CN102495162A - 一种配方烟丝中丁子香酚含量的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种配方烟丝中丁子香酚含量的测定方法，包括萃取试剂和样品溶液的制备，液相色谱分析及测定结果的计算等步骤。经优化之后的检测方法具有检测时间短、操作简便、灵敏度高、回收率高及重复性好等优点，本发明方法的色谱条件使丁子香酚的色谱峰与杂质色谱峰分离较好，并且具有较好的线性范围，检测限为0.3μg/g，平均加标回收率为101.14％，平均相对标准偏差小于2.4%。
Description
技术领域
本发明涉及一种配方烟丝中丁子香酚含量的改进测定方法，属于烟用原料的理化检验技术领域。
背景技术
丁子香酚，4-烯丙基-2-甲氧基苯酚，无色至淡黄色液体，在空气中变棕色，有强烈的丁香气味。极易溶于水，溶于乙醇、***、氯仿和精油。作为香味剂用于配制康乃馨型香精以及制异丁香酚和香兰素等。也用作杀虫剂和防腐剂，抗氧化剂，驱风剂以及在牙科中用于止痛剂。在国际癌症研究机构（IARC）公布的致癌名单中，丁子香酚被列为Group 3。丁香烟是印尼马来特有的一种香烟，其味道芳香可口清新祛暑。
2009年9月14日，美国食品和药品管理局（FDA）发布***，提醒业界注意根据《联邦食品、药品和化妆品法案》和《家庭吸烟预防与烟草控制法案》，自9月22日起禁止生产和销售含特定香味的香烟。美国总统奥巴马曾于6月22日签署了《家庭吸烟预防与烟草控制法案》，授权FDA管控烟草产品的生产和销售。根据该法案第907(a)(1)(A)章规定，香烟或其组成部分（包括烟草、过滤嘴或烟纸）不得含有或添加除烟草薄荷醇以外的任何人造、天然香料、药草及调味品，从而使香烟或烟雾含有草莓，葡萄，橘子，丁香等香味。该标准适用于所有烟草制品包括香烟、雪茄及其他一些烟草制品。目前国内还没有此方面的规定。
目前关于丁子香酚的测定的报道较少，其中Li Yong-Hong 等采用液相色谱法测定了肉汤中丁子香酚的测定；配方烟丝中丁子香酚的测定由于基质的复杂性，则更少有报道，其中加拿大方法T-314中采用外标－液相色谱法测定了烟草中的丁子香酚，由于丁子香酚的沸点较低，挥发性较大，外标法在样品处理过程中损失较大，因此有必要开发减少样品前处理过程损失的内标法测定方法；另外T-314中液相色谱检测时间为20min，色谱条件也有进一步优化的不要。
发明内容
本发明的目的旨在克服现有技术缺陷，提供一种烟丝中丁子香酚含量的测定方法，用于检测烟丝中丁子香酚的含量，通过对液相色谱条件的优化，使液相测定时间减少至10min，有效的提高了测定效率，使得丁子香酚的色谱峰与杂质色谱峰分离较好，具有灵敏度高等特点。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
配方烟丝中丁子香酚含量的测定方法，包括以下步骤：
（1）含内标萃取剂的配制，为含有茴香脑的无水乙醇溶液，茴香脑的浓度为0.1-0.2mg/mL；
（2）标准溶液的配制；称取丁子香酚标准品，用含内标萃取剂配制成具有浓度梯度的丁子香酚标准工作溶液；
（3）样品溶液的制备：使用含内标萃取剂萃取样品，然后离心过滤后制备样品溶液；
（4）液相色谱分析：利用液相色谱仪分别对标准溶液和样品溶液进行检测分析；
（5）烟丝中丁子香酚含量的计算。
所述含内标萃取剂的配制是称取0.4 g 茴香脑于4000 mL无水乙醇溶液中，其中茴香脑的浓度为1mg/mL。
所述标准溶液的配制是称取约0.2g丁子香酚，精确至0.0001g，用含内标的萃取剂溶解后转移至100mL容量瓶中，并定容，定为标准储备液。分别移取0.01mL，0.1mL，0.5mL，1.0mL，2.5mL，5.0mL的标准储备液到10mL容量瓶中，用萃取剂定容，则丁子香酚的浓度为2.0μg/mL，20μg/mL，100μg/mL，200μg/mL，500μg/mL，1000μg/mL。
所述样品溶液的制备方法具体包括称取0.2 g烟丝样品（精确至0.1 mg）于50 mL具塞三角瓶中，加入50mL含有内标的无水乙醇，用密封胶密封振荡萃取2h。如有必要则在10000rmp离心10分钟。静置后，移取2.0mL上层清液用0.45μm 有机滤膜过滤，得到样品溶液。
所述的色谱分析条件为色谱柱采用Nova-pak C18液相色谱柱，色谱柱温度为30 ℃，进样量为10 μL，流速为1.0 ml/min；检测波长：280nm，流动相：A为水，B为乙腈，采用等梯度洗脱程序，即水是30％，甲醇为70％，洗脱时间为10min。
所述的色谱柱的规格为3.9 × 150mm，5μm粒径。
丁子香酚含量的计算：首先以标准溶液所检测出的目标物与内标的色谱峰面积之比对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；然后将样品溶液检出的目标物与内标的色谱峰面积之比，代入标准曲线，即得到样品中的丁子香酚浓度，由此即可计算出烟丝中丁子香酚的含量。
本发明的检测方法对样品的处理方法和色谱条件进行了优化，达到了以下效果：
（1）检测时间短：采用本发明测定烟丝中丁子香酚含量周期仅需要10分钟左右；
（2）本发明具有操作简便、灵敏度高、回收率高及重复性好的优点：本发明方法的色谱条件使丁子香酚的色谱峰与杂质色谱峰分离较好，并且具有较好的线性相关性，检测限为0.3μg/g，平均加标回收率为101.14％，平均相对偏差小于2.4%。
附图说明
图1为本发明的测定方法的流程图；
图2为丁子香酚标准曲线线性方程及线性回归系数坐标图；
图3为标准溶液的色谱图；
图4为样品溶液的色谱图。
具体实施方式
本发明以下结合实施例（附图）做进一步描述：
实施例1
本实施例对烟丝中丁子香酚含量的检测方法如下（所述检测方法的流程图如图1所示）
（1）含内标萃取剂的配制：含有适当浓度内标物（茴香脑）的无水乙醇溶液，浓度一般为0.1mg/mL～0.2mg/mL；
（2）标准溶液的配制：称取约0.2g丁子香酚，精确至0.0001g，用含内标的萃取剂溶解后转移至100mL容量瓶中，并定容，定为标准储备液；
分别移取0.01mL，0.1mL，0.5mL，1.0mL，2.5mL，5.0mL的标准储备液到10mL容量瓶中，用萃取剂定容，则丁子香酚的浓度为2.0μg/mL，20μg/mL，100μg/mL，200μg/mL，500μg/mL，1000μg/mL；标液避光4℃保存，取用时放置于常温下，达到常温后方可使用。每周做一次标线；
（3）样品溶液的制备：称取0.2 g烟丝样品（精确至0.1 mg）于50 mL具塞三角瓶中，加入50mL无水乙醇，用密封胶密封振荡萃取2h。如有必要则在10000rmp离心10分钟。静置后，移取2.0mL上层清液用0.45μm 有机滤膜过滤，得到样品溶液，于4℃保存待分析；
（4）色谱分析：色谱分析条件为色谱柱采用Nova-pak C18液相色谱柱，色谱柱温度为30 ℃，进样量为10 μL，流速为1.0 ml/min；检测波长：280nm，流动相：A为水，B为甲醇，采用等梯度洗脱程序，即水是30％，甲醇为70％，洗脱时间为10min；标准溶液的色谱分析结果如图3所示；样品溶液的色谱分析结果如图4所示；
（5）配方烟丝中丁子香酚含量的计算
首先以标准溶液所检测出的目标物与内标的色谱峰面积之比对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线（如图2所示）；与标准曲线相对应的回归方程、相关系数等数据如表1所示。
表1烟丝中丁子香酚的标准曲线和检测限
注：①检测限以3倍信噪比（S/N = 3）计算。
然后将样品测得的检出目标物与内标的色谱峰面积之比，代入标准曲线，即得到样品中的丁子香酚浓度，由此计算烟丝中丁子香酚的含量，计算公式如下
式中：
m—每克烟丝中丁子香酚的含量，单位为微克每克（μg/g）；
A—样品中丁子香酚的浓度（μg/mL）；
S－溶液体积；
n—称取样品的质量（g）。
由表1和图4可知，所采用的色谱条件使丁子香酚的色谱峰与杂质色谱峰分离较好，并且具有较好的相关性，检测限在0.3μg/g。本实施例样品的丁子香酚的含量为865.7μg/g。
实施例2
本实施例对本发明方法的重复性和加标回收率的检测方法如下
采用样品加标回收率试验，分别在样品中加入20.8μg/g，208.0μg/g，1040.0μg/g三个不同浓度的标准溶液进行加标回收率试验，每个样品分别测定6次，色谱分析的条件同实施例1，根据分析结果计算本方法烟丝中丁子香酚的加标回收率及加标后测定值的相对标准偏差，结果如表2所示；
表2烟丝中丁子香酚的回收率和重复性（n=6）
由表2可以看出，在3个加标水平上，利用此方法检测烟丝中丁子香酚的平均回收率为101.14％，样品测试结果的平均相对标准偏差小于2.4%，说明本法的回收率较高，重复性较好。
Claims (7)
1.一种配方烟丝中丁子香酚含量的测定方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）含内标萃取剂的配制，为含有茴香脑的无水乙醇溶液，茴香脑的浓度为0.1-0.2mg/mL；
（2）标准溶液的配制；称取丁子香酚标准品，用含内标萃取剂配制成具有浓度梯度的丁子香酚标准工作溶液；
（3）样品溶液的制备：使用含内标萃取剂萃取样品，然后离心过滤后制备样品溶液；
（4）液相色谱分析：利用液相色谱仪分别对标准溶液和样品溶液进行检测分析；
（5）烟丝中丁子香酚含量的计算。
2.根据权利要求1所述的配方烟丝中丁子香酚含量的测定方法，其特征在于：所述含内标萃取剂的配制是称取0.4 g 茴香脑于4000 mL无水乙醇溶液中，其中茴香脑的浓度为1mg/mL。
3.根据权利要求1所述的配方烟丝中丁子香酚含量的测定方法，其特征在于：所述标准溶液的配制是称取0.2g丁子香酚，精确至0.0001g，用含内标的萃取剂溶解后转移至100mL容量瓶中，并定容，定为标准储备液；分别移取0.01mL，0.1mL，0.5mL，1.0mL，2.5mL，5.0mL的标准储备液到10mL容量瓶中，用萃取剂定容，则丁子香酚的浓度为2.0μg/mL，20μg/mL，100μg/mL，200μg/mL，500μg/mL，1000μg/mL。
4.根据权利要求1所述的配方烟丝中丁子香酚含量的测定方法，其特征在于：所述样品溶液的制备方法具体包括称取0.2 g烟丝样品于50 mL具塞三角瓶中，加入50mL含有内标的无水乙醇，用密封胶密封振荡萃取2h；如有必要则在10000rmp离心10分钟，静置后，移取2.0mL上层清液用0.45μm 有机滤膜过滤，得到样品溶液。
5.根据权利要求1所述的配方烟丝中丁子香酚含量的测定方法，其特征在于：所述的色谱分析条件为色谱柱采用Nova-pak C18液相色谱柱，色谱柱温度为30 ℃，进样量为10 μL，流速为1.0 ml/min；检测波长：280nm，流动相：A为水，B为乙腈，采用等梯度洗脱程序，即水是30％，甲醇为70％，洗脱时间为10min。
6.根据权利要求5所述的配方烟丝中丁子香酚含量的测定方法，其特征在于：所述的色谱柱的规格为3.9 × 150mm，5μm粒径。
7.根据权利要求1所述的配方烟丝中丁子香酚含量的测定方法，其特征在于：丁子香酚含量的计算：首先以标准溶液所检测出的目标物与内标的色谱峰面积之比对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；然后将样品溶液检出的目标物与内标的色谱峰面积之比，代入标准曲线，即得到样品中的丁子香酚浓度，由此即可计算出烟丝中丁子香酚的含量。
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