CN102317429A - 抗微生物可发泡皂 - Google Patents
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Abstract
基于环保天然的精油的可发泡组合物可以用作抗微生物物质。可发泡组合物包含百里香油作为唯一的或主要的抗微生物剂。所述可发泡组合物局部施用,可以用作预防和/或治疗剂。抗微生物可发泡组合物对甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)高度有效。
Description
相关申请的交叉引用
本申请根据35U.S.C.§119(e)的规定,要求2008年10月30日提交的美国临时申请61/109,721的优先权,通过引用将该申请全文纳入本文。
发明领域
本发明总体上涉及用于治疗和预防皮肤感染的抗微生物可发泡组合物。更具体地,本发明涉及含百里香油(thyme oil)的局部抗微生物可发泡组合物,用于治疗和预防细菌感染和耐药细菌感染,例如甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(MRSA)。
发明背景
金黄色葡萄球菌,通常简称为“葡萄球菌(Staph)”是一种在大概1/3人群的皮肤上或鼻腔中普遍存在的细菌菌株。在美国,葡萄球菌感染是最常见的引起皮肤感染的原因。大部分葡萄球菌感染较轻,可以用抗生素治疗。然而,葡萄球菌也可能导致皮肤和软组织的严重感染,血流感染和肺炎。
细菌会随着时间变得耐受某种抗生素。甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)是一种耐受β-内酰胺抗生素(例如青霉素和头孢菌素),治疗细菌感染最广泛使用的一类抗生素的葡萄球菌菌株。治疗MRSA的其它的合成抗生素和半合成抗生素(例如,万古霉素和噁唑烷类)目前是有效的,但对这些试剂的耐受性也已见报道。MRSA感染可能在医院和健康护理机构中的个体间发生(健康护理-相关的MRSA(HA-MRSA)),或在较大的社区中的个体中发生(社区-相关的MRSA(CA-MRSA))。大部分耐药葡萄球菌感染是与健康护理有关。具体地,就医病人MRSA感染的发生已从1974的2%稳定地升至1995年的22%,至2004年升至高达64%。参见Klevens等《1992年-2003年美国医院重症监护室中甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌的流行病学改变》(Changes in the Epidemiology ofMethicillin-Resistant Staphylococcus aureusin Intensive Care Units in USHospitals,1992-2003),Clinical Infectious Diseases,42:389-91,2006。估计每年因葡萄球菌感染的住院者有292,000。这些人中,大约126,000住院者与MRSA特定相关。每年因MRSA感染导致约19,000人死亡。
特别需要预防或治疗微生物感染,特别是耐药细菌感染的替代药剂。既天然(例如植物精油)又有效的产品是特别合乎需要的候选产品。
相应地,本发明提供绿色环保的抗微生物可发泡组合物。具体地,可发泡组合物中主要的或唯一的抗微生物剂是百里香油。本文所述的抗微生物可发泡组合物与常规市售的使用合成和半合成抗微生物化合物的抗微生物泡沫相比具有很多优点,它对个体无毒,毒副作用较少,特别是对MRSA功效提高,失败率较低,因此治疗的结果是得到较少的耐药感染。
发明内容
本发明提供绿色环保的用于杀灭受污染表面上MRSA的抗微生物可发泡组合物,和用于杀灭受污染表面上MRSA的方法。本发明可以用多种方式实施。
根据本发明的一个方面,所述可发泡组合物包含抗微生物量的约0.01%w/v至约0.5%w/v的百里香油,表面活性剂和二价铜离子源。当施用于受污染表面时,所述组合物15秒内杀灭超过99.9%或超过99.99%的MRSA。在一个实施方式中,所述组合物包含约0.01%w/v至约0.2w/v%的百里香油。铜肽复合物,例如铜PCA可以作为二价铜离子源。所述表面活性剂可以包括阴离子型或非离子型表面活性剂,可以非限制性地选自下组:烷基多聚葡萄糖苷表面活性剂、十二烷基硫酸钠和月桂醇聚醚硫酸酯钠(sodium laureth sulfate)。具体功效与烷基多聚葡萄糖苷表面活性剂的使用有关,烷基多聚葡萄糖苷表面活性剂可以是阴离子型或非离子型表面活性剂。优选地,所述表面活性剂是生物基表面活性剂,它并非主要源自石化原料的表面活性剂。
所述可发泡组合物除了百里香油之外,也可以包含牛至油(origanum oil),其存在的量为约0.01%w/v至0.2%w/v。此外,所述可发泡组合物可以进一步包含百里酚晶体,其存在的量为约0.01%w/v至0.05%w/v。
所述可发泡组合物可以进一步包含至少一种芳香组分,可以非限制性地选自下组:血橙、香草、薰衣草、姜、香柠檬、绿薄荷和酸橙。所述组合物也可以包含抗氧化剂,例如白茶提取物。
在一个优选的实施方式中,用于杀灭受污染表面上MRSA的局部可发泡组合物包含0.016%w/v百里香油,0.016%w/v牛至油,0.032%w/v植物百里酚晶体,3.0%v/v烷基多聚葡萄糖苷表面活性剂,0.008%w/v铜PCA和水,总量为100%。当施用于受污染表面时,所述组合物15秒内杀灭超过99.9%或超过99.99%的MRSA。所述组合物可以进一步包含一种或多种组分,所述组分选自:白茶、柠檬酸、柠檬酸钠、助表面活性剂、天然保湿剂和芦荟。
本发明的另一个方面提供杀灭受污染表面上MRSA的方法。所述方法包括向表面施用可发泡组合物,所述可发泡组合物包含抗微生物量的百里香油约0.01%w/v至约0.5%w/v,表面活性剂和二价铜离子源。此外,所述方法包括将所述表面与所述组合物接触,持续足以杀灭MRSA的接触时间。所述表面可以是哺乳动物皮肤,具体是人类皮肤。所述组合物可以施用于开放伤口。施用所述组合物的接触时间为,例如至少15秒,至少5分钟或至少1小时。所述组合物一天至少施用一次。所述组合物15秒内杀灭超过99.9%或超过99.99%的MRSA。
根据本发明的一个方面,提供一种试剂盒。所述试剂盒包括用于杀灭受污染表面上MRSA的抗微生物可发泡组合物,所述组合物包含抗微生物量的约0.01%w/v至约0.5%w/v的百里香油,表面活性剂和二价铜离子源。此外,所述试剂盒包括分配器。
本发明其它的特征、优点和实施方式可以从以下发明详述、附图和权利要求中阐明或明显得出。此外,上文对本发明的概述和下文的发明详述都是示例性的,以期提供进一步解释而非限制本发明要求保护的范围。
发明详述
本文所述的可发泡组合物是用来杀灭受污染表面上MRSA的环保的和绿色的组合物。所述可发泡组合物使用作为主要的或唯一的抗微生物剂的低浓度百里香油,表面活性剂和二价铜离子源。泡沫可以用来预防或治疗皮肤感染,特别是MRSA感染。皮肤感染的症状包括损伤、溃疡(sore)、皮疹、水泡、脓肿或皮肤破裂,都可能伴有变色、炎症、肿胀或疼痛。所述泡沫可以通过减少症状的持续时间或降低症状的严重程度,或者同时通过二者来治疗感染。另外,所述泡沫可以治愈感染和/或减轻所述感染的症状。
本文中术语“可发泡的”和“泡沫”表示在液体中形成并捕获气泡得到的物质。泡沫可以通过向液体可发泡组合物注入空气并捕获空气而形成。具体地,泡沫可以通过从容器(例如瓶或泵)中分散本发明所述的抗微生物组合物来形成,从而使得所述组合物与气泡混合,所述气泡捕获在所述组合物中。从液体产生泡沫的常规装置可以与本发明的组合物和方法一起使用。
本文中术语“天然的”和“植物的”表示整体或部分源自天然来源(例如植物)的物质。考虑物质的整个生命周期时,这些物质对环境的影响最小,需要最少的不可再生投入。本文中的“全天然”物质是从植物来源得到的或借助生物方法得到的。例如,“天然百里酚”表示从植物中得到的百里酚,而“合成百里酚”表示从石油化学合成得到的百里酚。本文中所述的可发泡组合物包含“全天然”,“植物的”产品。“全天然”并不排除各种分离方法,例如提取、蒸馏等或对天然产品最少的合成转化(例如半合成)。要排除的是人们仅通过化学方法得到的产品。落入本发明保护范围的产品优选基于天然材料的产品。
本文中术语“环保”表示化合物和产品设计为对环境造成的危害最小。可以使用“环保”成分和化学物质来代替含化学活性的和有毒的化合物的标准产品以避免或最大程度降低对环境的负面影响。本文中术语“绿色”表示与化合物或产品接触的结果是所述化合物和产品能最大程度降低人类疾病以及对环境的影响。EPA提供绿色化学的原理,包括(i)设计充分有效的较安全化学物质和产品,但毒性很小或无毒性,和(ii)设计较少的有毒化学合成。这些原理都适用于本发明。术语“绿色”也包括天然来源的产品,例如很少进行化学改性或不进行化学改性的本发明百里香油。因此,本文中所述的可发泡组合物是“环保”、“绿色”的产品。
本文中术语“抗微生物”表示能杀灭或抑制微生物(例如细菌、分歧杆菌、寄生虫、真菌、酵母、病毒或其它微观生物体)生长的物质。抗微生物物质可以是抑微生物剂(microbistatic agent)或杀微生物剂。本文中“抑微生物”表示减缓或阻止微生物的生长。例如,抑微生物物质干扰蛋白生成、DNA复制和细胞代谢等。本文中“杀微生物”表示杀灭微生物。本文中所述抗微生物可发泡组合物可以用来杀灭或抑制细菌、分歧杆菌、寄生虫、真菌、酵母、病毒或其它微观生物体。本发明的可发泡组合物特别适用于杀MRSA相关的微生物。
术语“抗微生物有效量”表示能抑制细菌、分歧杆菌、寄生虫、真菌、酵母或病毒的生长,杀灭它们的物质用量。例如,百里香油的抗微生物有效量是指能抑制或杀灭细菌(特别是MRSA)、分歧杆菌、寄生虫、真菌、酵母或病毒的百里香油用量。
本文中术语“抗菌”表示能抑制细菌生长(“抑菌”)或杀灭细菌(“杀菌”)的物质。这里使用的术语“抗生素”和“抗生素量”分别表示抑制细菌生长、抑制细菌毒性或杀灭细菌的物质或物质量。抗生素包括天然的、合成的或半合成的化合物。本文中所述的可发泡组合物可以用作对一种或多种细菌菌株有效的抗菌剂,所述细菌菌株包括但不限于葡萄球菌,如MRSA、链球菌(Streptococcus)、假单胞菌(Pseudomonas)、螺杆菌(Helicobacter)、沙门氏菌(Salmonella)和肠球菌(Enterococcus)。
本文中术语“抗真菌”表示能抑制真菌生长(“抑真菌”)或杀灭真菌(“杀真菌”)的物质。真菌的例子包括毛癣菌(Trichophyton)、小孢子菌(Microsporum)和表皮癣菌(Epidermophyton)。术语“抗真菌”是FDA规定的术语,定义为抑制真菌细胞生长和繁殖并减少真菌存活数量的药物。根据FDA对任一植物大分类(large division)的定义,本文中术语“真菌”定义为包括皮肤真菌、酵母和霉菌,特征在于简单的细胞结构和不含叶绿素。真菌感染能导致皮肤病,例如股癣(jock itch)、环形蠕虫(ring worm)和足癣。
本文中术语“抗病毒”表示能抑制病毒生长和/或复制(“抑病毒”)或杀灭病毒(“杀病毒”)的物质。
所述可发泡组合物可以用作抑微生物物质、杀微生物物质、抑菌物质、杀菌物质、抑真菌物质、杀真菌物质、抑病毒物质和杀病毒物质中的至少一种。具体地,可发泡组合物的诸实施方式证明具有高度杀菌功效。更具体地,所述可发泡组合物对耐药细菌(包括几种MRSA菌株)特别有效。将可发泡组合物施用到被MRSA感染的表面(有生命的或无生命的)后,在指定的时间测试减少的MRSA细菌百分比来确定功效(即杀灭速率)。在以下实施例中描述了微生物减少的试验。根据MRSA杀灭速率确定所述可发泡组合物的杀菌功效。
本文中术语“耐药性”表示微生物体耐受药物作用的能力。“抗生素耐药性”表示微生物体能耐受抗生素作用的特定类型耐药性。抗生素耐药性可以是自然或人为进化的。已发展为耐受某种抗生素的细菌被称为“耐药细菌”。如果细菌耐受几种不同的化合物和/或一类抗生素,它被称为“多重耐药”或“多药耐药性”。例如,MRSA是多药耐药性的金黄色葡萄球菌的细菌菌株。术语“抗微生物剂耐药性”表示微生物体耐受抗微生物物质的能力。例如,除葡萄球菌属(Staphylococcus spp.)之外,多种微生物已报道有耐药菌株,包括但不限于肠球菌属(Enterococcus spp.)、链球菌属(Streptococcus spp.)、大肠杆菌属(Escherichia spp.)、分枝杆菌属(Mycobacterium spp.)、沙门氏菌属(Salmonellaspp.)、弯曲杆菌属(Campylobacter spp.)、不动杆菌属(Acinetobacter spp.)、酵母菌属(Saccharomyces spp.)、假丝酵母菌属(Candida spp.)、隐球酵母菌属(Cryptococcus spp.)和假单胞菌属(Pseudomonas spp.)。缩写spp.表示指定属的种。
不受理论的限制,相信未经精制或掺杂的天然精油包含导致环境和人类健康以及组合物安全性,包括其抗微生物特性的非主要组分。由于天然精油的抗微生物活性机理大多未知,除全天然油的植物来源中提取之外的额外精炼可能以消极的方式改变环境和人类健康以及精油的安全性,并可能提高微生物耐药性。使用天然精油作为本文所述的可发泡组合物中唯一的或主要的抗微生物剂。具体地,使用百里香油和/或牛至油(origanum oil)作为可发泡组合物的天然抗微生物剂。本文中,作为唯一的或主要的抗微生物组分的百里香油包括百里香的精油和所有其天然存在的组分,百里酚和百里酚衍生物。
从麝香草(Thymus vulgaris)中提取的天然百里香油的主要化学组分包括α-侧柏酮、α-蒎烯、莰烯、β-蒎烯、p-对异丙基苯甲烷、α-萜品烯、沉香醇、龙脑、萜品烯-4-醇、β-石竹烯、百里酚和香芹酚。百里酚和香芹酚是单萜苯酚化合物。百里酚是天然百里香油的主要组分。通常,天然百里香油具有平均约35-40%百里酚和百里酚衍生物,和约3%至约7%香芹酚和香芹酚衍生物。可以从其中得到百里香油的代表性全草包括但不限于麝香草(Thymus vulgaris)、铺地百里香草(Thymus serpyllium)、西班牙奥勒冈草(Thymus capitatus)、乳香色百里香草(Thymus mastichina)和洋百里香草(Thymus zygus)。
天然牛至油通常包含约60%香芹酚和香芹酚衍生物,和约3%至约7%百里酚和百里酚衍生物。存在于牛至油中的酚类化合物(例如百里酚和百里酚衍生物)也可以提供抗微生物活性。可以从其中得到牛至油的代表性全草包括但不限于奥勒冈牛至(Origanum vulgar)和克里特牛至(Origanum dictamnus)。
在一个实施方式中,所述可发泡组合物包含抗微生物量的百里香。所述量可以是约0.01%w/v至约0.5%w/v、约0.01%w/v至约0.2%w/v、约0.01%w/v至约0.05%w/v,或者在一个特别优选的实施方式中约为0.016%w/v百里香油。
在另一个实施方式中,所述可发泡组合物还包含植物百里酚晶体。所述量可以是约0.01%w/v至约0.5%w/v、约0.01%w/v至约0.1%w/v、或约0.032%w/v。
在一个实施方式中,所述可发泡组合物还包括牛至油。所述量可以是约0.01%w/v至约0.2%w/v、约0.01%w/v至约0.05%w/v、或在一个特别优选的实施方式中为约0.016%w/v。
本发明所述的可发泡组合物包含一种或多种表面活性剂,例如烷基多聚葡萄糖苷表面活性剂。所述烷基多聚葡萄糖苷表面活性剂与精油和水混合时促进形成所述可发泡组合物稳定的大乳液(macroemulsion)或微乳液。所述可发泡组合物可包含烷基多聚葡萄糖苷表面活性剂的量为约0.01%v/v至约10%v/v、约0.5%v/v至约8%v/v,在一个特别优选的实施方式中为约2%v/v。烷基多聚葡萄糖苷的非限制性例子包括癸酰基(capryl)葡萄糖苷(Glucopon215CS UP)、癸基葡萄糖苷(Glucopon225DK)、椰油葡萄糖苷(Glucopon425-N)、月桂基葡萄糖苷(Glucopon625UP)、基于脂肪酸醇C9-C11的烷基多聚葡萄糖苷水溶液(APG325N)及月桂醇聚醚硫酸酯钠和月桂基葡萄糖苷和椰油酰胺基丙基甜菜碱(Plantapon611L)。
在一个实施方式中,所述烷基多聚葡萄糖苷表面活性剂是磺化的表面活性剂,使得该表面活性剂呈阴离子。磺化烷基多聚葡萄糖苷表面活性剂的非限制性例子包括癸基葡萄糖苷羟丙基磺酸钠(SugaNate 100)、癸基葡萄糖苷羟丙基磺酸钠和月桂基葡萄糖苷羟丙基磺酸钠(SugaNate 124),以及月桂基葡萄糖苷羟丙基磺酸钠SugaNate 160(SugaNate 160)。
与其它类型的表面活性剂相比,使用烷基多聚葡萄糖苷表面活性剂(例如磺化烷基多聚葡萄糖苷)的一个优点是能维持环境和人类健康以及安全性。此外,烷基多聚葡萄糖苷表面活性剂具有优良的起泡性质,对皮肤和眼睛的刺激很小,几乎没有刺激。因此,含非刺激性表面活性剂(例如烷基多聚葡萄糖苷)的泡沫可以改进伤口的治疗。
此外,本发明所述的可发泡组合物包含二价铜离子源。二价铜离子源包括但不限于二价铜盐和铜盐,例如硫酸铜、氯化铜、硝酸铜、乙酸铜、碱式碳酸铜(II)、乙酸铜(II)、柠檬酸铜(II)、氯化铜钾(II)、溴化铜(II)、氯化铜(II)、氟硼酸铜(II)、氢氧化铜(II)、硝酸铜(II)、氧化铜(II)和硫化铜(II)。铜肽复合物也是一种二价铜离子源。
在一个实施方式中,所述二价铜离子源可以是铜肽复合物。铜肽复合物的含量可以是约0.001%w/v至约0.5%w/v、约0.005%w/v至约0.05%w/v、或在一个特别优选的实施方式中为约0.008%w/v。铜肽是对铜具有亲和性的蛋白小片段。所述复合物的肽可以包含天然存在的L-构型、D-构型的氨基酸或D-和L-的氨基酸混合物。肽分子对铜的比例可以是1∶1或2∶1。铜肽有助于组织再生,特别是促进伤口和皮肤损伤的愈合。重要的是,最近的研究表明铜肽能降低或减少各种形式的皮肤刺激。参见Prickart,L.使用铜肽进行皮肤重塑》(SkinRemodeling with Copper Peptides),Cosmetics and Medicine(俄罗斯),2004。因此,包含铜肽复合物的可发泡组合物能改进对开放伤口的治疗。铜肽复合物,例如铜(II)复合物的非限制性例子包括甘氨酰-组氨酰-赖氨酸:铜(aka copperPCA)、甘氨酰-(3-甲基)组氨酰-赖氨酸:铜、丙氨酰-组氨酰-赖氨酸:铜、丙氨酰-(3-甲基)组氨酰-赖氨酸:铜、甘氨酰-组氨酰-苯丙氨酸:铜、甘氨酰-(3-甲基)组氨酰-苯丙氨酸:铜、丙氨酰-组氨酰-苯丙氨酸:铜、丙氨酰-(3-甲基)组氨酰-苯丙氨酸:铜、甘氨酰-组氨酰-赖氨酰-苯丙氨酰-苯丙氨酰:铜、甘氨酰-(3-甲基)组氨酰-赖氨酰-苯丙氨酰-苯丙氨酰:铜、缬氨酰-组氨酰-赖氨酸:铜、甘氨酰-精氨酰-赖氨酸:铜、甘氨酰-(5-甲基)精氨酰-赖氨酸:铜、丙氨酰-精氨酰-赖氨酸:铜、丙氨酰-(5-甲基)组氨酰-赖氨酸:铜和甘氨酰-精氨酰-苯丙氨酸:铜。在具体优选的实施方式中,可发泡组合物包括铜PCA。可以使用任意上述及其它铜肽复合物的组合。
所述可发泡组合物可以任选地以浓缩物提供,存在于所述组合物中的载体量减少。例如,组合物中的水量减少。浓缩的组合物可以在使用时按照需要添加水来重建。例如,浓缩的组合物可以约1∶10、1∶50或1∶100的浓缩物形式提供。
所述可发泡组合物任选地包含一种或多种其它成分以改进美学性质或其它有益的性质。这种任选的成分可以包括香料、除臭剂、着色剂、脱脂化合物、渗透促进剂或在局部化妆品或药物中常用的任意其它活性成分。但这些任选的成分应与抗微生物可发泡组合物的核心组分相容。这些添加到可发泡组合物中的任选成分不应对可发泡组合物的功效或环境和人类健康以及安全性产生负面影响。
在另一个实施方式中,所述可发泡组合物可以进一步包含至少一种香料。所述香料存在的量为约0.01%v/v至约5.0%v/v、约0.01%v/v至约1.0%v/v,或者约0.01%v/v至约0.5%v/v。非限制性的香料的例子包括香草、薰衣草、玫瑰、迷迭香、紫罗兰叶、姜、香柠檬、绿薄荷、薄荷、尤加利、酸橙、血橙、红桔、葡萄柚、柠檬、柠檬草、苦橙叶(petitgrain)、山苍籽(litsea cubeba)、松木、杉木、花梨木、甘菊、木兰和天竺葵。在优选的实施方式中,所述可发泡组合物包括下组中的一种或多种:血橙、香草、薰衣草、姜、香柠檬、绿薄荷和酸橙。
应注意本文中所述的可发泡组合物不同于其它包含百里香油仅作为香料的皂产品。相反,本文所述的百里香油可发泡组合物的独特配制物具有抗微生物活性。此外,所述可发泡组合物用低含量的百里香油实现了高度抗微生物活性。具体地,百里香油与特定葡萄糖苷表面活性剂结合使用提供了尤其在用来杀灭MRSA时非常有效的抗微生物组合物。
在另一个实施方式中,所述可发泡组合物可以进一步包含至少一种抗氧化剂。所述抗氧化剂存在的量为约0.001%v/v至约0.5%v/v、约0.001%v/v至约0.1%v/v,或者约0.008%v/v至约0.01%v/v。抗氧化剂是在体内中和自由基的分子。自由基是细胞内标准反应的天然产物,在很多生物过程中很重要。但自由基也可能损害细胞并导致异常的细胞功能(例如胶原分解)。抗氧化剂有助于阻止因接触自由基引起的损害。此外,抗氧化剂还有助于刺激维持和修复皮肤必需的胶原纤维的生长。最近的研究表明抗氧化剂和伤口的氧化还原环境对伤口愈合中起重要作用。参见Sen,C.K.,《伤口修复氧化还原控制的总体情况》(Thegeneral case for redox control of wound repair),Wound Repair Regen.,11(6):431-8,2003;Watt J,等,Clin Sci(Lond).,114(4):265-73,2008。因此,含抗氧化剂的可发泡组合物可以改进对开放伤口和皮肤损伤的治疗。抗氧化剂的非限制性例子包括白茶提取物、绿茶提取物、GHK铜肽(例如铜PCA)、维生素C(L-抗坏血酸)、葡萄籽提取物、海藻(例如红球藻(Haematococcus algae))、维生素E、番茄红素、生物类黄酮、蓝莓提取物、黑莓提取物、石榴提取物、β-胡萝卜素、艾地苯醌(idebenone)和辅酶Q10。在优选的实施方式中,可发泡组合物包含白茶提取物和/或铜PCA。
可发泡组合物可以进一步包括天然保湿剂。所述天然保湿剂存在的量为约0.01%v/v至约5.0%v/v、约0.05%v/v至约1.0%v/v,或者约0.1%v/v。天然保湿剂可以是例如温和不刺激的湿润剂。合适保湿剂的非限制性例子包括水解小麦蛋白和透明质酸(CromoistWHYA)、水解燕麦(CromoistO-25)、水解小麦蛋白和水解小麦淀粉(CropeptideW)、水解丝(Crosilk10,000)、丝氨基酸(CrosilkLiquid)、椰油基二甲基铵羟丙基水解丝氨基酸(Crosilkquat)、胶原氨基酸(CroteinCAA/SF)、毛发角蛋白氨基酸和氯化钠(CroteinHKP)、角蛋白氨基酸(CroteinHKP/SF)、胶原氨基酸(CroteinMCAA)、水解乳蛋白(Hydrolactin2500)、水解大豆蛋白(Hydrosoy2000)、水解小麦蛋白(Hydrotriticum2000)、小麦氨基酸(HydrotriticumWAA)和水解小麦蛋白(TritisolT)。在一个优选的实施方式中,所述可发泡组合物包含水解燕麦保湿剂。可以使用上述保湿剂的任一种组合。
在一个实施方式中,所述可发泡组合物可以进一步包括芦荟提取物。所述芦荟提取物存在的量为约0.1%v/v至约5.0%v/v、约0.1%v/v至约1.0%v/v,或者约为0.25%v/v。芦荟可用于治疗皮肤病症是由于它能减少炎症和疼痛以促进伤口愈合,并润湿来治疗干燥皮肤病症。此外,芦荟还是一种如上所述的可以促进并维持健康皮肤的抗氧化剂源。
在另一个实施方式中,所述可发泡组合物可以进一步包含至少一种助表面活性剂。所述助表面活性剂存在的量为约0.1%v/v至约10%v/v、约0.5%v/v至约8%v/v,或者约5%v/v。所述助表面活性剂进一步促进精油在水中溶解和分散。所述助表面活性剂可以是阴离子型、阳离子型、两性离子型(zwitteronic)、或非离子型表面活性剂。合适的助表面活性剂的非限制性例子包括月桂醚硫酸钠(sodium laurel ether sulphate)、月桂硫酸钠(sodium laurel sulphate)、月桂基硫酸钠(sodium laurly sulfate)、肌氨酸盐(sarcosinate)、丝兰、天然来源的磺基琥珀酸盐、甜菜碱、磺基甜菜碱(sultaine)、丙酸盐、醋酸盐、氧化胺、天然来源的氯化铵、双子型(geminis)、羧酸盐和醇乙氧基化物。优选地,所述助表面活性剂是生物基表面活性剂,它并非主要源自石化原料的表面活性剂。
可发泡组合物优选使用水作为载体。在一个实施方式中,可发泡组合物的pH范围为约0.2至约8.0,最优选的pH范围为约3.5至约6。在一个实施方式中,所述组合物可以进一步包含至少一种pH调节剂,例如柠檬酸或柠檬酸钠。所述pH调节剂存在的量为约0.1%w/v至约5%w/v、约0.1%w/v至约0.5%w/v、约0.4%w/v、或者约0.2%w/v。
本文中所述可发泡组合物可以根据FDA的分类为非处方灭菌药物产品。FDA将“灭菌”定义为通过杀灭或抑制微生物生长来防止感染的产品。灭菌剂包括“消费灭菌剂”,FDA对其的定义为一类市售的或在各种环境下为公众使用的抗微生物药物产品。消费灭菌剂包括抗菌皂、手部消毒剂和抗菌擦拭巾。
“健康护理灭菌剂”是在医院或健康护理机构使用的产品,那里感染风险较高。健康护理灭菌剂包括洗手液、术前皮肤制剂、手术手部擦洗液和手部消毒剂,主要用于医院、诊所、医生办公室、病人候诊室、护士站等。1994年FDATentative Monographs提出消费灭菌剂和个人健康护理灭菌剂在首次使用后都能达到细菌减少2 log10的功效标准。已证明本文所述的抗微生物可发泡组合物的功效超过大部分FDA monograph(1994)提出的消费和个人健康护理产品的标准(参见实施例1、表3;实施例2,表5;实施例3,表7)。
所述可发泡组合物也可以用来治疗一系列其它的皮肤感染,包括但不限于:脓疱病、毛囊炎、疖子、深脓疱、丹毒、蜂窝组织炎、股癣(jock itch)、痤疮和足癣。目前很多痤疮的治疗使用会刺激皮肤的刺激性化合物(例如水杨酸)。本文所述的泡沫是治疗或预防痤疮的温和、天然且有效的产品。
可发泡组合物也可以有效地用作预防或治疗其它组织的微生物感染的抗微生物物质,其它组织包括直肠、***、尿道海绵体部、粘膜和口腔。
在一个实施方式中,可发泡组合物可以用作“治疗绷带”,其中所述组合物施用于皮肤并使其扩散和/或覆盖染病区域。微生物通常经伤口进入身体,导致更严重的感染。本文中,“伤口”表示对皮肤、组织或身体外表面的伤害,通常是导致正常连续的结构破坏的物理损伤。本文中“开放性伤口”表示皮肤撕裂、切开、刺穿、刺破或以其他方式受损从而将损伤和下面的组织暴露的一类伤口。开放性伤口存在很高的感染风险。具体地,葡萄球菌和MRSA感染通常与经伤口进入身体有关(例如,损伤或外科手术所致)。所述可发泡组合物对伤口刺激很小,从而改进患者顺应性并最大程度提供疗效。另外,通过进一步施加机械力(例如将所述组合物擦到表面上),泡沫在表面自由扩散并被迅速吸收。此外,所述泡沫可以用来预防和/或治疗皮肤结构损伤(例如切伤、伤口、烧伤和病变)伴随的二次感染。所有这样的情况中,抗微生物可发泡组合物方便使用并容易扩散,无痛地覆盖受影响的区域。
所述抗微生物可发泡组合物可以在施用后从表面上去除(例如擦拭或冲洗)。泡沫也可以在施用后留在表面上。在一个实施方式中,所述可发泡组合物可以施用于哺乳动物皮肤,更优选施用于人类皮肤。与带有微生物的区域持续接触能在较长的时间内保证较高的杀灭率和持续的抑菌效果。此外,由于可发泡组合物不需要擦拭或冲洗来去除任何抗微生物剂残留,本发明的组合物是方便易于使用的。在某些情况下,优选用消毒绷带或纱布覆盖施用区域。例如,可以用无菌绷带覆盖而将所述组合物施用于感染MRSA的皮肤和/或伤口。泡沫也可以首先施用于绷带、纱布或其它敷药用品,然后与皮肤和/伤口接触。绷带与可发泡组合物的结合使用能进一步地保护受感染区域。
所述可发泡组合物优选不含酒精,并优选不含化妆品和药品中普遍存在的合成化学物质(例如石化产品和对羟基苯甲酸酯)。此外,所述组合物是非腐蚀性的、不可燃的、无反应活性的、易生物降解的,并且可挥发性有机化合物含量极低,低于1%。
所述可发泡组合物可以局部施用,持续时间为几秒到几小时。例如,泡沫可以保持与表面接触(即接触时间)约15秒至约300秒、约5分钟至约60分钟、约1小时至约24小时,或者更长。充足的接触时间能使得至少99.9%的微生物在15秒内被杀灭。更优选地,在接触时间15秒之后,99.99%的MRSA被杀灭。(参见实施例2,表5和实施例3,表7)。所述可发泡组合物可以一天施用一次或多次(例如一天一次、一天二次、一天三次)或按照需要施用。泡沫可以直接施用于表面,例如皮肤和/或伤口。
一种或多种附加产品可以在可发泡组合物中共同给予,或单独给予。例如,泡沫可以与另一种抗微生物或抗菌产品,局部止痛剂或退热剂共同给予。抗微生物产品的非限制性例子包括克林霉素、水杨酸、短杆菌肽、新霉素和多粘菌素。局部止痛剂的非限制性例子包括辣椒素、利多卡因和水杨酸甲酯。
可发泡组合物中使用组分的具体组合提供了一种稳定的组合物。优选地,所述泡沫的保质期至少为2年。
所述可发泡组合物可以通过本领域已知的常规工艺程序配制。例如,所述可发泡组合物可以通过将百里香油、烷基多聚葡萄糖苷表面活性剂和水结合在一起来配制。再将结合的成分搅拌或混合直到形成百里香油的大乳化溶液或微乳化溶液。
需要可发泡组合物的个体可以通过产生MRSA感染的一个或多个风险因素来确定。健康护理相关的MRSA风险因素与社区相关的MRSA风险因素可能由于不同的背景环境而不同。HA-MRSA的风险因素包括作为探访者、病人、住院医生或工作人员拜访医院或长期护理机构。在使用透析、插管、进食管或其它侵入装置(例如导管和静脉管)的个体更容易产生MRSA感染。住院的老年人(约65岁或更老)或者免疫***虚弱的个体,烧伤者,有外科手术伤口或严重的潜在健康问题的个体感染HA-MRSA的风险也在上升。来自感染控制和流行病学专业协会(Association for Professionals in Infection Control and Epidemiology)的2007报告估计在美国每年有120万住院病人感染MRSA。在长期护理机构中MRSA感染比医院更常见。应注意,近来使用抗生素如氟喹诺酮(例如环丙沙星、氧氟沙星或左氧氟沙星)和头孢菌素的治疗方法可能增加某些病人MRSA感染的风险。
CA-MRSA的主要风险因素包括年龄、参与体育锻炼、共用毛巾或运动设备、免疫***虚弱、在拥挤或不卫生的环境中生活以及与健康护理工作者相关。CA-MRSA对孩子(至多约16岁)特别危险,这是由于他们比成年人更容易产生危险形式的肺炎。具体地,免疫***虚弱的个体,例如孩子和感染HIV/AIDS的个体,更容易产生严重的MRSA感染。已报道过在公共体育馆中以及业余和专业运动队间CA-MRSA的爆发。此外,在军事训练营中发生过CA-MRSA的爆发。具有一种或多种CA-MRSA或HA-MRSA风险因素的个体产生MRSA感染的风险较高,可以从本发明的抗微生物可发泡组合物中受益。
所述可发泡组合物可以配制成用分配器(例如泵或瓶)分散。分配器可以是手动的或自动的,这样所述分配器可以是不使用手的分配器,不必按压按钮或杆等来提供一定量的泡沫,从而进一步将细菌和其它微生物的传播降至最小。可发泡组合物分配器的示例性位置包括但不限于家庭、学校、体育馆、医院、长期护理机构、日间护理机构、宿舍和军营。
可发泡组合物应具有一定稠度使得其流过所述分配器,从而能捕获气泡并产生可接受的泡沫。所述泡沫的质量包括丰富的乳状外观、极小的泡沫尺寸和在皮肤上扩散后保持乳脂状而不会变成水状的能力。
应理解本发明不限于本文所述的具体方法、方案和试剂等,本领域技术人员知晓它们有多种变化形式。本文中使用的术语用来仅描述具体实施方式,并不意于限制本发明的范围。本文和所附权利要求书所用的单数形式“一个”、“一种”和“这种”包括复数含义,除非文中另有明确说明。例如,“一种香料”表示一种或多种香料。
本文中的数字范围包括所有限定的范围,即该范围的最大值和最小值均落入所述宽范围中。
实施例
制备抗微生物可发泡组合物,其成分的体积量(%v/v)如下所示。
可发泡组合物的配方。制备的四种配方的可发泡组合物,具有下表1中指定的成分。
表1.配方
抗微生物剂的时间杀灭测试
将细菌细胞的悬浮液与测试物质接触,持续指定的接触时间。接触之后,将一份悬浮液转移至中和剂并分析存活率。进行适当地纯化、灭菌、微生物群体和中和对照。
测试的生物是社区获得性甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌-CA-MRSA(NRS384)(Genotype USA300)或金黄色葡萄球菌-MRSA(ATCC 33592)。测试的生物分别由ATS实验室(ATS Labs)购自NARSA接触管理公司(NARSA ContractsAdministrator)或美国典型培养物保藏中心(ATCC)。
接种物制备:使用测试生物的储备培养物,测试生物的培养物划线接种到含5%无菌绵羊血的胰蛋白酶大豆琼脂培养基上。细菌培养物在35-37℃培养24-48小时(对某些菌株可能需要改变或延长培养时间)。足量的生物生长物转移到无菌稀释液,得到均一的悬浮液,约1x108CFU/mL。(CFU是菌落形成单位)大部分细菌菌株大体上等于0.5麦克法郎德标准品(McFarland standard)。按照需要进一步调节培养物。抗微生物易感性测试使用来自测试当天的代表性培养物进行,来检验所述的抗微生物耐受模式。
向需要的测试培养物加入有机土载荷(organic soil load)。例如,将0.1mLFBS试样加入1.9mL肉汤培养基,得到5%胎牛血清土载荷。
测试物质的制备:测试物质根据提供的指导制备。将9.9mL制备测试物质试样转移至无菌容器(例如玻璃管、均浆灭菌袋(stomacher bag)等)进行测试。如果ATS实验室需要额外的制备,测试物质在制备的三小时内使用。
测试物质接触:0.1mL标准化接种物试样加入测试物质,代表测试接触的开始。立刻使用实验室均浆器(stomacher)、旋涡混合器或其他可用方法将接种的测试物质彻底混合。接种并混合的测试物质保持在指定温度。如果需要的接触温度不是可达到的环境条件,将测试物质在水浴(或其他合适的装置)中平衡以保持温度平衡至理想的接触温度。将0.1mL生物悬浮液的接种物加入9.9mL测试物质并旋涡混合。在室温(21℃)接触测试混合物15、30、60、120和300秒。
传代培养物:在各指定接触时间,将1.0mL接种的测试物质试样转移至9mL中和肉汤。用Butterfield缓冲液制备四份额外的1∶10稀释液。采用标准微生物涂板计数法,将1.0mL的各种稀释液(10-10-104)试样一式两份接种至合适的恢复培养基。5.0mL中和样品的试样转移至用10mL无菌稀释剂(例如0.85%无菌盐水)预湿的无菌0.45μm过滤装置***。将样品过滤浓缩并使用超过50mL的无菌稀释剂(例如0.85%无菌盐水)洗涤过滤器。将过滤器无菌地移出并放置于恢复琼脂培养基的表面。
培育和观测:所有的细菌传代培养物平板在35-37℃培育48±4小时。在测试之前,传代培养物平板任选在2-8℃冷藏不超过3天。培育后,目测检查测试物和对照物的生长情况。对琼脂平板计数并记录。确定每个时间点的下降Log和下降百分比。适当地检查显示生长的代表性传代培养物来确认测试生物。
测试群体对照:按照培养接种物加入测试物质的类似方式,向将等体积(0.1mL)的各接种物加入9.9mLButterfield缓冲液(与测试物质相同的体积)。按照测试方法中和该悬浮液。连续稀释该悬浮液,使用标准微生物技术接种合适的稀释液。培育后,观测生物平板来计算测试时存在于测试物质中的测试生物的浓度(时间分析)。该研究对照的可接受标准是生长情况,使用的数值仅为计算目的。
纯度对照:在生物培养物上进行划线平板分离。培育后,进行检查来确认纯培养物的存在。该研究对照的可接受标准是显示测试生物典型的菌落形状的纯培养物。
初始悬浮液群体对照:使用标准微生物技术将制备的测试生物悬浮液连续稀释并接种。培育后,观察微生物平板来计算测试时接种到测试物质中的测试生物浓度。该研究对照的可接受标准是生长情况大于等于1.0x 106CFU/mL。
中和剂的无菌对照:将中和剂的代表样品进行培育并观测。该研究对照的可接受标准是观察不到细菌生长情况。
有机土的无菌对照:将用于土载荷的血清进行培养、培育,未观察到细菌生长情况。例如,将用于土载荷的1.0mL血清加入液体硫乙醇酸盐培养基(FluidThioglycollate),培育,未观察到细菌生长情况。该研究对照的可接受标准是观察不到细菌生长情况。
中和对照:为模拟测试条件,用0.1mL Butterfield缓冲液代替测试生物悬浮液(NC悬浮液)接种9.9mL测试物质。
(1)过滤中和:将1.00mL NC悬浮液试样转移至9mL中和肉汤并充分混合。将对照悬浮液(5.0mL)过滤浓缩,按照测试方法清洗过滤器。将含有约100CFU/mL的生物体悬浮液试样(1.0mL)加入过滤装置并经所述装置处理。将生物悬浮液试样(1.0mL)用作接种种群对照加入第二过滤装置并进行处理。将过滤器无菌转移至恢复琼脂平板并培育。该研究对照的可接受标准需要过滤中和对照,相应的群体对照结果小于1.0Log。
(2)化学中和:将1.0mL NC悬浮液试样转移至9mL中和肉汤并充分混合。再将1.0mL中和样品试样移除并丢弃。加入1.0mL生物悬浮液(包含约1000CFU/mL)并完全混合来中和样品。一式两份接种中和混合物的试样(1.0mL)并进行培育。通过将1.0mL同样生物悬浮液试样加入9mL Butterfield缓冲液、一式两份接种并进行培育作接种种群对照。该研究对照的可接受标准需要化学中和对照,相应的群体对照结果小于1.0Log。
使用以下公式计算数据
下降百分比=[1-(测试存活数/测试群体对照)]x 100
下降Log=Log10(测试群体对照)-Log10(测试存活数)
上述方法是政府机构规定的适于测试抗微生物产品功效的一个例子。以下实施例使用美国材料和试验协会(ASTM)制定的标准的、经同行评审的方法进行。在非处方的抗菌药物的最终专著(Final Monograph)中ASTM方法已被提议作为FDA的功效标准。
实施例1.CA-MRSA的时间杀灭测试试验
在该研究条件下,配方1的可发泡组合物显示在15秒接触后,存活的社区获得性甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌-CA-MRSA(NRS384)(Genotype USA300)减少了99.9%(3.735Log10),30秒接触后减少了99.999%(5.2Log10),60秒接触后减少了超过99.999%(>5.8Log10),120秒接触后减少了超过99.999%(>5.8Log10),300秒接触后减少了超过99.999%(>5.8Log10),均在室温下(21℃)测试。
表2.测试结果
利用<1的数值仅因为计算原因。
表3.计算数据
*每mL测试混合物的菌落形成单位
实施例2.MRSA的时间杀灭测试试验
在该研究条件下,配方1的可发泡组合物显示在5%胎牛血清有机土载荷的存在下15秒接触后,存活的金黄色葡萄球菌-MRSA减少了99.99%(4.32Log10),30秒接触后减少了99.999%(5.5Log10),60秒接触后减少了超过99.999%(>5.8Log10),300秒接触后减少了超过99.999%(>5.8Log10),均在室温下(20℃)测试。
表4.测试结果
利用<1的数值来代替0仅为计算原因。
表5.计算数据
*每mL测试混合物的菌落形成单位
实施例3.MRSA的时间杀灭测试试验
在该研究条件下,配方3的可发泡组合物显示在5%胎牛血清有机土载荷的存在下15秒接触后,存活的金黄色葡萄球菌-MRSA减少了99.99%(4.84Log10),30秒接触后减少了超过99.999%(>5.8Log10),60秒接触后减少了超过99.999%(>5.8Log10),300秒接触后减少了超过99.999%(>5.8Log10),均在室温(20℃)下测试。
表6.测试结果
数值<1来代替0仅为计算原因。
表7.计算数据
*每mL测试混合物的菌落形成单位
实施例4.MRSA的时间杀灭测试试验
在该研究条件下,配方2的可发泡组合物显示在30、60、120和300秒接触后存活的金黄色葡萄球菌-MRSA减少了超过99.999%(>5.9Log10),在室温下(20℃)测试。
表8.测试结果
表9.计算数据
所给出的实施例仅仅是说明性的,而非本发明所有可能的实施方式、应用和变化形式的穷尽。对本发明所述方法和***的各种改进和变动对本领域技术人员是显而易见的,不超出本发明的范围和构思。虽然已结合具体的实施方式对本发明作了描述,但应了解,如权利要求所述,本发明不应过分地受限于这些具体实施方式。实际上,对化学领域或相关领域技术人员显而易见的用于实施本发明的方式的各种改进都落在以下权利要求的范围内。
上述所有的参考文献和公开出版物的内容通过引用全文结合于此,具有与各单独的参考文献和公开出版物均独立地通过引用纳入本文的相同程度。
Claims (32)
1.一种用于杀灭受污染表面上MRSA的可发泡组合物,其包含:抗微生物量的百里香油约0.01%w/v至约0.5%w/v;表面活性剂;和二价铜离子源。
2.如权利要求1所述的组合物,其特征在于,施用于所述表面时,所述组合物在15秒内杀灭的甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌超过99.99%。
3.如权利要求1所述的组合物,其特征在于,施用于所述表面时,所述组合物在15秒内杀灭的甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌超过99.9%。
4.如权利要求1所述的组合物,其特征在于,所述百里香油的抗微生物量为约0.01%w/v至约0.2%w/v。
5.如权利要求1所述的组合物,其特征在于,所述组合物还包含牛至油。
6.如权利要求5所述的组合物,其特征在于,所述牛至油的存在量为约0.01%w/v至约0.2%w/v。
7.如权利要求1所述的组合物,其特征在于,所述组合物还包含百里酚晶体。
8.如权利要求7所述的组合物,其特征在于,所述百里酚晶体的存在量为约0.01%w/v至约0.5%w/v。
9.如权利要求1所述的组合物,其特征在于,所述组合物还包含香料、抗氧化剂、润湿剂和助表面活性剂中的至少一种。
10.如权利要求9所述的组合物,其特征在于,所述香料选自:血橙、香草、薰衣草、姜、香柠檬、绿薄荷和酸橙。
11.如权利要求9所述的组合物,其特征在于,所述抗氧化剂是白茶提取物。
12.如权利要求1所述的组合物,其特征在于,所述二价铜离子源是铜肽复合物。
13.如权利要求12所述的组合物,其特征在于,所述铜肽复合物是铜PCA。
14.如权利要求1所述的组合物,其特征在于,所述表面活性剂是阴离子型或非离子型表面活性剂。
15.如权利要求1所述的组合物,其特征在于,所述表面活性剂选自:烷基多聚葡萄糖苷、十二烷基硫酸钠和月桂醇聚醚硫酸酯钠。
16.一种用于杀灭受污染表面上MRSA的可发泡组合物,其包含:
0.016%w/v百里香油
0.016%w/v牛至油
0.032%w/v植物百里酚晶体
3.0%v/v烷基多聚葡萄糖苷表面活性剂
0.008%w/v铜PCA
水,总量为100%。
17.如权利要求16所述的组合物,其特征在于,所述组合物局部施用时在15秒内能杀灭的甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌超过99.99%。
18.如权利要求16所述的组合物,其特征在于,所述组合物局部施用时在15秒内能杀灭的甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌超过99.9%。
19.如权利要求16所述的组合物,其特征在于,所述组合物进一步包含白茶、柠檬酸、柠檬酸钠、助表面活性剂、天然保湿剂和芦荟中的至少一种。
20.一种用于杀灭受污染表面上MRSA的方法,其包括:向所述表面施用可发泡组合物,所述可发泡组合物包含抗微生物量的百里香油约0.01%w/v至约0.5%w/v,表面活性剂和二价铜离子源;和
将所述表面与所述组合物接触,持续足以杀灭甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌的接触时间。
21.如权利要求20所述的方法,其特征在于,所述表面包括哺乳动物皮肤。
22.如权利要求20所述的方法,其特征在于,所述哺乳动物皮肤包括人类皮肤。
23.如权利要求21所述的方法,其特征在于,所述可发泡组合物施用于开放性伤口。
24.如权利要求21所述的方法,其特征在于,所述接触时间至少为15秒。
25.如权利要求21所述的方法,其特征在于,所述接触时间至少为5分钟。
26.如权利要求21所述的方法,其特征在于,所述接触时间至少为1小时。
27.如权利要求21所述的方法,其特征在于,所述可发泡组合物至少一天一次施用。
28.如权利要求21所述的方法,其特征在于,所述组合物在15秒内杀灭的甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌超过99.99%。
29.如权利要求21所述的方法,其特征在于,所述组合物在15秒内杀灭的甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌超过99.9%。
30.一种试剂盒,其包含:用于杀灭受污染表面上MRSA的抗微生物可发泡组合物和分配器;其中所述组合物包含抗微生物量的百里香油约0.01%w/v至约0.5%w/v,表面活性剂和二价铜离子源。
31.如权利要求30所述的试剂盒,其特征在于,所述组合物15秒内杀灭的甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌超过99.99%。
32.如权利要求30所述的试剂盒,其特征在于,所述组合物在15秒内杀灭的甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌超过99.9%。
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