MX2011003516A - Un dispositivo para la administracion de analgesicos liquidos. - Google Patents

Abstract

En el campo del alivio y tratamiento del dolor es necesario un dispositivo que sea capaz de administrar varias dosis predeterminadas de un analgésico opioide de manera que se puede hacer de forma simple y con seguridad por un paciente o cuidador, en particular, de una manera que reduzca al mínimo el riesgo de administrar una dosis demasiado grande en un momento dado. Un dispositivo (10), para la administración de un número predefinido (N) de dosis por unidad de volumen predefinidas (Vu) de un analgésico opioide en forma líquida, que incluye un recipiente cerrado (12), que contiene un volumen de llenado predeterminado (Vf) del analgésico opioide, y un dispensador (14) que está conectado al recipiente (12). El dispensador (14) es operable para administrar una dosis individual de una unidad de volumen (Vu) repetidamente el número de veces predefinido (N). Tanto el depósito (14) esta adaptado, y la concentración del analgésico opioide es seleccionada de manera que la dosis por unidad de volumen está en el rango de 0.05 a 0.15 ml.

Description

COMPUESTOS DE CARBAZOL Y USOS TERAPÉUTICOS DE LOS COMPUESTOS CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se relaciona con compuestos de carbazol, con métodos para preparar los compuestos, con las composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos, y con su uso como agentes terapéuticos. En particular, la invención se relaciona con compuestos de carbazol y su uso en una variedad de áreas terapéuticas, entre las que se incluyen el tratamiento de cánceres.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La frecuencia de cáncer en seres humanos ha aumentado en el mundo desarrollado a medida que la población ha envejecido. Para algunos tipos de cánceres y la etapa de enfermedad en el diagnóstico, las tasas de morbilidad y mortalidad no han mejorado significativamente en años recientes a pesar de una investigación extensiva. La inducción de muerte celular es una de las estrategias para tratamiento de cáncer más atractivas. Existe una necesidad significativa de identificar agentes que sean capaces de inducir la muerte celular en células tumorales y/o que potencien las terapias quimioterapéuticas y de radiación.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN La presente invención, se dirige a compuestos y composiciones que inducen muerte celular, y a los usos terapéuticos de los compuestos en el tratamiento de un cáncer y otras condiciones en individuos que necesitan de este tratamiento. La presente invención, también se dirige a los métodos para preparar los compuestos terapéuticos.

Más particularmente, la presente invención, se dirige a compuestos y métodos para el tratamiento de enfermedades y condiciones tales como cánceres, enfermedades inflamatorias, infecciones microbianas, infecciones virales, e infecciones por protozoarios . Los compuestos son útiles en un método que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula estructural (I) a un individual que necesita del mismo.

En particular, la presente invención se dirige a compuestos de carbazol que tienen una fórmula estructural (I) : en donde Ra se selecciona del grupo que consiste de, hidrógeno, Ci_6 alquilo, Ci-6 haloalquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, 0Re, N(Re)2, y SRe; alternativamente, ya sea Ra y R1 o NRe y R1 junto con los átomos de carbono a los cuales están unidos forman un anillo alifático carbociclico o heterociclico de cinco o seis miembros; Rb se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno Ci-6 alquilo, Ci-6 haloalquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, ORe, N(Re)2, y SRe, alternativamente, ya' sea Rb y R6 o NRe y R6 junto con los átomos de carbono a los cuales están unidos forman un anillo alifático carbociclico de cinco o seis miembros o un anillo alifático carbociclico o heterociclico de cinco o seis miembros; Rc se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno Ci-6 alquilo, Ci-6 hidroxialquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, y C(=0)Re, o Rc y Rd se toman juntos para formar un anillo alifático de cinco, seis, o siete miembros, que contenga opcionalmente un átomo de oxigeno; Rd se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, Ci_6 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, y C(=0)Re, o Rd y R7 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo alifático de cinco o seis miembros; Re independientemente, se selecciona del grupo que consiste de, hidrógeno, Ci-6 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, y heteroarilo, o dos grupos Re tomados juntos con un átomo de nitrógeno al cual están unidos para formar un anillo alifático de cinco o seis miembros; R1, R2, R3, R , R5, y R6, independientemente, se seleccionan del grupo que consiste de, hidrógeno, Ci-6 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, halo, 0Re, C(=0)Re, C(=0)ORe, OC(=0)Re, C(=0)N(Re)2, C (=0) NReS02Re, N(Re)2, NReC(=0)Re, NReC (=0) N (Re) 2, CN, N02, CF3, 0CF3, SRe, S0Re, S02R6, S02N(Re)2, y OS02CF3; R7 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno Ci-6 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, y heteroarilo; y n es 0, 1, 2, 3, 4, o 5, o una sal farmacéuticamente aceptable o hidrato de la misma.

La presente invención, también se dirige a compuestos de carbazol que tienen una fórmula estructural (ID : en donde Rf se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, Ci- 6 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, y C(=0)Rh, o Rf y R9 se toman juntos para formar un anillo alifático de cinco, seis, o siete miembros que contenga opcionalmente un átomo de oxigeno; Rg se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, Ci_6 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, y C(=0)Rh, o R9 y R8 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo alifático de cinco o seis miembros; Rh independientemente, se selecciona del grupo que consiste de, hidrógeno, Ci- 6 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, y heteroarilo, o dos grupos Rh tomados junto con un átomo de nitrógeno al cual están unidos forman un anillo alifático de cinco o seis miembros; R8 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, Ci_6 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, y heteroarilo; R9, R10, Ru, R12, R1 , y R14, independientemente, se seleccionan del grupo que consiste de, hidrógeno, Ci-6 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, halo, 0Rh, C(=0)Rh, C(=0)ORh, OC(=0)Rh, C(=0)N(Rh)2, C (=0)NRhS02Rh, N(Rh)2, NReC(=0)Rh, NRhC (=0) N (Rh) 2, CN, N02, CF3, 0CF3, SRh, S0Rh, S02Rh, S02N(Rh)2, y OS02CF3; p es O, 1, 2, 3, 4, o 5, con la condición de que cuando p sea 2, uno de Rf y Rg sea diferente de etilo, o una sal farmacéuticamente aceptable o hidrato de la misma.

Una enfermedad o condición que se puede tratar de acuerdo con la presente invención incluye, por ejemplo, un cáncer, inflamación, enfermedad autoinmune, infección microbiana, infección por protozoarios, infección viral, enfermedad de injerto contra hospedero, una condición asociada con la infección por VIH, o células pre-cancerosas . Las formas de cáncer que se pueden tratar incluyen, de manera enunciativa, carcinoma de células renales, sarcoma, cáncer prostético, cáncer de mama, cáncer pancreático, mieloma, leucemia mieloide y linfoblástica, neuroblastoma, glioblastoma, o un cáncer provocado por infección por HTLV.

En algunas modalidades, el compuesto tiene una fórmula estructural general (la) : donde Ra es Ci_3 alquilo, Ci-4 haloalquilo, C3_5 cicloalquilo, N(Re)2, o ORe, o Ra y R1 junto con los átomos de carbono a los cuales están unidos forman un anillo alifático carbociclico de cinco o seis miembros; Rb es Ci_4 alquilo, Ci_4 haloalquilo, C3_5 cicloalquilo, N(Re)2, o 0Re, o Rb y R6 junto con los átomos de carbono a los cuales están unidos forman un anillo alifático carbociclico de cinco o seis miembros o un anillo alifático de cinco o seis miembros que contiene un átomo de nitrógeno; Rc es Ci-6 alquilo, C3-5 cicloalquilo, o Ci_3 hidroxialquilo; Rd es hidrógeno, C1-4 alquilo, o C3_5 cicloalquilo, o Rd y R7 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo alifático de cinco o seis miembros que contiene un átomo de nitrógeno, o Rc y Rd se toman juntos para formar un anillo alifático de seis o siete miembros, que contenga opcionalmente un átomo de oxígeno; Re, independientemente, es hidrógeno o C1-3 alquilo; R1 es hidrógeno o C1-3 alquilo; R2 es hidrógeno, hidroxi, o C1-3 alcoxilo; R3 y R4, independientemente, es hidrógenos o C1-3 alquilo; R5 es hidrógeno, hidroxi, C1-3 alcoxi, o halo; R6 es hidrógeno, C1-3 alquilo, C1-3 alcoxi, o halo; R7 es hidrógeno o C1-3 alquilo; y n es 0, 1, 2, 3, 4, o 5, o una sal farmacéuticamente aceptable o hidrato de la misma.

En otras modalidades, el compuesto tiene una fórmula estructural general (Ib) : en donde Ra es metilo, etilo, n-propilo, ciclopropilo, NH(CH3), o 0CH3, o Ra y R1 junto con los átomos de carbono a , los cuales están unidos forman un anillo alifático carboxiclico de cinco miembros; Rb es metilo, etilo, n-propilo, ciclopropilo , NH(CH3), o OCH3, o R y R6 junto con los átomos de carbono a los cuales están unidos forman un anillo alifático carbociclico de cinco miembros o un anillo alifático de cinco miembros que contiene un átomo de nitrógeno; Rc es metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, ciclobutilo, o 2-hidroxietilo; Rd es hidrógeno, metilo, etilo, o ciclobutilo, o Rd y R7 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo alifático de cinco miembros que contiene un átomo de nitrógeno; o Rc y Rd son toman juntos para formar una porción de morfolino; una porción de tetrahidrofurilo; una porción de piperidinilo; una porción R1 es hidrógeno; R2 es hidrógeno, hidroxi, o metoxi; R3 y R4 son hidrógeno; R5 es hidrógeno, hidroxi, metoxi, o flúor; R6 es hidrógeno, metilo, metoxi o flúor; R7 es hidrógeno; y n es 1 ó 2, o una sal farmacéuticamente aceptable o hidrato la misma.

En otras modalidades, el compuesto tiene fórmula estructural general (lia) : (Ha), en donde Rf es Ci_6 alquilo; Rg es hidrógeno o Ci-4 alquilo, o Rg y R8 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo alifático de cinco o seis miembros que contiene un átomo de nitrógeno; R9 es hidrógeno o C1-3 alquilo; R10 es hidrógeno, hidroxi, o C1-3 alcoxilo; R11 y R12, independientemente, son hidrógeno o C1-3 alquilo; R13 es hidrógeno, hidroxi, Ci-3alcoxi, o halo; R14 es hidrógeno, C1-3 alquilo, o C1-3 alcoxi; R8 es hidrógeno o C1-3 alquilo; y p es 0, 1, 2, 3, 4, ó 5, con la condición de que cuando p sea 2, uno de Rf y R8 sea diferente de etilo, o una sal farmacéuticamente aceptable o hidrato de la misma.

Todavía en otras modalidades, el compuesto tiene una fórmula estructural (Ilb): (Ilb), en donde Rf es metilo o etilo; R9 es hidrógeno o metilo o Rg y R8 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo alifático de cinco miembros que contiene un átomo de nitrógeno; R8 es hidrógeno; y p es 1 ó 2, o una sal farmacéuticamente aceptable o hidrato de la misma.

Un aspecto de la presente invención, es proporcionar un método para tratar una condición o enfermedad al administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más compuesto de las fórmulas estructurales (I), (la), (Ib), de (II), (lia), o (Ilb), o una composición que comprenda uno o más de un compuesto de las fórmulas estructurales (I), (la), (Ib), (II), (Ha), o (Ilb), a un individual que necesita de los mismos. La composición puede comprende además un activador del receptor mortal de un polipéptido de la familia TNF. El activador puede ser un polipéptido TNF, tal como uno o más de NGF, CD40L, CD137L/4-1BBL, TNF-ot, CD134L/OX40L, CD27L/CD70, FasL/CD95, CD30L, TNF-ß/LT-a, LT-ß, y TRAIL.

Otro aspecto de la presente invención es proporcionar las composiciones farmacéuticas que comprendan un o más compuestos de las fórmulas estructurales (I) o (II), y el uso de las composiciones en un tratamiento terapéutico de una enfermedad o condición.

Todavía otro aspecto de la presente invención, es proporcionar un método para el tratamiento de un individuo que está experimentando un tratamiento quimioterapéutico o radioterapéutico para una condición médica que comprende la administración de un compuesto de las fórmulas estructurales (I) y/o (II) en combinación con un agente quimioterapéutico, un agente radioterapéutico, o ambos, al individual. Una indicación no limitante tratada por este método es un cáncer.

Los aspectos anteriores y adicionales de la presente invención se harán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada no limitante de las modalidades preferidas de la presente invención.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La figura la, es una gráfica de las veces para la actividad de NF-?? con relación al DMSO control contra la concentración para los carbazoles de la presente invención; La figura Ib, es una gráfica de ECso(u ) para la activación p53 y la inhibición NF-?? para los carbazoles de la presente invención; Las figuras 2a, 2b, 2c, 2d, 2e, 2f, 2g, 2h, 2i, 2j, 2k, son gráficas de % de viabilidad celular contra la concentración (µ ) para diversas células tumorales tratadas con los carbazoles de la presente invención; La figura 3, contiene una gráfica del volumen de tumores contra los días de tratamiento en un modelo de xenoinjerto HCT 116 sc utilizando el compuesto del ejemplo 7; La figura 4, es un esquema que muestra el análisis tridimensional de los compuestos de carbazol activo; La figura 5, es un esquema que el análisis tridimensional de los compuestos de carbazol inactivo; La figura 6, es un esquema que muestra la estructura tridimensional de un compuesto de carbazol activo, es decir, el ejemplo 2; La figura 7, es un esquema que muestra la estructura tridimensional de un compuesto de carbazol inactivo, es decir, el compuesto 200; La figura 8, contiene las gráficas del volumen de tumores (mm3) contra los días de tratamiento para crecimiento de tumores individuales en ratones tratados con un vehículo control (figura 8a) y en ratones tratados con el compuesto del ejemplo 7 (figura 8b); La figura 9, contiene gráficas del volumen de tumores (mm) contra los días de tratamiento con un vehículo control y con el compuesto del ejemplo 7; La figura 10, contiene gráficas del peso relativo de ratones individuales contra los días después de la inoculación celular en ratones tratados con el vehículo control (figura 10a) y ratones tratados con el compuesto del ejemplo 7 (figura 10b); y La figura 11, contiene gráficas de la concentración del compuesto 100 (µ?) contra la supervivencia de células relativas para trece líneas celulares de cáncer que muestran que un compuesto de carbazol de la presente es un agente efectivo contra muchos tipos de cáncer; La figura 12, contiene gráficas de barras que muestran la actividad antiparasitaria de diversos compuestos de carbazol contra Plasmodium falciparum (cepa DIO); y La figura 13, contiene gráficas que muestran la actividad antibacteriana de diversos compuestos de carbazol contra bacterias gram negativas (figura 13a) y gram positivas ( figura 13b) .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Con respecto a los compuestos, composiciones, y métodos expuestos en la presente, la terminología utilizada es con el fin de describir las modalidades particulares y no pretenden ser limitantes, En el sentido en el que se utilizan en la especificación y las reivindicaciones anexas. Las formas singulares "uno", "una" y "el" incluyen referencias a plural a menos que el contexto dicte claramente otra cosa.

La presente invención, se dirige a compuestos que tienen una fórmula estructural general (I) y (II) . Los compuestos de carbazol expuestos en la presente son útiles en el tratamiento de enfermedades y condiciones, tales como cánceres, enfermedad inflamatoria, infecciones microbianas, infecciones virales, infecciones por protozoarios , o una enfermedad autoinmune. en donde Ra se selecciona del grupo que consiste de, hidrógeno, Ci-6 alquilo, del Ci_6 haloalquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, ORe, N(Re)2, y SRe; alternativamente, ya sea Ra y R1 o NRe y R1 junto con los átomos de carbono a los cuales están unidos forman un anillo alifático carbociclico o heterociclico de cinco o seis miembros; Rb se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno Ci-ß alquilo, Ci-6 haloalquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, ORe, N(Re)2, y SRe, alternativamente, ya sea Rb y R6 o NRe y R6 junto con los átomos de carbono a los cuales están unidos forman un anillo alifático carbociclico de cinco o seis miembros o un anillo alifático carbociclico o heterociclico de cinco o seis miembros ; Rc se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno Ci- alquilo, Ci-6 hidroxialquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, y C(=0)Re, o Rc y Rd se toman juntos para formar un anillo alifático de cinco, seis, o siete miembros, que contenga opcionalmente un átomo de oxigeno; Rd se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, Ci-e alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, y C(=0)Re, o Rd y R7 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo alifático de cinco o seis miembros; Re independientemente, se selecciona del grupo que consiste de, hidrógeno, Ci-6 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, y heteroarilo, o dos grupos Re tomados juntos con un átomo de nitrógeno al cual están unidos para formar un anillo alifático de cinco o seis miembros; R1, R2, R3, R4, R5, y R6, independientemente, se seleccionan del grupo que consiste de, hidrógeno, Ci_ 6 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, halo, 0Re, C(=0)R% C(=0)ORe, OC(=0)Re, C(=0)N(Re)2, C (=0)NReS02Re, N(Re)2, NReC(=0)Re, NReC (=0) N (Re) 2, CN, N02, CF3, 0CF3, SRe, S0Re, S02R6, S02N(Re)2, y OS02CF3; R7 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno Ci-6 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, y heteroarilo; y n es 0, 1, 2, 3, 4, o 5, o una sal farmacéuticamente aceptable o hidrato la misma.

En modalidades preferidas, los compuestos tienen fórmula estructural general (la) : donde Ra es Ci_3 alquilo, Ci_4 haloalquilo, C3-5 cicloalquilo, N(Re)2, o 0Re, o Ra y R1 junto con los átomos de carbono a los cuales están unidos forman un anillo alifático carbociclico de cinco o seis miembros; Rb es C1-4 alquilo, C1- haloalquilo, C3-5 cicloalquilo, N(Re)2, o 0Re, o Rb y R6 junto con los átomos de carbono a los cuales están unidos forman un anillo alifático carbociclico de cinco o seis miembros o un anillo alifático de cinco o seis miembros que contiene un átomo de nitrógeno; Rc es C1-6 alquilo, C3_5 cicloalquilo, o C3.-3 hidroxialquilo; Rd es hidrógeno, C1-4 alquilo, o C3-5 cicloalquilo, o Rd y R7 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo alifático de cinco o seis miembros que contiene un átomo de nitrógeno, o Rc y Rd se toman juntos para formar un anillo alifático de seis o siete miembros, que contenga opcionalmente un átomo de oxigeno; Re, independientemente, es hidrógeno o C1-3 alquilo; R1 es hidrógeno o C1-3 alquilo; R2 es hidrógeno, hidroxi, o C1-3 alcoxilo; R3 y R4, independientemente, es hidrógeno o C1-3 alquilo; R5 es hidrógeno, hidroxi, C1-3 alcoxi, o halo; R6 es hidrógeno, C1-3 alquilo, C1-3 alcoxi, o halo; R7 es hidrógeno o Ci_3 alquilo; y n es O, 1, 2, 3, 4, o 5, o una sal farmacéuticamente aceptable o hidrato de la misma.

En modalidades adicionales preferidas, el compuesto tiene una fórmula estructural general (Ib): O R1 R6 O en donde es metilo, etilo, n-propilo, ciclopropilo, NH(CH3), o 0CH3, o Ra y R1 junto con los átomos de carbono a los cuales están unidos forman un anillo alifático carboxiclico de cinco miembros; es metilo, etilo, n-propilo , ciclopropilo , NH(CH3), o 0CH3, o Rb y R6 junto con los átomos de carbono a los cuales están unidos forman un anillo alifático carbociclico de cinco miembros o un anillo alifático de cinco miembros que contiene un átomo de nitrógeno; Rc es metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, ciclobutilo, o 2-hidroxietilo; Rd es hidrógeno, metilo, etilo, o ciclobutilo, o Rd y R7 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo alifático de cinco miembros que contiene un átomo de nitrógeno; o Rc y Rd son toman juntos para formar una porción de morfolino; una porción de tetrahidrofurilo; una porción de piperidinilo; o una porción R1 es hidrógeno; hidrógeno, hidroxi, o metoxi; R3 y R4 son hidrógeno; R5 es hidrógeno, hidroxi, metoxi, o flúor; R6 es hidrógeno, metilo, metoxi o flúor; R7 es hidrógeno; y n es 1 ó 2, o una sal farmacéuticamente aceptable o hidrato de la misma En una modalidad adicional, la presente invención, también se dirige a compuestos de carbazol que tienen una fórmula estructural (II) : en donde Rf se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, Ci-6 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, y C(=0)Rh, o Rf y Rg se toman juntos para formar un anillo alifático de cinco, seis, o siete miembros que contenga opcionalmente un átomo de oxigeno; Rg se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, Ci-6 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, y C(=0)Rh, o Rg y R8 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo alifático de cinco, seis o siete miembros; Rh independientemente, se selecciona del grupo que consiste de, hidrógeno, Ci-6 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, y heteroarilo, o dos grupos Rh tomados junto con un átomo de nitrógeno al cual están unidos forman un anillo alifático de cinco o seis miembros; R9, R10, Ru, R12, R1 , y R14, independientemente, se seleccionan del grupo que consiste de, hidrógeno, Ci-6 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, halo, 0Rh, C(=0)Rh, C(=0)ORh, OC(=0)Rh, C(=0)N(Rh)2, C (=0)NRhS02Rh, N(Rh)2, NReC(=0)Rh, NRhC (=0) N (Rh) 2, CN, N02, CF3, OCF3, SRh, S02Rh, S02N(Rh)2, y OS02CF3; R8 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, d_6 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, y heteroarilo; y p es 0, 1, 2, 3, 4, o 5, con la condición de que cuando p sea 2, uno de Rf y Rg sea diferente de etilo, o una sal farmacéuticamente aceptable o hidrato de la misma.

En otras modalidades, el compuesto tiene una fórmula estructural general (lia) : (Ila), en donde Rf es Ci_6 alquilo; Rg es hidrógeno o Ci-4 alquilo, o Rg y R8 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo alifático de cinco o seis miembros que contiene un átomo de nitrógeno; R9 es hidrógeno o C1-3 alquilo; R10 es hidrógeno, hidroxi, o C1-3 alcoxilo; R11 y R12, independientemente, son hidrógeno o C1-3 alquilo; R13 es hidrógeno, hidroxi, Ci_3alcoxi, o halo; R14 es hidrógeno, C1-3 alquilo, o C1-3 alcoxi; R8 es hidrógeno o C1-3 alquilo; y p es 0, 1, 2, 3, 4, ó 5, con la condición de que cuando p sea 2, uno de Rf y R8 sea diferente de etilo, o una sal farmacéuticamente aceptable o hidrato de la misma.

Todavía en modalidades adicionales, el compuesto tiene una fórmula estructural (Ilb): (Ilb), en donde Rf es metilo o etilo; Rg es hidrógeno o metilo o R9 y R8 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo alifático de cinco miembros que contiene un átomo de nitrógeno; R8 es hidrógeno; y p es 1 ó 2, o una sal farmacéuticamente aceptable o hidrato de la misma.

En el sentido en el que se utiliza en la presente, el término "alquilo", significa grupos hidrocarburo rectos, encadenados y ramificados que contienen el número indicado de átomos de carbono, típicamente metilo, etilo, y grupos propilo y butilo de cadena recta y ramificados. El término "cicloalquilo", se define como un grupo hidrocarburo cíclico que contiene el número indicado de átomos de carbono, por ejemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclohexilo, y ciclopentilo .

El término "heterocicloalquilo", significa grupos cicloalquilo monociclicos , biciclicos, y triciclicos que contienen uno o más heteroátomos seleccionados del grupo que consiste de oxigeno, nitrógeno y azufre, en la estructura de anillo. Un grupo "heterocicloalquilo", también puede contener un grupo oxo (=0) unido al anillo. Los ejemplos no limitantes de grupos heterocicloalquilo incluyen, de manera enunciativa, 1 , 3-dioxolano, 2-pirazolina, pirazolidina, pirrolidina, piperazina, una pirrolina, 2H-pirano, 4H-pirano, morfolina, tiofolina, piperidina, 1,4-ditiano, y 1,4-dioxano.

El término "halo" o "halógeno", significa flúor, bromo, cloro, y yodo.

El término "haloalquilo" , significa un grupo alquilo sustituido con uno o más, por ejemplo, 1 a 3, sustituyentes halo, ya sea flúor, cloro, bromo, yodo, o combinaciones de los mismos. De manera similar, el "halocicloalquilo", se define como un grupo cicloalquilo que tiene uno o más sustituyentes halo.

El término "arilo, " solo o en combinación, significa un grupo aromático monociclico o policiclico, de preferencia un grupo aromático monociclico o biciclico, por ejemplo, fenilo o naftilo. A menos que se indique de otra manera, un grupo "arilo", puede estar sin sustituir o sustituido, por ejemplo, con uno o más, y en particular uno a tres de, halo, alquilo, hidroxialquilo, alcoxilo, alcoxialquilo, haloalquilo, nitro, amino, alquilamino, acilamino, alquiltio, alquilsulfinilo, y alquilsulfonilo . Los ejemplos de grupos arilo, incluyen fenilo, naftilo, tetrahidronaftilo, 2-clorofenilo, 3-clorofenilo, 4-clorofenilo, 2-metilfenilo, 4-metoxifenilo, 3-trifluorometilfenilo, 4-nitrofenilo, y lo semejante.

El término "heteroarilo", significa un sistema de anillo monociclico o biciclico que contiene uno o más anillos aromáticos y que contiene al menos un átomo de nitrógeno, oxigeno, o azufre en un anillo aromático, y que puede estar sin sustituir o sustituido, por ejemplo, con uno o más, y en particular uno a tres, sustituyentes , similares a halo, alquilo, hídroxi, hidroxialquilo, alcoxilo, alcoxialquilo, haloalquilo, nitro, amino, alquilamino, acilamino, alquiltio, alquilsulfinilo, y alquilsulfonilo . Los ejemplos de grupos heteroarilo incluyen, de manera enunciativa, tienilo, furilo, piridilo, oxazolilo, quinolilo, isoquinolilo, indolilo, triazolilo, isotiazolilo, isoxazolilo, imidizolilo, benzotiazolilo, pirazinilo, pirimidinilo, tiazonilo, y tiadiazolilo .

El término "alquileno", significa un grupo alquilo que tiene un sustituyente . Por ejemplo, el término "Ci_3 alquilenarilo", se refiere a un grupo alquilo que contiene uno a tres átomos de carbono y sustituido con grupo arilo. El término "hidroxi", significa -OH.

El término "alcoxi", significa -0R, en donde R es alquilo .

El término "amino", significa -NH2, y el término "alquilamino" , significa -NR2, en donde al menos un R es alquilo y el segundo R es alquilo o hidrógeno.

El término "acilamino", significa R(=0)N-, en donde R es alquilo o arilo.

El término "alquiltio", significa -SR, en donde R es alquilo.

El término "nitro", significa -N02.

El término "trifluorometilo" , significa -CF3.

El término "trifluorometoxi", significa -OCF3.

El término "ciano", significa -CN.

El término "alcoxialquilo", significa un grupo alquilo, en donde se ha reemplazado un átomo de hidrógeno por un grupo alcoxi.

El término "hidroxialquilo", significa un grupo alquilo en donde se ha reemplazado un átomo de hidrógeno por un grupo hidroxi.

El término "alquilsulfinilo" , significa R-S02-, en donde R es alquilo.

El término "alquilsulfonilo" , significa R-S03-, en donde R es alquilo.

El término "porción de morfolino", significa El término "porción de tetrahidrofurilo" , gnifica término "porción de piperidinilo" , significa , sustituido opcionalmente con un grupo -OH o un grupo CH2OH.

Los términos "cantidad efectiva" y "cantidad terapéuticamente efectiva", cuando se utilizan con referencia a un compuesto o composición, significan una cantidad suficiente del compuesto o composición para proporcionar el resultado deseado. La cantidad exacta deseada o requerida variará dependiendo del compuesto o composición particulares utilizados, su forma de administración, y lo semejante. De esta forma, no siempre es posible especificar una "cantidad efectiva" exacta o "cantidad terapéuticamente efectiva". Sin embargo, se puede determinar una cantidad efectiva adecuada por alguien con experiencia normal en la técnica informado por la presente exposición utilizando únicamente experimentación rutinaria.

El término "adecuado", significa una entidad, por ejemplo una porción, sustituyente, o compuesto, que sea compatible con los compuestos o composiciones según se proporcionan en la presente para el fin establecido. La conveniencia para el fin establecido se podría determinar por alguien con experiencia normal en la técnica utilizando únicamente experimentación rutinaria.

El término "administrar", cuando se utiliza para describir la dosificación de un compuesto o composición, significa una sola dosis o múltiples dosis del compuesto o composición .

" In vivo", significa dentro de un sujeto viviente, como dentro de un animal o ser humano. En este contexto, los agentes se pueden utilizar terapéuticamente en un sujeto para tratar una condición o enfermedad, o un síntoma de la misma. Los agentes también se pueden utilizar como un profiláctico para evitar la presencia o recurrencia de una condición de enfermedad o los síntomas asociados con la misma. "£x vivo", significa fuera de un sujeto viviente. Los ejemplos de poblaciones celulares ex vivo incluyen cultivos celulares in vitro y muestras biológicas tales como muestras de fluido o tejido provenientes de seres humanos o animales. Estas muestras se pueden obtener mediante métodos bien conocidos en la técnica. Las muestras de fluido biológico ilustrativas incluyen, sangre, fluido cerebroespinal, orina, saliva. Las muestras de tejido ilustrativas incluyen tumores y biopsias de los mismos. En este contexto, los compuestos de la presente pueden estar en muchas aplicaciones, tanto terapéuticas como experimentales.

El término "radio-sensibilizador", significa un compuesto administrado a un ser humano u otro animal en una cantidad terapéuticamente efectiva para aumentar la sensibilidad de las células a radiación electromagnética y/o para estimular el tratamiento de las enfermedades tratables con radiación electromagnética.

Los términos "radiación electromagnética" y "radiación", significan, de manera enunciativa, radiación que tiene una longitud de onda de 10"20 a 100 metros.

El término "muerte celular", significa un proceso en donde se detiene el funcionamiento, proliferación, y metabolismo celular.

El término "tratamiento del cáncer", significa cualquier tratamiento para el cáncer conocido en la técnica incluyendo, de manera enunciativa, quimioterapia y terapia de radiación .

El término "combinación con", cuando se utiliza para la administración descrita de un compuesto de carbazol de la presente y cualquier tratamiento adicional, significa que el compuesto de carbazol se puede administrar, antes de, simultáneamente con, o después del tratamiento adicional, o una combinación de los mismos.

En el sentido en el que se utiliza en la presente, los términos "tratar", "tratando", "tratamiento", y lo semejante se refieren a eliminar, reducir, o aliviar una enfermedad o condición y/o los síntomas asociada con la misma. Aunque no se descarta, el tratamiento de una enfermedad o condición no requiere que la enfermedad, condición, o los síntomas asociados con la misma se eliminan completamente. En el sentido en el que se utiliza en la presente, los términos "tratar", "tratando", "tratamiento" y lo semejante pueden incluir "tratamiento profiláctico" que se refiere a reducir la probabilidad de desarrollar una enfermedad o condición, o de una recurrencia de una enfermedad o condición controlada anteriormente, en un sujeto que no la tiene, pero que está en riesgo o es susceptibles de, volver a desarrollar una enfermedad o condición o una recurrencia de la enfermedad o condición. El término "tratar" y los sinónimos contemplan administrar un compuesto de la invención a un individuo que necesita de este tratamiento .

Dentro del significado de la invención, "tratamiento", también incluye profilaxis para recaídas o profilaxis en fase, asi como también el tratamiento de las señales agudas o crónicas, síntomas y/o disfunciones. El tratamiento se puede orientar sintomáticamente, por ejemplo, para suprimir los síntomas. Se puede llevar a cabo durante un período corto, se puede orientar a través de un término medio, o puede ser un tratamiento a largo plazo, por ejemplo, dentro del contexto de una terapia de mantenimiento.

El término "mamífero", incluye seres humanos, animales de compañía (por ejemplo, perros, gatos, y caballos), animales zoológico (por ejemplo, cebras, elefantes, y felinos mayores), animales para fuente de alimentación (por ejemplo, vacas, cerdos, cabras, y ovejas), y animales para investigación (por ejemplo, ratas, ratones, cabras y cobayos).

La presente invención, se dirige, en parte, al descubrimiento de que las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de carbazol de las fórmulas estructurales generales (I) y (II) se pueden utilizar para modular la actividad NF-??, tal como las respuestas inmunitarias suministradas por NF-?? y las condiciones descritas en la solicitud de patente internacional PCT/US05/2588 , que designa a los Estados Unidos, los contenidos de la misma se incorporan en la presente como referencia .

En modalidades preferidas de un compuesto de carbazol de la fórmula estructural (I), Ra es metilo, etilo, NH(CH3), OCH3, o forma un anillo alifático de cinco miembros con R1. En otras modalidades preferidas, Rb es metilo, etilo, NH(CH3), OCH3, o forma un anillo alifático de cinco miembros con R6, o forma un anillo alifático que contiene nitrógeno, de cinco miembros con R6. En otra modalidad preferida, Rd es hidrógeno, metilo, etilo, o forma un anillo alifático de cinco miembros con R7.

En modalidades preferidas, R1 es hidrógeno o forma un anillo alifático de cinco miembros con Ra. En otras modalidades preferidas, R2 es hidrógeno o hidroxi . Todavía en otras modalidades preferidas, R3 es hidrógeno. En modalidades preferidas adicionales, R4 es hidrógeno. Todavía en modalidades adicionales preferidas, R5 es hidrógeno o hidroxi. En algunas modalidades preferidas, R6 es hidrógeno, forma un anillo alifático de cinco miembros con Rb, o forma un anillo alifático que contiene nitrógeno, de cinco miembros, con Rb. En modalidades preferidas, R7 es hidrógeno o forma un anillo de cinco miembros con Rd. Todavía en modalidades preferidas adicionales, n es 2 ó 3.

En modalidades preferidas de un compuesto de carbazol de la fórmula estructural (II) , Rf es metilo o etilo, Rg es hidrógeno, metilo, etilo, o forma un anillo alifático que contiene nitrógeno, de cinco miembros, con Rf y R8, o R8 es hidrógeno, R9, R10, R11, R12, R13, y R14 son hidrógeno. Todavía en modalidades adicionales, p es 2 ó 3.

Los compuestos de carbazol adicionales útiles en el tratamiento de una variedad de condiciones y enfermedades son : Ejemplo 26 Compuesto 17b La presente invención, incluye todos los estereoisómeros e isómeros geométricos posibles de los compuestos de la fórmulas estructurales (I) y (II) . La presente invención, incluye tanto compuestos racémicos como isómeros ópticamente activos. Cuando un compuesto de la fórmula estructural (I) o (II) se desea como un enantiómero individual, éste se puede obtener ya sea mediante la resolución del producto final o mediante síntesis estereoespecíficas a partir de ya sea un material de partida isoméricamente puro o el uso de un reactivo auxiliar quiral, por ejemplo, véase, Z. Ma et al., Tetrahedron: Asymmetry, 8(6), páginas 883-888 (1997). La resolución del producto final, un intermedio, o un material de partida se puede alcanzar mediante cualquier método adecuado conocido en la técnica. Adicionalmente, en situaciones donde son posibles tautómeros de los compuestos de la fórmula estructural (I) o (II), la presente invención, pretende incluir todas las formas tautoméricas de los compuestos.

Los profármacos de los compuestos de la fórmula estructural (I) y la (II) también se pueden utilizar como el compuesto en un método de la presente invención. Queda bien establecido que un método de estudio de profármacos, en donde un compuesto se deriva en una forma adecuada para formulación y/o administración, luego liberado como un fármaco in vivo, se ha empleado exitosamente para alterar transitoriamente (por ejemplo, bio-reversiblemente) las propiedades fisicoquímicas del compuesto (véase, H. Bundgaard, Ed., "Design of Prodrugs," Elsevier, Amsterdam, (1985); R.B. Silverman, "The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action, " Academic Press, San Diego, capitulo 8, (1992); K.M. Hillgren et al., Med. Res. Rev. , 15, 83 (1995)).

Los compuestos de la presente invención, pueden contener uno o más grupos funcionales. Los grupos funcionales, si se desea o es necesario, se pueden modificar para proporcionar un profármaco. Los profármacos adecuados incluyen, por ejemplo, derivados ácidos, tales como amidas y ésteres. También se apreciará por aquellos expertos en la técnica que se pueden utilizar como un profármaco los trióxidos .

Los compuestos de la invención pueden existir como sales. Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la invención en general se prefieren en los en los métodos de la invención. En el sentido en el que se utiliza en la presente, el término "sales farmacéuticamente aceptables", se refiere a sales o formas zwitteriónicas de los compuestos de la fórmula estructural (I) y (II) . Las sales de los compuestos de la fórmula (I) y (II) se pueden preparar durante el aislamiento y purificación final de los compuestos o por separado al hacer reaccionar el compuesto con un ácido que tenga un catión adecuado. Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la fórmula estructural (I) y (II) son sales de adición de ácido formadas con ácidos farmacéuticamente aceptables. Los ejemplos de ácidos que se pueden emplear para formar las sales farmacéuticamente aceptables incluyen ácidos inorgánicos tales como, nítrico, bórico, clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, y fosfórico, y ácidos orgánicos tales como oxálico, maléico, succínico, y cítrico. Los ejemplos no limitante de sales de los compuestos de la invención incluyen, de manera enunciativa, las sales de clorhidrato, bromhidrato, yodohidrato, sulfato, bisulfato, 2-hidroxietansulfonato, fosfato, fosfato hidrogenado, acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, bisulfato, butirato, canforato, canforsulfonato, digluconato, glicerolfosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, formiato, succinato, fumarato, maleato, ascorbato, isetionato, salicilato, metanosulfonato, mesitilensulfonato, naftilensulfonato, nicotinato, 2-naftalensulfonato, oxalato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilproprionato, picrato, pivalato, propionato, tricloroacetato, trifiuoroacetato, fosfato, glutamato, bicarbonato, paratoluensulfonato, undecanoato, lactato, citrato, tartrato, gluconato, metansulfonato, etandisulfonato, bencensulfonato, y p-toluensulfonato . Además, los grupos amino disponibles presentes en los compuestos de la invención se pueden cuaternizar con cloruros bromuros, y yoduros de metilo, etilo, propilo, y butilo; sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo, y diamilo; cloruros, bromuros, y yoduros de decilo, laurilo, miristilo, y esterilo; y bromuros de bencilo y fenetilo. A la luz de lo anterior, cualquier referencia a los compuestos de la presente invención, que aparezcan en la presente pretende incluir los compuestos de la fórmula estructural (I) y/o (II) asi como también las sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, o profármacos de los mismos.

Los compuestos de la fórmula estructural (I) y (II) también se pueden conjugar o enlazar con porciones auxiliares que estimulen una propiedad benéfica del compuesto en un método de uso terapéutico. Estos conjugados pueden intensificar el suministro de los compuestos a un sitio o región anatómica de interés (por ejemplo, un tumor), permitir las concentraciones terapéuticas sostenidas de los compuestos en células blanco, alterar las propiedades farmacocinéticas y farmacodinámicas de los compuestos, y/o mejora el índice terapéutico o perfil de seguridad de los compuestos. Las porciones auxiliares adecuadas incluyen, por ejemplo, aminoácidos, oligopéptidos , o polipéptidos, por ejemplo, anticuerpos tales como, anticuerpos monoclonales y otros anticuerpos manipulados por ingeniería; y ligandos naturales o sintéticos para los receptores en las células o tejidos blanco. Otros auxiliares adecuados incluyen porción de ácido graso o lípido que estimulen la biodistribución y/o absorción del compuesto por las células blanco (véase, por ejemplo, Bradley et al., Clin. Cáncer Res. (2001) 7:3229).

Los compuestos de la presente invención son potentes inhibidores de NF-??. De esta forma, los compuestos de la fórmula (I) y (II) son de interés para utilizarse en terapia, específicamente para el tratamiento de una variedad de condiciones donde la inhibición de NF-?? se considera benéfica. La inhibición de NF-?? es en blanco particularmente atractivo debido a que esta inhibición proporciona efectos tales como, apoptosis, antimicrobiana, antiprotozoarios, antiviral y anti-inflamatoria, todos son benéficos en el tratamiento de diversos estados de enfermedad. Los compuestos de la fórmula (I) y (II), por lo tanto, tienen utilidad en el tratamiento de varios trastornos, enfermedades, y condiciones.

La potencia de un compuesto de carbazol de la presente se determina al medir una capacidad del compuesto para inhibir la NF-?? O para activar p53. La activación de p53 típicamente se mide utilizando un análisis de respuesta a la dosis en el cual un sistema de análisis sensible se pone en contacto con un compuesto de interés sobre una gama de concentraciones, incluyendo concentraciones en las cuales no se observa o se observa un efecto mínimo, a través de concentraciones mayores en los cuales se observa un efecto parcial, para concentraciones de saturación en las cuales se observa un efecto máximo. Teóricamente, estos análisis de efecto de respuesta a la dosis de los compuestos activadores se pueden describir como una curva sigmoidea que expresa un grado de activación como una función de la concentración. La curva también pasa teóricamente a través de un punto en el cual la concentración es suficiente para aumentar la actividad a un nivel que sea 50% el de la diferencia entre un valor inicial y la actividad máxima en el análisis. Esta concentración se define como la concentración efectiva (50%) o valor EC50. La determinación de un valor EC50 se realiza utilizando técnicas de análisis bioquímicos convencionales (acelulares) o técnicas de análisis con base celular.

Las comparaciones de la eficacia de los activadores con frecuencia se proporcionan con referencia a los valores EC50 comparativos, en donde un EC50 mayor indica que el compuesto de prueba es menos potente, y un EC50 menor indica que el compuesto es más potente, que un compuesto de referencia. Los compuestos de la presente invención, exhiben inesperadamente buena potencia, es decir, la activación p53, en un análisis de linea de células reporteras de luciferasa. Los compuestos de la invención se someten a un análisis de base celular descrito más adelante que exhibió valores EC50 para la activación p53 de menos de aproximadamente 1.35 µ?. En ciertas modalidades, los compuestos de la invención exhibieron un valor EC50 de menos de aproximadamente 1.0 µ?. En otras modalidades, los compuestos inventivos exhibieron valores IC50 de menos de aproximadamente 0.75 µ?, aproximadamente 0.50 µ M, aproximadamente 0.30 µ?, menos de aproximadamente 0.20 µ?, o menos de 0.05 µ?.

Un uso especialmente importante de presentes compuestos de carbazol es el tratamiento de un cáncer, una inflamación, una enfermedad autoinmune, una infección microbiana, por protozoarios , o viral, una enfermedad de injerto contra hospedero, una condición asociada con la infección por VIH, o células precancerosas que hayan obtenido dependencia sobre el NF-?? constitutivamente activo. Diversos cánceres que se pueden tratar de acuerdo con la presente invención incluyen, de manera enunciativa, carcinoma de células renales, sarcoma, cáncer prostético, cáncer de mama, cáncer pancreático, mieloma, leucemia mieloide y linfoblástica, neuroblastoma, glioblastoma, y un cáncer provocado por infección HTLV.

Se prevé, por lo tanto, que los compuestos de fórmula (I) y (II) son útiles en el tratamiento de una variedad de condiciones y enfermedades. De esta forma, la presente invención se relaciona con el uso de compuestos de la fórmula (I) y (II), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o una composición farmacéutica que contiene cualquier porción, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de estas condiciones y enfermedades.

Los compuestos de la presente invención, se pueden administrar terapéuticamente como el químico producto, aunque se prefiere administrar los compuestos de la fórmula estructural (I) o (II) como una composición o formulación farmacéutica. De esta forma, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la fórmula (I) o (II) junto con un diluyente o portador farmacéuticamente aceptable para el mismo. También se proporciona un proceso para preparar una composición farmacéutica que comprende mezclar un compuesto de la fórmula (I) o (II) con un diluyente o portador farmacéuticamente aceptable para el mismo.

Por consiguiente, la presente invención, proporciona además formulaciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la fórmula estructural (I) o (II), o una sal farmacéuticamente aceptable, profármaco, o hidrato de la misma, junto con uno o más portadores farmacéuticamente aceptables y, opcionalmente, otros ingredientes terapéuticos y/o profilácticos. Los portadores son "aceptables" en el sentido en el que están compatibles con los otros ingredientes de la formulación y no dañinos para el recipiente de los mismos.

Las formulaciones de la presente invención, se pueden administrar de una forma estándar para el tratamiento de las enfermedades indicadas, tal como, oral, parenteral, transmucosalmente (por ejemplo, sublingualmente o vía administración bucal) , tópica, transdérmica, rectalmente, o via inhalación (por ejemplo, inhalación al pulmón nasal o profunda) . La administración parenteral incluye, de manera enunciativa: intravenoso, intra-arterial , intraperitoneal , subcutánea, intramuscular, intratecal, e intra-articular . La administración parenteral también se puede llevar a cabo utilizando una técnica de alta presión, similar a POWDERJECTMR (Powderject Pharmaceuticals, Pie, Oxford, Inglaterra). La composición también se puede administrar en la forma de un implante, que permite una lenta liberación de la composición asi como también una lenta infusión i.v. controlada.

Para administración oral, incluyendo la administración bucal, la composición puede estar en la forma de tabletas o trociscos formulados de forma convencional. Por ejemplo, las tabletas y cápsulas para administración oral pueden contener excipientes convencionales tales como, agentes aglutinantes (por ejemplo, jarabe, acacia, gelatina, sorbitol, tragacanto, mucilago de almidón, o polivinilpirrolidona) , materiales de relleno (por ejemplo, lactosa, azúcar, celulosa microcristalina, almidón de maíz, fosfato de calcio, o sorbitol) , lubrificantes (por ejemplo, estearato de magnesio, ácido esteárico, talco, polietilenglicol o sílice), desintegrantes (por ejemplo, almidón de papa o glicolato de almidón sódico) , o agentes humectante (por ejemplo, laurilsulfato de sodio) . Las tabletas se pueden recubrir de acuerdo con métodos bien conocidos en la técnica.

Alternativamente, los compuestos de la presente invención se pueden incorporar en preparaciones orales liquidas tales como, suspensiones, soluciones, emulsiones, jarabes, o elíxires acuosos u oleosos por ejemplo. Además, las formulaciones que contienen los compuestos se pueden presentar como un producto seco para constitución con agua u otro vehículo adecuado antes de utilizarse. Estas preparaciones líquidas pueden contener aditivos convencionales, por ejemplo, agentes de suspensión, tales como jarabe de sorbitol, metilcelulosa, jarabe de glucosa/azúcar, gelatina, hidroxietilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa, gel estearato de aluminio, y grasas comestibles hidrogenadas; agentes emulsionantes, tales como lecitina, mono-oleato de sorbitán, o acacia; vehículos no acuosos (que pueden incluir aceites comestibles), tales como, aceite de almendras, aceite de coco fraccionado, ásteres oleosos, propilenglicol, y alcohol etílico; y conservadores, tales como, p-hidroxibenzoato de metilo o propilo y ácido sórbico.

Estas preparaciones también se pueden formular como supositorios, por ejemplo, que contengan bases convencionales para supositorio, tales como, manteca de cacao u otros glicéridos. Las composiciones para inhalación típicamente se pueden proporcionar en la forma de una solución, suspensión, o emulsión que se pueda administrar como un polvo seco o en forma de un aerosol utilizando un propelente convencional, tal como, diclorodifluorometano o triclorofluorometano . Las formulaciones tópicas y transdérmicas típicas comprenden vehículos acuosos o no acuosos convencionales, tales como, gotas para los ojos, cremas, ungüentos, lociones, y pastas, o están en la forma de una escayola medicada, parche o membrana .

Adicionalmente, las composiciones de la presente invención, se pueden formular para administración parenteral mediante infusión por inyección o continua. Las formulaciones para inyección pueden estar en la forma de suspensiones, soluciones, o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos, y pueden contener agentes de formulación, tales como agentes de suspensión, estabilizantes, y/o de dispersión. Alternativamente, el ingrediente activo puede estar en forma de polvo para constitución con un vehículo adecuado (por ejemplo, agua estéril, libre de pirógenos) antes de utilizarse .

Una composición de la presente invención, también se puede formular como una preparación para depósito. Estas formulaciones de acción a largo plazo se pueden administrar mediante implantación (por ejemplo, subcutánea o intramuscularmente ) o mediante inyección intramuscular. Por consiguiente, los compuestos de la invención, se pueden formular con materiales poliméricos o hidrofóbicos adecuados (por ejemplo, una emulsión en un aceite aceptable) , resinas de intercambio iónico, o como derivados escasamente solubles (por ejemplo, una sal escasamente soluble) .

La composición también se puede formular como una preparación de liposoma. La preparación de liposomas puede comprender liposomas que penetran las células de interés o el estrato córneo, y fusionarse con la membrana celular, dando por resultado en el suministro de los contenidos del liposoma en la célula. Los liposomas se describen, por ejemplo, en la patente de los Estados Unidos No. 5,077,211, la patente de los Estados Unidos No. 4,621,023, y la patente de los Estados Unidos No. 4,508,703, cada uno incorporadas en la presente como referencia.

Para uso veterinario, un compuesto de la fórmula (I) o (II), o una sal o profármaco farmacéuticamente aceptables, se administra como una formulación adecuadamente aceptable de acuerdo con la práctica veterinaria normal. El veterinario puede determinar fácilmente el régimen de dosificación y vía de administración que sea la más adecuada para un animal particular. Los animales que se pueden tratar por los presentes compuestos y métodos incluyen, de manera enunciativa, mascotas, ganado, animales para espectáculos y especímenes de zoológico.

MÉTODOS SINTÉTICOS Los compuestos de la fórmula (I) y (II) se pueden preparar mediante cualquier método adecuado conocido en la técnica, o mediante los siguientes procesos que forman parte de la presente invención. En particular, los compuestos de la fórmula estructural (I) y (II) se pueden preparar de acuerdo con los siguientes esquemas sintéticos.

En los métodos sintéticos, los ejemplos, y a todo lo largo de la especificación, las abreviaturas tienen los siguientes significados: DMF dimeti1formamida NaH hidruro de sodio min minutos TLC cromatografía de capa fina CH2C12 cloruro de metileno CHC13 cloroformo MeOH metanol Na2SO„ sulfato de sodio A1C13 cloruro de amonio AcCl cloruro de acetilo LC-MS cromatografía liquida-espectrometría de masas Et20 dietiléter Na2C03 carbonto de sodio HPLC cromatografía en fase líquida de alta eficacia h horas NaHC03 bicarbonato de sodio NaCl cloruro de sodio HC1 ácido hidroclorhídrico g gramo eq equivalente mol mol mmol milimol mL mililitro H2S04 ácido sulfúrico K2C03 carbonato de potasio Pd (OAc) acetato de paladio Pd(PPh3)4 tetra (trifenilfosfin) paladio (OEt) trietoxifosfina NaH hidruro de sodio TfOH ácido tríflico EtOH etanol NMR espectrometría de resonancia magnética EtOAc acetato de etilo THF tetrahidrofurano NaOH hidroxido de sodio NMP N-metilpirrolidinona DBU 1, 8-diazabiciclo [5. 4. 0] undec-7-eno MsCl cloruro de mesilo TEA trietanolamina Na2S04 sulfato de sodio (Boc),0 carbonato diter-butilo Py piridina PdCl2 (PPh) 3 dicloro-trifenilfosfin-paladio ( II ) PhN02 nitrobenceno OAc acetato de potasio Pd(dppf )C12 dicloro- ( (bis-difenilfosfino) ferrocenil ) -paladio { II ) AcOK acetato de potasio PPh3 trifenilfosfina PPh30 óxido de trifenilfosfina BBr3 tribromoboro CH3CN acetonitrilo PhSH tiofenol Cs2C03 carbonato de cesio STAB triacetoxiborohidruro de sodio NEt3 trietilamina DMF dimetilformamida Se debe entender que se pueden utilizar agentes protectores de acuerdo con los principios generales de la química orgánica sintética para proporcionar los compuestos de la fórmula estructural (I) y (II) . Los reactivos formadores de grupos protectores son bien conocidos por los expertos en la técnica, por ejemplo, véase T.W. Greene et al., "Protective Groups in Organic Synthesis, Third Edition," John iley and Sons, Inc., NY, N. Y. (1999). Estos grupos protectores se retiran cuando es necesario mediante las condiciones básicas, ácidas, o hidrogenolíticas adecuadas conocidas por los expertos en la técnica. Por consiguiente, los compuestos de la fórmula estructural (I) y (II) no ejemplificados específicamente en la presente se pueden preparar por el experto en la técnica.

Además, los compuestos de la fórmula (I) y (II) se pueden convertir a otros compuestos de la fórmula (I) y (II). De esta forma, por ejemplo, se puede interconvertir un sustituyente R particular para preparar otro compuesto sustituido adecuadamente de la fórmula (I) o (II). Los ejemplos de interconversiones adecuadas incluyen, de manera enunciativa, 0Ra a hidroxi por medios adecuados (por ejemplo, un agente tal como SnCl2 o un catalizador de paladio, similar a paladio sobre carbono) , o amino a amino sustituido, tal como acilamino o sulfoilamino, utilizando condiciones estándar de acilación o sulfonación.

Los compuestos de la fórmula (I) y (II) se pueden preparar como estereoisómeros individuales como una mezcla racémica. Los estereoisómeros individuales de los compuestos de la invención se pueden preparar a partir de racematos mediante resolución utilizando los métodos conocidos en la técnica para la separación de mezclas racémicas en sus estereoisómeros constituyentes, por ejemplo, utilizando HPLC o una columna quiral, tal como, Hypersil naftilurea, o utilizando la separación de sales de estereoisómeros. Los compuestos de la invención se pueden aislar en asociación con moléculas de solventes mediante la cristalización, o la evaporación, de un solvente adecuado.

PROCEDIMIENTOS SINTÉTICOS GENERALES Esquema 1 Procedimiento general para la alquilación de carbazoles Se disolvió o suspendió el carbazol 1 en DMF. Luego, se agregó NaH (3 eq) . La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante un periodo de 5-10 min hasta que ya no se formó espuma. Se agregó clorhidrato y cloruro (1.3 eq) , y la mezcla de reacción se mantuvo a 50-60°C durante un periodo de 2-16 h (monitoreo mediante TLC; eluyente: CH2Cl2/acetato de etilo, 1:1 para la presencia del carbazol de partida; CHCl3/MeOH, 9:1 para la pureza del producto). La mezcla resultante se diluyó con agua. Si se forma un precipitado, éste se extrajo por filtración y se secó con aire. Si no se formó ningún precipitado (Tabla 1), la mezcla se extrajo con acetato de etilo. El extracto se secó sobre Na2S04, se evaporó, y el residuo se purificó mediante cromatografía (gel de sílice, CHCls/MeOH) . Los rendimientos de los productos 2a y 2b se muestran en la Tabla 1.

Procedimiento general para la acilación de carbazoles alquilados El nitrobenceno se disolvió un carbazol 2. La solución se enfrió en un baño con hielo, luego se agregaron AICI3 (5 eq) y AcCl (5 eq) . La mezcla de reacción se mantuvo durante un periodo de 2-16 h (monitoreo mediante LC-MS) . Una muestra de la mezcla de reacción se diluyó con Et2Ü, y más tarde se decantó a partir del precipitado, luego se disolvió en MeOH. La mezcla resultante se diluyó con agua, se neutralizó con a2C03, y se extrajo con CHCI3. El extracto se evaporó. El residuo se purificó primero mediante cromatografía en una columna de gel de sílice corta (CHCl3/MeOH) para eliminar el nitrobenceno; luego, si es necesario, en una columna de gel de sílice o mediante HPLC. Los rendimientos de los productos 3a y 3b se muestran en la Tabla 1.

Esquema 2 3, 6-Diacetilcarbazol (4) Se disolvió en nitrobenceno (300 mL) el carbazol 1 (16.9 g, 0.1 mol). Se agregó A1C13 anhidro (54.0 g, 0.4 mol) bajo agitación y enfriamiento con un baño con hielo. Luego, se agregó lentamente gota a gota AcCl (55.5 g, 0.7 mol). La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente bajo agitación y se mantuvo durante un periodo de 13 h. Se agregó agua (500 mL) en pequeñas porciones bajo enfriamiento con un baño con hielo. El baño de enfriamiento se retiró, y la mezcla se sometió a reflujo durante un periodo de 2 h y se extrajo con CHC13 (3 x 150 mL) . Los extractos combinados se lavaron secuencialmente con soluciones saturadas de NaHC03 y NaCl, se secaron con a2S04 anhidro, y se evaporaron. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice, CHCl3/MeOH) para proporcionar 12.5 g (50%) del 3,6-diacetilcarbazol (4).

Para la alquilacion del compuesto 4, se utilizó el procedimiento general para la alquilación de los carbazoles. Los rendimientos de los productos 3c-f se muestran en la Tabla 1.

Esquema 3 Preparación de los bromoalqaildiacetllcarbazoles 5a-c Se disolvió en DMF el diacetilcarbazol 4, luego se agregó NaH (3 eq) . La mezcla se agitó durante un periodo de 10 min a temperatura ambiente. Se agregó un dibromoalqueno (7 eq) . La mezcla de reacción se mantuvo durante un periodo de 1 h (5a a temperatura ambiente; 5b a 40°C; 5c durante un periodo de 20 min a 70 °C; monitoreo mediante TLC, CH2Cl2/acetato de etilo, acetato de etilo 4:1). La mezcla luego se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo. Los extractos combinados se lavaron con agua y salmuera, se secaron con Na2S04, y se evaporaron. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice, CHCI3) para proporcionar 5a (21%), 5b (29%), y 5c (74%).

Alquilaclón de aminas con los bromoalq ildlacetilcarbazoles 5a-c Se disolvió en DMF un bromuro 5, se agregó una amina (en exceso, véase la tabla 3) . La mezcla se mantuvo a 60°C durante la noche, (monitoreo mediante TLC, CH2Cl2/acetato de etilo, 1:1 para la presencia del carbazol de partida; CHCls/MeOH, 9:1 para la pureza del producto) . La mezcla de reacción se diluyó con agua y se extrajo acetato de etilo. Los extractos combinados se secaron con Na2SC>4. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice, CHCls/MeOH) . El producto se disolvió en una mezcla de CH2C12 y MeOH. Se agregó HC1 4M en dioxano, y la mezcla se evaporó. El residuo se trituró con Et20 y, si es necesario, con acetato de etilo o acetona. Los rendimientos de los productos 6a-h se muestran en la Tabla 3.

Esquema 4 Para la acilación de 2, se utilizó un procedimiento similar al descrito en el Esquema 1. Los rendimientos de los productos 7a-d se muestran en la Tabla 4.

Esquema 5 3, 6-Bis (cloroproplonil) -9-N,N-dietllaminoetllcarbazol (8) En un baño con hielo se enfrió una solución de 1-N, JV-dietilaminoetilcarbazol (0.23 g, 0.86 mmol) en 2 mL de nitrobenceno . Se agregaron A1C13 (0.57 g, 4.3 mmol) y cloruro de 3-cloropropionilo (0.4 mL, 4.2 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante la noche (monitoreo mediante LC-MS) y se diluyó con HC1 acuoso. El producto se extrajo con CHC13, y el filtrado se evaporó. El residuo se purificó rápidamente mediante cromatografía en una columna de gel de sílice corta (CHCl3/MeOH) para proporcionar 0.38 g (91%) del compuesto 8 como su clorhidrato. 1,2,10, ll-Tetrahidro-6-?,N-dimetilamloetll-6H- diciclopenta[c,g] carbazol-3, 9-diona (9) El compuesto 2 (0.38 g, 0.79 mmol) se disolvió en H2S04 al 98% (3 mL) . La mezcla de reacción se calentó a 95°C, se mantuvo a esta temperatura durante un periodo de 2.5 h (monitoreo mediante TLC, CHCl3/MeOH, 4:1), y se vació en hielo. La mezcla resultante se neutralizó con Na2C03 seco y se extrajo con CHCI3. El extracto se evaporó, y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna (CHCls/MeOH) . El producto crudo obtenido (0.08 g) se disolvió en MeOH. Se agregó HC1 4M en dioxano, y la mezcla se evaporó. El residuo se suspendió en MeOH, y la suspensión se llevó a reflujo. (El sólido no se disolvió en el proceso.) La suspensión se enfrió, y el sólido se extrajo por filtración para proporcionar 0.007 g (2%) del compuesto 9 como su clorhidrato .

Esquema 6 2-Metil-2' -nitro-1, 1' -bifenilo (10a) Se disolvieron ácido 2-metilfenilborónico (0.64 g, 4.7 mmol) y 2-nitroidobenceno (1.0 g, 4.0 mmol) en una mezcla de MeOH (20 mL) y agua (4 mL) . Se agregaron K2C03 (1.1 g, 8.0 mmol) y Pd(OAc)2 (0.018 g, 0.08 mmol) . La mezcla de reacción se inundó con argón, se calentó a 50 °C, se mantuvo durante la noche a esta temperatura, y se filtró a través Celite. Lo último se lavó con MeOH. El filtrado se evaporó, y el residuo se utilizó sin purificación adicional. 4, 4 ' -Dimetoxi-2-nitro-l, 1 ' -bifenilo (lOh) Se disolvieron ácido 4-metoxifenilboronico (3.00 g, 19.7 mmol) y -cloro-3-nitroanisol (3.69 g, 11.6 mmol) en una mezcla de dioxano (40 mL) y agua (10 mL) . Se agregaron K2C03 (5.44 g, 23.2 mmol) y Pd(PPh3)4 (1.14 g, 0.6 mmol). La mezcla de reacción se calentó en argón a 80°C, se mantuvo a esta temperatura durante la noche (monitoreo mediante TLC : hexano/acetato de etilo, 4:1), se enfrió, y se filtró a través Celite. Lo último se lavó con CH2CI2, y el filtrado se evaporó. El residuo se disolvió en CH2C12, y la solución se evaporó para proporcionar 6.0 g de bifenilo crudo lOh que se ciclo sin purificación.

Para obtener los bifenilos lOb-g se utilizó un procedimiento análogo.

Procedimiento general para la síntesis de carbazoles Un bifenilo crudo 10 se disolvió en (EtO)3P. La mezcla de reacción se mantuvo a 125-140°C en un flujo de argón durante un periodo de aproximadamente 48 h (monitoreo mediante TLC : hexano/acetato de etilo, 1:1) y se diluyó con agua. El precipitado se extrajo por filtración y se lavó con Et20. No se formó ningún precipitado, el producto se extrajo con acetato de etilo, el extracto se evaporó, y el residuo se purificó en una columna de gel de sílice corta (hexano/acetato de etilo) . Los rendimientos de los productos lla-g se muestran en la Tabla 5. 2, 7-Dimetoxi-9H-carbazol (llh) La reacción se llevó a cabo en una vial. El bifenilo crudo lOh (6.0 g) se disolvió en P(OEt> 3 (36 mL) . El vial se inundó con argón. La mezcla de reacción se calentó a 90 °C, se mantuvo a esta temperatura durante la noche, y se enfrió. Como resultado se precipitó el carbazol. Se agregó una mezcla de Et20/CH2C12. El precipitado se extrajo por filtración y se lavó con CH2C12. El filtrado se evaporó. Se agregó nuevamente P(OEt) 3, y la mezcla se dejó para ciclización durante 24 h. Estas operaciones se repitieron hasta que ya no hubo formación del precipitado, y la TLC indicó que desapareció el bifenilo de partida. Se obtuvo un total de 2.9 g del carbazol (65% calculado para dos pasos) .

Para la alquilación del compuesto 11, se utilizó el procedimiento general para la alquilación de los carbazoles. Los rendimientos de los compuestos 12a-i se muestran en la Tabla 1.

Para la acilación de 12, se utilizó un procedimiento similar al descrito para el Esquema 1. Sin embargo, para la monoacetilación de la cantidad de AcCl y A1C13 se disminuyó a 1.5 eq. Los rendimientos de los compuestos 13a-j se muestran en la Tabla 2.

Esquema 7 4, 4, 5, 5-Tetrametíl-2- (4-indanon-l-ll) - [1,3,2] - dioxoborolano (14a X=CH2) Se disolvieron 4-trifluorometilsulfoniloxi-1-indanona (9.7 g, 34.6 mmol) y bis (pinacolato) diboro (1 1.4 g, 45.0 mmol) en dioxano (100 mL) . Se agregaron AcOK (6.8 g, 69.2 mmol) y Pd(dppf)2Cl2 (1.3 g, 1.8 mmol). La mezcla de reacción se calentó en un flujo de argón a 80°C, se mantuvo a esta temperatura durante la noche, se enfrió, y se filtró a través Celite. El filtrado se evaporó. El residuo se disolvió en CH2CI2 y se purificó en una columna de gel de sílice corta (hexano/acetato de etilo) para proporcionar 9.5 g de un producto que contuvo 20% (masa) de bis (pinacolato ) diboro . El producto se utilizó para el siguiente paso sin purificación adicional.

El éster borónico proveniente del bromuro se preparó de la misma forma. Si se utilizó 1 eq de bis (pinacolato) diboron, se obtuvo un producto más puro. 4,4,5, 5-Tetramet±l-2- [4- (2-zaetilisoindolin-l- na) -il] - [1,3,2] -dloxoborolano (14b X = NMe) Se disolvieron 4-bromo-2-metilisoindolin-l-ona (3.23 g, 14.3 mmol) y bis (pinaeolato) diboro (4.72 g, 18.6 mmol) en dioxano (60 mL) . Se agregaron AcOK (2.80 g, 28.6 mmol) y Pd(dppf)2Cl2 (0.5 g, 0.7 mmol). La mezcla de reacción se calentó en un flujo de argón a 80°C, se mantuvo a esta temperatura durante la noche, se enfrió, y se filtró a través Celite. El filtrado se evaporó. El residuo se disolvió en CH2C12 y se purificó en una columna de gel de sílice corta (hexano/acetato de etilo) para proporcionar 4.2 g de un producto que contuvo 20% (masa) de bis (pinacolato) diboro . El producto se utilizó para el siguiente paso sin purificación adicional .

Bifenilo 15a (X=CH2, R=H) Se disolvieron 4 , 4 , 5 , 5-tetrametil-2- ( 4-indanona-l-il) - [1, 3, 2] -dioxoborolano (2.17 g, 8.4 mmol) y o-nitroiodobenceno (2.70 g, 10.9 mmol) en una mezcla de dioxano (30 mL) y agua (5 mL) . Se agregaron K2C03 (2.30 g, 16.7 mmol) y Pd(PPh3)4 (0.48 g, 0.4 mmol) . La mezcla de reacción se calentó en una flujo de argón a 80°C, se mantuvo a esta temperatura durante un periodo de 24 h (monitoreo mediante TLC : hexano/acetato de etilo, 4:1), se enfrió, y se filtró a través Celite. El filtrado se evaporó. El residuo se disolvió en CH2Cl2- Se extrajo por filtración un precipitado sin disolver. El filtrado se evaporó parcialmente, y el producto se purificó en una columna de gel de sílice corta (hexano/acetato de etilo) para proporcionar 2.5 g de un producto que contuvo PPh30. El producto se ciclo sin purificación adicional.

Bifenilo 15b (X=CH2, R=OMe) Se disolvieron , , 5, 5-tetrametil-2- ( 4-indanona-l-il) - [1, 3, 2] -dioxoborolano (1.20 g, 4.6 mmol) y o-nitroiodobenceno (0.87 g, 4.6 mmol) en una mezcla de dioxano (10 mL) y agua (2 mL) . Se agregaron K2CO3 (1.28 g, 9.2 mmol) y Pd(PPh3)4 (0.27 g, 0.2 mmol). La mezcla de reacción se calentó en una flujo de argón a 80°C, se mantuvo a esta temperatura durante un periodo de 24 h (monitoreo mediante TLC : hexano/acetato de etilo, 4:1), se enfrió, y se filtró a través Celite. El filtrado se evaporó. El residuo se disolvió en CH2CI2. Se extrajo por filtración un precipitado sin disolver. El filtrado se evaporó parcialmente, y el producto se purificó en una columna de gel de sílice corta (hexano/acetato de etilo) para proporcionar 1.25 g de un producto que contuvo PPh30. El producto se ciclo sin purificación adicional.

Bifenilo 15c (X= NMe, R=H) Se disolvieron 4 , 4 , 5 , 5-tetrametil-2- [ 4- ( 2-metilisoindolin-l-ona) -il] - [1, 3, 2] -dioxoborolano (2.43 g, 8.9 mmol) y o-nitroiodobenceno (2.44 g, 9.80 mmol) en una mezcla de dioxano (30 mL) y agua (6 mL) . Se agregaron K2C03 (2.50 g, 18.1 mmol) y Pd(PPh3)4 (0.51 g, 0.4 mmol). La mezcla de reacción se calentó en una flujo de argón a 80°C, se mantuvo a esta temperatura durante un periodo de 24 h (monitoreo mediante TLC : hexano/acetato de etilo, 4:1), se enfrió, y se filtró a través Celite. El filtrado se evaporó. El residuo se disolvió en CH2Cl2- Se extrajo por filtración un precipitado sin disolver. El filtrado se evaporó parcialmente, y el producto se purificó en una columna de gel de sílice corta (hexano/acetato de etilo) para proporcionar 2.3 g de un producto que contuvo PPh30. El producto se ciclo sin purificación adicional.

Bifenilo 15d (X= NMe, R=OMe) Se disolvieron 4 , 4 , 5, 5-tetrametil-2- [ 4- ( 2-metilisoindolin-l-ona) -il] - [1, 3, 2] -dioxoborolano (0.97 g, 3.6 mmol) y 4 -cloro-3-nitroanisol (0.67 g, 3.6 mmol) en una mezcla de dioxano (10 mL) y agua (2 mL) . Se agregaron K2C03 (0.98 g, 7.2 mmol) y Pd(PPh3)4 (0.21 g, 0.2 mmol). La mezcla de reacción se calentó en una flujo de argón a 80°C, se mantuvo a esta temperatura durante un periodo de 24 h (monitoreo mediante TLC : hexano/acetato de etilo, 4:1), se enfrió, y se filtró a través Celite. El filtrado se evaporó. El residuo se disolvió en CH2CI2. Se extrajo por filtración un precipitado sin disolver. El filtrado se evaporó parcialmente, y el producto se purificó en una columna de gel de sílice corta (hexano/acetato de etilo) para proporcionar 0.76 g de un producto que contuvo PPh30. El producto se ciclo sin purificación adicional.

Carbazol 16a (X=CH2, R=H) La reacción se llevó a cabo en un vial. Se disolvió 4- (2-nirofenil ) indanona-1 (2.54 g, 10.0 mmol) en P(OEt)3 (8 mL) . El vial se inundó con argón. La mezcla de reacción se calentó a 90 °C, se mantuvo a esta temperatura durante la noche, y se enfrió. Como resultado se precipitó el carbazol. Se agregó CH2CI2. El precipitado se extrajo por filtración y se lavó con CH2CI2. El filtrado se evaporó. se agregó nuevamente P(OEt)3 (2 mL) , y la mezcla se dejó para ciclización durante 24 h. Estas operaciones se repitieron hasta que ya no hubo formación del precipitado, y la TLC indicó que desapareció el bifenilo de partida. Se obtuvo un total de 0.58 g del carbazol.

Carbazol 16b (X=C 2, R=OMe) La reacción se llevó a cabo en una vial. Se disolvió 4- ( -metoxi-2-nitrofenil ) -indanona-1 (1.25 g, 4.4 mmol) en P(OEt)3 (8 mL) . El vial se inundó con argón. La mezcla de reacción se calentó a 90°C, se mantuvo a esta temperatura durante la noche, y se enfrió. Como resultado se precipitó el carbazol. Se agregó CH2C12. El precipitado se extrajo por filtración y se lavó con CH2C12. El filtrado se evaporó. Se agregó nuevamente P(OEt)3 (1 mL) , y la mezcla se dejó para ciclización durante 24 h. Estas operaciones se repitieron hasta que ya no hubo formación del precipitado, y la TLC indicó que desapareció el bifenilo de partida. Se obtuvo un total de 0.39 g del carbazol.

Carbazol 16c (X=NMe, R=H) La reacción se llevó a cabo en una vial. Se disolvió 4- (2-nitrofenil) -2-nietilisoinolin-l-ona (2.29 g, 8.5 mmol) en P(OEt)3 (10 mL) . El vial se inundó con argón. La mezcla de reacción se calentó a 90°C, se mantuvo a esta temperatura durante la noche, y se enfrió. Como resultado se precipitó el carbazol. Se agregó CH2CI2. El precipitado se extrajo por filtración y se lavó con CH2CI2. El filtrado se evaporó. Se agregó nuevamente P(OEt)3 (0.5 mL) , y la mezcla se dejó para ciclización durante 24 h. Estas operaciones se repitieron hasta que ya no hubo formación del precipitado, y la TLC indicó que desapareció el bifenilo de partida. Se obtuvo un total de 0.4 g del carbazol.

Carbazol 16d (X=NMe, R=OMe) La reacción se llevó a cabo en una vial. Se disolvió 4- (4-metoxi-2-nitrofenil) -2-metilisoinolin-l-ona (0.76 g, 2.6 mmol) en P(OEt)3 (6 mL) . El vial se inundó con argón. La mezcla de reacción se calentó a 90°C, se mantuvo a esta temperatura durante la noche, y se enfrió. Como resultado se precipitó el carbazol. Se agregó CH2C12. El precipitado se extrajo por filtración y se lavó con CH2CI2. El filtrado se evaporó. Se agregó nuevamente P(0Et)3 (0.5 mL) , y la mezcla se dejó para ciclización durante 24 h. Estas operaciones se repitieron hasta que ya no hubo formación del precipitado, y la TLC indicó que desapareció el bifenilo de partida. Se obtuvo un total de 0.34 g del carbazol .

Para la alquilación de 16, se utilizó el procedimiento general para la alquilación de carbazoles. Los rendimientos de los productos 17a-f se muestran en la Tabla 1.

Para la acilación de 17, se utilizó un procedimiento similar al descrito del Esquema 1. Los rendimientos de los productos 18a-d se muestran en la Tabla 2.

Esquema 8 Procedi iento ge eral de dimetilaclón.

Se disolvió un metoxi compuesto en CH2C12. La solución se enfrió a -40°C. Se agregó una solución 0.5M de BBr3 DCM (4 eq, durante un grupo metoxi) en un flujo de argón. Después de 10 min el baño de enfriamiento se retiró. La mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se mantuvo durante un periodo de 1 h (monitoreo mediante TLC, CHCl3/MeOH, 4:1), y se vació en una mezcla de NaHC03 acuoso y CH2C12. La capa orgánica se separó, y el acuoso se extrajo una vez más con CH2CI2. Los extractos combinados se secaron con Na2SC y se evaporaron. El producto se purificó mediante cromatografía en columna (CHCl3/MeOH) . Los rendimientos de los productos 19a-h se muestran en la Tabla 6.

Esquema 9 2-Hidroxi-9-N,N-dletilaminoetilcarbazol (20) Se disolvió 2-metoxi-9-N, N-dietilaminoetilcarbazol 12g en CH2C12 (10 mL) . La solución se enfrió a -40°C. Se agregó una solución 0.5M de BBr3 en DCM (6 mL, 3.00 mmol) en un flujo de argón. Se formó una suspensión naranja como resultado. La mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se mantuvo durante un periodo de 1.5 h, y se vació en una mezcla de NaHC03 acuosa y CH2CI2. La capa orgánica se separó, y la capa acuosa se extrajo una vez más con CH2CI2. Los extractos combinados se secaron con Na2S04 y se evaporó. El producto se purificó mediante cromatografía en columna (CHCl3/MeOH) para proporcionar 0.176 g (92%) del producto. 2-Acetoxl-9-N, N-dietilaminoetxlcarbazol (21) Una solución del compuesto 20 (0.176 g, 0.62 mmol) en Ac20 (2 mL) se llevó a reflujo durante un periodo de 30 min y se vació en agua. La mezcla resultante se neutralizó con NaHC03 y se extrajo con acetato de etilo. El extracto se evaporó para proporcionar 0.16 g (79%) del producto. 3-Acetll-2-hidxoxi-9-NrN-dletilaminoetllcarbazol (22) Se disolvió el compuesto 21 (0.16 g, 0.49 mmol) en PhN02 (2 mL) , y se agregó A1C13 (0.1 g, 0.75 mmol). La mezcla de reacción se calentó en un baño de aceite a 100°C, se mantuvo a esta temperatura durante un periodo de 2 h, se diluyó con agua, se neutralizó con Na2C03, y se extrajo con HCI3. El extracto se evaporó. El residuo se purificó mediante cromatografía en una columna de gel de sílice corta (CHCl3/MeOH) para proporcionar 0.044 g (28%) del compuesto Tabla. 1. Alquilación de carbazoles a contiene DMF. b El rendimiento no se precisa. Se utilizó carbazol crudo para la preparación. Purificación vía clorhidrato. c Purificación vía clorhidrato. d Aislado como sustancias cristalinas inmediatamente después de diluir la mezcla de reacción con agua.

Tabla 2. Acetilación de carbazoles alquilados a Después de la purificación mediante HPLC. mezcla con el compuesto de partida se aisló utilizó sin separación adicional.

Tabla 3. Alquilación de carbazoles bromoalquildiacetilcarbazoles Tabla 4 Después de la purificación mediante HPLC.

Tabla. 5 a Precipitado como cristales. b El producto contuvo (EtO) 3P0 y se utilizó sin purificación. c Sólo se proporciona el rendimiento de regioisómero blanco.

Tabla 6 a Después de la purificación mediante HPLC. b Obtenido después de trabajar con una mezcla y separado mediante HPLC. c Purificación vía clorhidrato.

EJEMPLOS [3- (9H-carbazol-9-il)propil]dimetilamina (30) .

Se disolvió carbazol 3.0 g (18.0 mmol) en DMF (20 mL) . Luego, se agregó NaH al 60% en parafina (2. 5 g, 62. 5 mmol) , y la mezcla se agitó durante 10 min. Se agregó cloruro de 2-N, N-dimetilaminopropilo 3.0 g (19. 0 mmol) en porciones, con lo cual la temperatura aumentó a 45-50°C. La mezcla de reacción se mantuvo a esta temperatura durante 2.5 h (monitoreo mediante TLC, CHCl3/MeOH, 9:1). La masa obtenida se vació cuidadosamente en una mezcla de hielo/agua y se extrajo con acetato de etilo. El extracto se secó con a2S04 y se evaporó para proporcionar el compuesto 30 (4.8 g, 100%) como un aceite fluido castaño. 1 , 1' -{ 9- [3- (dimetilami.no) propil] -9H-carbazol-3 , 6- diil}bis (2-metilpropan-l-ona) (Ejemplo 1).

Se disolvió el compuesto 30 (0.25 g, 1.0 mmol) en nitrobenceno (5 mL) . Se agregó en porciones A1C13 (0.6 g, 4.5 mmol) y luego cloruro de isobutiroilo (0.6 mL, 5.7 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 40 min (monitoreo mediante LC/MS) . La mezcla obtenida se vació en una mezcla de hielo/agua y se extrajo con CHC13. Los extractos combinados se evaporaron, y el residuo se purificó mediante cromatografía en una columna de gel de sílice gruesa corta (eluyente: CHCl3MeOH 99:1 ? 90:10) para proporcionar 0.189 g (47%) del producto. :H N R (DMS0-d6) : d 1.20 (12H, d, J-6.7 Hz) ; 1.90-1.97 (2H, m) ; 2.11 (6H, s); 2.18 (2H, t, J-6.7 Hz); 3.91 (2H, septeto, J=6.7 Hz), 4.50 (2H, t, J=6.6 Hz) ; 7.76 (2H, d, J=8.7 Hz); 8.14 (2H, dd, J=8.7 Hz, J=1.5 Hz) ; 9.11 (2H, d, J=1.5 Hz) . ELSD: 100%, ESI- S: m/z 392 [M+H]+.

Ejemplo 2 1,1- (9H-Carbazol-3 , 6-diil) dietanona (31) Se disolvió carbazol (16.9 g, 0.1 mol) en nitrobenceno (300 mL) . agregó bajo agitación AICI3 anhidro (54.0 g, 0.4 mol) en un baño con hielo. Luego se agregó lentamente gota a gota AcCI (55.5 g, 0.7 mol). La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente bajo agitación y se mantuvo durante 13 h. Se agregó agua (500 mL) en pequeñas porciones bajo enfriamiento en un baño con hielo para evitar una espumación violenta. El baño de enfriamiento se retiró, y la mezcla se llevó a reflujo con un condensador durante 2 h. El producto se extrajo con cloroformo (3 x 150 mL) . Los extractos combinados se lavaron secuencialmente con soluciones saturadas de NaHC03 y NaCl, se secaron con Na2S04 anhidro, y se evaporaron. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice, CHCl3-MeOH) para proporcionar 1, 12.5 g (50%). 1 , 1' - { 9- [2- (l-metilpirrolidin-2-il) etil] -9H-carbazol-3 , 6- diil}dietanona (Ejemplo 2, 3c).

Se disolvió el derivado de diacetilo 31 (0.97 g, 3.86 mmol) en DMF (7 mL) . Se agregó NaH (0.54 g, 13.5 mmol), y la mezcla se agitó durante 3-5 min a temperatura ambiente. Se agregó clorhidrato de 2- (2-cloroetil) -1-metilpirrolidina (1.07 g, 5.8 mmol) . La mezcla de reacción se agitó durante 24 h a 60°C (monitoreo mediante TLC, CHCl3/MeOH, 9:1), se diluyó con agua, y se extrajo con acetato de etilo. El extracto se secó con Na2S04 y se evaporó. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice, CHCl3/MeOH 99:1 ? 90:10) para proporcionar 0.90 g (64%) del producto. 1H NMR (DMS0-d6) : d 1.41-1.49 (1H, m) ; 1.54-1.73 (3H, m) ; 1.76-1.85 (1H, m) ; 1.97-2.13 (3H, m) ; 2.14 (3 H, s); 2.70 (6H, s); 2.86-2.93 (1H, m) ; 4.46-4.50 (2H, m) ; 7.72 (2H, d, J=8.8 Hz); 8.12 (2H, dd, J=8.8 Hz, J=l .6 Hz) ; 9.04 (2H, d, J=1.6 Hz) . ELSD: 100%, ESI-MS: m/z 363 [M+H]+.

Ejemplo 3 [2- (9H-Carbazol-9-il) etil] dietilamina (32) .

Se disolvió carbazol (10.0 g, 59.8 mmol) en DMF (60 mL) . Luego, se agregó en porciones NaH al 60% en parafina (7.2 g, 180.0 mmol) . La mezcla se agitó durante 10 min. Se agregó en porciones clorhidrato de 2-N,N-dietilaminoetilcloruro (10.5 g, 61.0 mmol), con lo cual la temperatura aumentó a 50°C. La mezcla de reacción se mantuvo a esta temperatura durante 2.5 h (monitoreo mediante TLC, hexano/acetato de etilo 4:1). La masa resultante se vació cuidadosamente en una mezcla de hielo/agua y se extrajo con acetato de etilo. El extracto se secó con a2S04 y se evaporó para proporcionar compuesto 1 (16.0 g, 100%) como un aceite fluido castaño.

Clorhidrato de 1 , 1' - { 9- [2- (dietilamino) etil] -9H-carbazol- 3, 6-diil}bis (3-cloropropan-l-ona) (33) .

Se enfrió en un baño con hielo una solución del compuesto 32 (17.9 g, 67.3 mmol) en nitrobenceno (150 mL) . Se agregó en porciones A1C13 (45.0 g, 337.1 mmol). Luego se agregó gota a gota cloruro de 3-cloropropionilo (32.4 mL, 336.7 mmol) durante 10 min. La mezcla de reacción se agitó durante 40 min (monitoreo mediante LC/MS) , se vació en una mezcla de hielo con HC1 diluido, y se extrajo con CHC13. El extracto se evaporó. El residuo se purificó mediante cromatografía en una columna gruesa corta (gel de sílice, CHCl3/MeOH 99:1 ? 90:10) para proporcionar 22.9 g (76.3%) del clorhidrato de 33.

Clorhidrato de 6- [2- (dietilamino) etil] -10 , 11-dihidro-lH- diciclopenta[c,g] carbazol-3, 9 (2H,6H) -diona (Ejemplo 3) Se disolvió el clorhidrato de 2 (22.9 g, 51.3 mmol) en H2S04 (150 mL) al 98%. La solución se mantuvo a 80°C durante 4 h (monitoreo mediante TLC, CHCl3/MeOH 4:1) y se vació en hielo. La mezcla resultante se neutralizó con Na2C03 y se extrajo con CHCI3. El extracto se evaporó. El residuo se purificó mediante cromatografía en una columna gruesa corta (gel de sílice, CHCl3/MeOH 99:1 ? 90:10) y se volvió a cristalizar a partir de MeOH para proporcionar 0.562 g (3%) del producto. Lo último se disolvió en CH2C12, se agregó HC1 en dioxano, y la mezcla se evaporó para secado. El residuo se lavó con éter y se secaron para proporcionar 0.6358 g del clorhidrato. H NMR Hz); 2.77-2.80 (4H, m) ; 3.42-3.47 (2H, m) ; 3.23-3.34 (4H, m) ; 3.83-3.85 (4H, m) ; 5.88 (2H, t, J-7.8 Hz); 7.84 (2H, d, J=8.6 Hz) ; 7.97 (2H, d, J=8.6 Hz); 10.75 (1H, br.s). ELSD: 100%, ESI-MS: m/z 375 [M+H]+.

Ejemplo 4 4- (4, 4, 5, 5-Tetrametil-l, 3, 2-dioxaborolan-2-il) indan-l-ona (34) .

Se agregó acetato de potasio (17.8 g, 181.6 mmol) y Pd(dppf)Cl2 (3.3 g, 4.5 mmol) a una solución de 4-bromo-l-indanona (19.3 g, 91.5 mmol) y bis (pinacolato) diboro (23.2 g, 91.3 mmol) en dioxano (300 mL) . La mezcla se calentó a 80°C bajo argón, se mantuvo a esta temperatura durante 16 h, se enfrió, se filtró a través Celite, y se evaporó. El residuo se disolvió en CH2C12. El producto se purificó con una columna de gel de sílice gruesa corta (eluyente : hexano-acetato de etilo 100:0 ? 50:50). Rendimiento de 34:23.4 g. El producto que contuvo bis (pinacolato) diboro (aproximadamente 7% molar) se utilizó en el siguiente paso sin purificación adicional. 4- (4-Metoxi-2-nitrofenil) indan-l-ona (35) .

Se agregó potasa (7.5 g, 54.3 mmol) y Pd(PPh3)4 (1.6 g, 1.4 mmol) a una solución de 4- ( 4 , 4 , 5 , 5-tetrametil-1 , 3 , 2-dioxaborolan-2-il ) indan-l-ona 34 (7.0 g, 27.1 mmol) y 4-cloro-3-nitroanisol (5.1 g, 27.1 mmol) en una mezcla de dioxano (80 mL) y agua (20 mL) . La mezcla obtenida se calentó a 80°C bajo argón, se mantuvo a esta temperatura durante 16 h (monitoreo mediante TLC, eluyente : hexano-acetato de etilo, 1:1), se enfrió, se filtró a través Celite, se evaporó, y se disolvió en CH2C12. Luego la mezcla se extrajo por filtración proveniente de la porción insoluble, se evaporó con gel de sílice, y se purificó en una columna de gel de sílice gruesa corta (eluyente : hexano-CH2Cl2 100:0 ? 0:100, CH2Cl2-acetato de etilo 100:0 ? 50:50). Rendimiento de 35:5.59 g. El producto se utilizó en el siguiente paso sin purificación adicional. 8-Metoxi-l , 6-dihidrociclopenta [c] carbazoI-3 (2H) -ona (36) .

Se obtuvo bifenilo 35 (5.59 g) se dividió en cinco porciones (cada 1.11 g) ; luego se agregó P(OEt)3 (por 7 mL) a cada porción. La mezcla resultante se sometió bajo un argón en un matraz, se calentó hasta 90°C, se mantuvo a esta temperatura durante 3 días, y se refrigeró. El Carbazol se precipitó. Luego la mezcla de reacción se diluyó con éter; el precipitado se extrajo por filtración y se lavó con CH2C12. Si el bifenilo inicial se quedó en el filtrado (monitoreo mediante TLC, eluyente : hexano-acetato de etilo, 1:1), este filtrado se evaporó y se agregó P(OEt)3 (por 1 mL en cada matraz). La mezcla se sometió para ciclización repetida durante un día. El procedimiento se repitió hasta que la precipitación se dejó y los datos de la TLC muestran la ausencia del bifenilo inicial. Rendimiento total de carbazol 36: 2.16 g. 6- [3- (Dimet±lam±no)prop±l] -8-metoxi-l , 6- dihidrociclopenta [c] carbazol-3 (2H) -ona (37) .

Se suspendió el compuesto 36 (1.0 g, 3.98 mmol) en CH2C12 (10 mL) ; se agregó NaH (0.75 g, 12.0 mmol, 3 eq.). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5-10 min; luego se agregó clorhidrato de 3-dimetilamin-l-propilcloruro (0.75 g, 4.74 mmol, 1.2 eq.). La mezcla de reacción se calentó a 70°C, se mantuvo a esta temperatura durante 2 h (monitoreo mediante TLC, eluyente : CH2Cl2-acetato de etilo, l:l-la presencia de carbazol inicial, CHCl3-MeOH, 9:l-del producto puro) . La mezcla resultante se diluyó con agua, se extrajo con acetato de etilo, se evaporó, y se purificó en una columna de gel de sílice gruesa corta, eluyente : CHC13-MeOH 99:1 ? 90:10. Rendimiento de 37:0.84 g (63%). 9-Acetil-6- [3- (dimetilamino) ropil] -8-metoxi-l , 6- dihidrociclopenta [c] carbazol-3 (2H) -ona (38) .

Se enfrió en un baño con hielo una solución del compuesto 37 (0.84 g, 2.51 mmol) en PhN02 (20 mL) . Luego A1C13 (1.7 g, 12.7 mmol, 5 eq. ) y después, se agregó AcCl (0.9 mL, 12.7 mmol, 5 eq.) . La mezcla se mantuvo durante 40 min (monitoreo mediante LC/MS), se diluyó con agua, se neutralizó con Na2C03, se extrajo con CHC13, y se evaporó. El producto se purificó en una columna gruesa corta, eluyente:CHCl3-MeOH 99:1 ? 90:10. Rendimiento de 38:0.658 g (69%) . 9-Acetil-6- [3- (dimetilamino)propil] -8-hidroxi-l , 6- dihidrociclopenta [c] carbazol-3 (2H) -ona (Ejemplo 4; 19c).

Se agregó gota a gota una solución de BBr3 0.5 M (16.5 mL, 5 eq. ) bajo argón a una solución del compuesto 38 (0.658 g, 1.74 mmol) en CH2C12 (100 mL) se enfrió a -40°C. La mezcla se mantuvo durante 10 min; luego el baño de enfriamiento se retiró y la mezcla se calentó a temperatura ambiente y se mantuvo durante 1-2 h (monitoreo mediante TLC, eluyente: CHCl3/NH3- eOH, 9:1). La mezcla resultante se vació en una mezcla de solución NaHC03 acuosa y CH2C12. La capa orgánica se separó; el acuoso se extrajo con CH2C12, se secaron sobre Na2S04, se evaporó, y se disolvió en una mezcla: CHl3-MeOH-agua, 40:9:1. El producto se purificó en una columna de gel de sílice con el uso de la mezcla posterior como un eluyente. Rendimiento del Ejemplo 4: 0.258 g (41%). Para la preparación de los clorhidrato, el producto se aisló, se disolvió en una mezcla: CH2Cl2-MeOH; se agregó una solución del HC1 en dioxano. La mezcla resultante se evaporó para secado; el residuo se lavó con éter. lH NMR espectro (DMSO-d6): d 2.14-2.20 (2H, m) ; 2.70 (6H, d, J=4.9 Hz); 2.78- 2.81 (2H, m) ; 3.12-3.17 (2H, m) ; 3.60-3.62 (2H, m) ; 4.51 (2H, t, J=7.1 Hz) ; 7.28 (1H, s); 7.73 (2H, s - sistema AB degenerado); 8.55 (1H, s); 10.40 (1H, br. s); 12.76 (1H, s) . ELSD: 100%, ESI-MS: m/z 364 [M+H].+ Ejemplo 5 4,4' -Dimetoxi-2-nitrobifenilo (39) Se agregó potasa (9.10 g, 65.9 mmol) y Pd(PPh3)4 (1.90 g, 1.6 mmol) a una solución de ácido 4-metoxifenilborónico (5.0 g, 32.9 mmol) y 4-cloro-3-nitroanizol (6.17 g, 32.9 mmol) en una mezcla de dioxano (80 rnJL) y agua (20 mL) . La mezcla resultante se calentó a 80°C bajo argón, se mantuvo a esta temperatura durante 16 h (monitoreo mediante TLC, eluyente : hexano-acetato de etilo, 4:1), se enfrió, y se filtró a través Celite. El producto se lavó fuera con CH2C12. El residuo se disolvió en CH2C12 y se purificó sobre una columna gruesa corta (eluyente : hexano- CH2C12-100:0 ? 0:100, CH2Cl2-acetato de etilo 100:0 ? 50:50). Rendimiento de 1:8.47 g. 2,7-dimetoxi-9H-carbazol (40) El compuesto 39 (8.47 g) se dividió en ocho porciones (cada 1.06 g) . Luego, se agregó a cada porción P(0Et)3 (por 7 mL) . La mezcla resultante se sometió bajo argón, se calentó a 90°C, se mantuvo a esta temperatura durante 3 días, se enfrió, y se diluyó con éter. El precipitado obtenido se filtró y se lavó con CH2C12. Rendimiento de carbazol 40:3.33 g. [3- (2 , 7-dimetoxi-9H-carbazol-9-il)propil] dimetilamina (40) Se suspendió en DMF (6 mL) el compuesto 40 (0.7 g, 3.1 mmol). Se agregó hidruro de sodio (0.4 g, 10.0 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5-10 min. Luego se agregó clorhidrato de 3-dimetilamino-l-propilcloruro (0.73 g, 4.6 mmol). La mezcla obtenida se calentó a 50-60°C, se mantuvo a esta temperatura durante 16 h (monitoreo mediante TLC, eluyente : CH2C12 - acetato de etilo, l:l-la presencia del carbazol inicial; CH2Cl2-MeOH, 9:1 - la pureza del producto), y se diluyó con agua. El precipitado blanco obtenido se dejó para reposo durante 1 h, se extrajo por filtración, y se secaron en aire. Rendimiento de 41:0.96 g (100%) . 1 , 1' -{ 9- [3- (dimetilamino)propil] -2 , 7-dimetoxi-9H-carbazol- 3, 6-diil}dietanona (42) Se disolvió el compuesto 41 (0.96 g, 3.2 mmol) en PhN02 (20 mL) ; la solución se enfrió en un baño con hielo. Luego, se agregó AcCl (1.1 mL, 15.4 mmol), seguido mediante A1C13 (2.1 g, 15.7 mmol) en porciones. La mezcla resultante se mantuvo durante 40 min (monitoreo mediante LC/MS) , se diluyó con agua, se neutralizó con Na2C03, se extrajo con CHCI3, y se evaporó. El producto se purificó sobre una columna de gel de sílice gruesa corta. Rendimiento de 42:0.787 g (62%) 1 , 1' -{9- [3- (dimetilamino)propil] -2 , 7-dihidroxi-9H- carbazol-3 , 6-diil}dietanona (Ejemplo 5; 19b).

Se agregó gota a gota una solución de BBr3 0.5 M (22.5 mL) bajo argón a una solución del compuesto 42 (0.787 g, 1.99 mmol) en CH2C12 (90 mL) , se enfrió a -40°C. Después de 10 min, a un baño de enfriamiento se retiró; la mezcla se calentó arriba de una temperatura ambiente y se mantuvo durante 1-2 h (monitoreo mediante TLC, eluyente : cloroformo-metanol, 4:1). La mezcla resultante se vació en una mezcla de la solución de soda acuosa y CH2C12. La capa orgánica se separó. La capa acuosa se extrajo con CH2CI2, se secaron sobre Na2S04, se evaporó, y se disolvió en una mezcla de CHCl3-MeOH-agua, 40:9:1. El producto se purificó sobre una columna. Rendimiento de Ejemplo 5: 0.379 g (52%).

Luego el producto se disolvió en una mezcla de CH2Cl2-MeOH. Se agregó una solución de HC1 en dioxano. La solución resultante se evaporó para secado; el residuo se lavó con CH3CN y éter. A partir de una base formadora del producto se aisló del clorhidrato (0.379 g) 0.339 g. 1H NMR (DMSO-d6) d: 2.09-2.13 (2H, m) ; 2.72 (6H, s ) ; 2.77 (6H, s); 3.13-3.16 (2H, m) ; 4.34 (2H, t, J=7.1 Hz); 7.13 (2H, s); 8.84 (2H, s) ; 10.17 (1H, br. s) ; 12.82 (2H, s).

ELSD: 100%, ESI-MS: m/z 369 [M+H]+.

Ejemplo 6 4- (2-Nitrofenil) indan-l-ona (45) .

Se agregó potasa (8.1 g, 58.7 mmol) y Pd(PPh3)4 (1.7 g, 1.5 mmol) a una solución del compuesto 44 (7.51 g, 29.1 mmol) y 4-cloro-3-nitrobenceno (4.6 g, 29.1 mmol) en una mezcla de dioxano (60 mL) y agua (20 mL) . La mezcla obtenida se calentó bajo argón a 80°C, se mantuvo a esta temperatura durante 16 h (monitoreo mediante TLC, eluyente : hexano-acetato de etilo, 1 : 1), se enfrió, se filtró a través Celite, y se evaporó. El producto resultante se disolvió en CH2CI2 y un residuo insoluble se extrajo por filtración. El producto resultante se evaporó con gel de sílice y se purificó sobre una columna gruesa corta (eluyente : hexano - CH2C12 100:0 —>· 0:100, CH2Cl2-acetato de etilo 100:0 ? 50:50). El compuesto 45 (5.0 g) se aisló y se utilizó en el siguiente paso sin purificación. 1 , 6-Dihidrociclopenta [c] carbazol-3 (2H) -ona (46) .

Se dividió el compuesto 45 (5.0 g) en cinco porciones (cada 1.0 g). Se agregó a cada porción P(OEt)3 (por 7 mL) . El producto resultante se sometió bajo argón en un matraz, se calentó a 90°C, se mantuvo a esta temperatura durante 3 días, luego se enfrió. El precipitado de carbazol se diluyó con éter. El precipitado se filtró y se lavó con éter. Si el bifenilo inicial se presentó en el filtrado (monitoreo mediante TLC, eluyente : hexano-acetato de etilo, 1:1), este filtrado se evaporó, luego se agregó P(OEt)3 (1 mL para cada matraz), y sometió para ciclización durante 1 día. El proceso se repitió hasta que cesó el precipitado y la TLC mostró la ausencia del bifenilo inicial. Se obtuvo carbazol 46 (2.7 g) . 2-Ni ro-N-propilbencensulfonamida (49) . se agregó gota a gota, una solución de 2-nitrofenilsulfocloruro (8 g, 36 mmol) en acetato de etilo (25 mL) a temperatura ambiente a una mezcla de propilamina (3 mL, 36.0 mmol), acetato de etilo (15 mL) , Na2C03 (4 g, 37.7 mmol), y agua (25 mL) . La solución resultante se agitó durante 2 h (monitoreo mediante TLC, eluyente : CH2CI2) . La capa orgánica se separó, se lavó con agua, una solución de ácido cítrico, se secaron sobre Na2S04, y se evaporó. El precipitado cristalizado como una masa blanca, la cual se lavó fuera con hexano. Rendimiento de 49: (7.47 g, 85%).

N- (3-Bromopropil) -2-nitro-N-propilbencensulfonamida (50). 1 , 3-Dibromopropano (8.5 mL, 82.0 mmol, 10 eq.) se agregó a una solución del compuesto 49 (2.0 g, 8.2 mmol) en DMF (20 mL) . Luego se agregó en porciones NaH (0.6 g, 15.0 mmol) . La temperatura aumentó a 50-60°C. La mezcla se agitó a esta temperatura durante 20 min (monitoreo mediante TLC, eluyente : CH2C12) . Luego la mezcla se vació cuidadosamente en hielo. El producto se extrajo con acetato de etilo, y el extracto se evaporó. El residuo se lavó a partir de 1,3-dibromopropano con hexano. El producto resultante se disolvió en CH2C12 y se purificó sobre una columna de gel de sílice gruesa corta, eluyente : hexano- CH2CI2 100:0 ? 0:100. El compuesto 50 (1.87 g, 62%) se aisló rápidamente como un aceite cristalizable . 2-Nitro-N- [3- (3-oxo-2 , 3-dihidrociclopenta [c] carbazol- 6 (1H) -il)propil] -N-propilbencensulfonamida (47) .

Se disolvió el compuesto 46 (0.538 g, 2.43 mmol) y bromuro 50 (0.9 g, 2.46 mmol) en CH2C12 (30 mL) . Luego se agregó NaH (0.15 g, 3.75 mmol, 1.5 eq. ) . La mezcla de reacción se agitó durante 20 min (monitoreo mediante TLC, eluyente : hexano-acetato de etilo, 1:1) . Luego, la mezcla se vació en hielo. El producto se extrajo con acetato de etilo, y el extracto se evaporó en un evaporador rotacional. El residuo se retiró del CH2CI2 en alto vacio. El metanol se agregó al precipitado endurecido. El producto se trituró; el precipitado se extrajo por filtración. Rendimiento de 47: 0.638 g (52%) .

N-[3- (9-Acetil-3-oxo-2 , 3-dihidrociclopenta [c] carbazol- 6 (1H) -il)propil] -2-nitro-N-propilbencensulfonamida (48) .

Se disolvió el compuesto 47 (0.638 g, 1.26 mmol) en PhN02 (7 mL) . La solución se enfrió en un baño con hielo, AICI3 (0.67 g, 5.02 mmol) y luego se agregó AcCl (0.45 mL, 6.31 mmol). La mezcla se mantuvo durante 40 min (monitoreo mediante LC/MS) , se diluyó con agua. El producto se extrajo con CH2C12. El extracto se evaporó. El residuo se evaporó, y el producto se pasó a través Celite, eluyente : CH2Cl2-acetato de etilo 100:0 ? 50:50 . Rendimiento de 48: 0.453 g (66%). 9-Acetil-6- [3- (propilamino) ropil] -1 , 6- dihidrociclopenta [ccarbazol-3 (2H) -ona (Ejemplo 6).

Se suspendió el compuesto 48 (0.496 g, 0.91 mmol) en una mezcla de MeOH (10 mL) y CHC13 (15 mL) . La mezcla se calentó a ebullición. Luego se agregó CS2CO3 (0.6 g, 1.82 mmol) y en seguida se vació PhSH (0.2 mL, 1.96 mmol) (solución tornada azul) . La solución resultante se llevó a reflujo durante 2 h (monitoreo mediante TLC, eluyente : CHCI3-MeOH, 9:1). Durante este periodo la mezcla de reacción se tornó verde. Luego, la mezcla se evaporó para secado. Se agregó una solución diluida del ácido cítrico. Se extrajo por filtración un precipitado amarillo, se lavó con éter, se suspendió en CH3CN, y reflujo. Luego se enfrió, el precipitado beige se extrajo por filtración proveniente del filtrado amarillo, y luego se lavó con éter. El producto resultante (0.251 g, 76%) se aisló. Para la transformación de la forma básica en el clorhidrato, el producto se disolvió en mezcla de CH2Cl2-metanol . (La mezcla se agregó hasta que el producto se disolvió completamente.) Luego, se agregó una solución del ácido clorhídrico en dioxano. La solución se evaporó para secado. Un precipitado oscuro-lila obtenido se lavó con metanol y acetonitrilo . Rendimiento del Ejemplo 6 como clorhidrato: 0.118 g.

H1-NMR (400 MHz, DMSO-d6) espectro: d 0.88 (3H, t, J=7.32 Hz); 1.53-1.62 (2H, m) ; 2.13-2.20 (2H, m) ; 2.73 (2H, s); 2.80-2.83 (4H, m) ; 2.95-2.96 (2H, m) ; 3.65-3.68 (2H, m) ; 4.68 (2H, t, J=7.3 Hz); 7.81 (1H, d, J-8.6 Hz) ; 7.85 (1H, d, J=8.6 Hz); 8.15 (1H, dd, J=8.6 Hz, J=1.3 Hz) ; 8.70 (1H, br. s); 8.71 (1H, d, J=1.3 Hz). ELSD: 100%, ESI-MS: m/z 362 [M+H]+.

Ejemplo 7 N- (2-Hidroxietil) -2-nitrobencensulfonamida (54) .

Se disolvió etanolamina (10 mL, 165 mmol) en acetato de etilo (60 mL) . Luego se agregó una solución de Na2C03 (22.7 g, 214.2 mmol) en agua (100 mL) . Luego, se agregó gota a gota una solución de cloruro de 2-nitrobencensulfonilo (35.0 g, 157.9 mmol) en acetato de etilo (100 mL) bajo agitación. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h (monitoreo mediante TLC, eluyente : CH2C12) . La capa orgánica se separó, se lavó con agua y una solución de ácido cítrico, se secaron sobre Na2SC , y se evaporó. Rendimiento de 54: 29.5 g (73%) como cristales blanco .

Metansulfonato de 2- {[ (2-nitrofenil) sulfonil] amino}etilo (55) .

Se agregó, trietilamina (20 mL, 144.6 mmol) a una solución del compuesto 54 (29.5 g, 119.9 mmol) en acetato de etilo (300 mL) . La mezcla se enfrió a 10°C en un baño con hielo. Luego, se agregó gota a gota una solución del cloruro de mesilo (10.2 mL, 131.8 mmol) en acetato de etilo (50 mL) a una temperatura de <20°C. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 3 h (monitoreo mediante TLC, eluyente : hexano-acetato de etilo, 4:1). La mezcla de reacción se filtró para eliminar el precipitado - clorhidrato de trietilamina. El filtrado se lavó con NaHC03 acuoso, agua, y se evaporó. Rendimiento de 55: 32.2 g (83%) como cristales . 1- [ (2-Nitrofenil) sulfonil] aziridina (56) .

Se agregó una solución de KOH (1.73 g, 31 mmol) en agua (50 mL) a una solución del compuesto 55 (10 g, 31 mmol) en acetato de etilo (100 mL) . La capa acuosa torno en amarillo. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h (monitoreo mediante TLC, eluyente : acetato, 1:1). Si es necesario, se agregó porciones adicionales de solución KOH (0.5 eq. ) . La capa orgánica se separó, se lavó totalmente con agua, una solución de ácido cítrico (a pH 7), nuevamente con agua, se secaron sobre Na2S04, y se evaporaron. Rendimiento de 56: 6.6 g (93%) como un fluido de aceite amarillo deseado.

N- [2- (9H-Carbazol-9-il) etil] -2-nitrobencensulfonamida (51) .

Se disolvió carbazol (1.10 g, 6.59 mmol) en CH3CN (40 mL) . Luego se agregó hidrato de sodio (0.33 g, 8.25 mmol), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15-20 min. Luego, se agregó una solución de aziridina 56 (1.5 g, 7.89 mmol) en CH3CN (30 mL) en una porción. La mezcla resultante se agitó durante 1 h (monitoreo mediante TLC, eluyente : hexano-acetato de etilo, 1:1), se vació en agua, acidificada con HC1 a pH 1, y se agitó nuevamente a temperatura ambiente. Gradualmente, se precipitó un producto naranja proveniente de la solución túrbida. El precipitado se filtró, y se lavó con eOH y éter. Rendimiento de 51: 2.15 g (83%) como cristales naranja.

N- [2- (3 , 6-Diacetil-9H-carbazol-9-il) etil] -2- nitrobencensulfonamida (52) .

Se disolvió el compuesto 51 (5.0 g, 12.7 mmol) en PhN02 (30 mL) . La solución se enfrió en un baño con hielo. Luego se agregó A1C13 (8.5 g, 63.7 mmol) y después de AcCl (4.5 mL, 63.1 mmol). La mezcla se mantuvo durante 40 min (monitoreo mediante LC/MS) , se diluyó con agua, se extrajo con cloroformo, y se evaporó. El producto se purificó sobre una columna de gel de sílice gruesa corta, eluyente: CH2C12-etil acetato 100:0 ? 50:50. Una mezcla de etanol y amonio acuoso al 25% (4:1) se agregó al residuo. El producto resultante se llevó a reflujo durante 1.5-2 h. Se extrajo por filtración una suspensión caliente. El producto 52 se aisló (4.11 g, 68%) como cristales beige. 1 ,1' - [9- (2-Aminoetil) -9H-carbazol-3 , 6-diil] dietanona (53) .

Se disolvió el compuesto 52 (4.11 g, 8.58 mmol) bajo reflujo en una mezcla de CH3CN (150 mL) y metanol (50 mL) . Luego, se agregó Cs2C03 (8.4 g, 25.78 mmol) y enseguida se vació en PhSH (2.6 mL, 25.48 mmol). La mezcla resultante se llevó a reflujo durante 2.5 h (monitoreo mediante TLC, eluyente: cloroformo-metanol, 9:1) y se evaporó para secado. Luego, se agregó agua y una solución del HC1. Como resultado, se disolvió todos los productos sólidos. La solución acidificada acuosa se extrajo con acetato de etilo hasta que lo último se deja de poner amarillo. La capa acuosa se neutralizó con una solución saturada de NaHCC>3, se extrajo con una mezcla de CH2Cl2-MeOH (4:1), y se evaporó. El residuo se lavó fuera con MeCN y se lavó con éter. Rendimiento de 53: 1.25 g (50%) como cristales beige. 1,1' { 9- [2- (Isopropilamino) etil] -9H-carbazol-3 , 6- diil }dietanona (Ejemplo 7; 6h) .

Se agregó acetona (5 mL, 68.10 mmol) a una solución del compuesto 53 (1.25 g, 4.25 mmol) en CH2C12 (50 mL) . Luego se agregó STAB (3.0 g, 14.15 mmol). La mezcla obtenida se agitó a temperatura ambiente durante 4.5 h (monitoreo mediante TLC, eluyente: CHCl3-MeOH, 9:1) y luego se vació en una solución acuosa de NaHC03. La capa orgánica se separó. La capa acuosa se extrajo con CH2C12. El producto se secó sobre Na2S04 y se evaporó. El residuo se purificó sobre una columna, eluyente: CHCl3-MeOH 99:1 ? 90:10. El ejemplo 7 (1.04 g, 73%) se aisló como un aceite cristalinizado rápidamente. Para la preparación de estos clorhidratos, la base se disolvió en CH2C12. Luego, se agregó una solución del HC1 en dioxano. La mezcla se evaporó para secado. El producto se lavó con éter.

:H NMR (DMS0-d6) espectro: d 1.25 (6H, d, J=6.6 Hz); 2.72 (6H, s); 3.33-3.39 (3H, m) ; 4.87 (2H, t, J=7.3 Hz); 7.92 (2H, d, J=8.7 Hz); 8.17 (2H, dd, J=8.7 Hz, J=l .6 Hz); 9.01 (2H, d, J=l .6 Hz); 9.24 (1H, br. s) ; 9.33 (1H, br. s). ELSD: 100%, ESI-MS: /z 336 [M+H].~ Ejemplo 8 La síntesis del compuesto 51 se describió Ejemplo 7.

N-{2- [3, 6-bis (3-cloropropanoil) -9H-carbazol-9-il] etil} -2- nitrobencensulfonamida (57) .

Se disolvió el compuesto 51 (20.0 g, 50.6 mmol) en PhN02 (130 mL) y la solución se enfrió en un baño con hielo. Luego se agregó AICI3 (34.0 g, 254.7 mmol) y después, cloruro de 3-cloropropionilo (25.0 mL, 259.8 mmol). La mezcla se mantuvo durante 40 min (monitoreo mediante LC/MS) , se vació en una mezcla de se diluyó HCl y hielo, se extrajo con CHC13, y se permitió durante 16 h. La residuo obtenido se precipitó, se filtró y se lavó con éter. Rendimiento de 57: 18.47 g (63%) .

N- [2- (3 , 9-dioxo-l ,2,3,9,10, ll-hexahidro-6H- diciclopen a [c , g] carbazol-6-il) etil-2- nitrobencensulfonamida (58) El ácido sulfúrico (200 mL) se calentó a 40°C. Luego, se agregó en porciones el compuesto 57 (18.47 g, 32.12 mmol) . La mezcla se calentó a 90°C y se mantuvo a esta temperatura durante 1.5-2 h (monitoreo mediante TLC, eluyente: CH2Cl2-acetato de etilo, 4:1). La mezcla resultante se vació en hielo. El precipitado gris se extrajo por filtración, se lavó sobre un filtrado con una mezcla de CHCl3-MeOH (4:1). El precipitado restante (en un filtro) se volvióa cristalizar con DMF, se lavó con CH3CN y éter. Rendimiento puro 58: 2.2 g (14%). 6- (2-aminoetil) -10 , 11-dihidro-lH- diciclopenta[c,g] carbazol-3, 9 (2H,6H) -diona (59) Se suspendió el compuesto 58 (2.2 g, 4.38 mmol) en una mezcla de cloroformo (200 mL) y metanol (200 mL) . Luego se agregó Cs2C03 (4.3 g, 13.20 mmol) y en seguida PhSH (1.3 mL, 12.74 mmol). La solución se llevó a reflujo durante 18 h (monitoreo mediante LC/MS) y se evaporó para secado. Luego, se agregó una solución acuosa de ácido cítrico. La solución obtenida se neutralizó con una solución de NaHC03 acuosa. El precipitado se extrajo por filtración, se lavó con CH3CN y éter. El producto aislado se utilizó en el siguiente paso sin purificación. 6- [2- (isopropilamino) etil] -10 , 11-dihidro-lH- diciclopenta [c,g] carbazol-3, 9 (2H,6H) diona (Ejemplo 8).

El compuesto 59 (1.69 g) crudo se suspendió en CH2C12 (200 mL) . Luego se agregó acetona (4 mL) y STAB (3.4 g) . La mezcla se agitó durante 24 h (monitoreo mediante TLC, eluyente: CHCl3-MeOH, 9:1), luego se vació en una solución NaHC03 acuosa. Luego, se agregó otra porción de CH2C12 y MeOH. La capa orgánica se separó, se evaporó, se lavó con MeCN y éter. Rendimiento del Ejemplo 8: 0.759 g. Para la preparación de los clorhidratos, el producto aislado se suspendió en una mezcla de CH2C12 y MeOH, luego se agregó una solución del HC1 en dioxano. La mezcla resultante se evaporó para secado, y se agregó etanol al residuo. La solución etanólica se llevó a reflujo y se enfrió, y el precipitado se filtró. Rendimiento del compuesto Ejemplo 8 clorhidrato: 0.684 g. 1H-NMR (DMSO-d6) espectro: d 1.24 (6H, d, J=6.6 Hz); 2.77-2.79 (4H, m) ; 3.34-3.43 (3H, m) ; 3.81-3.84 (4H, m) ; 4.91 (2H, t, J=7.3 Hz) ; 7.83 (2H, d, J=8.6 Hz) ; 7.91 (2H, d, J=8.6 Hz); 9.11 (2H, br. s) . ELSD: 100%, ESI-MS: tn/z 360 [M+H].+ Ejemplo 9 N-Etil-2-nitrobencensulfonamida (63) .

Se agregó gota a gota una solución de cloruro de 2- nitrobencensulfonilo (140 g, 361 mmol) en acetato de etilo (250 mL) a temperatura ambiente a una mezcla acuosa de etilamina al 70% (50 mL, 630 mmol), acetato de etilo (100 mL) , Na2C03 (67 g, 632 mmol), y agua (250 mL) . La mezcla de reacción se agitó durante 4 h (monitoreo mediante TLC, CH2CI2) . La capa orgánica se separó, se lavó con agua, con una solución de ácido cítrico, se secaron con Na2S04, y se evaporó. El residuo se solidifico en una masa blanca cristalina. Lo último se trituró con hexano, se extrajo por filtración, y se secaron para proporcionar 134 g (92%) del producto.

N- (3-Bromopropil) -N-etil-2-nitrobencensulfbnamida (64) .

Se disolvió el compuesto 63 (7.8 g, 33.9 mmol) en DMF (100 mL) . Se agregó en porciones 1, 3-dibromopropano (35 mL, 343.0 mmol) y luego NaH (2.7 g, 67.5 mmol), con lo cual la temperatura aumentó a 50-60°C. La mezcla de reacción se agitó a esta temperatura durante 1 h (monitoreo mediante TLC, CH2C12) , se vació cuidadosamente en una mezcla de hielo/agua, y se extrajo con acetato de etilo. El extracto se evaporó. El residuo se lavó con hexano para eliminar el 1,3-dibromopropano . Se obtuvo el compuesto 64 (9.7 g, 82%) como un aceite amarillo viscoso.

N- [3- (9H-Carbazol-9-il)propil] -N-etil-2- nitrobencensulfonamida (60) .

Se disolvió carbazol (4.15 g, 24.8 mmol) y bromuro 64 (9.7 g, 27.6 mmol) en DMF (30 mL) . Se agregó en porciones NaH (2.0 g, 50.0 mmol, 2 eq) , con lo cual la temperatura aumentó a 60°C. La mezcla de reacción se agitó durante 1 h (monitoreo mediante TLC, hexano/acetato de etilo 3:2), se vació en una mezcla de hielo/agua, y se extrajo con acetato de etilo. El residuo se trituró con éter. El precipitado amarillo se extrajo por filtración y se secaron para proporcionar 6.65 g (61%) del producto.

N-{3- [3, 6-Bis (3-cloropropanoil) -9H-carbazol-9-il]propil}- N-etil-2- nitrobencensulfonamida (61) .

Se disolvió el compuesto 63 (6.65 g, 15.2 mmol) en PhN02 (70 mL) . La solución se enfrió en un baño con hielo. Se agregó AICI3 (12.2 g, 91.4 mmol) y luego cloruro de 2-cloropropionilo (8.8 mL, 91.4 mmol). La mezcla de reacción se mantuvo durante 40 min (monitoreo mediante LC/MS) , se diluyó con agua, y se extrajo con CH2CI2. El extracto se evaporó. El residuo se purificó mediante cromatografía en una columna gruesa corta (eluyente: CH2Cl2/acetato de etilo 0:100 ? 50:50. El residuo se trituró con éter, se extrajo por filtración, y se secaron para proporcionar 7.60 g (81%) de un producto verduzco cristalino.

N- [3- (3 , 9-Dioxo-l , 2 , 3 , 9 , 10 , ll-hexahidro-6H- diciclopenta [c,g] carbazol-6-il)propil] -N-etil-2- nitrobencensulfonamida (62) .

Se calentó H2S04 (110 mL) a 40°C. Se agregó en porciones el compuesto 61 (7.6 g, 12.3 mmol) . La mezcla de reacción se calentó a 100°C, se mantuvo a esta temperatura durante 2 h (monitoreo mediante TLC, CH2Cl2/acetato de etilo 4:1), y se vació en hielo. El precipitado gris formado se extrajo por filtración. Luego se vació CHCl3/MeOH 4:1 (500 mL) en el filtrado. El sólido en el filtrado se disolvió, y la solución formada se transfirió en un embudo para separación. Se agregó una solución acuosa de Na2C03. La capa orgánica se separó, se secaron con a2S04, y se evaporó. Se agregó acetonitrilo al residuo. Se extrajo por filtración un precipitado beige, se lavó con acetonitrilo, con éter, y se secaron para proporcionar 1.56 g (23%) de un producto cristalino beige. 6- [3- (Etilamino)propil] -10 , 11-dihidro-lH- diciclopenta[c,g] carbazol-3, 9 (2H, 6H) -diona (Ejemplo 9).

Se suspendió el compuesto 62 (1.56 g, 2.86 mmol) en una mezcla de CHC13 (80 mL) y eOH (80 mL) . Luego se agregó Cs2C03 (2.8 g, 8.59 mmol) y PhSH (0.87 mL, 8.53 mmol) inmediatamente. La mezcla de reacción se llevó a reflujo durante 6 h (monitoreo mediante TLC, CHCl3/ eOH 9:1) y se evaporó para secado. Se agregó el ácido cítrico acuoso. La solución se neutralizó con una solución de NaHCC>3. El precipitado formado se extrajo por filtración, se lavó con acetato de etilo, acetonitrilo, agua, nuevamente con acetonitrilo, y con éter para proporcionar 0.75 g (73%) del producto. Lo último se transformó a este clorhidrato. Después de la evaporación con HC1 4M en dioxano, el residuo se lavó con MeOH para proporcionar 0.59 g del clorhidrato. XH NMR (DMSO-d5): d 1.66 (3H, t, J=7.3 Hz) ; 2.09-2.17 (2H, m) ; 2.73-2.77 (4H, m) ; 2.86-2.91 (2H, m) ; 2.95-3.10 (2H, m) ; 3.77-3.80 (4H, m) ; 4.70 (2H, t, J=7.3 Hz) ; 7.80 (2H, d, J=8.6 Hz); 7.89 (2H, d, J=8.6 Hz) ; 8.83 (2H, br.s). ELSD: 100%, ESI-MS: m/z 360 [M+H]+.

Ejemplos 10 y 11 síntesis del compuesto 46 se describe Ejemplo 6 6- [2- (l-metilpirrolidin-2-il) etil] -1 , 6- dihidrociclopenta [c] carbazol-3 (2H) -ona (65) .

Se disolvió carbazol 46 (0.4 g, 1.81 mmol) en CH2C12 (7 mL) , luego se agregó NaH (0.22 g, 5.50 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5-10 min, y se agregó clorhidrato de 2- (2-cloroetil ) -l-metilpirrolidina (0.4 g, 2.17 mmol). La mezcla se calentó a 60°C y se mantuvo a esta temperatura durante 4 h (monitoreo mediante TLC, eluyente: CHCl3-MeOH, 9:1) . La mezcla resultante se vació en agua. El producto se extrajo con acetato de etilo, se secaron sobre Na2S04, y se evaporó. El residuo se trituró con éter. El precipitado se extrajo por filtración. Rendimiento de 65: 0.365 g (61%) -S-isómero y 0.336 g (55%) -R-isómero. 9-acetil-6- [2- (l-metilpirrolidin-2-il) etil] -1, 6- dihidrociclopenta [c] carbazol-3 (2H) -ona (Ejemplos 10 y 11).

Se disolvió el compuesto 65 (0.336 g, 1.00 mmol) en PhN02 (7 mL) . La solución se refrigeró en un baño con hielo. Luego, se agregó A1C13 (0.67 g, 5.02 mmol) y después, AcCl (0.36 mL, 5.04 mmol). La mezcla resultante se mantuvo durante 40 min (monitoreo mediante LC/MS) , se diluyó con agua, se neutralizó con solución NaHC03 acuosa, se extrajo con CHCI3, y se evaporó. El producto se purificó sobre una columna gruesa corta, eluyente: 100:0 ->· 90:10. Rendimiento de producto: 0.307 g (82%) (R) ; S-isómero obtenido similarmente (77%).

Ejemplo 10

[0174] ^"H-NMR (DMSO-d6) espectro: d 1.69-1.79 (1H, m) ; 1.86-2.01 (2H, m) ; 2.07-2.24 (2H, m) ; 2.42-2.56 (1H, m) ; 2.73 (3H, s); 2.75 (3H, d, J=5.12 Hz) ; 2.79-2.82 (2H, m) ; 2.96- 3.05 (1H, m) ; 3.36-3.43 (1H, m) ; 3.49-3.57 (1H, m) ; 3.64-3.67 (2H, m) ; 4.62?.75 (2H, m) ; 7.80 (1H, d, J=8.6 Hz) ; 7.87 (1H, d, J=8.6 Hz) ; 7.96 (1H, d, J=8.6 Hz); 8.19 (1H, dd, J=8.6 Hz, J=1.5 Hz); 8.70 (1H, d, J=1.5 Hz); 10.63 (1H, br. s). ELSD: 100%, ESI-MS: m/z 374 [ +H]+.

Ejemplo 11

[0175] 1H-NMR (DMS0-d5) : d 1.69-1.79 (1H, m) ; 1.86-2.01 (2H, m) ; 2.05-2.24 (2H, m) ; 2.40-2.46 (1H, m) ; 2.73 (3H, s); 2.75 (3H, d, J-5.12 Hz); 2.79-2.82 (2H, m) ; 2.98-3.02 (1H, m) ; 3.36-3.43 (1H, m) ; 3.47-3.57 (1H, m) ; 3.63-3.66 (2H, m) ; 4.62-4.75 (2H, m) ; 7.80 (1H, d, J=8.6 Hz); 7.87 (1H, d, J=8.6 Hz); 7.96 (1H, d, J=8.8 Hz) ; 8.18 (1H, dd, J=8.8 Hz, J=l .4 Hz) ; 8.69 (1H, d, J=1.4 Hz) ; 10.72 (1H, br. s) . ELSD: 100%, ESI-MS: m/z 374 [M+H]+.

Síntesis del Ejemplo Paso 1. 4-hidroxiindan-l-ona (86) Se agregó gota a gota cromanona 85 (100 g, 0.68 mol) a la mezcla 150 g de NaCl y 500 g de A1C13 a 150°C. La mezcla resultante se calentó a 180°C, luego se agitó durante 8 h. La mezcla luego se enfrió a temperatura ambiente y se agregó 1 kg de hielo triturado con agitación intensa. Después de la homogenización, la mezcla se filtró, se lavó con 1 L agua fria, y se secaron para proporcionar aproximadamente 80g (80%), 4-hidroxiindan-l-ona (86) como un sólido gris.

Paso 2. trifluoromethanesulfonato de l-oxo-2 , 3-dihidro-lH- inden-4-ilo (87) Se agregó gota a gota, anhídrido triflico (152 g, 0.54 mol) a la solución 80 g del compuesto 86 y 60 g del NEt3 en CH2C12 1L a 0°C. La mezcla resultante se llevó a reflujo durante 2h, se enfrió a temperatura ambiente, se filtró, se lavó con agua (0.5L), ácido cítrico acuoso (50g/0.5L), salmuera (0.5L), se secaron sobre Na2S0 , y se evaporó para proporcionar aproximadamente lOOg (67%) del compuesto 87 como un líquido oscuro.

Paso 3. 4- (4 , 4 , 5 , 5-tetrametil-l , 3 , 2-dioxaborolan-2- il) indan-l-ona (88) Una mezcla que consiste de acetato de potasio (48 g, 0.5 mol, 1.5eq), trifiato 87 (100 g, 0.36 mol, 1.1 eq) , bis (pinacolo) diborano (100 g, 0.38 mol, 1.2 eq) , PPh3 (5 g, 0.02 mol, 0.06 eq) , y PdCl2(PPh3)2 (6.9 g, 0.01 mol, 0.03 eq) en tolueno desgasificado (2 L) se llevó a reflujo bajo atmósfera de argón durante la noche. La mezcla resultante se evaporó para secado y cromatografía con eluido mediante EtOAc/hexanos 1/5. Las fracciones que contuvieron el producto deseado se recolectaron y se evaporaron para proporcionar aproximadamente 50g (57%) del compuesto 88 como un sólido amarillo claro.

Paso 4. 4- (2-nitrofenil) -indan-l-ono (89) El tolueno desgasificado (0.5 L) , borolano 88 (10 g, 39 mmol) , 2-cloro-l-nitrobenceno (6.3 g, 40 mmol) , Pd(PPh3)4 (3 g, 2.6 mmol) y Na2C03 2M (200 mL) se mezclaron bajo un flujo rápido de argón, y la mezcla resultante se llevó a reflujo durante la noche. Se agregó agua (200 mL) y EtOAc (500 mL) . La capa acuosa se separó y se extrajo con EtOAc (2x500 mL) , y los extractos combinados se secaron sobre a2S04. El solvente se evaporó a presión reducida y el producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (20% EtOAc en hexanos) para proporcionar 9 g (91%) del bifenilo intermedio 89 como un sólido amarillo.

Paso 5. 1 , 2-dihidro-6H-cielopenta [c] carbazol-3-ona (90) Se agregó bifenilo 89 (9 g, 35mmol) y trietilfosfito a una bomba sellada y se calentó a 120°C durante la noche. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se filtró para proporcionar 4 g de 1, 2-dihidro-6H-ciclopenta [c] carbazol-3-ona . La precipitación con dietiléter del rendimiento proporcionó un 2 g adicional del producto deseado. Rendimiento común 90 como un polvo amarillo es 77.5%.

Paso 6. 9-acetil-l , 2-dihidro-6H~ciclopenta [c] carbazol-3- ona (91) El 1, 2-dihidro-6H-ciclopenta [c] carbazol-3-ona 90 (6 g, 27.1 mmol) se suspendió en CH2C12 (100 mL) seco. Se agregó AICI3 anhidro (6 g, 45 mmol) con agitación en un baño con hielo, seguido de la adición gota a gota del AcCl (2.4 mL, 33.2 mmol). La mezcla de reacción se agitó a aproximadamente 5°C durante 24 h, y se vació en agua con hielo. El precipitado sólido gris se extrajo por filtración, se lavó con agua (2 x 100 mL) , acetona (3 x 50 mL) , dietiléter (3 x 50 mL) para proporcionar 4 g (56.3%) del 9-acetil-l, 2-dihidro-6H-ciclopenta [c] carbazol-3-ona 91.

Paso 7. 9-acetil-l , 2-dihidro-6- (2-bromoetil) -ciclopenta [e] carbazol-3-ona (92) .

Se agregó NaH (2 g al 60%, 50 mmol) a una suspensión del compuesto 91 (4 g, 15.2 mmol) en D F (100 mL) seco, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente aproximadamente 1 h hasta que la evolución del hidrógeno se suspendió. 1 , 2-dibrometano (20g, 106 mmol) se agregó gota a gota bajo nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó durante 30 min a temperatura ambiente, luego a 60°C durante 24 h, y se vació en agua con hielo (300 mL) . El precipitado del sólido gris se extrajo por filtración y el producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (CHCI3) para proporcionar 2g del material de partida y aproximadamente lg (2.7 mmol, 35.5% a partir del material convertido) del carbazol 92 alquilado como un sólido crema.

Paso 8. Clorhidrato de 9-acetil-l , 2-dihidro-6- (2- (2- propil) aminoetil) -ciclopenta [e] carbazol-3-ona (Ejemplo 50) Se agregó bromuro 92 (1 g, 2.7 mmol) y 2-propilamina a una bomba sellada y se calentó a 180°C durante la noche. Después se enfrió a temperatura ambiente, la mezcla se evaporó para secado, el residuo se transformó con 100 mi solución de agua saturada de bicarbonato de sodio y se filtró. La torta de filtrado se purificó mediante cromatografía en columna (CHCl3/MeOH 10/1) . Las fracciones que contuvieron el producto deseado se recolectaron, se evaporó para secado, se diluyó con 40% de agua HC1 (10 mL) , se evaporó para secado y se volvió a evaporar con tolueno (2 x lOOmL) para proporcionar 200 mg (0.52 mmol, 19%) del clorhidrato de 9-acetil-l, 2-dihidro-6- (2- (2-propil ) aminoetil ) -ciclopenta [c] carbazol-3-ona (Ejemplo 50) como un sólido gris. 1H-NMR (DMSO-d6) : 1.23 d (6H), 2.74 s (3H)5 2.83 m (2H) , 3.67 m (2H) , 4.87 m (2H) , 7.85 dd (2H) , 7.97 d (1H), 8.22 d (1H), 8.71 s (1H), 8.9-9.2 s amplio (2H) .

Síntesis del Ejemplo 51 Paso 1. 9- (3-dimetilaminopropil) -carbazol (2b) Se agregó NaH (14.4 g de 60%, 360 mmol) en grandes porciones bajo argón a una suspensión de carbazol 1 (20 g, 119.8 mmol) en seco DMF (200 mL) . La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante aproximadamente lh hasta que la evolución del hidrógeno se suspendió. Se agregó clorhidrato de 3-dimetilaminopropilcloruro (28 g, 180 mmol) en grandes porciones a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó durante 20 min a temperatura ambiente, luego a 60 °C durante 3 hrs, y se vació en agua enfriada (500 mL) . El producto se extrajo con EtOAc (2 x 500 mL) . La capa orgánica se volvió a extraer con HC1 10% (200 mL) y la capa acidificada se extrajo con EtOAc para eliminar el carbazol sin reaccionar. Se agregó amonio saturado (200 mL) y el producto se extrajo nuevamente con EtOAc. El solvente evaporado proporcionó 25 g (99 mmol, 83%) del 9- (2-dimetilaminopropil) carbazol 2b como un aceite castaño.

Paso 2. 3 , 6-di (4-cloropropan-2-ona-il) -9- (2- dimetilaminopropil) carbazol (93) Se disolvió 9- (2-dimetilaminopropil ) carbazol 2b (25 g, 99 mmol) en CH2CI2 seco (150 mL) . Se agregó AICI3 anhidro (40 g, 300 mmol) en grandes porciones con agitación y enfriamiento en un baño con hielo. Se agregó gota a gota cloruro de 3-cloro-propionilo (30 mL, 312 mmol), mientras manteniendo la temperatura interna por debajo de 5°C. La mezcla de reacción se agitó a esta temperatura durante la noche, se vació en hielo triturado y se extrajo con CHCl3/MeOH 1/1 (3 x 500 mL) . El extracto se evaporó para secado, y el aceite verde resultante se trituró con dietiléter (2 ? 250 mL) para proporcionar 20 g (46 mmol, 47%) de 3 , 6-di ( 3-cloropropionil ) -9- (2-dimetilaminopropil ) -carbazol 93 como un polvo gris.

Paso 3. 6- (3-Dijaetilaminopropll) -1,2,10, ll-tetrahxdro-6H- bis- (ciclopenta [c] caxbazol-3, 9-dxona (Ejenxplo 51) Se agregó 3, 6-di- (3-cloropropionil) -9- (2-dimetilaminopropil) carbazol 93 (20 g, 46 mmol) en grandes porciones al ácido trifluorometansulfónico (100 g) con agitación a temperatura ambiente y la mezcla de reacción se calentó a 95°C durante la noche. Después se enfrió a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se vació en agua con hielo. El precipitado se extrajo por filtración, se transformó con bicarbonato de sodio saturado, y nuevamente se filtró externamente. La torta de filtrado resultante contiene aproximadamente 80% del producto deseado y 20% del isómero. Después de una cristalización individual a partir de metanol, el precipitado se transformó con HC1 4N/dioxano (100 mi), se evaporó para secado y se volvió a cristalizar a partir de EtOH para proporcionar aproximadamente 2.8 g (7.1 mmol, 15.4%) del Ejemplo 51 al 95% como un sólido blanco.

LCMS: 100%; 1H-NMR (D SO-d6) 95%: 2.18 m (2H) , 2.71 s (6H), 2.78 m (4H), 3.15 m (2H) , 3.83 m (4H), 4.68 m (2H), 7.85 dd (4H) , 10.0 br s (1H) .

Síntesis Alternativa del Ejemplos 15 y 17 y Síntesis del Ejemplo 20 Ejemplo 15 Ejemplo 17 Ejemplo 20 A menos que se observe de otra manera, se utilizaron los reactivos y solventes como se recibieron de los proveedores comerciales. Los espectros de resonancia magnética nuclear protónica se obtuvieron en un espectrómetro Bruker ARX 400 a 400 MHz. El solvente pico se utilizó como un pico de referencia para los espectros protónicos. Los TLC se corrieron sobre sílice, a menos que se observe de otra manera 9- (2-Dietilaminoetil) -carbazol (68) Se agregó NaH (14.4 g al 60%, 360 mmol, 3 eq) en una porción amplia bajo argón a una suspensión de carbazol (1) (20 g, 119.8 mmol, 1 eq) en seco DMF (200 mL) . La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 min hasta que se suspendió la evolución del hidrógeno. Se agregó clorhidrato de 2-dietilaminoetilcloruro (31 g, 180 mmol, 1.5 eq) en una porción amplia a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó durante 20 min a temperatura ambiente, luego a 60 °C durante 3 hrs (monitoreo mediante TLC) , y se vació en agua fría (1 L) . El producto se extrajo con EtOAc (5 x 200 mL) ; la capa orgánica se volvió a extraer con 10% de HC1 (400 mL) y se extrajo la capa acidica con EtOAc para eliminar el carbazol sin reaccionar. El pH de la capa acuosa se ajustó hasta aproximadamente 9 con K2CO3 y el producto se extrajo nuevamente con EtOAc. La evaporación del solvente proporcionó 29.5 g (93%) de 9- (2-dietilaminoetil ) carbazol (58) como un aceite castaño.

Clorhidrato de 3 , 6-di (4-cloropropan-2-ona-il) -9- (2- dietilaminoetil) carbazol (69).

Se disolvió 9- ( 2-dietilaminoetil ) carbazol (68) (17.9 g, 67.3 mmol, 1 eq) en diclorometano seco (150 mL) . Se agregó A1C13 anhidro (45 g, 337 mmol, 5 eq) en una porción amplia con agitación y enfriamiento en un baño con hielo. Se agregó gota a gota cloruro de 3-cloro-propionilo (32.4 mL, 337 mmol, 5 eq) , mientras mantuvo la temperatura interior por debajo de 5°C. La mezcla de reacción se agitó a esta temperatura durante 15 h, se vació en HC1 frío 3% (espumación violenta para ser evitada) y se extrajo con CHC13 (5x500 mL) . El extracto se evaporó y el aceite verde resultante se trituró con dietiléter (5x50 mL) para proporcionar 24 g (74%) de clorhidrato de 3, 6-di ( 3-cloropropionil ) -9- (2-dietilaminoetil ) -carbazol (69) como un sólido gris oscuro.

^-NMR (DMSO-d6): 1.27 (t, 6H) , 2.72 (q, 4H) , 3.75 (m, 6H) , 4.02 (m, 4H) , 5.00 (t, 2H) , 8.00 (d, 2H) , 8.17 (d, 2H) , 9.16 (s. 2H) , 11.42 (s, 1H) . 6- (3-Dietilaminoetil) -1,2,10, ll-tetrahidro-6H-bis- (ciclopenta [c] carbazol-3 , 9-diona (70) .

Se agregó clorhidrato de 3 , 6-di- ( 3-cloropropionil ) -9- (2-dietilaminoetil) carbazol (69) (5 g, 10.33 mmol, 1 eq) en grandes porciones al ácido trifluorometansulfónico (50 g, 333 mmol, 32 eq) con agitación a temperatura ambiente y la mezcla de reacción se calentó a 95°C durante la noche. Después se enfrió a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se vació en agua con hielo. La solución de pH acuosa se ajustó a s 9 con NaOH 10% y el producto se extrajo con mezcla EtOAc/THF = 3/1. Los solventes se evaporaron externamente y la el producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (10% EtOH en EtOAc) para proporcionar 1.12 g (29%) del intermediario puro 70 como un sólido blanco.

MS(ESI): m/z = 375.3 [M+H]+; 1H-NMR (DMSO-d6): 0.70 (t, 6H) , 2.41 (q, 4H) , 2.68 (m, 6H) , 3.73 (m, 4H) , 4.55 (t, 2H), 7.77 (s, 4H) .

Ejemplo 15 Se disolvió el intermediario 70 (1.12 g, 2.99 mmol, 1 eq) en CH2C12 (20 mL) y se agregó solución HC1 al 10% en etanol (3.4 g, 93.15 mmol, 30 eq) causando una formación para un precipitado voluminoso. El solvente se evaporó a presión reducida y el residuo se trituró con MeOH caliente para proporcionar 1.17 g (98%) del Ejemplo 15 como un sólido blanquecino .

Pureza: 97.3% mediante HPLC; MS(ESI): m/z = 375.3 [M-HC1+H] +; m.p. - 312.1-314.7 °C Los Ejemplos 17 y 20 se prepararon mediante un proceso idéntico utilizando la cloroamina verdadera, es decir, (CH3) 2CH-NH-CH2CH2-Ci o ( C2H5 ) NHCH2CH2-C1.

Síntesis Alternativa del Ejemplo 7 (Compuesto 6h) Ejemplo 7 Compuesto 6h Boc O Boc20 sCI/TEA/THF , NH N 1. M OH "OH eOH 70.5% 2. aq. Na2C03 -lA) 72 75% 74 paso 2a paso 2b Experimental A menos que se observe de otra manera, se utilizaron los reactivos y solventes como se recibieron de los proveedores comerciales. Los espectros de resonancia magnética nuclear protónica se obtuvieron en un espectrómetro Bruker ARX 400 a 400 MHz . El pico de solvente se utilizó como un pico de referencia para los espectros protónicos. Los TLC se corrieron sobre sílice, a menos que se observe de otra manera. 3 , 6-Diacetilcarbazol (4) Se suspendió carbazol (20 g, 0.12 mol, 1 eq) en anhidro CH2C12 (300 mL) bajo argón y la mezcla resultante se enfrió a 0°C. Se agregó a la mezcla A1C13 (95.5 g, 0.72 mol, 6 eq) seguido por la adición gota a gota de cloruro de acetilo (25.5 mL, 0.36 mol, 3 eq) , mientras que se mantuvo la temperatura interna a aproximadamente 0°C. Después de 3 horas de agitación a 0°C, se agregó otra porción de cloruro de acetilo (5 mL, 0.07 mol, 0.6 eq) y la agitación continuó durante otras 2 horas.

La mezcla de reacción se vació en hielo mientras se estaba agitando. El sólido se recolectó mediante filtración, se lavó con CH2C12 luego agua y se secó en un horno al vacío a 50°C. Rendimiento 16.3 g (54%) de carbazol 4. El filtrado y los lavados se combinaron y se extrajeron con CH2CI2 (3 x 300 mL) . Los extractos de CH2C12 se lavaron con NaHC03 saturados (1 x 300 mL) y salmuera (1 x 300 mL) . Después de secar sobre Na2S04, el filtrado se evaporó a sequedad para proporcionar el producto crudo, que se utilizó sin purificación adicional.

MS(ESI): m/z = 252.0 [M+H] 2-N-Boc-2-N-isopropilaminoethanol (14) Se agregó (Boc)20 (50.8 g, 0.23 mol, 2 eq) a una solución de 2-N-isopropilaminoetanol (72) (22.3 mL, 70%, 0.136 mol) en MeOH (200 mL) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas luego se diluyó con agua (1.2 L) y el producto se extrajo con EtOAc (4 x 400 mL) . Los extractos combinados de EtOAc se lavaron con salmuera (1 x 400 mL) y se secaron sobre Na2S04. El solvente se evaporó externamente y el producto crudo se purificó mediante columna (eluyente Hexanos : EtOAc de 4:1 a 1:1) para proporcionar 19.5 g (70.5% de rendimiento) del 73 puro como un aceite viscoso. 3-Isopropil-2-oxazolidinona (74) .

Se agregó gota a gota MsCl (8.5 mL, 0.109 mol) a una solución de alcohol (73) (18.5 g, 0.091 mol) y TEA (19 mL, 0.137 mol) en anhidro THF (200 mL) se enfrió a -20°C con agitación vigorosa. La reacción se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente (3 horas) . El sólido se retiro mediante filtración y se lavó con THF (20 mL) . Se agregó Na2C03 (100 mL) saturada para el filtrado y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche, luego se diluyó con agua (200 mL) y se extrajo con EtOAc (3 x 200 mL) . Los extractos combinados EtOAc se lavaron con 1% HC1 (1 x 200 mL) , salmuera (1 x 200 mL) se secaron sobre Na2SO/j . El solvente se evaporó externamente para proporcionar 8.8 g (75% de rendimiento) del carbamato cíclico (74), que se utilizó sin purificación adicional.

MS(ESI): m/z = 130.1 [M+H]+ 3 , 6-Diacetil-9- (2-N-isopopilaminoetil) -carbazol (71) .

Una mezcla de 3 , 6-diacetilcarbazol (4) (15.12 g, 0.06 mol), 3-isopropil-2-oxazolidinona (74) (7.80 g, 0.06 mol), Cs2C03 (39.2 g, 0.12 mol), y DBU (9 mL, 0.06 mol) en N P (150 mL) se agitó a 190°C durante 24 horas, luego se vació en H20 (500 mL) y se extrajo con EtOAc (3 x 300 mL) . Los extractos combinados EtOAc se lavaron con salmuera (2 x 200 mL) y se secaron sobre Na2S04. El solvente se evaporó y el producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (eluyente-(5 hasta 20%) MeOH (que contuvo 0.1% de NH3H20) /EtOAc) . Las primeras fracciones contenidas en el material de partida sin reaccionar (-1.7 g) . Las fraccione puras se combinaron y el solvente se evaporó para secado para proporcionar 9.36 g (contenido de EtOAc al 20% mediante NMR) puro (71) . Las fracciones puras menores se combinaron, se evaporaron para secado y el residuo triturado con EtOAc para proporcionar otros 3.47 g del producto crudo.

Rendimiento total - 54.5% (después de la cantidad sustraída de EtOAc) ; (Rendimiento base 61.6% sobre la reacción del material partida) .

MS(ESI): /z = 337.1 [M+H]+ Compuesto 6h Se disolvió el intermediario (71) (3.47 g, 0.0103 mol) en CH2C12 (30 mL) y la solución resultante se enfrió a aproximadamente 5°C. Se agregó gota a gota con agitación solución de HCl/EtOH al 10% (5.6 g, 0.0153 mol). Después de 40 minutos el solvente se retiró bajo vacío, el residuo se secó bajo alto vacío a 40°C para proporcionar 3.5 g (rendimiento 93%) de 6h . De manera similar, el otro grupo de 71 (9.36 g, 20% EtOAc) se convirtió en 6h.

Análisis de datos: Pureza: 99.5% mediante HPLC; MS(ESI): m/z = 337.3 [M-HC1+H]+; m.p. = 292.7-294.1 °C Paso 1. Se sintetizó 4-hidroxi-l-indanona (76) mediante cloruro de aluminio con reciclizacion inducida de dihidrocumarina (75), de acuerdo con Org. Lett. , 2007, 9(15), p. 2915-2918. La reacción se realizó en 100 g de (75) para proporcionar (76) con 85% de rendimiento.

Paso 2. La indanona (76) se convirtió a triflato (77) con 90% de rendimiento mediante la reacción con anhídrido tríflico en CH2C12 en presencia de Py, seguido por cromatografía instantánea.

Paso 3. Se sintetizó el triflato (79) de la misma forma con rendimiento cuantitativo, iniciando de 50 g de 4 metoxi-2-nitrofenol (78) .

Pasos 4 y 5. Siguiendo el protocolo para una síntesis con recipiente único de compuestos de bifenilo a partir de Synthetic Communications , 2006, 3_6, p. 3809-3820, el intermediario (81) se obtuvo en 80% de rendimiento iniciando a partir de 60 g del triflato (77).

Paso 6. La ciclización del intermediario de bifenilo (81) mediante calentamiento con exceso de trifenilfosfina en 1 , 2-diclorobenceno se llevó a cabo a una pequeña escala primero para producir el carbazol (82) esperado con ~50% (sin optimizar) después de la precipitación a partir de la mezcla de reacción con éter. La misma reacción se extrapoló a 42 g de (81) , proporcionando 27 g (73% de rendimiento) (82) puro.

Paso 7. La acetilación del intermediario (82) (27.8 g de escala) se llevó a cabo en CH2C12 de acuerdo con el protocolo estándar para proporcionar 26 g (80% de rendimiento) del intermedio (83).

Paso 8. Después de una extracción exhaustiva con una mezcla 1:1 de EtOAc/THF, se obtuvo aproximadamente el 68% de rendimiento del producto bruto (84), que contuvo una impureza de valores iniciales mediante TLC. Se utilizó para el paso de demetilacion sin purificación adicional.

Paso 9. El retiro del grupo metilo a partir de (84) se llevó a cabo mediante el calentamiento del sustrato en una mezcla 1:1 de Py*HCl/NMP a 190°C durante 10 h. Después de la purificación mediante cromatografía en columna, 7.8 g (37% de rendimiento) del ejemplo 4 (base libre) . Se trató con solución de HC1 al 10% en EtOH para proporcionar 8.4 g del ejemplo 4 puro.

EXPERIMENTAL A menos que se observe de otra manera, se utilizaron los reactivos y solventes como se recibieron de los proveedores comerciales. Los espectros de resonancia magnética nuclear protónica se obtuvieron en un espectrómetro Broker ARX 400 a 400MHz. El pico de solvente se utilizó como el pico de referencia para los espectros protónicos. El progreso de las reacciones se controló mediante análisis por TLC o/y LCMS. 4-Hidroxi-l-indanona (76) .

Se mezcló cloruro de aluminio anhidro (550 g, 4.135 mol, 4 eq) y cloruro de sodio (105 g, 1.795 mol, 2.7 eq) y se calentó a 150°C. Se agregó lentamente dihidrocoumarina (75) (100 g, 675.7 mol, 1 eq) se mantuvo la temperatura interna entre 150-160°C. Después de la adición, la temperatura se aumentó a 200°C y la mezcla de reacción se agitó durante 1.5 h, y mientras se calentó, se vació en una vasija de porcelana para enfriar. La masa solidificada se descontinuó y se agregó con una agitación vigorosa mezcla de hielo y agua (4L) que contuvo 400 mL HC1 conc. La suspensión resultante se agitó durante 1 h, se filtró, se lavó con agua y se secaron para proporcionar 85 g (85%) del 4-hidroxi-l-indanona (76) crudo como un sólido gris. Éste fue suficientemente puro para ser utilizado en el siguiente paso.

Ester l-oxoindan-4-ilo del ácido trifluorometansulfónico (77) .

Se agregó ácido trifluorometansulfónico anhidro (72.3 mL, 429.7 mmol, 1.2 eq) a una suspensión de 4-hidroxi-l-indanona (77) (53 g, 358.1 mmol, 1 eq) en CH2C12 seco (450 mL) y piridina (87 mL, 1074 mmol, 3 eq) , mientras que se mantuvo la temperatura interna inferior a 5°C. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y la agitación continuó durante 1 h. Se agregó CH2C12 (300 mL) y agua (100 mL) a la mezcla de reacción, la capa orgánica se separó, se lavó subsecuentemente con solución HC1 al 2% (3 x 100 mL) , y NaHC03 (saturada 2 x 100 mL) , y se secaron sobre Na2S04. SE evaporó externamente CH2C12 y el producto crudo se purificó mediante cromatografía instantánea (5% para EtOAc al 10% en hexanos) para proporcionar 90 g (90%) de 77 puro como un líquido castaño.

XH-NMR (DMSO-d6) : 2.76 (t, 2H) , 3.19 (t, 2H) , 7.65 (dd, 1H), 7.94 (2d, 2H) . Éster 4-metoxi-2-ni rofenilo del ácido trifluorometansulfonio (78) Se agregó ácido trifluorometansulfónico anhidro (60 mL, 350 mmol, 1.2 eq) a una solución de 4-metoxi-2-nitrofenol (78) (50.57 g, 298.9 mmol, 1 eq) en CH2C12 seco (550 mL) y piridina (72.5 mL, 897 mmol, 3 eq) , mientras que se mantuvo la temperatura interna inferior a 5°C. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. Se agregó agua (100 mL) a la mezcla de reacción, la capa orgánica se separó, se lavó subsecuentemente con soluciones de solución HC1 al 7%, luego NaHC03 saturada, y se secaron sobre Na2S04. La solución CH2C12 se filtró a través de una almohadilla de Si02 y el solvente se eliminó a vacío para proporcionar 89 g (99%) del triflato 79 puro como un líquido amarillo claro. 1H-NMR (DMSO-d6) : 3.92 (s, 3H) , 7.49 (dd, 1H), 7.71 (d, 1H), 7.81 (d, 1H) . 4- (4-Metoxi-2-nitrofenil) -indan-l-ona (81) .

Una mezcla que consiste de acetato de potasio (29.44 g, 0.3 mol, 1.5 eq) , triflato (77) (61.44 g, 0.22 mol, 1.1 eq) , bis (pinacolo) diborano (60.94 g, 0.24 mol, 1.2 eq) , PPh3 (3.15 g, 0.012 mol, 0.06 eq) , y PdCl2(PPh3)2 (4.21 g, 0.006 mol, 0.03 eq) en tolueno desgasificado (2 L) se llevó a reflujo bajo una atmósfera de argón durante la noche. Se agregó, el triflato (79) (60.24 g, 0.2 mol, 1 eq) , Pd(PPh3)4 (1 1.55 g, 0.01 mol, 0.05 eq) , y Na2C03 2M (800 mL) consecutivamente a la misma en un matraz bajo un flujo rápido de argón, y la solución resultante se llevó a reflujo durante la noche. Se agregó agua (200 mL) y EtOAc (500 mL) , la capa acuosa se separó y se extrajo con EtOAc (2 x 500 mL) y los extractos combinados se secaron sobre Na2S04. El solvente se evaporó a presión reducida y el producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (EtOAc al 20% en hexanos) para proporcionar 44 g (80%) del bifenilo intermediario (81) como un sólido amarillo. 8-Metoxi-l, 2-dihidro-6H-ciclopenta[c] carbazol-3-ona (82) .

Una solución de 4- ( 4-metoxi-2-nitrofenil ) -indan-l-ona (81) (42 g, 148.4 mmol, 1 eq) y trifenilfosfina (116 g, 445 mmol, 3 eq) en o-diclorobenceno (400 mL) se llevó a reflujo con agitación vigorosa durante 4 h, luego se enfrió a 0°C. Se agregó dietiléter (4 L) y el precipitado se filtró externamente, se lavó con dietiléter (3 x 100 mL) y se secaron para proporcionar 17 g (46%) de (82) . El filtrado se evaporó externamente y el residuo se lavó con MeOH frío (5 x 100 mi) para proporcionar un 10 g adicional (27%) de carbazol (82). Rendimiento total 27 g (73%). 1H-NMR (DMSO-d6) : 2.74 (m, 2H) , 3.50 (m, 2H) , 3.88 (s, 3H), 6.90 (d, 1H) , 7.08 (s, 1H) , 7.47 (d, 1H) , 7.58 (d, 1H) , 7.97 (d, 1H) , 1 1.79 (s, 1H) . 9-Acetil-8-metoxi-l ,2-dihidro-6H-ciclopenta [c] carbazol-3- ona (83) .

Se disolvió 8-metoxi-l , 2-dihidro- 6H-ciclopenta [c] carbazol-3-ona (82) (27.8 g, 1 10.8 mmol, 1 eq) en diclorometano seco (300 mL) . Se agregó A1C13 anhidro (29.5 g, 221.5 mmol, 2 eq) en porciones con agitación y enfriamiento, seguido mediante la adición gota a gota de AcCl (24 mL, 332.4 mmol, 3 eq) . La mezcla de reacción se agitó a aproximadamente 5°C durante 24 h y se vació en agua con hielo (la espumación violenta se debe evitar) . El precipitado sólido naranja se extrajo por filtración, se lavó con agua (10 x 100 mL) , CH2C12 (3 x 50 mL) , acetona (3 x 50 mL) para proporcionar 26 g (80%) de 9-acetil-8-metoxi-l, 2-dihidro- 6H-ciclopenta [c] carbazol-3-ona (83) . 9-Acetil-8-metoxi-l , 2-dihidro-6- (3-dimetilaminopropil) - ciclopenta [c] carbazol-3-ona (84) .

Se agregó NaH (6.88 g de 60%, 171.95 mmol, 2.5 eq) a una suspensión de 9-acetil-8-metoxi-l , 2-dihidro- 6H-ciclopenta [c] carbazol-3-ona (83) (26 g, 68.78 mmol, 1 eq) en CH2C12 seco (300 mL) , y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20-30 min hasta que la evolución del hidrógeno se suspendió. Se agregó clorhidrato de 3-dimetilaminopropilcloruro (16.3 g, 103.16 mmol, 1.5 eq) porciones bajo nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó durante 30 min a temperatura ambiente, luego a 60 °C durante 24 h y se vació en agua con hielo (4 L) . La solución acuosa se acidificó a aproximadamente pH 2 con HC1 conc. y el material de inicio sin reaccionar se extrajo con mezcla de EtOAc/THF = 3/1. Al ajustar el pH de la capa acuosa a aproximadamente 9, el producto se extrae con una mezcla 1:1 EtOAc:THF (10 x 500 mL) . Los extractos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2S04 y el solvente se evaporó externamente para proporcionar 22 g (68%) del carbazol crudo (84), razonablemente puro mediante LC/MS. Éste se utilizó en el siguiente paso sin purificación adicional.

XH-NMR (DMSO-d6): 1.88 (t, 2H) , 2.13 (s, 6H) , 2.16 (t, 2H), 2.62 (s, 3H) , 2.75 (m, 2H) , 3.47 (m, 2H) , 4.01 (s, 3H), 4.52 (t, 2H), 7.32 (s, 2H) , 7.65 (dd, 4H) , 8.32 (s, 2H) . 9-Acetil-8-hidroxi-l,2-dihidro-6- (3-dimetilaminopropil) - ciclopenta [c] carbazol-3-ona .

Una solución de 9-acetil-8-metoxi-l, 2-dihidro-6- ( 3-dimetilaminopropil ) -ciclopenta [c] carbazol-3-ona (84) (22 g, 58.2 mmol, 1 eq) y clorhidrato de piridina (134.4 g, 1164 mmol, 20 eq) en NMP (150 mL) se llevó a reflujo durante 10 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se vació en solución K2CO3 acuosa al 10% (3 L) . El precipitado sólido verde oscuro se extrajo por filtración, se lavó con agua (5 x 100 mL) y se secaron. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (eluyente MeOH al 10%-20% en EtOAc) para proporcionar 7.81 (37%) de 9-acetil-8-hidroxi-1 , 2-dihidro-6- (3-dimetilaminopropil ) -ciclopenta [c] carbazcl-3-ona puro como un sólido amarillo claro .

MS(ESI): m/z = 363.3 [M+H]+.

NMR XH (DMSO) : 1.86 (t, 2H) , 2.17 (s, 6H) , 2.20 (t, 2H), 2.79 (m, 2H) , 2.81 (s, 3H) , 3.52 (m, 2H) , 4.43 (t, 2H) , 7.15 (s, 2H), 7.66 (dd, 4H) , 8.50 (s, 2H) , 12.71 (s, 1H) .

Ejemplo 4 Se disolvió 9-acetil-8-hidroxi-l, 2-dihidro-6- (3-dimetilaminopropil) -ciclopenta [c] carbazol-3-ona (7.81 g, 21.46 mmol, 1 eq) en una mezcla de agua (20 mL) y solución HC1 al 10% (20 mL) en etanol (200 mL) , y la solución homogénea se evaporó para secado. El residuo se secó a vacio durante la noche para proporcionar 8.47 g del Ejemplo 4 como un sólido gris.

Pureza: 99.2% mediante HPLC; MS(ESI): m/z = 363.3 [M-HC1-H]+; m.p. = 241.3°C (Descomposición); 1H-NMR (DMSO-d6) : 2.15 t (2H), 2.68 s (3H), 2.69 s (3H), 2.80 m (2H), 2.82 s (3H), 3.11 m (2H) , 3.55 m (2H) , 4.53 t (2H) , 7.29 s (2H) , 7.73 dd (4H), 8.52 s (2H) , 11.00 s (1H), 12.76 s (1H).

Los compuestos de la fórmula estructural (II) se prepararon de manera similar a los compuestos de la fórmula estructural (I), y se incluyen por ejemplo, Ejemplo 21 Ejemplo 22 Ejemplo 17b Ejemplo 26 Un compuesto utilizado en los métodos presente invención tiene una estructura: Compuesto Los ejemplos adicionales tienen una fórmula estructural (I) incluida, de manera enunciativa: Ejemplo 29 Ejemplo 30 Ejemplo 38 Ejemplo 39 Ejemplo 46 Ejemplo 47 Ejemplo 48 Ejemplo 49 Los compuestos de la presente invención por tanto incluidos, pero no limitados a: 3a 3b 13b 13c 13d 20 i53 i54 Eiempl027 Ejemplo 28 Ejemplo 29 Ejemplo 30 Ejemplo 31 Ejemplo 32 Ejemplo 33 Ejemplo 34 Ejemplo 40 ??? La potencia de un compuesto de carbazol se determina al medir una capacidad del compuesto para activar p53. En particular, una linea de células reporteras de luciferasa sensible a p53 se utiliza para identificar los compuestos capaces de activar p53. La activación de p53 se reporta como el valor EC50, que es la concentración efectiva del compuesto necesaria para aumentar la actividad p53 en un 50% sobre una actividad p53 de valores iniciales.

El análisis de activación p53 para la determinación del valor EC50 se realizó como sigue: DEFINICIONES Y TERMINOLOGÍA ConALuc: estructura del reportero de luciferasa sensible a p53.

D SO: sulfóxido de dimetilo.

FBS : suero fetal de bovino EQUIPO Luminómetro-fluoexploración de 96 cavidades (por ejemplo, Fluoroscan, LabSystems, Inc, programa de ajustes, el tiempo de integración es 0.1 seg., el voltaje PMT es 1000, y cero el tiempo de retraso.

Pipeta con múltiples canales variación 50-300 uL.

Placas de 96 cavidades.

MATERIALES Lineas de células reporteras: HT1080-L (células de fibrosarcoma humano con el reprotero ConALuc) RCC45ConALuc (linea celular de carcinoma de células renales humanas con el reportero ConALuc) .

Medio DMEM estándar Medio RPMI estándar Pen/strep lOOx Tripsina-EDTA 1 dilución 10X a IX en PBS estéril.

PBS.

Sistema de análisis de luciferasa Bright-Glo (Fisher PR-E2620) 9-aminoacridina (9aa) 20 mm en DMSO (Sigma A38401), activador p53 (control positivo) .

Compuesto 100 20 mM en DMSO (Chembridge) , activador p53 (control positivo) .

DMSO (Fisher D128-500) (control negativo) .

MÉTODO 1. Se utilizaron dos tipos de células estándar, células ya sea HT1080-L o RCC45ConALuc . Ambas lineas celulares expresan establemente una estructura de reportero de luciferasa sensible a p53. 2. Las células HT1080-L se desarrollaron en medio DMEM que contuvo FBS al 10%. Las células RCC45ConALuc se desarrollaron en medio RPMI que contuvo 10% de FBS (Pen/Strep se puede agregar a una concentración de 1%, si se desea) . Ambas lineas celulares se desarrollaron en una incubadora humidificada a 37 °C con 5% de C02. Para cultivo normal, ambas lineas celulares se dividieron utilizando IX tripsina-EDTA a proporción de 1:20 para HT1080-L y 1:5 para células RCC45ConALuc cada 3-4 dias (cuando las células fueron 80-90% confluentes) . 3. Un día antes del experimento, las células se trataron con tripsina durante aproximadamente 5 minutos en solución de IX tripsina/EDTA en una incubadora a 37 °C y se colocaron en placas de 96 cavidades. Las células HT1080-L se sembraron a una densidad de 1 x 10 /cavidad en medio de DMEM estándar en un volumen de 50 ?,. RCC45ConALuc se sembraron a una densidad de 2 x 10 /cavidad en el volumen de 50 uL en medio RPMI estándar. 4. Al siguiente dia, se prepararon diversos compuestos de carbazol mediante la dilución de soluciones madre en medio DMEM estándar de tal forma que las células se trataron con las concentraciones químicas finales de la tabla 1 más adelante. Las soluciones madre se constituyeron en DMSO. Típicamente, los químicos se constituyeron como soluciones madre 20 mm. Sin embargo, esta concentración depende de la solubilidad de un compuesto determinado y por lo tanto las concentraciones madre reales se observaron en el momento del experimento (por ejemplo, los compuestos menos solubles pueden tener una concentración madre de 5 ó 10 mM) . 5. Cada compuesto probado utilizó dos hileras de una placa de 96 cavidades, de esta forma, se probaron cuatro compuestos (por ejemplo, W, X, Y, Z) en una placa simultáneamente. Además de los compuestos de prueba, cada placa incluyó controles positivos y negativos. Como control positivo, se utilizó 9aa a una dosificación de 3 µ?. Como control negativo, se utilizó DMSO en una concentración final de 0.1%.

Tabla 1. Esquema de una placa experimental con concentraciones finales de químicos 1. Las diluciones de los químicos agregados a la placa se constituyeron como las concentraciones 2X en DMEM estándar y se agregaron a la cavidad correspondiente en un volumen de 50 pL. 2. Los químicos se diluyeron en DMEM estándar en diluciones en serie de 2 tiempos iniciando de 40 µ? (2X de la concentración mayor, por ejemplo, 20 µ?) . Para una línea celular, el volumen mínimo fue 125 µ?, de la solución de trabajo 2X del químico de cada concentración en DMEM estándar . 3. Además de un control positivo agregado en una concentración en cada placa, un control positivo del compuesto 100, o el compuesto más activo en cada etapa de selección, se agregó a cada corrida de análisis en una variación de concentración total para asegurar un desempeño del análisis adecuado y robusto (estimado por comparación de las curvas de respuesta a la dosis de la activación de p53 entre las corridas) . 4. Dieciséis horas después de la adición del compuesto, todas las cavidades con la mayor concentración de los compuestos se verificaron microscópicamente para la presencia del efecto tóxico, debido a que la muerte de las células provocada por los compuestos puede no permitir la detección de la actividad de la luciferasa. Si es evidente la citotoxicidad, se verificaron para la presencia de toxicidad otras dosificaciones del mismo compuesto. Se registró la menor dosificación que provoca un efecto tóxico. En caso de que se observe citotoxicidad a las 3-4 dosis menores del compuesto (en un esquema de dosificación real a 0.3 y menor uM) , el compuesto se volvió a probar por separado en una variación de concentración menor, permitiendo al menos 4 dosificaciones diferentes duplicadas del compuesto que será probado sin señales de citotoxicidad) . 5. Después del examen microscópico, se agregaron a cada cavidad 15 µ? del sistema de análsis de luciferasa Bright Glo y después de 5 minutos de incubación a RT, las placas se leyeron sobre un luminómetro de placas de 96 cavidades con un tiempo de medición de 0.1 seg. Antes de la medición se incluyó un paso de agitación vigorosa. 6. Se calcularon las veces de la activación de luciferasa para cada concentración de cada químico al dividir la actividad detectada de la luciferasa en cada concentración química entre el promedio de la actividad de la luciferasa para el control DMSO en la misma placa. Las veces luego se graficaron contra la concentración química para determinar si los compuestos son activos. A partir de los datos, se determinaron tanto la activación máxima de veces y como la Emax (concentración que provoca la activación máxima de p53) . 7. Para cada compuesto, este análisis es repitió dos veces adicionales. Una vez que se completaron tres ejecuciones, se utilizaron datos en bruto para calcular el valor EC5o .

Un análisis se consideró inválido cuando: una diferencia entre dos duplicados se aumentó al 10% para más del 10% de las lecturas; se observó la muerte de las células tratadas con DMSO; menos de 3 veces la inducción de luciferasa en las células tratadas con el control positivo (compuesto 3a, 0.4 uM) contra la actividad de luciferasa de células tratadas con D SO; incapacidad de obtener una curva dependiente de la dosis de la inducción de luciferasa con control positivo (por ejemplo, el compuesto 100, 0.03-20 uM) .

Los siguientes son ejemplos no limitantes de los valores EC50 para diversos compuestos de carbazol útiles en el método de la presente invención: Compuesto Valor EC50 (activación p53, uM) Compuesto 100 1.30 Ejemplo 21 0.83 Ejemplo 22 0.53 Compuesto 3a 0.29 Compuesto 3b 0.49 Compuesto 7d 0.64 Ejemplo 23 0.88 Ejemplo 24 0.78 Ejemplo 25 0.88 Ejemplo 2 0.64 Examplo 27 0.54 Ejemplo 15 0.03 Compuesto 19a 0.40 Compuesto 3e 0.78 Ejemplo 7 0.37 Ejemplo 4 0.07 Compuesto 18c-l 0.08 Compuesto 18c-2 0.10 Compuesto 19e 0.07 Ejemplo 13 0.22 Ejemplo 14 0.05 Ejemplo 6 0.24 Ejemplo 17 0.04 Ejemplo 18 0.09 Ejemplo 38 0.12 Los compuestos y composiciones farmacéuticas de la presente invención incluyen aquellos en donde el ingrediente activo se administra en una cantidad terapéuticamente efectiva hasta alcanzar su fin pretendido. Una "cantidad terapéuticamente efectiva", se refiere a aquella cantidad de un compuesto de carbazol de la presente que de por resultado en alcanzar el efecto deseado. La toxicidad y eficacia terapéutica del los compuestos de carbazol se pueden determinar mediante procedimientos farmacéuticos estándar en cultivos celulares o animales experimentales, por ejemplo, para determinar la LD50 (la dosis letal para el 50% de la población) y la ED50 (la dosis terapéuticamente efectiva en el 50% de la población) . La proporción de dosificación entre los efectos tóxicos y terapéuticos es el índice terapéutico, que se expresa como la proporción entre LD50 y ED50. Se prefieren los compuestos que exhiben alto índices terapéuticos. Los datos obtenidos a partir de estos datos se pueden utilizar para formular una variación de dosificación para uso en seres humanos. La dosificación de preferencia depende de una variación de concentración del compuesto en circulación que incluyen la ED50 con poca o ninguna toxicidad. La dosificación puede variar dentro de este intervalo dependiendo de la forma de dosificación empleada, y la vía de administración utilizada. La determinación de una cantidad terapéuticamente efectiva queda dentro de la capacidad de aquellos expuestos en la técnica, en especial a la luz de la exposición detallada proporcionada en la presente.

Una cantidad terapéuticamente efectiva o un compuesto de carbazol de la fórmula estructural (I) o (II) requerido para utilizarse en terapia varia con la naturaleza de la condición que será tratada, el periodo de tiempo que se desea para esta actividad, y la edad y condición del paciente, y por último se determina por el médico. Las cantidades e intervalos de dosificación se pueden ajusfar individualmente para proporcionar niveles plasmáticos del compuesto de carbazol que sean suficiente para mantener los efectos terapéuticos deseados. La dosificación deseada convenientemente se puede administrar en una sola dosis, o como múltiples dosis administradas a intervalos adecuados, por ejemplo, como una, dos, tres, cuatro o más subdosis al día. Con frecuencia se desean o se requieren múltiples dosis. Por ejemplo, un compuesto de carbazol de la presente se puede administrar a una frecuencia de: cuatro dosis suministradas como una dosis al día a intervalos de cuatro días (q4d x 4); cuatro dosis suministradas a una dosis al día a intervalos de tres días (q3d x 4); una dosis suministrada al dia a intervalos de cinco días (qd x 5) ; una dosis a la semana durante tres semanas (qwk3) ; cinco dosis diarias, con dos días de descanso, y otras cinco dosis diarias (5/2/5) ; o, cualquier régimen de dosificación determinado que sea adecuado para la circunstancia.

La dosificación de una composición que contiene un compuesto de carbazol de la fórmula estructural (I) o (II), o una composición que contiene el mismo, puede ser entre aproximadamente 1 ng/kg hasta aproximadamente 200 mg/kg, entre aproximadamente 1 µ g/kg hasta aproximadamente 100 mg/kg, o entre aproximadamente 1 mg/kg hasta aproximadamente 50 mg/kg. La dosificación de una composición puede ser a cualquier dosificación incluyendo, de manera enunciativa, aproximadamente 1 pg/kg. La dosificación de una composición puede ser a cualquier dosificación incluyendo, de manera enunciativa, aproximadamente 1 pg/kg, 10 pg/kg, 25 pg/kg, 50 pg/kg, 75 pg/kg, 100 pg/kg, 125 pg/kg, 150 pg/kg, 175 pg/kg, 200 pg/kg, 225 pg/kg, 250 pg/kg, 275 pg/kg, 300 pg/kg, 325 pg/kg, 350 pg/kg, 375 pg/kg, 400 pg/kg, 425 pg/kg, 450 pg/kg, 475 pg/kg, 500 pg/kg, 525 pg/kg, 550 pg/kg, 575 pg/kg, 600 pg/kg, 625 pg/kg, 650 pg/kg, 675 pg/kg, 700 pg/kg, 725 pg/kg, 750 pg/kg, 775 pg/kg, 800 µg/kg, 825 pg/kg, 850 pg/kg, 875 Ug/kg, 900 pg/kg, 925 ug/kg, 950 ug/kg, 975 ug/kg, 1 mg/kg, 5 mg/kg, 10 mg/kg, 15 mg/kg, 20 mg/kg, 25 mg/kg, 30 mg/kg, 35 mg/kg, 40 mg/kg, 45 mg/kg, 50 mg/kg, 60 mg/kg, 70 mg/kg, 80 mg/kg, 90 mg/kg, 100 mg/kg, 125 mg/kg, 150 mg/kg, 175 mg/kg, o 200 mg/kg. Las dosificaciones anteriores son ilustrativas del caso promedio, aunque puede haber casos individuales en los cuales se ameriten mayores o menores dosificaciones, y éstas quedan dentro del alcance de esta invención.

Cuando se administra en combinación con otras terapias, un compuesto de carbazol de la presente se puede administrar a dosificaciones relativamente menores. Además, el uso de agentes blanco también puede permitir la dosificación necesaria que será relativamente baja. Ciertos compuestos se pueden administrar a dosificaciones relativamente altas debido a factores entre los que se incluyen, de manera enunciativa baja toxicidad y alto aclaramiento .

Para uso en seres humanos, un compuesto de la fórmula estructural (I) o (II) se puede administrar solo, aunque en general se administra en adición con un portador farmacéutico seleccionado con respecto a la vía de administración pretendida y la práctica farmacéutica estándar. Las composiciones farmacéuticas para utilizarse de acuerdo con la presente invención, se pueden formular de una forma convencional utilizando uno o más portadores fisiológicamente aceptables que comprenden excipientes y auxiliares que faciliten el procesamiento de los compuestos de la fórmula (I) o (II) o las preparaciones farmacéuticas.

Los compuestos de carbazol de la presente se pueden administrar simultánea o metronómicamente con otros tratamientos anticáncer, tales como, quimioterapia y/o terapia de radiación. El término "simultáneo" o "simultáneamente" significa que el otro tratamiento anticáncer y el compuesto de carbazol se administran en un término de 6 horas, 3 horas o menos entre si. El término "metronómicamente", significa la administración de los otros tratamientos anticáncer en momentos diferentes de los tratamientos anticáncer y a una cierta frecuencia con relación a la administración de repetición y/o el regimiento de tratamiento anticáncer.

El compuesto de carbazol, o las composiciones que contienen el compuesto de carbazol, se puede administrar de cualquier forma, incluyendo de manera enunciativa, oral, parenteral, sublingual, transdérmica , rectal, transmucosal, tópicamente, vía inhalación, via administración bucal, o combinaciones de las mismas. La administración parenteral incluye, de manera enunciativa: intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal , subcutánea, intramuscular, intratecal, e intra-articular . El compuesto de carbazol también se puede administrar en la forma de un implante, que permite una lenta liberación del compuesto, asi como también una infusión i.v. lenta controlada.

Los compuestos de carbazol de la presente invención se pueden utilizar para tratar una variedad de enfermedades y condiciones. Por ejemplo, los compuestos de la presente invención se pueden utilizar en combinación con radiación y/o un agente quimioterapéutico en el tratamiento de cánceres. Por ejemplo, los compuestos de carbazol se pueden utilizar para intensificar el tratamiento de tumores que se tratan habitualmente con un antimetabolito, por ejemplo, metotrexato o 5-flúoruracilo (5-FU) .

El uso de los compuestos de carbazol de la presente invención puede dar por resultado en una regresión parcial o completa de las células cancerígenas, es decir, la desaparición parcial o completa de estas células de la población celular. Por ejemplo, se puede utilizar un método de la invención para disminuir la tasa de crecimiento de tumores, disminuir el tamaño o número de los tumores, o inducir una regresión tumoral parcial o completa.

Un compuesto de carbazol de la presente se puede utilizar para el tratamiento de una enfermedad o condición in vivo mediante la administración a un individual que necesita del mismo. La enfermedad o condición puede ser un cáncer. Una variedad de cánceres se pueden tratar incluyendo, de manera enunciativa: carcinomas, incluyendo, vejiga (que incluye, cáncer de la vejiga acelerado y metastático) , mama, colon (incluyendo cáncer colorrectal) , riñon, hígado, pulmón (incluyendo cáncer pulmonar de células pequeñas y no pequeñas y adenocarcinoma pulmonar) , ovario, próstata, testículos, tracto genitourinario, sistema linfático, recto, laringe, páncreas (incluyendo carcinoma pancreático exocrino) , esófago, estómago, vesícula biliar, cérvix, tiroides, renal, y piel (incluyendo carcinoma de células escamosas); tumores hematopoiéticos de linaje linfoideo, incluyendo leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, linfoma de linfocitos B, linfoma de linfocitos T, linfoma de Hodgkins, linfoma que no es de Hodgkins, linfoma de células pilosas, linfoma histiocítico, y linfoma de Burketts, tumores hematopoiéticos de linaje mieloideo, incluyendo leucemias mielógenas agudas y crónicas, síndrome mielodisplásico, leucemia mieloide, y leucemia promielocítica; tumores del sistema nervioso central y periférico, incluyendo astrocitoma, neuroblastoma, glioma, y schwanomas; tumores de origen mesenquimal, incluyendo fibrosarcoma, rabdomioscarcoma, y osteosarcoma; y otros tumores, incluyendo melanoma, xenoderma pigmentosum, keratoactantoma, seminoma, cáncer folicular de la tiroides, teratocarcinoma, carcinoma de células renales (RCC) , cáncer pancreático, mieloma, leucemia mieloide y linfoblástica, neuroblastoma, y glioblastoma .

La transformación inducida por tax de HTLV, un agente provocador de la leucemia linfoblástica T en adultos humanos (ATL) , puede compartir los mismos blancos moleculares implicados en el RCC. Por ejemplo, NF-?? es constitutivamente activo en células tax-transformadas . Similar a RCC, la actividad p53 se inhibe a través de la activación de NF-?? en las células tax-transformadas y la inhibición p53 no implica el secuestro de p300. Con base en el mecanismo compartido de la activación p53, las composiciones también se pueden utilizar para tratar la leucemia inducida por HTLV. Sin importar su estado p53, la mayoría de los cánceres humanos tienen NF-?? hiperactivo constitutivamente. La composición también es capaz de inhibir NF-?? al reprogramar los complejos NF-?? de transactivación en complejos transrepresión, que se pueden utilizar para el tratamiento de cualquier tumor sin importar su estatus p53. Las composiciones se pueden utilizar además para el tratamiento de infecciones por VIH debido a que los VIH LTR dependen en gran medida de la actividad NF-KB.

La composición también se puede utilizar como una terapia adyuvante para superar la resistencia a los fármacos anticáncer que se puede provocar por la activación NF-KB constitutiva. El fármaco anticáncer puede ser un quimioterapéutico o radiación, como se describe en la presente .

Un método de la presente invención, comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de carbazol de la presente en combinación con un agente quimioterapéutico que puede efectuar las descomposiciones del ADN de una sola cadena o doble cadena o que puede bloquear la replicación de ADN o la proliferación celular. Alternativamente, un método de la presente invención, comprende la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos un compuesto de carbazol de la presente en combinación con terapias que incluyen el uso de un anticuerpo, por ejemplo, herceptina, que tiene actividad para inhibir la proliferación de células cancerosas. Por consiguiente, los cánceres, por ejemplo, cánceres colorrectales, cánceres de la cabeza y cuello, cánceres pancreáticos, cánceres de mama, cánceres gástricos, cánceres de la vejiga, cánceres vulvares, leucemias, linfomas, melanomas, carcinomas renales de células renales, cánceres ováricos, tumores cerebrales, osteosarcomas , y carcinomas pulmonares, son susceptibles al tratamiento intensificado mediante la administración de un carbazol de la presente en combinación con un agente quimioterapéutico o un anticuerpo.

Los cánceres que se pueden tratar mediante la presente invención también incluyen, tumores sólidos, es decir, carcinomas y sarcomas. Los carcinomas incluye neoplasmas malignos derivados de células epiteliales que infiltran (es decir, invaden) tejidos circundantes y producen metástasis. Los adenocarcinomas son carcinomas derivados de tejido glandular, o de tejidos que forman estructuras glandulares que se pueden reconocer. Otra amplia categoría de cánceres incluye sarcomas, que son tumores cuyas células se incrustan en una sustancia fibrilar u homogénea, similares a tejido conectivo embrionario. La presente invención también permite el tratamiento de los cánceres de los sistemas mieloide o linfoide, incluyendo leucemias, linfomas, y otros cánceres que típicamente no están presentes como una masa tumoral, pero que se distribuyen en los sistemas vasculares o linforreticulares .

Las formas adicionales de cáncer que se pueden tratar mediante los compuestos presentes del carbazol incluyen, por ejemplo, oncología en adultos y pediátrica, crecimiento de tumores sólidos/malignancias, carcinoma de células mixoides y cilindricas, tumores avanzados localmente, cáncer metastático, sarcomas de tejido suave humano, incluyendo sarcoma de Ewing, metástasis de cáncer, incluyendo metástasis linfática, carcinoma de célula escamosa, en particular de la cabeza y cuello, carcinoma de célula escamosa esofágica, carcinoma oral, malignidades de células sanguíneas, incluyendo mieloma múltiple, leucemias, incluyendo leucemia linfocítica aguda, leucemia no linfocítica aguda, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielocítica crónica, y leucemia de células pilosas, linfomas de derrame (linfomas basados en la cavidad corporal), cáncer pulmonar con linfoma químico (incluyendo carcinoma de células pequeñas, linfoma cutánea de línfocitos T, linfoma de Hodgkin, linfoma que no es de Hodgkin, cáncer de la corteza adrenal, tumores productores de ACTH, cánceres de células no pequeñas, cáncer de mama, incluyendo carcinoma de células pequeñas y carcinoma ductal) , cánceres gastrointestinales (incluyendo cáncer estomacal, cáncer de colon, cáncer colorrectal, y pólipos asociados con neoplasia colorrectal ) , cáncer pancreático, cáncer hepático, cánceres urológicos (incluyendo cáncer de vejiga, tal como tumores de vejiga superficiales primarios, carcinoma invasivo de células transicionales de la vejiga, y cáncer de la vejiga músculo invasivo) , cáncer próstata, malignidades del tracto genital femenino (incluyendo carcinoma ovárico, neoplasmas epiteliales peritoneales primarios, carcinoma cervical, cánceres endometriales uterinos, cáncer vaginal, cáncer de la vulva, cáncer uterino y tumores sólidos en el folículo ovárico) , malignidades del tracto genital masculino (incluyendo cáncer testicular y cáncer peneal) , cáncer renal (incluyendo carcinoma de células renales), cáncer cerebral (incluyendo tumores intrínsecos del cerebro, neuroblastoma, tumores astrocíticos del cerebro, gliomas, e invasión de células tumorales metastáticos en el sistema nervioso central), cánceres óseos (incluyendo osteomas y osteosarcomas ) , cánceres de piel (incluyendo melanoma maligno, progresión de tumores de queratinocitos en la piel, y cáncer de célula escamosa) , cáncer de la tiroides, retinoblastoma, neuroblastoma, derrame peritoneal, derrame pleural maligno, mesotelioma, tumores de Wilms, cáncer de la vesícula biliar, neoplasmas trofoblásticos, hemangiopericitoma, y sarcoma de Kaposi. Por consiguiente, la administración de un compuesto de carbazol de la presente se espera que mejore los regímenes de tratamiento.

Los compuestos de la presente invención, también pueden potenciar la eficacia de los fármacos en el tratamiento de enfermedades inflamatorias. Los compuestos de carbazol de la presente, son potentes inhibidores de la NF-KB, lo cual implica la supresión o expresión/secreción de blancos NF-?? pro-inflamatorios, tales como TNF, IL-1, IL-6, IL-8, y muchos otros. Por lo tanto, la inhibición de NF-KB mediante un carbazol de la presente podría conducir a la supresión de reacciones inflamatorias locales y sistémicas. Quinacrina, que se supone actúa mediante un mecanismo muy similar al carbazol de la presente, se utilizó ampliamente como un agente anti-inflamatorio para el tratamiento de enfermedades auto-inmunes e inflamación crónica.

Los ejemplos de enfermedades que se pueden beneficiar de la terapia de combinación con compuestos adecuados para el método de la presente invención son artritis reumatoide, psoriasis, vitíligo, granulomatosis de Wegener, y lupus eritematoso sistémico (SLE) . El tratamiento de la artritis, la granulomatosis de Wegener, y SLE con frecuencia implica el uso de terapias inmunosupresoras, .tales como, radiación ionizante, metotrexato, y ciclofosfamida . Estos tratamientos típicamente inducen, ya sea directa o indirectamente, daño al ADN. La inhibición de NF-?? y/o a la activación de p53 dentro de las células inmunitarias ofensoras hacen que las células sean sensibles para ser controladas o mediante estos tratamientos estándar. La psoriasis y vitíligo comúnmente se tratan con radiación ultravioleta (UV) en combinación con psoraleno. Los compuestos de carbazol de la presente inducen el efecto de exterminio de UV y psoraleno, y aumentan el índice terapéutico de este régimen de tratamiento. En general, los compuestos de carbazol útiles en los métodos de la presente invención, potencian el control de las células de una enfermedad inflamatoria cuando están en combinación con los fármacos inmunosupresores actualmente utilizados.

Además de las condiciones anteriores, la presente invención también se puede utilizar en los métodos para tratar condiciones tales como, de manera enunciativa, ateroesclerosis, reestenosis, vasculitis, nefritis, retinopatia, enfermedad renal, trastornos proliferativos de la piel, psoriasis, cicatrización queloides, queratosis actínica, síndrome de Stevens-Johnson, artritis reumatoide (RA) , artritis crónica juvenil de aparición sistémica ( JCA) , osteoporosis , lupus eritematoso sistémico, enfermedades hiperproliferativas del ojo incluyendo crecimiento descendente epitelial, vitreorretinopatía proliferativa (PVR), retropatía diabética, enfermedades Hemangio-proliferativas, ictiosis, y los papilomas.

Los carbazoles de la presente invención, también exhiben actividad antimicrobiana, por ejemplo, bacterias con agente germen-positivo y germen-negativos, incluyendo Salmonella; actividad antiprotozoarios; y actividad antiviral .

Como se apreciará por los expertos en la técnica, en los métodos descritos en la presente se pueden utilizar agentes activos o auxiliares adicionales. La referencia en la presente a tratamiento también se extiende a la profilaxis, asi como también al tratamiento de enfermedades o síntomas establecidos.

La presente invención, se puede aplicar a las poblaciones celulares ex vivo. Por ejemplo, los compuestos de carbazol de la bote presente se pueden utilizar ex vivo para determinar el plan óptimo y/o dosificación de administración del compuesto de carbazol de la presente para una indicación determinada, tipo celular, paciente, y otro parámetro. La información recolectada de este uso se puede utilizar para fines experimentales o en la clínica para establecer el protocolo para el tratamiento in vivo. Son evidentes para aquellos expertos en la técnica otros usos ex vivo para los cuales es adecuada la invención.

Un compuesto de carbazol de la presente también se puede administrar en combinación con radiación. Las enfermedades que se pueden tratar con radiación electromagnética incluyen enfermedades neoplásicas, tumores benignos y malignos, y células cancerosas.

El tratamiento con radiación electromagnética de otras enfermedades no listadas en la presente también se contempla por la presente invención. Las modalidades preferidas de la presente invención emplean la radiación electromagnética de: radiación gamma (10~20 a 10"13 m) , radiación por rayos x (10~12 a 10~9 m) , luz ultravioleta (10 nm a 400 nm) , luz visible (400 nm a 700 nm) , radiación infrarroja (700 nm a 1 mm) , y radiación por microondas (1 mm a 30 mm) .

Muchos protocolos de tratamiento contra el cáncer actualmente emplean radiosensibilizadores activados por radiación electromagnética, por ejemplo, rayos X. Los ejemplos de radiosensibilizadores activados por rayos X incluyen, de manera enunciativa, lo siguiente: metronidazol, misonidazol, desmetilmisonidazol, pimonidazol, etanidazol, nimorazol, mitomicina C, RSU 1069, SR 4233, E09, RB 6145, nicotinamida, 5-bromodeoxiuridina (BUdR) , 5-iododeoxiuridina (IUdR), bromodeoxicitidina, flúordeoxiuridina (FUdR), hidroxiurea, cis-platina, y análogos terapéuticamente efectivos y derivados de los mismos.

La terapia fotodinámica (PDT) de cánceres emplea luz visible como el activador de radiación del agente sensibilizador. Los ejemplos de radiosensibilizadores fotodinámicos incluyen los siguientes, de manera enunciativa: derivados de hematoporfirina, PHOTOFRIN®, derivados de benzoporfirina , NPe6, etioporfirina estañada (SnET2), feoborbido-a, bacterioclorofila-a, naftalocianinas , ftalocianinas , ftalocianina de zinc, y análogos terapéuticamente efectivos y derivados de los mismos.

Los radiosensibilizadores se pueden administrar junto con una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más compuestos además de un compuesto de carbazol de la presente, estos compuestos incluyen, de manera enunciativa, compuestos que estimulen la incorporación de los radiosensibilizadores a las células blanco, compuestos que controlen el flujo de los terapéuticos, nutrientes, y/u oxigeno hacia las células blanco, agentes quimioterapéuticos que actúen sobre el tumor con o sin radiación adicional, u otros compuestos terapéuticamente efectivos para el tratamiento de cáncer u otra enfermedad. Los ejemplos de agentes terapéuticos adicionales que se pueden utilizar junto con los radiosensibilizadores incluyen, de manera enunciativa: 5-flúoruracilo (5-FU), leucovorina, oxigeno, carbógeno, transfusiones de glóbulos rojos, perfluorocarburos (por ejemplo, FLUOSOLW® -DA), 2.3-DPG, BW12C, bloqueadores del canal de calcio, pentoxifilina, compuestos antiangiogénesis , hidralazina, y L-BSO.

El agente quimioterapéutico puede ser cualquier agente farmacológico o compuesto que induzca apoptósis. El agente farmacológico o compuesto puede ser, por ejemplo, una molécula orgánica pequeña, péptido, polipéptido, ácido nucleico, o anticuerpo. Los agentes quimioterapéuticos que se pueden utilizar incluyen, de manera enunciativa: agentes alquilantes, antimetabolitos , hormonas y antagonistas de los mismos, productos naturales y sus derivados, radioisótopos, anticuerpos, asi como también productos naturales, y combinaciones de los mismos. Por ejemplo, un compuesto de carbazol de la presente invención, se pueden administrar con antibióticos, tales como, doxorubicina y otros análogos de antraciclina , mostazas de nitrógeno, tales como, ciclofosfamida, análogos de pirimidina tales como, 5-flúoruracilo , cis-platina, hidroxiurea, taxol y sus derivados naturales y sintéticos, y lo semejante. Como otro ejemplo, en el caso de tumores mezclados, tales como adenocarcinoma de la mama, donde los tumores incluyen, células gonadotropina dependientes y gonadotropina independientes, el compuesto se puede administrar junto con leuprólido o goserelina (análogos de péptidos sintéticos de LH-RH) . Otros protocolos antineoplásicos incluyen el uso de un compuesto inhibidor con otra modalidad del tratamiento, por ejemplo, cirugía o radiación, también denominada en la presente como "modalidades antineoplásicas adjuntas". Los agentes quimioterapéuticos adicionales útiles en la invención incluyen hormonas y antagonistas de las mismas, radioisótopos, anticuerpos, productos naturales, y combinaciones de los mismos.

Los ejemplos de agentes quimioterapéuticos útiles para el método de la presente invención se listan en la siguiente tabla.

TABLA 1 Agentes alquilantes Productos naturales Mostazas de nitrógeno Fármacos antimicóticos Mecloretamina ciclofosfamida ifosfamida Taxanos melfalan paclitaxel cloram ucilo Vinca alcaloides mostaza uracilo vinblastina (VLB) temozolomida vincristina vinorelbina Nitrosoureas vindesina carmustina (BCNU) Taxotere® (docetaxel) lomustina (CCNU) estramustina semustina (metilo-CCNü) fosfato de estramustina clorometina estreptozocina Epipodofilotoxinas etopósido Etilenimina/Metil-melamina tenipósido trietilenemelamina (TEM) trietilen tiofosforamida Antibióticos (tiotepa) actimomicina D Hexametilmelamina daunomicina (rubidomicina) (HMM, altretamina) doxorubicina (adriamicina) mitoxantroneidarubicina Sulfonatos de alquilo bleomicina Busulfano esplicamicina (mitramicina) Pipobromano mitromicina-C dactinomicina Triazinas apidicolina dacarbazina (DTIC) epirubicina idarubicina Antimetabolitos daunorubicina Análogos de ácido fólico mitramicina Metotrexato desxi co-formicina Trimetrexato Pemetrexed Enzimas (antifolato de múltiples blancos) L-asparaginasa L-arginasa Análogos de pirimidina 5-fluorouracilo Radiosensiblizadores Fluorodeoxiuridina metronidazol Gemcitabina misonidazol citosina arabinósida desmetilmisonidazol (AraC, citarabina) pimonidazol 5-azacitidina etanidazol 2,2' -difluorodeoxi-citidina nimorazol Floxuridina RSU 1069 Pentostatina E09 RB 6145 Análogos de purina Antiandrógenos no esteroideos 6-mercaptopurina SR4233 6-tioguanina flutamida Azatioprina nicotinamida 2' -deoxicoformicina 5-bromodeoziuridina (pentostatina) 5-iododeoxiuridina eritrohidroxinonil-adenina (EHNA) bromodeoxicitidina fosfato de fludarabina 2-clorodeoxiadenosina Agentes varios (cladribina, 2-CdA) Complejos para coordinación de platino cisplatina Inhibidores de topoisomerasa tipo I carboplatina Camptotecina oxaliplatina Topotecano antracendiona Irinotecano mitoxantrona Modificadores de la respuesta biológica Urea sustituida G-CSF hidroxiurea GM-CSF Derivados de metilhidrazina Agentes de diferenciación metilhidrazina (MIH) Derivados de ácido retinoico procarbazina Hormonas y antagonistas Supresor adrenocortical Adrenocorticoesteroides/antagonistas mitotano (?,?' - DDD) prednisona y equivalentes ainoglutetimida dexametasona ainoglutetimida Citocinas interferón , ß, ?) Progestinas interleucina-2 caproato de hidroxiprogesterona acetato de medroxiprogesterona Fotosensibilizador acetato de megestrol derivados de hematoporfirina PHOTOFRIN® Estrógenos derivados de benzoporfirina Dietilstilbestrol Npe6 etinilestradiol/equivalentes etioporfirina estañada (SnET2) feoborida-a Antiestrógeno bacterioclorofil-a tamoxifeno naftalocianinas ftalocianinas Andróqenos ftalocianinas de zinc propionato de testosterona fluoximesterona/equivalentes Radiación rayos X Antiandróqenos luz ultravioleta flutamida radiación gamma análogos de la hormona radiación visible liberadora de gonadotropina radiación infrarroja leuprólido radiación por microondas Los ejemplos de agentes quimioterapéuticos que son particularmente útiles junto con los radiosensibilizadores incluyen, por ejemplo, camptotecinas, carboplatinas , cis-platina, daunorrubicina, doxorabicina, interferón (alfa, beta, gamma) , irinotecano, hidroxiurea, clorambucilo, 5-flúoruracilo (5-FU) , metotrexato, 2-cloroadenosina, fludarabina, azacitidina, gemcitabina, pemetrexed, 2-interleuquina , irinotecano, docetaxel, paclitaxel, topotecano, CPT-11, anastrazol, letrazol, capecitabina, reloxafina, ciclofosfamida, ifosamida, droloxafina, y los análogos terapéuticamente efectivos y derivados de los mismos .

Los agentes que afectan microtúbulos interfieren con la mitosis celular y son conocidos en la técnica por su actividad citotóxica. Los agentes que afectan microtúbulos útiles en la invención incluyen de manera enunciativa, alocolquicina (NSC 406042), halicondrina B (NSC 609395), colquicinas (NSC 757), derivados de colquicinas (por ejemplo, NSC 33410), dolastatina 10 (NSC 376128), maytansina (NSC 153858), rizoxina (NSC 332598), paclitaxel (NSC 125973), derivados de TAXOL* (por ejemplo, NSC 608832), tiocolquicina NSC 361792), tritilcisteina (NSC 83265), sulfato de vinblastina (NSC 49842), sulfato de vincristina (NSC 67574), epotilonas naturales y sintéticas que incluyen de manera enunciativa, epotilona A, epotilona B, y discodermólido (véase Service, (1996) Science, 274:2009) estramustina, nocodazol, MAP4, y lo semejante. Los ejemplos de estos agentes también se describen en Bulinski (1997) J. Cell Sci. 110:3055 3064; Panda (1997) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 94:10560-10564; Muhlradt (1997) Cáncer Res. 57:3344-3346; Nicolaou (1997) Nature 397:268-272; Vasquez (1997) Mol. Biol. Cell. 8:973-985; y Panda (1996) J. Biol. Chem 271:29807-29812.

Los agentes citoestáticos que se pueden utilizar incluyen, de manera enunciativa: hormonas y esferoides (incluyendo análogos sintéticos) : 17-ot-etinilestadiol, dietilstilbestrol, testosterona, prednisona, fluoximesterona, propionato de dromostanolono, testolactona, megestrolacetato, metilprednisolona, metil-testosterona, prednisolona, triamcinolona, clorotrianiseno, hidroxiprogesterona, aminoglutimida, estramustina, medroxiprogesteroneacetato, leuprolido, flutarnida, toremifeno, zoladex.

Otros agentes citoestáticos son antiangiogénicos tales como inhibidores de la metaloproteinasa matriz, y otros inhibidores VEGF, tales como anticuerpos anti-VEGF y pequeñas moléculas tales como, ZD6474 y SU668. También se pueden utilizar anticuerpos anti-Her2. Un inhibidor EGFR es EKB-569 (un inhibidor irreversible) . También se incluyen los anticuerpos C225 inmunoespecificos para los inhibidores de EGFR y Src.

También es adecuado para utilizarse como un agente citoestático CASODEX® (bicalutamida, Astra Zeneca) que hace a los carcinomas andrógeno-dependientes no-proliferativos . Todavía otro ejemplo de un agente citoestático es el antiestrógeno TA OXIFEN® que inhibe la proliferación o crecimiento del cáncer de mama estrógeno-dependiente . Los inhibidores de la transducción de las señales proliferativas celulares son agentes citoestáticos. Los ejemplos representativos incluyen, los inhibidores del factor de crecimiento epidérmico, inhibidores de Her-2, inhibidores de la MEK-I cinasa, inhibidores de la MAPK cinasa, inhibidores de pl3, inhibidores de Src cinasa, e inhibidores de PDGF.

Debido a su capacidad única para inducir apoptósis en células tumorales, los miembros de la familia TNF se consideran potenciales farmacéuticos anticáncer. Sin embargo, muchas células tumorales dejan escapar ácido proapoptótico de ligandos letales, reduciendo con esto el uso de estos agentes para la muerte de cánceres ligandos sensibles y permitir que el tumor escape a la respuesta inmunitaria del hospedero. El uso de un inhibidor de NF-KB se puede utilizar para sensibilizar las células tumorales al exterminio de un ligando letal, tal como un polipéptido del TNF.

El polipéptido del TNF puede ser un miembro de la superfamilia de ligandos del TNF. Los ejemplos representativos de polipéptidos del TNF incluyen, de manera enunciativa, NGF, CD40L, CD137L/4-1BBL, TNF-a, CD134L/OX40L, CD27L/CD70, FasL/CD95, CD30L, TNF- /LT-a, LT-ß, y TRAIL. Los miembros de la superfamilia deL TNF son proteínas naturales que están implicadas en el mantenimiento y función del sistema inmunitario y que pueden activar la apoptósis. El polipéptido del TNF puede ser TRAIL, que induce la apoptósis principalmente en tumores aunque no en células normales. La actividad de estos denominados "ligandos letales", se cree que se suministrará por la unión con miembros de la familia del receptor del TNF, que contienen dominios letales estructuralmente similares en sus porciones intracelulares . La ligación de estos receptores, específicos para cada ligando letal, la activación desencadenante de una cascada de eventos que den por resultado en la activación de caspasa. Los ejemplos representativos de los receptores de TNF-R unidos por los polipéptidos de TNF incluyen, de manera enunciativa, LNGFR/p75, CD40, CD137 /4-1BB/ILA, TNFRI/p55/CD120a, TNFRII/p75/CD120b, CD134/OX40/ACT35, CD27, Fas/CD95/APO-l, CD30/KÍ-1, LT-ß R, DR3, DR4 , DR5, DcRl/TRID, TR2, GITR y osteoprotegerina .

También se contempla que se puedan utilizar otros agentes en lugar del polipéptido del TNF. Por ejemplo, se puede utilizar un anticuerpo que imite la actividad de un polipéptido del TNF. Los ejemplos representativos de estos anticuerpos incluyen, de manera enunciativa, un anticuerpo agonista para FAS, un receptor TRAIL, o TNFR. Además, se pueden utilizar aptámeros y otros ligandos sintéticos capaces de activar los receptores correspondientes.

También es posible diagnosticar si un tumor en un paciente es capaz de ser tratado por un compuesto de carbazol de la presente. Una muestra de tumor se obtiene del paciente. Las células del tumor luego se translucen con un sistema reportero p53, tal como, un reportero lacZ sensible a p53. Las células transducidas luego se incuban con el compuesto. La producción de un control anterior de señal suministrada por p53 indica que el tumor se puede tratar por el compuesto de carbazol.

Las figuras la y Ib, son gráficas que muestran que los carbazoles de la presente inhiben la actividad transcripcional NF- ? en células tratadas con el TNF (figura la) y una comparación de la concentración activa (valores EC5o) sobre la activación de p53 y la inhibición de NF-KB ( figura Ib) .

Los compuestos de carbazol de la presente tienen propiedades anticáncer significativas in vitro (figura 2) e in vivo (figura 3) . La figura 2, muestra el efecto de diversos compuestos de carbazol sobre células tumorales que difieren en sus estados p53 después del tratamiento durante 1 hora con diferentes concentraciones de cuatro compuestos de carbazol de la presente. La supervivencia celular se valoró a las 72 horas mediante tinción con azul de metileno. Por lo tanto, se especula, aunque no se ha confirmado, que la activación p53 mediante los compuestos de carbazol de la presente puede no ser la señal primaria para inducción de muerte, aunque en su lugar puede reflejar un tipo de estrés celular provocado por la inactivación del NF-KB constitutivamente activo.

Las células tumorales probadas fueron adenocarcinoma p53 wt de colon HCT116 (figura 2a), adenocarcinoma p53 mut de mama MDA-MB-231 (figura 2b), carcinoma p53 wt de colon DLD1 (Figura 2c) , adenocarcinoma p53 wt de pulmón A549 (figura 2d) , carcinoma p53 wt de células renales Cakil (Figura 2e) , adenocarcinoma p53 mut de colon HT29 (Figura 2f ) , supresión de la adenocarcinoma p53 de pulmón H1299 (Figura 2g) , adenocarcinoma p53 wt de mama MCF7 (figura 2h) , RCC45 carcinoma p53 wt de células renales (figura 2i) , carcinoma de células renales ACHN (figura 2j), y fibrosarcona de pulmón HT1080 (figura 2k) . La célula tumoral probada de la figura 3 es el modelo de xenoinjerto HCT116.

Los compuestos de carbazol de la presente analizados no indujeron daño al ADN (Tabla I) . Por lo tanto, se especula, que la citotoxicidad de los compuestos de carbazol de la presentes resulta de un tipo único de estrés de células no genotóxicas que implica la supresión de NF-?? a la cual las células cancerosas son más sensibles que las células normales. Esto ilustra que los carbazoles de la presente son una clase novedosa bastante efectiva de los terapéuticos anticáncer.

Tabla I Sumario de los efectos de los compuestos de carbazol de la presente presentes y doxorubicina para comparar la señalización de ADN y sensible a daño del ADN.

Conpuesto Tnml i Tacirn Tinción activación fósforo Bosforo Inhibición Topo TT Prueba En oalular H2AX KSM/KSS. hkl/2 p53 In vitro ñmes Conpuesto 100 Citoplásmico No No NO S392 No Ligación Negativa Catpuesto 6h Citoplásmico No No No S392 ND Ligación Negativa Ejenplo 3 Citoplásmico No No No ND ND Ligación Negativa S15, Doxorubicina Nuclear Si Si Si 46, 392 Si Relegación Negativa ND - no determinado De acuerdo con una característica importante de la presente invención, una superposición tridimensional (3D) de conformadores de moléculas de carbazol activas e inactivas reveló las características de los compuestos que contribuyen a su actividad. Una característica importante es la planaridad del núcleo de carbazol. Al comparar múltiples alineaciones tridimensionales de los conformadores, se encontró que en todos los compuestos de carbazol activos, la región núcleo del carbazol fue plana (figura 4). Los compuestos inactivos pueden ser planos o no planos (figura 5). Los estudios estructurales adicionales de los compuestos que tienen similares distribuciones atómicas sobre la arquitectura molecular confirmaron que la planaridad del área de anillo del carbazol es importante para determinar la potencia de la activación p53 por el compuesto de carbazol (figuras, 6 y 7). Un carbazol activo, es decir, ejemplo 2, se muestra en la figura 6. Un carbazol inactivo, es decir, el compuesto 200, se muestra en la figura 7. El compuesto tiene una fórmula estructural El hallazgo de que los compuestos de carbazol son capaces de activar p53 tienen estructura plana lo que conduce a una hipótesis sin confirmar de que el mecanismo de acción de estos compuestos se suministra via la intercalación de ADN. Se especula que correlación entre la potencia de activación p53 y la estructura plana del núcleo de carbazol refleja una capacidad para intercalar ADN. Para probar esta hipótesis, los compuestos de carbazol se intercalan virtualmente en la estructura de ADN dimensional tomada del complejo p53-ADN complejo (estructura 1TUP PDB) . La intercalación inicial se realizó como sigue. Una molécula de carbazol activo, es decir, el compuesto 300, se superpuso sobre la estructura de ADN de tal forma que el área de anillo plano se colocara entre y paralelo a los dos pares de base de apilación. La molécula intercalada luego se colocó contra Arg280 de p53. El residuo Arg280 se considera que será crucial para la interacción p53-ADN. Véase, M. Kitayner et al., Molecular Cell, 22, páginas 741-753, junio de 2006. Esta superposición de fuerza bruta viola las interacciones Van der Waals entre los átomos de las dos estructuras. Utilizando el paquete de software MOLOC molecular mechanics, se utilizó el complejo del análogo-p53 de ADN-carbazol terciario para reducir las tensiones Van der .Waals y de ángulo de torsión en la estructura de la molécula combinada con ADN. Después de la optimización, la posición de la molécula activa se ajustó a la cavidad en el ADN con el plano de anillo que es paralelo a los pares de base de apilamiento de ADN. Como resultado de este procedimiento de optimización, los aceptores de enlaces de hidrógeno (HBA) ubicados en los sustituyentes del anillo de carbazol se colocaron en el canal principal y la cadena lateral unida al átomo de nitrógeno de carbazol colocado en el canal menor estrecho. La fórmula estructural para el compuesto 300 es: Como resultado de este estudio, se creó un fragmento de dsADN con una cavidad interna mejor configurada para adaptarse a los compuestos de carbazol para activar p53. Utilizando el paquete de software GOLD, se realizó un ensamblaje molecular sobre una variedad de compuestos de carbazol con actividad p53 conocidas. Se demostró que, en promedio, las moléculas bastante activas (activación p53 ?0¾? 130 µ?) fueron mucho mejor ajustadas a esta cavidad que las moléculas con EC50 >130 µ?. Los conformadores de los compuestos de carbazol bastante activos se colocaron uniformemente dentro de la cavidad, mientras que la calidad del ajuste disminuyó entre los compuestos de carbazol que tienen una débil potencia de activación p53. La mayoría de las moléculas inactivas se caracterizaron por una calidad de ajuste muy deficiente.

Una colocación adecuada del sustituyente unido al nitrógeno de carbazol en el canal menor del ADN puede ser importante para alcanzar una buena actividad p53. Simplemente, el ajuste de la cadena lateral en el canal menor mejora el ajuste total del compuesto de carbazol. Además, el análisis para elección de átomos de la superposición tridimensional de los compuestos de carbazol activos muestra que un grupo amino cargado positivamente en la cadena lateral es importante para alcanzar la actividad.

Las posiciones de los átomos HBA (unión con hidrógeno) en los sustituyentes de carbazol, y su identidad son importantes para alcanzar la actividad p53. La baja calidad de los átomos HBA (es decir, nitrógeno) conduce a una débil actividad del compuesto de carbazol- La ausencia de átomos HBA sobre los sustituyentes de carbazol proporciona un compuesto inactivo. Todos los compuestos bastante activos tienen sustituyentes de carbazol sin girar. El ensamblaje de las moléculas bastante activas (EC50<130 nm) y activas (EC50 aproximadamente 1 nM) en la cavidad de ADN demuestra que los sustituyentes de carbazol girados con buenos átomos HBA, pueden crear enlaces de hidrógeno con átomos de ADN. Por el contrario, los sustituyentes de carbazol no girados, no tienen enlaces de hidrógeno con ADN, lo cual conduce a su alta actividad.

La actividad antitumoral del ejemplo 7 (compuesto 6h) se demostró utilizando el modelo de tumor singénico de melanoma B16 como sigue. Se inocularon ratones C57BL/6 intradérmicamente en 2 sitios del abdomen con 5 x 104 de células de melanoma B16 murinas. Cuando al menos uno de los sitios de inoculación con el tumor desarrollaron un tumor (tamaño promedio de aproximadamente 6 mm3) , inició el tratamiento. Los ratones se trataron diariamente mediante gavage oral durante hasta 14 días con ya sea el vehículo control de metilcelulosa al 0.5% o 30 mg/kg del ejemplo 7 (n=5 ratones/grupo de tratamiento) . Las mediciones de tumores se recolectaron mediante calibradores digitales cada 1-2 días. El efecto del tratamiento sobre tumores individuales se presenta en las figuras 8a y 8b. Con excepción de un ratón del grupo de tratamiento del ejemplo 7, no se observó ningún efecto sobre el peso total del ratón para cualquier grupo de tratamiento (<10% de cambios). En el dia 9, hubo una disminución de aproximadamente tres veces en el crecimiento de tumores en el grupo de tratamiento del ejemplo 7 en comparación con el grupo con control de vehículo (supresión de crecimiento al 68%) .

Para confirmar la actividad anti-tumor del ejemplo 7, el compuesto de carbazol (30 mg/kg) se suministró oralmente utilizando el modelo de xenoinjerto HCT116. En esta prueba, se inocularon ratones desnudos atímicos con 5X106 de células tumorales HCT116 en dos sitios. 90% de los tumores aparecieron entre el séptimo y décimo primer día después de la inoculación. Los tratamientos diarios orales con 30 mg/kg del compuesto del ejemplo 7 en metilcelulosa al 0.5% o un vehículo control de metilcelulosa al 0.5% iniciaron cuando al menos un tumor por ratón alcanzó 20-25 mm3 de tamaño. Los ratones se trataron hasta que los tumores control alcanzaron 1000 mm3. Después del inicio del tratamiento, los ratones se supervisaron para la condición general, pérdida de peso, y supervivencia, asi como también para el tamaño de los tumores medido cada tercer día.

Tabla 2 : Grupos experimentales D - día En esta prueba, 100% de los ratones en el grupo 2 sobrevivieron al experimento. No se observó ninguna pérdida de peso en el grupo 1 tratado con el vehículo control, mientras que en el grupo 2, tres ratones perdieron 15-20% del peso al término del experimento. El peso del resto de los ratones del grupo 2 fluctuó en la variación de 95-105% del peso original. No se observaron otras señales anormales en la aparición del ratón, actividad o comportamiento del grupo 2.

En el grupo 1 control, los tumores HCT116 crecieron exponencialmente, según se esperó dentro de una desviación regular entre tumores de crecimiento más rápido y más lento. En el grupo 2 tratado del ejemplo 7, el crecimiento de todos los tumores se retardó en comparación con el grupo 1 tratado con el control de vehículo. En el día 14, después de iniciar el tratamiento, ninguno de los tumores tratados alcanzó el tamaño del tumor con control de crecimiento menor (530 mm3) . En el crecimiento promedio de tumores, el tratamiento con el ejemplo 7, suprimió el crecimiento del tumor en un factor de aproximadamente 3.5 (73% de inhibición) en comparación con el grupo 1. De manera importante, un tumor tratado se curó completamente, y, en la autopsia, sólo se encontró una formación de tipo del tejido conectivo mínimo en lugar del tumor. El tamaño de diversos tumores tratados no sólo aumentó más lentamente que los tumores control, sino que disminuyó, lo cual es indicativo de la muerte de las células tumorales y la destrucción del tumor como resultado del tratamiento con el compuesto del ejemplo 7. Este resultado se observó durante los primeros 3-5 días de tratamiento, luego los tumores tratados siguieron creciendo lentamente.

Este experimento muestra que el compuesto del ejemplo 7 tuvo un efecto supresor en el crecimiento de los tumores de xenoinjerto subcutáneo HCT116 en ratones desnudos. El valor de supresión de crecimiento es del 73%, que se considera por los estándares NCI como una actividad anticáncer significativa (>42%). Los resultados anteriores se ilustran en las figuras 3 y 8, 9, y 10.

La figura 3, es una curva promedio de crecimiento tumoral que muestra el tratamiento de un tumor de xenoinjerto con carcinoma de colon HCT116 con el compuesto del ejemplo 7 y un control (MC) . Los tumores tratados con el compuesto del ejemplo 7, exhiben un volumen tumoral sustancialmente reducido. Las barras en la gráfica del volumen de tumor contra días de tratamiento representa la desviación estándar. La figura 8, contiene gráficas que muestran el crecimiento de tumores individuales tratados en ratones con el vehículo control (figura 8a) y con el compuesto del ejemplo 7 (figura 8b) .

La figura 9, muestra el crecimiento de tumores individuales, hasta 100 mm3, en ratones tratados con el compuesto del ejemplo 7. La figura 10, muestra que el tamaño del tumor disminuyó durante los primeros días de tratamiento, y los tumores que se curaron.

La figura 11, demuestra un compuesto de carbazol, es decir, el compuesto 100, que activa p53 en el análisis descrito anteriormente, exhibe una actividad anticáncer significativa contra una amplia variedad de células de cáncer probadas. Cada una de las lineas celulares presentadas en la figura 11 se sembró en placas de 96 cavidades. Al siguiente día, las células se trataron con una variedad de concentraciones del compuesto 100. El tratamiento se presentó durante 24 horas, en cuyo tiempo el medio relleno con el compuesto se reemplazó con medio libre del compuesto y se dejó que las células crecieran hasta que las cavidades control, que se trataron sólo con el control del vehículo (DMSO), alcanzaron una monocapa (típicamente dentro de 48 horas) . Las células luego se fijaron y se tiñeron con azul de metileno al 0.5% en metanol al 50%. El tinte se eluyó con SDS al 1% y la absorbancia se midió a 650 nm. Los datos se presentan como la absorbancia a 650 nm contra la concentración del compuesto 100.

Los compuestos de los ejemplos 7, 15, y 13 mostraron una potente actividad anticáncer. En una prueba de eficacia utilizando estos tres compuestos, se inocularon subcutáneamente ratones desnudos atímicos con una suspensión de células de carcinoma de célula renal humana Cakil en ambos flancos traseros. Cuando al menos un tumor en un ratón alcanzó 20-50 mm3, se inició el tratamiento. Los ratones se trataron oralmente mediante gavage con ya sea 30 mg/kg del ejemplo 7, 5 mg/kg del ejemplo 15, o 25 mg/kg del ejemplo 13 formulado en hidroximetilcelulosa al 0.2%. Como un control positivo, un grupo se trató con 40 mg/kg de Sunitinib, un fármaco probado para el tratamiento del carcinoma de células renales. El tratamiento se administró durante 4 semanas en un programa de 5 días sobre/2 días. Después de que se completó el tratamiento, los ratones se supervisaron durante 4 semanas adicionales para determinar cuán rápidamente el crecimiento tumoral regresó a lo normal. La totalidad de los tres compuestos provocó una inhibición significativa del crecimiento del tumor en comparación con el vehículo control día 24 (fin del tratamiento) ejemplo 7 inhibición del 73%, ejemplo 15 inhibición del 50%, ejemplo 13 inhibición del 62%) . Este efecto antitumoral de los ejemplos 7 y 13 y, a un grado menor, ejemplo 15 fue sustancialmente mayor que el control con Sunitinib (42%). De manera interesante, el cese del tratamiento con cualquiera de los compuestos de la presente no condujo a un nuevo crecimiento rápido del tumor. Por el contrario, el final del tratamiento con Sunitinib dio por resultado en un crecimiento del tumor inmediato de tal forma que en el día 40, no hubo diferencia significativa en el volumen de tumor observada entre los grupos de control con Sunitinib y vehículo.

En resumen, la totalidad de tres carbazoles provocaron una inhibición del crecimiento tumoral que persistió incluso después de que se completó el tratamiento. El orden de potencia es el ejemplo 7 es mayor o igual al ejemplo 13, que es mayor al ejemplo 15. El tratamiento con el ejemplo 7 no provocó efectos secundarios evidentes en comparación con los ejemplos 13 y 15. Los efectos secundarios más severos se observaron con el ejemplo 13, donde dos ratones quedaron fuera del tratamiento a corto plazo y un ratón se retiró permanentemente debido a la pérdida de peso que condujo a una eutanasia prematura. De esta forma, el ejemplo 7 pareció ser el carbazol "más seguro" de esta prueba. Debido a que el ejemplo 15 sólo provocó un 10-15% de pérdida de peso de lo que fue a corto plazo, este compuesto fue el segundo más seguro en este modelo de tumor. Con base en los resultados, el ejemplo 7 es un compuesto preferido con potente actividad antitumoral (inhibición del 70-80%) en ausencia de efectos secundarios.

En otra prueba, se evaluaron la actividad y toxicidad antitumoral de los ejemplos 7, 15, y 13, a la dosis tolerada máxima (MTD) en ratones desnudos que portan xenoinjertos de adenocarcinoma ileocecal humanos HCT-8, y en ratones desnudos que portan xenoinjertos de adenocarcinoma de colon HT-29 humano. Se realizó una comparación de la eficacia y toxicidad antitumoral de los ejemplos 7, 15, y 13 en MTD de lado a lado contra xenoinjertos de adenocarcinoma de colon HCT-8 y HT-29 humanos.

Como se mostró anteriormente, los ejemplos 7, 15, y 13 demostraron una eficacia antitumor contra diversos xenoinjertos de tumores humanos se en ratones desnudos o SCID (tales como, los tumores HCT-116, DLD1, Cakil y MDA-MB-231 , con las células tumorales inoculadas como una suspensión celular a los ratones) . Se evaluaron la eficacia y toxicidad antitumor in vivo de estos tres compuestos en su MTD repetitivo contra xenoinjertos HCT-8 (relativamente sensibles a quimioterapia, tales como 5-FU e irinotecano) y HT-29 (relativamente resistentes a la quimioterapia) , establecidos en ratones desnudos mediante trasplante a aproximadamente 50 mg de piezas de tumor. En este estudio, se compararon el efecto y la toxicidad antitumor de los tres carbazoles contra tumores de cáncer de colon HCT-8 y HT29 con el tratamiento que inició cunado el tamaño del tumor alcanzó 150-200 mg (aproximadamente 7 días después del transplante del tumor) .

Materiales y métodos Animales. Ratones atímicos hembra de ocho a doce semanas de edad (nu/nu, peso corporal 22-25 g) se obtuvieron de Harían Sprague Dawley Inc. ( Indianapolis , IN) y se mantuvieron cinco ratones/ aula con agua y alimento ad libitum de acuerdo con un protocolo para animales aprobado institucionalmente .

Fármacos. Todos los compuestos se formularon en hidroxipropilmetilcelulosas al 0.2% a concentraciones de 0.5 mg/ml para el ejemplo 15, de 3 mg/ml para el ejemplo 7, y 2.5 mg/ml para el ejemplo 13.

Tumores. Se utilizaron xenoinjertos humanos de adenocarcinoma ileocecal HCT-8 y adenocarcinoma de colon HT-29. Los xenoinjertos se establecieron inicialmente al inyectar s.c 106 células cultivadas y los tumores se sub-cultivaron por varias generaciones al transplantar aproximadamente 50 mg de tumores no necróticos (2-3 piezas) via un trocar desde la travesía de los tumores cuando los tumores alcanzaron 1-1.5 g.

Dosis del fármaco y planificación. Todos los compuestos se administraron mediante administración oral (p.o.) en el MTD con el ejemplo 15: 5 mg/kg/día; Ejemplo 7: 30 mg/kg/día; y ejemplo 13: 25 mg/kg/día, 5 días en una semana durante 4 semanas (5 días/semana x 5) o hasta que el ratón se había tenido que sacrificar debido a un gran tumor. El tratamiento se inició 7 días después del transplante del tumor cuando los tumores alcanzaron 150-200 mg. Los ratones en el grupo control recibieron el vehículo (hidroxipropilmetilcelulosas al 0.2%) a 200 µ? por 20 g de peso corporal del ratón (al igual que los grupos de tratamiento) . Se utilizaron cinco ratones para cada grupo experimental con 10 tumores (1 tumor cada uno en los flancos laterales izquierdo y derecho) .

Medición del tumor. Con la ayuda de un calibrador de Vernier se midieron dos ejes (mm) del tumor (L, eje más largo; W, eje más corto) . El peso del tumor (mg) se estimó utilizando una fórmula: peso del tumor = 1/2 (L x W2 ) . Las mediciones de los tumores se tomaron diariamente al mismo tiempo que el tratamiento con el fármaco y 3-4 veces a la semana después de la terapia.

Dosis tolerada máxima (MTD) y evaluación de toxicidad. La MTD se definió como la dosis mayor de fármaco que no provoca una letalidad relacionada con el fármaco en ratones con una pérdida de peso menor al 20% del peso corporal original y las toxicidades fueron reversibles. La cinética de las toxicidades inducidas por el fármaco (pérdida de peso corporal, diarrea, y letalidad) se determinaron diariamente durante los primeros 10 días después del tratamiento y cada dos días después de éstos.

Actividad antitumoral . La actividad antitumoral se evaluó mediante la inhibición máxima del crecimiento del tumor (MTRI) que es el peso tumor medio del grupo tratado (MTWTG) en comparación con el grupo control sin tratar (MT CG) en el mismo punto de tiempo (MTRI = MTWTG - MT CG) ÷ MTWCG x 100%) . El tiempo de duplicación del tumor (TDT) se definió como el tiempo medio para que el tumor alcanzara dos veces su peso inicial. La respuesta del tumor se expresó como la respuesta de tumor parcial (PR) cuando el peso del tumor se redujo al menos el 50% del peso del tumor inicial y la respuesta del tumor completo (CR) se definió como la incapacidad para detectar el tumor con palpación en el sitio inicial de la aparición del tumor.

Resultados (a) la actividad antitumor y toxicidad del ejemplo 15, 7, y 13 en ratones desnudos que portan xenoinjertos HCT-8.

Los datos en la siguiente tabla muestran la actividad antitumoral y toxicidad del vehículo control, ejemplo 15, ejemplo 7, y ejemplo 13, administrados p.o. 5 días encendido y 2 días apagado a la semana en ratones desnudos que portan xenoinjertos HCT-8. Los datos indican que el ejemplo 13 y 15 tuvo una actividad moderada antitumoral contra los xenoinjertos HCT-8 con índices inhibidores de 35-40% y crecimiento retardado del tumoral en un 17% (ejemplo 13) y 57% (ejemplo 15), respectivamente, en comparación con el vehículo control (tiempo doble: 4.8 días).

Los cuatro cursos planeados de tratamiento para los ejemplos 13 y 15 no se completaron debido a que el gran volumen del tumor requirió que los ratones se sacrificaran. El ejemplo 7, fue mucho más activo que los ejemplos 13 y 15 contra xenoinjertos HCT-8 con una tasa inhibidora del 65.9% y un retraso del 142% del crecimiento del tumoral. El ejemplo 7, no produjo ninguna PR o CR. Con respecto a la toxicidad, el vehículo produjo leve toxicidad con el grupo de animales del tumor HCT-8 5 individual 5 días en y 2 días fuera a la semana x 2-4 semanas.

Tabla Actividad antitumoral y toxicidad de los ejemplos 15, 7, y 13 en ratones desnudos que portan xenoinjertos de adenocarcinoma ileocecal humanos HCT-8 Tratamiento Antitumor Actividad Toxicidad (%) (mg/kg/d) MTGI (%) TDT (día) PR (%) CR ( %) MWL letalidad Control-vehículo __ 4.8 ± 0.3 0 0 5.5 ± 1.9 0 Ejemplo 15 (5) 40.0 ± 18. .6 7.5 ± 3.5 0 0 10.0 ± 3.8 0 Ejemplo 7 (30) 65.9 ± 11. .0 11.6 ± 2.5 0 0 12.2 ± 6.8 0 Ejemplo 13 (25) 35.7 ± 20. .0 5.6 ± 1.2 0 0 8.5 ± 2.9 0 MTRI: inhibición máxima del crecimiento de tumores; TDT: tiempo para duplicación del tumor; PR: respuesta parcial al tumor; CR: respuesta completa al tumor; M L: pérdida máxima de peso del peso corporal en el pre-tratamiento . Al grupo control se le administraron hidroxipropilmetilcelulosas al 0.2% (vehículo)) a 200 µ? por 20 g de peso corporal del ratón. Se utilizaron cinco ratones para cada grupo experimental con 10 tumores (en los flancos laterales izquierdo y derecho) . (b) la actividad antitumor y la toxicidad de los ejemplos 15, 7, y 13 en ratones desnudos que portan xenoinjertos HT-29.

Los datos en la siguiente tabla muestran la actividad antitumoral y toxicidad del vehículo control, ejemplo 15, ejemplo 7, y ejemplo 13, administrados p.o. 5 días en y 2 días fuera por semana a ratones desnudos que portan xenoinjertos HT-29, lo cual es más resistente a la mayoría de los agentes quimioterapéuticos en comparación con HCT-8. Los datos indican que la totalidad de los tres compuestos fueron más activos contra este tumor que HCT-8. De manera similar, el ejemplo 13 fue el compuesto menos activo entre los tres, con tasas inhibidoras del 48% y crecimiento retardado del tumoral en un 50% (el tiempo para duplicación del tumor para el control fue 7.8 días). Mientras que el ejemplo 15 produjo una inhibición similar del crecimiento del tumoral (58%), tuvo menos de un efecto en el retraso del crecimiento del tumoral (retraso del 122% contra 76%) en comparación con el ejemplo 7. No se produjo ni PR ni CR por los tres agentes. Con respecto a la toxicidad, el ejemplo 7 y 13 produjeron menos pérdida de peso corporal. El ejemplo 7, fue más tóxico en el experimento con HT-29 en comparación con el experimento con HCT-8 con 18% de pérdida de peso 18% y 40% de letalidad.

Tabla Actividad antitumoral y toxicidad de los ejemplos 15, 7, y 13 en ratones desnudos que portan xenoinjertos de adenocarcinoma de colon HT-29.

Tratamiento Antitumor Actividad Toxicidad (%) (mg/kg/d) MTGI (%) TDT (día) PR (%) CR ( %) WL letalidad Control-vehículo 7.8 ± 0.8 0 0 5.6 ± 4. 2 0 Ejemplo 15 (5) 58.4 + 6.4 13.1 ± 2.3 0 0 17.9 ± 6 .8 40 Ejemplo 7 (30) 58.5 ± 17.4 17.3 ± 4.8 0 0 7.6 ± 5. 1 0 Ejemplo 13 (25) 47.6+ 6.7 11.7 ± 1.2 0 0 4.4 ± 2. 2 0 MTRI: inhibición máxima del crecimiento de tumores; TDT: tiempo para duplicación del tumor; PR: respuesta parcial al tumor; CR: respuesta completa al tumor; MWL: pérdida máxima de peso del peso corporal en el pre-tratamiento . Al grupo control se le administraron hidroxipropilmetilcelulosas al 0.2% (vehículo)) e 200 µ? por 20 g de peso corporal del ratón. Se utilizaron cinco ratones para cada grupo experimental con 10 tumores (en los flancos laterales izquierdo y derecho) .

Conclusión En conclusión, los ejemplos 15 y 13, muestran una actividad antitumor moderada, mientras que el ejemplo 7 tuvo mejor eficacia antitumor contra los xenoinjertos tanto HCT-8 como HT-29; El ejemplo 15, fue más tóxico que los ejemplos 7 y 15 en el estudio con HT-29; A diferencia de la respuesta para la mayoría de otros agentes quimioterapéuticos, los xenoinjertos HT-29 fueron más sensibles a la totalidad de los tres carbazoles en comparación con la respuesta observada con los xenoinjertos HCT-8 ; Los datos muestran que el ejemplo 7 es un compuesto preferido contra los xenoinjertos tanto HCT-8 como HT-29.

En otro experimento, se demostró la actividad antitumor del ejemplo 7 en un modelo murino de neuroblastoma . Los ratones transgénicos N-jr¡yc (TH-MYCN) portaron el oncogén N-myc humano bajo el control de un promotor de tirosina hidroxilasa, que se expresa en células neuroectodérmicas durante el desarrollo temprano, y los ratones desarrollaron un equivalente murino de neuroblastoma humano. Estos ratones habían probado ser un modelo excelente que comparte diversas características importantes con la enfermedad humana, incluyendo el sitio del tumor y sus metástasis, la histología del tumor, la tinción positiva para las proteínas marcadoras asociadas con neuroblastoma, la presencia de sinapsis y gránulos neurosecretores, ganancias y pérdidas de cromosomas en regiones sintéticas con aquellos observados en neuroblastoma humano, y la amplificación del número de copias de N-myc específicamente en los tumores que se desarrollaron.

La quimioterapia moderna ha mejorado dramáticamente los índices de supervivencia para muchos cánceres. Sin embargo, el desarrollo de resistencia a múltiples fármacos en el escenario clínico para neuroblastomas es una de las causas principales de fracaso del tratamiento, y la eliminación de la resistencia a múltiples fármacos tiene un enorme potencial clínico. Los fármacos que se dirigen a trayectorias novedosas no implicadas anteriormente en neuroblastoma podrían proporcionar una nueva avenida de protocolos de tratamiento .

Los resultados de las pruebas mostraron que el compuesto del ejemplo 7, tiene una remarcable actividad antitumor en este modelo de neuroblastoma, aunque altas dosis probaron ser tóxicas en algunos ratones. Los ratones tratados con 30 mg/kg del ejemplo 7 perdieron peso rápida e inesperadamente (2 g durante la noche en algún caso) y se encontró que murieron con bazos pequeños y señales de deshidratación . Los ratones que sobrevivieron a la terapia estuvieron libres de tumores durante un periodo que se prolongó de 15 a 47 días, sin embargo la totalidad de ratones no se trataron de acuerdo con la misma planificación. Las dosis se alteraron de acuerdo con la pérdida de peso. Con base en los resultados, el ejemplo 7 exhibió buena eficacia en el modelo de neuroblastoma TH-MYCN .

La quimioterapia moderna tuvo pasos de supervivencia dramáticamente mejoradas para muchos cánceres. Sin embargo, el desarrollo de resistencia a múltiples fármacos en el escenario clínico para neuroblastoma es una de las causas principales de fracaso del tratamiento, y evitar la resistencia a múltiples fármacos tuvo un enorme potencial clínico. Los fármacos que se dirigen a trayectorias novedosas no implicadas anteriormente en neuroblastoma podrían proporcionar una nueva avenida de protocolos de tratamiento .

La administración diaria del ejemplo 7, también evitó la aparición del tumor en un modelo de ratón transgénico MMTV-neu de cancerogénesis mamaria.

El cáncer de mama (BC) es un serio problema para el cuidado de la salud, debido a la alta incidencia de esta malignidad y éxito limitado de los tratamientos disponibles. Se sabe que el historial familiar de esta enfermedad junto con diversos factores genéticos específicos con grado sustancial de probabilidad predispone a los individuos al BC. Por lo tanto, las mujeres provenientes de los grupos con alto riesgo de BC, teóricamente se pueden beneficiar de una terapia anti-BC preventiva. Los compuestos de carbazol de la presente pueden modular diversas trayectorias celulares relacionadas con el cáncer en una dirección que conduce a una supresión del crecimiento tumoral. El compuesto del ejemplo 7, no provoca serios efectos secundarios en ratones cuando se administra a dosis terapéuticas (20-25 mg/kg) . El ejemplo 7, no mostró actividad mutagénica en el análisis Ames. En este estudio, el ejemplo 7, se probó como un agente preventivo para BC en ratones.

Modelo animal: Ratones hembra MMTV-neu en el antecedente de la cepa FVB expresan un proto-oncogén Her2 no activado bajo el promotor MMTV sensible a la estimulación con estrógeno. Los ratones desarrollaron tumores mamarios espontáneos que inician de las 24 semanas de edad con un 70-80% de animales que desarrollan normalmente tumores a los 10 meses de edad. Los objetivos de esta prueba fueron (a) comparan la incidencia de tumores en ratones tratados con el ejemplo 7, contra el vehículo control (agua), y (b) comparar la ganancia de peso y apariencia general de los ratones tratados con el ejemplo 7 contra vehículo control.

Diseño del estudio: 40 ratones hembra se destetaron de los padres reproductores a los 21 días de edad y se colocaron en jaulas por separado (4 ratones/jaula). En este momento, los ratones se marcaron y se asignaron a los grupos de tratamiento o control (20 ratones en cada uno) . Una vez a la semana se midió el peso corporal en ambos grupos. Iniciando a las 4 semanas de edad, a los ratones del grupo de tratamiento se les proporcionó agua que contuvo el ejemplo 7. El consumo de líquido en los grupos de tratamiento en control se estimó cada día. Con base en estas mediciones, se calculó el consumo de líquido por gramo de peso del ratón, y la concentración del ejemplo 7 en el agua para beber se ajustó a la dosis terapéutica conveniente. Semanalmente se prepararon soluciones frescas del ejemplo 7. Los ratones se supervisaron una vez a la semana para la formación de tumores mediante la palpación de las glándulas mamarias. Los ratones se sacrificaron en un momento en que el tamaño acumulativo del tumor alcanzó el volumen de 1000 mm .

Número de Grupo ratones Dosis destinada Modo de suministro 1 20 Ninguna (agua) Beber diariamente 2 20 aproximadamente 25 mg/kg del ejemplo 7 Beber diariamente Resultados preliminares: Los ratones del grupo de tratamiento estuvieron consumiendo el ejemplo 7 a una tasa promedio de 20 mg/kg diariamente. La variabilidad es debida a la precisión limitada del suministro del fármaco vía el agua para beber. No se observaron diferencias en la distribución de peso o anormalidades en aparición del animal entre el grupo de tratamiento y control En el curso del experimento, se presentaron en los grupos de tratamiento y control, diversas muertes espontáneas. La causa de muerte no fue clara debido a que los animales no tuvieron tumores y la examinación de patología aproximada post-mortem no mostró anormalidades evidentes. Ningunos de los ratones murió antes de varias semanas después del inicio de la administración del ejemplo 7. Durante la prueba, tres ratones control murieron a una edad de aproximadamente 15, 41 y 42 semanas, respectivamente. Siete ratones murieron en el grupo del ejemplo 7 a diferentes edades que varía de 12 a 45 semanas (de 7 a 41 semanas desde el inicio del tratamiento experimental) . 21 y 19 ratones alcanzaron una edad para portación del tumor en los grupos de control y tratamiento, respectivamente. Entre los mismos, se desarrollo un tumor en 14 (67%) de los ratones control y 7 (37%) de los ratones que recibieron el ejemplo 7.

La prueba mostrado: (a) la administración crónica del ejemplo 7 con agua para beber aproximadamente 20 mg/kg al día no provocó cambios en el peso corporal del ratón; (b) una mayor tasa de mortalidad en el grupo tratado con el ejemplo 7 contra el grupo control, aunque la diferencia no fue estadísticamente significativa y no hubo correlación entre la duración y periodo de tratamiento y la muerte de los ratones; y (c) una tasa menor de carga de tumores entre los ratones tratados con el ejemplo 7 contra los animales control .

Los compuestos de carbazol de la presente invención, también exhiben una actividad antiparasitaria. En particular, el efecto de los compuestos de carbazol sobre el parásito de la malaria se probó al cultivar Plasmodium falciparum (cepa DIO) in vitro en presencia o ausencia de los compuestos de prueba. Los compuestos de carbazol activos e inactivos (con respecto a la activación p53) se seleccionaron para ser probados, como fue quinacrina, un agente antimalaria convencional. La tabla 3, resume las estructuras de los compuestos, junto con sus valores EC50 en el análisis de activación p53.

Tabla 3. Compuestos de prueba El ejemplo 2, el compuesto 400, y el ejemplo 7, se probaron a concentraciones 29, 57, y 143 n . El compuesto 500, el ejemplo 18, y la quinacrina se probaron a 143 nM únicamente .

En cada experimento, se evaluaron microscópicamente 1000 eritrocitos para determinar el número de células infectadas. En experimentos control (sin compuestos de prueba agregados o PBS agregados), el porcentaje de células infectadas varió entre 1.6% y 6.4%. En la figura 12, se muestran los índices de reducción de infectividad determinados en el estudio. La potencia del análisis para activación p53 clara, pero indirectamente, se correlaciona con la inhibición de Plasmodium falciparum in vitro. Tres compuestos activos en el análisis de activación p53 (ejemplos 2, 7, y 18) demostraron actividad anti-malaria en comparación con quinacrina. Los compuestos inactivos en el análisis de activación p53 no mostraron reducción parasitemia (compuestos 400 y 500) .

Los compuestos de los ejemplos 7, 13 y 15, también mostraron actividad anti-protozoarios . La tripanosomiasis africana en humanos (HAT) o "enfermedad del sueño" es una de las infecciones tópicas más importantes, aunque igualmente la más olvidada. Se provoca por un protozoarios, Tripanosoma brucei, que se transmite a los seres humanos a través de la mordedura de una mosca tsetse (Glossina spp) . Aunque casi se eliminaron en la década de 1960, HAT ha reaparecido a una escala epidémica en varias de las áreas sub-Saharan no habitadas por la mosca tsetse. De acuerdo con la Organización Mundial de la Salud, aproximadamente 500,000 personas actualmente portan tripanosomas y morirán si quedan sin tratar. La mayor mortalidad asociada con HAT es debido, al menos en parte, a la falta de fármacos eficaces que se puedan administrar fácilmente.

Los fármacos utilizados actualmente para tratar la HAT son antiguos, tóxicos, y difíciles de administrar en el campo. Suramina y pentamidina, que se utilizan para tratar la enfermedad en las primeras etapas, se debe inyectar en una clínica. Sin embargo, el acceso a clínicas de la salud es poco común en las áreas rurales de África donde la enfermedad es endémica. Además, muchos pacientes en la primera etapa no buscan tratamiento debido a que no se han dado cuenta que están infectados. Esto es debido a la deficiente selección de poblaciones en riesgo, así como también la naturaleza variable intermitente y relativamente leve de los síntomas de la HAT de las primeras tempranas. En el momento en que se presentan los síntomas evidentes, los pacientes con frecuencia ya están en una etapa tardía de la enfermedad. El tratamiento de la HAT en etapa tardía es especialmente problemático debido a que implica la inyección de melarsoprol, un arsenical que literalmente quema a los pacientes en la inyección. Este tratamiento es bastante doloroso y muchos pacientes rechazan el tratamiento y tienen que ser sujetados físicamente y forzados a recibir el medicamento. Además, melarsoprol tiene efectos secundarios adversos significativos que dan por resultado en la muerte de 5-20% de pacientes tratados. Por estas razones, así como el problema esperado de la resistencia a fármacos, existe una urgente necesidad por crear un conducto de fármacos novedosos, biodisponibles oralmente para que cambien el lugar de los medicamentos anticuados actuales.

Las pruebas han mostrado que los compuestos de los ejemplos 7, 13, y 15 tienen una actividad anti-G. brucei remarcable (bajo IC50 nanomolar) in vitro. Se realizaron in vitro experimentos para la inactivación preliminar de G. brucei. El ciclo vital de T. brucei implica una etapa del desarrollo "procíclico" en una mosca tsetse, y una forma de "corriente sanguínea" en seres humanos. Todos los estudios se realizaron con la etapa en corriente sanguínea del parásito, debido a que es la etapa de desarrollo que provoca la enfermedad.

Para evaluar las actividades relativas anti-tripanosoma de los ejemplos 7, 13, y 15, y para determinar la concentración de cada compuesto que exterminó el 50% de los parásitos (IC50), T. brucei se expuesto a una variedad de concentraciones del compuesto. Suramina, un fármaco anti-HAT convencional, se utilizó como un control positivo.

En una placa de 24 cavidades (500 uL del medio por cavidad) se sembraron (3 x 103 células/ml) de G. brucei en la corriente sanguínea. Las concentraciones de los compuestos (0-200 nM para el ejemplo 7, 0-20 nM para el ejemplo 13, y 0-3 nM para el ejemplo 15) se agregaron a las células (cultivos por duplicado) . Los cultivos control recibieron volúmenes iguales de DMSO. La totalidad de los tres compuestos de prueba eliminaron completamente T. brucei, debido a que no se detectaron parásitos después de 48 horas de cultivo en presencia de los fármacos. Los cultivos control tratados con DMSO (vehículo) contuvieron parásitos a una densidad de 3 x 106 /mL.

La actividad tripanocida aumentó en el orden del ejemplo 7 menos que el ejemplo 13, que es menor que el ejemplo 15, con valores IC50 de aproximadamente 43 nM, aproximadamente 6-11 nM, y aproximadamente 0.5 nM, respectivamente. El IC50 de Suramina es mayor que 300 nM.

Por lo tanto, los compuestos de la presente invención son excelentes para el desarrollo como fármacos tripanocida .

El compuesto del ejemplo 15 se probó para actividad contra diferentes cepas de hongos. Se realizó una prueba de susceptibilidad in vitro del ejemplo 15 mediante los métodos CLSI M27A3 y M38A2 para 31 cepas clínicas y de laboratorio de hongos. En general, las cepas seleccionadas demostraron diferentes patrones de susceptibilidad para fármacos antihongos actuales. Para la evaluación del ejemplo 15, se probaron cepas de 8 Aspergillus spp. , 21 Candida spp. , 1 Cryptococcus neoformans, y 1 Debaryomyces hansenii .

Cepas Aspergillus spp. : Ocho cepas de Aspergillus spp. se utilizaron a todo lo largo del estudio. También se utilizaron seis de A. fumigatus, una de A. flavus y una de A. terreus. El grupo A. fumigatus, incluyó dos cepas resistentes a itraconazol (cepas RIT13 y RIT5) (1), una cepa de resistencia cruzada a triazol ( UT10) (2, 3), una cepa de resistencia cruzada a equinocandina (EMFRS678P) (4), y 2 aislados susceptibles tipo silvestre (R21 y ATCC13073) . Las cepas "sin fumigatus" fueron susceptibles a todos los antifungales disponibles con excepción del aislado de A. terreus (naturalmente menos susceptible a anfotericina B) (5) .

Cepas Ca -i a spp. : En el estudio se utilizaron 20 aislados clínicos de Candida spp. y una cepa para control de laboratorio (C. albicans SC5314) . En la recolección se incluyeron : 5 aislados de C. albicans, dos cepas tipo silvestre (SC5314 y ATCC36082) , un aislado resistente a equinocandina (M205) (6), y dos aislados clínicos resistentes a fluconazol (3795 y 3184) (7) . 3 cepas de C. krusei, 1 cepa control ATCC (control ATCC 6258 CLSI), y 2 cepas clínicas isogénicas (98 y 100). 100 es resistente a cruce a quinocandina (8, 9) . 2 cepas de C. glabrata, una cepa clínica tipo silvestre (3168), y un aislado resistente en cruce de equinocandina (3830) (10). 2 cepas de C. tropicalis, una cepa control ATCC (ATCC 750), y una resistente en cruce de equinocandina (T3) (11) · 2 cepas de C. dubliniensis, una cepa tipo silvestre (3949) y la otra con efecto paradójico de equinocandina (M204) . 4 redujeron naturalmente la susceptibilidad de equinocandina Candida spp. (12): 1 C. orthopsilosis (981224), 1 C. metapsilosis (2006-113) , C. parapsilosis (control ATCC 22019 CLSI), y C. guilliermondii (ATCC6260) (13).

Otros de Candida spp. y géneros: 1 C. rugosa (M83), 1 C. lipolytica (M159) , C. lusitaniae (200450), 1 Cryptococcus neoformans (499), y 1 Debaryomyces hansenii.

Prueba de susceptibilidad: Se realizó una prueba de susceptibilidad in vitro del ejemplo 15, utilizando los métodos estandarizados CLSI para levadura (M27A3) (14) y para moho (M38A2) (15) . Las lecturas MIC (concentración inhibidora mínima) se realizaron a 24 y 48 horas.

Tabla 1: Susceptibilidades in vitro de cepas fúngales contra el ejemplo Resistente en 3830 C. glabrata Fks2pS663P cruce con 0.16 0.16 equinocandina Susceptible ATCC 6258 C. krusei T (resistente 0.33 0.66 naturalmente a fluconazol) Susceptible 98b C. krusei WT (resistente 0.33 0.33 naturalmente a fluconazol) Resistente en 100b C. krusei FkslpF655F/C cruce con 0.33 0.33 equinocandina ATCC750 C. trcpicalis T Susceptible 0.08 0.16 Resistente en T3 C. tropicalis FkslpS546S/Pa 0.04 cruce con 0.08 equinocandina 3949 C. dubliniensis WT Susceptible 0.16 0.16 Efecto 204 C. dubliniensis WT paradójico con 0.16 0.16 equinocandina M159 C. lipolytica WT Susceptible 0.02 0.08 M83 C. rugosa WT Susceptible 0.16 0.66 200450 C. lusitaniae WT Susceptible 0.04 0.16 Susceptibilidad ATCC6260 C. WT reducida en 0.08 0.16 guilliermondii cruce con equinocandina Susceptibilidad ATCC22019 C. parapsilosis WT reducida en 0.08 0.08 cruce con equinocandina Susceptibilidad 981224 C. orthopsilosis WT reducida en 0.16 0.16 cruce con equinocandina Susceptibilidad 2006-113 C. metapsilosis WT reducida en 0.16 0.16 cruce con equinocandina 20124 Debarycmyces WT Susceptible 0.16 0.16 hansenii 499 Cryptococcus WT Susceptible 0.02 0.08 neoformans * media geométrica de dos repeticiones en µ . a número de aminoácidos correspondiente al equivalente de C. albicans .

Aspergillus spp. Susceptibilidades del ejemplo 15: las cepas de A. flavus y A. terreus fueron más sensibles al ejemplo 15 que as cepas de A. fumigatus (24hs MIC Geom. Medias 0.40 y 1.59 µ?, respectivamente). Además, no hubo diferencias MIC entre las cepas susceptibles y resistentes a azol o ecquinocandina (Tabla 1) .

Susceptibilidades del ejemplo 15 a levadura: No hubo diferencias MIC del ejemplo 15 entre los aislados resistentes a, o susceptibles a azol o equinocandina . En promedio, la levadura MIC fueron ocho veces menores en la MIC de Aspergillus spp. (tabla 1) . Las MIC obtenidas por el ejemplo 15 fueron compatibles o mejores que las MIC para los fármacos antifungales convencionales. Las cepas resistentes a azol y equinocandina fueron sensibles para el ejemplo 15.

Efecto del ejemplo 15 sobre la viabilidad de Aspergillus fumigatus: Se evaluó la actividad antifungal del ejemplo 15 sobre la cepa de A. fumigatus de Af293 utilizando el análisis de viabilidad XTT. Esta cepa se seleccionó debido a que es una de las cepas mejor caracterizadas y fue la cepa utilizada para la secuenciación del genoma de A. fumigatus . El análisis de viabilidad XTT se basa en la reducción de la sal de tetrazolio (XTT) en presencia de menadiona como un agente de acoplamiento electrónico. Existe una relación entre el número de hongos viables y la cantidad de reducción XTT (16) .

Métodos Se utilizaron los mismos métodos anteriormente descritos para realizar el análisis XTT (17) . Se colocaron en placas conidios de Af293 sobre inclinaciones de Sabouraud BHI con cloramfenicol y gentamicina (Becton Dickinson, MD) , se incubaron durante 7 a 10 días a temperatura ambiente, y se recolectaron al lavar la inclinación con 10 mi de Tween 20 al 0.05% en solución salina normal (NS) . La suspensión de conideos luego se pasó a través de un filtro de 100 µp?, se contó sobre un hemacitómetro, y se diluyó a 2.0 x 105 UFC/ml. Los conidios luego se diluyeron 1:50 en OPS - RPMI amortiguado con ácido morfolinpropansulfónico) (pH 7.0). Se utilizó una solución madre del ejemplo 15 disuelto en DMSO. El ejemplo 15 se diluyó en MOPS amortiguado con RPMI (pH 7.0) (concentración final de DMSO: 2% antes de la adición a suspensiones fúngales) . Después de la adición del medio que contiene fármaco a cada cavidad, se agregó la suspensión de conidios (100 µ?) (t = 0 h) . Las cavidades control contuvieron conidios, medio, y vehículo sin fármaco. Las cavidades vacías consistieron de medio únicamente sin conidios. Un experimento inicial utilizando una amplia gama de concentraciones del ejemplo 15 sin hongos agregados mostró que el reactivo del ejemplo 15 no afectó la densidad óptica en el análisis XTT. Las placas se incubaron a 37°C, y el análisis XTT se realizó a las 24 h esencialmente como se describió anteriormente (16), pero con una adaptación menor. Una solución madre de XTT (Sigma Chemical, St . Louis, MO) se disolvió en NS (1 mg/ml) . Una solución de 10-nM de menadiona con agente de acoplamiento electrónico (Sigma Chemical) se preparó en acetona y luego se diluyó 1:10 en NS. Una solución de trabajo que consiste de 4.0 mi XTT y 0.5 mi de menadiona se preparó inmediatamente antes de utilizarse. A cada cavidad se agregaron cincuenta microlitros de la solución de combinación, y las placas se incubaron durante 2h a 37°C. Cien microlitros del sobrenadante se transfirieron a una nueva placa, y se determinó la densidad óptica a 450 nm (OD450) al utilizar un lector de placas Labsystems Multiskan Plus. Las concentraciones finales de XTT y de menadiona en cada cavidad fueron 200 g/ml y 25 µ?, respectivamente.

El ejemplo 15, tuvo actividad antifungal contra Af293. La IC50 fue de aproximadamente 2.5 µ?. La supresión completa de crecimiento fangal presentada en las concentraciones del ejemplo 15 mayor que 12.5 µ?, se basa en la inspección visual de las cavidades. 1. A.M. Nascimento, et al., 2003, 47: 1719-26. 2. G. Garcia-Effron, et al., 2008, J Clin Microbiol, 46:1200-6. 3. S.J. Howard, et al., 2006, Int J Antimicrob ¦ Agents, 28 : 450-3. 4. E. . Rocha, et al., 2007, Antimicrob Agents Chemother, 51:4174-6. 5. W.J. Steinbach, et al., 2004, Clin Infect Dis., 39: 192-8. 6. G.S. Garcia-Effron, et al. Antimicrob Agents Chemother. 7. S. Perea, et al., 2001, Antimicrob Agents Chemother, 45:2676-84. 8. . Hakki, et al., 2006, Antimicrob Agents Chemother, 50:2522-4. 9. J.N. Kahn, et al., 2007, Antimicrob Agents Chemother, 51:1876-8. 10. J.D. Cleary, et al. 2008, Antimicrob Agents Chemother, 52:2263-5. 11. G. Garcia-Effron, et al. 2008, Antimicrob Agents Chemother, 52:4181-3. 12. G. Garcia-Effron, et al. 2008, Antimicrob Agents Chemother, 52:2305-12. 13. D.S. Perlin, 2007, Drug Resist Update, 10:121- 30. 14. Clinical Laboratory Standard Institute, C.L.S.L, 2008, 3rd ed., 28 (14). 15. Clinical Laboratory Standard Institute, C.L.S.L, 2008, 2nd ed., 28(16). 16. J. Meletiadis, et al., 2001, J Clin Microbiol, 39:3402-8. 17. Y.F. Brun et al., 2007, Antimicrob Agents Chemother, 51(5): 1804-12.

El compuesto de carbazol de la presente invención también exhibe actividad antibacteriana. En particular, el efecto de los compuestos de carbazol de la presente invención sobre bacterias gram-positivas { Bacillus subtilis) y gram-negativas (DH5-ot) se determinó mediante el siguiente procedimiento, y se resume en las 13a y 13b.

Prueba in vitro para evaluar el efecto de los compuestos de carbazol sobre bacterias gram(-) y gram(+).

Equipo Lector de placas de 96 cavidades (por ejemplo Multiscan, LabSystems, inc.) Pipeta de canales múltiples con variación de 50 300uL Puntas del filtro Placas de 96 cavidades (Corning Costar Cat. No. 3598) Discos petri de 100 mm Bucles de inoculación estériles de 1 µ? (Fisher 22- 170-209) Tubos de fondo redondo con tapa a presión de 14 mi (Falcon 352059) Materiales DH5-0C (bacterias de E. coli gram(-)) Bacillus subtilis (bacterias gram(+)) Difco LB Agar (BD 244510-para DH5-a) Difco LB Broth (BD 244610-para DH5-a) Difco Nutrient Broth (BD 233000-para B. subtilis) Difco Nutrient Agar (BD 212000-para B. subtilis) Método Preparación de reactivos Para preparar las placas para el desarrollo de DH5-ot, combinar 40 g de Difco LB agar por 1 litro de agua de MilliQ. Someter a autoclave con la sedimentación del liquido. Cuando se enfria el recipiente que contiene la solución, vaciar en discos de Petri de 100 mm y se deja que se inclinen ligeramente para evitar la acumulación de humedad como geles de agar. Hacer estallar las burbujas que se forman antes de la fermentación del agar. Almacenar a 4°C.

Para preparar el medio para desarrollo de DH5-a, combinar 25 g de caldo Difco LB por 1 litro de agua MilliQ. Someter a autoclave en la sedimentación del liquido para esterilizar .

Para preparar las placas para el desarrollo de B. subtilis, combinan 23 g de nutrientes Difco de agar por 1 litro de MilliQ. Someter a autoclave con la sedimentación del liquido. Cuando se enfria el recipiente que contiene la solución, vaciar en discos de Petri de 100 mm y se deja que se inclinen ligeramente para evitar la acumulación de humedad como geles de agar. Hacer estallar las burbujas que se forman antes de la fermentación del agar. Almacenar a 4°C.

Para preparar el medio para desarrollo de B. subtilis, combinar 8 g de caldo nutriente Difco por 1 litro de agua MilliQ. Someter a autoclave con la sedimentación del liquido a esterilizar.

Preparación de bacterias Dos días antes del inicio del análisis de citotoxicidad, inocular DH5-cc y B. subtilis en 1 mi del medio correspondiente a partir de concentraciones de glicerol. Dejar desarrollar durante el curso del día a 37 °C con agitación vigorosa.

Marcar cada una de las bacterias en las placas de agar adecuadas utilizando un bucle de inoculación estéril y permitir el desarrollo durante la noche a 37°C en la incubadora de bacterias.

Utilizando un bucle de inoculación estéril, seleccionar una sola colonia de bacterias e inocula 5 mi del medio correspondiente en un tubo con tapa a presión de 14 mi. Dejar desarrollar durante la noche (~16 h) a 37°C con agitación vigorosa.

Al siguiente día, medir el OD600nm para el cultivo para asegurar que las bacterias están en desarrollo exponencial (OD600nm=0. -0.8 ) Análisis de citotoxicidad (1) Diluir 5 mi de los cultivos de DH5-cc y B. subtilis a un OD600nm de 0.002, que corresponde a aproximadamente 2 xlO6 células/ml en un volumen suficiente para el experimento (dependiente del número de placas) . Colocar en placas 50 µ? en cada cavidad de placas de x 96-cavidades (X=# placas necesarias para un experimento determinado) .

Los compuestos se agregaran a las placas en diluciones triples de 0.005-50 µ? de acuerdo con la tabla 2.

Los químicos para prueba se preparan mediante la dilución de soluciones madres en caldo LB o caldo de nutriente para estudios de DH5-a y B. subtilis, respectivamente. Las células se tratan con las concentraciones químicas finales presentadas en el esquema más adelante (tabla 2) . Las soluciones madre se elaboraron en DMSO. Típicamente, los químicos se constituyen como soluciones madre de 20 mm. Sin embargo, esta concentración depende de la solubilidad de un químico determinado y las concentraciones madre reales se deben observar en el tiempo del experimento.

Tabla 4. Esquema de una placa experimental con concentraciones finales de químicos 5 Cada biblioteca de químicos que serán probados requiere 2 hileras de una placa de 96 cavidades, de esta forma se pueden probar 4 químicos (por ejemplo, W, X, Y, Z) en una placa simultáneamente. Además de probar los químicos, cada placa debe incluir controles positivos y negativos. Como el control positivo, se utilizó ampicilina a 100 µg/ml. Como control negativo, se utilizó DMSO en una cantidad igual al mayor volumen del compuesto de prueba utilizado (~0.25% DMSO para 50 µ?) .

Las diluciones de químicos que serán agregados a la placa se constituyen como concentraciones 2X en medios con bacterias adecuadas y se agregan a las cavidades correspondientes en un volumen de 50 L.

Los químicos se diluyen en los medios de bacterias adecuadas en diluciones en serie de tres veces que inician de 50 µ? (por ejemplo 2X de la concentración mayor (por ejemplo, 50 µ?) =100 µ?) . Se necesitan 300 µ? de la concentración 2X mayor para utilizar 1/3 para producir la Ia dilución y 200 µ? de medio para todas las diluciones posteriores. Se mezclan 100 µ? de la concentración 2X mayor con 200 µ? de medios y luego 100 µ? de la primera dilución se mezcla con 200 µ? de los medios para producir la siguiente dilución. Este proceso se repite hasta que se prepararon todas las 10 dosis 2X.

Junto con un control positivo agregado en una concentración en cada placa, se agregó el control positivo de ampicilina a cada ejecución de análisis en una variación de concentración total (diluciones de 3 veces) para asegurar un desempeño de análisis adecuado y robusto (estimado por comparación de las curvas de respuesta a la dosis ente ej ecuciones ) .

Después de la adición de los compuestos de carbazol a placas de 96 cavidades que contienen las bacterias, las placas se transfirieron al incubador de bacterias a 37°C durante 48 horas. Después de la incubación, se medirá la OD600nm para cada cavidad de las placas de 96 cavidades.

Análisis de datos La OD600nm promedio de las soluciones del compuesto de prueba se comparan con la del control DMSO al dividir la OD600nm promedio de la solución de prueba entre la del control de DMSO y multiplicar por 100 para producir el % de control de DMSO (es decir, % de citotoxicidad) . El % de control de DMSO se gráfica contra la concentración del compuesto para generar curvas de forma sigmoide. Después de que se completaron las tres ejecuciones, para los cálculos IC5o se utilizaron los datos aproximados para la totalidad de tres ejecuciones.

Los resultados de la prueba mostraron que los compuestos de carbazol de los ejemplos 15, 7, 4, 12, 13, 17, y 18 y compuesto 18c-l y demostraron un efecto antibacteriano contra B. siibtilis y HB 101 E. coli sobre una variación de potencias. Las bacterias gram(+) parecieron más sensibles a los compuestos de carbazol de la presentes. Además, varios de los compuestos de carbazol, por ejemplo, ejemplos 15 y 17, no fueron efectivos contra las bacterias que el control con ampicilina. Los compuestos de carbazol de la presente por lo tanto demuestran una actividad antibacteriana definitiva.

Claims (21)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiendo descrito el presente invento, se considera como una novedad y, por lo tanto, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes REIVINDICACIONES :

1. Un compuesto que tiene una fórmula estructural : caracterizado porque Ra se selecciona del grupo que consiste de, hidrógeno, Ci-ß alquilo, Ci_6 haloalquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, 0Re, N(Re)2, y SRe; alternativamente, ya sea Ra y R1 o NRe y R1 junto con los átomos de carbono a los cuales están unidos forman un anillo alifático carbociclico o heterociclico de cinco o seis miembros; Rc se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno Ci_6 alquilo, Ci-6 haloalquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, 0Re, N(Re)2, y SRe, alternativamente, ya sea Rb y R6 o NRe y R5 junto con los átomos de carbono a los cuales están unidos forman un anillo alifático carbociclico de cinco o seis miembros o un anillo alifático carbociclico o heterociclico de cinco o seis miembros; Rc se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno Ci_6 alquilo, Ci-6 hidroxialquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, y C(=0)Re, o Rc y Rd se toman juntos para formar un anillo alifático de cinco, seis, o siete miembros, que contenga opcionalmente un átomo de oxigeno; Rd se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, Ci-6 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, y C(=0)Re, o Rd y R7 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo alifático de cinco o seis miembros; Re independientemente, se selecciona del grupo que consiste de, hidrógeno, Ci_6 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, y heteroarilo, o dos grupos Re tomados juntos con un átomo de nitrógeno al cual están unidos para formar un anillo alifático de cinco o seis miembros; R1, R2, R3, R4, R5, y R6, independientemente, se seleccionan del grupo que consiste de, hidrógeno, Ci-6 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, halo, 0Re, C(=0)Re, C(=0)ORe, OC(=0)Re, C(=0)N(Re)2, C(=0)NReS02Re, N(Re)2, NReC(=0)Re, NReC (=0) N (Re) 2, CN, N02, CF3, 0CF3, SRe, SOR6, S02R6, S02N(Re)2, y OS02CF3; R7 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno Ci_6 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, y heteroarilo; y n es 0 , 1, 2, 3, 4 , o 5, o una sal farmacéuticamente aceptable o hidrato de la misma.

2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el compuesto tiene una fórmula estructural general: donde Ra es C1-3 alquilo, Ci-4 haloalquilo, C3-5 cicloalquilo, N(Re)2, o 0Re, o Ra y R1 junto con los átomos de carbono a los cuales están unidos forman un anillo alifático carbociclico de cinco o seis miembros; Rb es Ci-4 alquilo, Ci_4 haloalquilo, C3-5 cicloalquilo, N(Re)2, o 0Re, o Rb y R6 junto con los átomos de carbono a los cuales están unidos forman un anillo alifático carbociclico de cinco o seis miembros o un anillo alifático de cinco o seis miembros que contiene un átomo de nitrógeno; Rc es Ci-6 alquilo, C3_5 cicloalquilo, o C1-3 hidroxialquilo; Rd es hidrógeno, C1-4 alquilo, o C3-5 cicloalquilo, o Rd y R7 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo alifático de cinco o seis miembros que contiene un átomo de nitrógeno, o Rc y Rd se toman juntos para formar un anillo alifático de seis o siete miembros, que contenga opcionalmente un átomo de oxigeno; Re, independientemente, es hidrógeno o C1-3 alquilo; R1 es hidrógeno o C1-3 alquilo; R2 es hidrógeno, hidroxi, o C1-3 alcoxilo; R3 y R4, independientemente, es hidrógenos o C1-3 alquilo; R5 es hidrógeno, hidroxi, C1-3 alcoxi, o halo; R6 es hidrógeno, Ci_3 alquilo, Ci_3 alcoxi, o halo; R7 es hidrógeno o C1-3 alquilo; y n es 0, 1, 2, 3, 4, o 5, o una sal farmacéuticamente aceptable o hidrato de la misma.

3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el compuesto tiene una fórmula estructural general (Ib): en donde es metilo, etilo, n-propilo, ciclopropilo, NH(CH3), o OCH3, o Ra y R1 junto con los átomos de carbono a los ' cuales están unidos forman un anillo alifático carboxiclico de cinco miembros; Rb es metilo, etilo, n-propilo, ciclopropilo, NH(CH3), o OCH3, o Rb y R6 junto con los átomos de carbono a los cuales están unidos forman un anillo alifático carbociclico de cinco miembros o un anillo alifático de cinco miembros que contiene un átomo de nitrógeno; Rc es metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, ciclobutilo, o 2-hidroxietilo; Rd es hidrógeno, metilo, etilo, o ciclobutilo, o Rd y R7 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo alifático de cinco miembros que contiene un átomo de nitrógeno; o Rc y Rd son toman juntos para formar una porción de morfolino; una porción de tetrahidrofurilo; una porción de piperidinilo; una porción R es hidrógeno; R2 es hidrógeno, hidroxi, o metoxi; R3 y R4 son hidrógeno; R5 es hidrógeno, hidroxi, metoxi, o flúor; R6 es hidrógeno, metilo, metoxi o flúor; R7 es hidrógeno; y n es 1 ó 2, o una sal farmacéuticamente aceptable o hidrato de la misma.

4. Un compuesto que tiene una fórmula estructural : caractrizado porque Rf se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, Ci-6 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, y C(=0)Rh, o Rf y Rg se toman juntos para formar un anillo alifático de cinco, seis, o siete miembros que contenga opcionalmente un átomo de oxigeno; Rg se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, xs alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, y C(=0)Rh, o Rg y R8 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo alifático de cinco o seis miembros; Rh independientemente, se selecciona del grupo que consiste de, hidrógeno, Ci-6 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, y heteroarilo, o dos grupos Rh tomados junto con un átomo de nitrógeno al cual están unidos forman un anillo alifático de cinco o seis miembros; R8 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, Ci-6 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, y heteroarilo; R9, R10, R11, R12, R1 , y R14, independientemente, se seleccionan del grupo que consiste de, hidrógeno, Ci-6 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, halo, 0Rh, C(=0)Rh, C(=0)ORh, OC (=0) Rh, NRhC (=0) N (Rh) 2, CN; N02, CF3, OCF3, SRh, SORh, S02Rh, S02N(Rh)2, y OS02CF3; p es 0, 1, 2, 3, 4, ó 5, con la condición de que cuando p sea 2, uno de Rf y Rg sea diferente de etilo, o una sal farmacéuticamente aceptable o hidrato de la misma.

5. El compuesto de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque el compuesto tiene una fórmula estructural general (lia): en donde Rf es C1-6 alquilo; Rg es hidrógeno o C1-4 alquilo, o Rg y R8 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo alifático de cinco o seis miembros que contiene un átomo de nitrógeno ; R9 es hidrógeno o Ci_3 alquilo; R10 es hidrógeno, hidroxi, o C1-3 alcoxilo; R11 y R12, independientemente, son hidrógeno o C1-3 alquilo; R13 es hidrógeno, hidroxi, Ci-3alcoxi, o halo; R14 es hidrógeno, C1-3 alquilo, o C 1-3 alcoxi; R8 es hidrógeno o C1-3 alquilo; y p es O, 1, 2, 3, 4 , ó 5, con la condición de que cuando p sea 2, uno de Rf y R8 sea diferente de etilo, o una sal farmacéuticamente aceptable o hidrato de la misma.

6. El compuesto de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque el compuesto tiene una fórmula estructural general (Ilb): en donde Rf es metilo o etilo; Rg es hidrógeno o metilo o R9 y R8 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo alifático de cinco miembros que contiene un átomo de nitrógeno; R8 es hidrógeno; y p es 1 ó 2 , o una sal farmacéuticamente aceptable o hidrato de la misma.

7. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque Ra es metilo, etilo, NH(CH3), 0CH3, o forma un anillo alifático de cinco miembros con R1, Rb es metilo, etilo, NH(CH3), OCH3, forma un anillo alifático de cinco miembros con R6, o forma un anillo alifático que contiene nitrógeno, de cinco miembros con R6, y Rd es hidrógeno, metilo, etilo, o forma un anillo alifático de cinco miembros con R7.

8. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R1 es hidrógeno o forma un anillo alifático de cinco miembros con Ra, R2 es hidrógeno o hidroxi, R3 es hidrógeno, R4 es hidrógeno, R5 es hidrógeno o hidroxi, R6 es hidrógeno, forma un anillo alifático de cinco miembros con Rb, o forma un anillo alifático que contiene nitrógeno, de cinco miembros, con Rb, R7 es hidrógeno o forma un anillo 'de cinco miembros con Rd, y n es 2 ó 3.

9. El compuesto de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque Rf es metilo o etilo, Rg es hidrógeno, metilo, etilo, o forma un anillo alifático que contiene nitrógeno, de cinco miembros, con Rf y R8, o R8 es hidrógeno, R9, R10, R11, R12, R13, y R14 son hidrógeno, p es 2 ó 3.

10. Un compuesto caracterizado porque tiene una fórmula estructural: y

11. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 ó 4, caracterizado porque tienen un valor EC5o para la activación de p53 de menos de aproximadamente 1.35 µ?.

12. Un compuesto seleccionados del grupo expuesto en el párrafo comprendido en la página 150, lineas 8 y 9; en la presente.

13. Un método para el tratamiento de un cáncer caracterizado porque comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, 4, ó 10, o el compuesto 100, a un individuo que necesita del mismo.

14. Él método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque el cáncer se selecciona de un cáncer expuesto en los párrafos comprendidos entre páginas 171, linea 23 a página 177, linea 21; en la presente.

15. El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque el compuesto de la reivindicación 1, 4, ó 10, o el compuesto 100, se administra junto con un agente quimioterapéutico, terapia de radiación, un agente para afectación de microtúbulos , un agente citoestático, un polipéptido de TNF, y mezclas de los mismos.

16. Un método para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria caracterizado porque comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, 4, ó 10, o el compuesto 100, a un individuo que necesita del mismo.

17. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque la enfermedad inflamatoria se selecciona de una enfermedad expuesta en el párrafo comprendido en la página 179, lineas 10 a 22; en la presente.

18. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el compuesto de la reivindicación 1, 4, ó 10, o el compuesto 100, se administra junto con un fármaco inmunosupresor .

19. Un método para el tratamiento de una infección microbiana, una infección por protozoarios , o una infección viral caracterizado porque comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la reivindicación 1, 4, ó 10, o un compuesto 100, a un individuo que necesita del mismo.

20. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque la enfermedad es malaria.

21. Un método para el tratamiento de una enfermedad o condición seleccionados del grupo que consiste de las enfermedades y condiciones expuestas en el párrafo comprendido en página 179, linea 23 a página 180, linea 3; en la presente.