CN102219590B - 一种层卧孔菌一级菌种的培养基与培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种层卧孔菌深层发酵一级菌种的培养基配方与培养方法，层卧孔菌培养基选用红糖和玉米粉为发酵的碳源，选用蛋白胨为发酵的氮源，选用维生素VB6为发酵营养。采用所述层卧孔菌发酵培养基得到的一级菌种菌球数平均280-300个/ml、菌球直径0.5-1.5mm、大小均匀、汤汁清，菌球多而细密、菌丝萌发点多，有利于二级发酵。所述层卧孔菌液体培养基制作工艺简单，耗能小，有利于规模化产业生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种真菌培养的培养基与培养方法，具体是一种层卧孔菌深层发酵一级菌种的培养基与培养方法。
背景技术
层卧孔菌又名斑褐孔菌，非褶菌目、多孔菌科、褐孔菌属。形态为子实体多年生，无菌盖，平伏贴胜于基物表面，宽可达20厘米或更大，干时龟裂，菌管多层，每层厚2-3毫米，并逐年缩小，形成扁半球形的子实体，其总厚度达15mm，管孔表面初期锈褐色，后期由于被灰色菌丝所充塞而变为淡烟色至棕灰色，子实体的边缘灰黑色，管孔壁厚，完整，管口圆形，每毫米6-8个。孢子球形或近球形，无色、光滑，5-8μm，无刚毛。生于栎、械等阔叶树的树皮及腐木上，引起木材白腐。层卧孔菌是闽南地区民间治疗冠心病的一种药用真菌，目前仍处在野生状态，药物资源有限，需深入研究和开发。深层培养的菌丝体和发酵液的提取物，经药理实验和临床验证一致认为层卧孔菌是一种很有希望的抗心肌缺血药物，对治疗冠心病和心率失常安全有效。药用真菌是个巨大的宝库，迄今为大众所利用的，只是其中极少部分。
就本申请来说，本申请人之前在(层卧孔菌深层培养的研究，沈国华等，食用菌报1997.4(4)：43-48)发表公开了层卧孔菌的菌种分离，培养基配方，探索了培养条件，得出层卧孔菌一级种培养基配方为麦麸(取浸煮液)3％、蔗糖2％、酵母粉0.2％，培养条件为温度控制在28-30℃，PH自然，三角瓶装量200ml/500ml，转速96转/分，培养96-120小时，投入中试规模批量生产。
层卧孔菌从野生状态转变为工业化生产是可行的，但现有层卧孔菌原发酵配方存在以下问题：
(1)层卧孔菌原液体培养基制作工艺繁琐，耗能大、劳动力强，成本高不利于规模化产业生产。
(2)原发酵培养基培养的一级种的菌球个体大，球径达3-5mm，个数少，菌球数平均为10-30个/ml，由于菌球大而少，菌丝萌发点少，不利于二级发酵。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供一种层卧孔菌一级菌种的培养基，克服了现有层卧孔菌液体培养基培养的一级种的菌球个体大，球径达2-5mm，个数少，菌球数平均为10-30个/ml，由于菌球大而少，菌丝萌发点少，不利于二级发酵的问题。还解决了现有层卧孔菌菌种培养基制作工艺复杂繁琐，耗能大、劳动力强，成本高不利于规模化产业生产的技术问题。
本发明采用的技术方案是提供一种层卧孔菌一级菌种的培养基，包含碳源、氮源和维生素，所述碳源为土豆、地瓜粉、面粉、淀粉、玉米粉、红糖或蔗糖，所述氮源为酵母粉、牛肉膏或蛋白胨，所述维生素为VB1、VB2或VB6。
本发明的有益效果是，经所述层卧孔菌菌种培养基培养得到的菌球多而细密、菌数平均280-300个/ml、菌球直径0.5-1.5mm、大小均匀、汤汁清、菌球多而细密，菌丝萌发点多，有利于二级发酵。所述层卧孔菌液体培养基所用的各个成分在市场上可以大量廉价的采购，耗能小，成本低有利于规模化产业生产。
作为本发明的进一步改进，所述碳源为红糖和玉米粉，所述氮源为蛋白胨，所述维生素为VB6。
作为本发明的进一步改进，所述菌种培养基包含盐类，所述盐类为磷酸二氢钾、硫酸镁、氯化钙中的一种或几种。
作为本发明的进一步改进，所述菌种培养基溶液每100ml包含：玉米粉3g，红糖2g，蛋白胨0.3g，VB6，磷酸二氢钾0.1g，硫酸镁0.05g，氯化钙0.05g。
为解决上述技术问题，本发明采用的另一个技术方案是：提供一种层卧孔菌一级菌种的培养方法，步骤为：
步骤1：配制菌种培养基溶液，所述菌种培养基包含碳源、氮源和维生素，所述碳源为土豆、地瓜粉、面粉、淀粉、玉米粉、红糖或蔗糖，所述氮源为酵母粉、牛肉膏或蛋白胨，所述维生素为VB1、VB2或VB6，按所述培养基称取各配料加水搅拌均匀，装入三角瓶150ml/500ml，调节pH5.5-6.0，0.1Mpa杀菌30分钟。
步骤2：所述步骤1菌种培养基溶液，置恒温往复式摇床，温度控制在27-31℃，转速180转/分-220转/分，培养时间80小时-120小时，即可得到层卧孔菌一级菌种。
作为本发明的进一步改进，上述技术方案所述碳源为红糖和玉米粉，所述氮源为蛋白胨，所述维生素为VB6。
作为本发明的进一步改进，上述技术方案所述菌种培养基包含盐类，所述盐类为磷酸二氢钾、硫酸镁、氯化钙中的一种或几种。
作为本发明的进一步改进，上述技术方案菌种培养基溶液每100ml包含：玉米粉3g，红糖2g，蛋白胨0.3g，VB610mg，磷酸二氢钾0.1g，硫酸镁0.05g，氯化钙0.05g。
本发明的有益效果是，经所述层卧孔菌一级菌种的培养方法培养得到的菌球多而细密、菌球平均280-300个/ml、菌球直径0.5-1.5mm、大小均匀、汤汁清、菌球多而细密，菌丝萌发点多，有利于二级发酵。此方法所需劳动力少，成本低有利于规模化产业生产。
具体实施方式
为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式详予说明。
实施例1
层卧孔菌菌种由三明三真生物科技有限公司提供，母种斜面：PDA培养基。
层卧孔菌一级菌种的培养基为：玉米粉3％、红糖2％、蛋白胨0.3％、VB60.01％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.05％、氯化钙0.05％。
培养基制作方法：按配方称取各配料加水搅拌均匀，装入三角瓶150ml/500ml，pH5.0-6.0，0.1Mpa杀菌30分钟。
层卧孔菌深层培养一级菌种培养条件：摇瓶温度控制在27-31℃，装量150ml/500ml，最适pH为5.5～6.0，转速180转/分-220转/分.培养时间80小时-120小时左右.得到菌球多而细密、菌数平均280-300个/ml，菌球直径0.5-1.5mm，大小均匀、汤汁清、菌丝萌发点多的层卧孔菌一级菌种。
现有的(层卧孔菌深层培养的研究，沈国华等，食用菌报1997.4(4)：43-48)发表公开了层卧孔菌的菌种分离，培养基配方，发酵培养的一级种的菌球个体大，球径达2-5mm，个数少，菌球数平均为10-30个/ml，由于菌球大而少，菌丝萌发点少，不利于二级发酵。
而实施例1得到的一级菌种有利于二级发酵。此培养方法所需劳动力少，成本低有利于规模化产业生产。
实施例2
1、层卧孔菌菌种由三明三真生物科技有限公司提供，母种斜面：PDA培养基。培养方法：一级摇瓶250ml三角锥形瓶，装液量150ml，接种一块0.5cm菌种。置旋转式摇床，转速180转/分，温度27-31℃，每种试验三个重复，结果取其平均值。
生物量：样品制备发酵结束后将培养液取100ml经2000转/分，离心沉降30分钟，去上清液，取菌丝体称量菌丝湿重测定生物量。
2.培养基成分对液体发酵菌丝体产量的影响。
2.1碳源选择试验：将基础培养基(基础培养基含有真菌生长繁殖所需的基本营养物质，可供大多数真菌生长)中的淀粉碳源分别换成3％玉米粉、土豆、地瓜粉、面粉、玉米粉测定菌丝球湿重。
表1淀粉碳源对层卧孔菌菌丝体生物量的影响
表1显示，在供试的淀粉类碳源中，以玉米粉为碳源时，菌丝生物量最大层卧孔菌菌丝最适碳源为玉米粉、表现为菌球多而细密、大小均匀、汤汁清。因此，选用玉米粉为淀粉类碳源。
表2糖类碳源对层卧孔菌菌丝体生物量的影响
| 序号 | F | G |
| 碳源 | 红糖 | 蔗糖 |
| 菌球数(个/ml) | 135 | 47 |
| 生物量(g/100ml) | 45.2 | 38.6 |
| 菌球直径(mm) | 0.5-1.0 | 2-4 |
表2显示，在供试的糖类碳源中，以红糖作为碳源时，菌丝生物量最大，表现为菌球多而细密、大小均匀、汤汁清。因此，选用红糖为糖类碳源。
2.2氮源实验
将基础培养基中的氮源分别换成0.3％的酵母粉、牛肉膏、蛋白胨，配成3个不同氮源配方，每一处理重复3次，取平均值，考察不同氮源对生物量的影响。
表3氮源对层卧孔菌菌丝体生物量的影响
由表3可见，选用蛋白胨得到的生物量明显好于其它氮源。因此选用蛋白胨为发酵的氮源。在3种供试氮源中，层卧孔菌菌丝生长的最适氮源为蛋白胨，表现菌球多而细密、大小均匀、汤汁清。
2.3维生素对层卧孔菌菌丝生长情况影响实验
在基础培养基中分别加入0.01％的VB1、VB6、VB2，配成3个不同维生素配方，每一处理重复3次，取平均值，考察不同维生素源对生物量的影响。
表4维生素对层卧孔菌菌丝体生物量的影响
由表4可见，选用VB6得到的生物量明显好于其它维生素。因此选用VB6为发酵营养。在3种供试维生素中，层卧孔菌菌丝生长的最适维生素为VB6，表现菌球多而细密、大小均匀、汤汁清。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书所作的等效配方或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (2)
1.一种层卧孔菌一级菌种的培养基，其特征在于，菌种培养基溶液每100ml包含：蛋白胨0.3g，红糖2g，玉米粉3g，VB610mg，磷酸二氢钾0.1g，硫酸镁0.05g，氯化钙0.05g。
2.一种层卧孔菌一级菌种的培养方法，其特征在于，所述培养方法包括以下步骤：
步骤1：配制菌种培养基溶液，选择培养基各配料加水搅拌均匀，每100ml菌种培养基溶液包含：蛋白胨0.3g，红糖2g，玉米粉3g，VB610mg，磷酸二氢钾0.1g，硫酸镁0.05g，氯化钙0.05g，调节pH5.5-6.0，三角瓶装量150ml/500ml,0.1Mpa杀菌30分钟；
步骤2：将步骤1中配制的菌种培养基溶液,置于恒温往复式摇床中，温度控制在27-31℃,转速180转/分-220转/分，培养时间80小时-120小时，得到层卧孔菌一级菌种。
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