CN102095814B - 一种化妆品中挥发性亚硝胺的测定方法 - Google Patents
一种化妆品中挥发性亚硝胺的测定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102095814B CN102095814B CN201010576976A CN201010576976A CN102095814B CN 102095814 B CN102095814 B CN 102095814B CN 201010576976 A CN201010576976 A CN 201010576976A CN 201010576976 A CN201010576976 A CN 201010576976A CN 102095814 B CN102095814 B CN 102095814B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cosmetics
- sample
- nitrosamine
- column
- standard
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
本发明涉及一种采用气相色谱-质谱/质谱法测定化妆中的挥发性亚硝胺的方法，方法准确、可靠，检测限、回收率和精密度均符合要求。本发明建立了同时测定化妆品中10种挥发性亚硝胺的气相色谱-串联四极杆质谱分析方法，方法准确、快速、灵敏度高，能够为化妆品中亚硝胺污染状况的监测工作和产品质量控制提供科学依据和技术支持。
Description
技术领域
本发明涉及一种化妆品中挥发性亚硝胺的测定方法。
背景技术
亚硝胺类化合物是一类具有类似结构的有机化合物(见表1)，对动物具有致癌作用，在人们研究的300多种亚硝胺类化合物中，有90％以上对所试动物具有致癌性。化妆品中的亚硝胺一方面可能来自原料，另一方面是在化妆品生产和放置过程中由原料中的仲胺、叔胺、季胺、酰胺、烷基胺、胺氧化物等含氮化合物经亚硝化反应而形成的。化妆品中的亚硝胺可经皮肤吸收进入人体，研究发现，皮肤接触含有N-亚硝基二乙醇胺的化妆品后，在尿液中能够检出该成分，因此可对人体健康构成了极大的潜在危害。我国化妆品卫生规范及欧盟化妆品规程(Council Directive 76/768/EEC)中均明确规定化妆品中亚硝胺类化合物为化妆品组分中禁用物质。美国FDA颁布的化妆品手册(CosmeticHandbook)中明确规定亚硝胺类化合物为化妆品组分中禁用物质。
表110种挥发性亚硝胺标准品
化妆品中亚硝胺的检测研究主要集中在N-亚硝基二乙醇胺，采用的方法包括气相色谱配置热能或电子捕获检测器的测定方法、气相色谱-质谱法、毛细管电色谱法、极谱法、液相色谱配置热能、紫外或荧光检测器的测定方法、液相色谱-质谱法等，而目前国内外关于化妆品中N-亚硝基二甲基胺等挥发性亚硝胺的测定则鲜有报道。
发明内容
本发明所解决的技术问题是提供一种准确、快速、灵敏度高，能够为化妆品中亚硝胺污染状况的监测工作和产品质量控制提供科学依据和技术支持的化妆品中挥发性亚硝胺的检测方法。
为达到上述目的，本发明采用的技术方案如下：一种化妆品中挥发性亚硝胺的测定方法，包括以下步骤：
(1)试样处理：称取1.0g试样于50mL具塞锥形瓶中，加入10mL有机溶剂，超声提取15-30min，以不低于5000r/min离心15min；移取2mL上清液，氮气缓慢吹干；加入2mL 30％甲醇水溶液溶解后做待净化液；将待净化液转移至固相萃取柱中，用3mL30％甲醇水溶液洗涤，抽至近干后，用8mL甲醇洗脱；洗脱液于50℃下用氮气吹干，残留物用1mL甲醇定容，涡旋混合1min，过微孔滤膜后，供GC-MS/MS测定；
(2)测定：采用气相色谱-质谱/质谱方法，其中色谱柱温度以30℃/min的升温速度升至260℃；进样口温度：250℃；色谱-质谱接口温度：250℃；离子源温度：180℃；载气：氦气，纯度≥99.999％；流速：1.0mL/min；进样量：1μL；
(3)绘制标准工作曲线：分别准确吸取标准工作溶液配制成浓度为50μg/L、100μg/L、250μg/L、500μg/L、1mg/L、5mg/L、10mg/L的标准溶液；分别准确吸取1μL注入气相色谱-串联四极杆质谱仪，按照上述的分析条件下进行检测，以定量离子的峰面积为纵坐标，与其对应的浓度为横坐标，绘制标准工作曲线。
本发明方法采用气相色谱-质谱/质谱法测定化妆中的挥发性亚硝胺，方法准确、可靠，检测限、回收率和精密度均符合要求。本发明建立了同时测定化妆品中10种挥发性亚硝胺的气相色谱-串联四极杆质谱分析方法，方法准确、快速、灵敏度高，能够为化妆品中亚硝胺污染状况的监测工作和产品质量控制提供科学依据和技术支持。
具体实施方式
为进一步说明本发明，结合以下实施例具体说明：
1、试剂和材料：
除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
1.1甲醇。
1.2二氯甲烷。
1.3丙酮。
1.4无水乙醇。
1.5N-亚硝基二甲基胺(N-Nitrosodimethylamine)标准物质：纯度大于等于97％。
1.6N-亚硝基二乙基胺(N-Nitrosodiethylamine)标准物质：纯度大于等于98％。
1.7N-亚硝基二丙基胺(N-Nitrosodi-n-propylamine)标准物质：纯度大于等于99％。
1.8N-亚硝基吗啉(N-Nitrosomorpholine)标准物质：纯度大于等于99％。
1.9N-亚硝基吡咯烷(N-Nitrosopyrrolidine)标准物质：纯度大于等于97％。
1.10N-亚硝基哌啶(N-Nitrosopiperidine)标准物质：纯度大于等于98％。
1.11N-亚硝基二丁基胺(N-Nitrosodi-n-butylamine)标准物质：纯度大于等于97％。
1.12N-亚硝基二苯基胺(N-Nitrosodiphenylamine)标准物质：纯度大于等于97％。
1.13N-亚硝基二环己基胺(N-Nitrosodicyclohexylamine)标准物质：纯度大于等于99％。
1.14N-亚硝基二苄基胺(N-Nitrosodibenzylamine)标准物质：纯度大于等于99％。
1.15挥发性亚硝胺标准储备液：分别准确称取10mg(精确至0.0001g)各挥发性亚硝胺标准品，置于100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀，该溶液的浓度为100mg/L。
1.16混合标准溶液的配制：分别移取各标准储备液适量体积，用甲醇稀释，配制成浓度均为10mg/L的混合标准溶液。
1.17固相萃取柱：基质为N-乙烯吡咯烷酮-二乙烯基苯胺，200mg，6mL，或相当者。使用前依次用6mL甲醇、6mL水活化。
2、仪器和设备
2.1气相色谱-串联四极杆质谱仪(GC-MS/MS)：配有电子轰击电离源(EI)。
2.2分析天平：感量为0.0001g和0.001g。
2.3离心机：转速不低于5000r/min。
2.4超声波水浴。
2.5固相萃取装置。
2.6氮气吹干仪。
2.7涡旋混合器。
2.8滤膜：0.45μm，有机相。
3、测定步骤
3.1试样处理
3.1.1提取
3.1.1.1膏霜类样品
称取1.0g(精确至0.001g)试样于50mL具塞锥形瓶中，加入10mL甲醇-二氯甲烷混合液(8∶2，体积分数)，超声提取30min，以不低于5000r/min离心15min。移取2mL上清液，氮气缓慢吹干。加入2mL 30％甲醇水溶液溶解后做待净化液。
3.1.1.2水剂类样品
称取1.0g(精确至0.001g)试样于50mL具塞锥形瓶中，加入10mL丙酮，超声提取15min，以不低于5000r/min离心15min。移取2mL上清液，氮气缓慢吹干。加入2mL 30％甲醇水溶液溶解后做待净化液。
3.1.1.3香波类样品
称取1.0g(精确至0.001g)试样于50mL具塞锥形瓶中，加入10mL甲醇-丙酮混合液(5∶5，体积分数)，超声提取30min，以不低于5000r/min离心15min。移取2mL上清液，氮气缓慢吹干。加入2mL 30％甲醇水溶液溶解后做待净化液。
3.1.1.4唇膏类化妆品
称取1.0g(精确至0.001g)试样于50mL具塞锥形瓶中，加入10mL无水乙醇-丙酮混合液(8∶2，体积分数)，超声提取30min，以不低于5000r/min离心15min。移取2mL上清液，氮气缓慢吹干。加入2mL 30％甲醇水溶液溶解后做待净化液。
3.1.1.5散粉类化妆品
称取1.0g(精确至0.001g)试样于50mL具塞锥形瓶中，加入10mL甲醇，超声提取30min，以不低于5000r/min离心15min。移取2mL上清液，氮气缓慢吹干。加入2mL 30％甲醇水溶液溶解后做待净化液。
3.1.2净化
将3.1.1中的待净化液转移至固相萃取柱中。用3mL 30％甲醇水溶液洗涤，抽至近干后，用8mL甲醇洗脱。整个固相萃取过程流速不超过1mL/min。洗脱液于50℃下用氮气吹干，残留物用1mL甲醇定容，涡旋混合1min，过微孔滤膜(5.8)后，供GC-MS/MS测定。
3.2测定
3.2.1气相色谱-质谱/质谱条件
由于测试结果取决于所使用的仪器，因此不可能给出色谱分析的普遍参数。采用下列操作条件已被证明对测试是合适的。
a)色谱柱：DB-624石英毛细管柱，30m×0.25mm(i.d.)×0.25μm，或相当者；
b)色谱柱温度：
c)进样口温度：250℃；
d)色谱-质谱接口温度：250℃；
e)离子源温度：180℃；
f)载气：氦气，纯度≥99.999％；流速：1.0mL/min；
g)进样量：1μL；
h)进样方式：不分流进样，0.5min后开阀；
i)电离方式：EI；
j)质量扫描范围：(50～1000)amu；
k)电离能量：70eV；
1)阱电流：200μA；
m)溶剂延迟：3min；
n)监测方式：MRM；
o)倍增器电压：500V。
3.2.2标准工作曲线的绘制
分别准确吸取标准工作溶液配制成浓度为50μg/L、100μg/L、250μg/L、500μg/L、1mg/L、5mg/L、10mg/L的标准溶液。分别准确吸取1μL注入气相色谱-串联四极杆质谱仪，按照上述的分析条件下进行实验，以定量离子的峰面积为纵坐标，与其对应的浓度为横坐标，绘制标准工作曲线。可根据需要绘制不少于4点的标准曲线。
3.3空白试验
除不加试样外，均按上述步骤进行。
4、结果计算
结果按式(1)计算，计算结果保留两位小数：
式中：
W——化妆品中亚硝胺的质量分数，单位为毫克每千克(mg/kg)；
c——从标准工作曲线上查出的试样溶液中亚硝胺的浓度，单位为毫克每升(mg/L)；
V——试样定容体积，单位为升(L)；
m——试样的质量，单位为克(g)。
5、方法的线性关系和检出限
5.1线性关系
在本检验方法所确定的实验条件下，取一系列标准溶液50μg/L、100μg/L、250μg/L、500μg/L、1mg/L、5mg/L、10mg/L，以亚硝胺的峰面积(Y轴)对相应的浓度(X轴)作图，各亚硝胺的线性方程和回归系数见表2。当样品中的亚硝胺浓度超过此线性范围时，可适当加大样品的稀释倍数。
表210种挥发性亚硝胺的线性方程、回归系数和测定低限
| 中文名称 | 线性方程 | 回归系数r | 测定低限(mg/kg) |
| N-亚硝基二甲基胺 | Y＝5.6363X+0.3247 | 0.9969 | 10.0 |
| N-亚硝基二乙基胺 | Y＝60.3079X-11.9077 | 0.9960 | 2.5 |
| N-亚硝基二丙基胺 | Y＝60.2106X-13.9230 | 0.9955 | 2.5 |
| N-亚硝基吗啉 | Y＝9.8695X-1.9940 | 0.9954 | 2.5 |
| N-亚硝基吡咯烷 | Y＝16.8586X-3.2914 | 0.9960 | 5.0 |
| N-亚硝基哌啶 | Y＝54.4912X-12.9403 | 0.9955 | 2.5 |
| N-亚硝基二丁基胺 | Y＝34.2132X-6.7912 | 0.9966 | 2.5 |
| N-亚硝基二苯基胺 | Y＝110.1460X-12.3830 | 0.9986 | 2.5 |
| N-亚硝基二环己基胺 | Y＝1.5419X+0.0284 | 0.9978 | 10.0 |
| N-亚硝基二苄基胺 | Y＝2050X-79.4030 | 0.9984 | 2.5 |
5.2方法的检出限
经对检验方法的室内实验，方法的测定低限见表2。
6、方法的回收率和精密度
本标准方法回收率实验按通常化妆品中的添加情况，设定了三个添加浓度，按本检验方法所确定的实验条件，对每个添加浓度进行6次实验，亚硝胺回收率在85.2％～102.3％；精密度实验(n＝6)测得相对标准偏差在3.05％～9.24％。结果汇总于表3。
7、结论
综合上述情况，本标准检验方法的回收率，检测限和精密度等各项技术指标均符合要求，方法应用于化妆品样品检测，重现性良好。本标准建立的检验方法操作简便、结果准确，可用于化妆品中挥发性亚硝胺的检验。
本发明重点对上述实验条件进行了优化：
1、色谱和质谱条件的优化
分别考察了不同固定液、不同极性的气相色谱柱：非极性柱(DB-5MS，5％苯基-95％甲基聚硅氧烷固定液)、中等极性柱(DB-624，6％氰丙基苯基-94％二甲基聚硅氧烷固定液)、强极性柱(HP-INNOWax，聚乙二醇固定液)对10种挥发性亚硝胺的色谱分离效果。结果表明，选用DB-5MS非极性毛细管气相色谱柱获得了最佳的色谱峰形和分离效果，在15min内完成了10种挥发性亚硝胺的分离检测。分别考察了亚硝胺在电子轰击源(EI)和化学电离源(CI)下的电离效果，结果表明，10种挥发性亚硝胺在EI电离方式下可获得较高丰度的分子离子峰。根据欧盟2002/657/EC指令规定对于低分辨液相色谱-质谱确证方法必须达到4个确证点的要求，采用子离子扫描方式进行二级质谱分析，对子离子进行了优化选择，确定定量离子和辅助定性离子，通过透镜电压、碰撞能量、质谱分辨率等质谱参数，使亚硝胺化合物的分子离子与特征碎片离子产生的离子对强度达到最大。
2、样品前处理条件的优化
化妆品样品常用提取方法为振荡提取、加热提取、微波提取、超声提取等。为了减少操作步骤及获得尽可能高的提取效率，采用超声提取方式对样品进行提取。10种挥发性亚硝胺的正辛醇/水分配系数(Kow)介于-0.57和3.90之间，极性范围分布较宽。针对膏霜类、水剂类、香波类、唇膏类、散粉类不同类型的化妆品试样，分别考察了不同的提取溶剂，确定了最佳的样品提取条件。分别考察了不同类型的固相萃取柱对亚硝胺化合物的净化效果：亲水亲脂柱(Oasis HLB)、硅胶柱(Sep-Pak Silica)、氨基柱(Sep-Pak NH2)、氧化铝柱(Sep-Pak Alumina N)和弗罗里硅土柱(Sep-Pak Florisil)。结果表明，Oasis HLB柱的净化效果和回收率最优。采用Oasis HLB柱为固相萃取柱，先用6mL甲醇活化固定相，并除去固定相中的杂质，再用6mL水平衡，创造适合上样的环境。考察了不同配比的甲醇水溶液淋洗***的洗脱效果，确定了洗涤和洗脱条件。
以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通工程技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。
Claims (1)
1.一种化妆品中挥发性亚硝胺的测定方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)试样处理：称取1.0g试样于50mL具塞锥形瓶中，加入10mL有机溶剂，超声提取15-30min，以不低于5000r/min离心15min；移取2mL上清液，氮气缓慢吹干；加入2mL30％甲醇水溶液溶解后做待净化液；将待净化液转移至固相萃取柱中，用3mL 30％甲醇水溶液洗涤，抽至近干后，用8mL甲醇洗脱；洗脱液于50℃下用氮气吹干，残留物用1mL甲醇定容，涡旋混合1min，过微孔滤膜后，供GC-MS/MS测定；
(2)测定：采用气相色谱-质谱/质谱方法，其中色谱柱为30m×0.25mm×0.25μm的DB-624石英毛细管柱，色谱柱温度以30℃/min的升温速度升至260℃；进样口温度：250℃；色谱-质谱接口温度：250℃；离子源温度：180℃；载气：氦气，纯度≥99.999％；流速：1.0mL/min；进样量：1μL；
(3)绘制标准工作曲线：分别准确吸取标准工作溶液配制成浓度为50μg/L、100μg/L、250μg/L、500μg/L、1mg/L、5mg/L、10mg/L的标准溶液；分别准确吸取1μL注入气相色谱-串联四极杆质谱仪，按照步骤(2)的测定方法进行检测，以定量离子的峰面积为纵坐标，与其对应的浓度为横坐标，绘制标准工作曲线。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201010576976A CN102095814B (zh) | 2010-12-07 | 2010-12-07 | 一种化妆品中挥发性亚硝胺的测定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201010576976A CN102095814B (zh) | 2010-12-07 | 2010-12-07 | 一种化妆品中挥发性亚硝胺的测定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102095814A CN102095814A (zh) | 2011-06-15 |
| CN102095814B true CN102095814B (zh) | 2012-10-10 |
Family
ID=44128994
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201010576976A Expired - Fee Related CN102095814B (zh) | 2010-12-07 | 2010-12-07 | 一种化妆品中挥发性亚硝胺的测定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102095814B (zh) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105353068B (zh) * | 2015-12-09 | 2017-02-01 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 一种烟草及无烟气烟草制品中挥发性n‑亚硝胺的gc‑ms/ms分析测定方法 |
| CN106501410A (zh) * | 2016-10-27 | 2017-03-15 | 安徽易康达光电科技有限公司 | 一种化妆品中n‑亚硝基二乙醇胺的检测方法 |
| CN106770740A (zh) * | 2016-12-05 | 2017-05-31 | 江西宜信堂医疗科技有限公司 | 一种麦芽或啤酒中n‑亚硝基二甲胺的检测方法 |
| CN108008040A (zh) * | 2017-12-01 | 2018-05-08 | 暨南大学 | 一种水中痕量n-亚硝胺的检测方法 |
| CN112710763B (zh) * | 2021-01-06 | 2023-07-28 | 湖南威特制药股份有限公司 | 一种hplc法检测尼扎替丁中n-亚硝基二甲胺的方法 |
| CN114924013A (zh) * | 2022-05-12 | 2022-08-19 | 广东铭康香精香料有限公司 | 气相色谱-串联质谱法测定化妆品中多种香料成分的方法 |
-
2010
- 2010-12-07 CN CN201010576976A patent/CN102095814B/zh not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 李文寿.用气相色谱/热能分析仪同时测定挥发性亚硝胺和烟草特有亚硝胺.《中国烟草学报》.1999,第5卷(第1期),12-19. * |
| 林业刚、丁昌明、林少彬.N-亚硝基二乙醇胺液相色谱-串联质谱测定.《中国公共卫生》.2006,第22卷(第12期),1533-1534. * |
| 胡丽芳、尹德凤等.气质联用法测定咸鱼中N-二甲基亚硝胺含量.《江西农业学报》.2009,第21卷(第9期),135-136. * |
| 马强、王超等.超高效液相色谱法同时测定化妆品中的15种激素.《色谱》.2007,第25卷(第4期),541-545. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102095814A (zh) | 2011-06-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102095814B (zh) | 一种化妆品中挥发性亚硝胺的测定方法 | |
| CN106324144B (zh) | 亲水作用色谱-串联质谱法检测乳粉及婴幼儿配方乳粉中氯酸盐、高氯酸盐和溴酸盐的方法 | |
| CN102735784A (zh) | 一种超高效液相色谱-串联四级杆质谱同时测定中药中100种农药残留的方法 | |
| CN102353742A (zh) | 静态顶空-气相色谱质谱选择性测定烟用白乳胶中7种苯系物的方法 | |
| CN102854271A (zh) | 烟草及烟草制品中三种苯氧羧酸类农药残留量的测定方法 | |
| CN103926348A (zh) | 同时测定茶鲜叶中有机磷类及拟除虫菊酯类农药残留量的分析方法 | |
| CN103512996A (zh) | 酰胺类化合物的分析方法 | |
| CN102636610B (zh) | 一种水环境中***结合体的共检测方法 | |
| CN103308641A (zh) | 烟草及烟草制品中三种酰胺类除草剂的高效液相色谱-串联质谱测定方法 | |
| Krata et al. | Simultaneous speciation analysis of mercury in marine origin samples by high performance liquid chromatography and species-specific isotope dilution inductively coupled plasma mass spectrometry | |
| CN105738494A (zh) | 一种同时检测生物样品中有机氯农药和多氯联苯的同位素稀释高分辨色质联用方法及应用 | |
| CN102507819B (zh) | 一种食品接触材料中六溴环十二烷的测定方法 | |
| CN107543891B (zh) | 一种洗护用品中雄激素化学风险物质的筛查方法 | |
| CN102062766B (zh) | 一种化妆品中壬基苯酚的测定方法 | |
| CN105628837B (zh) | 一种土壤中硝磺草酮及其代谢物的检测方法 | |
| CN107543875B (zh) | 一种洗护用品中硝基呋喃类抗生素化学风险物质的筛查方法 | |
| CN108020627B (zh) | 一种超高效合相色谱-串联质谱法测定烟草中三种苯氧羧酸类农药残留量的方法 | |
| CN102095815A (zh) | 一种洗涤用品中二甲苯麝香的测定方法 | |
| CN106404958A (zh) | 快速检测蔬菜中植物生长调节剂含量的方法 | |
| CN106404978B (zh) | 脂肪醇聚氧乙烯醚组成分布的液相色谱分析方法 | |
| CN108760920A (zh) | 一种基于hplc-msms法测定氰霜唑及其代谢物残留量的方法 | |
| CN108760963A (zh) | 吡唑醚菌酯及其代谢物的高效液相色谱串联质谱分析方法 | |
| CN105388243A (zh) | 一种化妆品中己脒定和氯己定及其盐类的测定方法 | |
| CN105158372B (zh) | 一种化妆品中尿刊酸及其乙酯的测定方法 | |
| CN110887911B (zh) | 一种动物源食品中克霉唑残留的气相色谱-串联质谱检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20121010 Termination date: 20141207 |
|
| EXPY | Termination of patent right or utility model |