CN102027368B - 利用红细胞内含有的血红蛋白的本征色素沉着来确定血样的红细胞指数的方法及设备 - Google Patents
利用红细胞内含有的血红蛋白的本征色素沉着来确定血样的红细胞指数的方法及设备 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102027368B CN102027368B CN200980116926.4A CN200980116926A CN102027368B CN 102027368 B CN102027368 B CN 102027368B CN 200980116926 A CN200980116926 A CN 200980116926A CN 102027368 B CN102027368 B CN 102027368B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- red blood
- sample
- rbc
- chamber
- optical density
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 198
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 78
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims abstract description 41
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims abstract description 41
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 title claims description 36
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 title claims description 36
- 230000019612 pigmentation Effects 0.000 title description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims abstract description 35
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 33
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 23
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 claims description 18
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 claims description 14
- 239000000975 dye Substances 0.000 claims description 8
- 230000003068 static effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 6
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 claims description 3
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 2
- 230000005284 excitation Effects 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 46
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 abstract 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 108
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 19
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 14
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 14
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 12
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 7
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 7
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 5
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 5
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 5
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 3
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 3
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 3
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000938605 Crocodylia Species 0.000 description 2
- 102100031939 Erythropoietin Human genes 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001484259 Lacuna Species 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 2
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 2
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 2
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 2
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000000412 Avitaminosis Diseases 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010021135 Hypovitaminosis Diseases 0.000 description 1
- 241000222722 Leishmania <genus> Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 206010027527 Microangiopathic haemolytic anaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010027540 Microcytosis Diseases 0.000 description 1
- 206010061291 Mineral deficiency Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000031845 Pernicious anaemia Diseases 0.000 description 1
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 description 1
- CWHJIJJSDGEHNS-MYLFLSLOSA-N Senegenin Chemical compound C1[C@H](O)[C@H](O)[C@@](C)(C(O)=O)[C@@H]2CC[C@@]3(C)C(CC[C@]4(CCC(C[C@H]44)(C)C)C(O)=O)=C4[C@@H](CCl)C[C@@H]3[C@]21C CWHJIJJSDGEHNS-MYLFLSLOSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N acridine orange free base Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3C=C21 DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N benzoquinolinylidene Natural products C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000003990 capacitor Substances 0.000 description 1
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000010219 correlation analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010217 densitometric analysis Methods 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000003708 edge detection Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- ZZUFCTLCJUWOSV-UHFFFAOYSA-N furosemide Chemical compound C1=C(Cl)C(S(=O)(=O)N)=CC(C(O)=O)=C1NCC1=CC=CO1 ZZUFCTLCJUWOSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 208000007475 hemolytic anemia Diseases 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012886 linear function Methods 0.000 description 1
- 229910044991 metal oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004706 metal oxides Chemical class 0.000 description 1
- 230000005486 microgravity Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010422 painting Methods 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000002985 plastic film Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000012113 quantitative test Methods 0.000 description 1
- 239000012858 resilient material Substances 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 239000004065 semiconductor Substances 0.000 description 1
- 230000007958 sleep Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000009871 tenuigenin Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 208000030401 vitamin deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G06—COMPUTING; CALCULATING OR COUNTING
- G06T—IMAGE DATA PROCESSING OR GENERATION, IN GENERAL
- G06T7/00—Image analysis
- G06T7/0002—Inspection of images, e.g. flaw detection
- G06T7/0012—Biomedical image inspection
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/483—Physical analysis of biological material
- G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
- G01N33/49—Blood
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/04—Investigating sedimentation of particle suspensions
- G01N15/05—Investigating sedimentation of particle suspensions in blood
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/04—Investigating sedimentation of particle suspensions
- G01N15/05—Investigating sedimentation of particle suspensions in blood
- G01N2015/055—Investigating sedimentation of particle suspensions in blood for hematocrite determination
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Ecology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Radiology & Medical Imaging (AREA)
- Quality & Reliability (AREA)
- Computer Vision & Pattern Recognition (AREA)
- Theoretical Computer Science (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
Abstract
用于确定红细胞内的血红蛋白的浓度的方法及设备。将未稀释的、全血样本滴落在透明的分析腔室(10)中,该分析腔室的高度使得红细胞与两个表面(14,18)接触。然后,测量红细胞上与两个表面接触的部分的光密度。根据该光密度和血红蛋白的已知差异系数来计算红细胞的血红蛋白浓度。对其他细胞重复该操作,直到能够可靠地确定平均血红蛋白浓度。从属权利要求包括利用两性离子等容球状试剂来使得该测量与几何形状因子无关。
Description
本申请要求以下美国临时专利申请的优先权:2008年3月21日提交的No.61/038,557;2008年3月21日提交的No.61/038,574;2008年3月21日提交的No.61/038,545;和2008年3月21日提交的No.61/038,559,这些临时专利申请在此以引文方式整体并入本申请。
技术领域
本发明总的来说涉及分析血样的设备及方法,具体地讲,涉及确定样本的红细胞体积以及平均细胞体积的设备及方法。
背景技术
内科医生、兽医和科学家检查人类和动物的生物流体(尤其是血液),以确定组分的微粒数量以及识别是否存在在健康的受试者中没有发现的异常微粒。通常被测量、定量和识别的微粒包括红细胞(RBC)、白细胞(WBC)和血小板。RBC分析包括确定RBC数目、大小、体积、形状、血红蛋白含量和浓度、以及血细胞比容(也被称为红细胞压积)。RBC分析还可以包括确定红细胞(诸如DNA,RNA)内是否存在某些成分和/或确定这些成分的浓度,包括检测RBC中是否存在和/或存在多少血液寄生虫(例如疟原虫)或者检测WBC中是否存在和/或存在多少细胞外的或利什曼原虫组织的睡病虫,以及检测是否存在和/或存在多少其他血液寄生虫。WBC分析可以包括确定WBC子类型的族群(population)频率,通常称为分类WBC计数,以及通知任何在健康的受试者中没有发现的异常细胞类型。血小板(或者在包括鸟、爬行动物和鱼的某些动物中为凝血细胞(thrombocyte),该凝血细胞在功能上类似于哺乳动物的血小板,但是比哺乳动物的血小板大约10倍且是有核的)分析可以包括对血小板数目、大小、形状结构和体积的确定,包括确定样本中是否存在血小板或凝血细胞的凝块。
在诸如Wintrobe’s Clinical Hematology第12版的医学文献中详细描述的已知的血液检查技术通常将检查方法分为手动、离心和阻抗型方法。用于细胞计数的手动方法通常涉及产生精确确定的血液或流体样本的体积,该血液或流体样本被定量稀释并且在计数室中被直观计数。手动检查方法包括检查其中通过目测确定微粒类型的相对量的外周涂片。离心检查方法涉及对样本进行离心,使得根据组分的相对密度将样本分成多个组分层。可以给组分层染色,以增强可见性或检测性。阻抗型方法涉及检查根据被测量的颗粒而经过处理的血液的精确体积;例如溶解RBC来计数有核细胞以及在导电流体中体积(volumetrically)稀释样本。该过程通常涉及监视施加给通过窄通道的样本的电流或电压,以确定当微粒以单行通过时微粒对电流/电压的影响。其他技术涉及对通过光束入射到以单行通过的微粒的光的强度和散射角的分析。还可以使用流式细胞测定法,该方法涉及利用附着于针对细胞或微粒类型上存在的表面抗原决定簇的抗体的荧光基团给悬浮中的感兴趣的微粒染色、用适当波长的光激发染色微粒、以及分析各个微粒/细胞的发光(emission)。
除了外周涂片或离心分离之外,上述所有方法都要求滴涂精确的样本体积。样本体积的不精确将导致相关分析中同一数量的定量误差。除了离心方法之外,上述所有方法还都要求样本与一种或多种液体试剂或稀释剂混合,并且为了获得精确的结果还要求对仪器进行校准。在外周涂片的情况下,需要高度训练来正确地检查涂片。上述的许多方法产生大量的污染物,而处理这些污染物是昂贵的。另外,上述方法不适于确定其中红细胞和凝血细胞有核的鸟、爬行动物和鱼中的以及其中红细胞尺寸非常小并且可能与血小板混淆的某些哺乳动物中的全血计数(CBC)。
可以通过检查人类或动物的血液确定的信息量是巨大的。确定RBC指数尤其有用;例如,单个细胞大小、单个细胞血红蛋白含量和浓度、以及样本内的RBC的族群统计。如上述引用的Wintrobe的文献中的讨论所表明,对于上述参数中的每种参数的平均和离差统计(例如,变异系数)还可以提供重要信息,这已经使得外科医生能够对RBC紊乱进行更好地分类。
发明内容
根据本发明,提供了一种确定RBC指数的方法,RBC指数包括单个RBC的体积、以及血红蛋白含量和浓度;以及RBC族群统计,包括样本中存在的RBC的总量,和基本上未稀释的血液样本内的上述每个指数的平均值。
根据本发明的一方面,提供了一种方法,其包括以下步骤:1)提供基本上未稀释的血液样本;2)将样本滴落在适于静止保持样本以进行分析的分析腔室中,该分析腔室由第一平板的内表面和第二平板的内表面限定,其中两个平板都是透明的,并且该腔室的高度在两个平板的内表面之间延伸,该高度使得样本内的至少一个红细胞与这两个内表面都接触;3)对与内表面接触的所述至少一个红细胞成像;4)确定被成像的红细胞上与两个内表面接触的部分的光密度;以及5)使用所确定的与在两个内表面之间延伸的红细胞的所述部分光学对准的像素的光密度值,来确定与内表面接触的红细胞的血红蛋白浓度。
根据本发明的另一方面,提供了一种用于确定基本上未稀释的血液样本内的红细胞的细胞体积的方法。该方法包括以下步骤:1)提供基本上未稀释的血液样本;2)将该样本滴落在适于静止保持样本以进行分析的分析腔室中,该腔室由第一平板的内表面和第二平板的内表面限定,其中两个平板都是透明的,并且该腔室的高度在两个平板的内表面之间延伸,该高度使得样本内的至少一个红细胞与两个内表面都接触;3)对与内表面接触的所述至少一个红细胞进行成像,包括对红细胞上与两个内表面接触的部分进行成像;4)确定红细胞上与两个内表面接触的部分的平均光密度;5)确定整个红细胞的总的光密度;以及6)使用腔室的高度、为被成像的红细胞上与两个内表面接触的部分确定的平均光密度、和为整个被成像的红细胞确定的光密度,来确定所述至少一个红细胞的细胞体积。
本发明的一个优点在于本发明可以用来利用极少的样本量来确定血液样本的特性,该极少的样本量可以通过毛细管穿刺从病人直接获得,从而使得本发明对现场护理应用更加有用,或者可以根据需要从静脉样本获得该极少的样本量。
本发明的另一个优点在于其可用于利用血红蛋白的本征色素沉着来确定血液样本的特性,因此不需要添加任何染料或着色剂。血红蛋白的高摩尔消光系数使得能够精确地确定其在小到几微米的非常小的光路距离内的相对或绝对浓度。
本发明的另一个优点在于可以确定一个特定细胞上的单个RBC指数,从而可以识别指数之间的相关性。
本发明的方法的另一个优点在于其对于外部和内部流体都适用,并且与重力和方位无关,因此该方法适于用在手持式设备中和微重力条件下。
本发明的方法的另一个优点在于与阻抗计数器不同,本发明的设备不需要在每次使用时都进行校准。本发明的设备不易受诸如细胞流经阻抗型细胞计数器量孔以进行测量时的细胞形状、细胞方位之类的扰动,或者不易受到阻抗计数所需的稀释液体的渗透压影响。
通过下面提供的包括附图的详细描述,本发明的方法及与其有关的优点将更加显然。
附图说明
图1至图4是可用在本发明的方法中的分析腔室的截面示意图。
图5是具有多个分析腔室的条带的示意平面图。
图6是具有分析腔室的一次性容器的示意平面图。
图7是具有分析腔室的一次性容器的示意截面图。
图8是可与本发明的方法一起使用的分析设备的示意图。
图9是图1所示的分析腔室的一部分的放大示图。
图10是示出根据本发明的一个方面的用于确定红细胞内的血红蛋白浓度和多个红细胞内的平均血红蛋白浓度的方法步骤的框图。
图11是示出根据本发明的一个方面的用于确定红细胞的细胞体积和红细胞族群的平均细胞体积的方法步骤的框图。
图12是示出根据本发明的一个方面的用于确定红细胞的血红蛋白含量和红细胞族群的平均血红蛋白含量的方法步骤的框图。
具体实施方式
本发明的用于分析基本上未稀释的全血样本的方法及设备能够确定红细胞(RBC)细胞体积(CV)、平均细胞体积(MCV)、细胞血红蛋白浓度(CHC)、平均细胞血红蛋白浓度(MCHC)、和平均细胞血红蛋白含量(MCH),以及它们的族群统计,而不需要添加任何染料、试剂(除了一些实施例中的抗凝血剂之外)或者对样本进行稀释的稀释液。
本发明的方法利用了分析腔室,该分析腔室可用于静止地保持基本上未稀释的抗凝全血样本以进行分析。该腔室的典型大小可以保持大约0.2至1.0μl的样本,但是该腔室不限于任何特定的体积容量,该容量可以为适应分析应用而改变。在此使用的术语“基本上未稀释的”表示根本未被稀释的血液样本或者未被故意稀释的血液样本,但是为了进行分析,可以对血液样本添加一些试剂。如果添加有试剂的话,就该试剂添加对样本稀释的程度来说,在临床上这种稀释对所进行的分析没有显著的影响。通常,将在执行本发明的方法过程中使用的试剂只有抗凝血剂(例如,EDTA、肝素),在一些实例中为等容球状试剂(isovolumetric sphering agent)。这些试剂通常以干粉形式来添加,其目的是不稀释样本。在某些情况下(例如,非常快速的分析),不必添加抗凝血剂,但是在大多数情况下优选的是添加抗凝血剂以确保样本处于分析可接受的形式。术语“静止”用来描述样本被滴落在腔室内以进行分析,并且在分析过程中该样本不会相对于腔室故意移动;即,样本静止地处于腔室内。就血液样本内存在运动的程度来说,血液样本的形成组分的布朗运动占主导,该运动不会破坏本发明的设备的使用。
现在参照图1,分析腔室10由具有内表面14的第一平板12和具有内表面18的第二平板16限定。平板12、16都是足够透明的,以使得能够有足以执行如下所述的光密度分析的预定波长的光的量通过。平板12、16的至少一部分是彼此平行的,在该部分内,内表面14和内表面18彼此间隔开高度20,使得样本内的至少一些单个RBC 22均单独地接触两个内表面14、18,和/或样本内的一个或多个RBC聚合体23均接触腔室平板12、16的内表面14、18,以及静止样本内的一个或多个无RBC的区域(例如,腔隙)24在所述内表面之间延伸,如下将更详细地说明。本发明的方法可以利用具有上述特性的各种不同的分析腔室类型,因此不限于任何特定类型的分析腔室。具有平行的平板12、16的分析腔室简化了该分析,因此是优选的,但是并不是本发明所必需的;例如,可以使用这样一种腔室,即,该腔室的一个平板相对于另一个平板成已知的非平行角度布置。
现在参照图2至图5,示出了一个可接受的腔室10的示例,该腔室10包括第一平板12、第二平板16、以及至少三个布置在平板12和平板16之间的隔离物26。隔离物26可以是可布置在平板12和平板16之间的用于将平板12和平板16彼此分隔的任何结构。在平板12和平板16之间延伸的隔离物26的尺寸28在此被称为隔离物26的高度28。隔离物26的高度28通常不精确地彼此相等(例如,存在制造公差),但是处于商业上可接受的用于类似分析设备中的分隔装置的公差内。球状珠是可接受隔离物26的一个示例,并且商业上可从例如Bangs Laboratories of Fishers,Indiana,U.S.A.获得。
在图3所示的腔室实施例中,隔离物26由弹性大于第一平板12和第二平板16中的一个或者两个的材料组成。从图3可以看出,较大的隔离物26被压缩到大多数隔离物26接触平板12、16的内表面14、18的程度,从而使得腔室高度仅仅稍微小于平均的隔离物26的直径。在图4所示的腔室实施例中,隔离物26由弹性小于第一平板12和第二平板16中的一个或两个的材料组成。在图4中,第一平板12由比球状隔离物26和第二平板16更有弹性的材料形成,并且将以帐篷式(tent-like)的方式覆盖隔离物26。在该实施例中,虽然腔室10的小局部区域可能偏离期望的腔室高度20,但是腔室10的平均高度20将非常接***均的隔离物26的直径高度。分析显示使用该实施例可以将平均腔室高度20控制为小于4微米的腔室高度的上下1%或更好。除了受到上述的弹性特性(以及诸如隔离物的分布密度之类的其他因素)的限制,隔离物26和平板12、16可以由各种材料制备,只要平板12、16足够透明。由丙烯酸(acrylic)或者聚苯乙烯(polystyrene)组成的透明塑料薄膜是可接受的平板12、16的示例,并且由聚苯乙烯、聚碳酸酯(polycarbonate)、硅酮(silicone)等制成的球状珠是可接受的隔离物26。可接受的隔离物的特定示例是由聚苯乙烯制成的球体,在商业上可以从例如Thermo Scientific of Fremont,California,U.S.A.目录编号为4204A获得4微米(4μm)直径的这种球体。参照图5,垂直布置在另一个平板上方的平板12包括多个以规则的间隔布置的口30(例如,用作气孔),并且平板12和平板16在多个点处结合在一起。在一些实施例中,结合材料32形成了可用于将样本34横向地包含在分析腔室10内的外腔室壁。这个可接受的分析腔室的示例在美国专利申请公开No.2007/0243117、2007/0087442、以及2008年4月2日提交的美国临时专利申请No.61/041,783和2008年10月31日提交的美国临时专利申请No.61/110,341中详细地进行了描述,这些文献在此以引用方式整体并入本文。
另一个可接受的腔室10的示例布置在如图6和图7所示的一次性容器36中。腔室10形成在第一平板12和第二平板16之间。第一平板12和第二平板16都是透明的,以允许光穿过腔室10。第一平板12和第二平板16的至少一部分彼此平行,在该部分内,内表面14和内表面18彼此间隔开高度20。该腔室10的实施例在美国专利No.6,723,290中更详地进行了描述,该专利以引用方式整体并入本文。图2至图7所示的分析腔室表示可接受的用于本发明方法的腔室。然而,本发明的方法不限于这些特定实施例。
可接受的腔室高度是这样的一个高度,即,其中样本内的至少一些RBC单独地接触腔室平板的两个内表面,和/或一个或多个RBC聚合体接触腔室平板的两个内表面,和静止样本内的一个或多个无RBC区域(例如,腔隙)在所述内表面之间延伸。由于血液样本内的RBC 22的大小是被分析(例如人类、猴子、马、山羊、鱼、鸟等)的血液样本类型的函数,因此可接受的腔室高度将根据被测试对象而改变。基于典型的RBC大小和RBC在一定程度上可以变形(例如,上述的被部分压缩的球体)的事实,对于大多数动物品种来说,大约2至6微米(2-6μm)的腔室高度对于单个RBC是可接受的。可以分别在分别具有较大或较小腔室高度的腔室中执行其RBC基本上大于或小于人类RBC的动物品种的血细胞比容(hematocrit)分析。另外,利用RBC聚合体的红细胞压积分析的腔室高度可以由RBC聚合体的高度决定。
在不利用隔离物26的那些腔室的实施例中,腔室10的高度20可以作为腔室的制造工艺的一部分来确定并且提供给腔室。作为选择,可以使用包括利用已知的可感觉的着色剂量、或者利用布置在腔室内的几何特征的各种技术来确定腔室10的高度20,其中布置在腔室内的几何特征可以用来确定已知领域的样本的体积,从而确定腔室的高度。在美国专利No.6,723,290和No.6,929,953中描述了这些技术和其他技术。然而,本发明不限于这些技术。
在一些应用中,在至少一部分样本中掺合等容球状试剂(例如,两性离子去污剂或者类似功能的试剂),以使至少一些RBC呈现基本上为球状的几何形状。自然形式的RBC 22通常是双凹圆盘状38(见图1),而不是球状40。因此,没有等容球状试剂的影响,很大一部分圆盘状22将不会与两个腔室平板12、16都接触。增大具有基本上为球状的几何形状的RBC 22数量将会增大与两个平板12、16都接触的RBC 22的数量,这其中包括被腔室平板限制的可以用其他不同方法成为球状的一些细胞42。等容球状试剂(例如,通过滴落在内表面的特定部分上)可以布置在腔室10的分立区域中。在腔室10内没有样本混合时,该试剂将仅与靠近该试剂的样本部分掺合,从而留下未被球状试剂处理的其他样本部分。这种有选择地使一部分RBC 22免受等容球状处理的步骤容许(如下将要描述的)通过图像分析来检查RBC 22的定性形态以及容许将图像呈现给内科医生来检查诸如其圆度、形状和细胞上存在突起之类的特征。该等容球状处理不会干扰任何的RBC 22的定量分析。
使用分析设备来执行对静止地置于腔室10内的样本的分析,该分析设备可用于对至少一部分样本进行成像并且对该图像进行分析。以容许基于基本单位来确定样本的光密度的方式产生该图像。术语“基本单位”或者“图像单位”是指所定义的能够分辨样本图像的增量单位。通常被定义为在特定成像***内能够单独处理的最小图元的像素是图像单位的一个示例,并且图像单位还可以包括集合单位形式的少量像素。还可以以线性项(例如,在焦平面上每像素几微米)来描述成像设备的放大倍数,其中线性维度沿着应用于图像的正交网格的一个特定轴。在焦平面上被传感器像素(或者其他图像单位)捕获的实际样本面积因此是成像设备所应用的放大系数的函数。因此,成像设备的放大倍数应当已知或者应当能够确定。与该像素有关的体积因此是每个像素的图像的面积与已知的腔室高度的乘积,这是因为腔室中被感测的点是RBC延伸贯穿整个腔室的点。例如,如果放大倍数为每像素0.5微米,则占据200个像素的图像将具有50平方微米的面积,而体积则为50平方微米与腔室高度的乘积。
现在参照图8,适于用于本发明方法的分析设备44的示例包括样本照明器46、析像器48、以及可编程分析器50。样本照明器46包括光源,并且通常包括用于控制光的光学器件,该光源选择性地产生整个波长范围内的光,该波长范围宽到足以用于进行红细胞压积分析(例如,大概400-670nm;鉴于在大约413nm和大约540nm波长时血红蛋白内出现的高光吸收度(这在大约413nm和大约540nm波长时的高摩尔消光系数(ε)中得到反映),因此,在确定人类血液样本内的RBC的光密度方面,大约413nm和大约540nm的光尤其有效)。样本照明器46利用透光度来产生图像。例如可以通过将光源定位在停留于腔室10内的样本的一侧、引导光通过静止布置在腔室平板之间的样本、然后使用析像器捕获光来测量样本的透光特性。可接受的析像器48的示例是电耦合器件(CCD)类型的图像传感器,其将穿过样本的光的图像转换成为电子数据形式。互补金属氧化物半导体(“CMOS”)类型的图像传感器是另一种可以使用的图像传感器的示例,然而本发明不限于这些示例中的任意一个。可编程分析器50包括中央处理单元(CPU)并且连接至样本照明器46和析像器48。CPU适于(即,被编程为)选择性地执行进行本发明方法所必需的功能。应当注意,可以使用硬件、软件、固件或者其结合来实现可编程分析器50的功能。所属领域的技术人员将能够对处理单元进行编程以执行在此所述的功能,而不需要进行过度的实验。题目为“Apparatusfor Analyzing Biologic Fluids”且于2005年3月15日发布的美国专利No.6,866,823公开了这种分析设备44,该美国专利内容以引文方式整体并入本文。
分析设备44适于针对被成像的样本部分基于每个图像单位来确定与检测到的光信号相关的OD值。RBC 22的OD由细胞内的血红蛋白浓度、在给定波长的血红蛋白的摩尔消光系数(也被称为摩尔吸收率)、以及传播通过血红蛋白的光路的距离来确定,并且可由以下关系来表示:
OD=εcL
其中ε=血红蛋白摩尔消光系数,c=血红蛋白浓度,以及L=传播通过RBC 22(即,细胞内的血红蛋白)的距离。摩尔消光系数是血红蛋白的固有特性,可以由实验方法或者通过当前可获得的经验数据导出。在利用具有误差容限的光源(例如,具有设定的额定波长加上或减去某一数量的波长的LED)的分析设备的实施例中,为了精确的目的,初始校正设备并且确定血红蛋白摩尔消光系数是有用的,然后该摩尔消光系数可与该特定设备结合使用,直到该光源被替换为止,此时可以重新校准该设备。
所检测到的光信号(即,OD值)可被边缘检测算法(edge findingalgorithm)用来识别RBC的位置和边界。与腔室10的两个内表面都接触的RBC 22的OD分布类似于被部分压缩的球体的OD分布。与表面14、18不接触的细胞22的横向边缘的OD(相对而言)可以认为趋近于0。所确定的OD的值如下:1)在朝向RBC 22的中心的方向上行进时(即,随着通过细胞的光传输路径增大)增大;2)在RBC与平板内表面14、18接触时(即,当通过RBC的光传输路径恒定时),达到最大值并且基本上保持恒定;以及3)在远离RBC 22的中心的方向上行进时(即,随着通过细胞的光传输路径减小)减小。RBC的OD分布的这种表征对于球状的RBC来说尤其一致,并且不限于与两个内表面都接触的那些RBC。
在一些实施例中,分析设备44还适于确定与两个内表面都接触的一组RBC 22和/或RBC聚合体23的平均最大OD值。可以基于每个样本分析来确定与所述内表面接触的可接受组大小的一组RBC和/或RBC聚合体的构成,或者可以针对同一类型(例如,人类血液样本)的“n”个样本分析周期性地进行这种确定。例如,可以对被识别为与两个内表面14、18都接触的一组RBC 22进行比较估计,以确定该组内的平均最大OD和OD的统计偏差。希望确定平均最大OD,这是因为细胞22内的血红蛋白的OD即使在一个特定样本内也会根据细胞而发生变化。如果标准偏差大于预定阈值,则可以选择与两个平板12、16都接触的新的一组RBC 22,或者可以扩大现有的组,直到上述分析建立了这样一组RBC 22,即,该组RBC 22的平均最大OD具有可接受的标准偏差。例如,一组内的RBC 22的平均最大OD,如果大约为加上或减去该样本内与两个表面14、18都接触的所有RBC的平均最大OD的百分之一(1%),则处于可接受的标准偏差值内。然而,可以根据当前的应用和正在使用的特定统计分析(例如,标准误差等)来改变可接受的标准偏差值的构成。可以获得与RBC 22的OD相关的现有统计数据并且可以将其用于确定可接受的OD统计值。对一个特定组内的RBC的平均最大OD是否处于临床上可接受的标准偏差内的确定也是适应性的,这是由于,如上所述,公知的是个体内的RBC族群通常在血红蛋白浓度上的变化很小,并且可以使用该结果的连续(running)标准偏差来确定在获得可接受准确性的平均值之前必须检查多少细胞;例如,对于来自具有正常血液特征的对象的样本,可接受的组大小可以仅仅为100个RBC,而来自具有异常血液特征的对象的样本可能需要分析1000个或更多个RBC。用于确立可接受的平均最大OD的、与两个内表面都接触的特定数目的RBC 22和/或RBC聚合体23不限于样本内的任何具体数目或者百分比的RBC 22和/或RBC聚合体23,并且可以包括与两个表面14、18都接触的所有(例如,成千上万个)RBC 22和/或RBC聚合体23。
现在参照图9和10,分析设备44还适于通过检查与腔室10的两个内表面14、18都接触的RBC 22的一部分25来确定RBC 22的血红蛋白浓度(“CHC”)。血红蛋白浓度在任何给定的RBC 22内都是一致的。基于每个像素(或者其他图像单位)来确定OD值。每个像素的OD信号表示可归因于与该像素“对准”的腔室部分的高度“L”的OD信号。在确定CHC的过程中,感测OD、已知或者可以确定腔室的高度,以及已知血红蛋白摩尔消光系数(ε)。因此,使用光密度(OD)、血红蛋白消光系数(ε)、以及通过血红蛋白的路径长度(L)之间的关系来确定CHC,其中,对于与腔室的内表面接触的RBC 22的一部分25来说,通过血红蛋白的路径长度(L)等于腔室的高度:
OD=εcL,c=OD/εL。
使用以下步骤来确定RBC 22的平均细胞血红蛋白浓度(“MCHC”):使用上述用于确定单个RBC的CHC的同样方法,针对与腔室的两个内表面都接触的一些RBC重复该方法,使用这些结果来确定平均值和可接受的标准偏差。
现在参照图9和11,分析设备44还适于通过整合(integrating)作为RBC内血红蛋白的OD的函数的RBC体积来确定与腔室10的两个内表面都接触的单个RBC 22的细胞体积(“CV”)。可以通过使用各种分析技术来执行体积的整合。例如,根据第一技术,可以使用腔室高度20、为被成像的RBC 22上与两个内表面14、18接触的部分25确定的平均最大光密度、以及为整个被成像的RBC 22确定的光密度来确定与两个内表面14、18都接触的单个RBC 22的细胞体积。被成像的RBC的总的光密度除以平均最大光密度,并且针对腔室高度来校正该结果。根据另一个技术,通过将单个RBC 22划分成不同的部分来确定细胞体积:与两个表面接触的部分25(“区域I”),以及不与内表面14、18中的任何一个接触的部分27(“区域II”)。通过感测部分25(即,区域I)的OD来确定细胞上与内表面14、18接触的部分25的体积。该OD是基于每个像素(或者其他图像单位)来进行感测和定义的。如上所述,通过作为仪器放大系数的函数的每个像素的图像大小来确定由该像素表示的腔室面积。因此,与该像素相关的体积是每个像素的图像面积与已知腔室高度的乘积,这是因为腔室中被感测的点是RBC 22延伸贯穿整个腔室高度20的点。通过对与两个表面接触面积内的每个像素相关的体积求和来确定与两个表面14、18接触的RBC部分25(即,区域I)的体积。以类似的方式确定RBC 22上不与两个表面14、18接触的部分27(即,区域II)的体积。对为两个表面接触面积确定的OD值和为不与两个表面14、18接触的RBC 22的部分27(即,区域II)内的每个像素确定的OD值进行比较。由于血红蛋白摩尔消光系数(ε)是线性函数,则区域II内的每个像素的相对OD值也表示与该像素相关的RBC 22的高度;例如,如果该像素的OD是区域I中的OD的50%,则该点处的RBC 22的高度就是区域I中的RBC高度(即,腔室高度20)的50%。如上所述,基于每个像素来确定与区域II中的每个像素相关的体积并且将所确定的体积进行求和以确定RBC 22的区域II中的体积。RBC 22的体积是区域I和II的和。减小每个像素上的图像面积(即,增大分辨率)可以提高细胞体积确定的准确性。提供这些技术作为可使用技术的示例,然而本发明不限于这些技术。
用于确定细胞体积的上述技术可用于确定为获得OD而感测的特定RBC 22的体积。由于RBC 22内的血红蛋白的OD即使在一个特定样本内也会根据RBC的不同而不同,因此,使用针对特定细胞感测到的OD来确定细胞22的体积可以提高体积确定的准确性。然而,大量RBC 22不与腔室10的两个内表面14、18都接触。对于不与两个表面都接触的那些RBC 22,可以使用先前获得的与两个表面14、18都接触的RBC 22的平均最大光密度来确定细胞体积。如所述获得的平均最大光密度的准确性足以提供那些其他细胞22的准确体积。作为进一步的选择,对于本发明的那些利用等容球状试剂的实施例来说,还可以通过假定上述的RBC片段或RBC是球状的来确定与两个内表面14、18不接触的RBC片段或RBC 22的细胞体积。如果可以使用上述剖析技术(profiling technique)来确定RBC 22的周长,则可以使用该圆形面积来确定球体的大小,从而确定RBC 22的体积。
分析设备44还适于使用以下步骤来确定样本内的RBC 22的平均细胞体积(“MCV”):使用上述的同样方法,针对一些RBC重复该方法,使用这些结果来确定平均值以及该平均值的准确性或置信度的度量(例如,可接受的平均值的标准误差)。确定具有可接受的准确性度量的MCV所需要的RBC数目取决于所分析的RBC族群,该数目范围可以为从大约几百个到几千个RBC 22。用于确定已经确定了其细胞体积的RBC数目是否是为了确定MCV而可接受的族群的一种方法是迭代地确定该族群内的样本平均细胞体积并且确定这些平均值的标准误差(即,平均值的标准偏差)。一旦准确性度量(例如,标准误差)处于预定的可接受范围内,则接受该MCV。
现在参照图9和12,分析设备44还适于通过对所确定的单个RBC 22占据的体积上的血红蛋白浓度进行积分来确定RBC 22的细胞血红蛋白含量(“CH”)。对于与腔室10的两个内表面14、18都接触的那些RBC 22来说,使用如上所述的针对特定RBC 22确定的浓度(CHC)和体积(CV)来确定CH。如果基于单个RBC 22来确定CH,则可以使用为该特定RBC 22确定的CHC而不使用平均CHC(MCHC)来确定CH,从而提高精确度。对于不与腔室10的两个内表面14、18接触的那些RBC 22,通过使用平均最大光密度确定针对该特定RBC 22的浓度和体积来确定CH。
分析设备44还适于通过以下步骤来确定样本内RBC 22的平均细胞血红蛋白含量(“MCH”):使用上述的同样方法,针对一些RBC22重复该方法,使用这些结果来确定平均值以及可接受的准确性度量(例如,平均值的标准误差)。确定具有可接受的准确性度量的MCH所需要的RBC数目取决于所分析的RBC族群,该数目范围可以从大约几百个RBC 22到几千个RBC 22。一旦准确性度量(例如,标准误差)处于可接受的范围内,则接受该MCH。
用于确定CHC、MCHC、CV、MCV、CH和MCH的上述方法是本发明如何使用所述腔室和分析设备来确定基本上未稀释的血液样本的这些特征的示例。本发明不限于这些特定示例。
根据本发明的方法,如上所述,基本上未稀释的全血样本被置于腔室10中。在将样本引入腔室之前或者在将样本引入腔室时,将抗凝血剂(在一些实例中为等容球状试剂和/或凝聚剂)与样本混合。以干粉或半干粉形式(例如通过表面涂覆)添加的试剂尤其易于使用。但是,本发明不限于干粉形式的试剂,例如可以使用不会有意图地稀释样本的液态试剂。样本静止地停留在腔室中。在某些情况下(例如,非常快速的分析),可以不必添加抗凝血剂,但是在大多数情况下,添加抗凝血剂是优选的,以确保样本处于分析可接受的形式。在某些分析(例如,提供有关单个RBC的信息)中,可能优选的是不包括凝聚剂。
使用分析设备44,通过使光透射穿过样本并且检测透射光,来对静止停留在腔室10内的样本的至少一部分成像。虽然不要求对停留在腔室10内的整个样本进行成像,但是这是优选的,因为这么做通常会提供对样本(以及其所有组分)的更全面的分析并且伴随着准确性的提高,这是因为对于基本上未稀释的全血样本来说,腔室内的RBC 22和没有RBC的区域24的分布通常是不均匀的。
通过分析设备44,使用样本部分的图像来确定与腔室10的内表面12、16相接触的一组RBC 22。取决于被请求的血液样本的特征,分析设备44将确定一个或多个特征值来得出被请求的特征值。
本发明的优点是不必使样本内的所有RBC 22都与每个腔室平板接触。可以仅使用与腔室10的两个内表面14、18都接触的一些RBC
22来执行该方法。不使用较小的RBC 22和RBC片段来校准该分析,但是测量它们对红细胞压积的贡献。另外,根据本发明,可以确定样本的CHC、MCHC、CV、MCV、CH和MCH,而不需要知晓腔室10内的样本的总面积或体积。
根据本发明识别和分析的RBC 22包括网状细胞(未成熟的红细胞),该细胞在骨髓中生长成为有核细胞。在网状细胞释放到循环之前,剥去它们的核。网状细胞在失去它们的网状染色(为细胞质RNC和细胞核DNA的染色残留部分的功能)之前在血流中循环大约一天并且生长为基本上只包含血红蛋白的成熟RBC 22。血液样本内的网状细胞的相对数目是各种状态的重要指标。例如,网状细胞数目是骨髓红细胞生产活动的良好指标,这是因为它代表最近的生产。异常低的绝对网状细胞数目表示再生障碍性贫血、恶性贫血、骨髓肿瘤、红细胞生成素生产问题、各种维生素或者矿物质缺乏症(B9、B12、以及铁)等。异常高的绝对网状细胞数量可以表示由于身体对出血或溶血所引起的失血进行补充所导致的快速生产。因此,能够检测和计数网状细胞有重要的价值。根据本发明,网状细胞被识别为RBC 22,这是因为它们包含有血红蛋白,并且因为可以对它们进行染色以识别剩余的RNA和DNA。
还可以通过将样本与诸如体外活体染料(如吖啶橙、astrozoneorange等)之类的着色剂掺合来将网状细胞与其他RBC 22区分开并且对网状细胞进行计数。该染料使自然存在于网状细胞内的网状蛋白在被约470nm的紫光激发时发出荧光。通过由于所有网状细胞中包含的血红蛋白引起的并且根据样本图像来确定的RBC光密度,可以确定RBC 22在静止样本内的位置。可以通过在与体外活体染料相关的一个或多个被选波长(例如470nm)下对样本成像并且在荧光下对样本进行检查来将网状细胞与不包含网状蛋白的RBC 22和白细胞区分开。对于通过血红蛋白的存在和网状蛋白的荧光而被识别为网状细胞的那些RBC,可以使用用于确定细胞体积、细胞血红蛋白含量、以及细胞血红蛋白浓度的上述方法来确定各个网状细胞的这些特征。另外,可以确定统计信息(例如,平均值和准确性度量)。还可以通过荧光信号的强度来确定每个网状细胞内的网状细胞的相对量,该相对量与网状细胞的成熟度成反比。因此,可以确定与单个网状细胞以及网状细胞的族群有关的甚至更加具体的信息。可以使用荧光面积或荧光强度来确定单个网状细胞中的网状蛋白的相对量,并且可以作为单个网状细胞的体积的函数来计算该相对量。
使用本发明,还可以在包含或排除网状细胞的情况下确定RBC指数。例如,可以在包括和不包括网状细胞贡献的体积的两种情况下都绘制样本的MCV。在没有网状细胞的情况下确定MCV可以揭示受大尺寸网状细胞影响的族群小红细胞症。可以确定RBC和网状细胞之间的多种其他数学关系。
如上所述,根据本发明,可以为不与两个平板内表面14、18接触的RBC 22确定各个指数。可以以同样的方式分析RBC片段,从而使得能够将RBC片段与血液样本内发现的其他组分(例如,血小板、血小板凝块、白细胞片段、剩余物等)区分开。使用本发明检测RBC片段的能力尤其有用,这是因为RBC片段可以表示诸如微血管病性溶血性贫血、重度炎症、以及弥散性恶性肿瘤之类的状态。没有经过等容球状试剂处理的血液样本内的RBC片段的分析例如可以包括形态分析以确定未被改变的形态特征,例如大小确定、与圆度的偏差、周长与面积之比等。使用本发明产生的OD图像能够确定每个RBC片段的诸如圆度、椭圆度、突出度等之类的特征,这些特征有助于上述的形态分析。另外,通过测量红细胞片段的直径或周长并且用这些尺寸计算球体的体积,可以确定红细胞片段的体积。
虽然已经通过本发明的具体实施例示出和描述了本发明,但是所属领域的技术人员应当理解在不脱离本发明的思想和范围的情况下可以在形式上或细节上进行各种变化。
Claims (20)
1.一种用于确定血液样本内的红细胞血红蛋白浓度的方法,包括以下步骤:
将样本滴落在适于静止保持样本以进行分析的分析腔室中,所述腔室由第一平板的内表面和第二平板的内表面限定,其中两个平板都是透明的,并且所述腔室具有在两个平板的内表面之间延伸的已知高度或者可确定的高度L,该高度使得样本内的至少一个红细胞与两个内表面都接触;
使用预定波长的光对与两个内表面都接触的所述至少一个红细胞成像;
确定被成像的红细胞上与两个内表面接触的至少一部分的光密度OD;以及
使用所确定的光密度OD、血红蛋白对预定波长的光的摩尔消光系数ε、以及所述腔室的高度L,根据c=OD/εL来确定与内表面接触的红细胞的血红蛋白浓度c。
2.如权利要求1所述的方法,其中所述光密度是基于每个图像单位来确定的。
3.如权利要求2所述的方法,其中所述图像单位是像素。
4.如权利要求1所述的方法,进一步包括以下步骤:
确定与内表面接触的多个红细胞的血红蛋白浓度;以及
使用为所述多个红细胞中的每一个红细胞确定的血红蛋白浓度来确定平均血红蛋白浓度。
5.如权利要求4所述的方法,其中对整个样本成像。
6.如权利要求1所述的方法,进一步包括在至少一部分样本中掺合等容球状试剂的步骤。
7.如权利要求6所述的方法,其中所述等容球状试剂是两性离子去污剂。
8.如权利要求7所述的方法,其中两个平板的内表面实质上是平行的,并且在确定血红蛋白浓度之前已知腔室高度。
9.如权利要求8所述的方法,其中所述腔室高度处在大约2微米到6微米之间的范围内。
10.如权利要求1所述的方法,进一步包括以下步骤:
对多个红细胞成像,每个这种红细胞的至少一部分与内表面接触;
确定每个这种红细胞上与两个内表面接触的这部分的光密度;
使用为所述多个红细胞中的至少一些确定的光密度来确定平均最大光密度;以及
使用所确定的平均最大光密度,来确定样本内不与两个内表面都接触的一个或多个红细胞的血红蛋白浓度。
11.如权利要求1所述的方法,其中所述样本具有掺合有等容球状试剂的第一部分和没有掺合等容球状试剂的第二部分。
12.如权利要求11所述的方法,其中不与两个内表面都接触的一个或多个红细胞中的至少一些存在于样本的第二部分内,并且该方法进一步包括确定处于第二部分内的不与两个内表面都接触的一些红细胞的未改变的形态的步骤。
13.如权利要求1所述的方法,进一步包括在样本中掺合体外活体染料的步骤,该染料用于使样本内的网状细胞内的网状蛋白在被一个或多个预定波长的光激发时发出荧光。
14.如权利要求13所述的方法,进一步包括利用荧光面积或者荧光强度来确定一个或多个发出荧光的网状细胞内的网状蛋白的相对量的步骤。
15.如权利要求13所述的方法,进一步包括以下步骤:
对多个红细胞进行成像,每个这种红细胞的至少一部分与内表面接触,其中使用至少一个或多个预定波长的光执行该成像,所述至少一个或多个预定波长的光被红细胞内的血红蛋白吸收;
以用于使得网状细胞内的网状蛋白发出荧光的预定波长对所述多个红细胞进行成像;
确定每个这种红细胞上与两个内表面接触的部分的光密度;
使用所确定的光密度值,来确定所述多个红细胞中除了发出荧光的那些红细胞之外的每个红细胞的血红蛋白浓度;以及
使用为所述多个红细胞中除了发出荧光的那些红细胞之外的每个红细胞所确定的血红蛋白浓度,来确定平均血红蛋白浓度。
16.如权利要求1所述的方法,其中在一个或多个预定波长下执行成像步骤,并且血红蛋白浓度的确定利用了针对所述一个或多个预定波长的血红蛋白的摩尔消光系数。
17.如权利要求16所述的方法,其中使用分析设备执行成像步骤,该分析设备被校准以确定针对该分析设备的经过校准的血红蛋白摩尔消光系数值。
18.如权利要求1所述的方法,其中所述血液样本实质上是未稀释的。
19.如权利要求1所述的方法,其中所述血液样本是全血。
20.一种用于确定具有多个红细胞的实质上未稀释的血液样本内的红细胞血红蛋白浓度的设备,包括:
分析腔室,适于静止地保持样本以进行分析,所述腔室由第一平板的内表面和第二平板的内表面限定,其中两个平板都是透明的,并且所述腔室具有在两个平板的内表面之间延伸的已知高度或者可确定的高度L,该高度使得样本内的一个或多个红细胞将与两个内表面都接触;
成像单元,其包括照明器和析像器,该单元用于使用预定波长的光对与内表面接触的一个或多个红细胞进行成像,并且产生表示这种被成像的红细胞的图像信号;以及
可编程分析器,适于基于每个图像单位,使用所述图像信号来确定被成像的红细胞上与两个内表面接触的至少一部分的光密度OD,并且使用所确定的光密度OD、血红蛋白对预定波长的光的摩尔消光系数ε、以及所述腔室的高度L,根据c=OD/εL来确定与内表面接触的红细胞的血红蛋白浓度c。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410023739.4A CN103823051B (zh) | 2008-03-21 | 2009-03-20 | 利用红细胞内含有的血红蛋白的本征色素沉着来确定血样的红细胞指数的方法及设备 |
Applications Claiming Priority (9)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US3854508P | 2008-03-21 | 2008-03-21 | |
US3855708P | 2008-03-21 | 2008-03-21 | |
US3857408P | 2008-03-21 | 2008-03-21 | |
US3855908P | 2008-03-21 | 2008-03-21 | |
US61/038,545 | 2008-03-21 | ||
US61/038,574 | 2008-03-21 | ||
US61/038,557 | 2008-03-21 | ||
US61/038,559 | 2008-03-21 | ||
PCT/US2009/037815 WO2009117664A2 (en) | 2008-03-21 | 2009-03-20 | Method and apparatus for determining red blood cell indices of a blood sample utilizing the intrinsic pigmentation of hemoglobin contained within the red blood cells |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201410023739.4A Division CN103823051B (zh) | 2008-03-21 | 2009-03-20 | 利用红细胞内含有的血红蛋白的本征色素沉着来确定血样的红细胞指数的方法及设备 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN102027368A CN102027368A (zh) | 2011-04-20 |
CN102027368B true CN102027368B (zh) | 2014-02-26 |
Family
ID=40909895
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201410023739.4A Active CN103823051B (zh) | 2008-03-21 | 2009-03-20 | 利用红细胞内含有的血红蛋白的本征色素沉着来确定血样的红细胞指数的方法及设备 |
CN200980116926.4A Active CN102027368B (zh) | 2008-03-21 | 2009-03-20 | 利用红细胞内含有的血红蛋白的本征色素沉着来确定血样的红细胞指数的方法及设备 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201410023739.4A Active CN103823051B (zh) | 2008-03-21 | 2009-03-20 | 利用红细胞内含有的血红蛋白的本征色素沉着来确定血样的红细胞指数的方法及设备 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US7903241B2 (zh) |
EP (2) | EP2554987B1 (zh) |
JP (3) | JP5539309B2 (zh) |
CN (2) | CN103823051B (zh) |
CA (1) | CA2718995C (zh) |
ES (2) | ES2398488T3 (zh) |
WO (1) | WO2009117664A2 (zh) |
Families Citing this family (129)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7850916B2 (en) | 2004-04-07 | 2010-12-14 | Abbott Laboratories | Disposable chamber for analyzing biologic fluids |
US7731901B2 (en) | 2005-10-19 | 2010-06-08 | Abbott Laboratories | Apparatus and method for performing counts within a biologic fluid sample |
US7738094B2 (en) * | 2007-01-26 | 2010-06-15 | Becton, Dickinson And Company | Method, system, and compositions for cell counting and analysis |
JP5539309B2 (ja) * | 2008-03-21 | 2014-07-02 | アボット ポイント オブ ケア インコーポレイテッド | 赤血球中に含まれるヘモグロビンの固有色素を利用して血液試料の赤血球指数を決定するための方法及び装置 |
EP2269038B1 (en) | 2008-03-21 | 2016-07-27 | Abbott Point Of Care, Inc. | Method for analyzing individual cells or particulates in blood using fluorescence and absorption of a colorant |
ES2392380T3 (es) | 2008-03-21 | 2012-12-10 | Abbott Point Of Care, Inc. | Procedimiento y aparato para determinar el hematocrito de una muestra de sangre utilizando la pigmentación intrínseca de la hemoglobina contenida en los glóbulos rojos |
EP2271937B1 (en) * | 2008-03-21 | 2016-01-13 | Abbott Point Of Care, Inc. | Method and apparatus for detecting and counting platelets individually and in aggregate clumps |
US9602777B2 (en) | 2008-04-25 | 2017-03-21 | Roche Diagnostics Hematology, Inc. | Systems and methods for analyzing body fluids |
JP2012515931A (ja) * | 2008-04-25 | 2012-07-12 | ウィンケルマン、ジェイムズ | 全血球数及び白血球百分率を決定するシステム及び方法 |
US8330957B2 (en) * | 2009-06-29 | 2012-12-11 | Hager Enviromental and Atmospheric Technologies, LLC | Device and method for quantification of gases in plumes by remote sensing |
US8134711B2 (en) * | 2009-06-29 | 2012-03-13 | Hager J Stewart | Device for remote sensing of vehicle emission |
US20140152801A1 (en) | 2009-10-28 | 2014-06-05 | Alentic Microscience Inc. | Detecting and Using Light Representative of a Sample |
WO2011053631A1 (en) | 2009-10-28 | 2011-05-05 | Alentic Microscience Inc. | Microscopy imaging |
US9075225B2 (en) | 2009-10-28 | 2015-07-07 | Alentic Microscience Inc. | Microscopy imaging |
EP2512647A2 (en) | 2009-12-18 | 2012-10-24 | Abbott Point Of Care, Inc. | Biologic fluid analysis cartridge |
US8748186B2 (en) * | 2009-12-22 | 2014-06-10 | Abbott Laboratories | Method for performing a blood count and determining the morphology of a blood smear |
EP2519820B1 (en) * | 2009-12-31 | 2013-11-06 | Abbott Point Of Care, Inc. | Method and apparatus for determining mean cell volume of red blood cells |
US8472693B2 (en) * | 2010-03-18 | 2013-06-25 | Abbott Point Of Care, Inc. | Method for determining at least one hemoglobin related parameter of a whole blood sample |
EP2553471A1 (en) | 2010-03-31 | 2013-02-06 | Abbott Point Of Care, Inc. | Method and apparatus for selectively admixing reagents in a substantially undiluted biologic fluid sample analysis |
CA2804006C (en) * | 2010-06-29 | 2016-03-29 | Hager Environmental And Atmospheric Technologies, Llc | Device and method for quantification of gases in plumes by remote sensing |
US8481282B2 (en) | 2010-07-23 | 2013-07-09 | Abbott Point Of Care, Inc. | Method for detecting the presence of anisotropic crystals in undiluted whole blood |
ES2905560T3 (es) | 2010-08-05 | 2022-04-11 | Abbott Point Of Care Inc | Método y aparato para análisis automáticos de muestras de sangre completa a partir de imágenes microscópicas |
US9938557B2 (en) | 2010-09-16 | 2018-04-10 | The General Hospital Corporation | Red blood cell dynamics for administering treatment for iron-deficiency anemia |
US9522396B2 (en) | 2010-12-29 | 2016-12-20 | S.D. Sight Diagnostics Ltd. | Apparatus and method for automatic detection of pathogens |
WO2012092593A1 (en) | 2010-12-30 | 2012-07-05 | Abbott Point Of Care, Inc. | Biologic fluid analysis cartridge with sample handling portion and analysis chamber portion |
US8339586B2 (en) * | 2011-04-15 | 2012-12-25 | Constitution Medical, Inc. | Measuring volume and constituents of cells |
US10426356B2 (en) * | 2011-07-09 | 2019-10-01 | Gauss Surgical, Inc. | Method for estimating a quantity of a blood component in a fluid receiver and corresponding error |
US9652655B2 (en) | 2011-07-09 | 2017-05-16 | Gauss Surgical, Inc. | System and method for estimating extracorporeal blood volume in a physical sample |
US9870625B2 (en) * | 2011-07-09 | 2018-01-16 | Gauss Surgical, Inc. | Method for estimating a quantity of a blood component in a fluid receiver and corresponding error |
US9646375B2 (en) | 2011-07-09 | 2017-05-09 | Gauss Surgical, Inc. | Method for setting a blood transfusion parameter |
CN103827658B (zh) * | 2011-07-22 | 2016-04-13 | 罗氏血液诊断股份有限公司 | 识别和测量网状细胞 |
US9459196B2 (en) | 2011-07-22 | 2016-10-04 | Roche Diagnostics Hematology, Inc. | Blood analyzer calibration and assessment |
EP2748618A1 (en) * | 2011-08-24 | 2014-07-02 | Abbott Point of Care Inc. | Biologic fluid sample analysis cartridge |
US9046473B2 (en) * | 2011-09-28 | 2015-06-02 | Abbott Point Of Care, Inc. | Method and apparatus for detecting the presence of intraerythrocytic parasites |
CN103917870B (zh) | 2011-11-16 | 2016-04-13 | 贝克顿·迪金森公司 | 用于检测样品中的分析物的方法和*** |
CN104169719B (zh) | 2011-12-29 | 2017-03-08 | 思迪赛特诊断有限公司 | 用于检测生物样品中病原体的方法和*** |
EP2797695A1 (en) * | 2011-12-30 | 2014-11-05 | Abbott Point Of Care, Inc. | Method for rapid imaging of biologic fluid samples |
JP2013217673A (ja) * | 2012-04-04 | 2013-10-24 | Sharp Corp | 計数チップ、計数方法、および計数装置 |
EP4033405B1 (en) | 2012-05-14 | 2024-06-12 | Gauss Surgical, Inc. | Methods for managing blood loss of a patient |
JP6151771B2 (ja) | 2012-05-14 | 2017-06-21 | ガウス サージカル, インコーポレイテッドGauss Surgical, Inc. | 流体キャニスタ中の血液成分量を測定するシステム及び方法 |
US20140119633A1 (en) * | 2012-10-30 | 2014-05-01 | Prodo Laboratories | Systems, processes, methods and machines for transforming image data into sizing and volume measurements for tissue |
US20190114769A1 (en) * | 2012-10-30 | 2019-04-18 | Prodo Laboratories | Systems, Processes, Methods and Machines for Transforming Image Data Into Sizing and Volume Measurements for Tissue |
WO2014071399A1 (en) | 2012-11-05 | 2014-05-08 | Gauss Surgical | Method for triggering blood salvage |
ES2692407T3 (es) | 2013-01-11 | 2018-12-03 | Becton, Dickinson And Company | Dispositivo de ensayo de punto de cuidado de bajo coste |
US10502666B2 (en) | 2013-02-06 | 2019-12-10 | Alentic Microscience Inc. | Sample processing improvements for quantitative microscopy |
WO2014183049A1 (en) | 2013-05-09 | 2014-11-13 | Abbott Point Of Care, Inc. | Method and apparatus for determining hemoglobin based parameters in an unlysed blood sample |
EP2999988A4 (en) | 2013-05-23 | 2017-01-11 | S.D. Sight Diagnostics Ltd. | Method and system for imaging a cell sample |
JP2016531282A (ja) | 2013-06-26 | 2016-10-06 | アレンティック マイクロサイエンス インコーポレイテッド | 顕微鏡法に関するサンプル処理の改善 |
IL227276A0 (en) | 2013-07-01 | 2014-03-06 | Parasight Ltd | A method and system for obtaining a monolayer of cells, for use specifically for diagnosis |
US20150030215A1 (en) | 2013-07-26 | 2015-01-29 | Abbott Point Of Care, Inc. | Method and apparatus for producing an image of undiluted whole blood sample having wright stain coloration |
WO2015029032A1 (en) | 2013-08-26 | 2015-03-05 | Parasight Ltd. | Digital microscopy systems, methods and computer program products |
JP6632525B2 (ja) | 2013-11-06 | 2020-01-22 | ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニーBecton, Dickinson And Company | マイクロ流体デバイスならびにその製造方法および使用方法 |
WO2015073384A1 (en) | 2013-11-13 | 2015-05-21 | Becton, Dickinson And Company | Microimager analysis system comprising optics and methods of use thereof |
JP6652499B2 (ja) | 2014-04-15 | 2020-02-26 | ガウス サージカル, インコーポレイテッドGauss Surgical, Inc. | 流体キャニスター内の血液成分の量を推定するための方法 |
WO2015160997A1 (en) | 2014-04-15 | 2015-10-22 | Gauss Surgical, Inc. | Method for estimating a quantity of a blood component in a fluid canister |
CN107077732B (zh) | 2014-08-27 | 2020-11-24 | 思迪赛特诊断有限公司 | 用于对数字显微镜计算聚焦变化的***及方法 |
EP4261523A3 (en) | 2014-10-14 | 2023-12-06 | Becton, Dickinson and Company | Blood sample management using open cell foam |
EP3094252B1 (en) | 2014-10-14 | 2021-08-25 | Becton, Dickinson and Company | Blood sample management using open cell foam |
US10625259B1 (en) | 2014-11-26 | 2020-04-21 | Medica Corporation | Automated microscopic cell analysis |
US11478789B2 (en) | 2014-11-26 | 2022-10-25 | Medica Corporation | Automated microscopic cell analysis |
US20170328924A1 (en) | 2014-11-26 | 2017-11-16 | Ronald Jones | Automated microscopic cell analysis |
US12005441B1 (en) | 2014-11-26 | 2024-06-11 | Medica Corporation | Automated microscopic cell analysis |
CA2954658C (en) | 2015-03-10 | 2019-06-11 | Becton, Dickinson And Company | Biological fluid micro-sample management device |
US10555675B2 (en) | 2015-05-15 | 2020-02-11 | Gauss Surgical, Inc. | Method for projecting blood loss of a patient during a surgery |
US11504037B2 (en) | 2015-05-15 | 2022-11-22 | Gauss Surgical, Inc. | Systems and methods for assessing fluids from a patient |
US10789710B2 (en) | 2015-05-15 | 2020-09-29 | Gauss Surgical, Inc. | Methods and systems for characterizing fluids from a patient |
CN113376364A (zh) | 2015-08-10 | 2021-09-10 | Essenlix 公司 | 步骤简化、小样品、快速、易使用的生物/化学分析装置和方法 |
JP2018536142A (ja) | 2015-09-01 | 2018-12-06 | ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニーBecton, Dickinson And Company | 試料の相を分離するためのデプスフィルトレーションデバイス |
AU2016323062A1 (en) | 2015-09-14 | 2018-04-12 | Essenlix Corp. | Device and system for analyzing a sample, particularly blood, as well as methods of using the same |
AU2016323072B2 (en) | 2015-09-14 | 2019-09-19 | Essenlix Corporation | Device and system for collecting and analyzing vapor condensate, particularly exhaled breath condensate, as well as method of using the same |
EP3859425B1 (en) | 2015-09-17 | 2024-04-17 | S.D. Sight Diagnostics Ltd. | Methods and apparatus for detecting an entity in a bodily sample |
JP6523472B2 (ja) * | 2015-09-29 | 2019-06-05 | 富士フイルム株式会社 | 標的細胞の識別方法、及び標的細胞識別装置 |
WO2017074815A1 (en) | 2015-10-26 | 2017-05-04 | Idexx Laboratories, Inc. | Hematology test slide |
US10955423B2 (en) | 2015-12-15 | 2021-03-23 | The General Hospital Corporation | Methods of estimating blood glucose and related systems |
WO2017112939A1 (en) | 2015-12-23 | 2017-06-29 | Gauss Surgical, Inc. | Method for estimating blood component quantities in surgical textiles |
WO2017112913A1 (en) | 2015-12-23 | 2017-06-29 | Gauss Surgical, Inc. | System and method for estimating an amount of a blood component in a volume of fluid |
US10782306B2 (en) | 2015-12-24 | 2020-09-22 | Koninklijke Philips N.V. | Method and a system for determinations of cell suspensions |
US10928310B2 (en) | 2016-01-28 | 2021-02-23 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Methods and apparatus for imaging a specimen container and/or specimen using multiple exposures |
JP6791972B2 (ja) | 2016-01-28 | 2020-11-25 | シーメンス・ヘルスケア・ダイアグノスティックス・インコーポレーテッドSiemens Healthcare Diagnostics Inc. | 試料中のインターフェレントを検出するための方法と装置 |
CA3018536A1 (en) | 2016-03-30 | 2017-10-05 | S.D. Sight Diagnostics Ltd | Distinguishing between blood sample components |
WO2017177192A1 (en) | 2016-04-07 | 2017-10-12 | The General Hospital Corporation | White blood cell population dynamics |
AU2017263807B2 (en) | 2016-05-11 | 2023-02-02 | S.D. Sight Diagnostics Ltd | Performing optical measurements on a sample |
EP3455610B1 (en) | 2016-05-11 | 2023-01-04 | S.D. Sight Diagnostics Ltd. | Sample carrier for optical measurements |
EP3538839B1 (en) | 2016-11-14 | 2021-09-29 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Methods, apparatus, and quality check modules for detecting hemolysis, icterus, lipemia, or normality of a specimen |
JP6667052B1 (ja) | 2016-12-21 | 2020-03-18 | エッセンリックス コーポレーション | 試料を認証するためのデバイスおよび方法ならびにその使用 |
WO2018125812A1 (en) | 2017-01-02 | 2018-07-05 | Gauss Surgical, Inc. | Tracking surgical items with prediction of duplicate imaging of items |
US11229368B2 (en) | 2017-01-13 | 2022-01-25 | Gauss Surgical, Inc. | Fluid loss estimation based on weight of medical items |
EP3579981A4 (en) | 2017-02-07 | 2021-03-31 | Essenlix Corporation | COMPRESSED OPEN FLOW TEST AND USE |
WO2018148470A1 (en) | 2017-02-08 | 2018-08-16 | Essenlix Corporation | Sample collection and handling for delayed analysis |
US11927560B2 (en) | 2017-02-08 | 2024-03-12 | Essenlix Corporation | Bio/chemical material extraction and assay |
CA3053120A1 (en) | 2017-02-09 | 2018-08-16 | Essenlix Corporation | Colorimetric assays |
US11940382B2 (en) | 2017-02-09 | 2024-03-26 | Essenlix Corporation | Assay with amplification |
EP3580565B1 (en) | 2017-02-09 | 2024-05-29 | Essenlix Corporation | Assay using different spacing heights |
US10966634B2 (en) | 2017-02-16 | 2021-04-06 | Essenlix Corporation | Assay with textured surface |
CN110573883B (zh) | 2017-04-13 | 2023-05-30 | 美国西门子医学诊断股份有限公司 | 用于在样本表征期间确定标签计数的方法和装置 |
EP3610270B1 (en) | 2017-04-13 | 2024-05-29 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Methods and apparatus for label compensation during specimen characterization |
EP3432194A1 (en) * | 2017-07-16 | 2019-01-23 | IMEC vzw | Cell recognition |
EP3655757A4 (en) | 2017-07-19 | 2020-08-12 | Siemens Healthcare Diagnostics, Inc. | METHODS AND APPARATUS FOR SAMPLE CHARACTERIZATION USING HYPERSPECTRAL IMAGING |
CN112689758A (zh) | 2017-08-01 | 2021-04-20 | Essenlix公司 | 检查药物对微生物影响的装置和方法 |
CN111492222A (zh) | 2017-08-01 | 2020-08-04 | Essenlix公司 | 样品收集、保持和测定 |
US11280706B2 (en) | 2017-08-01 | 2022-03-22 | Essenlix Corporation | Dilution calibration |
CN110892247B (zh) | 2017-08-17 | 2023-08-25 | 雅培医护站股份有限公司 | 用于执行光学和电化学测定的设备、***和方法 |
EP3462170B1 (en) * | 2017-09-29 | 2020-09-16 | Siemens Healthcare GmbH | Specific malaria detection with digital optical microscopy |
US11393561B2 (en) | 2017-10-13 | 2022-07-19 | Essenlix Corporation | Devices and methods for authenticating a medical test and use of the same |
US11609224B2 (en) | 2017-10-26 | 2023-03-21 | Essenlix Corporation | Devices and methods for white blood cell analyses |
US10807095B2 (en) | 2017-10-26 | 2020-10-20 | Essenlix Corporation | Making and tracking assay card |
CN111970970A (zh) * | 2017-10-26 | 2020-11-20 | Essenlix公司 | 血小板的快速测量 |
US11237113B2 (en) | 2017-10-26 | 2022-02-01 | Essenlix Corporation | Rapid pH measurement |
EP3710810B1 (en) | 2017-11-14 | 2023-09-06 | S.D. Sight Diagnostics Ltd. | Sample carrier for optical measurements |
US11047845B1 (en) | 2017-11-15 | 2021-06-29 | Medica Corporation | Control material and methods for cell analyzers |
WO2019118652A1 (en) | 2017-12-12 | 2019-06-20 | Essenlix Corporation | Sample manipulation and assay with rapid temperature change |
CN112534259A (zh) | 2017-12-14 | 2021-03-19 | Essenlix公司 | 监测毛发的装置,***和方法 |
US11156606B2 (en) | 2018-01-11 | 2021-10-26 | Essenlix Corporation | Homogeneous assay (II) |
GB2573126B (en) * | 2018-04-24 | 2022-11-09 | Entia Ltd | A method and apparatus for determining haemoglobin concentration |
US11885952B2 (en) | 2018-07-30 | 2024-01-30 | Essenlix Corporation | Optics, device, and system for assaying and imaging |
USD897555S1 (en) | 2018-11-15 | 2020-09-29 | Essenlix Corporation | Assay card |
USD898224S1 (en) | 2018-11-15 | 2020-10-06 | Essenlix Corporation | Assay plate with sample landing mark |
USD898221S1 (en) | 2018-11-15 | 2020-10-06 | Essenlix Corporation | Assay plate |
USD898939S1 (en) | 2018-11-20 | 2020-10-13 | Essenlix Corporation | Assay plate with sample landing mark |
USD893469S1 (en) | 2018-11-21 | 2020-08-18 | Essenlix Corporation | Phone holder |
USD910202S1 (en) | 2018-11-21 | 2021-02-09 | Essenlix Corporation | Assay plate with sample landing mark |
USD910203S1 (en) | 2018-11-27 | 2021-02-09 | Essenlix Corporation | Assay plate with sample landing mark |
USD893470S1 (en) | 2018-11-28 | 2020-08-18 | Essenlix Corporation | Phone holder |
USD912842S1 (en) | 2018-11-29 | 2021-03-09 | Essenlix Corporation | Assay plate |
USD898222S1 (en) | 2019-01-18 | 2020-10-06 | Essenlix Corporation | Assay card |
USD1003453S1 (en) | 2019-05-14 | 2023-10-31 | Essenlix Corporation | Assay card hinge |
CN112113955B (zh) * | 2020-09-15 | 2022-03-18 | 四川行之智汇知识产权运营有限公司 | 血红蛋白检测卡 |
CN114778418B (zh) * | 2022-06-17 | 2022-09-27 | 深圳安侣医学科技有限公司 | 基于显微放大数字图像的血红蛋白分析方法及*** |
CN114813522B (zh) * | 2022-06-29 | 2022-10-21 | 深圳安侣医学科技有限公司 | 基于显微放大数字图像的血液细胞分析方法及*** |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0545313A1 (en) * | 1991-12-05 | 1993-06-09 | Bayer Corporation | Reagent compositions and their use in shering cells |
CN1292685A (zh) * | 1998-03-07 | 2001-04-25 | 斯蒂芬·C·沃德罗 | 静态抗凝全血样本分析 |
CN1441899A (zh) * | 2000-07-10 | 2003-09-10 | 因诺瓦蒂斯股份公司 | 检查培养基内细胞的方法 |
CN1957254A (zh) * | 2004-04-07 | 2007-05-02 | 沃德劳有限合伙公司 | 用于分析生物流体的可置换腔 |
Family Cites Families (66)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US612718A (en) * | 1898-10-18 | Rotary clothesj hat | ||
US3855908A (en) | 1972-06-06 | 1974-12-24 | Rissen Gmbh Maschf | Device for the manufacture of paper cups |
US3855708A (en) | 1972-10-16 | 1974-12-24 | Candid Logic Inc | Self-actuated digital location sensor |
US3854508A (en) | 1973-04-13 | 1974-12-17 | Atomic Energy Commission | Automated sample-reagent loader |
US3857408A (en) | 1973-10-23 | 1974-12-31 | Acf Ind Inc | Seat and sealing means for clapper-type check valve |
US4023716A (en) | 1976-04-20 | 1977-05-17 | Justin Joel Shapiro | Micro-dispensing liquid pipet |
DE2732291A1 (de) | 1977-07-16 | 1979-02-01 | Bayer Ag | Verfahren zur herstellung von 1-amino-8-naphthol-3,6-disulfonsaeure (h-saeure) |
US4197088A (en) | 1977-09-23 | 1980-04-08 | Akro-Medic Engineering, Inc. | Method for qualitative and quantitative determination of immunological reactions |
US4615878A (en) | 1980-03-12 | 1986-10-07 | Lawrence Kass | Metachromatic dye sorption means for differential determination of sub-populations of lymphocytes |
US4453266A (en) * | 1980-04-21 | 1984-06-05 | Rush-Presbyterian-St. Luke's Medical Center | Method and apparatus for measuring mean cell volume of red blood cells |
US4487081A (en) | 1982-08-27 | 1984-12-11 | Donald H. De Vaughn | Pipetting techniques using replaceable tips |
JPS60128350A (ja) * | 1983-12-15 | 1985-07-09 | Ngk Spark Plug Co Ltd | 空燃比検知方法および装置 |
JPH0743381B2 (ja) | 1988-10-28 | 1995-05-15 | 株式会社日立製作所 | 光音響免疫分析方法及び装置 |
US5012818A (en) | 1989-05-04 | 1991-05-07 | Joishy Suresh K | Two in one bone marrow surgical needle |
US5068181A (en) | 1989-12-01 | 1991-11-26 | Akzo N.V. | Method of monitoring reagent delivery in a scanning spectrophotometer |
GB2254414A (en) | 1991-03-21 | 1992-10-07 | Univ London | Volume measurement of microbial organisms. |
US5192511A (en) | 1991-05-31 | 1993-03-09 | Tri-Continent Scientific, Inc. | Pipette tip and piston |
US5360739A (en) * | 1991-12-05 | 1994-11-01 | Miles Inc. | Methods for the identification and characterization of reticulocytes in whole blood |
US5447838A (en) | 1992-08-05 | 1995-09-05 | Hybritech Incorporated | Protein-dye conjugate for confirmation of correct dilution of calibrators |
US5610027A (en) * | 1992-10-30 | 1997-03-11 | Micro-Med, Inc. | Microphoto lysis-anlaysis process to measure cell characteristics |
US5594808A (en) | 1993-06-11 | 1997-01-14 | Ortho Diagnostic Systems Inc. | Method and system for classifying agglutination reactions |
DE4330562A1 (de) | 1993-09-09 | 1995-03-16 | Behringwerke Ag | Kunststoffpipette |
US5454268A (en) | 1993-11-15 | 1995-10-03 | Kim; Young S. | Double-plunger liquid displacement syringe pipet |
GB9326238D0 (en) | 1993-12-23 | 1994-02-23 | Sinvent As | Method of assay |
US5460782A (en) | 1994-07-18 | 1995-10-24 | Safe-Tec Clinical Products, Inc. | Automatic filling micropipette with dispensing means |
US5891734A (en) | 1994-08-01 | 1999-04-06 | Abbott Laboratories | Method for performing automated analysis |
US5731212A (en) * | 1994-12-20 | 1998-03-24 | International Technidyne Corporation | Test apparatus and method for testing cuvette accommodated samples |
US6312607B1 (en) * | 1995-06-07 | 2001-11-06 | Baxter International Inc. | Blood processing systems and methods which optically monitor incremental platelet volumes in a plasma constituent |
CA2185292A1 (en) | 1995-09-15 | 1997-03-16 | James C. Smith | Positive displacement liquid drawing and dispensing apparatus and method |
JPH0989886A (ja) * | 1995-09-27 | 1997-04-04 | Toyobo Co Ltd | 小核試験装置 |
US5686309A (en) * | 1996-01-19 | 1997-11-11 | Coulter International Corp. | Method and apparatus for determination of hemoglobin content of individual red blood cells |
JPH10260181A (ja) * | 1997-03-17 | 1998-09-29 | Toa Medical Electronics Co Ltd | 赤血球測定方法 |
CN1086204C (zh) * | 1997-04-11 | 2002-06-12 | 夏志坚 | 生物组织原位三维测量细胞化学成份含量的方法 |
US20020028471A1 (en) * | 1998-02-20 | 2002-03-07 | Oberhardt Bruce J. | Cell analysis methods and apparatus |
US6251615B1 (en) * | 1998-02-20 | 2001-06-26 | Cell Analytics, Inc. | Cell analysis methods |
US6752965B2 (en) | 1998-03-06 | 2004-06-22 | Abner Levy | Self resealing elastomeric closure |
US6929953B1 (en) | 1998-03-07 | 2005-08-16 | Robert A. Levine | Apparatus for analyzing biologic fluids |
US6723290B1 (en) | 1998-03-07 | 2004-04-20 | Levine Robert A | Container for holding biologic fluid for analysis |
US6127184A (en) | 1998-03-07 | 2000-10-03 | Robert A. Levine | Calibration of a whole blood sample analyzer |
DE69910006T2 (de) * | 1998-05-13 | 2004-05-27 | Bayer Corp. | Durchflussküvette zur spektroskopischen untersuchung einer probe |
GB9903555D0 (en) | 1999-02-16 | 1999-04-07 | The Technology Partnership Plc | Chemical and biological assay method and apparatus |
US6589759B1 (en) | 1999-03-30 | 2003-07-08 | Trustees Of Boston University | Compositions and methods for producing platelets and/or proplatelets from megakaryocytes |
DE10011235C2 (de) | 2000-03-08 | 2002-08-08 | Max Planck Gesellschaft | Ausstechvorrichtung zur Probenaufnahme und Verfahren zur Probenaufnahme |
WO2002023154A2 (en) | 2000-09-13 | 2002-03-21 | Biometric Imaging, Inc. | Aggregation-based assays |
US20040132675A1 (en) * | 2002-02-08 | 2004-07-08 | Calvin Kuo | Method for treating cancer and increasing hematocrit levels |
EP1239284A1 (en) | 2001-03-08 | 2002-09-11 | The Technology Partnership Public Limited Company | Non-separation assay method and system using opaque particles |
US6630990B2 (en) * | 2001-06-05 | 2003-10-07 | Abbott Laboratories | Optical method and apparatus for red blood cell differentiation on a cell-by-cell basis, and simultaneous analysis of white blood cell differentiation |
EP1365240B1 (en) | 2002-05-22 | 2006-09-13 | Sysmex Corporation | Immunoassay methods, immunoassay apparatuses, and reagents for immunoassays |
US20030224531A1 (en) * | 2002-05-29 | 2003-12-04 | Brennen Reid A. | Microplate with an integrated microfluidic system for parallel processing minute volumes of fluids |
DE10240742A1 (de) | 2002-08-31 | 2004-03-18 | Weber, Jörg | Vorrichtung und Verfahren zur Aufnahme und Abgabe von Untersuchungsmedium |
US20040165090A1 (en) | 2003-02-13 | 2004-08-26 | Alex Ning | Auto-focus (AF) lens and process |
DE60300218T2 (de) * | 2003-03-05 | 2005-12-29 | Milestone S.R.L. | Fixierungslösung |
WO2005017184A2 (en) | 2003-06-26 | 2005-02-24 | Litron Laboratories, Ltd. | Method for the enumeration of micronucleated erythrocyte populations while distinguishing platelets and/or platelet-associated aggregates |
JP2005024472A (ja) | 2003-07-04 | 2005-01-27 | Sysmex Corp | 幼若血小板測定装置 |
US7598093B2 (en) | 2003-07-23 | 2009-10-06 | Ctl Analyzers, Llc | Nanoparticle and microparticle based detection of cellular products |
EP1668595A4 (en) | 2003-09-23 | 2007-01-03 | Iatia Imaging Pty Ltd | METHOD AND DEVICE FOR DETERMINING THE SURFACE OR CONFLUENCE OF A SAMPLE |
US9176121B2 (en) * | 2004-02-13 | 2015-11-03 | Roche Diagnostics Hematology, Inc. | Identification of blood elements using inverted microscopy |
US20050261970A1 (en) * | 2004-05-21 | 2005-11-24 | Wayport, Inc. | Method for providing wireless services |
JP2006071475A (ja) * | 2004-09-02 | 2006-03-16 | Hakuju Inst For Health Science Co Ltd | 血液観察用試料台、及び血液細胞の分離定量評価方法 |
CN100541677C (zh) | 2005-01-20 | 2009-09-16 | 卢米尼克斯股份有限公司 | 用于基于荧光应用的磁性微球 |
ITUD20050118A1 (it) * | 2005-07-13 | 2007-01-14 | Sire Analytical Systems Srl | Procedimento per la taratura di macchine per l' analisi di parametri del sangue connessi alla densita' del sangue, quali la velocita' di eritrosedimentazione e/o di aggregazione dei globuli rossi |
US7731901B2 (en) * | 2005-10-19 | 2010-06-08 | Abbott Laboratories | Apparatus and method for performing counts within a biologic fluid sample |
US7998747B2 (en) | 2006-09-15 | 2011-08-16 | Artel, Inc. | Quantitative dual-dye photometric method for determining dilution impact |
JP5539309B2 (ja) * | 2008-03-21 | 2014-07-02 | アボット ポイント オブ ケア インコーポレイテッド | 赤血球中に含まれるヘモグロビンの固有色素を利用して血液試料の赤血球指数を決定するための方法及び装置 |
US8472693B2 (en) * | 2010-03-18 | 2013-06-25 | Abbott Point Of Care, Inc. | Method for determining at least one hemoglobin related parameter of a whole blood sample |
US10549494B2 (en) | 2016-04-20 | 2020-02-04 | Himax Technologies Limited | Imprinting apparatus and imprinting method |
-
2009
- 2009-03-20 JP JP2011500981A patent/JP5539309B2/ja active Active
- 2009-03-20 EP EP12190944.4A patent/EP2554987B1/en active Active
- 2009-03-20 CN CN201410023739.4A patent/CN103823051B/zh active Active
- 2009-03-20 CA CA2718995A patent/CA2718995C/en active Active
- 2009-03-20 EP EP09721297A patent/EP2265945B1/en active Active
- 2009-03-20 ES ES09721297T patent/ES2398488T3/es active Active
- 2009-03-20 WO PCT/US2009/037815 patent/WO2009117664A2/en active Application Filing
- 2009-03-20 ES ES12190944.4T patent/ES2464572T3/es active Active
- 2009-03-20 CN CN200980116926.4A patent/CN102027368B/zh active Active
- 2009-03-20 US US12/408,357 patent/US7903241B2/en active Active
-
2010
- 2010-11-15 US US12/946,503 patent/US7929122B2/en active Active
-
2011
- 2011-03-03 US US13/039,453 patent/US8310658B2/en active Active
-
2012
- 2012-11-09 US US13/673,644 patent/US8885154B2/en active Active
-
2013
- 2013-10-02 JP JP2013207327A patent/JP5711800B2/ja active Active
- 2013-10-02 JP JP2013207328A patent/JP5711801B2/ja active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0545313A1 (en) * | 1991-12-05 | 1993-06-09 | Bayer Corporation | Reagent compositions and their use in shering cells |
CN1292685A (zh) * | 1998-03-07 | 2001-04-25 | 斯蒂芬·C·沃德罗 | 静态抗凝全血样本分析 |
CN1441899A (zh) * | 2000-07-10 | 2003-09-10 | 因诺瓦蒂斯股份公司 | 检查培养基内细胞的方法 |
CN1957254A (zh) * | 2004-04-07 | 2007-05-02 | 沃德劳有限合伙公司 | 用于分析生物流体的可置换腔 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2011515682A (ja) | 2011-05-19 |
CN102027368A (zh) | 2011-04-20 |
JP2014041140A (ja) | 2014-03-06 |
CN103823051B (zh) | 2015-11-18 |
JP5711800B2 (ja) | 2015-05-07 |
US20090238438A1 (en) | 2009-09-24 |
US20130170729A1 (en) | 2013-07-04 |
JP5711801B2 (ja) | 2015-05-07 |
JP2014041139A (ja) | 2014-03-06 |
EP2554987A1 (en) | 2013-02-06 |
CA2718995C (en) | 2014-08-19 |
WO2009117664A3 (en) | 2009-12-17 |
ES2464572T3 (es) | 2014-06-03 |
CN103823051A (zh) | 2014-05-28 |
EP2265945B1 (en) | 2012-11-07 |
US20110059481A1 (en) | 2011-03-10 |
EP2554987B1 (en) | 2014-04-16 |
WO2009117664A2 (en) | 2009-09-24 |
CA2718995A1 (en) | 2009-09-24 |
ES2398488T3 (es) | 2013-03-19 |
US8885154B2 (en) | 2014-11-11 |
EP2265945A2 (en) | 2010-12-29 |
US7903241B2 (en) | 2011-03-08 |
US8310658B2 (en) | 2012-11-13 |
JP5539309B2 (ja) | 2014-07-02 |
US7929122B2 (en) | 2011-04-19 |
US20110149061A1 (en) | 2011-06-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102027368B (zh) | 利用红细胞内含有的血红蛋白的本征色素沉着来确定血样的红细胞指数的方法及设备 | |
CN102016578B (zh) | 利用红细胞内含有的血红蛋白的本征色素沉着来确定血样的血细胞比容的方法及设备 | |
CN102084241B (zh) | 使用荧光淬灭和/或漂白分析个体细胞或微粒的方法及设备 | |
US8472693B2 (en) | Method for determining at least one hemoglobin related parameter of a whole blood sample | |
US9588102B2 (en) | Method and apparatus for determining white blood cell counts | |
JP4184258B2 (ja) | 光学式赤血球および白血球の弁別 | |
CN102027369A (zh) | 单独和在聚合凝块中检测和计数血小板的方法及设备 | |
JP5950423B2 (ja) | 幼若顆粒球(earlygranulatedcell)(EGC)の同定および計数 | |
EP2889379B1 (en) | Method of detecting filarial larvae in blood, and blood analyzer |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant |