CN102233071A - 一种用于治疗抑郁症的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗抑郁症的中药组合物。该中药组合物由下述质量份的原料制成：人参1-6份、远志1-5份、石菖蒲1-5份、茯苓1-6份、巴戟天1-6份、柴胡1-5份、枳实1-5份、赤芍1-6份和甘草1-5份。本发明的中药组合物具有益气养心安神、理气疏肝、活血解郁的功效；诸药共奏益气开郁之功。药效学试验证明，该中药组合物能明显改善不同类型抑郁症模型大鼠的行为学异常，并具有标准兼治的功效，可以有效治疗抑郁症。

Description

一种用于治疗抑郁症的中药组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种药物组合物，具体涉及一种用于治疗抑郁症的中药组合物。 

背景技术

抑郁症是情感性精神障碍的主要类型，是一种以显著而持久的心境低落为主要特征的综合征。抑郁症是危害人类身心健康的常见病、多发病，是目前全球的主要精神问题，其主要临床表现为心情低落，并由此引起生活中其他活动的减少，如社交被动、进取心减退、生活疏散等，抑郁症严重影响人们的生活质量，使工作效率下降，由此造成的各种无形损失代价巨大，有些极端严重者还可能有消极***举动。 

现代抑郁症的治疗方法主要有心理治疗、药物治疗和电休克(抽搐)治疗。其中心理治疗方法只适用轻度病例，中重度病例需要药物治疗，至于严重病例，才使用电休克治疗的方法。目前使用最多的还是药物治疗，临床最常使用的抑郁药多为西药，多在用药两周作用才开始起效，具有较大的副作用，需长期服用，且停药后容易反弹。而传统中药经过长期的临床检验，在治疗效果、毒副作用等方面有着得天独厚的优势。因此，寻找一种疗效确切、副作用小且不易复发的新型抗抑郁中药成为抗抑郁药物研究的热点。 

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗抑郁症的中药组合物及其制备方法。 

本发明所提供的治疗抑郁症的中药组合物，由下述质量份的原料制成：人参1-6份、远志1-5份、石菖蒲1-5份、茯苓1-6份、巴戟天1-6份、柴胡1-5份、枳实1-5份、赤芍1-6份和甘草1-5份。 

所述中药组合物可进一步由下述质量份的原料制成：人参2-4份、远志1-3份、石菖蒲1-3份、茯苓2-4份、巴戟天2-4份、柴胡1-3份、枳实1-3份、赤芍2-4份和甘草1-3份。 

所述中药组合物最优选由下述质量份的原料制成：人参3份、远志2份、石菖蒲2份、茯苓3份、巴戟天3份、柴胡2份、枳实2份、赤芍3份和甘草2份。 

本发明中所用各药材的来源及功效如下： 

人参：为五加科植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根及根茎。性甘、微苦，平。归脾、肺、心经。具有大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津，安神的功效。 

远志：为远志科植物远志Polygala tenuifolia Willd.或卵叶远志Polygala sibirica L.的干燥根。性苦、辛，微温。归心、肾、肺经。具有安神益智，祛痰，消肿的功效。 

石菖蒲：为天南星科植物石菖蒲Acorus tatarinowii Schott.的干燥根茎。性辛、苦， 温。归心、胃经。具有开窍醒神，化湿和胃，宁神益志的功效。 

茯苓：为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf的干燥菌核。性甘、淡，平。归心、脾、肾经。具有利水消肿，渗湿，健脾，宁心的功效。 

巴戟天：为茜草科植物巴戟天Morinda officinalis How.的根。性辛、甘，微温。归肾、肝经。具有补肾助阳，祛风除湿的功效。 

柴胡：为伞形科植物柴胡Bupleurum chinensis DC.或狭叶柴胡Bupleurumscorzonerifolium Willd.的干燥根。性苦、辛，微寒。归肝、胆经。具有解表退热，疏肝解郁，升举阳气的功效。 

枳实：为芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种或甜橙C.sinensisOsbeck的干燥幼果。性苦、辛、酸，温。归脾、胃、大肠经。具有破气除痞，化痰消积的功效。 

赤芍：为毛茛科植物赤芍Paeonia lactiflora Pall.或川赤芍P.veitchii Lynch的干燥根。性苦、微寒。归肝经。具有清热凉血，散瘀止痛的功效。 

甘草：为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草G.inflata Bat.、或光果甘草G.glabra L.的根及根茎。 

本发明所提供的中药组合物可按照下述1)-4)中任一所述方法进行制备： 

1)将制成所述中药组合物的原料粉碎后混合，加6-10倍质量的水浸泡0.5-2小时，再煎煮2-3次，每次煎煮40-60分钟，合并煎液，过滤，滤液减压浓缩至每毫升药液相当于生药0.2-3g，即得所述中药组合物。 

2)将制成所述中药组合物的人参，破碎后用6-10倍质量的60-80％乙醇水溶液回流提取2-3次，每次提1-2小时，每次提取完毕后，滤过，收集合并滤液，回收乙醇，将滤液减压浓缩至每毫升药液含0.1-1g生药的人参醇提浸膏；再将提取后剩余的人参药渣与制成所述中药组合物的其它各味原料合并，用6-10倍质量的水煎煮2-3次，每次煎煮40-60分钟，合并煎液，过滤，滤液与所述人参醇提浸膏合并，再进一步浓缩成每毫升药液相当于生药0.2-3g，即得所述中药组合物。 

3)将制成所述中药组合物的各味原料药在45-55℃干燥后，先破碎成粗粉，再粉碎至细粉，最后过6-9号筛，即得所述中药组合物。 

4)将制成所述中药组合物的人参粉碎成细粉，待用；将制成所述中药组合物的其它各味原料药合并，用6-10倍质量的水煎煮2-3次，每次煎煮40-60分钟，合并煎液，过滤，滤液减压浓缩至每毫升药液相当于生药0.2-3g，然后向浓缩液中加入人参细粉混匀，即得所述中药组合物。 

同时，以本发明所提供的中药组合物为活性成分制成的治疗抑郁症的药物也属于本发明的保护范围。 

所述药物可通过口服、外用、注射、渗透、吸收、物理或化学介导的方法导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉或粘膜组织；或是被其它物质混合或包裹后导入机体。 

需要的时候，在上述药物中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体及润滑剂等。 

该治疗抑郁症的药物可以制成片剂、分散片、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、丸剂、微丸、散剂、滴丸剂、汤剂、糖浆剂、合剂、口服液体制剂、煎膏剂和浸膏剂等。上述各种剂型的药物均可以按照中药制剂的常规方法制备。 

上述治疗抑郁症药物的用法及用量与药物的剂型及患者的年龄、体重等因素有关。以汤剂为例，成人的用量为40-90g(生药)/天。 

本发明的组方中，人参大补元气、安神益智，远志安神益智、祛痰开窍，石菖蒲开窍醒神、宁神益智，茯苓健脾宁心，取开心散(《太平惠民和剂局方》)益气养心安神、定志之义；加巴戟天益气助阳、化痰解郁，柴胡舒肝解郁，枳实散结畅滞，赤芍活血解郁，甘草健脾和中、调和诸药，取四逆散(《伤寒论·辨少阴病脉证并治》)理气疏肝、活血解郁；诸药共奏益气开郁之功。药效学试验证明，本发明的中药组合物能明显改善不同类型抑郁症模型大鼠的行为学异常，并具有标准兼治的功效，可以有效治疗抑郁症。 

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明的中药组合物进行说明，但本发明并不局限于此。 

下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。 

下述实施例中所用的人参、远志、石菖蒲、茯苓、巴戟天、柴胡、枳实、赤芍和甘草均符合中国药典2005年版一部正文各药材项下的有关规定。投料前，通过鉴定，各味药材实物与名称相符，质量符合药典标准。 

实施例1、制备抗抑郁组合物汤剂一 

取3质量份人参、2质量份远志、2质量份石菖蒲、3质量份茯苓、3质量份巴戟天、2质量份柴胡、2质量份枳实、3质量份赤芍、2质量份甘草合并，加10倍质量的水浸泡1小时，煎煮1次，药渣再用8倍量水煎煮一次，第二次煎煮后的药渣再用6 倍量水煎煮1次，1小时/次，合并三次水煎液，过滤，滤液减压浓缩至每毫升药液相当于生药3g，即得开心解郁汤汤剂一。 

实施例2、制备抗抑郁组合物汤剂二 

取3质量份人参，破碎后用10倍质量的70％乙醇水溶液回流提取3次，3次提取的时间分别为1小时、40分钟、40分钟，每次提取完毕后，滤过，收集滤液，合并三次滤液，回收乙醇，将滤液减压浓缩至每毫升药液含0.5g生药的醇提浸膏；再将提取后剩余的人参药渣与2质量份远志、2质量份石菖蒲、3质量份茯苓、3质量份巴戟天、2质量份柴胡、2质量份枳实、3质量份赤芍、2质量份甘草合并，用10倍质量的水煎煮3次，1h/次，合并煎液，过滤，滤液减压浓缩至一半体积时，将浓缩液与人参醇提浸膏合并，再浓缩成每mL含3g生药即可，即得开心解郁汤浸汤剂二。 

实施例3、制备抗抑郁组合物散剂 

取3质量份人参、2质量份远志、2质量份石菖蒲、3质量份茯苓、3质量份巴戟天、2质量份柴胡、2质量份枳实、3质量份赤芍、2质量份甘草，置烘箱中于50℃干燥6h，各味药先破碎成粗粉，再粉碎至细粉，最后过6号筛(出粉率大于80％)，即得抗抑郁组合物散剂。 

实施例4、制备抗抑郁组合物合剂 

取3质量份人参，破碎后用10倍质量的70％乙醇水溶液回流提取3次，3次提取的时间分别为1小时、40分钟、40分钟，每次提取完毕后，滤过，收集滤液，合并三次滤液，回收乙醇，将滤液减压浓缩至大约0.5g生药/ml；再将提取后剩余的人参药渣与2质量份远志、2质量份石菖蒲、3质量份茯苓、3质量份巴戟天、2质量份柴胡、2质量份枳实、3质量份赤芍、2质量份甘草合并，用10倍质量的水煎煮1次，再用8倍量水煎煮一次，1h/次，合并两次煎液，过滤，滤液与人参醇提液合并，减压浓缩至1g/ml(按生药量计算)，过滤，灌装，每瓶60ml，灭菌，即得抗抑郁组合物合剂。 

实施例5、制备抗抑郁组合物颗粒剂 

取3质量份人参粉碎成细粉，过6号筛；取2质量份远志、2质量份石菖蒲、3质量份茯苓、3质量份巴戟天、2质量份柴胡、2质量份枳实、3质量份赤芍、2质量份甘草合并，用10倍质量的水煎煮2次，1h/次，合并煎液，过滤，滤液减压浓缩至1g/ml(按生药量计算)，然后向浓缩液中加入人参药材细粉混匀后挤出制粒，干燥即得抗抑郁组合物颗粒剂。 

药效学实验 

实施例6、开心解郁汤对高脂合并慢性应激性抑郁症模型大鼠行为及体重影响的药效学试验 

(一)试验材料 

1、药品： 

阴性对照品：蒸馏水 

阳性对照品：盐酸氟西汀 

试验药品：实施例1制备的开心解郁汤汤剂 

2、试验动物：SD大鼠 

(二)高脂合并慢性应激性抑郁症模型大鼠的建立 

参照文献方法(潘菊华，王彦云，黄世敬，等.血管性抑郁大鼠模型的建立。首都医科大学学报，2007，28(6)：761-762)制作血管性抑郁模型。前4个组给普通饲料，后四个组肌内注射VD₃7.5mg/kg体重，连续3天，然后给予高脂饲料(高脂饲料配方：蛋黄粉10％，猪油10％，胆固醇1％，胆酸钠0.2％，普通饲料79％)，同时用丙基硫氧嘧啶(0.15g/kg体重)灌胃，每周2次。所有动物每周称1次体重和食用饲料量，9周后抽取3只普通饲料大鼠和3只高脂饲料大鼠检测血脂和做主动脉的病理学检查，证明高血脂形成，但未见明显的动脉硬化。对各组动物进行旷场试验和糖水消耗试验检测后，除正常对照组继续正常饲养外，其余各组采用慢性不可预见性温和应激(CUMS)进行3周抑郁症造模，形成高脂叠加CUMS抑郁模型。CUMS参照文献(Willner P，TowellA，Sampson D，et al1 Reduction of sucrose preference by chronic mild unpredictable stressand its restoration by a tricyclic antidepressantl Psychopharmacology，1987，93：3582-3641.)方法进行，将动物予以夹尾1min，禁水24h，禁食24h，45℃环境5min，明暗颠倒24h，电击足底10s(80v，10次，每次随机间隔10-50s)，空瓶放置1h，潮湿垫料24h，鼠笼倾斜24h，4℃冰水游泳5min等方法刺激。这些刺激每天随机采取一种，共3周，使动物不能预料刺激发生。 

(三)试验方法 

1.材料和方法 

1.1药品与试剂 

开心解郁汤：由广安门医院药研室提供(按照实施例1方法制备)，批号：080605。盐酸氟西汀，礼来苏州制药有限公司，批号：070608。蔗糖：国药集团化学试剂有限公司，批号：20080111。维生素D3注射液：上海通用药业股份有限公司，批号：061002。 

1.2分组 

大鼠适应环境一周后，进行糖水消耗试验和旷场试验，根据两项试验得分，进行 分层后，再按体重分组。共分为正常对照、抑郁、抑郁+中药、抑郁+西药、高脂、血管性抑郁、血管性抑郁+中药、血管性抑郁+西药等8个组，每组12只动物。 

1.3给药及检测 

在抑郁造模的同时开始给药。中药组给予开心解郁汤22g生药/kg，西药组给予盐酸氟西汀2.4mg/kg，其余各组给同体积蒸馏水，每日一次，连续灌胃给药22天。造模1、8、15、22天时称量体重并测定糖水消耗量和旷场试验，22天后腹主动脉取血测血脂等生化指标。用SPSS软件进行统计学处理。 

2观察指标 

2.1体重分别于实验前、抑郁1、8、15、22天记录大鼠体重。 

2.2糖水消耗实验 

参照文献方法(D′Aquila PS，Brain P，Willner P.Effects of chronic mild stress onperformance in behavioural tests relevant to anxitety and depression.PHYSIOL Behav，1994，56(5)：861-867.)，共进行5次，分别于实验前，抑郁1、8、15、22天时进行。实验时单笼饲养，在安静的房间内训练动物适应喝糖水，第1天每笼放置2瓶糖水(1％蔗糖溶液)；第2天1瓶糖水，1瓶白水，2瓶位置随机；第3天禁食禁水。第4天给每只大鼠随机放置2个水瓶，分别放有事先称重的1％蔗糖水和白水，120min后，取2瓶水再次称重。记录每只大鼠的糖水消耗量、白水消耗量，计算糖水消耗百分率。 

2.3旷场试验 

参照文献方法(Katz R J，Roth K A，Carroll RJ.Acute and chronic stress effects on openfield activity in the rat：implicarjons for a model of depression.Neurosci Biobehav Rev1981，5(2)：247-51.)，共进行5次，分别于实验前，抑郁1、8、15、22天时进行。自制敞箱，高42cm，底面为76×76cm²的正方形。箱壁四周及底面涂为黑色，底面用白线划分为等大的25个方格。大鼠四爪进入同一方格内计为行走1格，两前爪离地计为站立1次。安静房间内，旷场试验安排在上午8:30-11:30，每只大鼠单独测试，每次测试前保持敞箱内干净。用计数器数5min内每只大鼠行走及站立的次数，每次计为1分。分别统计站立和行走得分数，进行统计学处理。 

2.4血脂检测 

腹腔麻醉，腹主动脉取血，用AU640型全自动生化检测仪进行血脂检测。 

2.5统计学处理：用SPSS11.5进行单因素方差分析。 

(四)试验结果 

1、各组大鼠血脂情况(详见表1) 

表1抑郁造模22天时各组大鼠血脂情况 

与正常对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001 

与高脂对照组比较#P＜0.05，##P＜0.01 

2对大鼠糖水消耗量的影响(详见表2) 

表2各组大鼠不同时期糖水消耗百分率比较 

与抑郁组比较*P＜0.05，**P＜0.01。 

与血管抑郁组比较#P＜0.05。 

3对大鼠行为活动的影响(详见表3) 

表3各组大鼠不同时期走格次数比较(n＝12) 

与抑郁组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001 

与血管抑性郁组比较#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001 

本实验结果表明：食用高脂饲料的动物血中CHO、LDL含量明显升高，证明高血脂形成，与高脂对照组比较，中药干预组CHO明显下降(P＜0.05)，说明开心解郁汤有一定的降血脂作用；实验还显示：高血脂动物并未有明显抑郁症状，而单纯抑郁模型和血管性抑郁模型均有明显的抑郁表现，两组在糖水消耗量和旷场实验中未显示有统计学差异；开心解郁汤和盐酸氟西汀均能增加动物对糖水的偏好度，增强动物水平活动度和空间探索能力，表明药物对两种抑郁模型均有明显抑制作用，但在血管性抑郁模 型中，开心解郁汤的疗效略优于盐酸氟西汀。 

本实验中研究结果显示：与正常组相比模型组大鼠体重增长明显减慢，用药组大鼠较模型组体重增长明显提高，在给药22天时，抑郁中药组、抑郁西药组体重明显高于抑郁模型对照组(P＜0.05)，血管性抑郁中药组明显高于血管性抑郁模型组(P＜0.05)，血管性抑郁西药组体重虽然也有升高，但未见有统计学意义。表明开心解郁汤对抑郁症患者的厌食，体重下降会有改善作用。 

实施例7、开心解郁汤对高脂合并慢性应激性抑郁症模型大鼠抗氧化作用的药效学试验 

(一)试验材料 

1、药品： 

阴性对照品：蒸馏水 

试验药品：开心解郁汤汤剂一 

2、试验动物：SD大鼠 

(二)高脂合并慢性应激性抑郁症模型大鼠的建立，同实施例6。 

(三)试验方法 

1、动物分组 

动物适应性饲养1周后，采用Open-field方法进行行为学评价，选择评分相近的大鼠72只进行试验，每组12只。(1)正常对照组：给予普通饲料，正常饮水；(2)抑郁组：给予普通饲料，正常饮水。慢性不可预见性应激(CUMS)。(3)高脂组：给予高脂饲料，VD3负荷，正常饮水；(4)血管性抑郁组：予高脂饲料，VD3负荷，加以CUMS方法；(5)抑郁治疗组：在抑郁组的基础上加开心解郁汤干预。(6)血管性抑郁治疗组：在血管性抑郁组的基础上加开心解郁汤干预。未给药各组予等量蒸馏水。 

2、开心解郁汤供试品制备 

按处方量称取100剂，共6.6Kg，加10倍量水浸泡1小时，煎煮1次，药渣再加入8倍量水煎煮一次，第二次煎煮后的药渣再用6倍量水煎煮1次，1小时/次，合并三次煎煮液，过滤，滤液浓缩至每毫升相当于生药3g，共2200ml。(按实施例1的方法制备) 

3、检测NO、ET、MDA、SOD 

NO、ET、MDA、SOD均采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒。NO检测采用化学法。ET由解放军总医院科技开发中心放免所采用放免法检测。 

4、统计学处理 

汇总资料，全部资料录入计算机，采用SPSS 11.5 for windows，多组间采用方 差分析，两组间采用T检验进行数据分析。 

(四)试验结果 

分组时，各组大鼠均健康活泼，毛发光泽，两组间体重无显著差异。造模后，血管性抑郁组较正常对照组体重减轻，活动减少，毛发干枯，无光泽。 

血清NO、ET、MDA、SOD检测：与正常对照组相比，高脂模型组、抑郁对照组以及血管性抑郁对照组血清MDA均显著升高(p＜0.05)，各组SOD明显下降，NO和ET改变不明显。应用开心解郁汤干预后，SOD明显升高，与血管性抑郁模型组比有明显差异。结果见表4。 

表4各组大鼠NO、ET、MDA、SOD检测结果比较(n＝12， 

±s) 

注：与正常对照组比较：(2)p＜0.05，p＜0.01，(3)p＜0.001； 

与血管性抑郁组比较：(a)p＜0.05，(b)p＜0.01，(c)p＜0.001。 

本研究表明开心解郁汤能够升高慢性应激大鼠血浆中SOD活性，并降低慢性应激大鼠血浆中MDA含量，提示开心解郁汤的抗抑郁作用可能与其增强抗氧化酶活性、清除体内过多的自由基、抗脂质过氧化有关。 

实施例8、开心解郁汤对高脂合并慢性应激性抑郁症模型大鼠脑内单胺类神经递质含量影响的药效学试验 

(一)试验材料 

1、药品： 

阴性对照品：蒸馏水 

阳性对照品：盐酸氟西汀 

试验药品：开心解郁汤二 

2、试验动物：SD大鼠 

(二)高脂合并慢性应激性抑郁症模型大鼠的建立，同实施例6。 

(三)试验方法 

1药品与试剂 

盐酸氟西汀(礼来苏州制药有限公司，批号：070608)；开心解郁汤：由广安门医院药研室提供，批号：080605。NE、5-HT、DA、HVA、3，4二羟基苄胺(DHBA)、 

1-辛烷磺酸钠、一水合柠檬酸、柠檬酸三钠，乙二胺四乙酸二钠均为Sigma产品；甲醇为Merck公司产品；蔗糖、高氯酸及其他试剂均为国产AR级；实验用水为超纯水。 

2供试药品的制备 

开心解郁汤：按照实施例2的方法制备，批号：080605。盐酸氟西汀：乳钵研细，加生理盐水配成浓度为0.24mg/mL的溶液。 

3动物分组 

雄性SD大鼠适一周后，进行糖水消耗试验和旷场试验，根据两项试验得分和体重分为正常对照、抑郁模型、抑郁+中药和抑郁+西药组，每组12只动物，所有动物每周称1次体重和饲料量。 

4脑皮质中5-HT、NE、DA和HVA的测定 

大鼠腹主动脉放血处死，剪开头皮，分离硬脑膜和头盖骨，在冰盘上剥离脑组织，用4℃冷生理盐水冲洗除去粘附的血液，用滤纸吸干水分，剪取脑皮质，每组选取6个分离完整的标本置冻存管中液氮速冻，-80℃低温保存待测。剪取约20-30mg脑皮质样品，置于1.5mL EP管中，准确称量，加入200μL冰冷样品预处理A液(0.4mol·L^-1高氯酸)，加入5ng·μL的DHBA内标液2μL，冰浴中超声匀浆10s(0.5HZ，即振动1s，间歇1s，重复4～5次)，避光，匀浆后静置1h，4℃离心(12000rpm)20min，吸取上清液160μL，加入80μL的冰冷样品预处理B液(含20mmol·L^-1柠檬酸钾，300mmol·L^-1磷酸氢二钾，2mmol·L^-1EDTA·2Na的水溶液)，涡旋混匀，冰浴静置1h，4℃离心(12000rpm)20min，吸取上清液200μL，微孔滤膜过滤，立刻按下述色谱条件测定，未测样品-80℃避光保存。色谱条件：Zorbax Eclipse XDB-C₁₈(4.6mm×150mm，5μm)色谱柱，EasyGuard保护柱(Dikma公司)；以含一水合柠檬酸80mmol·L^-1，柠檬酸三钠73.4mmol·L^-1，1-辛烷磺酸钠0.12mmol·L^-1，乙二胺四乙酸二钠0.1mmol·L^-1，含18％甲醇的混合溶液为流动相(pH4.3)；流速：0.5mL·min^-1；柱温：25℃；进样器温度：4℃；进样量：10μL；测定电极电势：-150mv和400mv。 

(四)试验结果 

脑皮质中5-HT、NE、DA和HVA的变化结果见表5。与正常组比较，模型组大鼠脑皮质中5-HT、NE、DA和HVA的含量均降低，其中5-HT和NE变化有显著性差异(P＜0.01或0.05)，DA和HVA含量降低明显，但无显著性差异。与模型组比较，开心解郁汤组和盐酸氟西汀组的大鼠脑皮质中5-HT、NE、DA和HVA含量均有提高，其中5-HT和NE有显著性升高(P＜0.01或0.05)，部分组的DA和HVA含量有显著性升高(P＜0.05)。 

表5各组大鼠脑皮质中5-HT和NE的变化(mean±SD，n＝6) 

与抑郁组比较*P＜0.05，**P＜0.01。 

本实验中模型大鼠的脑皮质内5-HT、NE、DA和HVA的含量均较正常组下降，其中5-HT和NE变化有显著性差异(P＜0.01或0.05)。氟西汀为选择性5-HT再摄取抑制剂，可选择性抑制5-HT的再摄取，提高脑内5-HT水平，从而治疗抑郁症。经开心解郁汤和盐酸氟西汀治疗后，与模型组比较，大鼠脑皮质中5-HT、NE、DA和HVA(DA经单胺氧化酶途径的代谢产物)含量均有提高，其中5-HT和NE有显著性升高(P＜0.01或0.05)，部分组的DA和HVA含量也较显著升高(P＜0.05)，提示开心解郁汤可纠正脑组织单胺类递质失衡，能够增加脑皮层中5-HT、NE和DA含量，从而纠正模型鼠行为学异常。 

实施例9、开心解郁汤对高脂合并慢性应激性抑郁症模型大鼠脑皮层ICAM-1表达的药效学试验 

(一)试验材料 

1、药品： 

阴性对照品：蒸馏水 

试验药品：开心解郁汤二 

2、试验动物：SD大鼠 

(二)高脂合并慢性应激性抑郁症模型大鼠的建立，同实施例6。 

(三)试验方法 

1、实验动物分组 

动物适应性饲养1周后，采用Open-field方法进行行为学评价，选择评分相近的大鼠18只进行试验，每组6只。(1)空白组：给予普通饲料，正常饮水；(2)血管性抑郁组：给予高脂饲料，VD3负荷，加以慢性不可预见性应激CUMS方法；(3)血管性抑郁治疗组(中药)：在血管性抑郁组的基础上加中药干预。未给药各组给予等量蒸馏水。 

2、开心解郁汤供试品制备 

按实施例2的方法制备。 

3、方法 

3.1组织切片制备 

末次行为学测试及取血完毕，断头取脑，脑组织形态学观察，将脑组织进行石蜡包埋，切片，片厚4μm。 

3.2免疫组化实验操作步骤 

1、脱蜡、水化组织切片 

脱蜡前，将组织切片在80℃恒温箱中烘烤30分钟。 

1)组织切片置于二甲苯中浸泡10分钟，更换二甲苯后再浸泡10分钟； 

2)无水乙醇中浸泡5分钟； 

3)95％乙醇中浸泡5分钟； 

4)70％乙醇中浸泡5分钟； 

5)充分水洗。 

2、3％H₂O₂去离子水孵育10分钟(容器加盖)，以阻断内源性过氧化物酶。 

3、微波修复：微波高档10分钟。 

4、PBS冲洗，1次2分钟，共3次。 

5、擦干或吸干周围液体，滴加一抗，放入湿盒中，4℃过夜，PBS冲洗，1次2分钟，共3次。 

6、滴加试剂1，37℃孵育20分钟，PBS冲洗，1次2分钟，共3次。 

7、滴加试剂2，37℃孵育20分钟，PBS冲洗，1次2分钟，共3次。 

8、应用DAB溶液显色。DAB-H₂O₂显色，镜下观察显色情况控制时间，自来水充分冲洗终止显色。 

9、复染：苏木素复染20秒钟后，水洗；1％盐酸乙醇分化，水洗；氨水中30秒钟后，充分水洗。 

10、封片：梯度脱水(70％、95％乙醇)，无水乙醇脱水，每次5分钟，2次；晾干后，中性树胶封片，待其胶完干燥后置于切片盒保存，以待观察结果。 

3.3显微镜观察、照相及图像处理分析 

采用专业图像分析软件IPP6.0对切片进行图像分析，切片放大倍数表示物镜放大倍数相乘目镜放大倍数。取各大鼠断面水平相似的连续组织切片，所有切片在同一强度、放大100倍下进行。 

3.4统计学分析 

所有数据使用spss11.5软件进行统计分析。各组数据均以均数±标准差表示，成组设计多样本均数的比较用ANOVA检验，多个样本均数间每两个均数比较用q检验。 

(四)试验结果 

光镜下ICAM-1阳性反应物位于神经元胞浆内，呈深浅不一的棕黄色颗粒状，可明显看出其内深染的核和神经元突起，结果显示血管性抑郁组大鼠的阳性神经元数目多于对照组，差异具有显著性(P＜0.05)。血管性抑郁治疗组大鼠的阳性神经元数目少于血管性抑郁组，可见较少胞浆呈稍浅棕黄色颗粒状的阳性细胞，阳性细胞数明显减少，有显著差异性(P＜0.05)。具体结果见下表6。 

表6各组大鼠脑组织阳性表达结果 

注：*血管性抑郁组与空白组相比较均升局，P＜0.05； 

▲血管性抑郁治疗组与血管性抑郁组相比较均降低，P＜0.05。 

本实验研究结果显示，血管性抑郁治疗组大鼠的脑组织的阳性表达少于血管性抑郁组，可以说明开心解郁汤对细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的高表达有改善作用，同时也说明开心解郁汤对血管性抑郁大鼠模型有治疗作用。 

实施例10、开心解郁汤对高脂合并慢性应激性抑郁症模型大鼠脑组织5-HT受体表达的药效学试验 

(一)试验材料 

1、药品： 

阴性对照品：蒸馏水 

阳性对照品：盐酸氟西汀 

试验药品：开心解郁汤二 

2、试验动物：SD大鼠 

(二)高脂合并慢性应激性抑郁症模型大鼠的建立，同实施例4。 

(三)试验方法 

1、分组 

大鼠适应环境1周后，进行糖水消耗试验和旷场试验，根据两项试验得分，进行分层后，再按体重分组。共分为正常对照、抑郁、抑郁+中药、抑郁+西药4个组，每组8-12只大鼠。 

2、药品与试剂 

开心解郁汤：由广安门医院药研室提供(按照实施例2的方法进行制备)，批号：080605。盐酸氟西汀，苏州制药有限公司，批号：070608。蔗糖：国药集团化学试剂有限公司，批号：20080111。Trizol总RNA提取试剂：美国Invitrogene公司；cDNA试剂盒：美国ABI公司；荧光定量PCR试剂盒(Super Green Power Mix) 

3、给药及检测 

在抑郁造模的同时开始给药。中药组给予开心解郁汤22g生药/kg，西药组给予盐酸氟西汀2.4mg/kg，其余各组给同体积生理盐水，每日一次，连续灌胃给药22d。 

4、检测指标 

脑皮质和海马区5-HT 1A/2A受体mRNA表达的影响：大鼠腹主动脉取血完毕，立即断头剪开头皮，分离脑硬膜和头盖骨，冰上剥离脑组织，用4℃预冷生理盐水冲洗粘附的血液，滤纸吸干，分别切取大脑皮层区和海马区，各加入0.5ml预冷Trizol，小心快速研磨匀浆后，冻存于-80℃冰箱以备提取总RNA。提取总RNA时将样品取出放于4℃冰上，再加入0.5ml Trizol后，室温下静置5min；加入200μl氯仿，剧烈振摇15s混匀后，室温静置3min；4℃，12000rpm离心15min，RNA分布于水相中；将上层无色水相转移到另一Ep管中，加入500μl异丙醇，室温静置10min；4℃，12000rpm离心10min；弃上清液，用1ml75％乙醇洗涤RNA沉淀物，4℃，7500rpm离心5min；弃上清液，室温干燥15min；向干燥过的沉淀物中加入40μlDEPC水溶解沉淀物，测定OD260/280确定总RNA的浓度及纯度后，于-20℃保存以备进行逆转录用。然后按照cDNA试剂盒和实时荧光定量PCR试剂盒步骤，进行逆转录和PCR扩增。引物序列(由北京赛百盛基因技术有限公司合成)分别为：5-HT-1AR：上游aagaagagcctgaacggaca(序列表中序列1)，下游cagaggaaggtgctctttgg(序列表中序列2)；5-HT-2AR：上游agctctgtgcgatctggatt(序列表中序列3)，下游cccctccttaaagaccttcg(序列表中序列4)；内参GAPDH：上游agacagccgcatcttcttgt(序列表中序列5)，下游cttgccgtgggtagagtcat(序列表中序列6)。 

(四)试验结果 

1、各组大鼠海马区5-HT 1A/2A受体mRNA表达的改变 

模型组大鼠海马组织中，5-HT1AR mRNA水平下降，而5-HT2AR mRNA水平升高(与正常对照组相比p＜0.05)，中药及西药治疗后均可不同程度地降低。 

2、各组大鼠大脑皮层区5-HT 1A/2A受体mRNA表达的改变 

在大脑皮层中，5-HT1AR和5-HT2AR mRNA水平的改变与下丘脑组织中的改变呈现相互拮抗的改变。 

本研究结果显示：CUMS可引起大鼠相应的行为学改变，诱导形成大鼠抑郁症模型。开心解郁汤可以降低下丘脑中5-HT1A受体mRNA和大脑皮层中5-HT2A受体mRNA水平，同时升高下丘脑中5-HT2A受体mRNA和大脑皮层中5-HT1A受体mRNA水平，而部分实现其对抑郁症的治疗作用。研究结果为进一步揭示开心解郁汤治疗抑郁症提供了一定的科学依据。 

实施例11、开心解郁汤对慢性脑缺血抑郁症模型大鼠的药效学试验 

(一)试验材料 

1、药品： 

阴性对照品：蒸馏水 

试验药品：开心解郁汤散剂 

2、试验动物：SD大鼠 

(二)双侧颈动脉永久结扎造成慢性脑缺血抑郁症模型大鼠的建立 

动物适应性饲养1周后，随机分为手术组和假手术对照组，手术组又分为模型对照组和中药治疗组。采用双侧颈总动脉永久结扎方法制备脑缺血模型，具体方法如下：大鼠术前禁食12h。用水合氯醛(35mg/kg)腹腔注射麻醉，保证手术期间有自主呼吸。仰卧固定，颈部去毛、强力碘消毒后沿颈正中切开，分离双侧颈总动脉，并套以“5-0”号线。分别结扎双侧颈总动脉的远近端，并从中间剪断，以确保阻断动脉血流。手术注意保温，待动物清醒后送至有通风和空调设备的动物房饲养。假手术对照组除不结扎不剪断双侧颈总动脉外，其余过程与实验组相同。 

(三)试验方法 

1、中药供试品制备及应用 

1.1实验供试品的制备 

按实施例3的方法制备。将市售药材烘干后粉碎，制成超微药粉。按18g微药粉(即18g生药)加0.5％CMC-Na至100ml的方法配制。给药量为1.8g生药/kg/d。 

1.2实验供试品的应用 

术后次日，中药治疗组大鼠给予开心解郁方1ml/100g/d灌胃，连续三天；模型对照组和假手术对照组的大鼠给予饮用水1ml/100g.d灌胃，连续3天。 

2行为学检测 

采用Morris水迷宫法进行大鼠记忆功能的测定。Morris水迷宫(MorrisWaterMaze，MWM)由成都泰盟科技有限公司生产，为一不锈钢的圆形水池，直径130cm，高50cm。池壁标明4个入水点，由此将水池等分为4个象限，任选其中1个象限，正中放置1个直径10cm、高23cm的平台。实验室温度保持在24℃-25℃，水面高过安全平台1cm，水温控制在(26±1)℃。水池四周存在丰富的空间参考线索(门、窗、灯、实验者等)，且保持不变以供大鼠定位平台。迷宫上方安有摄像机，并和录像机以及显示器连接，自动录入大鼠游泳轨迹进行分析。测试程序为定位航行试验(place navigation)：历时6d，每天上午2次，将大鼠面向池壁分别从2个入水点放入水中，记录其在90s内寻找到并爬上平台的时间即逃避潜伏期(escape latency)。如果大鼠在90s未找到平台，则由实验者用手牵引其至平台上，让大鼠停留10s，再放回笼中，潜伏期记为最高分90s。手术以后，在术后3天重新进行水迷宫实验，大鼠每次在90s内寻找到并爬上平台的时间为大鼠的记忆成绩，当日上午2次，计算平均成绩。 

3CBF测定 

手术后第3天，大鼠麻醉后固定于脑立体定位仪(成都泰盟科技有限公司生产)， 按《大鼠脑立体定位图谱》，剪开颅顶皮肤，充分暴露颅骨。将光纤探头PROBE 418-1用支架固定，额叶CBF测定选择前囟前3mm、中线旁2mm点；顶叶选择前囟后4mm、中线旁2mm点。用生物胶粘于测定点。用瑞典Perimed AB公司生产的PeriFlux System5000型激光多普勒血流仪(LDP)，激光二极管光源为2mW氯-氖激光，波长为632·8nm。连续测定每只大鼠额叶、顶叶的CBF变化6min，记录LDP输出信号，经PERISOFT程序处理，计算平均值。 

4统计学分析 

本实验各组资料结果均以 

±s表示，实验组和对照组间比较采用t检验，实验组组间两两比较采用单因素方差分析进行统计学处理。 

(四)试验结果 

1、不同组别大鼠双侧颈总动脉永久结扎后记忆能力测定 

双侧颈总动脉完全阻断后首先出现短暂惊厥，呼吸减慢；术后早期观察动物运动减少，后肢呈“八字”，走路共济失调，或爬行和转圈。Morris水迷宫结果可以看出，经过训练已经学会游迷宫的各组大鼠，双侧颈总动脉永久结扎3天后，记忆功能下降，游泳时间延长。经统计学比较，模型对照组手术前后数据比较差异显著(P＜0.05)；中药治疗组和假手术对照组手术前后数据比较差异无显著性(P＞0.05)；三个组间手术前数据比较均差异无显著性(P＞0.05)；三个组间手术后数据比较：模型对照组手术后数据与中药治疗组手术后数据比较差异无显著性(P＞0.05)，模型对照组手术后数据与假手术对照组手术后数据比较差异显著(P＜0.05)，中药治疗组手术后数据与假手术对照组手术后数据比较差异无显著性(P＞0.05)；数据见表7。 

表7大鼠水迷宫实验成绩 

*术后与模型对照组术后对比P＜0.05 

2不同组别大鼠双侧颈总动脉永久结扎后CBF的测定 

大鼠双侧颈总动脉永久结扎后3天，经统计学比较，三个组别额叶皮质的CBF数据比较：模型对照组与中药治疗组比较差异无显著性(P＞0.05)；模型对照组与假手术对照组比较比较差异显著(P＜0.05)；中药治疗组与假手术对照组比较比较差异显著(P＜0.05)。三个组别顶叶皮质的CBF数据比较：模型对照组与中药治疗组比较差异无显著性(P＞0.05)；模型对照组与假手术对照组比较比较差异显著(P＜0.05)；中药治疗组与假手术对照组比较比较差异显著(P＜0.05)。数据见表8。 

表8大鼠双侧颈动脉永久结扎后额叶、顶叶CBF测定结果 

*假手术对照组分别与模型对照组、中药治疗组对比P＜0.05 

研究结果表明，双侧颈动脉永久结扎造成大鼠的脑缺血现象十分明显，开心解郁汤可以改善抑郁模型大鼠的水迷宫等行为学改变，提高抑郁模型大鼠的脑血流量。 

序列表

<160>6

<210>1

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>1

aagaagagcc tgaacggaca                                                 20

<210>2

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>2

cagaggaagg tgctctttgg                                                 20

<210>3

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>3

agctctgtgc gatctggatt                                                 20

<210>4

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>4

cccctcctta aagaccttcg                                                 20

<210>5

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>5

agacagccgc atcttcttgt                                                 20

<210>6

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>6

cttgccgtgg gtagagtcat                                                 20

Claims (10)

1.一种治疗抑郁症的中药组合物，由下述质量份的原料制成：人参1-6份、远志1-5份、石菖蒲1-5份、茯苓1-6份、巴戟天1-6份、柴胡1-5份、枳实1-5份、赤芍1-6份和甘草1-5份。

2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于：所述中药组合物由下述质量份的原料制成：人参2-4份、远志1-3份、石菖蒲1-3份、茯苓2-4份、巴戟天2-4份、柴胡1-3份、枳实1-3份、赤芍2-4份和甘草1-3份。

3.根据权利要求2所述的中药组合物，其特征在于：所述中药组合物由下述质量份的原料制成：人参3份、远志2份、石菖蒲2份、茯苓3份、巴戟天3份、柴胡2份、枳实2份、赤芍3份和甘草2份。

4.根据权利要求1-3中任一所述中药组合物，其特征在于：所述中药组合物的制备方法，包括下述步骤：将制成所述中药组合物的原料粉碎后混合，加6-10倍质量的水浸泡0.5-2小时，煎煮2-3次，每次煎煮40-60分钟，合并煎煮液，过滤，滤液减压浓缩至每毫升药液相当于生药0.3-3g，即得所述中药组合物。

5.根据权利要求1-3中任一所述中药组合物，其特征在于：所述中药组合物的制备方法，包括下述步骤：将制成所述中药组合物的人参，破碎后用6-10倍质量的60-80％乙醇水溶液回流提取2-3次，每次提1-2小时，每次提取完毕后，滤过，收集合并滤液，回收乙醇，将滤液减压浓缩至每毫升药液含0.1-1g生药的人参醇提浸膏；再将提取后剩余的人参药渣与制成所述中药组合物的其它各味原料合并，用6-10倍质量的水煎煮2-3次，每次煎煮40-60分钟，合并煎液，过滤，滤液与所述人参醇提浸膏合并，再进一步浓缩成每毫升药液相当于生药3g，即得所述中药组合物。

6.根据权利要求1-3中任一所述中药组合物，其特征在于：所述中药组合物的制备方法，包括下述步骤：将制成所述中药组合物的各味原料药在45-55℃干燥后，先破碎成粗粉，再粉碎至细粉，最后过6-9号筛，即得所述中药组合物。

7.根据权利要求1-3中任一所述中药组合物，其特征在于：所述中药组合物的制备方法，包括下述步骤：将制成所述中药组合物的人参粉碎成细粉，待用；将制成所述中药组合物的其它各味原料药合并，用6-10倍质量的水煎煮2-3次，每次煎煮40-60分钟，合并煎液，过滤，滤液减压浓缩至每毫升药液相当于生药0.2-3g，然后向浓缩液中加入人参细粉混匀，即得所述中药组合物。

8.一种治疗抑郁症的中药制剂，其活性成分为权利要求1-7中任一所述的中药组合物。

9.根据权利要求8所述的中药制剂，其特征在于：所述中药制剂的剂型选自下述任意一种：片剂、分散片、胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、丸剂、微丸、散剂、滴丸剂、汤剂、糖浆剂、合剂、口服液体制剂、煎膏剂和浸膏剂。

10.权利要求1-7中任一所述的中药组合物在制备下述任意一种产品中的应用：

1)制备抗抑郁症药物；

2)制备提高高脂合并慢性应激性抑郁症模型大鼠脑内单胺类神经递质含量的产品；

3)制备改善高脂合并慢性应激性抑郁症模型大鼠脑皮层ICAM-1表达的产品；

4)制备提高慢性脑缺血抑郁症模型大鼠脑血流量的产品。