CN102293791A - 一种提取银杏叶有效成分的生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种提取银杏叶有效成分的生产方法，包括以下步骤：酶解预处理→加入乙醇回流提取1次→加入转苷酶和相应糖基配体物质后再加入乙醇回流提取1次→将过滤后的提取液后回收乙醇，脱脂→上柱层析，用水和乙醇洗脱→将洗脱液回收乙醇，浓缩成膏状后干燥得到提取物。使用本发明的方法提取银杏叶，最后能使有效成份的含量提高43％～65％，且本发明的生产方法操作简单、环保无毒，生产成本低。
Description
技术领域
本发明涉及一种提取植物中有效成分的生产方法，特别涉及一种提取能治疗心脑血管疾病的银杏叶有效成分的生产方法，属于中药制备领域。
背景技术
银杏是世界上最古老的孑遗植物，素有“活化石”和“植物界的熊猫”之称，我国是银杏的故乡，银杏含量占世界总量的70％以上。银杏树的果实和叶子均有很高的药用价值和食用价值。据《本草纲目》记载，银杏“熟食温肺益气，定喘嗽，缩小便，止白浊；生食降痰、消毒、杀虫″。目前银杏叶提取物广泛用于改善心脑血管功能。银杏是最早被国外研究者认识和被广泛认同的中草药之一，其制剂是世界上最畅销的植物药。
银杏叶中含量最高的是黄酮类物质，萜内酯是银杏特有的结构复杂的化合物，从银杏叶中提取的黄酮类和萜内酯类等有效成分对治疗冠心病、脑血栓心脑血管疾病有明显效果。目前，银杏黄酮化合物的提取方法有水提取、有机溶剂提取、超临界流体提取等方法。水提法成本低，但提取率差，原料采用率不高；有机溶剂提取成本高，杂质含量高；超临界流体法虽提取率高，但因设备昂贵，普及受限制，CN101708195A专利于2010年5月19日公开了一种银杏提取物的生产工艺，但这种工艺仍然存在银杏叶有效成分提取率不高，不环保等缺陷，且这种工艺提取银杏叶有效成分黄酮类物质的含量最高只能达到24.5％，因此，急需一种能有效提高银杏叶中黄酮类物质含量的生产方法。
发明内容
为克服现有技术存在的提取银杏叶有效成分提取率低、不环保等缺点，本发明提供了一种能有效提高银杏叶有效成分提取比率的生产方法。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种提取银杏叶有效成分的生产方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)酶解银杏叶：将银杏叶原料粉碎成粗粉后，与酶解液混合均匀，在30～60℃的温度下酶解1～2天；
(2)提取银杏叶有效成分：将酶解好的银杏粉加入乙醇，在70～85℃的温度下回流提取1次，再加入转苷酶和相应糖基配体物质，然后加入乙醇，在50-60℃的温度下回流提取1次，过滤，合并两次的提取液后回收乙醇，脱脂；合并两次的提取液后回收乙醇，脱脂；
(3)上柱层析：将脱脂后的提取液通过大孔吸附树脂柱层析，然后依次用水洗脱一次，用乙醇洗脱至少三次，用盐酸镁粉试验洗脱液成阳性段后，合并洗脱液，回收乙醇，浓缩成膏状后干燥。
将银杏叶原料粉碎成颗粒后，增大了物料与酶解液及提取溶剂接触的比表面积，使原料充分溶解于溶剂中，能提高提取率。
温度对酶具有双重影响，因而合适的温度能够使酶发挥其最大活性，同时也能保持其较好的稳定性，对细胞壁进行裂解，致使溶剂溶解黄酮类化合物向细胞表面扩散时，阻力减小，有利于向溶剂主体扩散，提高银杏总黄酮的提取率，在30～60℃的温度下进行酶解，有利于在保持酶的稳定性的同时使酶发挥最大活力，使浸提效果达到最佳；浸提温度与浸提速率成正比，温度升高能减小乙醇溶剂的粘度，从而提高银杏黄酮的提取效率；但是温度太高有可能破坏黄酮的热稳定性，杂质溶出的概率也增大，反而会降低浸提效果，因此保持合适的温度就变得很重要，本发明将温度控制在70～85℃是最佳的浸提温度。
进一步的，所述步骤(1)中的酶解液为水和酶的混合物，水和酶的质量比为100∶1；酶解液的水与银杏叶粉的质量比为2∶1。
优选的，所述的酶为转苷酶或纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、复合酶中的一种与转苷酶的混合物。
银杏叶中的黄酮类化合物和萜内酯主要包裹在以纤维素为主构成的细胞壁内，单独的乙醇提取法无法使细胞壁完全破裂，致使银杏叶有效成分的溶出存在相当的阻力，导致提取效果受到很大的影响。将银杏叶进行酶预处理，酶能破坏银杏叶的细胞壁，使细胞壁松散、破裂，因而能减小银杏叶有效成分化合物的溶出阻力，使银杏叶的有效成分充分溶解，缩短提取时间，增强有效成分的提取效果。转苷酶可使银杏叶中一些酯溶性有效成分转化为带糖基的亲水性成分而提高收得率。在30～60℃的温度下对银杏叶进行酶解处理，能使纤维素酶或半纤维素酶或果胶酶或复合酶与转苷酶的混合物保持良好的活性，达到酶解处理的预期效果。酶解后的银杏叶粉在经过乙醇提取后，相对于其它方法得到的提取液，大分子物质相对较少，便于过滤，使树脂孔内杂质减少，在层析过程中不会堵塞树脂孔，使层析更充分，杂质分离更彻底。
进一步的，所述的回流提取工艺，第一次用30～70％的乙醇提取2小时，第二次用30％的乙醇提取1.5小时；乙醇与银杏叶粉质量比第一次为5∶1，第二次为3∶1；加入的转苷酶和相应糖基配体物质与银杏叶粉的质量比为1～2∶100；所述的相应糖基配体物质为麦芽糖或葡萄糖。
第一次用30～70％乙醇在70℃-85℃的温度下进行提取，目的是有利于银杏叶中有效成分的充分萃取，并便于第二次加酶处理，第二次回流提取中使用转苷酶和糖基配体物质对银杏叶进行处理，能提高黄酮苷元的极性，在此基础上再使用30％乙醇进行第二次提取，进一步提高黄酮苷的收率。
优选的，所述的步骤(2)中回流提取采用多功能提取罐对料液进行提取，能进一步增大提取率。
进一步的，所述的用乙醇分别洗脱三次是指第一次用30％乙醇、第二次用60％乙醇、第三次用80％乙醇分别洗脱。
提取液过柱后，用纯化水洗脱至洗脱液澄清，以除去在大孔树脂层析柱中的大分子物，清除杂质，再分别用乙醇进行三次梯度洗脱，使吸附在树脂柱上的银杏叶有效成分充分与树脂柱分离，增强了提取的纯度。
优选的，所述的步骤(3)中的大孔吸附树脂柱层析采用ADX-16型大孔吸附树脂柱，该树脂为美国罗门哈斯生产，对银杏黄酮及内酯选择性强，能有效降低银杏酸的含量.
本发明的有益效果如下：
1、将银杏叶在浸提前酶解预处理，使银杏叶中的有效成分充分溶出，极大的提高了浸提效力；
2、本发明采用多次浸提，纯水洗脱后再用不同纯度的乙醇三次梯度洗脱的方法，有利于完全溶出和充分解析银杏叶的有效成分，使提取的有效成分含量大大的提高；
3、本发明的酶解预处理、多次浸提、酶解、层析、分步洗脱都能分别提高银杏叶的有效成分的提取率，综合各步骤的技术方案，有效控制各个阶段的工艺，最后能使银杏叶提取物中有效成份的含量提高43％～65％；
4、本发明的生产方法操作简单、环保无毒，生产成本低。
具体实施方式
本发明一种提取银杏叶有效成分的生产方法，包括以下步骤：
(1)首先将银杏叶原料1000克粉碎成粗粉，然后将20克酶与2000克水混合，搅拌均匀配成酶解液，再加入粉碎的银杏粉，在30～60℃的温度下酶解1～2天；
(2)将上述酶解好的银杏叶粉加入5000克30％的乙醇(生产过程中加入的乙醇浓度可以在30～70％之间选择)，在70～85℃的温度下用多功能提取罐回流提取2小时后过滤，再加入12ml Suhong475转苷酶和80g/L的麦芽糖，用3000克30％乙醇在50-60℃的温度下回流提取1.5小时后过滤，收集两次的提取液后回收乙醇，脱脂；
生产过程中，糖基配体物质还可以用葡萄糖；转苷酶和相应糖基配体物质与银杏叶粉的质量比为1～2∶100，生产中根据银杏叶原材料的质量，相应的添加转苷酶和糖基配体物质，在1～2∶100的范围内合理调配转苷酶和糖基配体物质的质量；
(3)上柱层析：将脱脂后的提取液通过ADX-16型大孔吸附树脂柱层析，然后依次用水洗脱一次，再用30％乙醇、60％乙醇、80％乙醇分别洗脱，用盐酸镁粉试验洗脱液成阳性段后，合并三次的洗脱液，回收乙醇，浓缩成膏状后干燥。
以下为各实施例的具体工艺参数对照表：
Claims (7)
1.一种提取银杏叶有效成分的生产方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)酶解预处理：将银杏叶原料粉碎成粗粉后，与酶解液混合均匀，在30～60℃的温度下酶解1～2天；
(2)提取银杏叶有效成分：将酶解好的银杏粉加入乙醇，在70～85℃的温度下回流提取1次，再加入转苷酶和相应糖基配体物质，然后加入乙醇，在50～60℃的温度下回流提取1次，过滤，合并两次的提取液后回收乙醇，脱脂；
(3)上柱层析：将脱脂后的提取液通过大孔吸附树脂柱层析，然后依次用水洗脱一次，用乙醇洗脱至少三次，用盐酸镁粉试验洗脱液成阳性段后，合并洗脱液，回收乙醇，浓缩成膏状后干燥。
2.根据权利要求1所述的一种提取银杏叶有效成分的生产方法，其特征在于，所述的步骤(1)中的酶解液为水和酶的混合物，水和酶的质量比为100∶1；所述的酶解液的水与银杏叶粉的质量比为2∶1。
3.根据权利要求2所述的一种提取银杏叶有效成分的生产方法，其特征在于，所述的酶为转苷酶或纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、复合酶中的一种与转苷酶的混合物。
4.根据权利要求1所述的一种提取银杏叶有效成分的生产方法，其特征在于，所述的步骤(2)中的回流提取工艺，第一次用30～70％的乙醇提取2小时，第二次用30％的乙醇提取1.5小时；所述的乙醇与银杏叶粉质量比第一次为5∶1，第二次为3∶1；所述加入的转苷酶和相应糖类物质与银杏叶粉的质量比为1～2∶100；所述的相应糖基配体物质为麦芽糖或葡萄糖。
5.根据权利要求1所述的一种提取银杏叶有效成分的生产方法，其特征在于，所述的步骤(2)中回流提取采用多功能提取罐对料液进行提取。
6.根据权利要求1所述的一种提取银杏叶有效成分的生产方法，其特征在于，所述的步骤(3)中用乙醇分别洗脱三次是指第一次用30％乙醇、第二次用60％乙醇、第三次用80％乙醇分别洗脱。
7.根据权利要求1所述的一种提取银杏叶有效成分的生产方法，其特征在于，所述的步骤(3)中的大孔吸附树脂柱层析采用ADX-16型大孔吸附树脂柱。
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