具体实施方式:
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述,但是本领域技术人员将会理解,下列实施例仅用于说明本发明,而不应视为限定本发明的范围。
实施例1
表1-1实施例1组合物配方
组分 |
用量 |
米卡芬净 |
50mg/ml |
甘露醇 |
30mg/ml |
山梨醇 |
20mg/ml |
磷酸二氢钠 |
20mM |
盐酸 |
适量,调至pH至5.2 |
其制备过程如下:向2500ml烧杯中加入75g甘露醇,50g山梨醇,1750ml水,加入米卡芬净,至其最终的定容浓度为50mg/ml,加入磷酸二氢钠至其浓度为20mM,并且用1N盐酸将pH调节至5.2。加注射用水定容。在过滤前,注射液中加入12.5g活性碳,在搅拌下吸附热原30分钟,脱碳过滤。滤液经0.22μm钛棒过滤器过滤,再经0.22μm微孔滤膜除菌过滤。每瓶以1.25ml的量填充入10ml玻璃小瓶,冷冻干燥,压塞,扎盖,获得注射用米卡芬净制剂。
由实施例1制得注射用米卡芬净制剂1000支,通加速试验对其稳定性进行了考察。通过动物血管刺激性、肌肉刺激性、溶血及过敏性实验,对局部刺激性进行了考察。通过与常用输液配伍,观察其外观、有关物质及含量变化考察了其在常用输液中的稳定性。
加速试验:
上市对照品与实施例1样品对比:
分别将市售的注射用米卡芬净制剂对照品和实施例1的一批样品放入温度为40±2℃、相对湿度为75%±5%的恒温恒湿箱中进行考察,分别在0、1、2、3和6个月时取样测定,结果见表1-2和表1-3。
表1-2市售对照品加速试验结果
表1-3实施例1样品加速试验结果
通过表1-2和表1-3可以看出,经加速试验考察6个月,实施例1制备的注射用米卡芬净制剂与已上市的注射用米卡芬净制剂比较,外观色泽、pH、溶液澄清度指标相当,但实施例1制备的样品比已上市的供试品的杂质增加、含量下降明显,表明实施例1制备的样品不如已上市的供试品稳定。
血管刺激性、肌肉刺激性、过敏性及溶血实验:
血管刺激性:
选取双耳无损伤的健康家兔6只,左侧耳缘静脉注射实施例1注射液1ml,右耳注射等容量5%葡萄糖注射液,每天1次,连续注射7天。
注射期间,每天定时观察耳缘静脉的刺激性反应。第8天处死家兔,取双侧耳缘静脉及周围组织,用甲醛固定,在注射部位近心端作常规组织切片,光镜下观察有无病理变化。观察指标及判断标准见表1-4。
表1-4血管刺激性评分及判断标准
结果显示,家兔耳缘静脉注射实施例1注射液的刺激性,与5%葡萄糖注射液比较无明显差异。肉眼观察,未见血管充血、周围组织水肿等炎症反应。组织切片检查,未见血管结构异常、内皮损伤、血栓形成及其它病理变化。其肉眼和光镜观察的血管、周围组织的累计得分均小于0.5,表明无刺激性。
肌肉刺激性:
取健康家兔6只,每只家兔左侧股四头肌内注射实施例1注射液1ml,右侧注射同体积生理盐水。注射后观察注射部位肌肉有无充血、水肿等反应,半数动物48h后(第3天)放血处死,纵向切开皮肤,肉眼观察两侧注射部位有无充血、水肿等反应,并取其组织做病理检查。然后按表1-5中的标准评价该药的刺激反应。余下动物继续观察14d,于第18天放血处死后重复上述操作,评价标准见表1-5。
表1-5肌肉刺激反应评价标准
结果表明,家兔左侧股四头肌内注射实施例1注射液后,肉眼观察注射部位肌肉无充血、水肿等反应,病理组织检查亦未见组织变性或坏死等明显性刺激反应,与生理盐水侧相比无显著差异。
对豚鼠的致敏作用:
选取健康豚鼠6只,每只腹腔注射实施例1注射液0.5ml,隔日注射1次,共注射3次。然后随机分为2组,分别在第1次给药后14或21天,静脉注射实施例1注射液1ml。观察豚鼠有无兴奋不安、呼吸困难等过敏症状。
结果两组豚鼠均活动正常,未见呼吸异常等。
体外溶血性试验:
制备2%家兔红细胞悬液。取试管7支,按表1-6加入各种液体。将各试管轻轻摇匀,置37℃恒温水浴中孵育,观察0.5、1、2、3、6小时的结果。红细胞体外凝集与溶血的判断标准见表1-7。
表1-6样品体外溶血试验加样表
表1-7红细胞体外溶血与凝集试验判断标准
结果,蒸馏水对照管在0.5小时完全溶血。生理盐水和实施例1样品各浓度在6小时内均无溶血现象。轻轻振摇,生理盐水和各浓度实施例1样品管底沉积的红细胞均能完全分散,表明米卡芬净注射液无红细胞凝集反应。
血管刺激性、肌肉刺激性、体外溶血性及过敏性实验表明,实施例1注射液无明显的刺激性、过敏性,也不会引起溶血反应。
输液中稳定性实验:
以10.5ml纯化水稀释实施例1制备的注射用米卡芬净,分别吸取10ml,分别用常用输液:0.9%氯化钠注射液(0.9%NS)、5%葡萄糖注射液(5%GS)、稀释至200ml,使米卡芬净浓度为0.25mg/ml。分别于25℃,测定时间观察其外观、杂质、含量变化,结果见表1-8。
表1-8注射液稳定性实验
结果表明,实施例1制备的米卡芬净制剂与常用输液,0.9%氯化钠注射液(0.9%NS)、5%葡萄糖注射液(5%GS)配伍使用,稳定性都不太好,因此,该实施例制得样品不可以与这些输液配伍使用。
实施例2
表2-1实施例2组合物配方
组分 |
用量 |
米卡芬净 |
50mg/ml |
甘露醇 |
50mg/ml |
醋酸钠 |
50mM |
盐酸 |
适量,调至pH至6.0 |
其制备过程如下:向2500ml烧杯中加入125g甘露醇,1750ml水,加入米卡芬净,至其最终的定容浓度为50mg/ml,加入醋酸钠至其浓度为50mM,并且用1N盐酸将pH调节至6.0,加注射用水定容。在过滤前,注射液中加入12.5g活性碳,在搅拌下吸附热原30分钟,脱碳过滤。滤液经0.22μm钛棒过滤器过滤,再经0.22μm微孔滤膜除菌过滤。每瓶以1.25ml的量填充入10ml玻璃小瓶,冷冻干燥,压塞,扎盖,获得注射用米卡芬净制剂。
由实施例2制得注射用米卡芬净制剂1000支,通过加速试验对其稳定性进行了考察。通过动物血管刺激性、肌肉刺激性、溶血及过敏性实验,对局部刺激性进行了考察。通过与常用输液配伍,观察其外观、有关物质及含量变化考察了其在常用输液中的稳定性。
加速试验:
上市对照品与实施例2样品对比
分别将市售的注射用米卡芬净制剂对照品和实施例2的一批样品放入温度为40±2℃、相对湿度为75%±5%的恒温恒湿箱中进行考察,分别在0、1、2、3和6个月时取样测定,结果见表2-2和表2-3。
表2-2市售对照品加速试验结果
表2-3实施例2样品加速试验结果
通过表2-2和表2-3可以看出,经加速试验考察6个月,实施例2制备的注射用米卡芬净制剂与已上市的注射用米卡芬净制剂比较,外观色泽、pH、溶液澄清度指标相当,而已上市的供试品的杂质增加、含量下降明显,表明本发明制备的米卡芬净注射剂可于室温下保存,稳定性增加。
血管刺激性、肌肉刺激性、过敏性及溶血实验:
血管刺激性:
选取双耳无损伤的健康家兔6只,左侧耳缘静脉注射实施例2注射液1ml,右耳注射等容量5%葡萄糖注射液,每天1次,连续注射7天。
注射期间,每天定时观察耳缘静脉的刺激性反应。第8天处死家兔,取双侧耳缘静脉及周围组织,用甲醛固定,在注射部位近心端作常规组织切片,光镜下观察有无病理变化。观察指标及判断标准见表2-4。
表2-4血管刺激性评分及判断标准
结果显示,家兔耳缘静脉注射实施例2注射液的刺激性,与5%葡萄糖注射液比较无明显差异。肉眼观察,未见血管充血、周围组织水肿等炎症反应。组织切片检查,未见血管结构异常、内皮损伤、血栓形成及其它病理变化。其肉眼和光镜观察的血管、周围组织的累计得分均小于0.5,表明无刺激性。
肌肉刺激性:
取健康家兔6只,每只家兔左侧股四头肌内注射实施例2注射液1ml,右侧注射同体积生理盐水。注射后观察注射部位肌肉有无充血、水肿等反应,半数动物48h后(第3天)放血处死,纵向切开皮肤,肉眼观察两侧注射部位有无充血、水肿等反应,并取其组织做病理检查。然后按表2-5中的标准评价该药的刺激反应。余下动物继续观察14d,于第18天放血处死后重复上述操作,评价标准见表2-5。
表2-5肌肉刺激反应评价标准
结果表明,家兔左侧股四头肌内注射实施例2注射液后,肉眼观察注射部位肌肉无充血、水肿等反应,病理组织检查亦未见组织变性或坏死等明显性刺激反应,与生理盐水侧相比无显著差异。
对豚鼠的致敏作用:
选取健康豚鼠6只,每只腹腔注射实施例2注射液0.5ml,隔日注射1次,共注射3次。然后随机分为2组,分别在第1次给药后14或21天,静脉注射实施例2注射液1ml。观察豚鼠有无兴奋不安、呼吸困难等过敏症状。
结果两组豚鼠均活动正常,未见呼吸异常等。
体外溶血性试验:
制备2%家兔红细胞悬液。取试管7支,按表2-6加入各种液体。将各试管轻轻摇匀,置37℃恒温水浴中孵育,观察0.5、1、2、3、6小时的结果。红细胞体外凝集与溶血的判断标准见表2-7。
表2-6样品体外溶血试验加样表
表2-7红细胞体外溶血与凝集试验判断标准
结果,蒸馏水对照管在0.5小时完全溶血。生理盐水和实施例2样品各浓度在6小时内均无溶血现象。轻轻振摇,生理盐水和各浓度实施例2样品管底沉积的红细胞均能完全分散,表明米卡芬净注射液无红细胞凝集反应。
血管刺激性、肌肉刺激性、体外溶血性及过敏性实验表明,实施例2注射液无明显的刺激性、过敏性,也不会引起溶血反应。
输液中稳定性实验:
以10.5ml纯化水稀释实施例2制备的注射用米卡芬净,分别吸取10ml,分别用常用输液:0.9%氯化钠注射液(0.9%NS)、5%葡萄糖注射液(5%GS)、稀释至200ml,使米卡芬净浓度为0.25mg/ml。分别于25℃,测定时间观察其外观、杂质、含量变化,结果见表2-8。
表2-8注射液稳定性实验
结果表明,实施例2制备的米卡芬净制剂与常用输液,0.9%氯化钠注射液(0.9%NS)、5%葡萄糖注射液(5%GS)配伍使用,稳定性都较好,因此,该实施例制得样品可以与这些输液配伍使用。
实施例3
表3-1实施例3组合物配方
组分 |
用量 |
米卡芬净 |
50mg/ml |
甘露醇 |
30mg/ml |
乳糖 |
30mg/ml |
醋酸钠 |
50mM |
盐酸 |
适量,调至pH至6.0 |
其制备过程如下:向2500ml烧杯中加入75g甘露醇,75g乳糖,1750ml水,加入米卡芬净,至其最终的定容浓度为50mg/ml,加入醋酸钠至其浓度为50mM,并且用1N盐酸将pH调节至6.0,加注射用水定容。在过滤前,注射液中加入12.5g活性碳,在搅拌下吸附热原30分钟,脱碳过滤。滤液经0.22μm钛棒过滤器过滤,再经0.22μm微孔滤膜除菌过滤。每瓶以1.25ml的量填充入10ml玻璃小瓶,冷冻干燥,压塞,扎盖,获得注射用米卡芬净制剂。
由实施例3制得注射用米卡芬净制剂1000支,通过加速试验对其稳定性进行了考察。通过动物血管刺激性、肌肉刺激性、溶血及过敏性实验,对局部刺激性进行了考察。通过与常用输液配伍,观察其外观、有关物质及含量变化考察了其在常用输液中的稳定性。
加速试验:
上市对照品与实施例3样品对比
分别将市售的注射用米卡芬净制剂对照品和实施例3的一批样品放入温度为40±2℃、相对湿度为75%±5%的恒温恒湿箱中进行考察,分别在0、1、2、3和6个月时取样测定,结果见表3-2和表3-3。
表3-2市售对照品加速试验结果
表3-3实施例3样品加速试验结果
通过表3-2和表3-3可以看出,经加速试验考察6个月,实施例3制备的注射用米卡芬净制剂与已上市的注射用米卡芬净制剂比较,外观色泽、pH、溶液澄清度指标相当,而已上市的供试品的杂质增加、含量下降明显,实施例3制备的样品无明显变化,因此实施例3制备的米卡芬净注射剂可于室温下保存,稳定性增加。血管刺激性、肌肉刺激性、过敏性及溶血实验:
血管刺激性:
选取双耳无损伤的健康家兔6只,左侧耳缘静脉注射实施例3注射液1ml,右耳注射等容量5%葡萄糖注射液,每天1次,连续注射7天。
注射期间,每天定时观察耳缘静脉的刺激性反应。第8天处死家兔,取双侧耳缘静脉及周围组织,用甲醛固定,在注射部位近心端作常规组织切片,光镜下观察有无病理变化。观察指标及判断标准见表3-4。
表3-4血管刺激性评分及判断标准
结果显示,家兔耳缘静脉注射实施例3注射液的刺激性,与5%葡萄糖注射液比较无明显差异。肉眼观察,未见血管充血、周围组织水肿等炎症反应。组织切片检查,未见血管结构异常、内皮损伤、血栓形成及其它病理变化。其肉眼和光镜观察的血管、周围组织的累计得分均小于0.5,表明无刺激性。
肌肉刺激性:
取健康家兔6只,每只家兔左侧股四头肌内注射实施例3注射液1ml,右侧注射同体积生理盐水。注射后观察注射部位肌肉有无充血、水肿等反应,半数动物48h后(第3天)放血处死,纵向切开皮肤,肉眼观察两侧注射部位有无充血、水肿等反应,并取其组织做病理检查。然后按表3-5中的标准评价该药的刺激反应。余下动物继续观察14d,于第18天放血处死后重复上述操作,评价标准见表3-5。
表3-5肌肉刺激反应评价标准
结果表明,家兔左侧股四头肌内注射实施例3注射液后,肉眼观察注射部位肌肉无充血、水肿等反应,病理组织检查亦未见组织变性或坏死等明显性刺激反应,与生理盐水侧相比无显著差异。
对豚鼠的致敏作用:
选取健康豚鼠6只,每只腹腔注射实施例3注射液0.5ml,隔日注射1次,共注射3次。然后随机分为2组,分别在第1次给药后14或21天,静脉注射实施例2注射液1ml。观察豚鼠有无兴奋不安、呼吸困难等过敏症状。
结果两组豚鼠均活动正常,未见呼吸异常等。
体外溶血性试验:
制备2%家兔红细胞悬液。取试管7支,按表3-6加入各种液体。将各试管轻轻摇匀,置37℃恒温水浴中孵育,观察0.5、1、2、3、6小时的结果。红细胞体外凝集与溶血的判断标准见表3-7。
表3-6样品体外溶血试验加样表
表3-7红细胞体外溶血与凝集试验判断标准
结果,蒸馏水对照管在0.5小时完全溶血。生理盐水和实施例3样品各浓度在6小时内均无溶血现象。轻轻振摇,生理盐水和各浓度实施例3样品管底沉积的红细胞均能完全分散,表明米卡芬净注射液无红细胞凝集反应。
血管刺激性、肌肉刺激性、体外溶血性及过敏性实验表明,实施例3注射液无明显的刺激性、过敏性,也不会引起溶血反应。
输液中稳定性实验:
以10.5ml纯化水稀释实施例3制备的注射用米卡芬净,分别吸取10ml,分别用常用输液:0.9%氯化钠注射液(0.9%NS)、5%葡萄糖注射液(5%GS)、稀释至200ml,使米卡芬净浓度为0.25mg/ml。分别于25℃,测定时间观察其外观、杂质、含量变化,结果见表3-8。
表3-8注射液稳定性实验
结果表明,实施例3制备的米卡芬净制剂与常用输液,0.9%氯化钠注射液(0.9%NS)、5%葡萄糖注射液(5%GS)配伍使用,稳定性都较好,因此,该实施例制得样品可以与这些输液配伍使用。