CN102203063A - 咔唑化合物及其治疗用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了通用结构式(I)和(II)的化合物以及所述化合物及其盐和水合物作为治疗药的用途。可治疗的疾病和病症包括癌症、炎性疾病和病症、和免疫缺陷疾病。

Description

咔唑化合物及其治疗用途
相关申请的交叉引用
本申请要求于2008年10月6日提交的美国临时专利申请第61/102,913号的权益，该临时专利申请通过引用其全文结合到本文中。
发明领域
本发明涉及咔唑化合物、制备所述化合物的方法、含有所述化合物的药物组合物和它们作为治疗药的用途。具体地说，本发明涉及咔唑化合物及其在多个治疗领域中的用途，包括癌症的治疗。
发明背景
在发达国家的世界中，随着人口的老龄化，人类癌症的频率不断增加。对于某些类型的癌症和在诊断上疾病的分期，近年来尽管进行了广泛深入的研究，但是发病率和死亡率一直没有显著地改善。细胞死亡的诱导是最引人注目的癌症治疗策略之一。存在鉴定能够诱导肿瘤细胞中的细胞死亡和/或增强化疗和放疗的药物的巨大需求。
发明概述
本发明涉及诱导细胞死亡的化合物和组合物，还涉及所述化合物在需要这种治疗的个体中用于治疗癌症和其它病症的治疗用途。本发明还涉及制备所述治疗用化合物的方法。
更具体地说，本发明涉及用于治疗诸如癌症、炎性疾病、微生物感染、病毒感染和原生动物感染等疾病和病症的化合物和方法。所述化合物可用于包括将治疗有效量的结构式(I)化合物给予有需要的个体的方法。
具体地说，本发明涉及具有结构式(I)的咔唑化合物或其药学上可接受的盐或水合物：
Figure BPA00001347451800021
其中Ra选自氢、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、ORe、N(Re)2和SRe；两者中择一地，或者Ra和R1或者NRe和R1与它们所连接的碳原子一起形成5元或6元脂肪族碳环或杂环；
Rb选自氢、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、ORe、N(Re)2和SRe，两者中择一地，或者Rb和R6或者NRe和R6与它们所连接的碳原子一起形成5元或6元脂肪族碳环或5元或6元脂肪族碳环或杂环；
Rc选自氢、C1-6烷基、C1-6羟基烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基和C(＝O)Re，或者Rc和Rd结合在一起形成5元、6元或7元脂肪族环，任选含有氧原子；
Rd选自氢、C1-6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基和C(＝O)Re，或者Rd和R7与它们所连接的原子一起形成5元或6元脂肪族环；
Re独立选自氢、C1-6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基，或者两个Re基团与它们所连接的氮结合在一起形成5元或6元脂肪族环；
R1、R2、R3、R4、R5和R6独立选自氢、C1-6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、卤素、ORe、C(＝O)Re、C(＝O)ORe、OC(＝O)Re、C(＝O)N(Re)2、C(＝O)NReSO2Re、N(Re)2、NReC(＝O)Re、NReC(＝O)N(Re)2、CN、NO2、CF3、OCF3、SRe、SORe、SO2Re、SO2N(Re)2和OSO2CF3；
R7选自氢、C1-6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基；且
n为0、1、2、3、4或5。
本发明还涉及具有结构式(II)的咔唑化合物或其药学上可接受的盐或水合物：
Figure BPA00001347451800031
其中Rf选自氢、C1-6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基和C(＝O)Rh，或者Rf和Rg结合在一起形成任选含有氧原子的5元、6元或7元脂肪族环；
Rg选自氢、C1-6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基和C(＝O)Rh，或者Rg和R8与它们所连接的原子一起形成5元或6元脂肪族环；
Rh独立选自氢、C1-6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基，或者两个Rh基团与它们所连接的氮结合在一起形成5元或6元脂肪族环；
R8选自氢、C1-6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基；
R9、R10、R11、R12、R13和R14独立选自氢、C1-6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、卤素、ORh、C(＝O)Rh、C(＝O)ORh、OC(＝O)Rh、C(＝O)N(Rh)2、C(＝O)NRhSO2Rh、N(Rh)2、NReC(＝O)Rh、NRhC(＝O)N(Rh)2、CN、NO2、CF3、OCF3、SRh、SORh、SO2Rh、SO2N(Rh)2和OSO2CF3；
p为0、1、2、3、4或5，
前提条件是当p为2时，Rf和Rg中的一个不为乙基。
可以按照本发明进行治疗的疾病或病症包括例如癌症、炎症、自身免疫性疾病、微生物感染、原生动物感染、病毒感染、移植物抗宿主病、与HIV感染相关的疾病或癌变前的细胞。可以治疗的癌症形式包括但不限于肾细胞癌、肉瘤、***癌、乳癌、胰腺癌、骨髓瘤、骨髓性白血病和淋巴母细胞性白血病、成神经细胞瘤、成胶质细胞瘤或由HTLV感染引起的癌症。
在一些实施方案中，所述化合物具有通用结构式(Ia)：
其中Ra为C1-3烷基、C1-4卤代烷基、C3-5环烷基、N(Re)2或ORe，或者Ra和R1与它们所连接的碳原子一起形成5元或6元脂肪族碳环；
Rb为C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C3-5环烷基、N(Re)2或ORe，或者Rb和R6与它们所连接的碳原子一起形成5元或6元脂肪族碳环或者含有一个氮原子的5元或6元脂肪族环；
Rc为C1-6烷基、C3-5环烷基或C1-3羟基烷基；
Rd为氢、C1-4烷基或C3-5环烷基，或者Rd和R7与它们所连接的原子一起形成含有一个氮原子的5元或6元脂肪族环，或者Rc和Rd结合在一起形成6元或7元脂肪族环，任选含有氧原子；
Re独立地为氢或C1-3烷基；
R1为氢或C1-3烷基；
R2为氢、羟基或C1-3烷氧基；
R3和R4独立地为氢或C1-3烷基；
R5为氢、羟基、C1-3烷氧基或卤素；
R6为氢、C1-3烷基、C1-3烷氧基或卤素；
R7为氢或C1-3烷基；且
n为0、1、2、3、4或5，
或其药学上可接受的盐或水合物。
在其它的实施方案中，所述化合物具有通用结构式(Ib)：
Figure BPA00001347451800051
其中Ra为甲基、乙基、正丙基、环丙基、NH(CH3)或OCH3，或者Ra和R1与它们所连接的碳原子一起形成5元脂肪族碳环；
Rb为甲基、乙基、正丙基、环丙基、NH(CH3)或OCH3，或者Rb和R6与它们所连接的碳原子一起形成5元脂肪族碳环或含有一个氮原子的5元脂肪族环；
Rc为甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丁基或2-羟基乙基；
Rd为氢、甲基、乙基或环丁基，或者Rd和R7与它们所连接的原子一起形成含有一个氮原子的5元脂肪族环；或者Rc和Rd结合在一起形成吗啉代部分、四氢呋喃基部分、哌啶基部分、
Figure BPA00001347451800052
部分或
Figure BPA00001347451800053
部分；
R1为氢；
R2为氢、羟基或甲氧基；
R3和R4为氢；
R5为氢、羟基、甲氧基或氟；
R6为氢、甲基、甲氧基或氟；
R7为氢；且
n为1或2，
或其药学上可接受的盐或水合物。
在其它的实施方案中，所述化合物具有通用结构式(IIa)：
Figure BPA00001347451800061
其中Rf为C1-6烷基；
Rg为氢或C1-4烷基，或者Rg和R8与它们所连接的原子一起形成含有一个氮原子的5元或6元脂肪族环；
R9为氢或C1-3烷基；
R10为氢、羟基或C1-3烷氧基；
R11和R12独立地为氢或C1-3烷基；
R13为氢、羟基、C1-3烷氧基或卤素；
R14为氢、C1-3烷基或C1-3烷氧基；
R8为氢或C1-3烷基；且
p为0、1、2、3、4或5，
前提条件是当p为2时，Rf和Rg中的一个不为乙基，
或其药学上可接受的盐或水合物。
在又一些实施方案中，所述化合物具有结构式(IIb)：
Figure BPA00001347451800062
其中Rf为甲基或乙基；
Rg为氢或甲基，或者Rg和R8与它们所连接的原子一起形成含有一个氮原子的5元脂肪族环；
R8为氢；且
p为1或2，
或其药学上可接受的盐或水合物。
本发明的一个方面是提供一种治疗病症或疾病的方法，即通过将治疗有效量的结构式(I)、(Ia)、(Ib)、(II)、(IIa)或(IIb)的一种或多种化合物或包含结构式(I)、(Ia)、(Ib)、(II)、(IIa)或(IIb)化合物中的一种或多种的组合物给予有需要的个体。所述组合物可以还包含TNF家族多肽的死亡受体激活剂。所述激活剂可以是TNF多肽，例如NGF、CD40L、CD137L/4-1BBL、TNF-α、CD134L/OX40L、CD27L/CD70、FasL/CD95、CD30L、TNF-β/LT-α、LT-β和TRAIL中的一种或多种。
本发明的另一个方面是提供包含结构式(I)或(II)的一种或多种化合物的药物组合物，及所述组合物在治疗性治疗疾病或病症中的用途。
本发明的又一个方面是提供一种治疗正在进行化学治疗性治疗或放射治疗性治疗的个体的医学病症的方法，该方法包括将结构式(I)和/或(II)化合物与化疗药、放疗药或化疗药和放疗药两者一起给予所述个体。用该方法治疗的一种非限制性适应症是癌症。
根据下面对本发明的优选实施方案的非限制性详细描述，本发明的上述各方面和另外的方面将会变得显而易见。
附图简述
图1a是NF-κB活性相对于DMSO对照的倍数对本发明咔唑的浓度绘制的曲线图；
图1b是本发明咔唑对p53活化和NF-κB抑制的EC50(μM)的柱状图；
图2a至图2k是％细胞生存率对用本发明咔唑处理的各种肿瘤细胞的浓度(μM)绘制的曲线图；
图3含有在HCT 116皮下(sc)异种移植物模型中使用实施例7的化合物后肿瘤体积对治疗天数绘制的曲线图；
图4是显示有活性的咔唑化合物的三维分析的示意图；
图5是显示无活性的咔唑化合物的三维分析的示意图；
图6是显示有活性的咔唑化合物即实施例2的三维结构的示意图；
图7是显示无活性的咔唑化合物即化合物200的三维结构的示意图；
图8含有在用对照溶媒治疗的小鼠(图8a)中和在用实施例7的化合物治疗的小鼠(图8b)中个体肿瘤生长的肿瘤体积(mm3)对治疗天数的曲线图；
图9含有用对照溶媒和用实施例7的化合物后肿瘤体积(mm3)对治疗天数的曲线图；
图10含有在用对照溶媒治疗的小鼠(图10a)中和在用实施例7的化合物治疗的小鼠(图10b)中个体小鼠的相对体重对细胞接种后天数的曲线图；和
图11含有化合物100的浓度(μM)对13种癌细胞系的相对细胞存活的曲线图，显示本发明咔唑化合物对多种类型的癌症是有效的药物；
图12含有显示各种咔唑化合物针对恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)(品系D10)的抗寄生虫活性的柱状图；和
图13含有显示各种咔唑化合物针对革兰氏阴性菌(图13a)和革兰氏阳性菌(图13b)的抗细菌活性。
优选实施方案的详细描述
关于本文中公开的化合物、组合物和方法，所使用的术语是为了描述具体的实施方案，而不是意欲受到限制。本说明书和所附权利要求书中所用的单数形式“一”、“一个”和“该”包括复数形式，除非在上下文中另有明确说明。
本发明涉及具有通用结构式(I)和(II)的化合物。本文中公开的咔唑化合物可用于治疗诸如癌症、炎性疾病、微生物感染、病毒感染、原生动物感染或自身免疫性疾病的疾病和病症。
Figure BPA00001347451800091
其中Ra选自氢、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、ORe、N(Re)2和SRe，或者Ra和R1或NRe和R1与它们所连接的碳原子一起形成5元或6元脂肪族碳环或杂环；
Rb选自氢、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、ORe、N(Re)2和SRe，或者Rb和R6或NRe和R6与它们所连接的碳原子一起形成5元或6元脂肪族碳环或5元或6元脂肪族碳环或杂环；
Rc选自氢、C1-6烷基、C1-6羟基烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基和C(＝O)Re，或者Rc和Rd结合在一起形成5元、6元或7元脂肪族环，任选含有氧原子；
Rd选自氢、C1-6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基和C(＝O)Re，或者Rd和R7与它们所连接的原子一起形成5元或6元脂肪族环；
Re独立选自氢、C1-6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基，或者两个Re基团与它们所连接的氮结合在一起形成5元或6元脂肪族环；
R1、R2、R3、R4、R5和R6独立选自氢、C1-6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、卤素、ORe、C(＝O)Re、C(＝O)ORe、OC(＝O)Re、C(＝O)N(Re)2、C(＝O)NReSO2Re、N(Re)2、NReC(＝O)Re、NReC(＝O)N(Re)2、CN、NO2、CF3、OCF3、SRe、SORe、SO2Re、SO2N(Re)2和OSO2CF3；
R7选自氢、C1-6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基；且
n为0、1、2、3、4或5，
或其药学上可接受的盐或水合物。
在优选的实施方案中，所述化合物具有通用结构式(Ia)：
Figure BPA00001347451800101
其中Ra为C1-3烷基、C1-4卤代烷基、C3-5环烷基、N(Re)2或ORe，或者Ra和R1与它们所连接的碳原子一起形成5元或6元脂肪族碳环；
Rb为C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C3-5环烷基、N(Re)2或ORe，或者Rb和R6与它们所连接的碳原子一起形成5元或6元脂肪族碳环或者含有一个氮原子的5元或6元脂肪族环；
Rc为C1-6烷基、C3-5环烷基或C1-3羟基烷基；
Rd为氢、C1-4烷基或C3-5环烷基，或者Rd和R7与它们所连接的原子一起形成含有一个氮原子的5元或6元脂肪族环或者Rc和Rd结合在一起形成任选含有氧原子的6元或7元脂肪族环；
Re独立地为氢或C1-3烷基；
R1为氢或C1-3烷基；
R2为氢、羟基或C1-3烷氧基；
R3和R4独立地为氢或C1-3烷基；
R5为氢、羟基、C1-3烷氧基或卤素；
R6为氢、C1-3烷基、C1-3烷氧基或卤素；
R7为氢或C1-3烷基；且
n为0、1、2、3、4或5，
或其药学上可接受的盐或水合物。
在更优选的实施方案中，所述化合物具有通用结构式(Ib)：
其中Ra为甲基、乙基、正丙基、环丙基、NH(CH3)或OCH3，或者Ra和R1与它们所连接的碳原子一起形成5元脂肪族碳环；
Rb为甲基、乙基、正丙基、环丙基、NH(CH3)或OCH3，或者Rb和R6与它们所连接的碳原子一起形成5元脂肪族碳环或含有一个氮原子的5元脂肪族环；
Rc为甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丁基或2-羟基乙基；
Rd为氢、甲基、乙基或环丁基，或者Rd和R7与它们所连接的原子一起形成含有一个氮原子的5元脂肪族环，或者Rc和Rd结合在一起形成吗啉代部分、四氢呋喃基部分、哌啶基部分或部分、
Figure BPA00001347451800113
部分；
R1为氢；
R2为氢、羟基或甲氧基；
R3和R4为氢；
R5为氢、羟基、甲氧基或氟；
R6为氢、甲基、甲氧基或氟；
R7为氢；且
n为1或2，
或其药学上可接受的盐或水合物。
在另一个实施方案中，本发明还涉及具有结构式(II)的咔唑化合物：
Figure BPA00001347451800121
其中Rf选自氢、C1-6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基和C(＝O)Rh，或者Rf和Rg结合在一起形成任选含有氧原子的5元、6元或7元脂肪族环；
Rg选自氢、C1-6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基和C(＝O)Rh，或者Rg和Rh与它们所连接的原子一起形成5元、6元或7元脂肪族环；
Rh独立选自氢、C1-6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基，或者两个Rh基团与它们所连接的氮结合在一起形成5元或6元脂肪族环；
R9、R10、R11、R12、R13和R14独立选自氢、C1-6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、卤素、ORh、C(＝O)Rh、C(＝O)ORh、OC(＝O)Rh、C(＝O)N(Rh)2、C(＝O)NRhSO2Rh、N(Rh)2、NRhC(＝O)Rh、NRhC(＝O)N(Rh)2、CN、NO2、CF3、OCF3、SRh、SORh、SO2Rh、SO2N(Rh)2和OSO2CF3；
R8选自氢、C1-6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基；且
p为0、1、2、3、4或5，
前提条件是当p为2时，Rf和Rg中的一个不为乙基，
或其药学上可接受的盐或水合物。
在其它的实施方案中，所述化合物具有通用结构式(IIa)：
Figure BPA00001347451800131
其中Rf为C1-6烷基；
Rg为氢或C1-4烷基，或者Rg和R8与它们所连接的原子一起形成含有一个氮原子的5元或6元脂肪族环；
R9为氢或C1-3烷基；
R10为氢、羟基或C1-3烷氧基；
R11和R12独立地为氢或C1-3烷基；
R13为氢、羟基、C1-3烷氧基或卤素；
R14为氢、C1-3烷基或C1-3烷氧基；
R8为氢或C1-3烷基；且
p为0、1、2、3、4或5，
前提条件是当p为2时，Rf和Rg中的一个不为乙基，
或其药学上可接受的盐或水合物。
在又一些实施方案中，所述化合物具有结构式(IIb)：
Figure BPA00001347451800132
其中Rf为甲基或乙基；
Rg为氢或甲基，或者Rg和R8与它们所连接的原子一起形成含有一个氮原子的5元脂肪族环；
R8为氢；且
p为1或2，
或其药学上可接受的盐或水合物。
本文所用的术语“烷基”是指含有指定数目的碳原子的直链和支链烃基，通常是甲基、乙基和直链和支链丙基和丁基。术语“环烷基”定义为含有指定数目的碳原子的环状烃基，例如环丙基、环丁基、环己基和环戊基。
术语“杂环烷基”是指环结构中含有一个或多个选自氧、氮和硫的杂原子的单环、双环和三环环烷基。“杂环烷基”基团也可含有与环相连的氧代基团(＝O)。杂环烷基的非限制性实施例包括但不限于1，3-二氧杂环戊烷、2-吡唑啉、吡唑烷、吡咯烷、哌嗪、吡咯啉、2H-吡喃、4H-吡喃、吗啉、硫代吗啉(thiopholine)、哌啶、1，4-二噻烷和1，4-二氧杂环己烷。
术语“卤代”或“卤素”是指氟、溴、氯和碘。
术语“卤代烷基”是指被一个或多个(例如1-3个)卤代取代基(或为氟、氯、溴、碘或为它们的组合)取代的烷基。同样地，“卤代环烷基”定义为具有一个或多个卤代取代基的环烷基。
术语“芳基”，单用或联用时都是指单环或多环芳香族基团，优选单环或双环芳香族基团，例如苯基或萘基。除非另有说明，否则“芳基”基团可以是未取代的或者例如被一个或多个且特别是1-3个卤素、烷基、羟基烷基、烷氧基、烷氧基烷基、卤代烷基、硝基、氨基、烷基氨基、酰基氨基、烷基硫基、烷基亚磺酰基和烷基磺酰基取代。示例性芳基包括苯基、萘基、四氢萘基、2-氯苯基、3-氯苯基、4-氯苯基、2-甲基苯基、4-甲氧基苯基、3-三氟甲基苯基、4-硝基苯基等。
术语“杂芳基”是指在芳环中含有一个或两个芳环并含有至少一个氮、氧或硫原子的单环或双环环系，并且该环系可以是未取代的或者例如被一个或多个且特别是1-3个取代基如卤素、烷基、羟基、羟基烷基、烷氧基、烷氧基烷基、卤代烷基、硝基、氨基、烷基氨基、酰基氨基、烷基硫基、烷基亚磺酰基和烷基磺酰基取代。杂芳基的实例包括但不限于噻吩基、呋喃基、吡啶基、
Figure BPA00001347451800151
唑基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、***基、异噻唑基、异
Figure BPA00001347451800152
唑基、咪唑基(imidizolyl)、苯并噻唑基、吡嗪基、嘧啶基、噻唑基(thiazonyl)和噻二唑基(thiadiazolyl)。
术语“亚烷基”是指具有取代基的烷基。例如，术语“C1-3亚烷基芳基”是指含有1-3个碳原子且被芳基取代的烷基。
术语“羟基”是指-OH。
术语“烷氧基”是指-OR，其中R为烷基。
术语“氨基”是指-NH2，术语“烷基氨基”是指-NR2，其中至少一个R为烷基，而第二个R为烷基或氢。
术语“酰基氨基”是指R(＝O)N-，其中R为烷基或芳基。
术语“烷基硫基”是指-SR，其中R为烷基。
术语“硝基”是指-NO2。
术语“三氟甲基”是指-CF3。
术语“三氟甲氧基”是指-OCF3。
术语“氰基”是指-CN。
术语“烷氧基烷基”是指其中氢被烷氧基置换的烷基。
术语“羟基烷基”是指其中氢被羟基置换的烷基。
术语“烷基亚磺酰基”是指R-SO2-，其中R为烷基。
术语“烷基磺酰基”是指R-SO3-，其中R为烷基。
术语“吗啉代部分”是指
术语“四氢呋喃基部分”是指
Figure BPA00001347451800154
术语“哌啶基部分”是指
Figure BPA00001347451800155
任选被-OH或-CH2OH基团取代。
术语“有效量”和“治疗有效量”，当涉及化合物或组合物使用时，是指化合物或组合物能提供所需结果的足够量。所需要或要求的精确量将会根据所使用的具体化合物或组合物、其给药方式等因素而变化。因此，不可能总是规定精确的“有效量”或“治疗有效量”。然而，适当的有效量可以由本领域普通技术人员根据本发明的公开内容仅仅使用常规的实验手段来确定。
术语“合适的”是指实体(例如部分、取代基或化合物)与本文为了说明目的而提供的化合物或组合物相容。用于说明目的的合适性可以由本领域普通技术人员仅仅使用常规的实验手段来确定。
术语“给予”，当用来描述化合物或组合物的剂量时，是指化合物或组合物的单剂量或多剂量。
“体内(in vivo)”是指在有生命的受治疗者(subject)体内，如在动物或人体内。在本文中，药物可以治疗性地用于受治疗者以治疗其病症或疾病、或其症状。所述药物也可以作为预防药用来防止与之相关的疾病状态或症状的发生或复发。
“离体(ex vivo)”是指在有生命的受治疗者身体之外。离体细胞群体的实例包括来自人或动物的体外(in vitro)细胞培养物和生物样品例如体液样品或组织样品。这样的样品可以通过本领域众所周知的方法获取。示例性的生物体液样品包括血液、脑脊液、尿液、唾液。示例性的组织样品包括肿瘤及其活检样品。在本文中，本发明化合物可以有多种用途，既有治疗用途，也有实验用途。
术语“放射增敏剂”是指按治疗有效量给予人或其它动物以增加细胞对电磁辐射的敏感性和/或促进可用电磁辐射治疗的疾病的治疗的化合物。
术语“电磁辐射”和“辐射”是指但不限于其波长为10-20至100米的辐射。
术语“细胞死亡”是指细胞内其功能、增殖和代谢停止的过程。
术语“癌症治疗”是指本领域已知的任何用于癌症的治疗，包括但不限于化学治疗和放射治疗。
术语“与……联用”，当用来描述给予本发明的咔唑化合物和任何另外的治疗时，是指所述咔唑化合物可以在给予另外的治疗之前给予、与另外的治疗同时给予，或者在给予另外的治疗之后给予，或者它们的组合。
本文所用的术语“治疗”、“医治”、“处理”等是指消除、减轻或缓解疾病或病症和/或与其相关的症状。虽然没有被阻止，但是疾病或病症的治疗并不要求疾病、病症或与其相关的症状完全消除。本文所用的术语“治疗”、“医治”、“处理”等可包括“预防性治疗”，“预防性治疗”是指在现在没有但处于疾病或病症再发生或疾病或病症复发的危险之中或者对疾病或病症再发生或疾病或病症复发敏感的受治疗者中降低疾病或病症再发生的可能性、或先前已得到控制的疾病或病症复发的可能性。术语“治疗”及其同义词包括将本发明的化合物给予需要这种治疗的个体。
在本发明的含义之内，“治疗”也包括复发性(relapse)预防或阶段性(phase)预防，以及急性或慢性体征、症状和/或功能失常的治疗。治疗可以是对症治疗，例如抑制症状。它可以在短期内实现，在中期内调整，或者可以是长期治疗，例如在维持疗法里面。
术语“哺乳动物”包括人、陪伴动物(例如狗、猫和马)、动物园动物(例如斑马、大象和大型猫科动物)、食用动物(例如牛、猪、山羊和绵羊)和研究用动物(例如大鼠、小鼠、山羊和豚鼠)。
本发明部分地涉及以下发现：包含通用结构式(I)和(II)咔唑化合物的药物组合物可用于调节NF-κB活性，例如NF-κB介导的免疫应答和在国际专利申请PCT/US05/25884(指定美国)中描述的病症，该专利申请的内容通过引用结合到本文中。
在结构式(I)咔唑化合物的优选实施方案中，Ra为甲基、乙基、NH(CH3)、OCH3，或与R1形成5元脂肪族环。在其它优选的实施方案中，Rb为甲基、乙基、NH(CH3)、OCH3，与R6形成5元脂肪族环，或与R6形成5元含氮脂肪族环。在另一个优选的实施方案中，Rd为氢、甲基、乙基，或与R7形成5元脂肪族环。
在优选的实施方案中，R1为氢或与Ra形成5元脂肪族环。在其它优选的实施方案中，R2为氢或羟基。在又一些优选的实施方案中，R3为氢。在进一步优选的实施方案中，R4为氢。在再进一步优选的实施方案中，R5为氢或羟基。在一些优选的实施方案中，R6为氢，与Rb形成5元脂肪族环，或与Rb形成5元含氮脂肪族环。在优选的实施方案中，R7为氢或与Rd形成5元环。在再进一步优选的实施方案中，n为2或3。
在结构式(II)咔唑化合物的优选实施方案中，Rf为甲基或乙基，Rg为氢、甲基、乙基，或与Rf和R8形成5元含氮脂肪族环，或者R8为氢，R9、R10、R11、R12、R13和R14为氢。在再进一步的实施方案中，p为2或3。
另外两种可用于治疗多种病症和疾病的咔唑化合物是：
Figure BPA00001347451800181
本发明包括结构式(I)和(II)化合物的所有可能的立体异构体和几何异构体。本发明既包括外消旋化合物又包括旋光异构体。当要求结构式(I)或(II)化合物为单一对映体时，其可通过最终产物的拆分获得，或者通过由异构体纯的起始原料进行立体有择合成或者使用手性助剂来获得，例如，参见Z.Ma等，Tetrahedron：Asymmetry，8(6)，第883-888页(1997)。最终产物、中间体或起始原料的拆分可通过本领域已知的任何合适方法实现。另外，在结构式(I)或(II)化合物的互变异构体是可能的情况下，本发明意欲包括所述化合物的所有互变异构体形式。
结构式(I)和(II)化合物的前药也可用作本发明方法中的化合物。已充分确定，前药方法一直成功地应用于暂时地(例如生物可逆地)改变化合物的理化性质，其中化合物衍生成适合于剂型制备和/或给药的形式，然后在体内释放作为药物(参见H.Bundgaard，Ed.，“Design of Prodrugs(前药的设计)，”Elsevier，Amsterdam，(1985)；R.B.Silverman，“The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action(药物设计和药物作用的有机化学)，”Academic Press，San Diego，第8章，(1992)；K.M.Hillgren等，Med.Res.Rev.，15，83(1995))。
本发明的化合物可含有一个或多个官能团。所述官能团(如果需要或必要)可以进行修饰以提供前药。合适的前药包括例如酸衍生物，例如酰胺和酯。本领域技术人员也知道，N-氧化物可用作前药。
本发明的化合物可作为盐存在。一般而言，在本发明的方法中优选本发明化合物的药学上可接受的盐。本文所用的术语“药学上可接受的盐”是指结构式(I)和(II)化合物的盐或两性离子形式。式(I)和式(II)化合物的盐可以在化合物的分离和纯化期间制备或者使化合物与具有合适阳离子的酸反应后独立制备。结构式(I)和(II)化合物的药学上可接受的盐是与药学上可接受的酸形成的酸加成盐。可用于形成药学上可接受的盐的酸的实例包括无机酸(例如硝酸、硼酸、盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸)和有机酸(例如草酸、马来酸、琥珀酸和柠檬酸)。本发明化合物的盐的非限制性实例包括但不限于盐酸盐、氢溴化物、氢碘化物、硫酸盐、硫酸氢盐、2-羟基乙烷磺酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、醋酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、甲酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、抗坏血酸盐、羟乙磺酸盐、水杨酸盐、甲烷磺酸盐、均三甲苯磺酸盐、亚萘基磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、三氯乙酸盐、三氟乙酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、葡糖酸盐、甲烷磺酸盐、乙烷二磺酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。另外，本发明化合物中存在的可利用的氨基可以用下列化合物季铵化：甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；硫酸二甲基酯、二乙基酯、二丁基酯和二戊基酯；癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基的氯化物、溴化物和碘化物；和苄基和苯乙基溴化物。根据上文，任何提及本文中出现的本发明的化合物时，意欲包括结构式(I)和/或(II)化合物以及它们的药学上可接受的盐、水合物或前药。
在治疗用途的方法中，结构式(I)和(II)化合物也可缀合或连接到促进化合物的有益特性的辅助部分上。这样的缀合物可增强化合物递送到特殊的目标解剖部位或区域(例如肿瘤)，使得化合物在靶细胞内处于持久的治疗浓度，改变化合物的药代动力学和药效动力学，和/或提高化合物的治疗指数或安全性分布(profile)。合适的辅助部分包括例如氨基酸、寡肽或多肽，例如抗体，例如单克隆抗体和其它工程抗体；和靶细胞或组织中受体的天然或合成配体。其它合适的辅助部分包括促进化合物的生物分布和/或被靶细胞摄取的脂肪酸或脂质部分(参见例如Bradley等，Clin.Cancer Res.(2001)7：3229)。
本发明的化合物是强效NF-κB抑制剂。因此，式(I)和式(II)化合物在治疗用途中是有价值的，准确地说在治疗NF-κB的抑制被认为是有益的各种疾病当中是有价值的。NF-κB抑制是特别引人注意的靶标，因为这样的抑制提供了诸如细胞凋亡、抗微生物、抗原生动物、抗病毒和抗炎等效果，所有这些效果在治疗各种疾病状态中都是有益的。因此，式(I)和式(II)化合物在治疗多种障碍、疾病和病症中具有实用性。
本发明咔唑化合物的功效可通过测定化合物抑制NF-κB活性或激活p53的能力来确定。p53的活化通常使用剂量-反应试验来测定，其中敏感的测定***与一定范围内的不同浓度的目标化合物相接触，所述浓度包括观察到没有效果或最小效果的浓度，到观察到部分效果的较高浓度，一直到观察到最大效果的饱和浓度。理论上讲，激活剂化合物的剂量-反应效应的这类测定可以用表示活化程度为浓度的函数的S形曲线进行说明。该曲线也在理论上通过浓度足以使活性增加到某一水平即50％的点，它是所述测定中基线活性和最大活性之间的差。这种浓度被定义为有效浓度(50％)或EC50值。可以使用常规的生物化学(无细胞)测定技术或基于细胞的测定技术确定EC50值。
通常用对比EC50值来提供激活剂功效的比较，其中较高的EC50表示试验化合物比参比化合物的功效低，而较低的EC50表示试验化合物比参比化合物的功效高。在萤光素酶报道细胞系测定中，本发明的化合物表现出预料不到的好功效，即p53活化。经过下述基于细胞的测定的本发明化合物表现出对p53活化的EC50值小于约1.35μM。在某些实施方案中，本发明的化合物显示EC50值小于约1.0μM。在其它的实施方案中，本发明化合物显示IC50值小于约0.75μM、约0.50μM、约0.30μM、小于约0.20μM或小于0.05μM。
本发明咔唑化合物尤其重要的用途是治疗癌症、炎症、自身免疫性疾病、微生物感染、原生动物感染或病毒感染、移植物抗宿主病、与HIV感染相关的疾病或已获取依赖于组成型活性NF-κB的癌变前细胞。可按照本发明治疗的各种癌症包括但不限于肾细胞癌、肉瘤、***癌、乳癌、胰腺癌、骨髓瘤、骨髓性白血病、淋巴母细胞性白血病、成神经细胞瘤、成胶质细胞瘤和由HTLV感染引起的癌症。
因此，设想式(I)和式(II)化合物可用于治疗各种病症和疾病。所以，本发明涉及式(I)和式(II)化合物、或其药学上可接受的盐、或含有任一实体的药物组合物在制备用于治疗此类病症和疾病的药物中的用途。
本发明的化合物可作为纯化学药品治疗性给予，但优选结构式(I)或(II)化合物作为药物组合物或制剂给予。因此，本发明提供包含式(I)或式(II)化合物以及药学上可接受的合适稀释剂或载体的药物组合物。也提供药物组合物的制备方法，包括将式(I)或式(II)化合物与药学上可接受的合适稀释剂或载体混合。
因此，本发明还提供包含结构式(I)或(II)化合物、或其药学上可接受的盐、前药或水合物、以及一种或多种药学上可接受的载体和任选的其它治疗和/或预防成分的药物制剂。所述载体在与制剂中的其它成分配伍并对其接受者无害的意义上是“可接受的”。
为了治疗所指定的疾病，可以按标准方式给予本发明的制剂，例如口服、胃肠外、经粘膜(例如舌下或通过含服给药)、局部、经皮、直肠或通过吸入(例如鼻或经肺深吸)。胃肠外给药包括但不限于静脉内、动脉内、腹膜内、皮下、肌内、鞘内和关节内。也可采用高压技术，如POWDERJECTTM(Powderject Pharmaceuticals，Plc，Oxford，England)，完成胃肠外给药。所述组合物也可以植入物(其使所述组合物缓慢释放)的形式以及缓慢控制静脉内滴注的形式给予。
对于口服给药，包括含服给药，所述组合物可以呈按常规方式配制的片剂或锭剂形式。例如，口服给药用片剂和胶囊剂可含有常规赋形剂例如粘合剂(例如糖浆、***胶(acacia)、明胶、山梨醇、西黄蓍胶、淀粉胶浆剂或聚乙烯吡咯烷酮)、填充剂(例如乳糖、蔗糖、微晶纤维素、玉米淀粉、磷酸钙或山梨醇)、润滑剂(例如硬脂酸镁、硬脂酸、滑石粉、聚乙二醇或二氧化硅)、崩解剂(例如马铃薯淀粉或淀粉乙醇酸钠)或润湿剂(例如十二烷基硫酸钠)。片剂还可按照本领域众所周知的方法进行包衣。
或者，举例来说，本发明的化合物可以掺入到口服液体制剂例如水性或油性混悬剂、溶液剂、乳剂、糖浆剂或酏剂中。此外，含有这些化合物的制剂也可以制成干产品，在临用前用水或其它合适溶媒进行配制。这样的液体制剂可含有常规添加剂，例如助悬剂，例如山梨醇糖浆、甲基纤维素、葡萄糖/蔗糖糖浆、明胶、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶和氢化食用脂；乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇单油酸酯或***胶；非水溶媒(其可包括食用油)，例如杏仁油、分馏椰子油、油性酯、丙二醇和乙醇；和防腐剂，例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯和山梨酸。
这样的制剂也可配制成栓剂，例如含有常规栓剂基质，例如可可脂或其它甘油酯。吸入用组合物通常可以以溶液剂、混悬剂或乳剂形式提供，其可使用常规抛射剂(例如二氯二氟甲烷或三氯氟甲烷)，以干粉或气溶胶形式给药。常用的局部和经皮制剂包含常规水性或非水溶媒，例如滴眼剂、乳膏剂、软膏剂、洗剂和糊剂，或者呈药用硬膏剂、贴剂或膜剂的形式。
另外，本发明的组合物也可配制成供通过注射或连续输注进行胃肠外给药。注射用制剂可以呈在油性或水性溶媒中的混悬剂、溶液剂或乳剂，而且可含有诸如助悬剂、稳定剂和/或分散剂等配方剂(formulation agent)。或者，活性成分可以呈粉末状形式，其在使用前可用合适的溶媒(例如无菌、无热源水)进行配制。
本发明的组合物也可配制成包埋贮库(depot)制剂。这样的长效制剂可经植入(例如皮下或肌内)或通过肌内注射给药。因此，本发明的化合物可与合适聚合物或疏水材料(例如在可接受的油中的乳剂)、离子交换树脂或微溶的衍生物(例如微溶的盐)一起配制。
所述组合物也可配制成脂质体制剂。所述脂质体制剂可包含穿透目标细胞或角质层并且与细胞膜融合的脂质体，导致脂质体的内容物递送到细胞内。脂质体描述于例如美国专利第5,077,211号、美国专利第4,621,023号和美国专利第4,508,703号，所述各专利通过引用结合到本文中。
对于兽用而言，可以按照常规兽医实践，以适当的可接受制剂给予式(I)或式(II)化合物、或药学上可接受的盐或前药。兽医可以容易地确定对特定动物最适合的给药方案和给药途径。本发明化合物和方法可治疗的动物包括但不限于宠物、家畜、表演动物和动物园样本。
合成方法
式(I)和式(II)化合物可以通过本领域已知的任何合适方法或者通过构成本发明组成部分的下述方法制得。具体地说，结构式(I)和(II)化合物可以按照以下的合成流程制得。
在这些合成方法、实施例和整个说明书中，所用缩写具有以下含义：
  DMF   二甲基甲酰胺
  NaH   氢化钠
  min   分钟
  TLC   薄层色谱法
  CH2Cl2   二氯甲烷
  CHCl3   氯仿
  MeOH   甲醇
  Na2SO4   硫酸钠
  AlCl3   氯化铝
  AcCl   乙酰氯
  LC-MS   液相色谱法-质谱法
  Et2O   ***
  Na2CO3   碳酸钠
  HPLC   高效液相色谱法
  h   小时
  NaHCO3   碳酸氢钠
  NaCl   氯化钠
  HCl   盐酸
  g   克
  eq   当量
  mol   摩尔
 mmol   毫摩尔
 mL   毫升
 H2SO4   硫酸
 K2CO3   碳酸钾
 Pd(OAc)2   乙酸钯
 Pd(PPh3)4   四(三苯基膦基)合钯
 P(OEt)3   三乙氧基膦
 NaH   氢化钠
 TfOH   三氟甲磺酸
 EtOH   乙醇
 NMR   核磁共振谱法
 EtOAc   乙酸乙酯
 THF   四氢呋喃
 NaOH   氢氧化钠
 NMP   N-甲基吡咯烷酮
 DBU   1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯
 MsCl   甲磺酰氯
 TEA   三乙醇胺
 Na2SO4   硫酸钠
 (Boc)2O   碳酸二叔丁酯
 Py   吡啶
 PdCl2(PPh)3   二氯-三苯基膦基-钯(II)
 PhNO2   硝基苯
 KOAc   乙酸钾
 Pd(dppf)Cl2   二氯化((双二苯基膦基)二茂铁基)合钯(II)
 AcOK   乙酸钾
 PPh3   三苯基膦
  PPh3O   氧化三苯基膦
  BBr3   三溴化硼
  CH3CN   乙腈
  PhSH   苯硫酚
  Cs2CO3   碳酸铯
  STAB   三乙酰氧基硼氢化钠
  NEt3   三乙胺
  DMF   二甲基甲酰胺
应当理解，保护基以按照合成有机化学的一般原则来使用，以提供结构式(I)和(II)化合物。生成保护基的试剂是本领域技术人员众所周知的，例如参见T.W.Greene等，“Protective Groups in Organic Synthesis，Third Edition(《有机合成中的保护基》第三版)，”John Wiley and Sons，Inc.，NY，N.Y.(1999)。当需要时，这些保护基通过本领域技术人员已知的适当的碱解、酸解或氢解条件脱去。因此，本领域技术人员可以制备本文中未具体例举的结构式(I)和(II)化合物。
另外，式(I)和式(II)化合物可以转化成其它式(I)和式(II)化合物。因此，例如，特定的R取代基可以相互转变以制备另一种适当取代的式(I)或式(II)化合物。适当互变的实例包括但不限于通过合适的手段把ORa变成羟基(例如使用例如SnCl2的试剂或钯催化剂，如披钯碳)，或者使用标准酰化或磺酰化条件把氨基变成取代的氨基(例如酰氨基或磺酰氨基)。
式(I)和式(II)化合物可制备成各个立体异构体作为外消旋混合物。可以使用本领域已知的把外消旋混合物分离成它们的组成立体异构体的方法，例如，使用HPLC(在手性柱上，例如Hypersil萘基脲)，或者使用立体异构体的盐的分离法，通过拆分由外消旋物制备本发明化合物的各个立体异构体。可以通过从适当的溶剂结晶或蒸发掉适当的溶剂，把以溶剂分子缔合的本发明的化合物分离出来。
通用合成程序
流程1
Figure BPA00001347451800271
用于咔唑烷基化的通用程序
将咔唑1溶于或悬浮于DMF中。然后，加入NaH(3eq)。将混合物在室温下在5-10min的时间内搅拌直到泡沫产生停止。加入氯化物的盐酸盐(chloride hydrochloride)(1.3eq)，使反应混合物在2-16h的时间内保持在50-60℃(TLC监测；洗脱剂：CH2Cl2/乙酸乙酯，1∶1对于存在起始咔唑；CHCl3/MeOH，9∶1对于产物纯度)。所得混合物用水稀释。如果有沉淀物生成，则将其滤出后风干。如果没有沉淀物生成(表1)，则混合物用乙酸乙酯萃取。萃取液经Na2SO4干燥，蒸发，残余物通过色谱法纯化(硅胶，CHCl3/MeOH)。产物2a和2b的收率示于表1。
用于烷基化咔唑的酰化的通用程序
将咔唑2溶于硝基苯中。将溶液在冰浴中冷却，然后加入AlCl3(5eq)和AcCl(5eq)。将反应混合物维持2-16h的时间(LC-MS监测)。反应混合物的样品用Et2O稀释，把后者从沉淀物中滗析出来，然后溶于MeOH中。所得混合物用水稀释，用Na2CO3中和，并用CHCl3萃取。蒸发萃取液。残余物先在短硅胶柱中通过色谱法纯化(CHCl3/MeOH)以去除硝基苯；然后，必要时，在硅胶柱中通过色谱法纯化或者通过HPLC纯化。产物3a和3b的收率示于表1。
流程2
Figure BPA00001347451800281
3，6-二乙酰基咔唑(4)
将咔唑1(16.9g，0.1mol)溶于硝基苯(300mL)中。在搅拌下并用冰浴冷却的同时加入无水AlCl3(54.0g，0.4mol)。然后，慢慢地滴加AcCl(55.5g，0.7mol)。使反应混合物在搅拌下升温至室温并保持13h的时间。在用冰浴冷却下分小批量加入水(500mL)。去除冷浴，并将混合物在2h的时间内回流并用CHCl3(3×150mL)萃取。合并的萃取液依次用饱和NaHCO3溶液和饱和NaCl溶液洗涤，用无水Na2SO4干燥，和蒸发。残余物通过柱色谱法纯化(硅胶，CHCl3/MeOH)，得到12.5g(50％)3，6-二乙酰基咔唑(4)。
对于化合物4的烷基化，采用了用于使咔唑烷基化的通用程序。产物3c-f的收率示于表1。
流程3
Figure BPA00001347451800282
溴烷基二乙酰基咔唑5a-c的制备
将二乙酰基咔唑4溶于DMF中，然后加入NaH(3eq)。将混合物在室温下搅拌10min。加入二溴烷烃(7eq)。将反应混合物保持1h的时间(5a在室温下；5b在40℃；5c保持20min在70℃；TLC监测，CH2Cl2/乙酸乙酯，乙酸乙酯4∶1)。混合物再用水稀释并用乙酸乙酯萃取。合并的萃取液用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，和蒸发。残余物通过柱色谱法纯化(硅胶，CHCl3)，得到5a(21％)、5b(29％)和5c(74％)。
胺与溴烷基二乙酰基咔唑5a-c的烷基化
将溴化物5溶于DMF中，加入胺(过量，见表3)。将混合物保持在60℃过夜。(TLC监测，CH2Cl2/乙酸乙酯，1∶1对于存在起始咔唑；CHCl3/MeOH，9∶1对于产物纯度)。反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。合并的萃取液用Na2SO4干燥。残余物通过柱色谱法纯化(硅胶，CHCl3/MeOH)。将产物溶于CH2Cl2和MeOH的混合物中。加入4M HCl的二
Figure BPA00001347451800291
烷溶液，并蒸发混合物。残余物用Et2O研磨，必要时用乙酸乙酯或丙酮研磨。产物6a-h的收率示于表3。
流程4
Figure BPA00001347451800292
对于2的酰化，采用了类似于流程1中所描述的步骤。产物7a-d的收率示于表4。
流程5
Figure BPA00001347451800293
3，6-双(氯丙酰基)-9-N，N-二乙基氨基乙基咔唑(8)
将1-N，N-二乙基氨基乙基咔唑(0.23g，0.86mmol)与2mL硝基苯的溶液在冰浴中冷却。加入AlCl3(0.57g，4.3mmol)和3-氯丙酰基氯(0.4mL，4.2mmol)。将反应混合物搅拌过夜(LC-MS监测)并用HCl水溶液稀释。产物用CHCl3萃取，蒸发滤液。残余物色谱法在短硅胶柱中通过色谱法快速纯化(CHCl3/MeOH)，得到0.38g(91％)化合物8，为其盐酸盐。
1，2，10，11-四氢-6-N，N-二甲基氨基乙基-6H-二环戊二烯并[c，g]咔唑-3，9-二酮(9)
将化合物2(0.38g，0.79mmol)溶于98％H2SO4(3mL)中。将反应混合物加热到95C，在2.5h的时间内保持在该温度下(TLC监测，CHCl3/MeOH，4∶1)，再倒入冰中。所得混合物用无水Na2CO3中和并用CHCl3萃取。将萃取液蒸发，残余物通过柱色谱法纯化(CHCl3/MeOH)。将所获得的粗产物(0.08g)溶于MeOH中。加入4M HCl的二
Figure BPA00001347451800301
烷溶液，并蒸发混合物。将残余物悬浮于MeOH中，并将悬浮液回流。(在此过程中固体不溶解)。将悬浮液冷却后滤出固体，得到0.007g(2％)化合物9，为其盐酸盐。
流程6
Figure BPA00001347451800302
2-甲基-2′-硝基-1，1′-联苯(10a)
将2-甲基苯基硼酸(0.64g，4.7mmol)和2-硝基碘苯(2-nitroidobenzene)(1.0g，4.0mmol)溶于MeOH(20mL)和水(4mL)的混合物中。加入K2CO3(1.1g，8.0mmol)和Pd(OAc)2(0.018g，0.08mmol)。反应混合物用氩气吹扫，加热到50℃，在该温度下保持过夜，通过Celite牌硅藻土过滤。后者用MeOH洗涤。蒸发滤液，残余物无需进一步纯化就可使用。
4，4′-二甲氧基-2-硝基-1，1′-联苯(10h)
将4-甲氧基苯基硼酸(3.00g，19.7mmol)和4-氯-3-硝基茴香醚(3.69g，11.6mmol)溶于二
Figure BPA00001347451800311
烷(40mL)和水(10mL)的混合物中。加入K2CO3(5.44g，23.2mmol)和Pd(PPh3)4(1.14g，0.6mmol)。将反应混合物在氩气中加热到80℃，在该温度下保持过夜(TLC监测：己烷/乙酸乙酯，4∶1)，冷却，通过Celite牌硅藻土过滤。后者用CH2Cl2洗涤，蒸发滤液。将残余物溶于CH2Cl2中，蒸发溶液后得到6.0g粗制联苯10h，其无需纯化就可直接进行环化。
采用类似的程序获得了联苯10b-g。
用于咔唑合成的通用程序
将粗制联苯10溶于(EtO)3P中。反应混合物在氩气流中保持在125-140℃约48h的时间(TLC监测：己烷/乙酸乙酯，1∶1)并用水稀释。将沉淀物滤出并用Et2O洗涤。如果没有沉淀物生成，则产物用乙酸乙酯萃取，蒸发萃取液，残余物在短硅胶柱中纯化(己烷/乙酸乙酯)。产物11a-g的收率示于表5。
2，7-二甲氧基-9H-咔唑(11h)
在一个小瓶中进行反应。将粗制联苯10h(6.0g)溶于P(OEt)3(36mL)中。该小瓶用氩气吹扫。将反应混合物加热到90℃，保持在该温度下过夜，和冷却。结果，咔唑沉淀出来。加入Et2O/CH2Cl2混合物。将沉淀物滤出并用CH2Cl2洗涤。蒸发滤液。再次加入P(OEt)3，并将混合物留下进行环化达24h。重复这些操作直到沉淀物生成停止，TLC表明起始联苯消失。得到咔唑共2.9g(65％，用两个步骤计算得出)。
对于化合物11的烷基化，采用了咔唑烷基化的通用程序。化合物12a-i的收率示于表1。
对于12的酰化，采用了类似于流程1所描述的程序。然而，对于单乙酰化，AcCl和AlCl3的用量减少至1.5eq。化合物13a-j的收率示于表2。
流程7
Figure BPA00001347451800321
4，4，5，5-四甲基-2-(4-茚满酮-1-基)-[1，3，2]-二氧杂硼杂环戊烷(14aX＝CH2)
将4-三氟甲基磺酰氧基-1-茚满酮(9.7g，34.6mmol)和二硼酸二频哪醇酯(bis(pinacolato)diboron)(11.4g，45.0mmol)溶于二
Figure BPA00001347451800322
烷(100mL)中。加入AcOK(6.8g，69.2mmol)和Pd(dppf)2Cl2(1.3g，1.8mmol)。将反应混合物在氩气流中加热到80℃，保持在该温度下过夜，冷却，通过Celite牌硅藻土过滤。蒸发滤液。将残余物溶于CH2Cl2中并在短硅胶柱中纯化(己烷/乙酸乙酯)，得到9.5g含有20％(质量)二硼酸二频哪醇酯的产物。产物无需额外的纯化就可用于下一步骤。
按同样的方式由溴化物制得所述硼酸酯。如果使用了二硼酸二频哪醇酯1eq，则得到更多纯产物。
4，4，5，5-四甲基-2-[4-(2-甲基异吲哚啉-1-酮)-基]-[1，3，2]-二氧杂硼杂环戊烷(14b X＝NMe)
将4-溴-2-甲基异吲哚啉-1-酮(3.23g，14.3mmol)和二硼酸二频哪醇酯(4.72g，18.6mmol)溶于二
Figure BPA00001347451800323
烷(60mL)中。加入AcOK(2.80g，28.6mmol)和Pd(dppf)2Cl2(0.5g，0.7mmol)。将反应混合物在氩气流中加热到80℃，在该温度下保持过夜，冷却，通过Celite牌硅藻土过滤。蒸发滤液。将残余物溶于CH2Cl2中并在短硅胶柱中纯化(己烷/乙酸乙酯)，得到4.2g含有20％(质量)二硼酸二频哪醇酯的产物。产物无需额外的纯化就可用于下一步骤。
联苯15a(X＝CH2，R＝H)
将4，4，5，5-四甲基-2-(4-茚满酮-1-基)-[1，3，2]-二氧杂硼杂环戊烷(2.17g，8.4mmol)和邻硝基碘苯(2.70g，10.9mmol)溶于二烷(30mL)和水(5mL)的混合物中。加入K2CO3(2.30g，16.7mmol)和Pd(PPh3)4(0.48g，0.4mmol)。将反应混合物在氩气流中加热到80℃，在24h的时间内保持在该温度下(TLC监测：己烷/乙酸乙酯，4∶1)，冷却，通过Celite牌硅藻土过滤。蒸发滤液。将残余物溶于CH2Cl2中。将未溶解的沉淀物滤出。部分地蒸发滤液后，产物在短硅胶柱中纯化(己烷/乙酸乙酯)，得到2.5g含有PPh3O的产物。产物无需额外的纯化就直接用于环化。
联苯15b(X＝CH2，R＝OMe)
将4，4，5，5-四甲基-2-(4-茚满酮-1-基)-[1，3，2]-二氧杂硼杂环戊烷(1.20g，4.6mmol)和邻硝基碘苯(0.87g，4.6mmol)溶于二
Figure BPA00001347451800332
烷(10mL)和水(2mL)的混合物中。加入K2CO3(1.28g，9.2mmol)和Pd(PPh3)4(0.27g，0.2mmol)。将反应混合物在氩气流中加热到80℃，在24h的时间内保持在该温度下(TLC监测：己烷/乙酸乙酯，4∶1)，冷却，通过Celite牌硅藻土过滤。蒸发滤液。将残余物溶于CH2Cl2中。将未溶解的沉淀物滤出。部分地蒸发滤液，产物在短硅胶柱中纯化(己烷/乙酸乙酯)，得到1.25g含有PPh3O的产物。产物无需额外的纯化就可直接环化。
联苯15c(X＝NMe，R＝H)
将4，4，5，5-四甲基-2-[4-(2-甲基异吲哚啉-1-酮)-基]-[1，3，2]-二氧杂硼杂环戊烷(2.43g，8.9mmol)和邻硝基碘苯(2.44g，9.80mmol)溶于二
Figure BPA00001347451800341
烷(30mL)和水(6mL)的混合物中。加入K2CO3(2.50g，18.1mmol)和Pd(PPh3)4(0.51g，0.4mmol)。将反应混合物在氩气流中加热到80℃，在24h的时间内保持在该温度下(TLC监测：己烷/乙酸乙酯，4∶1)，冷却，通过Celite牌硅藻土过滤。蒸发滤液。将残余物溶于CH2Cl2中。将未溶解的沉淀物滤出。部分地蒸发滤液，产物在短硅胶柱中纯化(己烷/乙酸乙酯)，得到2.3g含有PPh3O的产物。产物无需额外的纯化就可直接环化。
联苯15d(X＝NMe，R＝OMe)
将4，4，5，5-四甲基-2-[4-(2-甲基异吲哚啉-1-酮)-基]-1，3，2]-二氧杂硼杂环戊烷(0.97g，3.6mmol)和4-氯-3-硝基茴香醚(0.67g，3.6mmol)溶于二
Figure BPA00001347451800342
烷(10mL)和水(2mL)的混合物中。加入K2CO3(0.98g，7.2mmol)和Pd(PPh3)4(0.21g，0.2mmol)。将反应混合物在氩气流中加热到80℃，在24h的时间内保持在该温度下(TLC监测：己烷/乙酸乙酯，4∶1)，冷却，通过Celite牌硅藻土过滤。蒸发滤液。将残余物溶于CH2Cl2中。将未溶解的沉淀物滤出。部分地蒸发滤液，产物在短硅胶柱中纯化(己烷/乙酸乙酯)，得到0.76g含有PPh3O的产物。产物无需额外的纯化就可直接环化。
咔唑16a(X＝CH2，R＝H)
在一个小瓶中进行反应。将4-(2-硝基苯基)茚满酮-1(2.54g，10.0mmol)溶于P(OEt)3(8mL)中。该小瓶用氩气吹扫。将反应混合物加热到90℃，保持在该温度下过夜，和冷却。结果，咔唑沉淀出来。加入CH2Cl2。将沉淀物滤出后用CH2Cl2洗涤。蒸发滤液。再次加入P(OEt)3(2mL)，将混合物留下进行环化达24h。重复这些操作直到沉淀物生成停止，TLC表明起始联苯消失。得到咔唑共0.58g。
咔唑16b(X＝CH2，R＝OMe)
在一个小瓶中进行反应。将4-(4-甲氧基-2-硝基苯基)-茚满酮-1(1.25g，4.4mmol)溶于P(OEt)3(8mL)中。该小瓶用氩气吹扫。将反应混合物加热到90℃，保持在该温度下过夜，和冷却。结果，咔唑沉淀出来。加入CH2Cl2。将沉淀物滤出后用CH2Cl2洗涤。蒸发滤液。再次加入P(OEt)3(1mL)，并将混合物留下进行环化达24h。重复这些操作直到沉淀物生成停止，TLC表明起始联苯消失。得到咔唑共0.39g。咔唑16c(X＝NMe，R＝H)
在一个小瓶中进行反应。将4-(2-硝基苯基)-2-甲基异吲哚啉(isoinolin)-1-酮(2.29g，8.5mmol)溶于P(OEt)3(10mL)中。该小瓶用氩气吹扫。将反应混合物加热到90℃，保持在该温度下过夜，和冷却。结果，咔唑沉淀出来。加入CH2Cl2。将沉淀物滤出后用CH2Cl2洗涤。蒸发滤液。再次加入P(OEt)3(0.5mL)，并将混合物留下进行环化达24h。重复这些操作直到沉淀物生成停止，TLC表明起始联苯消失。得到咔唑共0.4g。
咔唑16d(X＝NMe，R＝OMe)
在一个小瓶中进行反应。将4-(4-甲氧基-2-硝基苯基)-2-甲基异吲哚啉(isoinolin)-1-酮(0.76g，2.6mmol)溶于P(OEt)3(6mL)中。该小瓶用氩气吹扫。将反应混合物加热到90℃，保持在该温度下过夜，和冷却。结果，咔唑沉淀出来。加入CH2Cl2。将沉淀物滤出后用CH2Cl2洗涤。蒸发滤液。再次加入P(OEt)3(0.5mL)，并将混合物留下进行环化达24h。重复这些操作直到沉淀物生成停止，TLC表明起始联苯消失。得到咔唑共0.34g。
对于16的烷基化，采用了咔唑烷基化的通用程序。产物17a-f的收率示于表1。
对于17的酰化，采用了类似于流程1所描述的程序。产物18a-d的收率示于表2。
流程8
Figure BPA00001347451800361
用于二甲基化的通用程序
将甲氧基化合物溶于CH2Cl2中。将溶液冷却至-40℃。在氩气流中加入0.5M BBr3的DCM溶液(4eq，对于一个甲氧基)。在10min之后，去除冷浴。将反应混合物加热到室温，保持1h的时间(TLC监测，CHCl3/MeOH，4∶1)，再倒入NaHCO3水溶液和CH2Cl2的混合物中。分离有机层，水层用CH2Cl2萃取多一次。合并的萃取液用Na2SO4干燥并蒸发。产物通过柱色谱法纯化(CHCl3/MeOH)。产物19a-h的收率示于表6。
流程9
Figure BPA00001347451800362
2-羟基-9-N，N-二乙基氨基乙基咔唑(20)
将2-甲氧基-9-N，N-二乙基氨基乙基咔唑12g溶于CH2Cl2(10mL)中。将溶液冷却至-40℃。在氩气流中加入0.5M BBr3的DCM溶液(6mL，3.00mmol)。结果，生成橙色悬浮液。将反应混合物加热到室温，保持1.5h的时间，再倒入NaHCO3水溶液和CH2Cl2的混合物中。分离有机层，水层用CH2Cl2萃取多一次。合并的萃取液用Na2SO4干燥并蒸发。产物通过柱色谱法纯化(CHCl3/MeOH)，得到0.176g(92％)产物。
2-乙酰氧基-9-N，N-二乙基氨基乙基咔唑(21)
将化合物20(0.176g，0.62mmol)的Ac2O(2mL)溶液在30min的时间内回流后倒入水中。所得混合物用NaHCO3中和后用乙酸乙酯萃取。蒸发萃取液，得到0.16g(79％)产物。
3-乙酰基-2-羟基-9-N，N-二乙基氨基乙基咔唑(22)
将化合物21(0.16g，0.49mmol)溶于PhNO2(2mL)中，再加入AlCl3(0.1g，0.75mmol)。将反应混合物在油浴中加热到100℃，在2h的时间内保持在该温度下，用水稀释，用Na2CO3中和，并用CHCl3萃取。蒸发萃取液。残余物通过短硅胶柱色谱法纯化(CHCl3/MeOH)，得到0.044g(28％)化合物22。
表1.咔唑的烷基化
Figure BPA00001347451800381
Figure BPA00001347451800391
Figure BPA00001347451800401
a含有DMF。b收率并不精确。粗制咔唑用来制备。通过盐酸盐纯化。c通过盐酸盐纯化。d紧接在用水稀释反应混合物之后作为结晶物质被分离出来。
表2.烷基化咔唑的乙酰化
Figure BPA00001347451800402
Figure BPA00001347451800411
Figure BPA00001347451800421
a在HPLC纯化之后。b含起始化合物的混合物分离后无需再分离就可使用。
表3.咔唑用溴烷基二乙酰基咔唑进行烷基化
Figure BPA00001347451800431
Figure BPA00001347451800441
表4.
Figure BPA00001347451800442
a在HPLC纯化之后。
表5.
Figure BPA00001347451800451
a析出后为晶体。b产物含有(EtO)3PO并且无需纯化就可使用。c仅给出了目标区域异构体(regioisomer)的收率。
表6.
Figure BPA00001347451800461
a在HPLC纯化之后。b在用混合物工作后获得并通过HPLC分离。c通过盐酸盐纯化。
实施例
实施例1
Figure BPA00001347451800471
[3-(9H-咔唑-9-基)丙基]二甲胺(30)。
将咔唑3.0g(18.0mmol)溶于DMF(20mL)中。然后，加入60％NaH/石蜡(2.5g，62.5mmol)，并将混合物搅拌10min。分批加入2-N，N-二甲基氨基丙基氯3.0g(19.0mmol)，随后使温度升高到45-50℃。在该温度下保持反应混合物2.5h(TLC监测，CHCl3/MeOH，9∶1)。将所获得的物质小心地倒入冰/水混合物中并用乙酸乙酯萃取。萃取液用Na2SO4干燥后蒸发，得到化合物30(4.8g，100％)，为褐色液体油状物。
1，1′-{9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-咔唑-3，6-二基}双(2-甲基丙-1-酮)(实施例1)。
将化合物30(0.25g，1.0mmol)溶于硝基苯(5mL)中。依次分批加入AlCl3(0.6g，4.5mmol)和异丁酰氯(0.6mL，5.7mmol)。将反应混合物搅拌40min(LC/MS监测)。将所获得的混合物倒入冰/水混合物中并用CHCl3萃取。将合并的萃取液蒸发，残余物在短厚硅胶柱中通过色谱法纯化(洗脱剂：CHCl3/MeOH 99∶1→90∶10)，得到0.189g(47％)产物。1H NMR(DMSO-d6)：δ1.20(12H，d，J＝6.7Hz)；1.90-1.97(2H，m)；2.11(6H，s)；2.18(2H，t，J＝6.7Hz)；3.91(2H，七重峰，J＝6.7Hz)，4.50(2H，t，J＝6.6Hz)；7.76(2H，d，J＝8.7Hz)；8.14(2H，dd，J＝8.7Hz，J＝1.5Hz)；9.11(2H，d，J＝1.5Hz)。ELSD：100％，ESI-MS：m/z 392[M+H]+。
实施例2
Figure BPA00001347451800481
1，1′-(9H-咔唑-3，6-二基)二乙酮(31)。
将咔唑(16.9g，0.1mol)溶于硝基苯(300mL)中。在冰浴中在搅拌下加入无水AlCl3(54.0g，0.4mol)。然后慢慢地滴加AcCl(55.5g，0.7mol)。在搅拌下使反应混合物升温至室温并保持13h。在冰浴中在冷却下分小批量加入水(500mL)以避免急剧起泡沫。去除冷浴，混合物用冷凝器回流2h。产物用氯仿(3×150mL)萃取。合并的萃取液依次用饱和NaHCO3溶液和饱和NaCl溶液洗涤，用无水Na2SO4干燥，和蒸发。残余物通过柱色谱法纯化(硅胶，CHCl3-MeOH)，得到112.5g(50％)。
1，1′-{9-[2-(1-甲基吡咯烷-2-基)乙基]-9H-咔唑-3，6-二基}二乙酮(实施例2，3c)。
将二乙酰基衍生物31(0.97g，3.86mmol)溶于DMF(7mL)中。加入NaH(0.54g，13.5mmol)，并将混合物在室温下搅拌3-5分钟。加入2-(2-氯乙基)-1-甲基吡咯烷盐酸盐(1.07g，5.8mmol)。将反应混合物在60℃下搅拌24h(TLC监测，CHCl3/MeOH，9∶1)，用水稀释，并用乙酸乙酯萃取。萃取液用Na2SO4干燥后蒸发。残余物通过柱色谱法纯化(硅胶，CHCl3/MeOH 99∶1→90∶10)，得到0.90g(64％)产物。1H NMR(DMSO-d6)：δ1.41-1.49(1H，m)；1.54-1.73(3H，m)；1.76-1.85(1H，m)；1.97-2.13(3H，m)；2.14(3H，s)；2.70(6H，s)；2.86-2.93(1H，m)；4.46-4.50(2H，m)；7.72(2H，d，J＝8.8Hz)；8.12(2H，dd，J＝8.8Hz，J＝1.6Hz)；9.04(2H，d，J＝1.6Hz)。ELSD：100％，ESI-MS：m/z 363[M+H]+。
实施例3
Figure BPA00001347451800491
[2-(9H-咔唑-9-基)乙基]二乙胺(32)。
将咔唑(10.0g，59.8mmol)溶于DMF(60mL)中。然后，分批加入60％NaH/石蜡(7.2g，180.0mmol)。将混合物搅拌10min。分批加入2-N，N-二乙基氨基乙基氯盐酸盐(10.5g，61.0mmol)，随后使温度升高到50℃。将反应混合物在该温度下保持2.5h(TLC监测，己烷/乙酸乙酯4∶1)。将所得物质小心地倒入冰/水混合物中并用乙酸乙酯萃取。萃取液用Na2SO4干燥后蒸发，得到化合物1(16.0g，100％)，为液体褐色油状物。
1，1′-{9-[2-(二乙基氨基)乙基]-9H-咔唑-3，6-二基}双(3-氯丙-1-酮)盐酸盐(33)。
将化合物32(17.9g，67.3mmol)的硝基苯(150mL)溶液在冰浴中冷却。分批加入AlCl3(45.0g，337.1mmol)。然后滴加3-氯丙酰基氯(32.4mL，336.7mmol)达10min。将反应混合物搅拌40min(LC/MS监测)，倒入冰与稀HCl的混合物中，并用CHCl3萃取。将萃取液蒸发。残余物在厚短柱中用色谱法纯化(硅胶，CHCl3/MeOH 99∶1→90∶10)，得到22.9g(76.3％)盐酸盐33。
6-[2-(二乙基氨基)乙基]-10，11-二氢-1H-二环戊二烯并[c，g]咔唑-3，9(2H，6H)-二酮盐酸盐(实施例3)。
将盐酸盐2(22.9g，51.3mmol)溶于98％H2SO4(150mL)中。将溶液在80℃下保持4h(TLC监测，CHCl3/MeOH 4∶1)后倒入冰中。所得混合物用Na2CO3中和并用CHCl3萃取。将萃取液蒸发。残余物在短厚柱中通过色谱法纯化(硅胶，CHCl3/MeOH 99∶1→90∶10)并用MeOH重结晶，得到0.562g(3％)产物。将后者溶于CH2Cl2中，加入HCl的二烷溶液，并将混合物蒸发至干。残余物用***洗涤后干燥，得到0.6358g盐酸盐。1H NMR(DMSO-d6)：δ1.26(6H，t，J＝7.4Hz)；2.77-2.80(4H，m)；3.42-3.47(2H，m)；3.23-3.34(4H，m)；3.83-3.85(4H，m)；5.88(2H，t，J＝7.8Hz)；7.84(2H，d，J＝8.6Hz)；7.97(2H，d，J＝8.6Hz)；10.75(1H，br.s)。ELSD：100％，ESI-MS：m/z 375[M+H]+。
实施例4
Figure BPA00001347451800501
4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)茚满-1-酮(34)。
将乙酸钾(17.8g，181.6mmol)和Pd(dppf)Cl2(3.3g，4.5mmol)加入到4-溴-1-茚满酮(19.3g，91.5mmol)和二硼酸二频哪醇酯(23.2g，91.3mmol)的二
Figure BPA00001347451800502
烷(300mL)的溶液中。将混合物在氩气中加热到80℃，在该温度下保持16h，冷却，通过Celite牌硅藻土过滤，和蒸发。将残余物溶于CH2Cl2中。产物在短厚柱上用硅胶纯化(洗脱剂：己烷-乙酸乙酯100∶0→50∶50)。34的产量：23.4g。含有二硼酸二频哪醇酯(约7molar％)的产物无需额外的纯化就可用于下一步骤。
4-(4-甲氧基-2-硝基苯基)茚满-1-酮(35)。
将钾碱(7.5g，54.3mmol)和Pd(PPh3)4(1.6g，1.4mmol)加入到4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)茚满-1-酮34(7.0g，27.1mmol)和4-氯-3-硝基茴香醚(5.1g，27.1mmol)在二
Figure BPA00001347451800503
烷(80mL)和水(20mL)混合物的溶液中。将所获得的混合物在氩气中加热到80℃，在该温度下保持16h(TLC监测，洗脱剂：己烷-乙酸乙酯，1∶1)，冷却，通过Celite牌硅藻土过滤，蒸发，溶于CH2Cl2。然后从不溶的部分中滤出该混合物，与硅胶一起蒸发，在短厚柱上用硅胶纯化(洗脱剂：己烷-CH2Cl2 100∶0→0∶100，CH2Cl2-乙酸乙酯100∶0→50∶50)。35的产量：5.59g。产物无需额外的纯化就可用于下一步骤。
8-甲氧基-1，6-二氢环戊二烯并[c]咔唑-3(2H)-酮(36)。
将所获得的联苯35(5.59g)分成五份(各1.11g)；然后向每一份中加入P(OEt)3(每份7mL)。所得混合物在烧瓶中进行氩气吹扫，加热到最高90℃，在该温度下保持3天，和冷却。使咔唑沉淀出来。然后反应混合物用***稀释；将沉淀物滤出并用CH2Cl2洗涤。如果初始联苯化合物仍保留在滤液中(TLC监测，洗脱剂：己烷-乙酸乙酯，1∶1)，则将该滤液蒸发后加入P(OEt)3(每个烧瓶中加入1mL)。混合物进行重复环化一天。重复该程序直到停止沉淀为止，TLC数据表明不存在初始联苯化合物。咔唑36的总产量：2.16g。
6-[3-(二甲基氨基)丙基]-8-甲氧基-1，6-二氢环戊二烯并[c]咔唑-3(2H)-酮(37)。
将化合物36(1.0g，3.98mmol)悬浮于CH2Cl2(10mL)中；加入NaH(0.75g，12.0mmol，3eq.)。将混合物在室温下搅拌5-10min；然后加入3-二甲基氨基-1-丙基氯盐酸盐(0.75g，4.74mmol，1.2eq.)。将反应混合物加热到70℃，在该温度下保持2h(TLC监测，洗脱剂：CH2Cl2-乙酸乙酯，1∶1-存在初始咔唑，CHCl3-MeOH，9∶1-产物的纯度)。所得混合物用水稀释，用乙酸乙酯萃取，蒸发，在短厚柱上用硅胶纯化，洗脱剂：CHCl3-MeOH 99∶1→90∶10。37的产量：0.84g(63％)。
9-乙酰基-6-[3-(二甲基氨基)丙基]-8-甲氧基-1，6-二氢环戊二烯并[c]咔唑-3(2H)-酮(38)。
将化合物37(0.84g，2.51mmol)的PhNO2(20mL)溶液在冰浴中冷却。然后加入AlCl3(1.7g，12.7mmol，5eq.)，此后再加入AcCl(0.9mL，12.7mmol，5eq.)。将混合物保持40min(LC/MS监测)，用水稀释，用Na2CO3中和，用CHCl3萃取，和蒸发。产物在短厚柱上纯化，洗脱剂：CHCl3-MeOH 99∶1→90∶10。38的产量：0.658g(69％)。
9-乙酰基-6-[3-(二甲基氨基)丙基]-8-羟基-1，6-二氢环戊二烯并[c]咔唑-3(2H)-酮(实施例4；19c)。
将0.5M BBr3溶液(16.5mL，5eq.)在氩气中滴加到化合物38(0.658g，1.74mmol)的CH2Cl2(100mL)溶液(冷却至-40℃)中。将混合物保持10min；然后去除冷浴后将混合物加热到室温并保持1-2h(TLC监测，洗脱剂：CHCl3/NH3-MeOH，9∶1)。将所得混合物倒在NaHCO3水溶液和CH2Cl2的混合物中。分离有机层；水层用CH2Cl2萃取，经Na2SO4干燥，蒸发，溶于CHCl3-MeOH-水(40∶9∶1)混合物中。产物在硅胶柱中纯化，用后一混合物作为洗脱剂。实施例4的产量：0.258g(41％)。为了制备盐酸盐，将分离出的产物溶于CH2Cl2-MeOH混合物中；加入HCl的二
Figure BPA00001347451800521
烷溶液。将所得混合物蒸发至干；残余物用***洗涤。
1H NMR谱(DMSO-d6)：δ2.14-2.20(2H，m)；2.70(6H，d，J＝4.9Hz)；2.78-2.81(2H，m)；3.12-3.17(2H，m)；3.60-3.62(2H，m)；4.51(2H，t，J＝7.1Hz)；7.28(1H，s)；7.73(2H，s-降级的AB体系)；8.55(1H，s)；10.40(1H，br.s)；12.76(1H，s)。ELSD：100％，ESI-MS：m/z 364[M+H]+。
实施例5
Figure BPA00001347451800522
4，4′-二甲氧基-2-硝基联苯(39)
将钾碱(Potash)(9.10g，65.9mmol)和Pd(PPh3)4(1.90g，1.6mmol)加入到4-甲氧基苯基硼酸(5.0g，32.9mmol)和4-氯-3-硝基茴香醚(anizole)(6.17g，32.9mmol)在二
Figure BPA00001347451800531
烷(80mL)和水(20mL)的混合物的溶液中。将所得混合物在氩气中加热到80℃，在该温度下保持16h(TLC监测，洗脱剂：己烷-乙酸乙酯，4∶1)，冷却，通过Celite牌硅藻土过滤。产物用CH2Cl2洗出来。将残余物溶于CH2Cl2中并在短厚柱上纯化(洗脱剂：己烷-CH2Cl2100∶0→0∶100，CH2Cl2-乙酸乙酯100∶0→50∶50)。1的产量：8.47g。
2，7-二甲氧基-9H-咔唑(40)
将化合物39(8.47g)分成8份(各1.06g)。然后，向每一份中加入P(OEt)3(每份7mL)。所得混合物进行氩气吹扫，加热到90℃，在该温度下保持3天，冷却，用***稀释。将所获得的沉淀物过滤并用CH2Cl2洗涤。咔唑40的产量：3.33g。
[3-(2，7-二甲氧基-9H-咔唑-9-基)丙基]二甲胺(40)
将化合物40(0.7g，3.1mmol)悬浮于DMF(6mL)中。加入氢化钠(0.4g，10.0mmol)，将混合物在室温下搅拌5-10min。然后加入3-二甲基氨基-1-丙基氯盐酸盐(0.73g，4.6mmol)。将所获得的混合物加热到50-60℃，在该温度下保持16h(TLC监测，洗脱剂：CH2Cl2-乙酸乙酯，1∶1-存在初始咔唑；CH2Cl2-MeOH，9∶1-产物的纯度)，并用水稀释。放置所获得的白色沉淀物沉降1h，滤出后风干。41的产量：0.96g(100％)。
1，1′-{9-[3-(二甲基氨基)丙基]-2，7-二甲氧基-9H-咔唑-3，6-二基}二乙酮(42)
将化合物41(0.96g，3.2mmol)溶于PhNO2(20mL)中；溶液在冰浴上冷却。然后，分批加入AcCl(1.1mL，15.4mmol)，再分批加入AlCl3(2.1g，15.7mmol)。将所得混合物保持40min(LC/MS监测)，用水稀释，用Na2CO3中和，用CHCl3萃取，和蒸发。产物在短厚柱上用硅胶纯化。42的产量：0.787g(62％)。
1，1′-{9-[3-(二甲基氨基)丙基]-2，7-二羟基-9H-咔唑-3，6-二基}二乙酮(实施例5；19b)。
将0.5M的BBr3溶液(22.5mL)在氩气中滴加到化合物42(0.787g，1.99mmol)的CH2Cl2(90mL)溶液中，冷却至-40℃。在10min之后，去除冷浴；将混合物加热至室温并保持1-2h(TLC监测，洗脱剂：氯仿-甲醇，4∶1)。把所得混合物倒入苏打水溶液和CH2Cl2的混合物中。分离有机层。水层用CH2Cl2萃取，经Na2SO4干燥，蒸发，溶于CHCl3-MeOH-水(40∶9∶1)混合物。产物在柱上纯化。实施例5的产量：0.379g(52％)。
然后，将产物溶于CH2Cl2-MeOH混合物中。加入HCl的二
Figure BPA00001347451800541
烷溶液。将所得溶液蒸发至干；残余物用CH3CN和***洗涤。自产物(0.379g)的碱形式分离得到0.339g盐酸盐。
1H NMR(DMSO-d6)δ：2.09-2.13(2H，m)；2.72(6H，s)；2.77(6H，s)；3.13-3.16(2H，m)；4.34(2H，t，J＝7.1Hz)；7.13(2H，s)；8.84(2H，s)；10.17(1H，br.s)；12.82(2H，s)。ELSD：100％，ESI-MS：m/z 369[M+H]+。
实施例6
Figure BPA00001347451800551
4-(2-硝基苯基)茚满-1-酮(45)。
将钾碱(8.1g，58.7mmol)和Pd(PPh3)4(1.7g，1.5mmol)加入到化合物44(7.51g，29.1mmol)和4-氯-3-硝基苯(4.6g，29.1mmol)在二
Figure BPA00001347451800552
烷(80mL)和水(20mL)混合物中的溶液中。所获得的混合物在氩气中加热到80℃，并在该温度下保持16h(TLC监测，洗脱剂：己烷-乙酸乙酯，1∶1)，冷却，通过Celite牌硅藻土过滤，和蒸发。将所得产物溶于CH2Cl2中并将不溶的残余物滤出。所得产物与硅胶一起蒸发并在短厚柱上纯化(洗脱剂：己烷-CH2Cl2 100∶0→0∶100，CH2Cl2-乙酸乙酯100∶0→50∶50)。化合物45(5.0g)分离后无需纯化而用于下一步骤。
1，6-二氢环戊二烯并[c]咔唑-3(2H)-酮(46)。
把化合物45(5.0g)分成五份(各1.0g)。向每一份中加入P(OEt)3(每份7mL)。所得产物在烧瓶中进行氩气吹扫，加热到90℃，在该温度下保持3天，然后冷却。咔唑沉淀物用***稀释。将沉淀物过滤并用***洗涤。如果在滤液中存在初始联苯(TLC监测，洗脱剂：己烷-乙酸乙酯，1∶1)，则蒸发该滤液，然后加入P(OEt)3(每个烧瓶各加1mL)并进行环化1天。重复该程序直到沉淀停止并且TLC显示不存在初始联苯。得到咔唑46(2.7g)。
2-硝基-N-丙基苯磺酰胺(49)。
在室温下，将2-硝基苯基磺基氯(8g，36mmol)的乙酸乙酯(25mL)溶液滴加到丙胺(3mL，36.0mmol)、乙酸乙酯(15mL)、Na2CO3(4g，37.7mmol)和水(25mL)的混合物中。将所得溶液搅拌2h(TLC监测，洗脱剂：CH2Cl2)。分离有机层，用水、柠檬酸溶液洗涤，经Na2SO4干燥，和蒸发。结晶出沉淀物，为白色物质，再用己烷洗出。49的产量：(7.47g，85％)。
N-(3-溴丙基)-2-硝基-N-丙基苯磺酰胺(50)。
将1，3-二溴丙烷(8.5mL，82.0mmol，10eq.)加入到化合物49(2.0g，8.2mmol)的DMF(20mL)溶液中。然后分批加入NaH(0.6g，15.0mmol)。使温度升高到50-60℃。将混合物在该温度下搅拌20min(TLC监测，洗脱剂：CH2Cl2)。然后将混合物小心地倒入冰中。产物用乙酸乙酯萃取，蒸发萃取液。残余物用己烷从1，3-二溴丙烷中洗出。将所得产物溶于CH2Cl2中并在短厚柱上用硅胶纯化，洗脱剂：己烷-CH2Cl2 100∶0→0∶100。分离得到化合物50(1.87g，62％)，为可快速结晶的油状物。
2-硝基-N-[3-(3-氧代-2，3-二氢环戊二烯并[c]咔唑-6(1H)-基)丙基]-N-丙基苯磺酰胺(47)。
将化合物46(0.538g，2.43mmol)和溴化物50(0.9g，2.46mmol)溶于CH2Cl2(30mL)中。然后加入NaH(0.15g，3.75mmol，1.5eq.)。将反应混合物搅拌20min(TLC监测，洗脱剂：己烷-乙酸乙酯，1∶1)。然后，把混合物倒在冰上。产物用乙酸乙酯萃取，萃取液在旋转蒸发器内蒸发。在高真空下去除CH2Cl2的残余物。将甲醇加入到硬化沉淀物中。产物进行研磨；沉淀物滤出。47的产量：0.638g(52％)。
N-[3-(9-乙酰基-3-氧代-2，3-二氢环戊二烯并[c]咔唑-6(1H)-基)丙基]-2-硝基-N-丙基苯磺酰胺(48)。
将化合物47(0.638g，1.26mmol)溶于PhNO2(7mL)中。将溶液在冰浴上冷却，加入AlCl3(0.67g，5.02mmol)，然后再加入AcCl(0.45mL，6.31mmol)。将混合物保持40min(LC/MS监测)，用水稀释。产物用CH2Cl2萃取。蒸发萃取液。蒸发残余物，使产物通过Celite牌硅藻土，洗脱剂：CH2Cl2-乙酸乙酯100∶0→50∶50。48的产量：0.453g(66％)。
9-乙酰基-6-[3-(丙基氨基)丙基]-1，6-二氢环戊二烯并[c]咔唑-3(2H)-酮(实施例6)。
将化合物48(0.496g，0.91mmol)悬浮于MeOH(10mL)和CHCl3(15mL)的混合物中。将混合物加热到沸腾。然后加入Cs2CO3(0.6g，1.82mmol)，立即倒入PhSH(0.2mL，1.96mmol)(溶液变成蓝色)。将所得溶液回流2h(TLC监测，洗脱剂：CHCl3-MeOH，9∶1)。在此期间，反应混合物变成绿色。然后，将混合物蒸发至干。加入稀柠檬酸溶液。将黄色沉淀物滤出，用***洗涤，悬浮于CH3CN中，和回流。在冷却之后，由黄色滤液滤出米色沉淀物，然后用***洗涤。分离得到的产物(0.251g，76％)。为了将碱形式转化成盐酸盐，将产物溶于CH2Cl2-甲醇混合物中。(加入混合物直到产物完全溶解)。然后，加入盐酸的二
Figure BPA00001347451800571
烷溶液。将溶液蒸发至干。所获得的深紫色(dark-lilac)沉淀物用甲醇和乙腈洗涤。实施例6作为盐酸盐的产量：0.118g。
H1-NMR(400MHz，DMSO-d6)谱：δ0.88(3H，t，J＝7.32Hz)；1.53-1.62(2H，m)；2.13-2.20(2H，m)；2.73(2H，s)；2.80-2.83(4H，m)；2.95-2.96(2H，m)；3.65-3.68(2H，m)；4.68(2H，t，J＝7.3Hz)；7.81(1H，d，J＝8.6Hz)；7.85(1H，d，J＝8.6Hz)；8.15(1H，dd，J＝8.6Hz，J＝1.3Hz)；8.70(1H，br.s)；8.71(1H，d，J＝1.3Hz)。ELSD：100％，ESI-MS：m/z362[M+H]+。
实施例7
Figure BPA00001347451800581
N-(2-羟基乙基)-2-硝基苯磺酰胺(54)。
将乙醇胺(10mL，165mmol)溶于乙酸乙酯(60mL)中。然后加入Na2CO3(22.7g，214.2mmol)的水(100mL)溶液。然后，在搅拌下滴加2-硝基苯磺酰基氯(35.0g，157.9mmol)的乙酸乙酯(100mL)溶液。将所得溶液在室温下搅拌2h(TLC监测，洗脱剂：CH2Cl2)。分离有机层，用水和柠檬酸溶液洗涤，经Na2SO4干燥，和蒸发。54的产量：29.5g(73％)，为白色晶体。
甲烷磺酸2-{[(2-硝基苯基)磺酰基]氨基}乙基酯(55)。
将三乙胺(20mL，144.6mmol)加入到化合物54(29.5g，119.9mmol)的乙酸乙酯(300mL)溶液中。混合物在冰浴中冷却至10℃。然后，在温度≤20℃下滴加甲磺酰氯(10.2mL，131.8mmol)的乙酸乙酯(50mL)溶液。将所得溶液在室温下搅拌3h(TLC监测，洗脱剂：己烷-乙酸乙酯，4∶1)。过滤反应混合物以去除沉淀物-三乙胺盐酸盐。滤液用NaHCO3水溶液、水洗涤后蒸发。55的产量：32.2g(83％)，为晶体。
1-[(2-硝基苯基)磺酰基]氮丙啶(56)。
将KOH(1.73g，31mmol)的水(50mL)溶液加入到化合物55(10g，31mmol)的乙酸乙酯(100mL)溶液中。水层染成黄色。将混合物在室温下搅拌1h(TLC监测，洗脱剂：CH2Cl2-乙酸乙酯，1∶1)。必要时，另外分批加入KOH溶液(0.5eq.)。分离有机层，用水、柠檬酸溶液(至pH 7)充分洗涤，再次用水洗涤，经Na2SO4干燥，和蒸发。56的产量：6.6g(93％)，为带黄色的液体油状物。
N-[2-(9H-咔唑-9-基)乙基]-2-硝基苯磺酰胺(51)。
将咔唑(1.10g，6.59mmol)溶于CH3CN(40mL)中。然后加入氢氧化钠(sodium hydrate)(0.33g，8.25mmol)，将混合物在室温下搅拌15-20min。然后，一次性加入氮丙啶56(1.5g，7.89mmol)的CH3CN(30mL)溶液。将所得混合物搅拌1h(TLC监测，洗脱剂：己烷-乙酸乙酯，1∶1)，倒入水中，用HCl酸化至pH为1，再次在室温下搅拌。橙色产物逐渐地从浑浊溶液中沉淀出来。将沉淀物过滤，再用MeOH和***洗涤。51的产量：2.15g(83％)，为橙色晶体。
N-[2-(3，6-二乙酰基-9H-咔唑-9-基)乙基]-2-硝基苯磺酰胺(52)。
将化合物51(5.0g，12.7mmol)溶于PhNO2(30mL)中。将溶液在冰浴中冷却。然后加入AlCl3(8.5g，63.7mmol)，此后再加入AcCl(4.5mL，63.1mmol)。将混合物保持40min(LC/MS监测)，用水稀释，用氯仿萃取，和蒸发。产物在短厚柱上用硅胶纯化，洗脱剂：CH2Cl2-乙酸乙酯100∶0→50∶50。将乙醇和25％氨水(4∶1)的混合物加入到残余物中。将所得产物回流1.5-2h。将热的悬浮液滤出。分离得到产物52(4.11g，68％)，为米色晶体。
1，1′-[9-(2-氨基乙基)-9H-咔唑-3，6-二基]二乙酮(53)。
将化合物52(4.11g，8.58mmol)在回流下溶于CH3CN(150mL)和甲醇(50mL)的混合物中。然后，加入Cs2CO3(8.4g，25.78mmol)后立即倒入PhSH(2.6mL，25.48mmol)。所得混合物回流2.5h(TLC监测，洗脱剂：氯仿-甲醇，9∶1)后蒸发至干。然后，加入水和HCl溶液。结果，所有的固体产物都溶解了。酸性水溶液用乙酸乙酯萃取直到后者停止变成黄色。水层用饱和NaHCO3溶液中和，用CH2Cl2-MeOH混合物(4∶1)萃取，蒸发萃取液。残余物用MeCN洗出后，再用***洗涤。53的产量：1.25g(50％)，为米色晶体。
1，1′-{9-[2-(异丙基氨基)乙基]-9H-咔唑-3，6-二基}二乙酮(实施例7；6h)。
将丙酮(5mL，68.10mmol)加入到化合物53(1.25g，4.25mmol)的CH2Cl2(50mL)溶液中。然后加入STAB(3.0g，14.15mmol)。将所获得的混合物在室温下搅拌4.5h(TLC监测，洗脱剂：CHCl3-MeOH，9∶1)，然后倒入NaHCO3水溶液中。分离有机层。水层用CH2Cl2萃取。产物经Na2SO4干燥后蒸发。残余物在柱上纯化，洗脱剂：CHCl3-MeOH99∶1→90∶10。分离得到实施例7(1.04g，73％)，为快速结晶的油状物。对于其盐酸盐的制备，将所述碱溶于CH2Cl2中。然后，加入HCl的二烷溶液。将混合物蒸发至干。产物用***洗涤。
1H NMR(DMSO-d6)谱：δ1.25(6H，d，J＝6.6Hz)；2.72(6H，s)；3.33-3.39(3H，m)；4.87(2H，t，J＝7.3Hz)；7.92(2H，d，J＝8.7Hz)；8.17(2H，dd，J＝8.7Hz，J＝1.6Hz)；9.01(2H，d，J＝1.6Hz)；9.24(1H，br.s)；9.33(1H，br.s)。ELSD：100％，ESI-MS：m/z 336[M+H]+。
实施例8
Figure BPA00001347451800602
化合物51的合成法描述于实施例7中。
N-{2-[3，6-双(3-氯丙酰基)-9H-咔唑-9-基]乙基}-2-硝基苯磺酰胺(57)
将化合物51(20.0g，50.6mmol)溶于PhNO2(130mL)中并将溶液在冰浴中冷却。然后加入AlCl3(34.0g，254.7mmol)，此后再加入3-氯丙酰基氯(25.0mL，259.8mmol)。将混合物保持40min(LC/MS监测)，倒入稀HCl和冰的混合物中，用CHCl3萃取，并保持16h。将所获得的草黄色(straw-colored)沉淀物过滤后用***洗涤。57的产量：18.47g(63％)。
N-[2-(3，9-二氧代-1，2，3，9，10，11-六氢-6H-二环戊二烯并[c，g]咔唑-6-基)乙基]-2-硝基苯磺酰胺(58)
将硫酸(200mL)加热到40℃。然后，分批加入化合物57(18.47g，32.12mmol)。将混合物加热到90℃并保持在该温度下达1.5-2h(TLC监测，洗脱剂：CH2Cl2-乙酸乙酯，4∶1)。把所得混合物倒在冰上。将灰色沉淀物滤出，在滤器上用CHCl3-MeOH(4∶1)混合物洗涤。剩下的沉淀物(在滤器上)用DMF重结晶，用CH3CN和***洗涤。纯58的产量：2.2g(14％)。
6-(2-氨基乙基)-10，11-二氢-1H-二环戊二烯并[c，g]咔唑-3，9(2H，6H)-二酮(59)
将化合物58(2.2g，4.38mmol)悬浮于氯仿(200mL)和甲醇(200mL)的混合物中。然后加入Cs2CO3(4.3g，13.20mmol)，并立即再加入PhSH(1.3mL，12.74mmol)。将溶液回流18h(LC/MS监测)并蒸发至干。然后，加入柠檬酸水溶液。所获得的溶液用NaHCO3水溶液中和。将沉淀物滤出，用CH3CN和***洗涤。分离出的产物无需纯化就可用于下一步骤。
6-[2-(异丙基氨基)乙基]-10，11-二氢-1H-二环戊二烯并[c，g]咔唑-3，9(2H，6H)-二酮(实施例8)
将粗制化合物59(1.69g)悬浮于CH2Cl2(200mL)中。然后加入丙酮(4mL)和STAB(3.4g)。将混合物搅拌24h(TLC监测，洗脱剂：CHCl3-MeOH，9∶1)，然后倒入NaHCO3水溶液中。然后，加入另一份CH2Cl2和MeOH。分离有机层，蒸发，用MeCN和***洗涤。实施例8的产量：0.759g。对于盐酸盐的制备，将所分离的产物悬浮于CH2Cl2和MeOH的混合物中，然后加入HCl的二
Figure BPA00001347451800621
烷溶液。所得混合物蒸发至干，将乙醇加入到残余物中。将乙醇溶液回流和冷却，沉淀物进行过滤。化合物实施例8盐酸盐的产量：0.684g。1H-NMR(DMSO-D6)谱：δ1.24(6H，d，J＝6.6Hz)；2.77-2.79(4H，m)；3.34-3.43(3H，m)；3.81-3.84(4H，m)；4.91(2H，t，J＝7.3Hz)；7.83(2H，d，J＝8.6Hz)；7.91(2H，d，J＝8.6Hz)；9.11(2H，br.s)。ELSD：100％，ESI-MS：m/z 360[M+H]+。
实施例9
N-乙基-2-硝基苯磺酰胺(63)。
在室温下，将2-硝基苯磺酰基氯(140g，361mmol)的乙酸乙酯(250mL)溶液滴加到70％乙胺水溶液(50mL，630mmol)、乙酸乙酯(100mL)、Na2CO3(67g，632mmol)和水(250mL)的混合物中。将反应混合物搅拌4h(TLC监测，CH2Cl2)。分离有机层，依次用水、柠檬酸溶液洗涤，用Na2SO4干燥，和蒸发。残余物固化成白色结晶物质。后者用己烷研磨、滤出和干燥，得到134g(92％)产物。
N-(3-溴丙基)-N-乙基-2-硝基苯磺酰胺(64)。
将化合物63(7.8g，33.9mmol)溶于DMF(100mL)中。加入1，3-二溴丙烷(35mL，343.0mmol)，然后分批加入NaH(2.7g，67.5mmol)，随后使温度升高到50-60℃。将反应混合物在该温度下搅拌1h(TLC监测，CH2Cl2)，小心地倒入冰/水混合物中，用乙酸乙酯萃取。蒸发萃取液。残余物用己烷洗涤以去除1，3-二溴丙烷。得到化合物64(9.7g，82％)，为粘稠的黄色油状物。
N-[3-(9H-咔唑-9-基)丙基]-N-乙基-2-硝基苯磺酰胺(60)。
将咔唑(4.15g，24.8mmol)和溴化物64(9.7g，27.6mmol)溶于DMF(30mL)中。分批加入NaH(2.0g，50.0mmol，2eq)，随后使温度升高到60℃。将反应混合物搅拌1h(TLC监测，己烷/乙酸乙酯3∶2)，倒入冰/水混合物中，用乙酸乙酯萃取。残余物用***研磨。将黄色沉淀物滤出后干燥，得到6.65g(61％)产物。
N-{3-[3，6-双(3-氯丙酰基)-9H-咔唑-9-基]丙基}-N-乙基-2-硝基苯磺酰胺(61)。
将化合物63(6.65g，15.2mmol)溶于PhNO2(70mL)中。所得溶液在冰浴中冷却。加入AlCl3(12.2g，91.4mmol)，然后加入2-氯丙酰基氯(8.8mL，91.4mmol)。将反应混合物保持40min(LC/MS监测)，用水稀释，用CH2Cl2萃取。蒸发萃取液。残余物在短厚柱中通过色谱法纯化(洗脱剂：CH2Cl2/乙酸乙酯0∶100→50∶50)。残余物用***研磨、滤出和干燥，得到7.60g(81％)带绿色的结晶产物。
N-[3-(3，9-二氧代-1，2，3，9，10，11-六氢-6H-二环戊二烯并[c，g]咔唑-6-基)丙基]-N-乙基-2-硝基苯磺酰胺(62)。
将H2SO4(110mL)加热到40℃。分批加入化合物61(7.6g，12.3mmol)。将反应混合物加热到100℃，在该温度下保持2h(TLC监测，CH2Cl2/乙酸乙酯4∶1)后倒入冰中。将生成的灰色沉淀物滤出。然后将CHCl3/MeOH 4∶1(500mL)倒入滤器中。将滤器上的固体溶解，所生成的溶液移入分液漏斗内。加入Na2CO3水溶液。分离有机层，用Na2SO4干燥，和蒸发。将乙腈加入到残余物中。将米色沉淀物滤出，依次用乙腈、***洗涤后干燥，得到1.56g(23％)米色结晶产物。
6-[3-(乙基氨基)丙基]-10，11-二氢-1H-二环戊二烯并[c，g]咔唑-3，9(2H，6H)-二酮(实施例9)。
将化合物62(1.56g，2.86mmol)悬浮于CHCl3(80mL)和MeOH(80mL)的混合物中。加入Cs2CO3(2.8g，8.59mmol)，然后马上加入PhSH(0.87mL，8.53mmol)。将反应混合物回流6h(TLC监测，CHCl3/MeOH 9∶1)并蒸发至干。加入柠檬酸水溶液。所得溶液用NaHCO3的溶液中和。将生成的沉淀物滤出，依次用乙酸乙酯、乙腈、水洗涤、再次用乙腈洗涤，然后用***洗涤，得到0.75g(73％)产物。后者转化成它的盐酸盐。在与4M HCl的二烷溶液一起蒸发之后，残余物用MeOH洗涤，得到0.59g盐酸盐。1H NMR(DMSO-d6)：δ1.66(3H，t，J＝7.3Hz)；2.09-2.17(2H，m)；2.73-2.77(4H，m)；2.86-2.91(2H，m)；2.95-3.10(2H，m)；3.77-3.80(4H，m)；4.70(2H，t，J＝7.3Hz)；7.80(2H，d，J＝8.6Hz)；7.89(2H，d，J＝8.6Hz)；8.83(2H，br.s)。ELSD：100％，ESI-MS：m/z 360[M+H]+。
实施例10和11
Figure BPA00001347451800642
化合物46的合成法描述于实施例6中。
6-[2-(1-甲基吡咯烷-2-基)乙基]-1，6-二氢环戊二烯并[c]咔唑-3(2H)-酮(65)。
将咔唑46(0.4g，1.81mmol)溶于CH2Cl2(7mL)中，然后加入NaH(0.22g，5.50mmol)。将混合物在室温下搅拌5-10min，再加入2-(2-氯乙基)-1-甲基吡咯烷盐酸盐(0.4g，2.17mmol)。将混合物加热到60℃并保持在该温度下达4h(TLC监测，洗脱剂：CHCl3-MeOH，9∶1)。将所得混合物倒入水中。产物用乙酸乙酯萃取，经Na2SO4干燥，和蒸发。残余物用***研磨。将沉淀物滤出。65的产量：0.365g(61％)-S-异构体和0.336g(55％)-R-异构体。
9-乙酰基-6-[2-(1-甲基吡咯烷-2-基)乙基]-1，6-二氢环戊二烯并[c]咔唑-3(2H)-酮(实施例10和11)。
将化合物65(0.336g，1.00mmol)溶于PhNO2(7mL)中。所得溶液在冰浴中冷却。然后，加入AlCl3(0.67g，5.02mmol)，此后再加入AcCl(0.36mL，5.04mmol)。将所得混合物保持40min(LC/MS监测)，用水稀释，用NaHCO3水溶液中和，用CHCl3萃取，和蒸发。产物在短厚柱上纯化，洗脱剂：100∶0→90∶10。产物的产量：0.307g(82％)(R)；类似地得到S-异构体(77％)。
实施例10
1H-NMR(DMSO-D6)谱：δ1.69-1.79(1H，m)；1.86-2.01(2H，m)；2.07-2.24(2H，m)；2.42-2.56(1H，m)；2.73(3H，s)；2.75(3H，d，J＝5.12Hz)；2.79-2.82(2H，m)；2.96-3.05(1H，m)；3.36-3.43(1H，m)；3.49-3.57(1H，m)；3.64-3.67(2H，m)；4.62-4.75(2H，m)；7.80(1H，d，J＝8.6Hz)；7.87(1H，d，J＝8.6Hz)；7.96(1H，d，J＝8.6Hz)；8.19(1H，dd，J＝8.6Hz，J＝1.5Hz)；8.70(1H，d，J＝1.5Hz)；10.63(1H，br.s)。ELSD：100％，ESI-MS：m/z 374[M+H]+。
实施例11
1H-NMR(DMSO-D6)：δ1.69-1.79(1H，m)；1.86-2.01(2H，m)；2.05-2.24(2H，m)；2.40-2.46(1H，m)；2.73(3H，s)；2.75(3H，d，J＝5.12Hz)；2.79-2.82(2H，m)；2.98-3.02(1H，m)；3.36-3.43(1H，m)；3.47-3.57(1H，m)；3.63-3.66(2H，m)；4.62-4.75(2H，m)；7.80(1H，d，J＝8.6Hz)；7.87(1H，d，J＝8.6Hz)；7.96(1H，d，J＝8.8Hz)；8.18(1H，dd，J＝8.8Hz，J＝1.4Hz)；8.69(1H，d，J＝1.4Hz)；10.72(1H，br.s)。ELSD：100％，ESI-MS：m/z 374[M+H]+。
实施例50的合成法
Figure BPA00001347451800661
步骤1.4-羟基茚满-1-酮(86)
在150℃，将色满酮85(100g，0.68mol)滴加到150g NaCl和500g AlCl3的混合物中。将所得混合物加热到180℃，然后搅拌8h。然后将混合物冷却至室温，并在充分搅拌下加入1kg碎冰。在匀化之后，将混合物过滤，用1L冷水洗涤后干燥，得到约80g(80％)4-羟基茚满-1-酮(86)，为灰色固体。
步骤2.三氟甲烷磺酸1-氧代-2，3-二氢-1H-茚-4-基酯(87)
在0℃，将三氟甲磺酸酐(152g，0.54mol)滴加到80g化合物86和60g NEt3在1L CH2Cl2中的溶液中。所得混合物回流2h，冷却至室温，过滤，用水(0.5L)、柠檬酸水溶液(50g/0.5L)、盐水(0.5L)洗涤，在Na2SO4上干燥，和蒸发，得到约100g(67％)化合物87，为深色液体。
步骤3.4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)茚满-1-酮(88)
将由乙酸钾(48g，0.5mol，1.5eq)、三氟甲磺酸酯87(100g，0.36mol，1.1eq)、双(频哪基)二硼烷(bis(pinacolo)diborane)(100g，0.38mol，1.2eq)、PPh3(5g，0.02mol，0.06eq)和PdCl2(PPh3)2(6.9g，0.01mol，0.03eq)与脱气甲苯(2L)组成的混合物在氩气氛下回流过夜。所得混合物蒸发至干后经色谱纯化(用EtOAc/己烷(1/5)洗脱)。收集含有所需产物的流分并蒸发，得到约50g(57％)化合物88，为浅黄色固体。
步骤4.4-(2-硝基苯基)-茚满-1-酮(89)
将脱气甲苯(0.5L)、硼杂环戊烷(borolan)88(10g，39mmol)、2-氯-1-硝基苯(6.3g，40mmol)、Pd(PPh3)4(3g，2.6mmol)和2M Na2CO3(200mL)在氩气的快速流中混合，所得混合物回流过夜。加入水(200mL)和EtOAc(500mL)。分离水层，用EtOAc(2x500mL)萃取，合并的萃取液经Na2SO4干燥。减压蒸发溶剂，粗产物通过柱色谱法纯化(20％EtOAc/己烷)，得到9g(91％)联苯中间体89，为黄色固体。
步骤5.1，2-二氢-6H-环戊二烯并[c]咔唑-3-酮(90)
将联苯89(9g，35mmol)和亚磷酸三乙酯加入到密封的弹状容器(sealed bomb)中，在120℃下加热过夜。在冷却至室温之后，将混合物过滤，得到4g 1，2-二氢-6H-环戊二烯并[c]咔唑-3-酮。用***沉淀后另外得到2g所需产物。90作为黄色粉末的总收率为77.5％。
步骤6.9-乙酰基-1，2-二氢-6H-环戊二烯并[c]咔唑-3-酮(91)
将1，2-二氢-6H-环戊二烯并[c]咔唑-3-酮90(6g，27.1mmol)悬浮于无水CH2Cl2(100mL)中。在冰浴上边搅拌边加入无水AlCl3(6g，45mmol)，然后滴加AcCl(2.4mL，33.2mmoL)。将反应混合物在5℃左右搅拌24h，再倒入冰水中。将析出的灰色固体滤出，用水(2x100mL)、丙酮(3x50mL)、***(3x50mL)洗涤，得到4g(56.3％)9-乙酰基-1，2-二氢-6H-环戊二烯并[c]咔唑-3-酮91。
步骤7.9-乙酰基-1，2-二氢-6-(2-溴乙基)-环戊二烯并[c]咔唑-3-酮(92)
将NaH(2g，60％，50mmol)加入到化合物91(4g，15.2mmol)的无水DMF(100mL)悬浮液中，将混合物在室温下搅拌约1h直到氢气的放出停止。在氮气氛下滴加1，2-二溴甲烷(1，2-dibromethane)(20g，106mmol)。将反应混合物在室温下搅拌30min，然后在60℃下搅拌24h，再倒入冰水(300mL)中。将析出的灰色固体滤出，粗产物通过柱色谱法纯化(CHCl3)，得到2g起始材料和约1g(2.7mmol，35.5％，自转化的材料)烷基化咔唑92，为乳白色固体。
步骤8.9-乙酰基-1，2-二氢-6-(2-(2-丙基)氨基乙基a)-环戊二烯并[c]咔唑-3-酮盐酸盐(实施例50)
将溴化物92(1g，2.7mmol)和2-丙胺加入到密封的弹状容器中并在180℃下加热过夜。在冷却至室温之后，将混合物蒸发至干，残余物用100ml饱和碳酸氢钠水溶液处理后过滤。滤饼通过柱色谱法纯化(CHCl3/MeOH 10/1)。把含有所需产物的流分收集起来，蒸发至干，用40％HCl水溶液(10mL)稀释，蒸发至干，再与甲苯(2x100mL)一起重新蒸发，得到200mg(0.52mmol，19％)9-乙酰基-1，2-二氢-6-(2-(2-丙基)氨基乙基)-环戊二烯并[c]咔唑-3-酮盐酸盐(实施例50)，为灰色固体。
1H-NMR(DMSO-d6)：1.23d(6H)，2.74s(3H)，2.83m(2H)，3.67m(2H)，4.87m(2H)，7.85dd(2H)，7.97d(1H)，8.22d(1H)，8.71s(1H)，8.9-9.2宽s(2H).
实施例51的合成法
Figure BPA00001347451800681
步骤1.9-(3-二甲基氨基丙基)-咔唑(2b)
在氩气氛下，将NaH(14.4g，60％，360mmol)分批加入到咔唑1(20g，119.8mmol)的无水DMF(200mL)悬浮液中。将混合物在室温下搅拌约1h直到氢气的放出停止。在室温下分批加入3-二甲基氨基丙基氯盐酸盐(28g，180mmol)。将反应混合物在室温下搅拌20min，然后在60℃下搅拌3小时，再倒入冷水(500mL)中。产物用EtOAc(2x500mL)萃取。有机层用10％HCl(200mL)反萃取，酸性层用EtOAc萃取以去除未反应的咔唑。加入饱和氨(200mL)，产物再次用EtOAc萃取。蒸发溶剂，得到25g(99mmol，83％)9-(2-二甲基氨基丙基)咔唑2b，为褐色油状物。
步骤2.3，6-二(4-氯丙-2-酮-基)-9-(2-二甲基氨基丙基)咔唑(93)
将9-(2-二甲基氨基丙基)咔唑2b(25g，99mmol)溶于无水CH2Cl2(150mL)中。在搅拌和冷却下，在冰浴中分批加入无水AlCl3(40g，300mmol)。滴加3-氯-丙酰基氯(30mL，312mmol)，同时保持内部温度低于5℃。将反应混合物在该温度下搅拌过夜，倒入碎冰中并用CHCl3/MeOH 1/1(3x500mL)萃取。将萃取液蒸发至干，所得绿色油状物用***(2x250mL)研磨，得到20g(46mmol，47％)3，6-二(3-氯丙酰基)-9-(2-二甲基氨基丙基)-咔唑93，为灰色粉末。
步骤3.6-(3-二甲基氨基丙基)-1，2，10，11-四氢-6H-双(环戊二烯并[c]咔唑-3，9-二酮(实施例51)
在室温下，边搅拌边将3，6-二-(3-氯丙酰基)-9-(2-二甲基氨基丙基)咔唑93(20g，46mmol)分批加入到三氟甲烷磺酸(100g)中，将反应混合物加热到95℃过夜。在冷却至室温之后，将反应混合物倒入冰水中。将沉淀物滤出，用饱和碳酸氢钠处理，再次滤出。所得滤饼含有约80％所需产物和20％异构体。在用甲醇单结晶之后，沉淀物用4NHCl/二烷(100ml)后处理，蒸发至干，再用EtOH重结晶，得到约2.8g(7.1mmol，15.4％)95％实施例51，为白色固体。
LCMS：100％；1H-NMR(DMSO-d6)95％：2.18m(2H)，2.71s(6H)，2.78m(4H)，3.15m(2H)，3.83m(4H)，4.68m(2H)，7.85dd(4H)，10.0br s(1H).
实施例15和17的替代合成法及实施例20的合成法
Figure BPA00001347451800701
除非另有说明，否则试剂和溶剂按照从商业供应商购得时的原样使用。质子核磁共振谱在Bruker ARX 400光谱仪(400MHz)上获得。用溶剂峰作为质子谱的参比峰。反应进程通过TLC或/和LC-MS分析来控制。
9-(2-二乙基氨基乙基)-咔唑(68)
在氩气氛下，将NaH(14.4g，60％，360mmol，3eq)分批加入到咔唑(1)(20g，119.8mmol，1eq)的无水DMF(200mL)悬浮液中。将混合物在室温下搅拌30min直到氢气的放出停止。在室温下分批加入2-二乙基氨基乙基氯盐酸盐(31g，180mmol，1.5eq)。将反应混合物在室温下搅拌20min，然后在60℃下搅拌3小时(TLC监测)，再倒入冷水(1L)中。产物用EtOAc(5x200mL)萃取；有机层用10％HCl(400mL)反萃取，酸性层用EtOAc萃取以去除未反应的咔唑。用K2CO3把水层的pH调到9左右，产物再次用EtOAc萃取。蒸发溶剂，得到29.5g(93％)9-(2-二乙基氨基乙基)咔唑(68)，为褐色油状物。
3，6-二(4-氯丙-2-酮-基)-9-(2-二乙基氨基乙基)咔唑盐酸盐(69)
将9-(2-二乙基氨基乙基)咔唑(68)(17.9g，67.3mmol，1eq)溶于无水二氯甲烷(150mL)中。在冰浴中，在搅拌和冷却下分批加入无水AlCl3(45g，337mmol，5eq)。滴加3-氯-丙酰基氯(32.4mL，337mmol，5eq)，同时保持内部温度低于5℃。将反应混合物在该温度下搅拌15h，倒入冷3％HCl(应当避免急剧起泡沫)后用CHCl3(5x500mL)萃取。蒸发萃取液，所得的绿色油状物用***(5x50mL)研磨，得到24g(74％)3，6-二(3-氯丙酰基)-9-(2-二乙基氨基乙基)-咔唑盐酸盐(69)，为深灰色固体。
1H-NMR(DMSO-d6)：1.27(t，6H)，2.72(q，4H)，3.75(m，6H)，4.02(m，4H)，5.00(t，2H)，8.00(d，2H)，8.17(d，2H)，9.16(s.2H)，11.42(s，1H).
6-(3-二乙基氨基乙基)-1，2，10，11-四氢-6H-双(环戊二烯并[c]咔唑-3，9-二酮(70)
在室温、搅拌下，将3，6-二-(3-氯丙酰基)-9-(2-二乙基氨基乙基)咔唑盐酸盐(69)(5g，10.33mmol，1eq)分批加入到三氟甲烷磺酸(50g，333mmol，32eq)中，将反应混合物加热到95℃过夜。在冷却至室温之后，将反应混合物倒入冰水中。用10％NaOH把水溶液的pH调到9，产物用EtOAc/THF＝3/1混合物萃取。将溶剂蒸发出来，粗产物通过柱色谱法纯化(10％EtOH/EtOAc)，得到1.12g(29％)纯的中间体70，为白色固体。
MS(ESI)：m/z＝375.3[M+H]+；1H-NMR(DMSO-d6)：0.70(t，6H)，2.41(q，4H)，2.68(m，6H)，3.73(m，4H)，4.55(t，2H)，7.77(s，4H).
实施例15
将中间体70(1.12g，2.99mmol，1eq)溶于CH2Cl2(20mL)中，加入10％HCl的乙醇溶液(3.4g，93.15mmol，30eq)，引起大量沉淀物的生成。减压蒸发溶剂，残余物用热MeOH研磨，得到1.17g(98％)实施例15，为灰白色固体。
纯度：97.3％(通过HPLC)；MS(ESI)：m/z＝375.3[M-HCl+H]+；m.p.＝312.1-314.7℃。
实施例17和20用相同的方法制备，但使用适当的氯胺即(CH3)2CH-NH-CH2CH2-Cl或(C2H5)NHCH2CH2-Cl。
实施例7(化合物6h)的替代合成法
Figure BPA00001347451800721
实验部分
除非另有说明，否则试剂和溶剂按照从商业供应商购买时的原样使用。质子核磁共振谱在Bruker ARX 400光谱仪(400MHz)上获得。用溶剂峰作为质子谱的参比峰。TLC在硅胶上运行，除非另有说明。
3，6-二乙酰基咔唑(4)
在氩气氛下，将咔唑(20g，0.12mol，1eq)悬浮于无水CH2Cl2(300mL)中，使所得混合物冷却至0℃。将AlCl3(95.5g，0.72mol，6eq)加入到混合物中，然后再滴加乙酰氯(25.5mL，0.36mol，3eq)，同时保持内部温度在0℃左右。在0℃搅拌3小时之后，加入另一份乙酰氯(5mL，0.07mol，0.6eq)，继续再搅拌2小时。
边搅拌边将反应混合物倒入冰中。固体经过滤收集起来，依次用CH2Cl2、水洗涤，在真空炉中于50℃干燥，得到16.3g(54％)咔唑4。把滤液和洗涤液合并后用CH2Cl2(3×300mL)萃取。CH2Cl2萃取液用饱和NaHCO3(1×300mL)和盐水(1×300mL)洗涤。在经Na2SO4干燥之后，把滤液蒸发至干，得到粗产物，其无需进一步纯化就可直接使用。
MS(ESI)：m/z＝252.0[M+H]+
2-N-Boc-2-N-异丙基氨基乙醇(14)
将(Boc)2O(50.8g，0.23mol，2eq)加入到2-N-异丙基氨基乙醇(72)(22.3mL，70％，0.136mol)的MeOH(200mL)溶液中。将反应混合物在环境温度下搅拌4小时，然后用水(1.2L)稀释，产物用EtOAc(4×400mL)萃取。合并的EtOAc萃取液用盐水(1×400mL)洗涤后经Na2SO4干燥。将溶剂蒸发出来，粗产物通过柱纯化(洗脱剂：己烷∶EtOAc，4∶1-1∶1)，得到19.5g(收率70.5％)纯的73，为粘稠油状物。
3-异丙基-2-
Figure BPA00001347451800731
唑烷酮(74)
在剧烈搅拌下，将MsCl(8.5mL，0.109mol)滴加到冷却至-20℃的醇(73)(18.5g，0.091mol)和TEA(19mL，0.137mol)在无水THF(200mL)中的溶液中。让反应物慢慢地升温到环境温度(3小时)。通过过滤取出固体并用THF(20mL)洗涤。将饱和Na2CO3(100mL)加入到滤液中，所得混合物在环境温度下搅拌过夜，然后用水(200mL)稀释并用EtOAc(3×200mL)萃取。合并的EtOAc萃取液用1％HCl(1×200mL)、盐水(1×200mL)洗涤，经Na2SO4干燥。将溶剂蒸发出来，得到8.8g(收率75％)环状氨基甲酸酯(74)，其无需进一步纯化就可直接使用。
MS(ESI)：m/z＝130.1[M+H]+
3，6-二乙酰基-9-(2-N-异丙基(isopopyl)氨基乙基)-咔唑(71)
将3，6-二乙酰基咔唑(4)(15.12g，0.06mol)、3-异丙基-2-
Figure BPA00001347451800741
唑烷酮(74)(7.80g，0.06mol)、Cs2CO3(39.2g，0.12mol)和DBU(9mL，0.06mol)在NMP(150mL)中的混合物在190℃下搅拌24小时，然后倒入H2O(500mL)中并用EtOAc(3×300mL)萃取。合并的EtOAc萃取液用盐水(2×200mL)洗涤后经Na2SO4干燥。蒸发溶剂，粗产物通过柱色谱法纯化(洗脱剂-(5-20％)MeOH(含有0.1％的NH3H2O)/EtOAc)。第一流分含有未反应的起始材料(～1.7g)。把纯流分合并，溶剂蒸发至干，得到9.36g(含有20％EtOAc，通过NMR)纯的(71)。把较少的纯流分合并，蒸发至干，残余物用EtOAc研磨，另外得到3.47g纯产物。总收率-54.5％(在减去EtOAc的量之后)；(收率61.6％，基于反应的起始材料)。
MS(ESI)：m/z＝337.1[M+H]+
化合物6h
将中间体(71)(3.47g，0.0103mol)溶于CH2Cl2(30mL)中，所得溶液冷却至5℃左右。边搅拌边滴加10％HCl/EtOH溶液(5.6g，0.0153mol)。在40分钟之后，真空去除溶剂，残余物在高真空下于40℃干燥，得到3.5g(收率93％)6h。同样地，将71的另一批(9.36g，20％EtOAc)转化成6h。
分析数据：纯度：99.5％(通过HPLC)；MS(ESI)：m/z＝337.3[M-HCl+H]+；m.p.＝292.7-294.1℃。
实施例4的替代合成法
Figure BPA00001347451800751
步骤1.4-羟基-1-茚满酮(76)如下合成：通过氯化铝诱发的二氢香豆素(75)的再环化，按照Org.Lett.，2007，9(15)，p.2915-2918。在100g(75)上进行反应，得到(76)，收率85％。
步骤2.茚满酮(76)如下转化成三氟甲磺酸酯(77)(收率90％)：使茚满酮(76)与三氟甲磺酸酐在Py存在下在CH2Cl2中反应，然后通过快速色谱法纯化。
步骤3.三氟甲磺酸酯(79)按同样的方法合成(定量收率)，只是从50g 4-甲氧基-2-硝基苯酚(78)开始。
步骤4和5.根据联苯化合物的一锅合成法(one-pot synthesis)中的方案(Synthetic Communications，2006，36，p.3809-3820)，从60g三氟甲磺酸酯(77)开始，得到中间体(81)，收率80％。
步骤6.首先小规模地进行联苯中间体(81)的环化，即与过量的三苯基膦的1，2-二氯苯溶液一起加热，在反应混合物用***沉淀后得到预期的咔唑(82)(收率～50％，未优化)。相同的反应扩大规模到42g(81)，从而得到27g(收率73％)纯的(82)。
步骤7.按照标准方案，在CH2Cl2中进行中间体(82)的乙酰化(27.8g规模)，得到26g(收率80％)中间体(83)。
步骤8.在用EtOAc/THF的1∶1混合物彻底萃取之后，得到粗产物(84)，收率约68％，含有基线杂质(通过TLC)。粗产物(84)无需进一步纯化就可直接用于脱甲基步骤。
步骤9.将底物(substrate)在Py*HCl/NMP的1∶1混合物中于190℃加热10h，完成从(84)脱去甲基。在通过柱色谱法纯化之后得到7.8g(收率37％)实施例4(游离碱)，再用10％HCl的EtOH溶液处理后得到8.4g纯的实施例4。
实验部分
除非另有说明，否则试剂和溶剂按照从商业供应商购买时的原样使用。质子核磁共振谱在Bruker ARX 400光谱仪(400MHz)上获得。用溶剂峰作为质子谱的参比峰。反应进程通过TLC或/和LCMS分析来控制。
4-羟基-1-茚满酮(76)
将无水氯化铝(550g，4.135mol，4eq)和氯化钠(105g，1.795mol，2.7eq)混合并加热到150℃。慢慢地加入二氢香豆素(75)(100g，675.7mol，1eq)，同时保持内部温度介于150-160℃之间。在加入之后，把温度升高到200℃，将反应混合物搅拌1.5h，趁热倒入瓷皿内冷却。把固化物质弄碎后加入到剧烈搅拌的冰水混合物(4L)(含有400mL浓HCl)。将所得悬浮液搅拌1h、过滤、用水洗涤和干燥，得到85g(85％)粗制4-羟基-1-茚满酮(76)，为灰色固体。它足够纯可直接用于下一步骤。
三氟甲烷磺酸1-氧代茚满-4-基酯(77)
将三氟甲烷磺酸酐(72.3mL，429.7mmol，1.2eq)加入到4-羟基-1-茚满酮(77)(53g，358.1mmol，1eq)在无水CH2Cl2(450mL)和吡啶(87mL，1074mmol，3eq)中的悬浮液中，同时保持内部温度低于5℃。使反应混合物升温到室温并继续搅拌1h。将CH2Cl2(300mL)和水(100mL)加入到反应混合物中，分离有机层，依次用2％HCl溶液(3x100mL)和饱和NaHCO3(2x100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥。将CH2Cl2蒸发出来，粗产物通过快速色谱法纯化(5％～10％EtOAc/己烷)，得到90g(90％)纯的77，为褐色液体。
1H-NMR(DMSO-d6)：2.76(t，2H)，3.19(t，2H)，7.65(dd，1H)，7.94(2d，2H).
三氟甲烷磺酸4-甲氧基-2-硝基苯基酯(78)
将三氟甲烷磺酸酐(60mL，350mmol，1.2eq)加入到4-甲氧基-2-硝基苯酚(78)(50.57g，298.9mmol，1eq)在无水CH2Cl2(550mL)和吡啶(72.5mL，897mmol，3eq)中的溶液中，同时保持内部温度低于5℃。使反应混合物升温至室温并搅拌过夜。将水(100mL)加入到反应混合物中，分离有机层，依次用7％HCl溶液、饱和NaHCO3溶液洗涤，经Na2SO4干燥。CH2Cl2溶液通过SiO2垫过滤，真空下去除溶剂，得到89g(99％)纯三氟甲磺酸酯79，为淡黄色液体。
1H-NMR(DMSO-d6)：3.92(s，3H)，7.49(dd，1H)，7.71(d，1H)，7.81(d，1H).
4-(4-甲氧基-2-硝基苯基)-茚满-1-酮(81)
将由乙酸钾(29.44g，0.3mol，1.5eq)、三氟甲磺酸酯(77)(61.44g，0.22mol，1.1eq)、双(频哪基)二硼烷(60.94g，0.24mol，1.2eq)、PPh3(3.15g，0.012mol，0.06eq)和PdCl2(PPh3)2(4.21g，0.006mol，0.03eq)与脱气甲苯(2L)组成的混合物在氩气氛下回流过夜。在氩气的快速流动下，将三氟甲磺酸酯(79)(60.24g，0.2mol，1eq)、Pd(PPh3)4(11.55g，0.01mol，0.05eq)和2M Na2CO3(800mL)连续地加入到同一烧瓶中，所得溶液回流过夜。加入水(200mL)和EtOAc(500mL)，分离出水层并用EtOAc(2x500mL)萃取，合并的萃取液经Na2SO4干燥。减压蒸发溶剂，粗产物通过柱色谱法纯化(20％EtOAc/己烷)，得到44g(80％)联苯中间体(81)，为黄色固体。
8-甲氧基-1，2-二氢-6H-环戊二烯并[c]咔唑-3-酮(82)
4-(4-甲氧基-2-硝基苯基)-茚满-1-酮(81)(42g，148.4mmol，1eq)和三苯基膦(116g，445mmol，3eq)在邻二氯苯(400mL)中的溶液在剧烈搅拌下回流4h，然后冷却至0℃。加入***(4L)，滤出沉淀物，用***(3x100mL)洗涤后干燥，得到17g(46％)(82)。蒸发出滤液，残余物用冷MeOH(5x100ml)洗涤，另外得到10g(27％)咔唑(82)。总产量为27g(73％)。
1H-NMR(DMSO-d6)：2.74(m，2H)，3.50(m，2H)，3.88(s，3H)，6.90(d，1H)，7.08(s，1H)，7.47(d，1H)，7.58(d，1H)，7.97(d，1H)，11.79(s，1H).
9-乙酰基-8-甲氧基-1，2-二氢-6H-环戊二烯并[c]咔唑-3-酮(83)
将8-甲氧基-1，2-二氢-6H-环戊二烯并[c]咔唑-3-酮(82)(27.8g，110.8mmol，1eq)溶于无水二氯甲烷(300mL)中。在搅拌和冷却下分批加入无水AlCl3(29.5g，221.5mmol，2eq)，再滴加AcCl(24mL，332.4mmol，3eq)。将反应混合物在约5℃下搅拌24h后倒入冰水中(应当避免急剧起泡沫)。将析出的橙色固体滤出，用水(10x100mL)、CH2Cl2(3x50mL)、丙酮(3x50mL)洗涤，得到26g(80％)9-乙酰基-8-甲氧基-1，2-二氢-6H-环戊二烯并[c]咔唑-3-酮(83)。
9-乙酰基-8-甲氧基-1，2-二氢-6-(3-二甲基氨基丙基)-环戊二烯并[c]咔唑-3-酮(84)
将NaH(6.88g，60％，171.95mmol，2.5eq)加入到9-乙酰基-8-甲氧基-1，2-二氢-6H-环戊二烯并[c]咔唑-3-酮(83)(26g，68.78mmol，1eq)的无水CH2Cl2(300mL)悬浮液中，并将混合物在室温下搅拌20-30min直到氢气的放出停止。在氮气氛下分批加入3-二甲基氨基丙基氯盐酸盐(16.3g，103.16mmol，1.5eq)。将反应混合物在室温下搅拌30min，然后在60℃下搅拌24h，再倒入冰水(4L)中。水溶液用浓HCl酸化至pH约为2，未反应的起始材料用EtOAc/THF＝3/1混合物萃取。在将水层的pH调到9左右时，产物用1∶1EtOAc∶THF混合物(10x500mL)萃取。合并的萃取液用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，蒸发出溶剂，得到22g(68％)粗制咔唑(84)，为相当纯的(通过LC/MS)。其无需进一步纯化就可用于下一步骤。
1H-NMR(DMSO-d6)：1.88(t，2H)，2.13(s，6H)，2.16(t，2H)，2.62(s，3H)，2.75(m，2H)，3.47(m，2H)，4.01(s，3H)，4.52(t，2H)，7.32(s，2H)，7.65(dd，4H)，8.32(s，2H).
9-乙酰基-8-羟基-1，2-二氢-6-(3-二甲基氨基丙基)-环戊二烯并[c]咔唑-3-酮
将9-乙酰基-8-甲氧基-1，2-二氢-6-(3-二甲基氨基丙基)-环戊二烯并[c]咔唑-3-酮(84)(22g，58.2mmol，1eq)和吡啶盐酸盐(134.4g，1164mmol，20eq)的NMP(150mL)溶液回流10h。反应混合物冷却至室温后倒入10％K2CO3水溶液(3L)中。将析出的暗绿色固体滤出，用水(5x100mL)洗涤后干燥。粗产物通过柱色谱法纯化(洗脱剂10％-20％MeOH/EtOAc)，得到7.81(37％)纯的9-乙酰基-8-羟基-1，2-二氢-6-(3-二甲基氨基丙基)-环戊二烯并[c]咔唑-3-酮，为淡黄色固体。
MS(ESI)：m/z＝363.3[M+H]+
NMR 1H(DMSO)：1.86(t，2H)，2.17(s，6H)，2.20(t，2H)，2.79(m，2H)，2.81(s，3H)，3.52(m，2H)，4.43(t，2H)，7.15(s，2H)，7.66(dd，4H)，8.50(s，2H)，12.71(s，1H).
实施例4
将9-乙酰基-8-羟基-1，2-二氢-6-(3-二甲基氨基丙基)-环戊二烯并[c]咔唑-3-酮(7.81g，21.46mmol，1eq)溶于水(20mL)和10％HCl溶液(20mL)与乙醇(200mL)的混合物中，均质溶液蒸发至干。残余物真空下干燥过夜，得到8.47g实施例4，为灰色固体。
纯度：99.2％(通过HPLC)；MS(ESI)：m/z＝363.3[M-HCl+H]+；m.p.＝241.3℃(分解)；1H-NMR(DMSO-d6)：2.15t(2H)，2.68s(3H)，2.69s(3H)，2.80m(2H)，2.82s(3H)，3.11m(2H)，3.55m(2H)，4.53t(2H)，7.29s(2H)，7.73dd(4H)，8.52s(2H)，11.00s(1H)，12.76s(1H).
结构式(II)化合物按与结构式(I)化合物类似的方法制备并且包括例如，
另外的本发明的咔唑化合物是：
Figure BPA00001347451800811
可用于本发明方法的化合物具有以下结构：
Figure BPA00001347451800821
另外的实施例具有结构式(I)包括但不限于：
Figure BPA00001347451800822
Figure BPA00001347451800831
Figure BPA00001347451800841
Figure BPA00001347451800851
本发明的化合物因此包括但不限于：
Figure BPA00001347451800852
Figure BPA00001347451800861
Figure BPA00001347451800871
Figure BPA00001347451800881
Figure BPA00001347451800901
Figure BPA00001347451800911
Figure BPA00001347451800921
咔唑化合物的功效通过测定化合物激活p53的能力来确定。具体地说，用p53应答性萤光素酶报道细胞系来鉴定能够激活p53的化合物。p53的活化报告为EC50值，EC50值是增加p53活性超过基线p53活性50％所需要的化合物的有效浓度。
用于确定EC50值的p53活化测定如下进行：
定义和术语
ConALuc：p53应答性萤光素酶报道构建体
DMSO：二甲基亚砜
FBS：胎牛血清
设备
96孔发光计-荧光扫描(例如Fluoroscan，LabSystems，Inc，设定程序，积分时间为0.1秒，PMT电压为1000，零滞后时间)
多道移液管50-300uL范围
96孔板
材料
报道细胞系：
HT1080-L(含ConALuc报道基因的人纤维肉瘤细胞)
RCC45ConALuc(含ConALuc报道基因的人肾细胞癌细胞系)
标准DMEM培养基
标准RPMI培养基
青霉素/链霉素100x
胰蛋白酶-EDTA 10x-用无菌PBS稀释到1X
PBS
Bright-Glo萤光素酶测定***(Fisher PR-E2620)
9-氨基吖啶(9aa)20mM/DMSO(Sigma A38401)，p53激活剂(阳性对照)
化合物10020mM/DMSO(Chembridge)，p53激活剂(阳性对照)
DMSO(Fisher D128-500)(阴性对照)
方法
1.使用两种标准细胞类型，或为HT1080-L细胞或为RCC45ConALuc细胞。这两种细胞系均稳定地表达p53应答性萤光素酶报道基因构建体。
2.让HT1080-L细胞生长在含有10％FBS的DMEM培养基中。让RCC45ConALuc细胞生长在含有10％FBS的RPMI培养基(必要时可以加入青霉素/链霉素至终浓度为1％)中。让这两种细胞系均生长在湿润培养箱(37℃，5％CO2)中。对于正常培养，这两种细胞系均用1X胰蛋白酶-EDTA按1∶20(对于HT1080-L细胞)和1∶5(对于RCC45ConALuc细胞)的比率每3-4天进行分传(split)(当细胞为80-90％汇合时)。
3.实验前一天，所述细胞在1X胰蛋白酶(tripsin)/EDTA溶液中进行胰蛋白酶消化约5分钟(在37℃培养箱中)，然后接种到96孔板。HT1080-L细胞按密度为1X104/孔接种到标准DMEM培养基中，体积为50μl。RCC45ConALuc按密度为2X104/孔、体积为50uL接种到标准RPMI培养基中。
4.第二天，用标准DMEM培养基稀释贮液来制备不同的咔唑化合物，使得细胞用下表1的最终化合物浓度处理。贮液用DMSO制得。典型地，将化学药品制成20mM贮液。然而，这种浓度取决于给定化合物的溶解度，因此实验时要注意实际贮液浓度(例如溶解度较小的化合物的贮液浓度可以是5mM或10mM)。
5.每一种被测化合物用了96孔板中的两行，因此4种化合物(例如W，X，Y，Z)可以在一个板中同时进行试验。除了试验化合物之外，每个板还包括阳性对照和阴性对照。用9aa作为阳性对照，剂量为3μM。用DMSO作为阴性对照，终浓度为0.1％。
表1.实验板与化学药品终浓度的方案
Figure BPA00001347451800951
1.把加到板中的化学药品稀释液在标准DMEM中制成2X浓度，然后按体积为50μl加到相应孔中。
2.化学药品在标准DMEM中按两倍系列稀释度从40μM开始稀释(最高浓度的2X，例如20μM)。对于一个细胞系，最小体积是125μL的每种浓度的化学药品在标准DMEM中的2X工作液。
3.除了在每个板中以一个浓度加入的阳性对照之外，还在每个筛选阶段，在全部浓度范围内进行的每个测定中加入了阳性对照化合物100或活性最高的化合物，以确保既正确又稳健的测定性能(在操作中通过比较p53活化的剂量反应曲线来估计)。
4.化合物加入后16小时，用显微镜检查所有具有最高化合物浓度的孔中毒性效应的存在，因为由化合物引起的细胞死亡导致不能检出萤光素酶活性。如果细胞毒性明显，则检查相同化合物的其它剂量中毒性的存在。记录引起毒性效应的最低剂量。假如在3-4个最低化合物剂量都观察到细胞毒性(在当前的剂量方案，在0.3uM和0.3uM以下)，那么所述化合物在较低浓度范围内重新进行独立测试，使得至少4个两倍不同剂量的待测化合物没有细胞毒性征兆)。
5.在显微镜检查之后，向各孔中加入15μl Bright Glo萤光素酶测定***，在室温孵育5分钟后，在96孔板发光计上读板，测量时间为0.1秒。在测量之前包括一个振荡步骤。
6.把每种化学药品浓度的所测萤光素酶活性除以同一板上DMSO对照的萤光素酶活性平均值，计算出每种化学药品的每种浓度的萤光素酶活化倍数。然后，把倍数对化学药品的浓度作图以确定化合物是否有活性。根据数据，确定最大活化倍数和Emax(引起最大p53活化的浓度)。
7.对于每一种化合物，这种测定都另外重复两次。一旦完成三次测定，就用原始数据计算出EC50值。
当满足下列条件时，认为测定无效：
多于10％的读数中两个重复之间的差异上升了10％；
观察到DMSO处理的细胞死亡；
用阳性对照(化合物3a，0.4uM)处理的细胞中萤光素酶诱导相对于DMSO处理的细胞的萤光素酶活性小于3倍；
用阳性对照(例如化合物100，0.03-20uM)无法获得萤光素酶诱导的剂量依赖性曲线。
下面是用于本发明方法的各种咔唑化合物EC50值的非限制性实例：
  化合物   EC50值(p53活化，μM)
  化合物100   1.30
  实施例21   0.83
  实施例22   0.53
  化合物3a   0.29
  化合物3b   0.49
  化合物7d   0.64
  实施例23   0.88
  实施例24   0.78
  实施例25   0.88
  实施例2   0.64
  实施例27   0.54
  实施例15   0.03
  化合物19a   0.40
  化合物3e   0.78
  实施例7   0.37
  实施例4   0.07
  化合物18c-1   0.08
  化合物18c-2   0.10
  化合物19e   0.07
  实施例13   0.22
  实施例14   0.05
  实施例6   0.24
  实施例17   0.04
  实施例18   0.09
  实施例38   0.12
本发明的化合物和药物组合物包括其中活性成分按治疗有效量给予能达到其预定目的的那些化合物和药物组合物。“治疗有效量”是指本发明咔唑化合物导致达到所需效果的量。所述咔唑化合物的毒性和治疗功效可以用标准药学程序在细胞培养物或实验动物中测得，例如，测定LD50(使50％群体死亡的剂量)和ED50(使50％群体治疗上有效的剂量)。毒性效应和治疗效应间的剂量比就是治疗指数，其表示为LD50和ED50之比值。优选显示高治疗指数的化合物。由这样的数据所获得的数据可用来制定人用剂量范围。剂量优选在循环化合物浓度的范围之内，包括没有或几乎没有毒性的ED50。剂量可以在该范围内变化，取决于所用的剂型和所用的给药途径。治疗有效量的测定是在本领域技术人员的能力范围之内，尤其根据本文提供的详细公开内容。
治疗应用中所需结构式(I)或(II)咔唑化合物的治疗有效量视待治疗疾病的性质、活性所需要的时间长短、患者年龄和身体状况的不同而异，最终由主治医师来判定。剂量和间隔可作个性化调整以提供足以维持所需治疗效果的咔唑化合物的血浆水平。所需剂量可适宜以单剂量给予，或以多剂量按适当的间隔给予，例如，每天1、2、3、4或更多次分次剂量。通常需要或者要求多剂量。例如，本发明的咔唑化合物可以按以下频率给予：每隔4天每天用药4次为一个剂量(q4d x4)；每隔3天每天用药4次为一个剂量(q3d x 4)；每隔5天每天用药一次(qd x 5)；每周用药一次持续3周(qwk3)；每天用药5次，停药2天，再每天用药5次(5/2/5)；或者，根据实际情况确定任何适宜的剂量方案。
含有结构式(I)或(II)咔唑化合物的组合物、或含有它们的组合物的剂量可以是约1ng/kg至约200mg/kg、约1μg/kg至约100mg/kg或约1mg/kg至约50mg/kg。组合物的剂量可以是任何剂量，包括但不限于约1μg/kg。组合物的剂量可能是任何剂量，包括但不限于约1μg/kg、10μg/kg、25μg/kg、50μg/kg、75μg/kg、100μg/kg、125μg/kg、150μg/kg、175μg/kg、200μg/kg、225μg/kg、250μg/kg、275μg/kg、300μg/kg、325μg/kg、350μg/kg、375μg/kg、400μg/kg、425μg/kg、450μg/kg、475μg/kg、500μg/kg、525μg/kg、550μg/kg、575μg/kg、600μg/kg、625μg/kg、650μg/kg、675μg/kg、700μg/kg、725μg/kg、750μg/kg、775μg/kg、800μg/kg、825μg/kg、850μg/kg、875μg/kg、900μg/kg、925μg/kg、950μg/kg、975μg/kg、1mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg、80mg/kg、90mg/kg、100mg/kg、125mg/kg、150mg/kg、175mg/kg或200mg/kg。上述剂量是示例性的一般情况，但在个别情况下可能需要较高或较低的剂量，这都在本发明的范围之内。
当与其它治疗药联用时，本发明的咔唑化合物可以相对较低的剂量给予。另外，靶向剂的应用可以使必需剂量比较低。由于包括但不限于低毒性和高清除率在内的因素，某些化合物可以相对高剂量给予。
对于人用，结构式(I)或(II)化合物可以单独给予，但一般与药物载体混合后给予，所述药物载体根据预定的给药途径和标准药物实践来选择。按照本发明使用的药物组合物可以按常规方式，使用一种或多种生理可接受的载体来配制，所述生理可接受的载体包括便于式(I)或式(II)化合物加工成药物制剂的赋形剂和辅料。
本发明的咔唑化合物可以与其它抗癌治疗法(例如化疗和/或放疗)同时或按节奏(metronomically)给予。术语“同时”或“同时地”是指其它抗癌治疗和所述咔唑化合物彼此在6小时以内、3小时以内或者在更短的时间内给予。术语“按节奏”是指相对于重复给药和/或抗癌治疗编组(regiment)，有时给予不同于所述抗癌治疗的其它抗癌治疗并且以某种频率给予。
所述咔唑化合物或含有所述咔唑化合物的组合物可以按任何方式给予，所述方式包括但不限于口服、胃肠外、舌下、经皮、直肠、经粘膜、局部、通过吸入、通过含服给药或它们的组合。胃肠外给药包括但不限于静脉内、动脉内、腹膜内、皮下、肌内、鞘内和关节内。所述咔唑化合物也可以植入物(其使所述化合物缓慢释放)的形式以及缓慢控制静脉内滴注的形式给予。
本发明的咔唑化合物可用于治疗多种疾病和病症。例如，本发明的化合物可以与辐射和/或化疗药联合用于治疗癌症。例如，所述咔唑化合物可用于增强对习惯用抗代谢药(例如甲氨蝶呤或5-氟尿嘧啶(5-FU))治疗的肿瘤的治疗。
应用本发明的咔唑化合物可以导致癌细胞的部分或完全消退，即来自细胞群体的这类细胞的部分或完全消失。例如，本发明的方法可用于减慢肿瘤生长的速率、减少肿瘤的大小或数量、或诱导肿瘤部分或完全消退。
本发明的咔唑化合物通过给予有需要的个体可用于治疗其体内的疾病或病症。所述疾病或病症可以是癌症。各种各样的可治疗的癌症包括但不限于：癌，包括膀胱癌(包括恶化和转移的膀胱癌)、乳癌、结肠癌(包括结肠直肠癌)、肾癌、肝癌、肺癌(包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌和肺腺癌)、卵巢癌、***癌、睾丸癌、泌尿生殖道癌、淋巴***癌、直肠癌、喉癌、胰腺癌(包括外分泌胰腺癌)、食管癌、胃癌、胆囊癌、***、甲状腺癌、肾癌和皮肤癌(包括鳞状细胞癌)；淋巴系造血***肿瘤，包括白血病、急性淋巴细胞白血病、急性淋巴母细胞白血病、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤(Hodgkins lymphoma)、非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkins lymphoma)、毛细胞淋巴瘤、组织细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤(Burketts lymphoma)；髓系造血***肿瘤，包括急慢性骨髓性白血病、骨髓异常增生综合征、骨髓性白血病和早幼粒细胞白血病；中枢和周围神经***肿瘤，包括星形细胞瘤、成神经细胞瘤、胶质瘤和神经鞘瘤(Schwannomas)；间充质细胞起源的肿瘤，包括纤维肉瘤、横纹肌肉瘤和骨肉瘤；和其它肿瘤，包括黑素瘤、着色性干皮病(xenoderma pigmentosum)、角化棘皮瘤(keratoactanthoma)、***瘤、甲状腺滤泡癌、畸胎癌、肾细胞癌(RCC)、胰腺癌、骨髓瘤、骨髓性白血病和淋巴母细胞性白血病、成神经细胞瘤和成胶质细胞瘤。
由HTLV的tax所诱导的转化是成人T淋巴母细胞白血病(ATL)的一种致病因子，可以共享相同的参与RCC的分子靶标。例如，NF-κB在tax转化的细胞内有组成型活性。与RCC相类似，在tax转化的细胞中，p53活性通过NF-κB的活化而抑制，p53抑制不涉及p300的螯合。根据p53活化的共享机制，所述组合物也可用于治疗HTLV诱导的白血病。无论其p53状态如何，人类癌症的大多数都具有组成型超活化NF-κB。所述组合物也能够通过使反式活化NF-κB复合物重新编程为反式阻抑复合物而抑制NF-κB，反式阻抑复合物可用来治疗与其p53状态无关的任何肿瘤。所述组合物还可用来治疗HIV感染，因为HIV LTRs强烈地依赖于NF-κB活性。
所述组合物也可用作辅助疗法以克服可能由组成型NF-κB活化引起的抗癌药物抗性。所述抗癌药物可以是如本文所述的化疗药或放疗。
本发明的一种方法包括治疗有效量的本发明咔唑化合物与可造成单链或双链DNA断裂的化疗药或者可阻断DNA复制或细胞增殖的化疗药联合给药。或者，本发明的一种方法包括治疗有效量的至少一种本发明咔唑化合物与包括使用抗体(例如赫赛汀(herceptin)，它在抑制癌细胞的增殖方面有活性)在内的疗法联合给药。因此，癌症例如结肠直肠癌、头颈部癌症、胰腺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、外阴癌、白血病、淋巴瘤、黑素瘤、肾细胞癌、卵巢癌、脑肿瘤、骨肉瘤和肺癌通过联合给予本发明咔唑和化疗药或抗体而对强化治疗敏感。
本发明可治疗的癌症也包括实体肿瘤，即癌和肉瘤。癌包括衍生自上皮细胞的恶性赘生物，其浸润(即侵入)周围组织并引起转移瘤。腺癌是衍生自腺体组织的癌，或者是衍生自构成可识别腺体结构的组织的癌。癌症的另一大类包括肉瘤，肉瘤是其细胞埋在原纤维或均质物质(如胚胎***)中的肿瘤。本发明也能够治疗骨髓***或淋巴***的癌症，包括白血病、淋巴瘤和其它通常不以肿瘤块存在但分布在血管***或淋巴网状***的癌症。
本发明咔唑化合物可治疗的癌症的其它形式包括例如成人和儿科肿瘤、实体肿瘤/恶性肿瘤的生长、粘液样和圆形(round)细胞癌、局部晚期肿瘤、转移性癌症、人软组织肉瘤(包括尤因肉瘤(Ewing′s sarcoma))、癌症转移(包括淋巴癌转移)、鳞状细胞癌(特别是头颈部的鳞状细胞癌)、食管鳞状细胞癌、口腔癌、血细胞恶性肿瘤(包括多发性骨髓瘤)、白血病(包括急性淋巴细胞白血病、急性非淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性骨髓细胞白血病和毛细胞白血病)、弥散性淋巴瘤(基于体腔的淋巴瘤)、胸腺淋巴瘤性肺癌(包括小细胞癌、皮肤T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、肾上腺皮质的癌症、产生ACTH的肿瘤、非小细胞癌、乳癌(包括小细胞癌和导管癌)、胃肠癌(包括胃癌、结肠癌、结肠直肠癌和与结肠直肠瘤形成相关的息肉)、胰腺癌、肝癌、泌尿***癌症(包括膀胱癌，例如原发性浅层***、膀胱的侵袭性过渡性细胞癌和侵袭肌肉的膀胱癌)、***癌、女性生殖道恶性肿瘤(包括卵巢癌、原发性腹膜上皮赘生物、***、子宫内膜癌症、***癌、外阴癌、子宫癌和卵泡内的实体瘤)、男性生殖道恶性肿瘤(包括睾丸癌和***癌)、肾癌(包括肾细胞癌、脑癌(包括内源性脑肿瘤、成神经细胞瘤、星形细胞性脑肿瘤、胶质瘤和中枢神经***内的转移性肿瘤细胞侵袭)、骨癌(包括骨瘤和骨肉瘤)、皮肤癌(包括恶性黑素瘤、人皮肤角质化细胞的肿瘤进程和鳞状细胞癌)、甲状腺癌、成视网膜细胞瘤、成神经细胞瘤、弥散性腹膜癌、恶性弥散性胸膜癌、间皮瘤、维尔姆斯瘤(Wilms′s tumor)、胆囊癌、绒毛膜上皮肿瘤(trophoblastic neoplasm)、血管外皮细胞瘤和卡波西肉瘤(Kaposi′s sarcoma)。因此，预期给予本发明的咔唑化合物能强化治疗方案。
本发明的化合物也可以增强药物在治疗炎性疾病中的功效。本发明的咔唑化合物是NF-κB应答的强效抑制剂，NF-κB应答涉及促炎NF-κB靶(例如TNF、IL-1、IL-6、IL-8等)的表达/分泌的阻抑。因此，本发明咔唑对NF-κB的抑制将导致局部和***性炎症反应的阻抑。奎纳克林(Quinacrine)，假设它是通过非常类似于本发明咔唑的机制起作用，在治疗自身免疫性疾病和慢性炎症时它被广泛用作抗炎药物。
可以从与适合于本发明方法的化合物的联合疗法中受益的疾病实例是类风湿性关节炎、银屑病、白斑、韦格纳肉芽肿病(Wegener′s granulomatosis)和***性红斑狼疮(SLE)。关节炎、韦格纳肉芽肿病和SLE的治疗常常包括使用免疫抑制疗法，例如电离辐射、甲氨蝶呤和环磷酰胺。这样的治疗通常直接或间接地诱导DNA损伤。在攻击性(offending)免疫细胞内NF-κB的抑制和/或p53的活化使细胞对受这些标准治疗的控制更敏感。银屑病和白斑通常都用紫外辐射(UV)并结合补骨脂素进行治疗。本发明的咔唑化合物诱导UV和补骨脂素的杀伤作用，并增加该治疗方案的治疗指数。一般而言，用于本发明方法的咔唑化合物当与目前使用的免疫抑制药物联用时，增强了对炎性疾病细胞的控制。
除了上述病症之外，本发明还可用于治疗例如但不限于以下病症的方法之中：动脉粥样硬化、再狭窄、血管炎、肾炎、视网膜病、肾病、增生性皮肤病、银屑病、瘢痕瘤性疤痕形成(keloid scarring)、光化性角化病、斯蒂文斯-约翰逊综合征(Stevens-Johnson Syndrome)、类风湿性关节炎(RA)、***性起病型青少年慢性关节炎(JCA)、骨质疏松症、***性红斑狼疮、眼的过度增殖性疾病(包括上皮向内生长)、增殖性玻璃体视网膜病(PVR)、糖尿病性视网膜病、血管性增殖性疾病、鱼鳞病和***瘤。
本发明咔唑也表现出抗微生物活性，例如抗革兰氏阳性菌和抗革兰氏阴性菌，包括沙门氏菌属(Salmonella)；抗原生动物活性；和抗病毒活性。
正如本领域技术人员所了解的，在本文描述的方法中可以使用另外的活性或辅助药物。本文提及治疗时也延伸至预防，以及已确立的疾病或症状的治疗。
本发明可应用于离体细胞群体。例如，本发明的咔唑化合物可离体地用来确定针对给定适应症、细胞类型、患者和其它参数给予本发明咔唑化合物的最佳时间表和/或剂量。从这类使用搜集到的信息可用于实验目的或用于临床以制定用于体内治疗的方案。本发明适用的其它离体用途对于本领域技术人员来说是显而易见的。
本发明的咔唑化合物也可与辐射联合给予。可用电磁辐射治疗的疾病包括瘤性疾病、良性肿瘤、恶性肿瘤和癌细胞。
本发明也考虑了本文未列出的其它疾病的电磁辐射治疗。本发明优选的实施方案使用了以下的电磁辐射：γ-辐射(10-20m～10-13m)、X-射线辐射(10-12m～10-9m)、紫外光(10nm～400nm)、可见光(400nm～700nm)、红外辐射(700nm～1mm)和微波辐射(1mm～30cm)。
目前，许多癌症治疗方案都使用了由电磁辐射(例如X-射线)活化的放射增敏剂。X-射线活化的放射增敏剂的实例包括但不限于下列：双唑泰栓、米索硝唑、去甲米索硝唑、哌莫硝唑、依他硝唑、尼莫唑、丝裂霉素C、RSU 1069、SR 4233、EO9、RB 6145、烟酰胺、5-溴脱氧尿苷(BUdR)、5-碘脱氧尿苷(IUdR)、溴脱氧胞苷、氟脱氧尿苷(FUdR)、羟基脲、顺铂及其治疗上有效的类似物和衍生物。
癌症的光动力疗法(PDT)使用可见光作为增敏剂的辐射激活剂。光动力放射增敏剂的实例包括但不限于下列：血卟啉衍生物、光敏素
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(PHOTOFRIN
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)、苯并卟啉衍生物、NPe6、初卟啉锡(SnET2)、pheoborbide-a、细菌叶绿素-a、萘酞菁类(naphthalocyanines)、酞花菁类(phthalocyanines)、酞花菁锌及其治疗上有效的类似物和衍生物。
放射增敏剂可以与除了本发明的咔唑化合物之外的治疗有效量的一种或多种化合物联合给予，这样的化合物包括但不限于促进放射增敏剂掺入到靶细胞内的化合物，控制治疗物、营养物和/或氧气流入到靶细胞内的化合物，与或不与另外的辐射一起对肿瘤起作用的化疗药，或其它治疗上有效的用于治疗癌症或其它疾病的化合物。可与放射增敏剂联用的另外的治疗药实例包括但不限于5-氟尿嘧啶(5-FU)、亚叶酸、氧气、卡波金(carbogen)、红细胞输注、全氟化碳(例如FLUOSOLW
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-DA)、2，3-DPG、BW12C、钙通道阻断药、己酮可可碱、抗血管生成化合物、肼屈嗪和L-BSO。
所述化疗药可以是任何诱导细胞凋亡的药物或化合物。所述药物或化合物可以是例如有机小分子、肽、多肽、核酸或抗体。可以使用的化疗药包括但不限于烷化剂、抗代谢药、激素及其拮抗剂、天然产物及其衍生物、放射性同位素、抗体以及天然产物，和它们的组合。例如，本发明的咔唑化合物可以与抗生素一起给药，所述抗生素有例如多柔比星和其它蒽环霉素类似物、氮芥(例如环磷酰胺)、嘧啶类似物(例如5-氟尿嘧啶)、顺铂、羟基脲、紫杉醇及其天然和合成衍生物等。作为另一个实例，就混合肿瘤(例如乳腺癌)而言，所述化合物可以与亮丙立德或戈舍瑞林(LH-RH的合成肽类似物)一起给药，其中所述肿瘤包括依赖***的细胞和不依赖***的细胞。其它抗肿瘤方案包括同时使用抑制剂化合物和其它治疗方式(modality)(例如外科手术或辐射，本文亦称“辅助抗肿瘤方式”)。可用于本发明的另外的化疗药包括激素及其拮抗剂、放射性同位素、抗体、天然产物和它们的组合。
在下列表格中列出了可用于本发明方法的化疗药的多个实例。
表1
具体与放射增敏剂联用的化疗药的实例包括例如喜树碱、卡铂、顺铂、柔红霉素、多柔比星、干扰素(α，β，γ)、伊立替康、羟基脲、苯丁酸氮芥、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲氨蝶呤、2-氯腺苷、氟达拉滨、阿扎胞苷、吉西他滨、培美曲塞、白介素2、伊立替康、多西他赛、紫杉醇、托泊替康、CPT-11、阿那曲唑(anastrazole)、来曲唑(letrazole)、卡培他滨(capecitabine)、雷洛昔芬(reloxafine)、环磷酰胺、异环磷酰胺(ifosamide)、屈洛昔芬(droloxafine)及其治疗上有效的类似物和衍生物。
影响微管的药物能干扰细胞的有丝***，其细胞毒活性是本领域众所周知的。可用于本发明的影响微管的药物包括但不限于别秋水仙素(NSC 406042)、软海绵素B(halichondrin B)(NSC 609395)、秋水仙素(NSC 757)、秋水仙素衍生物(例如NSC 33410)、多拉司他汀10(NSC376128)、美登素(NSC 153858)、根霉素(NSC 332598)、紫杉醇(NSC 125973)、紫杉醇
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衍生物(例如NSC 608832)、硫秋水仙素NSC361792)、三苯甲基半胱氨酸(NSC 83265)、硫酸长春碱(NSC 49842)、硫酸长春新碱(NSC 67574)、天然和合成埃博霉素(包括但不限于埃博霉素A、埃博霉素B和盘皮海绵内酯(参见Service，(1996)Science，274：2009))雌莫司汀、诺考达唑、MAP4等。这类药物的实例也可参见Bulinski(1997)J.Cell Sci.110：3055 3064；Panda(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94：10560-10564；Muhlradt(1997)Cancer Res.57：3344-3346；Nicolaou(1997)Nature 397：268-272；Vasquez(1997)Mol.Biol.Cell.8：973-985；和Panda(1996)J.Biol.Chem 271：29807-29812。
可使用的细胞生长抑制药包括但不限于激素和类固醇(包括合成类似物)：17-α-炔雌醇、己烯雌酚、睾酮、***、氟***、丙酸屈他雄酮、睾内酯、醋酸甲地孕酮、甲泼尼龙、***、***龙、曲安西龙、hlorotrianisene、羟孕酮、氨鲁米特、雌莫司汀、醋酸甲羟孕酮、亮丙立德、氟他胺、托瑞米芬、诺雷德。
其它细胞生长抑制药是抗血管生成药(例如基质金属蛋白酶抑制剂)和其它VEGF抑制剂(例如抗VEGF抗体和小分子(例如ZD6474和SU668))。也可使用抗Her2抗体。一种EGFR抑制剂是EKB-569(一种不可逆的抑制剂)。也包括对EGFR和Src抑制剂具有免疫特异性的抗体C225。
适宜用作细胞生长抑制药的还有康士德(CASODEX)(比卡鲁胺，Astra Zeneca)，其赋予雄激素依赖性癌非增殖性。细胞生长抑制药的再一个实例是抗***药他莫昔芬
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，其抑制***依赖的乳癌的增殖或生长。细胞增殖信号转导的抑制剂是细胞生长抑制药。代表性实例包括表皮生长因子抑制剂、Her-2抑制剂、MEK-1激酶抑制剂、MAPK激酶抑制剂、PI3抑制剂、Src激酶抑制剂和PDGF抑制剂。
由于TNF家族成员诱导肿瘤细胞凋亡的独特能力，因此它们被认为是潜在的抗癌药物。然而，许多肿瘤细胞逃避了死亡配体的促凋亡酸(proapoptotic acid)，从而降低了这些药物对死亡配体敏感性癌症的应用并使得肿瘤可以逃避宿主免疫应答。使用NF-κB抑制剂可用来使肿瘤细胞对死亡配体(例如TNF多肽)的杀伤力敏感。
所述TNF多肽可以是配体的TNF超家族中的一个成员。TNF多肽的代表性实例包括但不限于NGF、CD40L、CD137L/4-1BBL、TNF-α、CD134L/OX40L、CD27L/CD70、FasL/CD95、CD30L、TNF-β/LT-α、LT-β和TRAIL。所述TNF超家族的成员都是天然蛋白质，它们涉及免疫***的维持和功能并且可以触发细胞凋亡。所述TNF多肽可以是TRAIL，TRAIL主要在肿瘤细胞而不是在正常细胞中诱导凋亡。据信，这些所谓的“死亡配体”的活性是通过与TNF受体家族成员结合而介导的，TNF受体家族成员在它们的细胞内部分含有结构上类似的死亡域。这些受体(其对各自的死亡配体有特异性)的连接触发了一系列事件的活化，导致半胱天冬酶(caspase)的活化。所述TNF多肽所结合的TNF-R受体的代表性实例包括但不限于LNGFR/p75、CD40、CD137/4-1BB/ILA、TNFRI/p55/CD120a、TNFRII/p75/CD120b、CD134/OX40/ACT35、CD27、Fas/CD95/APO-1、CD30/Ki-1、LT-βR、DR3、DR4、DR5、DcR1/TRID、TR2、GITR和护骨蛋白(osteoprotegerin)。
也考虑了可以用其它药物替代TNF多肽。例如，可以使用模拟TNF多肽活性的抗体。这类抗体的代表性实例包括但不限于抗FAS、TRAIL受体或TNFR的激动剂抗体。另外，可以使用适体(aptamer)和其它能激活相应受体的合成配体。
确诊患者的肿瘤是否能够用本发明的咔唑化合物治疗也是可能的。从患者获取肿瘤样品。然后，肿瘤细胞用p53报道***(例如应答p53的lacZ报道基因)转导。转导后的细胞再与所述化合物一起温育。p53介导的信号超出对照的产生，说明肿瘤可以用所述咔唑化合物进行治疗。
图1a和图1b是显示在TNF处理细胞中本发明咔唑抑制NF-κB转录活性的曲线图(图1a)和对p53活化和NF-κB抑制的有效浓度(EC50值)比较的柱状图(图1b)。
本发明的咔唑化合物在体外(图2)和体内(图3)都具有显著的抗癌特性。图2显示各种咔唑化合物对肿瘤细胞的影响，肿瘤细胞在用不同浓度的4种本发明咔唑化合物处理1小时后，其p53状态各不相同。在72小时用亚甲基蓝染色来评价细胞存活情况。因此，推测但不依赖于，p53被本发明咔唑化合物的活化可能不是主要的死亡诱导信号，而可能是反应出由组成型活性NF-κB失活引起的细胞应激类型。
被测的肿瘤细胞是HCT116结肠腺癌p53wt(图2a)，MDA-MB-231乳腺癌p53mut(图2b)，DLD1结肠癌p53wt(图2c)，A549肺腺癌p53wt(图2d)，Caki1肾细胞癌p53wt(图2e)，HT29结肠腺癌p53mut(图2f)，H1299肺腺癌p53缺失(图2g)，MCF7乳腺癌p53wt(图2h)，RCC45肾细胞癌p53wt(图2i)，ACHN肾细胞癌(图2j)，和HT1080肺纤维肉瘤(图2k)。图3中被测的肿瘤细胞是HCT116sc异种移植物模型。
经过分析的本发明咔唑化合物不诱导DNA损伤(表I)。因此，推测本发明咔唑化合物的细胞毒性由非基因毒性细胞应激的独特类型所引起，包括癌细胞比正常细胞更敏感的NF-κB阻抑。这说明本发明咔唑类化合物是一类新的高效抗癌治疗药。
表I
本发明咔唑化合物和多柔比星的效果汇总以比较DNA和DNA损伤应答性信号传导。
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ND-未测
根据本发明的重要特征，有活性咔唑分子和无活性咔唑分子的构象异构体的三维(3D)叠加(superimposition)揭示出所述化合物的特征在于对其活性的贡献。一个重要特征是咔唑核心的平面性(planarity)。比较了构象异构体的多个三维排列，发现在所有有活性的咔唑化合物中，咔唑核心区都是平面的(图4)。无活性化合物可以是平面或非平面的(图5)。具有相似原子分布的化合物与分子构型(architecture)的其它结构研究证实，咔唑环区域的平面性在决定所述咔唑化合物对p53活化的功效方面是重要的(图6和图7)。有活性的咔唑即实施例2示于图6。无活性的咔唑即化合物200示于图7。化合物200具有下列结构式：
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我们发现能够激活p53的咔唑化合物具有导致不依赖于下列假设的平面结构：这些化合物的作用机制是通过DNA嵌入而介导的。我们假设p53活化功效和咔唑核心的平面结构之间的关系反映出嵌入DNA的能力。为了检验这一假设，使咔唑化合物实际上嵌入到取自p53-DNA复合物的三维DNA结构(1TUP PDB结构)中。初始嵌入如下进行。有活性的咔唑分子即化合物300叠加在DNA结构之上，使得平面环区域位于两个堆积碱基对之间且与它们平行。嵌入的分子则处于p53的Arg280对面。Arg280残基被认为是对p53-DNA相互作用至关重要的。参见M.Kitayner等，Molecular Cell，22，第741-753页，2006年6月。这样的暴力式叠加违反了两个结构的原子间范德华(Van der Waals)相互作用。采用MOLOC分子力学软件包，DNA-咔唑类似物-p53三元复合物被优化，降低了合并的DNA-分子结构中范德华和扭转角张力。在优化之后，活性分子的位置适合于DNA与平行于DNA堆积碱基对的环平面中的空腔。作为该优化程序的结果，定位于咔唑环取代基的氢键接受体(HBA)位于大沟内，而与咔唑氮相连的侧链位于窄窄的小沟内。化合物300的结构式是：
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作为本研究的结果，创建了其内部空腔形状更好地容纳p53激活咔唑化合物的dsDNA片段。采用GOLD软件包，对已知具有p53活性的各种咔唑化合物进行了分子对接(docking)。结果表明，平均来说，高活性分子(p53活化EC50＜130μM)拟合该空腔比EC50＞130μM的分子要好得多。高活性咔唑化合物的构象异构体一致地位于所述空腔内，而拟合的质量在p53活化功效弱的咔唑化合物中有削弱。大多数的无活性分子的特征在于拟合的质量极差。
与咔唑氮相连的取代基正确地定位到DNA的小沟内对于获得好的p53活性可能是重要的。简单地说，侧链拟合到小沟内改进了所述咔唑化合物的总体拟合。另外，活性咔唑化合物三维叠加的原子表决(atom voting)分析表明，侧链中带正电荷的氨基对获得活性是重要的。
咔唑取代基上HBA(氢键合)原子的位置及其同一性(identity)对获得p53活性是重要的。低质量的HBA原子(即氮)导致咔唑化合物的弱活性。咔唑取代基上不存在HBA原子使得化合物无活性。所有的高活性化合物都具有非旋转的咔唑取代基。高活性分子(EC50＜130nM)和活性分子(EC50约1nM)停靠到DNA空腔内，表明具有好的HBA原子的旋转咔唑取代基可以与DNA原子一起产生氢键。相比之下，非旋转的咔唑取代基与DNA一起不产生氢键，于是导致其高活性。
使用B16黑素瘤singenic肿瘤模型如下证明了实施例7(化合物6h)的抗肿瘤活性。在C57BL/6小鼠腹部的两个部位真皮内接种5x104鼠B16黑素瘤细胞。当肿瘤接种部位中的至少一个发生肿瘤(平均大小约6mm3)时，开始治疗。小鼠通过经口管饲法每天用0.5％甲基纤维素溶媒对照或30mg/kg实施例7(n＝5只小鼠/治疗组)进行治疗，长达14天。每1-2天用数字测径器采集肿瘤测量值。对各个肿瘤的治疗效果见图8a和图8b。除了来自实施例7治疗组的一只小鼠以外，对于任一治疗组都没有观察到对整个小鼠体重的影响(＜10％变化)。到第9天，在实施例7治疗组中的肿瘤生长与溶媒对照组相比较有3倍左右的减少(68％生长抑制)。
为了证实实施例7的抗肿瘤活性，使用HCT116异种移植物模型经口递送所述咔唑化合物(30mg/kg)。在本试验中，在无胸腺裸鼠的两个部位接种了5X106HCT116肿瘤细胞。接种后第7～11天之间90％出现肿瘤。当每只小鼠至少有一个肿瘤的大小达到20-25mm3时，开始用0.5％甲基纤维素中的30mg/kg实施例7的化合物或用0.5％甲基纤维素溶媒对照每天口服治疗。小鼠进行治疗直到对照肿瘤达到1000mm3为止。开始治疗后，监测小鼠的总体情况、体重减轻和存活，以及每隔一天测量的肿瘤大小。
表2：实验组
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D-天
在本试验中，第2组中的小鼠100％在实验中存活。在对照溶媒治疗组1中未观察到体重减轻，而在第2组中，3只小鼠到实验结束时体重减轻了15-20％。第2组中剩余的小鼠的体重波动范围为原始体重的95-105％。在第2组的小鼠外观、活动或行为方面都没有出现任何其它异常体征。
在对照组1中，HCT116肿瘤呈指数生长，较快和较慢生长肿瘤间的正常偏差在预期范围内。在实施例7治疗组2中，所有肿瘤的生长与溶媒对照治疗组1相比较都延迟了。在治疗开始后的第14天，经治疗的肿瘤都没有达到最慢生长对照肿瘤的大小(530mm3)。在肿瘤平均生长方面，用实施例7治疗能抑制肿瘤生长达到溶媒对照组1相比的约3.5倍(抑制73％)。重要的是，有一个经治疗的肿瘤完全治愈，尸检时，在有肿瘤的地方只发现了最小***类型形成。几个经治疗的肿瘤的大小不仅比对照肿瘤增加得更慢，而且还有减少，这说明由于用实施例7的化合物治疗而导致了肿瘤细胞死亡和肿瘤破坏。这一结果在治疗的头3-5天就可观察到，然后经治疗的肿瘤继续缓慢生长。
本实验表明，实施例7的化合物对裸鼠体内的HCT116皮下异种移植物肿瘤生长有抑制作用。生长抑制值为73％，根据NCI标准，73％被认为是具有显著抗癌活性(≥42％)。上述结果详见图3和图8-10。
图3是显示用实施例7的化合物和对照(MC)治疗HCT116结肠癌异种移植物肿瘤的平均肿瘤生长曲线图。用实施例7的化合物治疗的肿瘤表现出肿瘤体积明显减少。在肿瘤体积对治疗天数的曲线图中，小棒代表标准差。图8表示小鼠中用对照溶媒(图8a)和用实施例7的化合物(图8b)治疗的各个肿瘤生长的曲线图。
图9显示用实施例7的化合物治疗的小鼠中各个肿瘤最多生长到100mm3。图10显示肿瘤大小在治疗头几天内就有减少，还有肿瘤被治愈。
图11证明上述测定中激活p53的一种咔唑化合物即化合物100表现出针对多种被测癌细胞的显著抗癌活性。将图11中给出的细胞系中的每一种接种到96孔板中。第二天，细胞用不同浓度的化合物100进行处理。处理持续24小时，此时把含化合物的培养基更换为无化合物的培养基，让细胞生长直到仅用溶媒对照(DMSO)处理的对照孔达到单层(通常在48小时内)。然后，将细胞固定，用50％甲醇中的0.5％亚甲基蓝染色。染料用1％SDS洗脱，在650nm测量吸光度。数据用于650nm的吸光度对化合物100的浓度表示。
实施例7、15和13的化合物显示出有效的抗癌活性。在采用这三种化合物的功效试验中，在无胸腺裸鼠的两个后胁腹皮下接种Caki1人肾细胞癌细胞悬液。当小鼠中至少有一个肿瘤达到20-50mm3时，开始治疗。小鼠通过管饲法经口给予配制在0.2％羟甲基纤维素中的30mg/kg实施例7、5mg/kg实施例15或25mg/kg实施例13进行治疗。作为阳性对照，一个组用40mg/kg舒尼替尼(Sunitinib)治疗，舒尼替尼是一种批准用于治疗肾细胞癌的药物。治疗持续4周，时间表是用药5天/停药2天。治疗完成后，再监测小鼠4周以判定肿瘤生长怎样快速回到正常。所有三种化合物相对于溶媒对照都引起显著的肿瘤生长抑制(第24天(治疗结束)实施例7 73％抑制、实施例15 50％抑制、实施例13 62％抑制)。实施例7和13的这种抗肿瘤作用及较低程度的实施例15都明显高于舒尼替尼对照(42％)。有趣的是，停止用任何本发明化合物治疗后不会导致肿瘤的快速重新生长。相比之下，结束舒尼替尼治疗会立即导致肿瘤生长，致使到第40天，在舒尼替尼和溶媒对照组之间观察不到肿瘤体积的显著差异。
总之，甚至在治疗完成后，所有三种咔唑化合物都引起肿瘤生长被持续抑制。功效等级是实施例7大于或等于实施例13，实施例13大于实施例15。用实施例7治疗相对于实施例13和15不引起明显的副作用。用实施例13观察到最严重的副作用，其中有两只小鼠不得不放弃短期治疗，有一只小鼠由于体重减轻而永久地去掉，导致过早安乐死。因此，在本试验中，实施例7似乎是“最安全的”咔唑。在这个肿瘤模型中，因为实施例15仅引起短期体重减轻10-15％，所以这种化合物是第二个最安全的。根据这些结果，实施例7是优选的化合物，具有有效的抗肿瘤活性(70-80％抑制)，没有副作用。
在另一个试验中，评价了在携带人HCT-8回肠盲肠腺癌异种移植物的裸鼠中和在携带人HT-29结肠腺癌异种移植物的裸鼠中实施例7、15和13在最大耐受剂量(MTD)时的抗肿瘤活性和毒性。也对实施例7、15和13在MTD并排针对人HCT-8和HT-29结肠异种移植物的抗肿瘤功效和毒性进行了比较。
如上所述，实施例7、15和13证明在裸鼠或SCID小鼠(例如HCT-116、DLD1、Caki1和MDA-MB-231肿瘤，肿瘤细胞作为细胞悬液接种到小鼠体内)中具有针对多种人肿瘤异种移植物的抗肿瘤功效。评价了这三种化合物以其重复MTD针对HCT-8(对化疗比较敏感，例如5-FU和伊立替康)和HT-29(相对抵抗化疗)异种移植物(通过把约50mg肿瘤块移植到裸鼠体内而建立的)的体内抗肿瘤功效和毒性。在本研究中，比较了这三种咔唑针对HCT-8和HT29结肠癌肿瘤的抗肿瘤效果和毒性，其中当肿瘤大小达到150-200mg(在肿瘤移植后7天左右)时治疗开始。
材料与方法
动物：8-12周龄雌性无胸腺裸鼠(nu/nu，体重22-25g)得自Harlan Sprague Dawley Inc.(Indianapolis，IN)，每个笼子装5只小鼠，水和食物自由摄取，遵循公共机构批准的动物方案。
药物：所有三种化合物都配制在0.2％羟丙基甲基纤维素中，对实施例15，浓度为0.5mg/ml；对实施例7，浓度为3mg/ml；对实施例13，浓度为2.5mg/ml。
肿瘤：使用人回肠盲肠腺癌HCT-8和结肠腺癌HT-29异种移植物。最初通过皮下注射106个培养细胞建立了异种移植物，肿瘤传代若干次，当肿瘤达到1-1.5g时，从传代肿瘤中取约50mg非坏死肿瘤(2-3块)通过套针进行移植。
药物剂量和时间表：所有所述化合物都以MTD口服(p.o.)给予，其中实施例15：5mg/kg/天；实施例7：30mg/kg/天；实施例13：25mg/kg/天，一周5天持续4周(5天/周x 5)或直到小鼠不得不由于大肿瘤而处死。肿瘤移植后7天开始治疗，当肿瘤达到150-200mg时。对照组中的小鼠接受溶媒(0.2％羟丙基甲基纤维素)，每20g小鼠体重给予200μl(同治疗组)。每个实验组使用5只小鼠，共10个肿瘤(在左侧和右侧胁腹各有1个肿瘤)。
肿瘤测量：借助Vernier测径器测量肿瘤的两个轴(mm)(L，最长轴；W，最短轴)。用公式：肿瘤重量＝1/2(L x W2)来估算肿瘤重量(mg)。在药物治疗的同时每天进行肿瘤测量，在治疗结束后一周3-4次。
最大耐受剂量(MTD)和毒性评价：MTD定义为小鼠中不引起药物相关致死的最高药物剂量，体重减轻小于原体重的20％，毒性为可逆的。药物诱导的毒性(体重减轻、腹泻和死亡)的动力学在治疗后的头10天每天进行测定，此后每两天测定一次。
抗肿瘤活性：抗肿瘤活性通过最大肿瘤生长抑制(MTRI)进行评价，最大肿瘤生长抑制(MTRI)是治疗组(MTWTG)与未治疗对照组(MTWCG)在同一时间点相比较的平均肿瘤重量(MTRI＝MTWTG-MTWCG)÷MTWCG x 100％)。肿瘤倍增时间(TDT)定义为肿瘤达到其初始重量两倍的平均时间。肿瘤应答表示为当肿瘤重量减少到初始肿瘤大小的至少50％时的部分肿瘤应答(PR)，而完全肿瘤应答(CR)定义为在肿瘤外观的原部位在触诊时无法检出肿瘤。
结果
(a)实施例15、7和13在携带HCT-8异种移植物的裸鼠中的抗肿瘤活性和毒性。
下表中的数据表明在携带HCT-8异种移植物的裸鼠中每周口服用药5天停药2天后，溶媒对照、实施例15、实施例7和实施例13的抗肿瘤活性和毒性。数据表明，与溶媒对照相比，实施例13和15针对HCT-8异种移植物具有中等抗肿瘤活性，抑制率为35-40％，延迟肿瘤生长分别为17％(实施例13)和57％(实施例15)(倍增时间：4.8天)。对于实施例13和15，计划的4个疗程未完成，因为大的肿瘤体积要求把小鼠处死。实施例7比实施例13和15针对HCT-8异种移植物的活性高得多，抑制率为65.9％，肿瘤生长有142％延迟。实施例7不产生任何PR或CR。关于毒性，在单独的HCT-8肿瘤的动物组中，一周口服用药5天停药2天持续2-4周后，溶媒产生很弱的毒性。
表
实施例15、7和13在携带人HCT-8回肠盲肠腺癌异种移植物的裸鼠中的抗肿瘤活性和毒性
Figure BPA00001347451801191
MTRI：最大肿瘤生长抑制；TDT：肿瘤倍增时间；PR：部分肿瘤应答；CR：完全肿瘤应答；MWL：预治疗体重的最大体重减轻。对照组给予0.2％羟丙基甲基纤维素(溶媒)，每20g小鼠体重给予200μl。每个实验组使用5只小鼠，共10个肿瘤(在左侧和右侧胁腹)。
(b)实施例15、7和13在携带HT-29异种移植物的裸鼠中的抗肿瘤活性和毒性。
下表中的数据表明在携带HT-29异种移植物的裸鼠中每周口服用药5天停药2天后，溶媒对照、实施例15、实施例7和实施例13的抗肿瘤活性和毒性，其中HT-29异种移植物比HCT-8对大多数化疗药的耐药性高。数据表明，所有三种化合物都是抗该肿瘤比抗HCT-8的活性高。同样地，在这三种化合物当中，实施例13是活性最小的化合物，抑制率为48％，延迟肿瘤生长为50％(对照的肿瘤倍增时间是7.8天)。尽管实施例15产生了类似的肿瘤生长抑制(58％)，但是它对肿瘤生长延迟的作用(延迟76％vs 122％)比实施例7的小。这三种药物都不产生PR或CR。关于毒性，实施例7和13产生很小的体重减轻。实施例7在HT-29实验中比在HCT-8实验中的毒性高，体重减轻18％，及致死率40％。
表
实施例15、7和13在携带人HT-29结肠腺癌异种移植物的裸鼠中的抗肿瘤活性和毒性
Figure BPA00001347451801201
MTRI：最大肿瘤生长抑制；TDT：肿瘤倍增时间；PR：部分肿瘤应答；CR：完全肿瘤应答；MWL：预治疗体重的最大体重减轻。对照组给予0.2％羟丙基甲基纤维素(溶媒)，每20g小鼠体重给予200μl。每个实验组使用5只小鼠，共10个肿瘤(在左侧和右侧胁腹)。
结论
得出的结论是，实施例15和13显示有中等抗肿瘤活性，尽管实施例7针对HCT-8和HT-29异种移植物两者具有更好的抗肿瘤功效。
在HT-29研究中，实施例15的毒性大于实施例7和15。
与对大多数其它化疗药的反应不同，与用HCT-8异种移植物观察到的反应相比，HT-29异种移植物对所有三种咔唑化合物更敏感。
数据表明，实施例7对HCT-8和HT-29异种移植物都是优选的化合物。
在另一个实验中，证明了实施例7在成神经细胞瘤鼠模型中的抗肿瘤活性。N-myc(TH-MYCN)转基因小鼠携带有处于酪氨酸羟化酶启动子控制之下的人N-myc癌基因，它在早期发育期间在神经外胚层细胞中表达，该小鼠发生人成神经细胞瘤的鼠对应瘤。这些小鼠被证明是极好的模型，享有人类疾病的若干重要特征，包括肿瘤及其转移瘤的部位、肿瘤的组织结构、成神经细胞瘤相关标记蛋白的阳性染色、突触和神经分泌颗粒的存在、染色体在与人成神经细胞瘤中观察到的区域同线(syntenic)的区域中获得和丢失、和发生的肿瘤中特异性N-myc拷贝数的扩增。
现代化疗显著提高了许多癌症的存活率。然而，对于成神经细胞瘤，临床环境中多药耐药性的发生是治疗失败的主要原因之一，防止多药耐药性的发生具有巨大的临床潜力。靶向以前没有涉及成神经细胞瘤的新途径的药物可以为治疗方案提供一种新的途径。
这些试验结果表明，实施例7的化合物在成神经细胞瘤的这个模型中具有不同寻常的抗肿瘤活性，尽管高剂量在一些小鼠中证明有毒性。用30mg/kg实施例7治疗的小鼠快速且预料不到地体重减轻(在一些情况下2g过夜)，并发现由于小的脾脏和脱水体征引起的死亡。治疗后存活的小鼠在延长15-47天的时间内没有肿瘤，然而所有小鼠并没有按照相同的时间表进行治疗。剂量按照减轻的体重进行修改。根据这些结果，实施例7在成神经细胞瘤的TH-MYCN模型中表现出良好功效。
现代化疗显著提高了许多癌症的存活率。然而，对于成神经细胞瘤，临床环境中多药耐药性的发生是治疗失败的主要原因之一，防止多药耐药性的发生具有巨大的临床潜力。靶向以前没有涉及成神经细胞瘤的新途径的药物可以为治疗方案提供一种新的途径。
在哺乳动物癌发生的MMTV-neu转基因小鼠模型中，每天给予实施例7也可防止肿瘤发作。
乳癌(BC)是一种严重的公共健康问题，因为这种恶性肿瘤的高发和可利用治疗的有限成功。已经知道，这种疾病的家族史以及若干特定遗传因子与相当大程度的概率素因使个体易患BC。因此，来自BC高危人群的妇女在理论上讲可因预防性抗BC疗法而受益。本发明的咔唑化合物可以在导致肿瘤生长抑制的方向上调节若干癌症相关的细胞途径。实施例7的化合物在小鼠中当以治疗剂量(20-25mg/kg)给予时不引起严重的副作用。实施例7表明在Ames测定中没有致突变活性。在该项研究中，实施例7经测试为小鼠BC的预防药。
动物模型：背景为FVB品系的MMTV-neu雌性小鼠在对***刺激应答时表达处于MMTV启动子下的非活化Her2原癌基因。小鼠从24周龄开始发生自发的哺乳动物肿瘤，到10月龄有70-80％的动物正常发生肿瘤。本试验的目的是(a)比较用实施例7与用溶媒对照(水)治疗的小鼠中的肿瘤发生率，和(b)比较用实施例7与用溶媒对照治疗的小鼠体重增加和一般外观。
研究设计：把40只雌性小鼠在21日龄时与其哺乳母鼠分开来进行断奶，并置于单独的笼子(4只小鼠/笼)内。此刻，小鼠做好标记后分配到治疗组或对照组(每组20只小鼠)。两组的体重一周测量一次。从4周龄开始，给来自治疗组的小鼠提供含有实施例7的水。每天估计治疗组和对照组中的液体消耗。根据这些测量结果，计算出每克小鼠体重的液体消耗，并把饮用水中的实施例7浓度调整到理想的治疗剂量。每周准备实施例7的新鲜溶液。通过乳腺触诊来监控小鼠的肿瘤形成情况，一周一次。当累积肿瘤大小达到体积为1000mm3时，立刻处死小鼠。
  组别   小鼠数目   靶向剂量   递药方式
  1   20   无(水)   每天饮用
  2   20   约25mg/kg实施例7   每天饮用
初步结果：来自治疗组的小鼠按平均速率为每天20mg/kg消耗实施例7。变异性是由于通过饮用水递药的有限精确性所致。在体重分布或动物外观的异常方面没有观察到治疗组和对照组之间的差异。
在实验过程中，在治疗组和对照组中都出现了几只自发死亡。死亡原因不清楚，因为动物都没有肿瘤，死后的总体病理检查显示没有明显的异常。没有小鼠死亡早于实施例7给药开始后几周。在试验期间，3只对照小鼠死亡年龄分别在15周龄、41周龄和42周龄左右。在实施例7组中死亡的7只小鼠处在不同的年龄范围，从12周龄到45周龄(自从实验性治疗开始后的7-41周)。
在对照组和治疗组中分别有21只小鼠和19只小鼠达到了荷瘤年龄。在它们中间，对照小鼠中有14只(67％)发生肿瘤，接受实施例7的小鼠中有7只(37％)发生肿瘤。
本试验表明：
(a)用饮用水按每天约20mg/kg长期给予实施例7不引起小鼠体重的改变；
(b)实施例7治疗组相对于对照组中的死亡率较高，但是差异没有统计学上的显著性并在治疗周期长短和小鼠死亡之间没有相关性；和
(c)用实施例7治疗的小鼠相对于对照动物中负担的肿瘤率较低。
本发明的咔唑化合物也表现出抗寄生虫活性。具体地说，通过在体外、在试验化合物存在或不存在下培养恶性疟原虫(品系D10)，检验了咔唑化合物对疟疾寄生虫的影响。根据试验，筛选出了有活性的和无活性的咔唑化合物(根据激活p53)，正如奎纳克林(一种常用的抗疟疾药物)一样。表3汇总了化合物的结构以及它们在p53活化测定中的EC50值。
表3.试验化合物
实施例2、化合物400和实施例7在29nM、57nM和143nM浓度时进行了试验。化合物500、实施例18和奎纳克林仅在143nM时进行了试验。
在每个实验中，用显微镜法评价了1000个红细胞以判定受感染细胞的数量。在对照实验(不加试验化合物或加PBS)中，受感染细胞的百分比在1.6％和6.4％之间变动。该研究中确定的感染性降低指数见图12。p53活化测定的功效清楚地但间接地与恶性疟原虫体外抑制相关联。在p53活化测定中有活性的三种化合物(实施例2、7和18)证明其抗疟疾活性与奎纳克林相当。在p53活化测定中无活性的化合物(化合物400和500)显示出没有寄生虫血症降低。
实施例7、13和15的化合物也显示有抗原生动物活性。人非洲锥虫病(HAT)或“睡眠病”是一种最重要的但同时最易被忽略的热带传染病。该病由原生动物一布氏锥虫(Trypanosoma brucei)引起，布氏锥虫通过采采蝇(tsetse fly)(舌蝇(Glossina spp))叮咬传播给人。虽然HAT早在20世纪60年代(1960s)已被消灭，但是HAT在有采采蝇栖息的撒哈拉以南非洲多个地区以流行规模重新出现。根据世界卫生组织，目前大约有500,000人携带锥虫，若不治疗，都将会死亡。与HAT相关的高死亡率是由于、至少部分由于缺乏可容易地给予的有效药物。
目前用于治疗HAT的药物在本领域中都是老的、有毒的、难以给药的。苏拉明(Suramin)和喷他脒，它们都是用来治疗早期疾病，必须在诊所注射。然而，到卫生所去对于在该病十分流行的非洲农村地区却不是一件普通的事情。而且，许多早期患者不去治疗是因为他们并不知道自已被感染了。这是由于在危险人群中不好筛选，以及早期HAT症状的性质可变、间歇性和相对轻微。到明显症状出现时，患者常常已经处于该病的晚期。晚期HAT的治疗尤其麻烦，因为它包括注射美拉胂醇，美拉胂醇是一种注射时确实会灼伤患者的砷剂。这种治疗十分疼痛，许多患者会拒绝治疗，因此不得不进行身体约束，强迫接受这种药物。而且，美拉胂醇还有明显的毒副作用，会导致经治疗的患者有5-20％死亡。鉴于这些原因以及预期的耐药性问题，急需找到一种新的、可口服生物利用的药物来替代目前古老的药物。
试验表明，实施例7、13和15的化合物具有体外不同寻常的抗布氏锥虫(T.brucei)活性(低纳摩尔浓度IC50)。在体外进行了初步布氏锥虫失活实验。布氏锥虫的生活史包括采采蝇体内的“前循环(procyclic)”发育阶段和人体内的“血流”形式。所有的研究都是用该寄生虫的血流阶段进行的，因为它才是引起该病的发育阶段。
为了评价实施例7、13和15的相对抗锥虫活性，也为了确定每种化合物杀死50％寄生虫的浓度(IC50)，使布氏锥虫暴露在不同的化合物浓度范围。用苏拉明(一种常用的抗HAT药物)作为阳性对照。
将血流布氏锥虫按3x103细胞/mL接种到24孔(每孔装有500uL培养基)板中。向各细胞(一式两份培养物)中加入不同浓度的化合物(0-200nM，对于实施例7；0-20nM，对于实施例13；和0-3nM，对于实施例15)。对照培养物接受等体积的DMSO。所有三种试验化合物完全消除了布氏锥虫，因为在这些药物存在下，在培养48小时之后没有检出寄生虫。用DMSO(溶媒)处理的对照培养物含有寄生虫，密度为3x106/mL。
杀锥虫活性按下列等级增加：实施例7小于实施例13，实施例13小于实施例15，IC50值分别为约43nM、约6-11nM和约0.5nM。苏拉明的IC50大于300nM。
因此，本发明的化合物用于开发成为杀锥虫药物是极好的。
测试了实施例15的化合物对抗不同真菌菌株的活性。采用CLSIM27A3和M38A2方法，进行了实施例15对31种临床和实验室真菌菌株的体外敏感性试验。一般而言，所选出的菌株证明对目前的抗真菌药物有不同的敏感性模式。为了评价实施例15，测试了8个曲霉(Aspergillus spp.)、21个念珠菌(Candida spp.)、1个新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)和1个汉逊德巴利酵母(Debaryomyces hansenii)菌株。
曲霉菌株：整个研究中使用了8个曲霉菌株。也使用了6个烟曲霉(A.fumigatus)、1个黄曲霉(A.flavus)和1个土曲霉(A.terreus)。烟曲霉组包括2个伊曲康唑抗性菌株(RIT13和RIT5菌株)(1)、1个***交叉抗性菌株(MUT10)(2，3)、1个棘白菌素(echinocandin)交叉抗性菌株(EMFRS678P)(4)和2个野生型敏感分离株(R21和ATCC13073)。“非烟曲霉(non-fumigatus)”菌株对所有可利用的抗真菌药敏感，只是土曲霉分离株(对两性霉素B(amphotericin B)天然不太敏感)例外(5)。
念珠菌菌株：在研究中使用了20个念珠菌临床分离株和1个实验室对照菌株(白色念珠菌SC5314)。在采集时包括：
5个白色念珠菌(C.albicans)分离株、2个野生型菌株(SC5314和ATCC 36082)、1个棘白菌素抗性分离株(M205)(6)和2个氟康唑抗性临床分离株(3795和3184)(7)。
3个克鲁斯念珠菌(C.krusei)菌株、1个ATCC对照菌株(ATCC6258 CLSI对照)和2个等基因临床菌株(98和100)。100是棘白菌素交叉抗性(8，9)。
2个光滑念珠菌(C.glabrata)菌株、1个野生型临床菌株(3168)和1个棘白菌素交叉抗性分离株(3830)(10)。
2个热带念珠菌(C.tropicalis)菌株、1个ATCC对照菌株(ATCC750)和1个棘白菌素交叉抗性(T3)(11)。
2个都柏林念珠菌(C.dubliniensis)菌株、1个野生型菌株(3949)和具有棘白菌素反常(paradoxical)作用的其它菌株(M204)。
4个棘白菌素敏感性天然降低的念珠菌(12)：1个C.orthopsilosis(981224)、1个C.metapsilosis(2006-113)、1个***滑念珠菌(C.parapsilosis)(ATCC 22019 CLSI对照)和1个季也蒙念珠菌(C.guilliermondii)(ATCC6260)(13)。
其它的念珠菌种和属：1个皱落念珠菌(C.rugosa)(M83)、1个解脂念珠菌(C.lipolytica)(M159)、1个葡萄牙念珠菌(C.lusitaniae)(200450)、1个新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)(499)和1个汉逊德巴利酵母(Debaryomyces hansenii)。
敏感性试验：采用CLSI标准化方法，进行了实施例15对酵母(M27A3)(14)和霉菌(M38A2)(15)的体外敏感性试验。在24小时和48小时进行了MIC(最小抑制浓度)读数。
表1：真菌菌株针对实施例15的体外敏感性
Figure BPA00001347451801281
Figure BPA00001347451801291
*两个重复的几何平均值，单位μM。
a对应于白色念珠菌等同物的氨基酸数量。
曲霉对实施例15的敏感性：黄曲霉和土曲霉菌株比烟曲霉菌株对实施例15更敏感(24小时MIC几何平均值分别为0.40μM和1.59μM)。而且，在敏感菌株和唑类或棘白菌素抗性菌株之间没有MIC差异(表1)。
酵母对实施例15的敏感性：在唑类或棘白菌素抗性或敏感分离株之间没有实施例15MIC差异。平均来说，酵母MIC为曲霉MIC的八分之一(1/8)(表1)。用实施例15获得的MIC与常规抗真菌药的MIC相当，或者好于常规抗真菌药的MIC。唑类和棘白菌素抗性菌株均对实施例15敏感。
实施例15对烟曲霉(Aspergillus fumigatus)生存力的影响：采用XTT生存力测定，评价了实施例15对烟曲霉Af293菌株的抗真菌活性。选择该菌株，是因为它是一个表征得最好的菌株，也是用于测定烟曲霉基因组序列的菌株。XTT生存力测定基于在作为电子偶合剂(electron-coupling agent)的甲萘醌存在下，四唑
Figure BPA00001347451801301
盐(XTT)的减少。活的真菌数量和XTT减少的量之间存在相关性(16)。
方法
采用了先前在进行XTT测定(17)中描述的相同方法。把Af293分生孢子接种到含有氯霉素和庆大霉素(Becton Dickinson，MD)的Sabouraud BHI斜面上，室温下孵育7-10天，用10ml含0.05％吐温(Tween)20的生理盐水(NS)洗斜面进行收获。然后，将分生孢子悬液通过100μm滤器过滤，在血细胞计数器上计数，再稀释至2.0×106CFU/ml。然后，分生孢子用MOPS(吗啉丙烷磺酸)缓冲的RPMI(pH 7.0)按1∶50稀释。使用实施例15溶于DMSO中的贮液。将实施例15稀释在MOPS缓冲的RPMI(pH 7.0)中(在加到真菌悬液之前，DMSO的终浓度为2％)。在将含药物培养基加到各孔之后，加入分生孢子悬液(100μl)(t＝0h)。对照孔含有分生孢子、培养基和溶媒，但不含药物。空白孔仅由培养基组成，不含分生孢子。使用不同浓度的实施例15但不加真菌的初始实验表明，实施例15试剂不影响XTT测定中的光密度。将板在37℃孵育，在24h时基本上同前(16)所述进行XTT测定，但有一点小改动。将XTT(Sigma Chemical，St.Louis，MO)的贮液溶于NS(1mg/mL)中。在丙酮中制备电子偶合剂甲萘醌(Sigma Chemical)的10mM溶液，然后用NS按1∶10稀释。临用前制备由4.0ml XTT和0.5ml甲萘醌组成的工作液。向各孔中加入50微升的组合溶液，将板在37℃孵育2小时。把100微升的上清液转移到一块新板中，再用Labsystems Multiskan Plus读板器测定450nm的光密度(OD450)。各孔中XTT和甲萘醌的终浓度分别为200μg/ml和25μM。
实施例15具有针对Af293的抗真菌活性。IC50大约为2.5μM。在实施例15浓度大于12.5μM时出现了真菌生长被完全抑制，基于对各孔的肉眼检查。
1.A.M.Nascimento等，2003，47：1719-26.
2.G.Garcia-Effron等，2008，J Clin Microbiol，46：1200-6.
3.S.J.Howard等，2006，Int J Antimicrob Agents，28：450-3.
4.E.M.Rocha等，2007，Antimicrob Agents Chemother，51：4174-6.
5.W.J.Steinbach等，2004，Clin Infect Dis.，39：192-8.
6.G.S.Garcia-Effron等，Antimicrob Agents Chemother.
7.S.Perea等，2001，Antimicrob Agents Chemother，45：2676-84.
8.M.Hakki等，2006，Antimicrob Agents Chemother，50：2522-4.
9.J.N.Kahn等，2007，Antimicrob Agents Chemother，51：1876-8.
10.J.D.Cleary等，2008，Antimicrob Agents Chemother，52：2263-5.
11.G.Garcia-Effron等，2008，Antimicrob Agents Chemother，52：4181-3.
12.G.Garcia-Effron等，2008，Antimicrob Agents Chemotger，52：2305-12.
13.D.S.Perlin，2007，Drug Resist Update，10：121-30.
14.Clinical Laboratory Standard Institute(临床实验室标准研究所)，C.L.S.I.，2008，第3版，28(14).
15.Clinical Laboratory Standard Institute(临床实验室标准研究所)，C.L.S.I.，2008，第2版，28(16).
16.J.Meletiadis等，2001，J Clin Microbiol，39：3402-8.
17.Y.F.Brun等，2007，Antimicrob Agents Chemother，51(5)：1804-12.
本发明的咔唑化合物也表现出抗细菌活性。具体地说，本发明的咔唑化合物对革兰氏阳性菌(枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis))和革兰氏阴性菌(DH5-α)的效果可用下列方法来测定，并汇总于图13a和图13b中。
体外试验评价了咔唑化合物对革兰氏阴性菌(-)和革兰氏阳性菌(+)的效果。
设备
96孔读板器(例如Multiscan，Lab Systems，Inc)
多道移液管50-300uL范围
滤器尖(Filter tips)
96孔板(Corning Costar Cat.No.：3598)
100mm陪替氏培养皿(petri dish)
无菌1μl接种环(Fisher 22-170-209)
14ml带快速压紧帽(snap-cap)的圆底管(Falcon 352059)
材料
DH5-α(大肠杆菌(E.coli)-革兰氏阴性(-)菌)
枯草芽孢杆菌(革兰氏阳性(+)菌)
Difco LB琼脂(BD 244510-对于DH5-α)
Difco LB肉汤(BD 244610-对于DH5-α)
Difco营养肉汤(BD 233000-对于枯草芽孢杆菌(B.subtilis))
Difco营养琼脂(BD 212000-对于枯草芽孢杆菌(B.subtilis))
方法
试剂的准备
为了准备供DH5-α生长用的平板，在每1公升MilliQ水中加入40g Difco LB琼脂。对液体环境(liquid setting)进行高压灭菌。当装有溶液的容器冷却时，倒入100mm陪替氏培养皿内，让盖子稍稍合上一些以防水分随着琼脂凝结越聚越多(leave lids slightly off to prevent build up of moisture as agar gels)。使在琼脂凝固之前形成的气泡劈劈啪啪地破掉(Pop bubbles that form prior to the agar setting)。4℃保存。
为了准备供DH5-α生长用的培养基，在每1公升MilliQ水中加入25g Difco LB肉汤。对液体环境进行高压灭菌。
为了准备供枯草芽孢杆菌生长用的平板，在每1公升MilliQ水中加入23g Difco营养琼脂。对液体环境进行高压灭菌。当装有溶液的容器冷却时，倒入100mm培养皿内，让盖子稍稍合上一些以防水分随着琼脂凝结越聚越多。使在琼脂凝固之前形成的气泡劈劈啪啪地破掉。4℃保存。
为了准备供枯草芽孢杆菌生长用的培养基，在每1公升MilliQ水中加入8g Difco营养肉汤。对液体环境进行高压灭菌。
细菌的准备
在细胞毒性测定开始前两天，把DH5-α和枯草芽孢杆菌接种到1ml相应培养基(来自甘油贮液)中，让其在振荡下于37℃生长一整天。
每种细菌用无菌接种环在适当的琼脂平板上划线，让其在细菌培养箱中于37℃生长过夜。
用无菌接种环挑取细菌的一个单菌落，接种5ml相应培养基(在14ml带快速压紧帽的管(snap cap tube)内)中。在振荡下于37℃生长过夜(～16h)。
第二天，测量培养物的OD600nm，以确保细菌处于指数生长期(OD600nm＝0.4-0.8)。
细胞毒性测定(1)
把5ml DH5-α和枯草芽孢杆菌的培养物稀释至OD600nm为0.002，OD600nm为0.002相当于足够完成实验的体积中有约2x106细胞/ml(取决于板的数量)。取50μl加到X 96孔板的各孔(X＝给定实验所需的板的数量)。
化合物将按表2从0.005-50μM开始以3倍稀释度加入到各板中。
将贮液在LB肉汤或营养肉汤中稀释(分别用于DH5-α和枯草芽孢杆菌研究)，制备用于试验的化学药品。细胞用以下方案中给出的最终化学药品浓度(表2)进行处理。贮液在DMSO中制得。典型地，将化学药品制成20mM贮液。然而，这种浓度取决于给定化学药品的溶解度，因此在实验时必须注意实际贮液浓度。
表4.实验板与化学药品终浓度的方案
Figure BPA00001347451801341
每种待测的文库化学药品在96孔板中要求有两行，因此4种化学药品(例如W，X，Y，Z)可以在一个板中同时进行试验。除了试验化学药品之外，每个板还应当包括阳性对照和阴性对照。用100μg/ml氨苄西林作为阳性对照。用DMSO作为阴性对照，其用量等于所用试验化合物的最大体积(～0.25％DMSO，对于50μM)。
把待加到板中的化学药品稀释液用适当的细菌培养基制成2X浓度，然后按体积为50μl加到相应孔中。
化学药品用适当的细菌培养基从50μM开始稀释成3倍系列稀释液(例如最高浓度的2X，例如50μM的2X＝100μM)。需要最高2X浓度300μl以便使用1/3来得到第1稀释度，而对于所有后续稀释都用200μl培养基。最高2X浓度100μl与200μl培养基混合，然后将第1稀释度100μl与200μl培养基混合产生下一个稀释度。重复这个过程直到所有10个2X剂量全都制得。
除了在每个板的一个浓度中加入的阳性对照物之外，还在全部浓度范围内向各测定操作中加入了阳性对照氨苄西林(3倍稀释液)，以确保既正确又稳健的测定性能(在操作中通过比较剂量反应曲线来估计)。
在向含有细菌的96孔板中加入咔唑化合物之后，把板移到37℃细菌培养箱孵育48小时。在孵育之后，测量96孔板中每个孔的OD600mm。
数据分析
将试验化合物溶液的平均OD600nm与DMSO对照的平均OD600nm进行比较，即把试验溶液的平均OD600nm除以DMSO对照的平均OD600nm，再乘以100，得出％DMSO对照(即％细胞毒性)。把％DMSO对照对化合物浓度作图，绘出S形曲线。在三轮试验完成之后，所有三轮试验的原始数据全都用来进行IC50计算。
试验结果表明，实施例15、7、4、12、13、17和18咔唑化合物和化合物18c-1都证明有不同功效的对抗枯草芽孢杆菌和HB 101大肠杆菌的抗菌效果。革兰氏阳性(+)菌似乎对本发明的咔唑化合物更敏感。另外，所述咔唑化合物中的几种，例如实施例15和17，抗细菌比抗氨苄西林对照更有效。因此，本发明的咔唑化合物证明有确定的抗细菌活性。

Claims (21)

1.一种化合物或其药学上可接受的盐或水合物，所述化合物具有以下结构式：
Figure FPA00001347451700011
其中Ra选自氢、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、ORe、N(Re)2和SRe；两者中择一地，或者Ra和R1或者NRe和R1与它们所连接的碳原子一起形成5元或6元脂肪族碳环或杂环；
Rb选自氢、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、ORe、N(Re)2和SRe，两者中择一地，或者Rb和R6或者NRe和R6与它们所连接的碳原子一起形成5元或6元脂肪族碳环或5元或6元脂肪族碳环或杂环；
Rc选自氢、C1-6烷基、C1-6羟基烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基和C(＝O)Re，或者Rc和Rd结合在一起形成任选含有氧原子的5元、6元或7元脂肪族环；
Rd选自氢、C1-6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基和C(＝O)Re，或者Rd和R7与它们所连接的原子一起形成5元或6元脂肪族环；
Re独立选自氢、C1-6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基，或者两个Re基团与它们所连接的氮结合在一起形成5元或6元脂肪族环；
R1、R2、R3、R4、R5和R6独立选自氢、C1-6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、卤素、ORe、C(＝O)Re、C(＝O)ORe、OC(＝O)Re、C(＝O)N(Re)2、C(＝O)NReSO2Re、N(Re)2、NReC(＝O)Re、ReC(＝O)N(Re)2、CN、NO2、CF3、OCF3、SRe、SORe、SO2Re、SO2N(Re)2和OSO2CF3；
R7选自氢、C1-6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基；且
n为0、1、2、3、4或5。
2.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐或水合物，其中所述化合物具有通用结构式(Ia)：
Figure FPA00001347451700021
其中Ra为C1-3烷基、C1-4卤代烷基、C3-5环烷基、N(Re)2或ORe，或者Ra和R1与它们所连接的碳原子一起形成5元或6元脂肪族碳环；
Rb为C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C3-5环烷基、N(Re)2或ORe，或者Rb和R6与它们所连接的碳原子一起形成5元或6元脂肪族碳环或者含有一个氮原子的5元或6元脂肪族环；
Rc为C1-6烷基、C3-5环烷基或C1-3羟基烷基；
Rd为氢、C1-4烷基或C3-5环烷基，或者Rd和R7与它们所连接的原子一起形成含有一个氮原子的5元或6元脂肪族环，或者Rc和Rd结合在一起形成6元或7元脂肪族环，任选含有氧原子；
Re独立地为氢或C1-3烷基；
R1为氢或C1-3烷基；
R2为氢、羟基或C1-3烷氧基；
R3和R4独立地为氢或C1-3烷基；
R5为氢、羟基、C1-3烷氧基或卤素；
R6为氢、C1-3烷基、C1-3烷氧基或卤素；
R7为氢或C1-3烷基；且
n为0、1、2、3、4或5。
3.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐或水合物，其中所述化合物具有通用结构式(Ib)：
Figure FPA00001347451700031
其中Ra为甲基、乙基、正丙基、环丙基、NH(CH3)或OCH3，或者Ra和R1与它们所连接的碳原子一起形成5元脂肪族碳环；
Rb为甲基、乙基、正丙基、环丙基、NH(CH3)或OCH3，或者Rb和R6与它们所连接的碳原子一起形成5元脂肪族碳环或含有一个氮原子的5元脂肪族环；
Rc为甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丁基或2-羟基乙基；
Rd为氢、甲基、乙基或环丁基，或者Rd和R7与它们所连接的原子一起形成含有一个氮原子的5元脂肪族环；或者Rc和Rd结合在一起形成吗啉代部分、四氢呋喃基部分、哌啶基部分、
Figure FPA00001347451700032
部分或
Figure FPA00001347451700033
部分；
R1为氢；
R2为氢、羟基或甲氧基；
R3和R4为氢；
R5为氢、羟基、甲氧基或氟；
R6为氢、甲基、甲氧基或氟；
R7为氢；且
n为1或2。
4.一种化合物或其药学上可接受的盐或水合物，所述化合物具有以下结构式：
Figure FPA00001347451700041
其中Rf选自氢、C1-6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基和C(＝O)Rh，或者Rf和Rg结合在一起形成任选含有氧原子的5元、6元或7元脂肪族环；
Rg选自氢、C1-6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基和C(＝O)Rh，或者Rg和R8与它们所连接的原子一起形成5元或6元脂肪族环；
Rh独立选自氢、C1-6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基，或者两个Rh基团与它们所连接的氮结合在一起形成5元或6元脂肪族环；
R8选自氢、C1-6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基；
R9、R10、R11、R12、R13和R14独立选自氢、C1-6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、卤素、ORh、C(＝O)Rh、C(＝O)ORh、OC(＝O)Rh、C(＝O)N(Rh)2、C(＝O)NRhSO2Rh、N(Rh)2、NReC(＝O)Rh、NRhC(＝O)N(Rh)2、CN、NO2、CF3、OCF3、SRh、SORh、SO2Rh、SO2N(Rh)2和OSO2CF3；
p为0、1、2、3、4或5，
前提条件是当p为2时，Rf和Rg中的一个不为乙基。
5.权利要求4的化合物或其药学上可接受的盐或水合物，其中所述化合物具有通用结构式(IIa)：
Figure FPA00001347451700051
其中Rf为C1-6烷基；
Rg为氢或C1-4烷基，或者Rg和R8与它们所连接的原子一起形成含有一个氮原子的5元或6元脂肪族环；
R9为氢或C1-3烷基；
R10为氢、羟基或C1-3烷氧基；
R11和R12独立地为氢或C1-3烷基；
R13为氢、羟基、C1-3烷氧基或卤素；
R14为氢、C1-3烷基或C1-3烷氧基；
R8为氢或C1-3烷基；且
p为0、1、2、3、4或5，
前提条件是当p为2时，Rf和Rg中的一个不为乙基。
6.权利要求4的化合物或其药学上可接受的盐或水合物，其中所述化合物具有结构式(IIb)：
Figure FPA00001347451700052
其中Rf为甲基或乙基；
Rg为氢或甲基，或者Rg和R8与它们所连接的原子一起形成含有一个氮原子的5元脂肪族环；
R8为氢；且
p为1或2。
7.权利要求1的化合物，其中Ra为甲基、乙基、NH(CH3)、OCH3，或与R1形成5元脂肪族环，Rb为甲基、乙基、NH(CH3)、OCH3，与R6形成5元脂肪族环，或与R6形成5元含氮脂肪族环，且Rd为氢、甲基、乙基，或与R7形成5元脂肪族环。
8.权利要求1的化合物，其中R1为氢或与Ra形成5元脂肪族环，R2为氢或羟基，R3为氢，R4为氢，R5为氢或羟基，R6为氢、与Rb形成5元脂肪族环、或与Rb形成5元含氮脂肪族环，R7为氢或与Rd形成5元环，且n为2或3。
9.权利要求4的化合物，其中Rf为甲基或乙基，Rg为氢、甲基、乙基，或与Rf和R8形成5元含氮脂肪族环，或者R8为氢；R9、R10、R11、R12、R13和R14为氢，p为2或3。
10.一种具有以下结构式的化合物：
Figure FPA00001347451700061
11.权利要求1或4的化合物，其对p53活化的EC50值小于约1.35μM。
12.一种化合物，其从本发明说明书中段落[0238]中公开的组中选出。
13.一种治疗癌症的方法，该方法包括将治疗有效量的权利要求1、4或10的化合物、或化合物100给予有需要的个体。
14.权利要求13的方法，其中所述癌症选自本发明说明书中段落[0270]、[0273]、[0274]和[0275]中公开的癌症。
15.权利要求13的方法，其中权利要求1、4或10的化合物、或化合物100与化疗药、放疗、影响微管的药物、细胞生长抑制药、TNF多肽及其混合物联合给予。
16.一种治疗炎性疾病的方法，该方法包括将治疗有效量的权利要求1、4或10的化合物、或化合物100给予有需要的个体。
17.权利要求16的方法，其中所述炎性疾病选自本发明说明书中段落[0277]中公开的疾病。
18.权利要求16的方法，其中权利要求1、4或10的化合物、或化合物100与免疫抑制药联合给予。
19.一种治疗微生物感染、原生动物感染或病毒感染的方法，该方法包括将治疗有效量的权利要求1、4或10的化合物、或化合物100给予有需要的个体。
20.权利要求19的方法，其中所述疾病是疟疾。
21.一种治疗疾病或病症的方法，所述疾病或病症选自本发明说明书中段落[0278]中公开的疾病和病症。
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103936654A (zh) * 2014-04-08 2014-07-23 南京林业大学 一类脱氢枞酸吲哚衍生物的用途
CN104302286A (zh) * 2012-03-27 2015-01-21 英丘伦有限责任公司 用于治疗乳腺癌的curaxin和用于鉴别可能响应的患者的方法
CN106572992A (zh) * 2014-04-06 2017-04-19 英丘伦有限责任公司 用curaxins进行组合治疗
CN106573918A (zh) * 2014-07-04 2017-04-19 默克专利股份有限公司 具有抗寄生虫活性的氮杂环庚烷基衍生物和包含它们的药物组合物
WO2017084231A1 (zh) * 2015-11-17 2017-05-26 江苏师范大学 系列含氟咔唑类化合物及其制备方法和应用
WO2019062872A1 (zh) * 2017-09-30 2019-04-04 成都中创蜀洋生物科技有限公司 氘代咔唑类化合物

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UA107652C2 (en) * 2008-10-06 2015-02-10 Incuron Llc Carbazole compounds and therapeutic uses of the compounds
JP5831068B2 (ja) * 2011-09-13 2015-12-09 コニカミノルタ株式会社 縮合複素環化合物の製造方法
MX347570B (es) * 2011-11-15 2017-05-02 Yissum Res Dev Co Of Hebrew Univ Jerusalem Ltd Compuestos triciclicos, composiciones que los comprenden y usos de los mismos.
MX2014011419A (es) 2012-04-25 2014-11-25 Hoffmann La Roche Clorhidrato de (3,4-dicloro-fenil)-((s)-3-propil-pirrolidin-3-il)- metanona y procesos de manufacturacion.
SG11201407402TA (en) 2012-05-11 2014-12-30 Reset Therapeutics Inc Carbazole-containing sulfonamides as cryptochrome modulators
EA036615B1 (ru) 2013-02-11 2020-11-30 Общество С Ограниченной Ответственностью "Инкурон" Применение комплекса, облегчающего транскрипцию хроматина (fact), при раке
PT3013833T (pt) * 2013-06-26 2019-03-20 Univ Do Porto Oxazoloisoindolinonas derivadas de triptofanol: ativadoras de molécula pequena da p53
WO2015020553A1 (en) * 2013-08-07 2015-02-12 Obschestvo S Ogranichennoy Otvetstvennost'yu "Panacela Labs" Carbazole compounds and methods of using same
WO2015020556A1 (ru) * 2013-08-08 2015-02-12 Общество С Ограниченной Ответственностью "Панацела Лабс" Соединения ксеномицина с противогрибковыми свойствами
WO2015050471A1 (en) * 2013-10-02 2015-04-09 Obschestvo S Ogranichennoy Otvetstvennost'yu "Panacela Labs" Carbazole compounds and methods of using same
WO2015050472A1 (en) * 2013-10-02 2015-04-09 Obschestvo S Ogranichennoy Otvetstvennost'yu "Panacela Labs" Fused indole compounds and methods of using same
EP3079689A4 (en) * 2013-12-10 2017-08-09 Incuron LLC Methods of modulating various biomarkers with curaxins
TWI690521B (zh) 2014-04-07 2020-04-11 美商同步製藥公司 作為隱花色素調節劑之含有咔唑之醯胺類、胺基甲酸酯類及脲類
CN109528712B (zh) * 2019-01-24 2020-11-17 江南大学 9-甲基-3,6-二乙酰基咔唑用于治疗或预防肿瘤疾病的用途
CN115066241A (zh) * 2019-09-15 2022-09-16 拉结尔治疗有限公司 用于治疗实体瘤的组合物
WO2023220558A1 (en) * 2022-05-09 2023-11-16 Institute For Cancer Research D/B/A The Research Institute Of Fox Chase Cancer Center Combination of curaxins and immune checkpoint inhibitors for treating cancer

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004035580A1 (en) * 2002-10-21 2004-04-29 Aprea Ab Reactivation of wild type p53 in human tumour cells by a low molecular weight compound
WO2008008155A2 (en) * 2006-06-20 2008-01-17 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Small molecule modulators of p53 family signaling

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2715680A1 (de) * 1977-04-07 1978-10-12 Henkel Kgaa Haarfaerbemittel
EP1462105A1 (en) * 2003-03-28 2004-09-29 Procorde GmbH Activation specific inhibitors of NF-kB and method of treating inflammatory processes in cardio-vascular diseases
US7169802B2 (en) * 2003-12-23 2007-01-30 Cephalon, Inc. Fused pyrrolocarbazoles
EP1771203A4 (en) * 2004-07-20 2010-06-02 Cleveland Clinic Foundation INHIBITION OF NF-KB
JP2009001495A (ja) * 2005-10-13 2009-01-08 Taisho Pharmaceutical Co Ltd ２−アリール−ベンゾイミダゾール−５−カルボキサミド誘導体
ES2390135T3 (es) * 2005-11-22 2012-11-06 Merck Sharp & Dohme Corp. Compuestos tricíclicos útiles como inhibidores de quinasas
RU2315594C1 (ru) * 2006-09-01 2008-01-27 Всеволод Иванович Киселев Антиэстрогенное и антипролиферативное средство для лечения и профилактики заболеваний женской репродуктивной системы
UA107652C2 (en) * 2008-10-06 2015-02-10 Incuron Llc Carbazole compounds and therapeutic uses of the compounds
US9169207B2 (en) * 2012-03-27 2015-10-27 Incuron, Llc Curaxins for use in treating carcinogen-induced cancer

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004035580A1 (en) * 2002-10-21 2004-04-29 Aprea Ab Reactivation of wild type p53 in human tumour cells by a low molecular weight compound
WO2008008155A2 (en) * 2006-06-20 2008-01-17 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Small molecule modulators of p53 family signaling

Cited By (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104302286A (zh) * 2012-03-27 2015-01-21 英丘伦有限责任公司 用于治疗乳腺癌的curaxin和用于鉴别可能响应的患者的方法
CN106572992A (zh) * 2014-04-06 2017-04-19 英丘伦有限责任公司 用curaxins进行组合治疗
CN103936654A (zh) * 2014-04-08 2014-07-23 南京林业大学 一类脱氢枞酸吲哚衍生物的用途
CN103936654B (zh) * 2014-04-08 2016-05-18 南京林业大学 一类脱氢枞酸吲哚衍生物的用途
CN106573918A (zh) * 2014-07-04 2017-04-19 默克专利股份有限公司 具有抗寄生虫活性的氮杂环庚烷基衍生物和包含它们的药物组合物
CN106573918B (zh) * 2014-07-04 2020-06-16 默克专利股份有限公司 具有抗寄生虫活性的氮杂环庚烷基衍生物和包含它们的药物组合物
CN111533734A (zh) * 2014-07-04 2020-08-14 默克专利股份有限公司 具有抗寄生虫活性的氮杂环庚烷基衍生物和包含它们的药物组合物
WO2017084231A1 (zh) * 2015-11-17 2017-05-26 江苏师范大学 系列含氟咔唑类化合物及其制备方法和应用
WO2019062872A1 (zh) * 2017-09-30 2019-04-04 成都中创蜀洋生物科技有限公司 氘代咔唑类化合物
CN109593057A (zh) * 2017-09-30 2019-04-09 成都中创蜀洋生物科技有限公司 氘代咔唑类化合物
CN109593057B (zh) * 2017-09-30 2022-03-04 成都中创蜀洋生物科技有限公司 氘代咔唑类化合物

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