CN102512379A - 一种新型棘白菌素类抗真菌药物组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于药用制剂技术领域，提供一种米卡芬净为有效成分的注射制剂组合物。这种注射制剂组合物，包括米卡芬净或其药学上可用的盐5-200mg/ml、赋形剂5-250mg/ml、缓冲液10-250mM及适量氢氧化钠或盐酸调节pH值为4.0-7.0。

Description

一种新型棘白菌素类抗真菌药物组合物及其制备方法

技术领域：

本发明涉及抗真菌制剂，尤其涉及一种新型棘白菌素类抗真菌药物组合物。

背景技术：

1974年，人们发现了棘球白菌素类化合物具有良好的抗菌活性，因此，人们研究了许多半合成的棘球白菌素类化合物的药理活性。其中，米卡芬净(Micafungin)是其中一种，已经用作制备治疗或预防抗真菌制剂。美国专利US5376634，US5569646、WO9611210和WO9940108公开了该化合物及其制备方法。

发明内容：

本发明提供了一种稳定的药物组合物，其包含：

(1)米卡芬净或其药学上可用的盐；

(2)缓冲液及适量氢氧化钠或盐酸调节pH调节剂；

(3)有效形成冻干饼状物的药学上可接受的赋形剂。

其中，所述的米卡芬净药学上可接受的盐优选米卡芬净钠，所述赋形剂为山梨醇、甘露醇、乳糖、蔗糖、葡萄糖、麦芽糖或者其混合物，优选甘露醇与乳糖的混合物。所述缓冲剂为醋酸钠、硫酸氢钠、枸橼酸钠、磷酸钠、乳酸钠或其混合物，优选醋酸钠。

另外，本发明提供了一种可通过冻干如上所述的本发明药物组合物获得的冻干粉。该冻干粉适合于再溶解成静脉注射的液体组合物。

本发明还提供了制备含米卡芬净的药学上可接受的盐的药物组合物的方法，该方法包括以下步骤：

(1)将赋形剂或赋形剂的组合物溶于水中；

(2)向步骤(1)中获得的水溶液中加入米卡芬净或其药学上可接受的盐，并将其溶解；

(3)向步骤(2)中获得的水溶液中加入PH调节剂，达到所需PH值；

(4)过滤并冷冻干燥步骤(3)制备的溶液。

按照上述方法制备的药物组合物比现有制剂稳定，并且制备方法更简便。

具体实施方式：

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。

实施例1

表1-1实施例1组合物配方

组分	用量
		米卡芬净	50mg/ml
甘露醇	30mg/ml
		山梨醇	20mg/ml
磷酸二氢钠	20mM
		盐酸	适量，调至pH至5.2

其制备过程如下：向2500ml烧杯中加入75g甘露醇，50g山梨醇，1750ml水，加入米卡芬净，至其最终的定容浓度为50mg/ml，加入磷酸二氢钠至其浓度为20mM，并且用1N盐酸将pH调节至5.2。加注射用水定容。在过滤前，注射液中加入12.5g活性碳，在搅拌下吸附热原30分钟，脱碳过滤。滤液经0.22μm钛棒过滤器过滤，再经0.22μm微孔滤膜除菌过滤。每瓶以1.25ml的量填充入10ml玻璃小瓶，冷冻干燥，压塞，扎盖，获得注射用米卡芬净制剂。

由实施例1制得注射用米卡芬净制剂1000支，通加速试验对其稳定性进行了考察。通过动物血管刺激性、肌肉刺激性、溶血及过敏性实验，对局部刺激性进行了考察。通过与常用输液配伍，观察其外观、有关物质及含量变化考察了其在常用输液中的稳定性。

加速试验：

上市对照品与实施例1样品对比：

分别将市售的注射用米卡芬净制剂对照品和实施例1的一批样品放入温度为40±2℃、相对湿度为75％±5％的恒温恒湿箱中进行考察，分别在0、1、2、3和6个月时取样测定，结果见表1-2和表1-3。

表1-2市售对照品加速试验结果

表1-3实施例1样品加速试验结果

通过表1-2和表1-3可以看出，经加速试验考察6个月，实施例1制备的注射用米卡芬净制剂与已上市的注射用米卡芬净制剂比较，外观色泽、pH、溶液澄清度指标相当，但实施例1制备的样品比已上市的供试品的杂质增加、含量下降明显，表明实施例1制备的样品不如已上市的供试品稳定。

血管刺激性、肌肉刺激性、过敏性及溶血实验：

血管刺激性：

选取双耳无损伤的健康家兔6只，左侧耳缘静脉注射实施例1注射液1ml，右耳注射等容量5％葡萄糖注射液，每天1次，连续注射7天。

注射期间，每天定时观察耳缘静脉的刺激性反应。第8天处死家兔，取双侧耳缘静脉及周围组织，用甲醛固定，在注射部位近心端作常规组织切片，光镜下观察有无病理变化。观察指标及判断标准见表1-4。

表1-4血管刺激性评分及判断标准

结果显示，家兔耳缘静脉注射实施例1注射液的刺激性，与5％葡萄糖注射液比较无明显差异。肉眼观察，未见血管充血、周围组织水肿等炎症反应。组织切片检查，未见血管结构异常、内皮损伤、血栓形成及其它病理变化。其肉眼和光镜观察的血管、周围组织的累计得分均小于0.5，表明无刺激性。

肌肉刺激性：

取健康家兔6只，每只家兔左侧股四头肌内注射实施例1注射液1ml，右侧注射同体积生理盐水。注射后观察注射部位肌肉有无充血、水肿等反应，半数动物48h后(第3天)放血处死，纵向切开皮肤，肉眼观察两侧注射部位有无充血、水肿等反应，并取其组织做病理检查。然后按表1-5中的标准评价该药的刺激反应。余下动物继续观察14d，于第18天放血处死后重复上述操作，评价标准见表1-5。

表1-5肌肉刺激反应评价标准

结果表明，家兔左侧股四头肌内注射实施例1注射液后，肉眼观察注射部位肌肉无充血、水肿等反应，病理组织检查亦未见组织变性或坏死等明显性刺激反应，与生理盐水侧相比无显著差异。

对豚鼠的致敏作用：

选取健康豚鼠6只，每只腹腔注射实施例1注射液0.5ml，隔日注射1次，共注射3次。然后随机分为2组，分别在第1次给药后14或21天，静脉注射实施例1注射液1ml。观察豚鼠有无兴奋不安、呼吸困难等过敏症状。

结果两组豚鼠均活动正常，未见呼吸异常等。

体外溶血性试验：

制备2％家兔红细胞悬液。取试管7支，按表1-6加入各种液体。将各试管轻轻摇匀，置37℃恒温水浴中孵育，观察0.5、1、2、3、6小时的结果。红细胞体外凝集与溶血的判断标准见表1-7。

表1-6样品体外溶血试验加样表

表1-7红细胞体外溶血与凝集试验判断标准

结果，蒸馏水对照管在0.5小时完全溶血。生理盐水和实施例1样品各浓度在6小时内均无溶血现象。轻轻振摇，生理盐水和各浓度实施例1样品管底沉积的红细胞均能完全分散，表明米卡芬净注射液无红细胞凝集反应。

血管刺激性、肌肉刺激性、体外溶血性及过敏性实验表明，实施例1注射液无明显的刺激性、过敏性，也不会引起溶血反应。

输液中稳定性实验：

以10.5ml纯化水稀释实施例1制备的注射用米卡芬净，分别吸取10ml，分别用常用输液：0.9％氯化钠注射液(0.9％NS)、5％葡萄糖注射液(5％GS)、稀释至200ml，使米卡芬净浓度为0.25mg/ml。分别于25℃，测定时间观察其外观、杂质、含量变化，结果见表1-8。

表1-8注射液稳定性实验

结果表明，实施例1制备的米卡芬净制剂与常用输液，0.9％氯化钠注射液(0.9％NS)、5％葡萄糖注射液(5％GS)配伍使用，稳定性都不太好，因此，该实施例制得样品不可以与这些输液配伍使用。

实施例2

表2-1实施例2组合物配方

组分	用量
		米卡芬净	50mg/ml
甘露醇	50mg/ml
		醋酸钠	50mM
盐酸	适量，调至pH至6.0

其制备过程如下：向2500ml烧杯中加入125g甘露醇，1750ml水，加入米卡芬净，至其最终的定容浓度为50mg/ml，加入醋酸钠至其浓度为50mM，并且用1N盐酸将pH调节至6.0，加注射用水定容。在过滤前，注射液中加入12.5g活性碳，在搅拌下吸附热原30分钟，脱碳过滤。滤液经0.22μm钛棒过滤器过滤，再经0.22μm微孔滤膜除菌过滤。每瓶以1.25ml的量填充入10ml玻璃小瓶，冷冻干燥，压塞，扎盖，获得注射用米卡芬净制剂。

由实施例2制得注射用米卡芬净制剂1000支，通过加速试验对其稳定性进行了考察。通过动物血管刺激性、肌肉刺激性、溶血及过敏性实验，对局部刺激性进行了考察。通过与常用输液配伍，观察其外观、有关物质及含量变化考察了其在常用输液中的稳定性。

加速试验：

上市对照品与实施例2样品对比

分别将市售的注射用米卡芬净制剂对照品和实施例2的一批样品放入温度为40±2℃、相对湿度为75％±5％的恒温恒湿箱中进行考察，分别在0、1、2、3和6个月时取样测定，结果见表2-2和表2-3。

表2-2市售对照品加速试验结果

表2-3实施例2样品加速试验结果

通过表2-2和表2-3可以看出，经加速试验考察6个月，实施例2制备的注射用米卡芬净制剂与已上市的注射用米卡芬净制剂比较，外观色泽、pH、溶液澄清度指标相当，而已上市的供试品的杂质增加、含量下降明显，表明本发明制备的米卡芬净注射剂可于室温下保存，稳定性增加。

血管刺激性、肌肉刺激性、过敏性及溶血实验：

血管刺激性：

选取双耳无损伤的健康家兔6只，左侧耳缘静脉注射实施例2注射液1ml，右耳注射等容量5％葡萄糖注射液，每天1次，连续注射7天。

注射期间，每天定时观察耳缘静脉的刺激性反应。第8天处死家兔，取双侧耳缘静脉及周围组织，用甲醛固定，在注射部位近心端作常规组织切片，光镜下观察有无病理变化。观察指标及判断标准见表2-4。

表2-4血管刺激性评分及判断标准

结果显示，家兔耳缘静脉注射实施例2注射液的刺激性，与5％葡萄糖注射液比较无明显差异。肉眼观察，未见血管充血、周围组织水肿等炎症反应。组织切片检查，未见血管结构异常、内皮损伤、血栓形成及其它病理变化。其肉眼和光镜观察的血管、周围组织的累计得分均小于0.5，表明无刺激性。

肌肉刺激性：

取健康家兔6只，每只家兔左侧股四头肌内注射实施例2注射液1ml，右侧注射同体积生理盐水。注射后观察注射部位肌肉有无充血、水肿等反应，半数动物48h后(第3天)放血处死，纵向切开皮肤，肉眼观察两侧注射部位有无充血、水肿等反应，并取其组织做病理检查。然后按表2-5中的标准评价该药的刺激反应。余下动物继续观察14d，于第18天放血处死后重复上述操作，评价标准见表2-5。

表2-5肌肉刺激反应评价标准

结果表明，家兔左侧股四头肌内注射实施例2注射液后，肉眼观察注射部位肌肉无充血、水肿等反应，病理组织检查亦未见组织变性或坏死等明显性刺激反应，与生理盐水侧相比无显著差异。

对豚鼠的致敏作用：

选取健康豚鼠6只，每只腹腔注射实施例2注射液0.5ml，隔日注射1次，共注射3次。然后随机分为2组，分别在第1次给药后14或21天，静脉注射实施例2注射液1ml。观察豚鼠有无兴奋不安、呼吸困难等过敏症状。

结果两组豚鼠均活动正常，未见呼吸异常等。

体外溶血性试验：

制备2％家兔红细胞悬液。取试管7支，按表2-6加入各种液体。将各试管轻轻摇匀，置37℃恒温水浴中孵育，观察0.5、1、2、3、6小时的结果。红细胞体外凝集与溶血的判断标准见表2-7。

表2-6样品体外溶血试验加样表

表2-7红细胞体外溶血与凝集试验判断标准

结果，蒸馏水对照管在0.5小时完全溶血。生理盐水和实施例2样品各浓度在6小时内均无溶血现象。轻轻振摇，生理盐水和各浓度实施例2样品管底沉积的红细胞均能完全分散，表明米卡芬净注射液无红细胞凝集反应。

血管刺激性、肌肉刺激性、体外溶血性及过敏性实验表明，实施例2注射液无明显的刺激性、过敏性，也不会引起溶血反应。

输液中稳定性实验：

以10.5ml纯化水稀释实施例2制备的注射用米卡芬净，分别吸取10ml，分别用常用输液：0.9％氯化钠注射液(0.9％NS)、5％葡萄糖注射液(5％GS)、稀释至200ml，使米卡芬净浓度为0.25mg/ml。分别于25℃，测定时间观察其外观、杂质、含量变化，结果见表2-8。

表2-8注射液稳定性实验

结果表明，实施例2制备的米卡芬净制剂与常用输液，0.9％氯化钠注射液(0.9％NS)、5％葡萄糖注射液(5％GS)配伍使用，稳定性都较好，因此，该实施例制得样品可以与这些输液配伍使用。

实施例3

表3-1实施例3组合物配方

组分	用量
		米卡芬净	50mg/ml
甘露醇	30mg/ml
		乳糖	30mg/ml
醋酸钠	50mM
		盐酸	适量，调至pH至6.0

其制备过程如下：向2500ml烧杯中加入75g甘露醇，75g乳糖，1750ml水，加入米卡芬净，至其最终的定容浓度为50mg/ml，加入醋酸钠至其浓度为50mM，并且用1N盐酸将pH调节至6.0，加注射用水定容。在过滤前，注射液中加入12.5g活性碳，在搅拌下吸附热原30分钟，脱碳过滤。滤液经0.22μm钛棒过滤器过滤，再经0.22μm微孔滤膜除菌过滤。每瓶以1.25ml的量填充入10ml玻璃小瓶，冷冻干燥，压塞，扎盖，获得注射用米卡芬净制剂。

由实施例3制得注射用米卡芬净制剂1000支，通过加速试验对其稳定性进行了考察。通过动物血管刺激性、肌肉刺激性、溶血及过敏性实验，对局部刺激性进行了考察。通过与常用输液配伍，观察其外观、有关物质及含量变化考察了其在常用输液中的稳定性。

加速试验：

上市对照品与实施例3样品对比

分别将市售的注射用米卡芬净制剂对照品和实施例3的一批样品放入温度为40±2℃、相对湿度为75％±5％的恒温恒湿箱中进行考察，分别在0、1、2、3和6个月时取样测定，结果见表3-2和表3-3。

表3-2市售对照品加速试验结果

表3-3实施例3样品加速试验结果

通过表3-2和表3-3可以看出，经加速试验考察6个月，实施例3制备的注射用米卡芬净制剂与已上市的注射用米卡芬净制剂比较，外观色泽、pH、溶液澄清度指标相当，而已上市的供试品的杂质增加、含量下降明显，实施例3制备的样品无明显变化，因此实施例3制备的米卡芬净注射剂可于室温下保存，稳定性增加。血管刺激性、肌肉刺激性、过敏性及溶血实验：

血管刺激性：

选取双耳无损伤的健康家兔6只，左侧耳缘静脉注射实施例3注射液1ml，右耳注射等容量5％葡萄糖注射液，每天1次，连续注射7天。

注射期间，每天定时观察耳缘静脉的刺激性反应。第8天处死家兔，取双侧耳缘静脉及周围组织，用甲醛固定，在注射部位近心端作常规组织切片，光镜下观察有无病理变化。观察指标及判断标准见表3-4。

表3-4血管刺激性评分及判断标准

结果显示，家兔耳缘静脉注射实施例3注射液的刺激性，与5％葡萄糖注射液比较无明显差异。肉眼观察，未见血管充血、周围组织水肿等炎症反应。组织切片检查，未见血管结构异常、内皮损伤、血栓形成及其它病理变化。其肉眼和光镜观察的血管、周围组织的累计得分均小于0.5，表明无刺激性。

肌肉刺激性：

取健康家兔6只，每只家兔左侧股四头肌内注射实施例3注射液1ml，右侧注射同体积生理盐水。注射后观察注射部位肌肉有无充血、水肿等反应，半数动物48h后(第3天)放血处死，纵向切开皮肤，肉眼观察两侧注射部位有无充血、水肿等反应，并取其组织做病理检查。然后按表3-5中的标准评价该药的刺激反应。余下动物继续观察14d，于第18天放血处死后重复上述操作，评价标准见表3-5。

表3-5肌肉刺激反应评价标准

结果表明，家兔左侧股四头肌内注射实施例3注射液后，肉眼观察注射部位肌肉无充血、水肿等反应，病理组织检查亦未见组织变性或坏死等明显性刺激反应，与生理盐水侧相比无显著差异。

对豚鼠的致敏作用：

选取健康豚鼠6只，每只腹腔注射实施例3注射液0.5ml，隔日注射1次，共注射3次。然后随机分为2组，分别在第1次给药后14或21天，静脉注射实施例2注射液1ml。观察豚鼠有无兴奋不安、呼吸困难等过敏症状。

结果两组豚鼠均活动正常，未见呼吸异常等。

体外溶血性试验：

制备2％家兔红细胞悬液。取试管7支，按表3-6加入各种液体。将各试管轻轻摇匀，置37℃恒温水浴中孵育，观察0.5、1、2、3、6小时的结果。红细胞体外凝集与溶血的判断标准见表3-7。

表3-6样品体外溶血试验加样表

表3-7红细胞体外溶血与凝集试验判断标准

结果，蒸馏水对照管在0.5小时完全溶血。生理盐水和实施例3样品各浓度在6小时内均无溶血现象。轻轻振摇，生理盐水和各浓度实施例3样品管底沉积的红细胞均能完全分散，表明米卡芬净注射液无红细胞凝集反应。

血管刺激性、肌肉刺激性、体外溶血性及过敏性实验表明，实施例3注射液无明显的刺激性、过敏性，也不会引起溶血反应。

输液中稳定性实验：

以10.5ml纯化水稀释实施例3制备的注射用米卡芬净，分别吸取10ml，分别用常用输液：0.9％氯化钠注射液(0.9％NS)、5％葡萄糖注射液(5％GS)、稀释至200ml，使米卡芬净浓度为0.25mg/ml。分别于25℃，测定时间观察其外观、杂质、含量变化，结果见表3-8。

表3-8注射液稳定性实验

结果表明，实施例3制备的米卡芬净制剂与常用输液，0.9％氯化钠注射液(0.9％NS)、5％葡萄糖注射液(5％GS)配伍使用，稳定性都较好，因此，该实施例制得样品可以与这些输液配伍使用。

Claims (10)

1.一种米卡芬净注射制剂组合物，其特征在于：包括米卡芬净或其药学上可用的盐5-200mg/ml、赋形剂5-250mg/ml、缓冲液10-250mM及适量氢氧化钠或盐酸调节pH值为4.0-7.0，其中缓冲剂为醋酸盐、硫酸盐、枸橼酸盐、磷酸盐、乳酸盐或其混合物。

2.根据权利要求1所述的米卡芬净注射制剂组合物，其中所述的米卡芬净药学上可接受的盐为与碱金属加成盐，所述的碱金属选自钠、钾、钙、镁等。

3.根据权利要求1或2的药物组合物，其中所述的米卡芬净药学上可接受的盐为米卡芬净钠。

4.根据权利要求1-3所述的药物组合物，其中所述的米卡芬净或其药学上可接受的盐含量优选为40-100mg/ml。

5.根据权利要求1所述的米卡芬净注射制剂组合物，其特征在于：所述赋形剂为山梨醇、甘露醇、乳糖、蔗糖、葡萄糖、麦芽糖或者其混合物。

6.根据权利要求5所述的米卡芬净注射制剂组合物，其特征在于：所述赋形剂优选甘露醇与乳糖的混合物，含量优选50-70mg/ml。

7.根据权利要求1所述的米卡芬净注射制剂组合物，其特征在于：所述缓冲剂为醋酸钠、硫酸氢钠、枸橼酸钠、磷酸钠、乳酸钠或其混合物。

8.根据权利要求1所述的米卡芬净注射制剂组合物，其特征在于：所述缓冲剂优选醋酸钠，含量优选10-50mM。

9.根据权利要求1所述的米卡芬净注射制剂组合物，其特征在于：pH值优选5.0-7.0。

10.制备权利要求1所述的米卡芬净注射制剂组合物的方法，该方法包括下列步骤：

(1)将赋形剂或赋形剂的组合物溶于水中；

(2)向步骤(1)中获得的水溶液中加入米卡芬净或其药学上可接受的盐，并将其溶解；

(3)向步骤(2)中获得的水溶液中加入PH调节剂，达到所需PH值；

(4)过滤并冷冻干燥步骤(3)制备的溶液。