CN102146083B - 一种千金藤素的分离提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种千金藤素的分离提取方法。取干燥地不容块根，粉碎，每公斤粉碎物加入2-3L水和0.5-5ml混合生物酶液泡1小时后，加入9-11L的1-2%质量百分比HCL水溶液加热到90℃浸泡3小时；分离药液，药渣再次加入9-11L的1%-2%HCL水溶液煎煮3小时，过滤，合并2次滤液，采用阳离子交换柱或者阳离子纤维素柱吸附，富集千金藤素，用添加氢氧化钠到60-90%乙醇水溶液中至饱和状态的溶液作为洗脱液，洗脱，收集千金藤素段洗脱液，调节pH值至7，浓缩回收乙醇，过滤，沉淀物用无水乙醇溶解后，用阴离子柱洗脱纯化，收集千金藤素段洗脱液，浓缩，结晶，干燥即得千金藤素。本发明操作简单，污染小、成本低，回收率高，千金藤素纯度高，易于实现产业化。
Description
技术领域
本发明涉及一种千金藤素的提取分离方法，具体地说，是一种从植物地不容中提取千金藤素的方法。
背景技术
千金藤素（Cepharanthine），是一种具有生物活性的双苄基异喹啉生物碱，主要来源于防已科植物，例如地不容，光叶地不容、金线吊乌龟、江南地不容和台湾千金藤等。由于地理环境、气候条件等因素的影响，不同来源的同一药材质量多存在差异，种属和源产地的差异导致植物中千金藤素含量高低不一。
千金藤素能促进骨髓组织增生，增加血液中白细胞的数量，适用于白细胞减少症；同时也是较好的抗癌药增效剂，能提高抗癌药物的疗效，降低抗癌药的用量，减轻毒副作用；对多种动物炎性水肿和疼痛均有明显的抑制作用，且无任何毒性反应。
现有技术中千金藤素主要通过纯甲醇或乙醇粗提，酸溶碱沉，硅胶柱层析或氧化铝柱层析，丙酮结晶，这些传统方法提取分离所得千金藤素回收率较低，纯化过程中千金藤素损失较大，有机溶剂消耗量大，工业化成本较高，工业污染严重。
发明内容
本发明提供了一种适用于工业化生产的千金藤素制备方法。
本发明的技术方案为：
取干燥地不容块根，粉碎，每公斤粉碎物加入2-3L水和0.5-5ml混合生物酶液泡1小时后，加入9-11 L的1-2%（质量百分比，下同）HCL水溶液加热到90℃浸泡3小时；分离药液，药渣再次加入9-11 L的1-2%HCL水溶液煎煮3小时，过滤。合并2次滤液，采用阳离子交换柱或者阳离子纤维素柱吸附，富集千金藤素，用添加氢氧化钠到60-90%（质量百分比，下同）乙醇水溶液中至饱和状态的溶液作为洗脱液，洗脱，收集千金藤素段洗脱液，调节PH值至7，浓缩回收乙醇，过滤，沉淀物用无水乙醇溶解后，用阴离子柱洗脱纯化，收集千金藤素段洗脱液，浓缩，结晶，干燥即得千金藤素。
混合生物酶液由半纤维素酶，果胶裂解酶，中温液化酶，低温液化酶，蜗牛酶，黑曲酶等中的一种或几种组成。
氢氧化钠饱和的乙醇水溶液的优选浓度为80%。
采用上述技术方案制备千金藤素，采用混合生物酶酸水提取能提高提取效率，提取完全，减少粗提物中有机杂质，用离子交换法替代酸溶碱沉法提高收率，提高千金藤素纯度，使用阴离子柱层析替代硅胶和氧化铝柱层析，降低溶剂成本，对木质素去除效果更佳。整个工艺操作简单、有机溶剂使用少仅使用少量乙醇和水，工艺路线绿色环保，生产成本低，利于工业化生产。
下面结合具体实施方式对本发明做进一步的描述，但本发明要求保护的内容并不局限于下列实施方式。
具体实施方式
实施例1
取干燥地不容块根1kg，块根粉碎到40目加2L水和3ml混合生物酶液（果胶裂解酶：α低温液化酶 =1:4）50℃浸泡1小时后，加入10升1%HCL（质量百分比，下同）水溶液加热到90℃提取3小时。分离药液，药渣再次加入10升1%HCL水溶液煎煮3小时，过滤，合并2次滤液，采用强酸苯乙烯磺酸基阳离子交换树脂001X7交换吸附，富集千金藤素，用添加氢氧化钠到80%（质量百分比，下同）乙醇水溶液中至饱和状态的溶液5L作为洗脱液，洗脱，流速为10ml/min，收集千金藤素段洗脱液调节PH值至7，浓缩回收乙醇，过滤，沉淀物用无水乙醇溶解后，采用阴离子DESE纤维素柱纯化，收集洗脱液，浓缩，用50%乙醇水结晶干燥得淡黄色粉末9.0克，含量99.6%。
实施例2
取干燥地不容块根1kg，块根粉碎到60目加2L水和1ml混合生物酶液（蜗牛酶：黑曲酶 =3:2）50℃浸泡1小时后，加入11升2%HCL（质量百分比，下同）水溶液加热到90℃提取3小时。分离药液，药渣再次加入11升2%HCL水溶液煎煮3小时，过滤，合并2次滤液，采用阳离子CM纤维素柱吸附，富集千金藤素，用添加氢氧化钠到70%乙醇水溶液中至饱和状态的溶液5L作为洗脱液，洗脱，流速为10ml/min。收集千金藤素段洗脱液调节PH值至7，浓缩回收乙醇，过滤，沉淀物用无水乙醇溶解后，采用700B阴离子树脂柱纯化，收集洗脱液，浓缩，60%乙醇水结晶干燥得淡黄色粉末8.6克，含量99.2%。
实施例3
取干燥地不容块根1kg，块根粉碎到40目加3L水和5ml混合生物酶液（半纤维素酶：α中温液化酶=1:4）60℃浸泡1小时后，加入9升1%HCL（质量百分比，下同）水溶液加热到90℃提取3小时。分离药液，药渣再次加入9升1%HCL水溶液煎煮3小时，过滤，合并2次滤液，采用弱酸性丙稀酸阳离子交换树脂152交换吸附生物碱，富集千金藤素，用添加氢氧化钠到90%乙醇水溶液中至饱和状态的溶液5L作为洗脱液，洗脱，流速为10ml/min。收集千金藤素段洗脱液调节PH值至7，浓缩回收乙醇，过滤，沉淀物用无水乙醇溶解后，采用D941阴离子柱洗脱纯化，收集洗脱液，浓缩，30%乙醇水结晶干燥得淡黄色粉末9.1克，含量98.9%。
实施例4
取干燥地不容块根1kg，块根粉碎到40目加2.5L水和4ml混合生物酶液（果胶裂解酶：蜗牛酶=2:3）45℃浸泡1小时后，加入10升1%HCL（质量百分比，下同）水溶液加热到90℃提取3小时。分离药液，药渣再次加入10升1%HCL水溶液煎煮3小时，过滤，合并2次滤液，采用阳离子交换树脂001X7交换吸附生物碱，富集千金藤素，用添加氢氧化钠到80%乙醇水溶液中至饱和状态的溶液5L作为洗脱液，洗脱，流速为10ml/min。收集千金藤素段洗脱液调节PH值至7，浓缩回收乙醇，过滤，沉淀物用无水乙醇溶解后，采用D900阴离子柱洗脱纯化，收集洗脱液，浓缩，50%乙醇水结晶干燥得淡黄色粉末8.9克，含量99.5%。
Claims (2)
1.一种千金藤素的分离提取方法，其特征在于按以下步骤进行：取干燥地不容块根，粉碎，每公斤粉碎物加入2-3L水和0.5-5ml混合生物酶液泡1小时后， 加入9-11 L的1-2%质量百分比HCL水溶液加热到90℃浸泡3小时；分离药液，药渣再次加入9-11 L的1-2%HCL水溶液煎煮3小时，过滤，合并2次滤液，采用阳离子交换柱或者阳离子纤维素柱吸附，富集千金藤素，用添加氢氧化钠到60-90%质量浓度的乙醇水溶液中至饱和状态的溶液作为洗脱液，洗脱，收集千金藤素段洗脱液，调节PH值至7，浓缩回收乙醇，过滤，沉淀物用无水乙醇溶解后，用阴离子柱洗脱纯化，收集千金藤素段洗脱液，浓缩，结晶，干燥即得千金藤素；所述的混合生物酶液由半纤维素酶，果胶裂解酶，中温液化酶，低温液化酶，蜗牛酶，黑曲酶中的一种或几种组成。
2.根据权利要求1所述的千金藤素分离提取方法，其特征在于用添加氢氧化钠到80%乙醇水溶液中至饱和状态的溶液作为洗脱液。
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