CN102429928A - 薏米红曲的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种薏米红曲的制备方法，解决已有制备方法工艺复杂，周期长，产品中莫纳可林K含量低，桔霉素含量高的问题。主要是以薏米为原料，接入红曲曲种，经发酵过程而得。制备步骤主要有液态红曲曲种制备，薏米原料制备，接种，发酵培养和成品制备。红曲菌种经第一、二培养基培养该方法制备的薏米红曲莫纳可林K（Monacolin-K）、γ-氨基丁酸（GABA）、红色素含量高，桔霉素含量低，脂肪酸亚油酸含量高，医药保健作用非常明显；本发明工艺简便，适合工业化生产。
Description
技术领域：
本发明涉及一种以薏米为原料制备的红曲，以及该红曲的制造方法。
背景技术：
红曲也称丹曲，传统红曲的做法是以大米为原料，接种红曲菌经固体发酵而成，具有药食两用价值。红曲菌在分类学上属于真菌界，子囊菌门，真子囊菌纲，散子囊菌目，红曲菌科，红曲菌属。红曲菌虽在生物界犹如九牛一毛，但是它有一定的位置。红曲菌所代谢的生理活性物质除了monacolins-K外，尚含有麦角固醇、γ-氨基丁酸、多不饱和脂肪酸等。
红曲具有健脾健胃、活血化瘀、降血压、降血糖等作用；目前，在食品或医药行业，红曲品种很多，大都以谷物为原料制备的，但以薏米为原料制备的固体薏米红曲以及制备方法，却未见到报道。
薏米，又名薏苡仁、薏仁，属禾本科植物薏苡仁之果，产于福建、江苏、河北等地，它的主要成分是淀粉和葡萄糖，含有大量的蛋白质、氨基酸、维生素、脂肪酸等。薏苡仁与大米比较，淀粉含量较低，但粗蛋白和粗脂肪比大米高，分别是大米含量的1.97和5.81倍，尤其是单位重量所提供的氨基酸是大米的2.2倍；薏苡仁油脂中所含人类营养中最重要的必须脂肪酸亚油酸高达45.85%，具有中等程度的抗氧性，表现在对超氧自由基消除的SOD样作用，加上对体内氮氧化合物生成的抑制，即对NO合成酶的抑制，这些都被认为是抗衰的标志性指标，经常在抗老化妆品中使用；其中还含有维生素B1，是大米的2.54倍，矿物质含量也比大米高。薏苡仁有健脾利尿、去热去湿、补血状体至功能，薏苡仁中含有薏苡酯对癌细胞的生长有抑制作用。
薏米红曲，是以薏米为原料，接入红曲曲种，经过制备红曲的过程而得；国内有报道薏米红曲液态发酵，主要是考察抗氧化成分，但红曲产品中红曲红素以及Monacolins-K、γ-氨基丁酸等未见报道（刘畅等，薏苡仁在曲霉发酵过程中成分及抗氧化性变化的研究，食品科学，Vol.30,No.23,2009）；美国专利20070160694公开了使用Aspergillus, lactic acid bacteria and yeast.发酵薏米用于预防或***的方法，但是Aspergillus和Monascus是两类不同菌种（李忠庆，郭芳编著，红曲菌的形态与分类学，2002）。
发明内容：
本发明的目的是提供一种制备周期短，薏米红曲中莫纳可林Ｋ含量高，桔霉素含量低的薏米红曲的制备方法。
本发明是这样实现的：
本发明薏米红曲的制备方法，包括如下步骤：
（1）斜面菌种培养：
将红曲菌种经马铃薯葡萄糖琼脂PDA斜面在26—35℃下培养5—8天得斜面菌种；所述红曲菌种选自红曲红曲菌、紫色红曲菌、红色红曲菌中之一，红曲菌种：PDA斜面。
（2）在第一培养基中接入斜面菌种，在30—35℃下，培养48—72小时，得一级种子，第一培养基包括米粉，
（3）在第二培养基中接入一级种子，在30—35℃，培养48—72小时，得二级种子，第二培养基的组分与第一培养基的差别之一是将米粉改为薏米粉，
（4）取薏米、浸泡、蒸煮熟、接入二级种子，在34—36℃下培养3天，喷入生理盐水，翻动拌匀后，在29—31℃培养，薏米全部变红即可。
第一培养基的组成如下（g/L）：
米 粉 4.00—6.00
黄豆粉 1.5—2.5
磷酸二氢钾 0.02—0.04
硫酸镁 0.025—0.035
硫酸铵 0.15—0.25
葡萄糖 1.5—2.00
碳酸钙 0.35—0.40
503型蛋白胨 0.15—0.20
氯化钠 0.40—0.50
其余为水，
用乳酸将消毒前pH调至5.5—6.0，121℃灭菌20分钟。
第二培养基的组成如下：（g/L）
薏米粉 5.00—8.00
黄豆粉 1.5—2.5
硫酸镁 0.03—0.035
503型蛋白胨 0.05—0.10
葡萄糖 2.00—3.00
磷酸二氢钾 0.04—0.06
碳酸钙 0.4—0.5
氯化钠 0.4—0.5
其余为水，
用乳酸将消毒前pH调至5.5—6.0，121℃灭菌20分钟。
一级种子接量5—30wt%，二级种子接种量为5—30wt%。
步骤（3）中一级种子接入量为10—15%wt%，步骤（4）中二级种子接种量为10～15%wt。
本发明的红曲菌经第一、二培养基培养，薏米红曲菌体量多、红色素色价高、Monacolins高以及含有必须脂肪酸亚油酸等抗氧化成分，莫纳可林K含量高，桔霉素含量低，制备周期更短，具有丰富的营养价值和突出的医疗保健作用。
具体实施方式：
下面结合实例，更具体的说明本发明内容。本发明的制备方法，并不局限于以下实例，对本发明的制备方法有任何形式的变通和/或改变，都将落入本发明的保护范围。
实施例1：
本发明以薏米为原料，接入制备的曲种，经过制备红曲的过程而得。其制备方法包括以下步骤：
1、液态曲种的制备
a、斜面菌种培养
红曲菌经PDA斜面在28℃下培养6天，得斜面菌种。
b、一级液体种子培养
培养基组成（g/L）：米粉4.00，黄豆粉1.50，磷酸二氢钾 0.02， 硫酸镁 0.025，硫酸铵0.20，葡萄糖2.00，碳酸钙0.40，蛋白胨（503型）0.18 ，氯化钠 0.40，定容至1L，溶剂为水，用乳酸将消毒前pH调至5.7；用250ml三角瓶分装，每瓶装液量25ml；121℃灭菌20分钟；待培养基温度降至室温后接入步骤a中的斜面菌种，30℃，摇床转速220r.P.M，培养50h。得一级液体种子备用。
c、二级液体种子培养
培养基组成（g/L）：薏米粉5.00，葡萄糖2.50，黄豆粉1.80，硫酸镁0.03，蛋白胨（503型）0.08，磷酸二氢钾0.04，碳酸钙 0.45，氯化钠 0.40；定容至1L，溶剂为水，用乳酸将消毒前pH调至5.5；750ml三角瓶分装，每瓶装液量50ml；121℃灭菌20分钟；待培养基温度降至室温后接入步骤b中的一级液体种子，接种量10wt%，30℃，摇床转速220r.P.M，培养50h得二级液体种子备用。
2、原料的制备
取8公斤的薏米，用清水浸泡8小时，沥干水分，蒸煮薏米，熟后薏米松散，颗粒均匀。
3、原料接种
待熟后的薏米温度降至30℃，接入上述的二级液体种子，接种量10wt%，拌匀，放入已消毒的托盘，盖上灭菌后的7层纱布。
4、发酵培养
将接种后的薏米在35℃下培养3天，喷入400ml的生理盐水，翻动拌匀，32℃培养1天，薏米全部变深红，即可。
5、制成成品
将发酵好的薏米取出，在105℃干燥，即得薏米红曲。
6、薏米红曲中莫纳可林K含量HPLC测定方法如下：
流动相：乙腈：水=6：94
流速：1ML/min
色谱柱：4.6×150mm，5μm，C18柱；
检测波长：260nm
进样量：25μL
样品处理方法：准确称量0.1g薏米红曲置容量瓶，加入纯净水至刻度，超声溶解，微孔滤膜过滤，待测。
结果：薏米红曲中莫纳可林K含量以干重计11.2mg/g
7、薏米红曲中桔霉素HPLC控制方法
色谱柱SHIMADZU Shim-pack VP-ODS， C18
柱温：28℃,
流动相：乙腈:甲醇:水(磷酸调pH 2.5)为70:10:20(v/v/v)
流速为1 mL/min
进样量20 μL
荧光检测波长为λex=331 nm和λem=500 nm。
经检测，薏米红曲中桔霉素含量低于50ppm。
实施例2
本发明以薏米为原料，接入制备的曲种，经过制备红曲的过程而得。其制备方法包括以下步骤：
1、液态曲种的制备
a、斜面菌种培养
将紫色红曲菌经PDA斜面在34℃下培养8天，得斜面菌种。
b、一级液体种子培养
培养基组成（g/L）：米粉5.00，黄豆粉1.80，磷酸二氢钾 0.02， 硫酸镁 0.025，（NH4）2SO4 0.15，葡萄糖1.50，碳酸钙 0.35，蛋白胨（503型）0.15 ，氯化钠 0.40，定容至1L，用乳酸将消毒前pH调至5.5；用250ml三角瓶分装，每瓶装液量25ml；121℃灭菌20分钟；待培养基温度降至室温后接入步骤a中的斜面菌种，接种量为？33℃，摇床转速220r.P.M，培养50h，得一级液体种子备用。
c、二级液体种子培养
培养基组成（g/L）：薏米粉6.00，葡萄糖2.35，黄豆粉2.40， 硫酸镁 0.03，蛋白胨（503型）0.05，磷酸二氢钾，0.04，碳酸钙 0.45，氯化钠 0.40；定容至3L，用乳酸将消毒前pH调至5.9；750ml三角瓶分装，每瓶装液量50ml；121℃灭菌20分钟；待培养基温度降至室温后接入步骤b中的一级液体种子，接种量10wt%，33℃，摇床转速220r.P.M，培养50h得二级液体种子备用。
2原料的制备
取24公斤的薏米，用清水浸泡12小时，沥干水分，蒸煮薏米，熟后薏米松散，颗粒均匀。
3原料接种
待熟后的薏米温度降至30℃，接入上述的二级液体种子，接种量12wt%，拌匀，放入已消毒的托盘，盖上灭菌后的7层纱布。
4发酵培养
将接种后的薏米在35℃下培养3天，喷入1200ml的生理盐水，翻动拌匀，30℃培养2天，薏米全部变深红，即可。
5制成成品
将发酵好的薏米取出，在80℃下真空干燥，即得薏米红曲。
6、莫纳可林K含量及桔霉素含量控制方法同实施例1，莫纳可林K含量12.1mg/g；桔霉素含量低于50ppm。
实施例3：
本发明以薏米为原料，接入制备的曲种，经过制备红曲的过程而得。其制备方法包括以下步骤：
1、液态曲种的制备
a、斜面菌种培养
将红色红曲菌种经PDA斜面在30℃下培养7天，得斜面菌种。
b、一级液体种子培养
培养基组成（g/L）：米粉4.50，黄豆粉1.50，磷酸二氢钾 0.02， 硫酸镁 0.025，硫酸铵 0.20，葡萄糖1.50，碳酸钙 0.35，蛋白胨（503型）0.15 ，氯化钠 0.45，定容至1L，用乳酸将消毒前pH调至5.8；用250ml三角瓶分装，每瓶装液量25ml；121℃灭菌20分钟；待培养基温度降至室温后接入步骤a中的斜面菌种， 35℃，摇床转速220r.P.M，培养50h。备用。
c、二级液体种子培养
培养基组成（g/L）：薏米粉6.00，葡萄糖2.50，黄豆粉2.15， 硫酸镁 0.035，蛋白胨（503型）0.07，磷酸二氢钾，0.06，碳酸钙 0.50，氯化钠 0.50；定容至2L，用乳酸将消毒前pH调至6.0；750ml三角瓶分装，每瓶装液量50ml；121℃灭菌20分钟；待培养基温度降至室温后接入步骤b中的一级种子，接种量10wt%，35℃，摇床转速220r.P.M，培养50h。备用。
2、原料的制备
取8公斤的薏米，粉碎80目细度，用清水浸泡1小时，沥干水分，蒸煮薏米，至熟透。
3、原料接种
待熟后的薏米温度降至30℃，接入上述的二级液体种子，接种量12wt%，放入已消毒的托盘，盖上灭菌后的7层纱布。
4、发酵培养
将接种后的薏米在36℃下培养1天，翻动拌匀，32℃培养2天，喷入200ml的生理盐水,30℃培养1天，薏米全部变深红，即可。
5、制成成品
将发酵好的薏米取出，在50℃下真空干燥，即得薏米红曲。
6、莫纳可林K含量及桔霉素含量控制方法同实施例1，莫纳可林K含量108mg/g；桔霉素含量低于50ppm。
实施例4
本发明以薏米为原料，接入制备的曲种，经过制备红曲的过程而得。其制备方法包括以下步骤：
1、液态曲种的制备
a、斜面菌种培养
将红色红曲菌经PDA斜面在35℃下培养5-7天，得斜面菌种。b、一级液体种子培养
培养基组成（g/L）：米粉5.00.，黄豆粉2.50，磷酸二氢钾 0.02， 硫酸镁 0.025，硫酸铵 0.25，葡萄糖2.0，碳酸钙 0.40，蛋白胨（503型）0.20 ，氯化钠 0.45，定容至1L，用乳酸将消毒前pH调至6.0；用250ml三角瓶分装，每瓶装液量25ml；121℃灭菌20分钟；待培养基温度降至室温后接入步骤a中的斜面菌种， 35℃，摇床转速220r.P.M，培养50h。备用。
c、二级液体种子培养
培养基组成（g/L）：薏米粉8.00，葡萄糖3.0，黄豆粉2.5， 硫酸镁 0.035，蛋白胨（503型）0.08，磷酸二氢钾，0.04，碳酸钙 0.45，氯化钠 0.45；定容至4L，用乳酸将消毒前pH调至5.5-6.0；750ml三角瓶分装，每瓶装液量50ml；121℃灭菌20分钟；待培养基温度降至室温后接入步骤b中的一级液体种子，接种量10wt%，35℃，摇床转速220r.P.M，培养50h。备用。
2原料的制备
取24公斤的薏米，粉碎成80目细度，用清水浸泡2小时，沥干水分，蒸煮薏米，至熟透。 3原料接种
待熟后的薏米温度降至30℃，接入上述的二级液体种子，接种量12wt%，拌匀，放入已消毒的托盘，盖上灭菌后的7层纱布。
4发酵培养
将接种后的薏米在36℃下培养2天，翻动拌匀，32℃培养1天，喷入600ml的生理盐水,30℃培养1天，薏米全部变深红，即可。
5制成成品
将发酵好的薏米取出，自然晒干，即得薏米红曲。
6、莫纳可林K含量及桔霉素含量控制方法同实施例1，莫纳可林K含量13.5mg/g；桔霉素含量低于50ppm 。
Claims (5)
1.薏米红曲的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
（1）斜面菌种培养：
将红曲菌种经马铃薯葡萄糖琼脂PDA斜面在26—35℃下培养5—8天得斜面菌种；所述红曲菌种选自红曲红曲菌、紫色红曲菌、红色红曲菌中之一，
（2）在第一培养基中接入斜面菌种，在30—35℃下，培养48—72小时，得一级种子，第一培养基包括米粉，
（3）在第二培养基中接入一级种子，在30—35℃，培养48—72小时，得二级种子，第二培养基的组分与第一培养基的差别之一是将米粉改为薏米粉，
（4）取薏米、浸泡、蒸煮熟、接入二级种子，在34—36℃下培养3天，喷入生理盐水，翻动拌匀后，在29—31℃培养，薏米全部变红即可。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于第一培养基的组成如下（g/L）：
米 粉 4.00—6.00
黄豆粉 1.5—2.5
磷酸二氢钾 0.02—0.04
硫酸镁 0.025—0.035
硫酸铵 0.15—0.25
葡萄糖 1.5—2.00
碳酸钙 0.35—0.40
503型蛋白胨 0.15—0.20
氯化钠 0.40—0.50
其余为水，
用乳酸将消毒前pH调至5.5—6.0，121℃灭菌20分钟。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于第二培养基的组成如下：（g/L）
薏米粉 5.00—8.00
黄豆粉 1.5—2.5
硫酸镁 0.03—0.035
503型蛋白胨 0.05—0.10
葡萄糖 2.00—3.00
磷酸二氢钾 0.04—0.06
碳酸钙 0.4—0.5
氯化钠 0.4—0.5
其余为水，
用乳酸将消毒前pH调至5.5—6.0，121℃灭菌20分钟。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于一级种子接种量5—30wt%，二级种子接种量为5—30wt%。
5.按照权利要求书4所述，其特征在于步骤（3）中一级种子接入量为10—15wt%，步骤（4）中二级种子接种量为10—15wt%。
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