH稳定性。
图3重组木聚糖酶的最适温度。
图4重组木聚糖酶的热稳定性。
具体实施方式
试验材料和试剂
1、菌株及载体:毕赤酵母表达载体pPIC9及菌株GS115购自于Invitrogen公司。
2、酶类及其它生化试剂:内切酶购自TAKARA公司,连接酶购自Promega公司。底物购自Sigma公司,其它都为国产试剂(均可从普通生化试剂公司购买得到)。
3、培养基:
(1)重组毕赤酵母菌培养基为马铃薯汁培养基:1000mL马铃薯汁,10g葡萄糖,25g琼脂,pH 5.0。
(2)大肠杆菌培养基LB(1%蛋白胨、0.5%酵母提取物、1%NaCl,pH 7.0)。
(3)BMGY培养基:1%酵母提取物,2%蛋白胨,1.34%YNB,0.00004%Biotin,1%甘油(V/V)。
(4)BMMY培养基:除以0.5%甲醇代替甘油,其余成份均与BMGY相同,pH4.0。
说明:以下实施例中未作具体说明的分子生物学实验方法,均参照《分子克隆实验指南》(第三版)J.萨姆布鲁克一书中所列的具体方法进行,或者按照试剂盒和产品说明书进行。
实施例1木聚糖酶编码基因XYN10B的克隆
提取青霉S10(Penicillium sp.)基因组DNA:
培养3天后将菌丝离心后取入研钵中,液氮冻制研磨5min,然后将研磨液置于50mL离心管中,加入2mL CTAB提取液,70℃水浴锅裂解2h,每隔10min混匀一次,在4℃下12000rpm离心10min。取上清于酚/氯仿中抽提除去杂蛋白,再取上清加入等体积异丙醇,于室温静置10min后,4℃下12000rpm离心10min。弃上清,沉淀用70%的乙醇洗涤两次,真空干燥,加入0.2mL TE溶解,置于-20℃备用。
根据第11家族木聚糖酶基因的保守(CYLG(A)VYGW和TFNQYWS)序列设计合成了简并引物P1,P2:
P1:5′-TGCTACCTGG(C/G)CTT(A/C/G/T)TA(C/T)GG(A/C/G/T)TGG-3′;
P2:5′-ACCAGTA(C/T)TG(A/C/G/T)T(A/C/G/T)(A/G)AA(A/C/G/T)GT-3′。
以青霉S10(Penicillium sp.)总DNA为模板进行PCR扩增。PCR反应参数为:94℃变性5min;然后94℃变性30sec,53℃降落48℃(每个循环降落0.5℃)退火30sec,72℃延伸30s,十个循环;94℃变性30s,48℃退火30s,72℃延伸30s,30个循环,72℃保温10min。得到一约199bp片段,将该片段回收后与pEBSY-T3载体相连送三博生物技术有限公司测序。
根据测序得到的核苷酸序列,设计上游和下游各二条TAIL-PCR特异性引物:设计方向为需要扩增的未知区域方向,第二条引物的位置设计在第一条引物的内侧。每两个引物之间的距离为50bp左右,引物长度一般30nt,退火温度在60℃。并将它们分别命名为usp1,usp2(上游特异性引物),dsp1,dsp2(下游特异性引物)见表1。
表1.木聚糖酶XYN10B TBIL-PCR特异性引物
通过反向TAIL-PCR得到已知基因序列的侧翼序列,扩增得到产物回收后送三博生物技术有限公司测序。拼接后再通过RT-PCR方法获得XYN10B木聚糖酶基因全长702bp(SEQ ID NO.4),编码233个氨基酸(SEQ ID NO.1)和一个终止密码子。用SignalP(http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP)进行分析表明N端19个氨基酸为预测的信号肽(SEQ ID NO.3)。预测该基因所编码的成熟蛋白的理论分子量为23.1kDa。
实施例2重组木聚糖酶的制备
将表达载体pPIC9进行双酶切(SpeI+NotI),同时将扩增到编码木聚糖酶的基因xyn10B(不含信号肽)双酶切(EcoRI+NotI),切出编码木聚糖酶的基因片段与表达载体pPIC9连接,获得含有木聚糖酶基因xyn10B的重组质粒pPIC9-xyn10B并转化毕赤酵母GS115,获得重组毕赤酵母菌株GS115/xyn10B;同样,将包含有信号肽序列的木聚糖酶XYN10B的cDNA通过酶切、连接方法***已去除α-因子信号肽序列的表达载体pPIC9中,获得含信号肽序列的编码木聚糖酶的基因xyn10B的重组质粒pPIC-xyn10B-1并转化毕赤酵母GS115,获得重组毕赤酵母菌株GS115/xyn10B-1。
分别取含有两种重组质粒的GS115菌株,分别接种于300mL BMGY培养液中,30℃250rpm振荡培养48h后,离心收集菌体。然后于100mL BMMY培养基重悬,30℃250rpm振荡培养。诱导72h后,离心收集上清。测定木聚糖酶的活力。重组菌株GS115/xyn10B的重组木聚糖酶的表达量为46.2U/mL,相比之下,重组菌株GS115/xyn10B-1的重组木聚糖酶的表达量低于前者。SDS-PBGE结果表明,重组木聚糖酶在毕赤酵母中得到了表达。重组木聚糖酶的比活为1200U/mg。
实施例3重组木聚糖酶的活性分析
纯化重组菌株GS115/XYN10B和GS115/XYN10B-1所产重组木聚糖酶,使用DNS法进行活性分析。
DNS法:具体方法如下:在pH 3.5,40℃条件下,1mL的反应体系包括100μL适当的稀释酶液,900μL底物,反应10min,加入1.5mLDNS终止反应,沸水煮5min。冷却后540nm测定OD值。1个酶活单位(U)定义为在给定的条件下每分钟释放出1μmol还原糖的酶量。
实施例4重组木聚糖酶XYN10B的性质测定
1、重组木聚糖酶XYN10B的最适pH和pH稳定性的测定方法如下:
将实施例3纯化的重组木聚糖酶在不同的pH下测定其最适pH。桦木木聚糖在不同pH的0.1mol/L柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液中37℃下进行酶活力测定。结果(图1)表明,重组酶XYN10B的最适pH为3.5,在pH 2.5~4.5有50%以上的相对酶活性。木聚糖酶在以上各种不同pH的缓冲液中37℃处理60min,再在pH 7.0缓冲液体系中60℃下测定酶活性,以研究酶的pH稳定性。结果(图2)表明木聚糖酶在pH 3.0~6.0之间均很稳定,在此pH范围内处理60min后剩余酶活性在70%以上,这说明此酶在酸性范围内具有很好的pH稳定性。
2、木聚糖酶的最适温度及热稳定性测定方法如下:
木聚糖酶的最适温度的测定为在柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH 3.5)缓冲液体系及不同温度下进行酶促反应。耐温性测定为木聚糖酶在不同温度下处理不同时间,再在37℃下进行酶活性测定。酶反应最适温度测定结果(图3)表明其最适温度为40℃。酶的热稳定性性试验表明(图4),XYN10B在37℃下温育1h,能保持原有的酶活性的90%,而在55℃下温育1h后只剩余5%。
3、木聚糖酶的Km值测定方法如下:
以不同浓度的桦木木聚糖为底物,在柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH3.5)缓冲液体系中,40℃下测定酶活性,计算出其在40℃下的Km值。经测定,Km值为2.2mg/mL,最大反应速度Vmax为1425.5μmol/min·mg。
4、不同金属离子化学试剂对XYN10B酶活的影响测定如下:
在酶促反应体系中加入1mmol/L的不同的金属离子及化学试剂,研究其对酶活性的影响。在40℃、pH 3.5条件下测定酶活性。结果表明(表2),Cu2+、Fe3+、Ag+对酶活有部分抑制作用,SDS强烈抑制其活性,而巯基乙醇对酶活都有一定的促进作用,其它金属离子和EDTA对酶活的影响不大。
表2.各种化学试剂及离子的对木聚糖酶XYN10B的影响
5、重组木聚糖酶的底物特异性
该酶除可作用于桦木木聚糖外,对于榉木木聚糖、可溶性小麦***木聚糖也有较高的降解作用(表3),但该酶不降解纤维素钠。其桦木木聚糖降解产物主要为木糖、木二糖、木三糖和其他寡糖。
表3.木聚糖酶XYN10B底物特异性
Claims (9)
1.一种低温酸性木聚糖酶XYN10B,其特征在于,其氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。
2.一种低温酸性木聚糖酶基因xyn10B,其特征在于,编码权利要求1所述的低温酸性木聚糖酶XYN10B。
3.根据权利要求2所述的低温酸性木聚糖酶基因xyn10B,其特征在于,所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4或5所示。
4.包含权利要求2或3所述低温酸性木聚糖酶基因xyn10B的重组载体。
5.根据权利要求4所述的重组载体,其特征在于,所述重组载体为pPIC9-xyn10B。
6.包含权利要求2或3所述低温酸性木聚糖酶基因xyn10B的重组菌株。
7.根据权利要求6所述的重组菌株,其特征在于,所述重组菌株为毕赤酵母菌。
8.一种制备低温酸性木聚糖酶XYN10B的方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)用权利要求4的重组载体转化宿主细胞,得重组菌株;
2)培养重组菌株,诱导重组木聚糖酶XYN10B的表达;以及
3)回收并纯化所表达的木聚糖酶XYN10B。
9.权利要求1所述低温酸性木聚糖酶XYN10B的应用。
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103013958A (zh) * | 2012-12-21 | 2013-04-03 | 青岛蔚蓝生物集团有限公司 | 一种木聚糖酶及表达木聚糖酶的重组工程菌 |
CN108456667A (zh) * | 2017-02-17 | 2018-08-28 | 中国科学院微生物研究所 | 一种木聚糖酶及其编码基因和它们的应用 |
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Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
CAI H ET AL.: "AEH26027.1", 《GENBANK》 * |
CAI H ET AL.: "JF827295.1", 《GENBANK》 * |
罗建杰等: "高比活木聚糖酶XYN-W及其突变体在酵母中的高效表达", 《中国农业科技导报》 * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103013958A (zh) * | 2012-12-21 | 2013-04-03 | 青岛蔚蓝生物集团有限公司 | 一种木聚糖酶及表达木聚糖酶的重组工程菌 |
CN108456667A (zh) * | 2017-02-17 | 2018-08-28 | 中国科学院微生物研究所 | 一种木聚糖酶及其编码基因和它们的应用 |
CN108456667B (zh) * | 2017-02-17 | 2019-10-18 | 中国科学院微生物研究所 | 一种木聚糖酶及其编码基因和它们的应用 |
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20120704 |