CN102212123B - 棉花GhLS基因、其编码蛋白及应用 - Google Patents

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CN102212123B CN 201110143752 CN201110143752A CN102212123B CN 102212123 B CN102212123 B CN 102212123B CN 201110143752 CN201110143752 CN 201110143752 CN 201110143752 A CN201110143752 A CN 201110143752A CN 102212123 B CN102212123 B CN 102212123B
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Abstract

本发明涉及棉花GhLS基因及其编码的蛋白，其基因序列如SEQID No.1或2所示，其蛋白序列如SEQ ID No.3或4所示。通过转化拟南芥las4突变体和和水稻mocl突变体，发现GhLS可以使突变体恢复分枝的表型，因而GhLS基因具有控制植物(拟南芥、水稻、棉花等)分枝的功能，有望对棉花各类分枝的形成进行调控进而对株型定向设计，以提高棉株生产力。

Description

棉花GhLS基因、其编码蛋白及应用
技术领域
本发明属于基因工程领域，具体地说，涉及棉花GhLS基因、其编码蛋白及应用。
背景技术
棉花是世界上最主要的纤维作物之一，是纺织和精细化工等工业的原料。由于棉花具有果枝、营养枝和赘芽组成的复杂分枝模式和顶芽无限生长的习性，在生产上需要耗费大量劳动力进行打顶、打杈等整枝管理。对棉花分枝机制的研究有着极其重要的意义。
近年来对植物分枝发育的研究取得了很大进展，对分枝的发育机制进行了生理生化及基因组学等多方面的研究。在豌豆、拟南芥、矮牵牛、水稻、番茄和玉米中获得很多与分枝发育相关的突变体。这些突变的基因有的促进侧枝的形成，有的则抑制侧枝的伸长。如Ls/LAS/MOC1和Blind/RAX1抑制叶腋处形成分生组织；MAX2/RMS4/D3、MAX3/RMS5/HTD1和MAX4/RMS1/DAD1控制腋芽向外生长。了解植物分枝机理不仅具有重要的理论意义，而且它还直接影响到农业生产。在生产中需要人工对棉花进行整枝、果树进行修剪等。如能利用分子生物学方法控制植物的分枝，将会节约劳动成本，产生巨大的经济效益。
调控已知基因的转录水平的蛋白称为转录因子。通常转录因子通过序列特异DNA结合位点调控基因的表达。转录因子是转录起始过程中RNA聚合酶所需的辅助因子。真核生物基因在无转录因子时处于不表达状态，RNA聚合酶自身无法启动基因转录，只有当转录因子结合在其识别的DNA序列上后，基因才开始表达。植物的生长发育是有大量的转录因子，包括NAC、AP2、GRAS、YABBY、ARF和TCP等参与调控的过程。而调控植物分枝的转录因子主要有两大类GRAS家族和TCP家族。
已报道的GRAS家族转录因子，包括促进植物分枝形成的番茄LS、拟南芥LAS和水稻MOC1基因，它们之间的同源性较高，而未见棉花中GRAS家族转录因子及其功能的相关报道。
发明内容
本发明的目的是提供棉花GhLS基因、其编码蛋白及应用。
为了实现本发明目的，本发明的一种棉花GhLS基因编码的蛋白，其具有SEQ ID No.3或4所示的氨基酸序列或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能(控制棉花分枝的功能)的氨基酸序列。例如，在非活性区段，将第32位的Q替换为T，或是将第110位的L缺失，或是在320位添加G均不会影响蛋白的功能。
本发明还提供棉花GhLS基因，其具有SEQ ID No.1或2所示的核苷酸序列。
本发明还提供含有棉花GhLS基因的载体以及含有该载体的宿主细胞。
本发明还提供含有棉花GhLS基因的转化植物细胞。
本发明进一步提供棉花GhLS基因在促进植物分枝发育中的应用，优选所述的植物为拟南芥、水稻、棉花等。
借由上述技术方案，本发明至少具有下列优点及有益效果：
(1)本发明提供了棉花GhLS基因(核苷酸序列如SEQ ID No.1或2所示)及其编码的蛋白(氨基酸序列如SEQ ID No.3或4所示)。
(2)通过转化拟南芥las4突变体和和水稻mocl突变体，发现GhLS可以使突变体恢复分枝的表型，因而GhLS基因具有控制植物(拟南芥、水稻、棉花等)分枝的功能，有望对棉花各类分枝的形成进行调控进而对株型定向设计，以提高棉株生产力。
附图说明
图1为本发明GRAS家族同源序列蛋白比对结果。
图2为载体pCAMBIA2301结构示意图。
图3为棉花GhLS基因转化拟南芥后植物的生长情况，其中，1为las-4突变体；2为Col-0；3为las-4突变体转化pCAMBIA2301载体；4为las-4突变体转化GhLS基因载体。
图4为植物表达载体pCAMBIA1305.1结构示意图。
图5为棉花GhLS基因转化水稻后植物的生长情况，其中，1为mocl突变体转化空载体pCAMBIA1305.1AP；2和3为mocl突变体转化Actin1 promoter：GhLS。
图6为酵母双杂交饵载体pGBKT7结构示意图。
图7为酵母双杂验证棉花GhLS的转录激活活性结果。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
以下实施例中使用的陆地棉(Gossypium hirsutum)品种新陆早13号为市售商品，水稻单分蘖mocl突变体由中国科学院遗传与发育生物学研究所李家洋课题组惠赠，该mocl突变体已在文献(***，Control of tillering in rice，nature，2003)中公开。
实施例1  棉花GhLS基因的获得
本发明的GhLS基因是采用同源序列法从陆地棉(Gossypiumhirsutum)品种新陆早13号克隆得到的，通过从其它植物中克隆出来的GRAS家族中控制植物分枝的亚家族成员的氨基酸序列比对，包括拟南芥AtLAS、水稻OsMOC1和番茄LeLS。根据它们VHIID区的两段保守序列TANQATL、QWPPLMQ和羧基端保守序列RLHYPSE分别设计了兼并引物GhLSF1、GhLSF2、GhLSR。首先以棉花基因组DNA为模板，用GhLSF1和GhLSR引物组合进行了第一轮扩增，没有出现特异性条带；再以第一轮PCR产物为模板，用GhLSF2和GhLSR引物组合进行了第二轮扩增，获得了680bp长的核心片段。将此核心片段进行了克隆和序列分析，证明确实编码预期的GRAS家族转录因子。
PCR反应体系如下(20μL)：
Figure BDA0000064940600000041
反应条件如下：94℃3min；94℃30s，45℃30s，72℃1min，5个循环；94℃30s，50℃30s，72℃1min，35个循环；72℃10min。
为了获得全长基因序列，根据核心片段的序列设计了5’RACE引物GhLS5RGSP1和GhLS5RGSP2以及3’RACE引物GhLS3RGSP1和GhLS3RGSP2，以棉花侧芽的总RNA为模板分离了该基因的5’端和3’端cDNA片段。5’RACE后得到了683bp长的片段，3’RACE后得到了315bp长的片段。将这三个片段拼接后得到全长1459bp的核苷酸序列。
5’RACE操作步骤：
(1)准备第一链cDNA的合成：
总RNA    1-3μL(相当于50ng-1μg)
5′-CDS引物                1μL
SMART II A oligo           1μL
加RNase free water到5μL，混匀后快速离心。
(2)70℃温育2min，然后移至冰上放置2min，快速离心。
(3)加入反应物：
Figure BDA0000064940600000051
混匀后快速离心。
(4)42℃金属浴孵育1.5h，加入20μL Tricine-EDTA缓冲液稀释第一链反应产物。
(5)72℃温育7min，反转产物可于-20℃保存。
(6)配制PCR反应液：
Figure BDA0000064940600000052
混匀后快速离心。
(7)反应条件如下：94℃30s，72℃3min，5个循环；94℃30s，70℃30s，72℃3min，5个循环；94℃30s，68℃30s，72℃3min，25个循环。经过两轮PCR后，电泳检测PCR产物，回收目的条带。
3’RACE操作步骤：
反转录反应。反应体系及反应条件如下：
Figure BDA0000064940600000061
反应条件：42℃60min；70℃15min。反应结束后可以进行下一步实验或将反应液保存于-20℃。
(2)套式PCR反应
Outer PCR反应，反应体系及反应条件如下：
Figure BDA0000064940600000062
反应条件：94℃3min；94℃30s，55℃30s，72℃3min，30个循环；72℃10min。
Inner PCR反应，反应体系及反应条件如下：
Figure BDA0000064940600000063
Figure BDA0000064940600000071
反应条件：94℃3min；94℃30s，55℃30s，72℃3min，30个循环；72℃10min。取5～10μL的PCR反应液进行琼脂糖凝胶电泳，确认3’RACE PCR扩增产物，回收目的条带。
根据拼接序列设计引物GhLS ProSP1、GhLS ProSP2和GhLSProSP3，以棉花基因组DNA为模板，通过Genome Walking获得2370bp长的启动子片段。据此片段设计引物GhLSPFF和GhLSPFR以基因组DNA为模板，用高保真Taq酶扩增获得了2409bp该基因的启动子区。使用TaKaRa Genome Walking Kit同种AP引物进行三次巢式PCR扩增基因启动子区，操作步骤如下：
(1)配制1st PCR反应液：
Figure BDA0000064940600000072
Figure BDA0000064940600000081
反应条件：94℃1min；98℃1min；94℃30s，65℃1min，72℃2min，5个循环；94℃30s；25℃3min；72℃2min；94℃30s，65℃1min，72℃2min，94℃30s，65℃1min，72℃2min，94℃30s，44℃1min，72℃2min，15个循环；72℃10min。
将1st PCR反应液稀释1～1000倍后，取1μL作为2nd PCR反应的模板。
(2)配制2nd PCR反应液
Figure BDA0000064940600000082
反应条件：94℃30s，65℃1min，72℃2min，94℃30s，65℃1min，72℃2min，94℃30s，44℃1min，72℃2min，15个循环；72℃10min。
将1st PCR反应液稀释1～1000倍后，取1μL作为2nd PCR反应的模板。
(3)配制3rd PCR反应液，同2nd PCR反应液加样量，模板为稀释后的2nd PCR反应产物，基因特异引物用GhLSProSP3，反应条件，同2nd PCR反应条件。
取1st，2nd，3rd PCR反应液各5μL，使用1％的琼脂糖凝胶进行电泳。
试剂盒包括4种AP引物应分别进行巢式PCR，取条带最大的3rdPCR切胶回收电泳条带。
通过分析拼接序列发现克隆基因无内含子，根据拼接序列设计引物GhLSFLF和GhLSFLR，以基因组DNA为PCR模板，用高保真Taq酶扩增获得了该基因的全长基因组DNA，并将这个片段进行克隆和序列测定。
反应体系如下：
Figure BDA0000064940600000091
反应程序为：98℃变性10s，60℃退火5s，72℃延伸2min，35个循环。PCR产物经电泳检测后，回收目的条带。
将所测得的序列和在NCBI网站上公布的同源序列进行Blast比较分析，发现该基因与控制分枝的番茄LS，拟南芥LAS和水稻MOC1等GRAS家族基因同源性极高，而且此前还没有从棉花中克隆出此类基因，所以我们把该基因命名为陆地棉LS基因，简称GhLS。GhLS基因组核苷酸DNA序列总长1459bp，启动子区长为2148bp，5’UTR区长为66bp，3’UTR区长为79bp，无内含子，其开放阅读框长度为1314bp核苷酸(SEQ ID No.1或SEQ ID No.2)，编码437个氨基酸(SEQ IDNo.3或SEQ ID No.4)。
将GhLS蛋白序列与其它植物中克隆出来的LS蛋白序列进行了比对，包括拟南芥AtLAS、水稻OsMOC1和番茄LeLS。发现GhLS同样具有VHIID保守区，并且在氨基端与其它成员的同源性也很高。
将GhLS与已经克隆的植物GRAS转录因子进行了进化树分析，使用的氨基酸序列包括：拟南芥中的AtGAI(NP_172945)、AtRGA1(NP_178266)、AtPAT1(NP_199626)、AtSHR(NP_195480)、AtSCR(NP_190990)、AtLAS(NP_175954)；水稻中的OsMOC1(AAP13049)、OsSLR1(BAE96289)；番茄中的LeLS(AAD05242)和矮牵牛PhHAM(AAM90848)。结果显示GhLS基因与控制营养生长期侧枝分生组织形成的番茄LeLS等基因位于同一个大的进化枝上。GRAS家族同源序列蛋白比对结果如图1所示，将GhLS蛋白序列与其它植物中克隆出来的LS蛋白序列进行了比对，包括拟南芥AtLAS、水稻OsMOC1和番茄LeLS。发现GhLS同样具有VHIID保守区，并且在氨基端与其它成员的同源性也很高。
实施例1中涉及的引物序列如表1所示。
表1  实施例1中涉及的引物序列
  引物名称   引物序列
  GhLSF1   5’-ACBGCKAAYCAAGCKATYYTV-3’
  GhLSF2   5’-CAATGGCCWCCRTTRATGCAA-3’
  GhLSR   5’-TTCWGAWGGRTAATGAAGTCT-3’
  GhLS5RGSP1   5’-GCTTCGTCGGGTAGGATCGTGACCATGG-3’
  GhLS5RGSP2   5’-CCGGTTCCAGTAATTCGAAGCATCGGCG-3’
  GhLS3RGSP1   5’-GTTCGTTGAGGCCTTGGACT-3’
  GhLS3RGSP2   5’-CACGAGAGATTGGAGACATG-3’
  GhLS ProSP1   5’-ATGGTGGTGATGGTGGTGGTGAAGAC-3’
  GhLS ProSP2   5’-AGATTGAGAAACAAGCTCCGCGCAAC-3’
  GhLS ProSP3   5’-ACGGTGTTGGTGGTGTAGATCTGAAG-3’
  GhLSPFF   5’-AGACAAAAGGCGAATGGCAGC-3’
  GhLSPFR   5’-CGGTGTTGGTGGTGTAGATCT-3’
  GhLSFLF   5’-GATGAATTCATGGCGAAATGCAATCTGACTC-3’
  GhLSFLR   5’-GACTCTAGAGCATAGTGAGGGTTTTGGGAT-3’
实施例2  棉花GhLS基因转化拟南芥
本发明将GhLS基因克隆至植物表达载体pCAMBIA 2301(购自pCAMBIA公司，载体结构如图2所示)，并在大肠杆菌DH5α中扩繁。通过农杆菌介导转化方法，将pCAMBIA 2301携带的GhLS基因转入拟南芥，共获得12株转基因拟南芥。
将基因克隆至载体、载体在大肠杆菌DH5α中扩繁以及农杆菌介导转化的过程如下：
1、载体的构建
先用EcoR I和Xba I双酶切质粒pCAMBIA2301，回收载体大片段，再与目的基因连接。
连接体系：
Figure BDA0000064940600000111
2、载体在大肠杆菌DH5α中扩繁过程如下：
质粒载体和外源片断得摩尔量为1∶3。连接过夜后转入DH5α内，涂到含卡那霉素抗性的平板进行阳性筛选。因GhLS 3’-UTR区较短，因此为了利用载体上的NOS 3’UTR，再用SalI和PmlI(形成平端)切除35S：GUS片段，然后经Klenow DNA聚合酶补平Sal I粘性末端，再自连环化。转入DH5α内，涂与卡那霉素抗性平板进行阳性筛选。
筛选到的阳性克隆用酶切鉴定。BstE II单切，应切下一条481bp的条带及载体大片段；EcoR I、BstE II双切，应切下3114bp和481bp两条带及载体大片段。最后将构建好的载体质粒转化农杆菌GV3101。
3、转化农杆菌感受态细胞的步骤如下：
(1)取-70℃保存的农杆菌于含50μg/mL利福平(Rifampicin)的YEP平板上划线，28℃培养2～3d。
(2)挑取单菌落接种于5mL YEP液体培养基中，220rpm 28℃振荡培养12～16h。
(3)取2mL菌液转接于100mL YEP液体培养基中，28℃220rpm振荡培养至OD600＝0.4～0.6。
(4)转入无菌离心管，5000rpm离心5min，弃上清。
(5)每50mL菌液加入5mL预冷的0.1M CaCl2溶液，轻轻悬浮细胞，冰上放置20min。4℃5000rpm离心5min，弃上清。
(6)每50mL菌液加入2mL预冷的含15％甘油的0.1M CaCl2溶液，轻轻悬浮细胞。
(7)将农杆菌悬浮液分装于1.5mL无菌的EP管中，每管100μL(可冻存于-70℃)。
(8)取1μg左右的质粒DNA加入到100μL农杆菌感受态细胞中，混匀后冰浴30min。
(9)液氮速冻5min，再在37℃水浴5min。
(10)马上冰浴2min，加入800μL YEP液体培养基，28℃175rpm振荡培养2～4h后，涂在含50μg/ml卡那霉素的YEP固体平板上，28℃培养2～3d到形成单菌落。
(11)挑取单菌落，PCR验证。阳性克隆用于转化植物。
4、农杆菌接到的拟南芥转化过程如下：
拟南芥受体材料准备：拟南芥移栽后，其主苔长至10～15cm，生成1～2个角果时即可用于转化试验。为得到较多花序，可将顶芽除去，促使更多侧芽生长，转化前剪去已开花的花蕾和已长成的角果。
挑取已活化并含有目的载体的GV3101单菌落于5mL YEB液体培养基(Kan 50mg/L，Rif 50mg/L)中，28℃220rpm震荡培养12～16h，取20～60μL菌液涂与含相应抗生素的平板上28℃黑暗培养2～3d，收集菌体与30mL液体YEB使OD600值达到2.0，将菌液加入到含120mL转化介质的塑料袋中用于转化。
将花序浸入转化液10s，轻轻抖落多余菌液，侧放并避光保湿处理16～24h，将转化好的植株放到培养架上继续光照培养。1周后以同样的方法重新转染一次。收集T1代种子。
5、转基因阳性苗的筛选过程如下：
T1代种子经消毒后，重悬与0.05％的琼脂溶液中(40μL种子/ml琼脂)。在含卡纳霉素90x90x25mm的MS培养基平板铺种1mL混合物，4℃冰箱春化3d，转基因阳性苗(T1代植株)可以长成真叶，而不含目的基因片段的幼苗则不能成活，将阳性苗移栽。
用棉花GhLS基因转化拟南芥las4突变体(购自拟南芥生物资源中心，ABRC)，观察莲座叶片处分枝情况(图3)，转基因苗同野生型拟南芥相似，在莲座叶出长出侧枝，对照(含有空载体pCAMBIA2301的转化拟南芥las4突变体)没有侧枝长出。表明GhLS基因能够恢复拟南芥las4突变体分枝的表型。
实施例3  棉花GhLS基因转化水稻
本发明将植物表达载体pCAMBIA1305.1(购自pCAMBIA公司，载体结构如图4所示)进行了改造，***组成型高表达的水稻Actin1启动子。再将GhLS基因克隆至改造后的的植物表达载体pCAMBIA1305.1AP中的组成型高表达的水稻Actin1启动子下游。并在大肠杆菌DH5α中扩繁。通过农杆菌介导转化方法，将pCAMBIA1305.1AP携带的GhLS基因和不携带GhLS基因的植物表达载体pCAMBIA1305.1AP转入水稻，每个载体获得10个以上的转基因株系，每个株系有5-6株转基因水稻。
转化水稻。结果表明，通过同源序列克隆的GhLS基因具有控制植物分枝的功能。
1、基因载体的构建
先用NcoI和PmlI双酶切植物表达载体pCAMBIA1305.1AP切除上面的GUS片段后回收载体大片段，再与GhLS基因片段连接。连接过夜后转入DH5α内，涂到含卡那霉素平板上进行阳性筛选。
筛选的阳性克隆用酶切鉴定，NcoI单切应切下一条464bp的条带及载体大片段；NcoI和PmlI双酶切应切下两条带464bp和611bp及载体大片段；KpnI和NcoI双酶切应切下两条带464bp和1723bp及载体大片段。最后将构建好的载体质粒转化农杆菌EHA105，用于水稻的转化试验。
2、水稻mocl突变体的转化
将mocl突变体的成熟种子脱壳灭菌，接种到诱导愈伤的培养基中。培养3周后，从盾片处生长出愈伤组织，挑选生长旺盛，颜色浅黄，比较松散的胚性愈伤，用作转化的受体。通过农杆菌EHA105菌株介导转化方法，将pCAMBIA1305.1AP携带的GhLS基因和不携带GhLS基因的植物表达载体pCAMBIA1305.1AP转入水稻，分别侵染水稻愈伤，在黑暗处25℃培养3天后，在含有50mg/L潮霉素的选择培养基上筛选抗性愈伤和转基因植株。将潮霉素抗性植株在阴凉处炼苗，几天后移栽到水田。携带GhLS基因的植物表达载体pCAMBIA1305.1和植物表达载体pCAMBIA1305.1分别获得了10个以上转基因株系，每个株系大约有5-6株。
将上述构建的表达载体(Actin1 promoter：GhLS载体)经农杆菌介导对水稻单分蘖mocl突变体进行转化，对所获得的转基因植株进行表型鉴定，结果表明转基因植株恢复分蘖能力(图5)，从而验证了GhLS基因具有调控分枝形成的功能。
实施例4  酵母双杂验证棉花GhLS的转录激活活性
本发明将GhLS基因克隆至酵母双杂交诱饵载体pGBKT7(购自Clontech公司，载体结构如图6所示)中的GAL4转录因子的DNA结合结构域(GAL4BD)融合，看是否能够激活GAL4调控的报告基因的表达。结果表明，GhLS不具有转录激活的活性。
1、载体的构建过程如下：
先用NdeI和SalI双酶切pGBKT7，然后连入目的片段。连接过夜后转入DH5α内，涂到含相应氨苄霉素的平板进行阳性筛选。
筛选的阳性克隆用酶切鉴定，NdeI和SalI双酶切得到一条1.3kb的条带及载体大片段。最后将构建好的载体质粒转化酵母菌Y187，转化过程如下：
2、酵感受态的制备
(1)首先将酵母菌Y187在YPDA平板上划线，30℃培养3d至出现单菌落。
(2)挑取直径为2～3mm单菌落至3mL液体YPDA，用15mL离心管，30℃振荡培养8～12h。
(3)取10μL菌液接种与50mL液体YPDA，230～250rpm振荡培养16～20h至OD600为0.15～0.3。700g室温离心5min，弃上清。
(4)加100mL液体YPDA 30℃250rpm振荡培养3～5h，至OD600为0.4～0.5。700g室温离心5min，弃上清。
(5)加60mL无菌水吹吸混匀，700g室温离心5min，弃上清。
(6)加3mL 1.1倍TE/LiAc，吹吸混匀后分装到2个1.5mL EP管，最大转速离心15s，弃上清。
(7)每管加入600μL 1.1倍TE/LiAc，室温储存。
3、.转化酵母感受态
(1)取0.1～1μg质粒DNA和5μL Herring Testes Carrier DNA加入50μL酵母感受态细胞，轻轻涡旋混匀。
(2)加0.5ml PEG/LiAc溶液轻轻涡旋混匀。
(3)30℃温育30min每10min混匀1次。
(4)加20mL DMSO混匀，42℃水浴15min每5min轻轻涡旋混匀1次。
(5)冰浴10min，最大转速离心15s，弃上清。
(6)加200μL 0.9％(w/v)NaCl重悬细胞。
(7)涂菌与SD/-Trp平板，30℃培养3～6d。
将转化得到的含有pGBKT7-GhLS和pGBKT7的酵母菌Y187(购自Clontech公司)及正对照和负对照四种菌在SD/-Trp、SD/-Ade/-His/-Trp/X-α-Gal平板上做倍比稀释结果如图7所示。四种菌在SD/-Trp上具有相同的生长活性，而在三种缺陷型培养基上只有正对照生长，表明GhLS没有自身激活活性。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Figure IDA0000064940690000011
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Claims (8)

1.棉花GhLS基因编码的蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQID No.3所示。
2.编码权利要求1所述蛋白的基因。
3.如权利要求2所述的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQID No.1所示。
4.含有权利要求2或3所述基因的载体。
5.含有权利要求4所述载体的宿主细胞。
6.含有权利要求2或3所述基因的转化植物细胞。
7.权利要求2或3所述的基因在促进植物分枝发育中的应用。
8.如权利要求7所述的应用，其中所述的植物为拟南芥、水稻、棉花。
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植物分枝发育的调控机制;李亚栋等;《中国农业科技导报》;20091231;第11卷(第4期);1-9 *
植物分枝性状遗传机理的研究进展;史俊等;《安徽农学通报》;20101231;第16卷(第24期);32-33,99 *

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