CN102363612A - 一种简便高效提取紫杉醇的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种简便高效提取紫杉醇的方法，属于紫杉醇的提取方法。将红豆杉干燥药材粉碎成粗粉用超临界CO2萃取法去除脂溶性杂质，药渣加入纤维素酶水解；过滤，药渣干燥后，用乙醇浸提，过滤，减压回收乙醇至残留物无醇味，将残留物用水洗，弃去水洗液，干燥，层析法制备紫杉醇。本发明提高了紫杉醇的提取率，用水量少，避免了溶剂萃取法中使用有机溶剂，减轻了上柱的压力，更加适合大工业生产。
Description
技术领域
本发明属于紫杉醇的提取方法。
背景技术
红豆杉，学名Taxus chinensis(pilger)Rehd.；俗称紫杉，属植物界，裸子植物门，红豆杉纲(紫杉纲)，红豆杉目，红豆杉科，红豆杉属。紫杉醇是从红豆杉中提取出来的一种具有抗癌作用的新物质。紫杉醇的主要成分是由三个主环构成的二萜核和一个苯异丝氨酸侧链，分子式为C47H51NO14，分子量为853.92，结构式如下：
目前，关于我国从红豆杉中获得紫杉醇的专利大致两类：提取和提纯。从红豆杉中提取紫杉醇基本分为5种：甲醇提取法，乙醇提取法，细胞培养法，生物酶解法，超临界二氧化碳法；其中，应用最多的是乙醇提取法，其次是甲醇提取法和细胞培养法。一般情况下，用低级醇提取紫杉醇时，使用甲醇或者乙醇两者都可以，但由于甲醇有毒，有一些专利是以无毒提取紫杉醇为重点，所以只选用乙醇而不用甲醇作为提取溶剂，提取后的分离纯化方法大同小异。20世纪90年代的提取法纯度偏低，需要进一步提纯；但近些年很多专利直接从红豆杉中提取出紫杉醇的纯度已经达到99.5％以上，所以之前关于提纯的专利已经被灵活的运用到提取步骤中。
在用乙醇从红豆杉药材中提取紫杉醇时，提取物中含有大量的糖类等水溶性杂质，如不处理，将直接影响到下一步纯化效率，以往的专利和文献报道多数采用萃取法，即将乙醇提取物用二氯甲烷溶解，再用水进行萃取除杂，萃取次数较多，操作起来也很繁杂，虽然可以去上述杂质，但经我们实验验证，紫杉醇的损失量较大，而且在实验中需用大量的二氯甲烷有机溶剂，在工业化生产中使用受到很限制，增加成本，安全性低，不适合大工业生产。
发明内容
本发明提供一种简便高效提取紫杉醇的方法，以解决紫杉醇提取率低及不适合大工业生产的问题。
本发明采取的技术方案是，包括以下步骤：
(1)将1000g红豆杉干燥药材粉碎成粗粉，过20目筛，用超临界CO2萃取法去除脂溶性杂质，萃取温度：40-60℃，萃取压力：25-35MPa，萃取时间1-3h，不含夹带剂；
(2)药渣加入纤维素酶8-12g，加水8-12L，60-70℃下水解20-30小时；
(3)过滤，药渣干燥后，用5-12倍量乙醇浸提，浸提方法采用渗漉法或回流提取法；
(4)过滤，35-60℃减压回收乙醇至残留物无醇味；
(5)将残留物用2倍～4倍水洗1-2遍，弃去水洗液，滤渣在40℃-60℃干燥；
(6)层析法制备紫杉醇：可将上述干燥滤渣，上氧化铝或硅胶柱层析，先用二氯甲烷洗脱去杂质，再用5％甲醇二氯甲烷溶液(V/V)洗至无紫杉醇流出，收集此洗脱液，回收溶剂后，残留物低温干燥后，再利用反相色谱柱层析及制备液相色谱制备紫杉醇。
本发明所述渗漉提取法步骤为：将上述药渣装入渗漉筒中，用95％乙醇作溶剂，首先浸泡12-48小时，然后由下口开始流出渗漉液，渗漉筒上口不断添加新溶剂，至无紫杉醇为止，溶剂始终保持浓度差。
本发明所述回流提取法步骤为：以95％乙醇为提取溶剂，将药渣置于回流装置中加热进行提取，加热温度75-85℃，提取时间6-10小时，反复回流操作2～4次。
本发明的特点在于(1)加酶水解可提高紫杉醇的提取率，同时还可去除部分多糖等水溶性杂质；(2)清水洗涤红豆杉乙醇提取物，可以去除大量的糖类等水溶性杂质，而紫杉醇的含量未受影响，用水量少，避免了溶剂萃取法中使用有机溶剂，减轻了上柱的压力，更加适合大工业生产。
本发明采用在红豆杉药材中加入纤维素溶解酶进行水解，破坏植物细胞壁，使紫杉醇更容易被提取出来，不仅提高了的紫杉醇的提取率，而且经过滤后，还去除了部分多糖等水溶性杂质；改进了诸多专利及文献中除水溶性杂质方法，改进后的工艺无论是从紫杉醇得率上，还是提取和纯化步骤上都得到了改善。在用乙醇从红豆杉药材中提取紫杉醇时，提取物中含有大量的糖类等水溶性杂质，如不处理，将直接影响到下一步纯化效率，以往的专利和文献报道多数采用萃取法，即将乙醇提取物用二氯甲烷溶解，再用水进行萃取除杂，萃取次数较多，操作起来也很繁杂，虽然可以去上述杂质，但经我们实验验证，紫杉醇的损失量较大，而且在实验中需用大量的二氯甲烷有机溶剂，在工业化生产中使用受到很限制，本发明改用水洗乙醇提取物后，不仅紫杉醇的损失大大降低，而且避免了使用二氯甲烷有机溶剂，降低了成本，增加了安全性，利用本发明的工艺提取制备紫杉醇更加适合大工业生产。
具体实施方式
实施例1
(1)将1000g红豆杉干燥药材粉碎成粗粉，过20目筛，用超临界CO2萃取法去除脂溶性杂质，萃取温度：40℃，萃取压力：25MPa，萃取时间3h，不含夹带剂；
(2)药渣加入纤维素酶8g，加水8L，70℃下水解30小时；
(3)过滤，药渣干燥后，用5倍量乙醇浸提，浸提方法采用渗漉法：将上述药渣装入渗漉筒中，用95％乙醇作溶剂，首先浸泡12小时，然后由下口开始流出渗漉液，渗漉筒上口不断添加新溶剂，至无紫杉醇为止，溶剂始终保持浓度差；
(4)过滤，35℃减压回收乙醇至残留物无醇味；
(5)将残留物用2倍水洗2遍，弃去水洗液，滤渣在40℃干燥；
(6)层析法制备紫杉醇：可将上述干燥滤渣，上氧化铝或硅胶柱层析，先用二氯甲烷洗脱去杂质，再用5％甲醇二氯甲烷溶液(V/V)洗至无紫杉醇流出，收集此洗脱液，回收溶剂后，残留物低温干燥后，再利用反相色谱柱C18反相柱层析及制备液相色谱制备紫杉醇。
实施例2
(1)将1000g红豆杉干燥药材粉碎成粗粉，过20目筛，用超临界CO2萃取法去除脂溶性杂质，萃取温度：50℃，萃取压力：30MPa，萃取时间2h，不含夹带剂；
(2)药渣加入纤维素酶10g，加水10L，65℃下水解25小时；
(3)过滤，药渣干燥后，用8.5倍量乙醇浸提，浸提方法采用渗漉法：将上述药渣装入渗漉筒中，用95％乙醇作溶剂，首先浸泡30小时，然后由下口开始流出渗漉液，渗漉筒上口不断添加新溶剂，至无紫杉醇为止，溶剂始终保持浓度差；
(4)过滤，47℃减压回收乙醇至残留物无醇味；
(5)将残留物用3倍水洗2遍，弃去水洗液，滤渣在50℃干燥；
(6)层析法制备紫杉醇：可将上述干燥滤渣，上氧化铝或硅胶柱层析，先用二氯甲烷洗脱去杂质，再用5％甲醇二氯甲烷溶液(V/V)洗至无紫杉醇流出，收集此洗脱液，回收溶剂后，残留物低温干燥后，再利用反相色谱柱C18反相柱层析及制备液相色谱制备紫杉醇。
实施例3
(1)将1000g红豆杉干燥药材粉碎成粗粉，过20目筛，用超临界CO2萃取法去除脂溶性杂质，萃取温度：60℃，萃取压力：35MPa，萃取时间1h，不含夹带剂；
(2)药渣加入纤维素酶12g，加水12L，60℃下水解20小时；
(3)过滤，药渣干燥后，用12倍量乙醇浸提，渗漉法：将上述药渣装入渗漉筒中，用95％乙醇作溶剂，首先浸泡48小时，然后由下口开始流出渗漉液，渗漉筒上口不断添加新溶剂，至无紫杉醇为止，溶剂始终保持浓度差。
(4)过滤，60℃减压回收乙醇至残留物无醇味；
(5)将残留物用4倍水洗2遍，弃去水洗液，滤渣在60℃干燥；
(6)层析法制备紫杉醇：可将上述干燥滤渣，上氧化铝或硅胶柱层析，先用二氯甲烷洗脱去杂质，再用5％甲醇二氯甲烷溶液(V/V)洗至无紫杉醇流出，收集此洗脱液，回收溶剂后，残留物低温干燥后，再利用反相色谱柱C18反相柱层析及制备液相色谱制备紫杉醇。
实施例4
步骤(3)中浸提方法采用回流提取法，该回流提取法步骤为：以95％乙醇为提取溶剂，将药渣置于回流装置中加热进行提取，加热温度75℃，提取时间10小时，反复回流操作4次；
其余步骤同实施例1。
实施例5
步骤(3)中浸提方法采用回流提取法，该回流提取法步骤为：以95％乙醇为提取溶剂，将药渣置于回流装置中加热进行提取，加热温度80℃，提取时间8小时，反复回流操作3次；
其余步骤同实施例2。
实施例6
步骤(3)中浸提方法采用回流提取法，该回流提取法步骤为：以95％乙醇为提取溶剂，将药渣置于回流装置中加热进行提取，加热温度85℃，提取时间6小时，反复回流操作2次。
其余步骤同实施例3。
下列通过实验例来进一步验证本发明的效果。
实验例1 超临界去除脂溶性杂质
实验题目：超临界去除脂溶性杂质
实验目的：通过采用超临界技术，去除红豆杉中的脂溶性杂质，从而提高紫杉醇的萃取率。
实验原理：超临界技术采用不加夹带剂方法，可以去除红豆杉中的脂溶性杂质
实验仪器用具及试剂：超临界萃取仪、岛津高效液相色谱仪、水浴锅、抽滤瓶250ml、容量瓶100ml、蒸发皿、玻璃棒、无水乙醇(化学纯)。
实验步骤：
预处理：将红豆杉的树皮与枝叶原料药材充分干燥，粉碎，过20目筛，备用；
称量：分别称取经干燥后的红豆杉树皮与枝叶粉末1000g，超临界萃取，分别收集萃
取物；萃取条件：萃取温度：50℃，萃取压力：30MP，萃取时间2h；
溶解：将所得到的萃取物用无水乙醇充分溶解，并最后定容至100ml。
检测：通过HPLC在吸收波长为227nm下检测样品，与标准品对照，无紫杉醇的单一吸收峰。
结果与讨论：
实验结果
药材为新鲜红豆杉树皮和枝叶，在实验室放置阴干，粉碎。用超临界CO2装置萃取，萃取物经HPLC检测，结果与标准品对照，树皮与枝叶在相应保留时间处，均无明显单一的色谱峰，结果表明：不加夹带剂不能从红豆杉树皮与枝叶中萃取出紫杉醇。
结论：用超临界CO2流体不加夹带剂萃取红豆杉干燥药材，会去除一些对紫杉醇分离有影响的杂质，且未见有紫杉醇的单一吸收峰，可用于去除脂溶性杂质。
实验例2 加酶水解的实验报告
实验目的：
比较加酶水解除杂质和不加酶直接提取紫杉醇哪个效率更高。
实验原理：
在提取药用植物的有效成分过程中，有效成分向提取介质扩散时，必须克服细胞壁和细胞间质的双重阻力。植物细胞壁是由纤维素、半纤维素、果胶质、木质素等物质构成的致密结构。选用适当的酶作用于药用植物材料，如纤维素酶可以破坏细胞壁的致密结构，从而有利于有效成分的溶出。另一方面，选择适当的酶类，可以有效的使目标物溶出，同时控制非目标物的溶出，在提高溶出效率的同时，为后续的提取液的精制创造有利条件。
仪器和试剂：
高效液相色谱仪分析，烧杯、量筒、玻璃棒、95％乙醇、自来水。
实验准备：
原料处理：阴干红豆杉树皮，粉碎过20目筛，分别称取2个1000g备用。
HPLC用流动相：甲醇-乙腈-水23∶36∶41
HPLC用标准品溶液：精密称取标准品粉末1.25mg，用无水乙醇定容至25mL，
该标准品浓度为0.05mg/mL。
实验步骤：
对照组：取1000g粗粉，用5L自来水完全浸泡3h，过滤，取残渣采用提取渗漉法，用10L95％乙醇浸泡48小时，装入渗漉筒中，进行渗漉，HPLC跟踪至无紫杉醇，合并渗漉液，40℃减压浓缩得稠膏，用无水乙醇将稠膏定容至250mL，测紫杉醇含量。
加酶水解组：取1000g粗粉，用5L自来水完全浸泡3h，过滤，取残渣加纤维素酶10g，加水10L，恒温65℃，酶解25h，过滤，取残渣自然阴干后采用渗漉提取法，用10L95％乙醇浸泡48小时，装入渗漉筒中，进行渗漉，HPLC跟踪至无紫杉醇，合并渗漉液，40℃减压浓缩得稠膏，用无水乙醇将稠膏定容至250mL，测紫杉醇含量。
实验现象与结果：
对照组：乙醇用量50L，可以将紫杉醇提取完全，紫杉醇提取率为0.016％。在渗漉过程中，渗漉液的颜色从红棕色渐渐变为淡红色，到最后接近无色时，无紫杉醇。提取液浓缩除去溶剂后，非常粘稠。
加酶水解组：HPLC检测酶解液中无紫杉醇，酶解液为棕色，提取液浓缩除去溶剂后，黏稠度降低。紫杉醇含量为0.021％。
分析与讨论
1.加酶水解能够提高提取率，对照组紫杉醇提取率为0.016％，加酶组为0.021％。
2.加酶水解能够降低提取液的黏度。在对提取溶剂回收过程中，对照组的浓缩液非常粘稠，含有多糖和树胶等杂质；加酶组的浓缩液不粘稠，说明在加酶水解的过程中能够除去多糖和树胶等水溶性杂质。
从二者的HPLC谱图对照可以看出，两者无差异，说明加酶水解没有破坏紫杉醇中的有效成分。
实验例3 不同提取方法对比实验报告
实验目的：
比较浸泡、渗漉、加热回流3种提取方法，哪种更适合于从红豆杉中提取紫杉醇。
实验原理：
紫杉醇以共价键的形式键和于红豆杉的细胞壁上，易溶于甲醇、乙醇等有机溶剂，微溶于***，几乎不溶于水，有热敏性。
浸泡提取法是将红豆杉粗粉装在适当容器中，加入95％乙醇浸泡一定时间，反复数次，合并浸泡液。此法不用加热，适用于遇热易破坏或挥发性成分，也适用于含淀粉或粘液质多得成分。
渗漉提取法是将药材粗粉装入渗漉筒中，用95％乙醇作溶剂，首先浸泡48小时，然后由下口开始流出提取液(渗漉液)，渗漉筒上口不断添加新溶剂，进行渗漉数小时，溶剂始终保持浓度差。
加热回流提取法是以95％乙醇为提取溶剂，在回流装置中加热进行，乙醇的沸点为75℃，所以本实验的加热温度为80℃，反复回流，即第一次回流一定时间后，滤出提取液，加入新鲜溶剂，重新回流，如此重复3次。
仪器和试剂：
高效液相色谱仪分析，烧杯、量筒、玻璃棒、渗漉桶、电热套、圆底烧瓶、冷凝管、95％乙醇。
实验准备：
原料处理：阴干红豆杉树皮，粉碎过20目筛，分别称取3个1000g备用。
HPLC用流动相：甲醇-乙腈-水(23∶36∶41)
HPLC用标准品溶液：精密称取标准品粉末1.25mg，用无水乙醇定容至25mL，该标准品浓度为0.05mg/mL。
实验步骤：
浸泡法：取1000g粗粉，用10L95％乙醇浸泡48小时，适度搅拌，过滤，收集滤液，HPLC检测滤液中是否含有紫杉醇，将残渣再用10L95％乙醇浸泡48小时，过滤，重复以上步骤至无紫杉醇为止，合并滤液，40℃减压浓缩得稠膏，用无水乙醇将稠膏定容至250mL，测紫杉醇含量。
渗漉法：取1000g粗粉，用10L95％乙醇浸泡48小时，装入渗漉筒中，设置流速为0.2mL/min，不断加入新的95％乙醇溶剂，HPLC跟踪至无紫杉醇，合并渗漉液，40℃减压浓缩得稠膏，用无水乙醇将稠膏定容至250mL，测紫杉醇含量。
加热回流法：取1000g粗粉，用10L95％乙醇完全浸泡，加热至80℃恒温，提取8小时，过滤，收集滤液，HPLC检测是否含有紫杉醇，将残渣再用10L95％乙醇完全浸泡，加热至80℃恒温，提取8小时，过滤，重复以上步骤至无紫杉醇为止，合并滤液，40℃减压浓缩得稠膏，用无水乙醇将稠膏定容至250mL，测紫杉醇含量。
实验现象与结果：
浸泡法：共浸泡提取9次仍没将紫杉醇提取完全，乙醇用量90L。还有紫杉醇。每次过滤时紫杉醇都会有损失，且极其不易过滤，用滤纸抽滤时，浸泡充分膨胀的紫杉醇粉末会将滤纸密封导致溶剂难被抽滤下去，或者有粉末被抽滤到滤液中，每次抽滤1L滤液耗时3h。
渗漉法：乙醇用量50L，可以将紫杉醇提取完全，紫杉醇提取率为0.022％。在渗漉过程中，渗漉液的颜色从红棕色渐渐变为淡红色，到最后接近无色时，无紫杉醇。
加热回流法：提取4次，紫杉醇提取量为0.021％，与渗漉法接近。
分析与讨论：
1.加热回流法和渗漉法均可以用来提取紫杉醇，两种方法都能成功的从红豆杉中提取出紫杉醇。
2.浸泡法耗时久，提取溶剂用量大，过滤时操作麻烦；加热回流提取法和渗漉法耗时短，提取溶剂用量小，需要不间断的操作，不用过滤，只要保证新的提取溶剂不断加入，所以，加热回流提取法和渗漉法更加简单经济，易与操作。综上所述，选择加热回流提取法或渗漉法提取紫杉醇。
实验例4加热回流提取紫杉醇实验报告
实验目的：
判断加热回流法是否适合从红豆杉树皮中提取紫杉醇。
实验原理：
加热回流提取法是以95％乙醇为提取溶剂，在回流装置中加热进行，乙醇受热汽化挥发遇冷又凝结为新的醇滴下，使提取溶剂在不引入更多的条件下不断更新提取溶剂，增强提取能力。
仪器和试剂：
高效液相色谱仪分析，烧杯、量筒、玻璃棒、水浴锅、圆底烧瓶、冷凝管、95％乙醇、色谱甲醇、色谱乙腈、纯净水。
实验准备：
原料处理：阴干红豆杉树皮，粉碎过20目筛，称取1000g备用。
HPLC用流动相：甲醇-乙腈-水(23∶36∶41)
HPLC用标准品溶液：精密称取标准品粉末1.25mg，用无水乙醇定容至25mL，该标准品浓度为0.05mg/mL。
实验步骤：
第一次提取：取1000g粗粉，用10L95％乙醇完全浸泡，加热至70℃恒温，提取10小时，放冷，过滤，收集滤液，量体积，HPLC检测是否含有紫杉醇，测紫杉醇含量，将残渣全部装回瓶中。
第二次提取：加入第一次提取滤液体积的95％乙醇，加热至70℃恒温，提取5小时，放冷过滤，重复以上步骤。
第三次提取：加入第二次提取滤液体积的95％乙醇，同上。
第四次提取：加入第三次提取滤液体积的95％乙醇，提取2小时，同上。
合并滤液，40℃减压浓缩得稠膏，用无水乙醇将稠膏定容至250mL，测紫杉醇含量。
实验现象与结果：
第一次提取：提取液为红黑色，HPLC检测含量为125.43mg。
第二次---第四次：提取液依次为深红色、红色、浅红色，HPLC检测含量分别为40.60mg、27.70mg、10.95mg，四次共提取出紫杉醇204.60mg。
分析与讨论
1.根据文献和之前的渗滤实验结果知道，红豆杉树皮中含有紫杉醇万分之二左右，所以1000g树皮中含紫杉醇200mg左右，所以提取四次基本将紫杉醇提取完全。
2.第一次和第二次的提取量较高，第三次和第四次的提取量较低，所以如果为了节省时间、节省提取溶剂可以只提取两次。
3.加热回流法可以用来提取紫杉醇，且不会破坏其有效成分，杂质也不多。
实验例5 渗漉提取法的实验报告
实验目的：
研究渗漉法提取紫杉醇最适合的提取条件。
实验原理：
渗漉提取法是将药材粗粉装入渗漉筒中，用乙醇作溶剂，首先浸泡48小时，然后由下口开始流出提取液(渗漉液)，渗漉筒上口不断添加新溶剂，进行渗漉数小时，溶剂始终保持浓度差。
仪器和试剂：
高效液相色谱仪分析，烧杯、量筒、玻璃棒、渗漉桶、95％乙醇。
实验准备：
原料处理：阴干红豆杉树皮，粉碎过20目筛，分别称取3个1000g备用。
HPLC用流动相：甲醇-乙腈-水(23∶36∶41)
HPLC用标准品溶液：精密称取标准品粉末1.25mg，用无水乙醇定容至25mL，该标准品浓度为0.05mg/mL。峰面积645876.5。
实验步骤：
取1000g粗粉，用10L95％乙醇浸泡48小时，装入渗漉筒中，不断加入新的乙醇溶剂进行渗漉，HPLC跟踪至无紫杉醇，合并渗漉液，40℃减压浓缩得稠膏，无水乙醇定容至250mL。
实验现象与结果：
当乙醇用量40L时，提取出紫杉醇160mg。当乙醇用量50L，提取出紫杉醇220mg。当乙醇用量60L，提取出紫杉醇222mg。
结论：
当乙醇用量为50L时，基本可以将紫杉醇全部提取出来。
实验例6水洗与二氯甲烷萃取的对比实验报告
实验目的：
比较水洗和二氯甲烷萃取法哪个除去粗提紫杉醇中杂质效果更好。
实验原理：
从红豆杉中粗提紫杉醇普遍采用有机溶剂提取法，将提取溶剂回收后得到富含紫杉醇的浓缩稠膏，该稠膏非常粘稠，含有多糖和树胶等水溶性杂质。由于紫杉醇不溶于水，去除该杂质可以采用水洗法，不溶的沉淀中含有紫杉醇；也可以直接用二氯甲烷溶解稠膏，然后以等体积水萃取(水萃取二氯甲烷)，水溶性杂质会溶解在水中被除去，紫杉醇保留在二氯甲烷层中。
仪器和试剂：
高效液相色谱仪分析，烧杯、量筒、玻璃棒、自来水、二氯甲烷。
实验准备：
原料处理：分别取两个采用相同提取方法提取浓缩后的富含紫杉醇的稠膏，要求无醇味无水分。
HPLC用流动相：甲醇-乙腈-水(23∶36∶41)
HPLC用标准品溶液：精密称取标准品粉末1.25mg，用无水乙醇定容至25mL，该标准品浓度为0.05mg/mL。
实验步骤：
水洗：加入5体积水溶解稠膏，过滤，收集沉淀，无水乙醇溶解沉淀，定容至50mL，HPLC测紫杉醇含量。
二氯甲烷萃取：直接用二氯甲烷溶解稠膏，然后以等体积水萃取(水萃取二氯甲烷)，但是有时稠膏不能完全溶于二氯甲烷，会产生粘稠的不溶物，该不溶物可完全溶于水，然后再以等体积的二氯甲烷萃取水溶液(二氯甲烷萃取水)，HPLC测紫杉醇含量，重复以上操作至无紫杉醇，合并萃取液。
实验现象与结果：
水洗：只水洗1次即可。水洗过程简单，直接过滤即可。半个小时完成，紫杉醇提取率为85％。
二氯甲烷萃取：萃取时产生严重的乳化现象对二氯甲烷层直接进行HPLC检测时，紫杉醇峰与前后峰连在一起，必须挥干二氯甲烷后用乙醇溶解才能测到紫杉醇单峰。共耗时10h，水萃取二氯甲烷共进行了5次，二氯甲烷用量为100mL，紫杉醇提取率为25％，二氯甲烷萃取水共进行了16次，二氯甲烷用量为1000mL，紫杉醇提取率为35％，总提取率为60％。
分析与讨论
1.水洗法的紫杉醇提取率要远远大于二氯甲烷萃取法。
2.水洗操作简单，节省时间，无毒无残留；二氯甲烷为有毒溶剂，操作复杂，时间久，溶剂用量大。
3.相比之下，水洗法要比二氯甲烷萃取法更为安全、经济、简单、方便。
Claims (5)
1.一种简便高效提取紫杉醇的方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）将1000g红豆杉干燥药材粉碎成粗粉，过20目筛，用超临界CO2萃取法去除脂溶性杂质，萃取温度：40-60℃，萃取压力：25-35MPa，萃取时间1-3h，不含夹带剂；
（2）药渣加入纤维素酶8-12g,加水8-12L，60-70℃下水解20-30小时；
（3）过滤，药渣干燥后，用5－12倍量乙醇浸提,浸提方法采用渗漉法或回流提取法；
（4）过滤，35－60℃减压回收乙醇至残留物无醇味；
（5）将残留物用2倍~4倍水洗1－2遍，弃去水洗液，滤渣在40℃－60℃干燥；
（6）层析法制备紫杉醇：可将上述干燥滤渣，上氧化铝或硅胶柱层析，先用二氯甲烷洗脱去杂质，再用5%甲醇二氯甲烷溶液（V/V）洗至无紫杉醇流出，收集此洗脱液，回收溶剂后，残留物低温干燥后，再利用反相色谱柱层析及制备液相色谱制备紫杉醇。
2.如权利要求1所述的一种简便高效提取紫杉醇的方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）将1000g红豆杉干燥药材粉碎成粗粉，过20目筛，用超临界CO2萃取法去除脂溶性杂质，萃取温度：50℃，萃取压力：30MPa，萃取时间2h，不含夹带剂；
（2）药渣加入纤维素酶10g,加水10L，65℃下水解25小时；
（3）过滤，药渣干燥后，用8.5倍量乙醇浸提, 浸提方法采用渗漉法或回流提取法；
（4）过滤，47℃减压回收乙醇至残留物无醇味；
（5）将残留物用3倍水洗2遍，弃去水洗液，滤渣在50℃干燥；
（6）层析法制备紫杉醇：可将上述干燥滤渣，上氧化铝或硅胶柱层析，先用二氯甲烷洗脱去杂质，再用5%甲醇二氯甲烷溶液（V/V）洗至无紫杉醇流出，收集此洗脱液，回收溶剂后，残留物低温干燥后，再利用反相色谱柱C18反相柱层析及制备液相色谱制备紫杉醇。
3.如权利要求1或2所述的一种简便高效提取紫杉醇的方法，其特征在于所述渗漉提取法步骤为：将上述药渣装入渗漉筒中，用95%乙醇作溶剂，首先浸泡12-48小时，然后由下口开始流出渗漉液，渗漉筒上口不断添加新溶剂，至无紫杉醇为止，溶剂始终保持浓度差。
4.如权利要求1或2所述的一种简便高效提取紫杉醇的方法，其特征在于所述回流提取法步骤为：以95%乙醇为提取溶剂，将药渣置于回流装置中加热进行提取，加热温度75-85℃，提取时间6-10小时，反复回流操作2~4次。
5.如权利要求4所述的一种简便高效提取紫杉醇的方法，其特征在于所述回流提取法步骤为：以95%乙醇为提取溶剂，将药渣置于回流装置中加热进行提取，加热温度80℃，提取时间8小时，反复回流操作3次。
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