CN102138999B - 一种治疗消化道相关疾病的吴茱萸有效成分口服液及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种治疗胃溃疡、十二指肠溃疡、胃炎、胆囊炎、胰腺炎、肠炎等消化道疾病的吴茱萸有效成分口服液,该提取物是由吴茱萸多糖提取物和吴茱萸内酯提取物组成。本发明还公开了吴茱萸内酯提取物与吴茱萸多糖提取物的制备方法。本发明吴茱萸多糖提取物中吴茱萸多糖的含量以葡萄糖计,占吴茱萸多糖提取物重量百分比的68%以上;吴茱萸内酯的含量占茱萸内酯提取物重量百分比的50%以上。本发明通过大量的药理学实验发现,吴茱萸多糖提取物与吴茱萸内酯提取物具有治疗胃溃疡、十二指肠溃疡、胃炎、胆囊炎、胰腺炎、肠炎等消化道疾病的作用,可配伍组合制成各种剂型的药物或作为原料药。
Description
技术领域
本发明涉及治疗胃溃疡、十二指肠溃疡、胃炎、胆囊炎、胰腺炎、肠炎等消化道疾病的中药吴茱萸有效成分口服液,尤其涉及吴茱萸有效成分口服液及其制备方法,本发明还涉及吴茱萸有效成分口服液治疗胃溃疡、十二指肠溃疡、胃炎、胆囊炎、胰腺炎、肠炎等消化道疾病的医药用途。
背景技术
吴茱萸为芸香科植物吴茱萸Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth.var bod-inieri(Dode)Huang干燥近成熟的果实。性味辛、苦,热,有小毒,归肝、脾、胃、肾经。具有散寒止痛,降逆止呕,助阳止泻功效,用于厥阴头痛,寒疝腹痛,寒湿脚气,经行腹痛,脘腹胀痛,呕吐吞酸,五更泄泻。现代药理表明其扩张血管、降压、强心、止泻、收缩子宫、抗菌、抗病毒、抗溃疡、抗胆碱酯酶等作用。目前对吴茱萸化学成分的研究主要集中于吴茱萸中的生物碱、黄酮、挥发油、鞣质类成分,而这些成分在吴茱萸中含量较低,不足以解释吴茱萸的临床作用,所以一直以来对吴茱萸的药效物质基础研究还不够透彻。而多糖提取物含量较大,并且无毒副作用,但对多糖的研究几近空白。吴茱萸内酯是吴茱萸脂溶性提取物中含量较大的一种单体成分,分子量为470,分子式C26H30O8,结构如图所示,其在该药中所发挥的效能也一直不为人们所认知。
发明内容
本发明目的之一是提供一种具有治疗消化道疾病作用的吴茱萸有效成分口服液,该吴茱萸有效成分口服液是由吴茱萸多糖提取物和或吴茱萸内酯提取物组成。
本发明目的之二是提供一种制备上述吴茱萸有效成分口服液的方法。
本发明目的之三是将上述吴茱萸有效成分口服液用于胃溃疡、十二指肠溃疡、胃炎、胆囊炎、胰腺炎、肠炎等消化道疾病的医药用途。
本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的:
本发明的一个目的是提供一种具有治疗消化道疾病作用的吴茱萸有效成分口服液,该吴茱萸有效成分口服液包括吴茱萸多糖提取物和或吴茱萸内酯提取物。从吴茱萸药材的高浓度醇提物中可以分离纯化得到具有脂溶性的吴茱萸内酯提取物,所制得的吴茱萸内酯的含量占此部分提取物总重量百分比的50%以上;而同一批次的经过高浓度醇提后的药渣中可以提纯得到吴茱萸多糖提取物,所得到的吴茱萸多糖的含量占此部分提取物总重量百分比的68%以上,该种提取方法可以实现吴茱萸药材的综合利用。
本发明提供了一种上述吴茱萸多糖提取物与吴茱萸内酯提取物的制备方法。
其中,吴茱萸多糖提取物的制备方法,包括:吴茱萸药材经高浓度醇提取后,取药渣药渣先经过水提取,再醇沉淀得到粗多糖,粗多糖经过透析、离子交换层析脱去蛋白、色素,再除去小分子化学成分,制成较高纯度的吴茱萸多糖提取物。
吴茱萸多糖提取物的制备方法主要包括以下步骤:
(1)将吴茱萸用高浓度乙醇回流提取,得到醇提取物;(2)残渣加水回流提取,滤液浓缩,加入乙醇醇沉,离心得沉淀;(3)沉淀依次用无水乙醇,丙酮分别洗涤;(4)洗涤后的沉淀用蒸馏水复溶,透析;(5)透析液浓缩,加入乙醇醇沉,离心得沉淀;(6)沉淀依次用无水乙醇,丙酮分别洗涤;(7)洗涤后的沉淀用蒸馏水复溶,采用弱酸弱碱型阴、阳离子交换树脂串联法脱去多糖中的色素和蛋白质,即得吴茱萸多糖提取物。为了达到更好的提取效果,优选的,步骤(1)中将吴茱萸用6~12倍量的浓度为80~95%的乙醇回流提取2~4次,每次回流2~3h,分别收集滤液和药渣;步骤(2)中将残渣加6~12倍重量的蒸馏水回流提取2~3次,每次回流提取2~3h,将滤液浓缩至药材0.2~1.0体积,加入80~95%乙醇醇沉,离心得沉淀;步骤(3)、(6)中将沉淀依次用2~4倍量的无水乙醇,丙酮分别洗涤;步骤(4)中的沉淀以0.5~2倍重量的蒸馏水复溶,以分子量大小为3.0×103-1.2×104的透析袋透析24~72h。
将从吴茱萸中分离出的多糖依次采用DEAE-Sepharose F.F和DEAE-52离子交换色谱柱(洗脱相为0.1-1mol/L的NaCl溶液),收集液可以选择但不限于如下琼脂糖凝胶柱色谱做进一步纯化分离:Sephadex G50、Sephacryl S100、Sephacryl 200、Sephacryl S300和SephacrylS400(洗脱相为0.1-1mol/L NaCl溶液)。本发明吴茱萸多糖提取物中总多糖的含量占提取物重量百分比的68%以上。
所述的吴茱萸内酯提取物的制备方法主要包括以下步骤:吴茱萸药材经高浓度醇提取后,取醇提取物,回收溶剂,得稠膏,加水分散后,进行大孔吸附树脂柱层析,用不同浓度乙醇梯度洗脱,收集50%~95%乙醇浓度的洗脱液,回收溶剂即得吴茱萸内酯提取物。为了达到更好的提取效果,优选的方法为:(1)将吴茱萸用6~12倍量的浓度为80~95%的乙醇回流提取2~4次,每次回流2~3h,得到醇提取物;(2)将醇提取物减压浓缩至药材0.2~1.0体积,得稠膏;(3)将稠膏加0.5~2.0倍体积的水进行分散;(4)将分散后的稠膏进行大孔树脂柱层析;(5)分别用蒸馏水、30%、50%、70%、95%乙醇进行梯度洗脱,收集50%~95%乙醇浓度的洗脱液,回收溶剂即得吴茱萸内酯提取物。所得的吴茱萸内酯的含量占提取物总重量百分比的50%以上。
本发明的再一个目的是提供一种治疗胃溃疡、十二指肠溃疡、胃炎、胆囊炎、胰腺炎、肠炎等消化道疾病的药物组合物,该药物组合物由有效量的吴茱萸多糖提取物和或吴茱萸内酯提取物加上药学上可接受的载体、赋型剂或稀释剂,制成注射剂、口服制剂(片剂、口服液、颗粒剂、胶囊剂、软胶囊或滴丸)、外用制剂等。
以上所述吴茱萸多糖和吴茱萸内酯有效成分提取物,来源于同一批次的吴茱萸药材,吴茱萸内酯具脂溶性,来自高浓度醇提取液中,而水溶性较强的吴茱萸多糖组分来自高浓度醇提后的药渣,使中药吴茱萸得到了综合的利用。而吴茱萸多糖和吴茱萸内酯均有治疗和改善消化道疾病:胃溃疡、十二指肠溃疡、胃炎、胆囊炎、胰腺炎、肠炎的作用,二者可能通过不同途径和机制发挥治疗作用,体现了中药治疗疾病多组分、多途径、多环节的作用特点。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明,本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的,并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是,在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换,但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
实施例1
取干燥至恒重的吴茱萸药材4kg,用10倍量90%乙醇回流提取3次,每次3h,用亚麻布抽滤,将滤渣至通风处自然晾干,残渣加蒸馏水10倍量,回流提取3次,每次3h,用亚麻布抽滤,合并滤液,减压回收溶剂至药材1倍体积,用100%乙醇调至含醇量为85%,静置过夜,2000rpm每分钟离心,沉淀依次用3倍量无水乙醇、丙酮洗涤,得沉淀物。取沉淀加蒸馏水复溶,装入分子量范围为3.0×103-1.2×104透析袋中流水透析48小时,蒸馏水透析72小时,将透析液冷冻干燥,得到粗多糖;经过DEAE-Sepharose F.F和DEAE-52离子交换色谱柱(洗脱相为0.1-1mol/L的NaCl溶液),脱去多糖中色素和蛋白质冷冻干燥,得精制吴茱萸多糖,苯酚-硫酸法,在490nm处,对吴茱萸多糖进行紫外分光光度法测定提取物中多糖含量,以葡萄糖计,含量为68%。
实施例2
取上述施例1中的醇提取物,将醇提取物减压浓缩至药材0.5体积,稠膏加1倍体积的水进行分散,分散后的稠膏上AB-8型大孔树脂进行柱层析,分别用蒸馏水、30%、50%、70%、95%乙醇进行梯度洗脱,收集50%~95%乙醇浓度的洗脱液,回收溶剂即得吴茱萸内酯提取物,吴茱萸内酯的含量占提取物总重量百分比的50%以上。
实施例3制成口服液:
取吴茱萸多糖提取物275g,吴茱萸内酯提取物25g,加入适量增溶剂,研磨,再加少量水稀释,混匀,然后加入矫味剂及防腐剂,混匀,加水至规定量。混匀,分装成1000支,10ml/支,灭菌,即得。
实施例4制成片剂:
取吴茱萸多糖提取物适量,加入辅料适量,混匀,制成颗粒,干燥,压制成片,即得。
试验例1吴茱萸多糖与吴茱萸内酯抗炎作用研究——对小鼠耳肿胀的影响
昆明种小鼠,雌雄各半,体重(20±2)g,随机分为:空白组、模型组、阳性药***组(DSMS)、吴茱萸多糖组(DT)、吴茱萸内酯组(NZ)、内酯和多糖组合物组(D+N),每日给药1次,连续4d,末次给药1h后,立即在小鼠左耳前后两面涂抹二甲苯20μL,2h后,将小鼠脱颈椎处死,用手术剪齐耳根剪下左右两耳片,用7mm直径打孔器,分别在同一部位打下圆耳片,用电子天平称两耳片的重量,每只鼠的左耳片重量减去右耳片重量作为肿胀度,最后比较各组的耳片肿胀程度,计算各组肿胀度之均值与标准差,实验结果见表1。
注:与模型对照组比较*p<0.05,**p<0.01
结论:各给药组同模型对照组比较,吴茱萸多糖与吴茱萸内酯组小鼠的左右耳差值重量减轻,出现极显著性差异(p<0.01)。表明吴茱萸多糖与吴茱萸内酯能降低小鼠耳肿胀程度,具有一定抗炎作用。
试验例2吴茱萸多糖与吴茱萸内酯抗炎作用研究——对大鼠足趾肿胀的影响
取Wister大鼠,雌雄各半,体重(190±10)g,随机分为:空白组、模型组、阳性药***组(DSMS)、吴茱萸多糖组(DT)、吴茱萸内酯组(NZ)、内酯和多糖组合物组(D+N)。每日给药1次,灌胃量2.0mL(100g)-1,连续5d。实验前在大鼠右后足踝关节处作标记,用足容积测定仪测定各鼠右后肢足容积两次,取平均值作为正常足容积。给药后30min,每只大鼠右后足跖部皮下进针至踝关节附近皮下注射10%新鲜鸡蛋清溶液0.1mL致炎,分别于致炎后0.5h、1h、2h、4h、6h测定致炎足容积,实验结果见表2。
注:与模型对照组比较*p<0.05,**p<0.01
结论:各给药组同模型对照组比较,吴茱萸多糖与吴茱萸内酯对大鼠足趾肿胀的抗炎作用有显著性差异(p<0.01)。表吴茱萸多糖与吴茱萸内酯均能降低大鼠足趾肿胀程度,具有一定抗炎作用。
试验例3吴茱萸多糖提取物与吴茱萸内酯对大鼠应激型胃溃疡的影响
取Wister大鼠,雌雄各半,体重(190±10)g,随机分为:空白组、模型组、阳性药三联疗法组(SLLF)、吴茱萸多糖组(DT)、吴茱萸内酯组(NZ)、内酯和多糖组合物组(D+N)。各组禁食12h后灌胃给药,按大鼠体重2mL·100g-1给药。实验前,将大鼠禁食48h,自由饮水。实验时,给药30min后,用***轻麻大鼠,将动物仰卧固定于大鼠固定钢板上,将其下半身置于20±1℃的冷水,水面齐剑突水平,5h后处死大鼠,打开腹腔,暴露胃。先结扎贲门,再由十二指肠经幽门向胃内注入1%甲醛固定液6mL(固定15min),然后结扎幽门,剪下胃,浸泡于同一浓度的甲醛中20min。沿胃大弯剪开并展平,用小棉球轻轻将粘膜上的粘液和血块擦掉,观察粘膜损伤程度。石蜡包埋胃组织行4μm切片,苏木精-伊红(HE)染色,光镜下观察粘膜组织学改变。实验结果见表3。
表3:吴茱萸多糖与吴茱萸内酯对应激型胃溃疡试验结果(n=10)
注:与模型对照组比较*p<0.05,**p<0.01
结果:冷水对大鼠应激刺激后,模型大鼠胃肉眼观察:大鼠胃底部粘膜大片瘀血、出血严重,溃疡面较多;胃粘膜病理切片经HE染色,光学显微镜观察:胃粘膜上皮有缺损,胃底腺上皮细胞变性、坏死,粘膜层和粘膜下层偶见红细胞及含铁血黄素颗粒,粘膜下层偶见中性白细胞浸润。给予吴茱萸多糖组与吴茱萸内酯组大鼠胃粘膜出血明显减少,且溃疡部位面积缩小;胃粘膜病理切片经HE染色,光学显微镜观察:大鼠胃底腺上皮细胞基本完好,未见粘膜下层中性粒细胞浸润等变化。其余各组具有不同程度的粘膜充血、糜烂及炎细胞浸浸润。各给药组与模型组比较,有极显著差异(p<0.01)。
结论:吴茱萸多糖与吴茱萸内酯对大鼠应激型胃溃疡有明显的抑制作用。
试验例4吴茱萸多糖提取物与吴茱萸内酯对大鼠幽门结扎胃溃疡的影响
取Wister大鼠,雌雄各半,体重(190±10)g,随机分为:空白组、模型组、阳性药三联疗法组(SLLF)、吴茱萸多糖组(DT)、吴茱萸内酯组(NZ)、内酯和多糖组合物组(D+N)。每天给予大鼠相应药物,连续给药14d,第14d各组给相应药物后,禁食48h(禁食期间将动物置于底部升高的大孔金属滤网的笼中,以防止其食粪和垫料;禁食期间不禁水),末次给药提前2h。48h后,将大鼠置于钟罩内,用***麻醉后,固定在大鼠板上,自胸骨剑突下沿腹中线切开腹壁,切口约2~3cm,在左侧肋缘部位,用指轻轻往上一推,使胃暴露于切口。在幽门下穿一线将幽门结扎(邻近的其它血管不结扎),结扎后各组大鼠均经十二指肠注射药液1次,溃疡模型组注射同等容积的蒸馏水,然后缝合腹壁切口,用生理盐水清洗,注射青霉素钠5万u/只。
缝合后,将动物单独置于底部升高的大孔金属滤网的饲养笼中,禁食水。经18h后各组大鼠处死,结扎贲门,将胃取出,打开幽门或食道结扎端,收集胃液于刻度离心管中,以3000rp·min-1速度离心20min。取上清胃液1mL,加酚红指示剂1滴,用0.01mol·L-1NaOH滴定,直至胃液先呈黄色再转为红色2秒内不消失为终点,记录用去的NaOH量,按照下列公式计算胃酸度。
总酸度(mmol·L-1)=耗去的NaOH量×10
按照改良Mett法测定胃液胃蛋白酶活性:取内径为0.9~1.1mm的毛细玻璃管(10cm长)。洗净烘干,取适量的鸡蛋清,充分搅匀后用二层纱布过滤。将毛细玻璃管利用虹吸作用灌满蛋清(内无气泡)后,置85℃恒温水浴中使蛋清凝固,制成蛋白管。冷却后,用石蜡将毛细管两端封固,置冰箱中备用。取上述每只大鼠胃液上清液1mL,加入0.05mol·L-1盐酸8mL摇匀。每瓶中放入长约5cm的蛋白毛细管2根,塞好瓶口,于37℃的恒温箱放置24h后,取出毛细管,用游标卡尺测量毛细管两端的透明长度,求平均值,计算胃蛋白酶活性,胃蛋白酶活性(kU·L-1)=平均值2×16。实验结果见表4。
表4:吴茱萸多糖与吴茱萸内酯对大鼠幽门结扎型胃溃疡实验结果(n=10)
注:与模型对照组比较*p<0.05,**p<0.01
结果:吴茱萸多糖组、吴茱萸内酯组与多糖内酯组合物组均能降低溃疡指数,与模型对照组比较有显著差异(P<0.05);吴茱萸多糖组、吴茱萸内酯组与多糖内酯组合物组均能降低大鼠胃液胃蛋白酶活性,与模型对照组比较有显著差异(P<0.05);吴茱萸多糖组、吴茱萸内酯组与多糖内酯组合物组均能降低胃酸浓度,与模型对照组有显著性差异(P<0.05)。
结论:吴茱萸多糖与吴茱萸内酯对大鼠幽门结扎型胃溃疡有明显的抑制作用。
Claims (3)
1.一种治疗消化道相关疾病的吴茱萸有效成分口服液,其特征在于:取吴茱萸多糖提取物275g,吴茱萸内酯提取物25g,加入适量增溶剂,研磨,再加少量水稀释,混匀,然后加入矫味剂及防腐剂,混匀,加水至规定量,混匀,分装成1000支,10ml/支,灭菌,即得。
2.根据权利要求1所述的治疗消化道相关疾病的吴茱萸有效成分口服液的制备方法,其特征在于包括如下步骤:
(1)将吴茱萸用6~12倍量的浓度为80~95%的乙醇回流提取2~4次,每次回流2~3h;残渣加6~12倍重量的蒸馏水回流提取2~3次,每次回流提取2~3h,滤液浓缩至药材0.2~1.0体积,加入80~95%乙醇醇沉,离心得沉淀;沉淀依次用2~4倍量无水乙醇,丙酮分别洗涤;洗涤后的沉淀用0.5~2倍重量的蒸馏水复溶,以分子量大小为3.0×103-1.2×104的透析袋透析24~72h;透析液浓缩,加入乙醇醇沉,离心得沉淀;沉淀依次用2~4倍量无水乙醇,丙酮分别洗涤;洗涤后的沉淀用蒸馏水复溶,采用弱酸弱碱型阴、阳离子交换树脂串联法脱去多糖中的色素和蛋白质,即得吴茱萸多糖提取物;
(2)吴茱萸药材用6~12倍量的浓度为80~95%的乙醇回流提取2~4次,每次回流2~3h,得到醇提取物;将醇提取物减压浓缩至药材0.2~1.0体积,得稠膏;将稠膏加0.5~2.0倍体积的水进行分散;将分散后的稠膏进行大孔树脂柱层析;分别用蒸馏水、30%、50%、70%、95%乙醇进行梯度洗脱,收集50%~95%乙醇浓度的洗脱液,回收溶剂即得吴茱萸内酯提取物。
(3)取吴茱萸多糖提取物275g,吴茱萸内酯提取物25g,加入适量增溶剂,研磨,再加少量水稀释,混匀,然后加入矫味剂及防腐剂,混匀,加水至规定量,混匀,分装成1000支,10ml/支,灭菌,即得。
3.权利要求1所述吴茱萸有效成分口服液在制备治疗消化道相关疾病的药物中的用途,其中所述消化道相关疾病是胃溃疡、十二指肠溃疡、胃炎、胆囊炎、胰腺炎及肠炎。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
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C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Application publication date: 20110803 Assignee: Mudanjiang Lingtai Pharmaceuticals Co., Ltd. Assignor: Kuang Haixue Contract record no.: 2015230000016 Denomination of invention: Medicinal evodia fruit lactone and polysaccharide extracts for treating digestive tract diseases, and preparation method and application thereof Granted publication date: 20130612 License type: Exclusive License Record date: 20150320 |
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LICC | Enforcement, change and cancellation of record of contracts on the licence for exploitation of a patent or utility model |