CN102091283B - 一种醒脑静注射液的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种中药制剂的检测方法，具体涉及一种中药醒脑静注射液的检测方法。所述检测方法包括：性状的观察，内容物的鉴别，内容物的检查，指纹图谱比较，对含有的成分进行含量测定。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药制剂的检测方法，具体涉及一种中药醒脑静注射液的检测方法。
背景技术
醒脑静注射液包含麝香、栀子、郁金、冰片四味药材的有效成分，由于中药材成分比较复杂，按现行质量标准进行检测，不能完全对成品的质量进行监控。
现有产品检测方法影响因素较多，结果重现性较差，不能很好的控制药品质量，从而不能很好地保证产品质量的稳定均一。
为保证其质量稳定均一，这就要求对产品有一个好的质量控制方法对其进行有效的质量控制，使产品做到“安全、有效、质量可控”。
为了更好的保证醒脑静注射液成品的质量，故采用指纹图谱的方法对各环节的物料进行质量控制，比原标准采用的方法更具有准确、重现性好的特点，从而可准确严格地控制产品的质量与均一性。
发明内容
本发明提供的是一种针对醒脑静注射液的质量控制方法，可包括以下内容：性状的观察，内容物的鉴别，内容物的检查，指纹图谱比较，对含有的成分进行含量测定，因此，本发明的质量控制方法其主要的内容是对醒脑静注射液的成分进行检测。该方法可以更加准确的把握有关药品的质量，降低用药风险。
本发明提供一种醒脑静注射液的检测方法，包括对麝香、郁金、冰片、栀子、醒脑静注射液的中间体和醒脑静注射液进行指纹图谱测定。
本发明通过指纹图谱测定对药品中的药物成分进行鉴别，因此本发明涉及一种指纹图谱比较法。
所述指纹图谱比较法包括以下步骤：
步骤1、制定标准对照指纹图谱；
步骤2、测定制剂的指纹图谱；
步骤3、将标准对照指纹图谱和制剂的指纹图谱进行比较。
比较可用目测，也可采用计算软件比较，供试品指纹图谱与标准品对照指纹图谱相似度大于0.80为合格，优选0.90，更优选0.95。
所述采用计算软件比较，是采用由国家药典委员会提供的一种中药色谱指纹图谱相似度评价***软件，属于已知操作法。
本发明的方法，其中各种数据均为实验获得，在实际操作过程中会有误差，该误差在±20％以内均可，因此本发明的方法中的数值为在本发明记载的数值基础上±20％以内。
任何人在±20％以内使用本发明的数值均落在本发明范围内。
本发明的指纹图谱比较法具体步骤如下：
1)标准麝香指纹图谱的测定
a.色谱条件与***适应性试验：WAX毛细柱；30m×0.25mm×0.25μm(膜厚)；载气：高纯氮气；流速：1ml/min；分流比：3∶1；FID检测器温度：270℃；进样口温度：270℃；柱温：50℃(5min)10℃/min 200℃(0min)4℃/min 240℃(30min)；
b.参照物溶液的制备：取0.025g十七烷用正己烷定容至50ml容量瓶中，即得，作为内标溶液
c.供试品溶液的制备：精密称取麝香药材40mg，至500ml圆底烧瓶烧瓶中，加入蒸馏水200ml，正己烷2ml，，在电热套中用挥发油提取器加热分别提取4h，，收集正己烷溶液至5ml容量瓶中，精密加入内标溶液1ml，并用正己烷定容至刻度，作为供试品溶液。
d.测定法：分别取各批药材供试品溶液2μl，注入气相色谱仪，记录1h色谱。
2)标准郁金指纹图谱测定
a.色谱条件与***适应性试验：WAX毛细柱；30m×0.25mm×0.25μm；载气：高纯氮气；流速：1ml/min；分流比：20∶1；FID检测器温度：250℃；进样口温度：250℃；柱温：50℃(5min)4℃/min 90℃(5min)2℃/min 220℃(6min)；进样量：1μl。
b.参照物溶液的制备：取0.035g十二烷用正己烷定容至500ml容量瓶中，即得，作为内标溶液。
c.供试品溶液的制备：取温郁金样品粉碎成粗粉，分别取样20.0克，置圆底烧瓶中，加入蒸馏水200ml，放置12小时后，加入3ml正己烷，置电热套中用挥发油提取器加热提取8小时，收集正己烷并定容至5ml容量瓶中，加入无水硫酸钠脱水至澄清。精密量取1.00ml正己烷样品溶液，与1.00ml内标溶液混匀，作为供试品溶液。
d.测定法：取供试品溶液1μl，注入气相色谱仪，记录1小时色谱图。
3)标准冰片指纹图谱测定
a.色谱柱：WAX毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm)；进样口温度：200℃；FID检测器温度：200℃；载气：高纯氮气；流速1ml/min；分流比：40∶1；柱温：100℃(5min)7℃/min170℃；内标物：十八烷。
b.标准品溶液的配制
精密称定樟脑标准品，以正己烷定溶于5ml容量瓶中，配成浓度为2.5mg/ml的标准品溶液；精密称定异龙脑标准品，以正己烷定容于5ml容量瓶中，配成浓度为2.5mg/ml的标准品溶液；精密称定龙脑标准品，以正己烷定容于5ml容量瓶中，配成浓度为3.0mg/ml的标准品溶液。
c.参照物溶液的制备：精密称取十五烷，用正己烷定容至250ml，得浓度为0.80mg/ml的内标溶液。
d.供试品溶液的制备：精密称定样品，以正己烷定溶于5ml容量瓶中，配成浓度为1.0mg/ml的标准品溶液。
e.取供试品溶液1μl，注入气相色谱仪，记录1小时色谱图。
4)标准栀子指纹图谱测定
a.色谱条件与***适应性试验：色谱柱：DB-5MS毛细柱，30m×0.25mm×0.25μm；载气：高纯氮气；流速：1.0ml/min；分流比：20∶1；FID检测器温度：250℃；进样口温度：250℃；柱温：50℃(5min)4℃/min240℃(5min)；进样量：1μl。
b.参照物溶液的制备：精密称取十五烷0.020g用正己烷定容至250ml，作为内标溶液。
c.供试品溶液的制备：取栀子样品粉碎成粗粉，取样20.0克，置圆底烧瓶中，加入蒸馏水200ml，放置12小时后，加入3ml正己烷，在电热套中用挥发油提取器加热提取8小时，收集正己烷样品溶液并定容至5ml，加入无水硫酸钠脱水至澄清。精密量取栀子正己烷样品溶液1.00ml，加入内标溶液1.00ml，得供试品溶液。
d.测定法：取药材供试品溶液1μl，注入气相色谱仪，记录1h色谱图。
5)醒脑静注射剂中间体指纹图谱测定：
a.色谱条件与***适应性试验：WAX毛细柱；30m×0.25mm×0.25μm；载气：高纯氮气；流速：1ml/min；分流比：20∶1；FID检测器温度：250℃；进样口温度： 250℃；柱温：50℃(5min)4℃/min 220℃(12min)。
b.参照物溶液的制备取0.0050g十二烷用正己烷定容至50ml容量瓶中，即得，作为内标溶液
c.供试品溶液的制备精密吸取醒脑静注射剂中间体样品10ml，置圆底烧瓶中，加入蒸馏水200ml，沸石少许，正己烷2ml，在电热套中用挥发油提取器加热提取5小时，收集正己烷并定容至5ml，加入无水硫酸钠脱水至澄清，取样品溶液1.00ml加入十二烷内标溶液1.00ml，混匀，即得。
d.测定法：取供试品溶液1μl，注入气相色谱仪，记录1h色谱。
6)醒脑静注射剂指纹图谱测定：
a.色谱条件与***适应性试验：WAX毛细柱；30m×0.25mm×0.25μm；载气：高纯氮气；流速：1ml/min；分流比：20∶1；FID检测器温度：250℃；进样口温度：250℃；柱温：50℃(5min)4℃/min 220℃(12min)。
b.参照物溶液的制备：取0.0050g十二烷用正己烷定容至50ml容量瓶中，即得，作为内标溶液。
c.供试品溶液的制备：精密吸取醒脑静注射剂样品10ml，置圆底烧瓶中，加入蒸馏水200ml，沸石少许，正己烷2ml，在电热套中用挥发油提取器加热提取5小时，收集正己烷并定容至5ml，加入无水硫酸钠脱水至澄清，取样品溶液1.00ml加入十二烷内标溶液1.00ml，混匀，即得。
d.测定法：取供试品溶液1μl，注入气相色谱仪，记录1h色谱。
最后将中间体和终产品的指纹图谱和标准品的指纹图谱进行比较，符合者为合格产品，不符合者为不合格产品。
本发明的优点是：质量控制方法精密度、灵敏度、稳定性均好，确保产品质量的“安全、均一、稳定、有效、可控”。使该药物生产标准化，达到疗效确切，质量稳定，工艺先进合理的目的。
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步叙述，以使公众对发明内容有更深入的了解，并非对本发明的限制，凡依照本发明公开内容所进行的任何本领域等同替换，均属于本发明的保护范围。
附图说明
图1为标准麝香指纹图谱
图2为标准郁金指纹图谱
图3为标准冰片指纹图谱
图4为标准栀子指纹图谱
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步地说明，以便对本发明作更详细地的了解。以下所述仅为用以解释本发明的优选实施例，并非据以对本发明作任何形式上的限制，故凡是在本发明的创作精神基础上所作的任何形式修饰或变更，皆应属于本发明的保护范畴。
实施例1
1.1仪器和试剂
气相色谱仪岛津GC15-A，C-R4A积分仪。
正己烷(分析纯)、无水硫酸钠(分析纯)、挥发油提取器(北京玻璃仪器厂)。十二烷：色谱纯，中外合资绿色特种化学有限公司，批号：950824。
十一批不同产地温郁金：由江苏省无锡市山禾药业提供，采收日期：2003年1月，由本校生药系阎玉凝教授鉴定。
内标溶液的配制：取0.03267g十二烷用正己烷定容至50ml容量瓶中，即得，作为内标溶液。
1.2分析条件的考察
取温郁金样品粉碎成粗粉，分别取样20.0克，置圆底烧瓶中，加入蒸馏水200ml，放置12小时后，加入3ml正己烷，在电热套中用挥发油提取器加热分别提取2、4、6、8、10小时，收集正己烷溶液并定容至5ml容量瓶中，加入无水硫酸钠脱水至澄清。精密量取1.00ml正己烷样品溶液，与1.00ml内标溶液混匀，作为供试品溶液，进样1μl。以色谱图中最大峰面积为指标，实验结果表明提取时间应为6小时即可。
程序升温升至220℃后恒温持续一小时，在60分钟内未见其他峰。实验结果表明，该升温程序可使温郁金挥发油中的所有成份流出柱子，可用于温郁金挥发油成份的分析。
1.3GC分析条件
GC分析条件：色谱柱：ALLTECH-WAX毛细柱；30m×0.25mm×0.25μm；载气：高纯氮气；流速：1ml/min；分流比：20∶1；FID检测器温度：250℃；进样口温度：250℃；柱温：50℃(5min)4℃/min 90℃(5min)2℃/min 220℃(6min)；进样：1μl。
1.4样品制备
温郁金样品11批，取温郁金样品粉碎成粗粉，分别取样20.0克，置圆底烧瓶中，加入蒸馏水200ml，放置12小时后，加入3ml正己烷，置电热套中用挥发油提取器加热提取6小时，收集正己烷并定容至5ml容量瓶中，加入无水硫酸钠脱水至澄清。精密量 取1.00ml正己烷，与1.00ml内标溶液混匀，作为供试品溶液，进样1μl。
根据十个不同产地温郁金的指纹图，找到20个共有峰。
将该20个共有峰作为标准郁金指纹图谱。
醒脑静注射剂中间体中郁金的鉴别：
a.色谱条件与***适应性试验：WAX毛细柱；30m×0.25mm×0.25μm；载气：高纯氮气；流速：1ml/min；分流比：20∶1；FID检测器温度：250℃；进样口温度：250℃；柱温：50℃(5min)4℃/min 220℃(12min)。
b.参照物溶液的制备取0.0050g十二烷用正己烷定容至50ml容量瓶中，即得，作为内标溶液
c.供试品溶液的制备精密吸取醒脑静注射剂中间体样品10ml，置圆底烧瓶中，加入蒸馏水200ml，沸石少许，正己烷2ml，在电热套中用挥发油提取器加热提取5小时，收集正己烷并定容至5ml，加入无水硫酸钠脱水至澄清，取样品溶液1.00ml加入十二烷内标溶液1.00ml，混匀，即得。
d.测定法：取供试品溶液1μl，注入气相色谱仪，记录1h色谱。
采用计算软件比较，供试品指纹图谱与标准郁金指纹图谱相似度大于0.95。
醒脑静注射剂中郁金的鉴别
a.色谱条件与***适应性试验：WAX毛细柱；30m×0.25mm×0.25μm；载气：高纯氮气；流速：1ml/min；分流比：20∶1；FID检测器温度：250℃；进样口温度：250℃；柱温：50℃(5min)4℃/min 220℃(12min)。
b.参照物溶液的制备：取0.0050g十二烷用正己烷定容至50ml容量瓶中，即得，作为内标溶液。
c.供试品溶液的制备：精密吸取醒脑静注射剂样品10ml，置圆底烧瓶中，加入蒸馏水200ml，沸石少许，正己烷2ml，在电热套中用挥发油提取器加热提取5小时，收集正己烷并定容至5ml，加入无水硫酸钠脱水至澄清，取样品溶液1.00ml加入十二烷内标溶液1.00ml，混匀，即得。
d.测定法：取供试品溶液1μl，注入气相色谱仪，记录1h色谱。
采用计算软件比较，供试品指纹图谱与标准郁金指纹图谱相似度大于0.95。
Claims (1)
1.一种醒脑静注射液的检测方法，包括以下内容：性状的观察，内容物的鉴别，内容物的检查，指纹图谱比较，对含有的成分进行含量测定，
其中，所述指纹图谱比较包括以下步骤：
1)标准麝香指纹图谱的测定a.色谱条件与***适应性试验：WAX毛细柱；膜厚30m×0.25mm×0.25μm；载气：高纯氮气；流速：1ml/min；分流比：3∶1；FID检测器温度：270℃；进样口温度：270℃；柱温：50℃5min 10℃/min 200℃0min 4℃/min 240℃30min；b.参照物溶液的制备：取0.025g十七烷用正己烷定容至50ml容量瓶中，即得，作为内标溶液；c.供试品溶液的制备：精密称取麝香药材40mg，至500ml圆底烧瓶烧瓶中，加入蒸馏水200ml，正己烷2ml，，在电热套中用挥发油提取器加热分别提取4h，，收集正己烷溶液至5ml容量瓶中，精密加入内标溶液1ml，并用正己烷定容至刻度，作为供试品溶液；d.测定法：分别取各批药材供试品溶液2μl，注入气相色谱仪，记录1h色谱；
2)标准郁金指纹图谱测定a.色谱条件与***适应性试验：WAX毛细柱；30m×0.25mm×0.25μm；载气：高纯氮气；流速：1ml/min；分流比：20∶1；FID检测器温度：250℃；进样口温度：250℃；柱温：50℃5min 4℃/min 90℃5min 2℃/min 220℃6min；进样量：1μl；b.参照物溶液的制备：取0.035g十二烷用正己烷定容至500ml容量瓶中，即得，作为内标溶液；c.供试品溶液的制备：取温郁金样品粉碎成粗粉，分别取样20.0克，置圆底烧瓶中，加入蒸馏水200ml，放置12小时后，加入3ml正己烷，置电热套中用挥发油提取器加热提取8小时，收集正己烷并定容至5ml容量瓶中，加入无水硫酸钠脱水至澄清，精密量取1.00ml正己烷样品溶液，与1.00ml内标溶液混匀，作为供试品溶液；d.测定法：取供试品溶液1μl，注入气相色谱仪，记录1小时色谱图；
3)标准冰片指纹图谱测定a.色谱柱：WAX毛细管柱30m×0.25mm×0.25μm；进样口温度：200℃；FID检测器温度：200℃；载气：高纯氮气；流速1ml/min；分流比：40∶1；柱温：100℃5min 7℃/min 170℃；内标物：十八烷；b.标准品溶液的配制精密称定樟脑标准品，以正己烷定溶于5ml容量瓶中，配成浓度为2.5mg/ml的标准品溶液；精密称定异龙脑标准品，以正己烷定容于5ml容量瓶中，配成浓度为2.5mg/ml的标准品溶液；精密称定龙脑标准品，以正己烷定容于5ml容量瓶中，配成浓度为3.0mg/ml的标准品溶液；c.参照物溶液的制备：精密称取十五烷，用正己烷定容至250ml，得浓度为0.80mg/ml的内标溶液；d.供试品溶液的制备：精密称定样品，以正己烷定溶于5ml容量瓶中，配成浓度为1.0mg/ml的标准品溶液；e.取供试品溶液1μl，注入气相色谱仪，记录1小时色谱图；
4)标准栀子指纹图谱测定a.色谱条件与***适应性试验：色谱柱：DB-5MS毛细柱，30m×0.25mm×0.25μm；载气：高纯氮气；流速：1.0ml/min；分流比：20∶1；FID检测器温度：250℃；进样口温度：250℃；柱温：50℃5min4℃/min240℃5min；进样量：1μl；b.参照物溶液的制备：精密称取十五烷0.020g用正己烷定容至250ml，作为内标溶液；c.供试品溶液的制备：取栀子样品粉碎成粗粉，取样20.0克，置圆底烧瓶中，加入蒸馏水200ml，放置12小时后，加入3ml正己烷，在电热套中用挥发油提取器加热提取8小时，收集正己烷样品溶液并定容至5ml，加入无水硫酸钠脱水至澄清，精密量取栀子正己烷样品溶液1.00ml，加入内标溶液1.00ml，得供试品溶液；d.测定法：取药材供试品溶液1μl，注入气相色谱仪，记录1h色谱图；
5)醒脑静注射剂中间体指纹图谱测定：a.色谱条件与***适应性试验：WAX毛细柱；30m×0.25mm×0.25μm；载气：高纯氮气；流速：1ml/min；分流比：20∶1；FID检测器温度：250℃；进样口温度：250℃；柱温：50℃5min 4℃/min 220℃12min；b.参照物溶液的制备取0.0050g十二烷用正己烷定容至50ml容量瓶中，即得，作为内标溶液；c.供试品溶液的制备精密吸取醒脑静注射剂中间体样品10ml，置圆底烧瓶中，加入蒸馏水200ml，沸石少许，正己烷2ml，在电热套中用挥发油提取器加热提取5小时，收集正己烷并定容至5ml，加入无水硫酸钠脱水至澄清，取样品溶液1.00ml加入十二烷内标溶液1.00ml，混匀，即得；d.测定法：取供试品溶液1μl，注入气相色谱仪，记录1h色谱；
6)醒脑静注射剂指纹图谱测定：a.色谱条件与***适应性试验：WAX毛细柱；30m×0.25mm×0.25μm；载气：高纯氮气；流速：1ml/min；分流比：20∶1；FID检测器温度：250℃；进样口温度：250℃；柱温：50℃5min 4℃/min 220℃12min；b.参照物溶液的制备：取0.0050g十二烷用正己烷定容至50ml容量瓶中，即得，作为内标溶液；c.供试品溶液的制备：精密吸取醒脑静注射剂样品10ml，置圆底烧瓶中，加入蒸馏水200ml，沸石少许，正己烷2ml，在电热套中用挥发油提取器加热提取5小时，收集正己烷并定容至5ml，加入无水硫酸钠脱水至澄清，取样品溶液1.00ml加入十二烷内标溶液1.00ml，混匀，即得；d.测定法：取供试品溶液1μl，注入气相色谱仪，记录1h色谱。
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2009
- 2009-12-11 CN CN200910186698A patent/CN102091283B/zh active Active
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| CN102091283A (zh) | 2011-06-15 |
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