CN102219726A - 一种从加纳籽中提取5-羟基色氨酸的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种提取5-羟基色氨酸的方法,属于有效成分提取技术领域。本发明的提取方法,包括将加纳籽粉碎后在30-70℃的温度下用纯净水超声提取1-4次,每次提取时间为1-4h,加纳籽粉与纯净水的质量比为1∶6-10;提取液过60目滤网后再用0.1-5μm超滤膜过滤;滤液浓缩后经结晶、重结晶后用离心机分离出晶体,在热风循环干燥箱于65-70℃的温度下干燥5h,得5-羟基色氨酸产品。所得产品经HPLC检测纯度大于99%、转换率大于70%。由于整个工艺中不再使用各种有机溶剂,产品中就不存在有机溶剂残留的问题,使产品更加绿色和环保。
Description
技术领域
本发明涉及一种提取5-羟基色氨酸的方法,具体地说涉及从加纳籽中提取5-羟基色氨酸的方法,属于有效成分提取技术领域。
背景技术
5-羟基色氨酸(5-hydroxytrophan,简称5-HTP),化学命名:5-羟基-3-吲哚基-α-氨基丙酸,分子量220.23,其化学结构如下:
5-羟基色氨酸是由必需氨基酸-色氨酸在体内经色氨酸羟化酶催化生成,在体内可以通过脱羧作用转化为5-羟色胺(5-HT),经羟基吲哚氧甲基转化酶作用可转化为5-甲氧基色氨酸(MTrp)。5-羟色胺是人体内重要的神经递质,5-甲氧基色氨酸是褪黑激素的前驱物质,另外5-羟基色氨酸还可以提高饮食中枢的敏感性,可以作为减肥药物,在美国等已作为药品上市,现已受到人们越来越多的关注。因此,5-羟基色氨酸具有非常广泛的利用价值和应用前景。
加纳籽,是热带豆科植物加纳谷物Griffonia simplicifolia的干燥种子,野生于非洲加纳、象牙海岸和多哥等西非国家。种子长圆形,长约1.5厘米,宽约1厘米,种皮呈黑色,有皱纹,胚乳黄绿色,略带豆香味。每年12月到次年2月采收。自古以来西非地区的人们就有把加纳籽作为治疗疾病的历史,叶子以及其汁可用来治疗伤口和肾病,也可用作灌肠剂和***;捣碎的树皮可做成药膏治疗软下疳等。经过研究发现,该种植物的主要活性物质是5-羟色氨酸,其种子中5-HTP含量很高,含量高达10%。
目前国内提取分离5-羟基色氨酸的工艺普遍采用:加纳籽经压榨或溶剂油脱油,甲醇/乙醇提取,浓缩后经活性炭/大孔树脂脱色,经结晶/重结晶提纯。由于加纳籽中含有大量的油以及其它脂溶性物质,即使经过压榨或溶剂油脱油也很难将其去除干净,不利于后续的分离纯化。同时甲醇/乙醇还会将原料中的大分子水溶性色素、糖、蛋白质和果胶等物质同时提取出,这些物质用活性炭/大孔树脂不仅效果难以控制,而且产品的损失也比大,通常5-羟基色氨酸的得率不超过50%。生产成本高,原料浪费极大。这种工艺在制备过程中使用多种有机溶剂,因此在产品的溶剂残留是一个无法回避的问题。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中所存在的从加纳籽中提取5-羟基色氨酸的得率低、产品中存在溶剂残留的问题,提供一种5-羟基色氨酸的得率高、产品中无溶剂残留的5-羟基色氨酸的提取方法。
本发明实现上述目的的技术方案如下:
一种从加纳籽中提取5-羟基色氨酸的方法,包括以下工艺步骤:
(1)超声提取:将加纳籽粉碎至10-30目,在30-70℃的温度下用纯净水超声提取1-4次,每次提取时间为1-4h,加纳籽粉与纯净水的质量比为1∶6-10;
(2)过滤及分离:合并提取液,过60目滤网,滤液再用0.1-5μm超滤膜过滤;
(3)浓缩及结晶:将超滤膜过滤后所得滤液用真空浓缩器浓缩至原体积的1/4-1/5,将浓缩液放入结晶罐中冷却至室温后于4-10℃的温度下静置12-24h析晶,得到粗晶;
(4)重结晶:粗晶用10-15倍质量的纯净水加热溶解,加热温度控制在60-70℃,水溶液趁热过滤,滤液放入结晶罐中冷却至室温后在4℃下静置12-24h析晶;
(5)干燥:用离心机分离出晶体,在热风循环干燥箱于65-70℃的温度下干燥5h,得5-羟基色氨酸产品。
上述从加纳籽中提取5-羟基色氨酸的方法,步骤(1)中超声提取的温度最好为50℃,提取时间最好为1h,提取次数最好为2次,加纳籽粉与纯净水的质量比最好为1∶10。
5-羟基色氨酸在甲醇或乙醇中的溶解性较好,但用它们来提取却存在以下缺点:由于压榨或溶剂油脱油不能将原料中的油脂去除干净,甲醇或乙醇提取时会将其残留的油脂和脂溶性物质同时提出,增大了后续工艺的分离难度,并且还存在溶剂残留的问题。
本发明使用纯净水作为溶剂,利用超声波从加纳籽中提取5-羟基色氨酸,提取液经超滤膜过滤后再浓缩结晶、重结晶,晶体干燥后得到5-羟基色氨酸产品。使用纯净水作溶剂,可以避免脂溶性物质被提出,原料也不再需要榨油或脱油。5-羟基色氨酸在水中的溶解性不如醇中的好,采用超声波提取可以改进这一不足。用水提取会造成各种大分子水溶性色素、糖、蛋白质和果胶被大量提取出,这时再采用活性炭或大孔树脂来脱色去杂则效果不佳,固本发明利用超滤膜的微孔筛分作用去除各种大分子水溶性杂质。所得产品经HPLC检测纯度大于99%、转换率大于70%。由于整个工艺中不再使用各种有机溶剂,产品中就不存在有机溶剂残留的问题,使产品更加绿色和环保。
具体实施方式
下面结合试验例及具体实施方式对本发明作进一步的详细描述。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例,凡基于本发明内容所实现的技术均属于本发明的范围。
试验例
提取方法的考察
水热提取法:取加纳籽粉末1.00g,用50mL蒸馏水50℃提取2h,过滤,滤液定容至50mL。醇热提取法:取加纳籽粉末1.00g,用50mL80%甲醇溶液50℃提取2h,过滤,滤液定容至50mL。超声波水提取法:取加纳籽粉末1.00g,用50mL蒸馏水50℃超声提取2h,过滤,滤液定容至50mL。
3种提取方法各重复3次,滤液定容后适当稀释再用0.45μm滤膜过滤,HPLC检测含量。试验表明醇热提取和超声波水提取法对5-羟基色氨酸提取率较高,但超声波水提取的产品更安全和环保。
提取温度的考察
在加纳籽粉与纯净水的质量比为1∶10,提取时间为2h,提取次数为2次的条件下考察了不同温度下(30,50,70℃)对5-羟基色氨酸得率的影响。在上述温度下5-羟基色氨酸的得率分别为8.2%,10.1%,9.4%。结果表明50℃左右产品提取率高,这可能与温度促进分子扩散和5-羟基色氨酸的稳定性有关。
提取时间的考察
在加纳籽粉与纯净水的质量比为1∶10,提取次数为2次,提取温度为50℃时,研究了不同提取时间(1,2,3,4h)对5-羟基色氨酸得率的影响。在上述提取时间下5-羟基色氨酸的得率分别为9.2%,10.0%,10.2%,10.3%。结果表明,随着提取时间的延长,5-羟基色氨酸的得率在增加,但2h后,提取率增加幅度减小。
提取次数的考察
在加纳籽粉与纯净水的质量比为1∶10,提取温度为50℃,提取时间为2h的条件下研究了不同提取次数(1,2,3,4次)对5-羟基色氨酸得率的影响。在上述提取次数下5-羟基色氨酸的得率分别为6.8%,9.8%,10.1%,10.3%。结果表明,随着提取次数的增加,5-羟基色氨酸的得率在增加,但在2次以后,提取率增加的幅度减小。
加纳籽粉与纯净水的质量比的考察
在提取温度为50℃,提取时间为2h,提取次数为2次的条件下研究了加纳籽粉与纯净水的质量比(1∶6,1∶8,1∶10,1∶12)对5-羟基色氨酸得率的影响。在质量比条件下5-羟基色氨酸的得率分别为6.3%,8.8%,10.0%,10.3%。结果表明,随着料液比的增加,5-羟基色氨酸的得率在增加,但在料液比1∶10以后,提取率增加的幅度很小。
正交试验
在讨论了各单因素影响的基础上,为了讨论各工艺参数相互交叉影响,试验设计了四因素三水平正交试验,结果见表2
精确称取加纳籽粉末1.0g,按表1因素及不同水平进行正交实验。
表1因素水平表
将在不同水平下提取出的样品液抽滤后定容于500mL量瓶中,通过HPLC分别检测出不同水平下的5-羟基色氨酸含量,结果见表2。
表2正交试验结果
表3方差分析
*P<0.1
通过正交试验可知各因素对提取效果的影响程度依次为:A>C>D>B,因素A对提取效果影响显著(P<0.1),其次是因素C(P<0.15),因素B和D对实验影响不显著。因此,结合单因素试验,最优提取工艺条件可选取方案A2B1C2D2,即提取温度50℃,提取时间1h,提取次数2次,料液比1∶10。
实施例
本实施例列举的从加纳籽中提取5-羟基色氨酸的方法,包括以下工艺步骤:
(1)超声提取:将加纳籽粉碎至10目,在大约50℃的温度下用纯净水超声提取2次,每次提取时间为1h,加纳籽粉与纯净水的质量比为1-10;
(2)过滤及分离:合并提取液,过60目滤网,滤液再用0.45μm超滤膜过滤;
(3)浓缩及结晶:将超滤膜过滤后所得滤液用真空浓缩器浓缩至原体积的1/4,将浓缩液放入结晶罐中冷却至室温后于4-10℃的温度下静置12h析晶,得到粗晶;
(4)重结晶:粗晶用10倍质量的纯净水加热溶解,加热温度控制在60-70℃,水溶液趁热过滤,滤液放入结晶罐中冷却至室温后在4℃下静置24h析晶;
(5)干燥:用离心机分离出晶体,在热风循环干燥箱于65-70℃的温度下干燥5h,得5-羟基色氨酸产品。
所得产品经HPLC检测,其纯度大于99%。
Claims (2)
1.一种从加纳籽中提取5-羟基色氨酸的方法,其特征在于包括以下工艺步骤:
(1)超声提取:将加纳籽粉碎至10-30目,在30-70℃的温度下用纯净水超声提取1-4次,每次提取时间为1-4h,加纳籽粉与纯净水的质量比为1∶6-10;
(2)过滤及分离:合并提取液,过60目滤网,滤液再用0.1-5μm超滤膜过滤;
(3)浓缩及结晶:将超滤膜过滤后所得滤液用真空浓缩器浓缩至原体积的1/4-1/5,将浓缩液放入结晶罐中冷却至室温后于4-10℃的温度下静置12-24h析晶,得到粗晶;
(4)重结晶:粗晶用10-15倍质量的纯净水加热溶解,加热温度控制在60-70℃,水溶液趁热过滤,滤液放入结晶罐中冷却至室温后在4℃下静置12-24h析晶;
(5)干燥:用离心机分离出晶体,在热风循环干燥箱于65-70℃的温度下干燥5h,得5-羟基色氨酸产品。
2.根据权利要求1所述的从加纳籽中提取5-羟基色氨酸的方法,其特征在于:步骤(1)中超声提取的温度为50℃,提取时间为1h,提取次数为2次,加纳籽粉与纯净水的质量比为1∶10。
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PB01 | Publication | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
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