CN102015667A

CN102015667A - 作为用于治疗阿尔茨海默氏病的bace抑制剂的氨基二氢噻嗪衍生物

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Publication number: CN102015667A
Application number: CN2009801153849A
Authority: CN
Inventors: J·E·奥迪亚; D·J·默戈特; S·M·希恩; B·M·沃森
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 2008-05-02
Filing date: 2009-04-15
Publication date: 2011-04-13
Anticipated expiration: 2029-04-15
Also published as: JP2017048212A; KR20100125475A; TWI431004B; DOP2010000328A; ZA201006868B; CA2723207C; IL208350A; CA2723207A1; UA102251C2; EP2297120B1; JP5658139B2; PT2297120E; US20090275566A1; EP2297120A1; IL208350A0; US7648983B2; AU2009241515A1; HRP20150941T1; JP2015051980A; RS54260B1

Abstract

本发明提供了式I的BACE抑制剂，它们的使用方法以及制备它们的中间体和方法：

Description

作为用于治疗阿尔茨海默氏病的BACE抑制剂的氨基二氢噻嗪衍生物

本发明属于阿尔茨海默氏病和其它牵涉淀粉样蛋白β(Aβ)肽即淀粉样前体蛋白(APP)的神经毒性和高度聚集性肽片段的疾病和病症的治疗领域。具体而言提供了β-分泌酶或β-位淀粉样前体蛋白裂解酶(BACE)的有效抑制剂。已经表明，BACE的完全或部分抑制对小鼠模型的斑块相关和斑块依赖性病变具有显著的效应，这提示了甚至Aβ水平的少量减低也可导致斑块负荷和突触缺乏的长期显著减轻，因此提供了重要的治疗益处。

目前描述的BACE抑制剂是拟肽过渡态类似物，通常含有羟乙基结构部分。虽然这些化合物中的许多是BACE的有效抑制剂，但是它们的高分子量和低膜渗透性使它们成为不良的药物候选者。已经从大的拟肽分子进展到小分子，例如各种羟乙胺骨架和含杂环的骨架。例如参见，Durham和Shepherd，Current Opinion in Drug Discovery & Development，9(6)，776-791(2006))。某些氨基噻嗪化合物在WO 2007/049532中已被描述为BACE抑制剂。

需要有效且更强效的BACE抑制剂来提供Aβ肽介导的病症如阿尔茨海默氏病的治疗。本发明提供新的有效且效力大的BACE抑制剂。

本发明提供了式I的化合物或其药用盐：

其中：

n是0、1或2；

R¹是嘧啶基，任选被氯或氟取代的吡嗪基，或任选被各自独立选自氯、氟和C₁-C₃烷氧基中的一个或两个取代基取代的吡啶基；

R²在所有情况下独立地选自氯和氟；

R³是氢或任选被羟基取代的C₁-C₄烷基；以及

R⁴是氢或C₁-C₃烷基。

本发明还提供了治疗患者的阿尔茨海默氏病的方法，包括将有效量的式I的化合物给药于需要这种治疗的患者。

本发明进一步提供了防止患者从轻度认知损害进展到阿尔茨海默氏病的方法，包括将有效量的式I的化合物给药于需要这种治疗的患者。

本发明进一步提供了防止处于发展为阿尔茨海默氏病的危险之中的患者进展的方法，包括将有效量的式I的化合物给药于需要这种治疗的患者。

本发明还提供了抑制患者的BACE的方法，包括将有效量的式I的化合物给药于需要这种治疗的患者。

本发明还提供了抑制淀粉样蛋白前体蛋白的β-分泌酶介导的裂解的方法，包括将有效量为式I为化合物给药于需要这种治疗为患者。

本发明进一步提供抑制Aβ肽的产生的方法，包括将有效量的式I的化合物给药于需要这种治疗的患者。

本发明还提供了包括式(I)的化合物与药用载体、稀释剂或赋型剂的药物制剂。

此外，本发明提供用于治疗，尤其用于治疗阿尔茨海默氏病，或用于防止轻度认知损害进展为阿尔茨海默氏病的式I的化合物。本发明也提供了式I的化合物在制备用于治疗阿尔茨海默氏病的药物中的用途。此外，本发明提供式I的化合物在制备用于防止轻度认知损害进展为阿尔茨海默氏病的药物中的用途。本发明也提供了式I的化合物在制备用于抑制BACE的药物中的用途。本发明进一步提供了式I的化合物在制备用于抑制Aβ肽产生的药物中的用途。

另外，本发明提供适合于治疗阿尔茨海默氏病的药物制剂。此外，本发明提供适合于防止轻度认知损害进展为阿尔茨海默氏病的药物制剂。另外，本发明还提供了适合于抑制BACE的药物制剂。

此外，本发明提供了适合于抑制淀粉样蛋白前体蛋白的β-分泌酶介导的裂解的药物制剂。本发明还提供了适合于治疗由Aβ肽的过高水平导致的病症的药物制剂，其包含式I的化合物或其药用盐与一种或多种药用赋型剂、载体或稀释剂的组合。

以上化学式中使用的一般化学术语具有其通常的含义。例如，术语“C₁-C₃烷基”是指甲基、乙基、丙基和异丙基。术语“C₁-C₄烷基”是指甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基结构部分。

“任选被羟基取代的C₁-C₄烷基”是C₁-C₄烷基，其中氢原子之一被羟基结构部分置换。

术语“C₁-C₃烷氧基”是键接于氧原子的C₁-C₃烷基，是指甲氧基、乙氧基、丙氧基和异丙氧基。

术语“氮保护基团”是指对计划的反应条件稳定，然而可通过试剂和与再生胺相适应的反应条件选择性除去的结构部分。此类基团是本领域技术人员所熟知的，并且在文献中有描述。例如参见Greene和Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，第三版，第7章，John Wiley and Sons Inc.，(1999)。

术语“抑制Aβ肽的产生”是指将如果过量的患者的Aβ肽的体内水平降低至正常，或者根据需要，低于正常的水平。

术语“有效量的式I的化合物”是指充分抑制BACE以将患者的Aβ肽的体内水平降低至正常或低于正常的水平的式I化合物的一个或多个剂量。

术语“治疗”包括减慢或阻止患者疾病的进展。

轻度认知损害已经被定义为与阿尔茨海默氏病相关的痴呆的潜伏前驱期，以临床表现和表现轻度认知损害的患者将来进展为阿尔茨海默氏痴呆为基础。(Morris等人，Arch.Neurol.，58，397-405(2001)；Petersen等人，Arch.Neurol.，56，303-308(1999))。术语“防止轻度认知损害进展为阿尔茨海默氏病”包括减慢、阻止或逆转患者由轻度认知损害进展为阿尔茨海默氏病。

本领域技术人员将领会，式I的化合物能够以互变异构形式存在，如图(1)所示。当在本申请中提到式I的化合物的特定互变异构体之一时，应该理解为包括两种互变异构形式和它们的所有混合物。

图(1)

技术人员将领会到，式I的化合物包括含有至少一个手性中心的核：

图(2)

虽然本发明考虑了所有单个对映异构体以及包括外消旋物的所述化合物的对映异构体的混合物，但图2中所示的具有在标记为1的原子处的绝对构型的化合物是优选的式I的化合物。

图(3)

此外，当适当地被取代时，具有如图3所示的标记为2的原子的绝对构型的化合物是优选的式I的化合物。

另外，技术人员将领会到，通过选择某些变量在本发明的化合物中可以产生其他手性中心。本发明考虑了全部单个对映异构体或非对映异构体以及包括外消旋物的所述化合物的对映异构体和非对映异构体的混合物。

技术人员也将领会到，所有手性中心的Cahn-Ingold-Prelog(R)或(S)标识将根据特定化合物的取代方式而变化。单一对映异构体或非对映异构体可通过以手性试剂开始或通过立体选择性或立体专一合成技术来制备。或者，单一对映异构体或非对映异构体可在本发明化合物合成中的任何适当点通过标准手性色谱或结晶技术从混合物中分离。本发明化合物的单一对映异构体和非对映异构体是本发明的优选实施方案。

本发明的化合物是胺类，因此相应地与许多无机和有机酸中的任一种反应而形成药用酸加成盐。药用盐以及制备它们的普通方法在本领域中是众所周知的。例如参见，P.Stahl等人，Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties，Selection and Use(药用盐手册：性质、选择和使用)，(VCHA/Wiley-VCH，2002)；S.M.Berge等人，“Pharmaceutical Salts(药用盐)”，Journal of Pharmaceutical Sciences，第66卷，第1号，1977年1月。优选的药用盐是与盐酸形成的那些药用盐。

虽然所有式I的化合物是有用的BACE抑制剂，但是某些类别的化合物是优选的。下面的段落描述这种优选的类别：

a)R¹是嘧啶基；

b)R¹是任选被氟取代的吡嗪基；

c)R¹是在所有情况下任选被独立地选自氯、氟或甲氧基中的基团取代一次或两次的吡啶基；

d)R¹是任选被氟或甲氧基取代的吡啶基；

e)R¹是任选被氟取代的吡啶基；

f)R²是氟；

g)R²是氯；

h)n是0；

i)n是1；

j)n是2；

k)R³是氢；

l)R³是被羟基取代的甲基；

m)R³是甲基；

n)R³是被羟基取代的异丙基；

o)R⁴是氢；

p)R⁴是甲基；

q)式I的化合物在与氨基噻嗪环的氮相邻的手性中心具有(S)的绝对构型；

r)式I的化合物是游离碱；

s)式I的化合物是药用盐；

t)式I的化合物是盐酸盐。

u)式I的化合物是二盐酸盐。

本发明的优选实施方案涉及式I的化合物或其药用盐，其中R¹是嘧啶基，在所有情况下任选被独立地选自氯、氟或甲氧基中的基团取代一次或两次的吡啶基，或任选被氟取代的吡嗪基；R²是氯或氟；R³是氢，甲基，被羟基取代的甲基，或被羟基取代的异丙基；R⁴是氢或甲基；以及n是0、1或2。在所述实施方案中，优选的是，与氨基噻嗪环的氮相邻的手性中心的绝对构型为(S)；或其药用盐。

本发明的另一个优选实施方案涉及式I的化合物或其药用盐，其中R¹是嘧啶基，在所有情况下任选被独立地选自氯、氟或甲氧基中的基团取代一次或两次的吡啶基，或任选被氟取代的吡嗪基；R²是氯或氟；R³是氢、甲基、被羟基取代的甲基、或被羟基取代的异丙基；R⁴是氢；以及n是0、1或2。在所述实施方案中，优选的是与氨基噻嗪环的氮相邻的手性中心的绝对构型是(S)；或其药用盐。

本发明的一个更优选实施方案涉及式I的化合物或其药用盐，其中R¹是嘧啶基，在所有情况下任选被选自氯或氟中的基团取代一次或两次的吡啶基，或者任选被氟取代的吡嗪基；R²是氯或氟；R³是氢，甲基；R⁴是氢；和n是0、1或2。在所述实施方案中，优选的是，与氨基噻嗪环的氮相邻的手性中心的绝对构型是(S)；或其药用盐。

本发明的另一个实施方涉及式I的化合物或其药用盐，其中R¹是嘧啶基，任选被氟或甲氧基取代的吡啶基，或者任选被氟取代的吡嗪基；R²是氟；R³是氢或甲基；R⁴是氢；以及n是1或2。在所述实施方案中，优选的是，与氨基噻嗪环的氮相邻的手性中心的绝对构型是(S)；或其药用盐。

本发明的最优选的实施方案方涉及式I的化合物或其药用盐，其中R¹是嘧啶基，任选被氟取代的吡啶基，或者任选被氟取代的吡嗪基；R²是氟；R³是氢或甲基；R⁴是氢；以及n是1或2。在所述实施方案中，优选的是，与氨基噻嗪环的氮相邻的手性中心的绝对构型是(S)，或其药用盐。

本发明的特别优选的实施方案方涉及式I的化合物或其药用盐，其中R¹是嘧啶基；R²是氟；R³是氢；R⁴是氢；以及n是2。在所述实施方案中，优选的是，与氨基噻嗪环的氮相邻的手性中心的绝对构型是(S)；或其药用盐。

涉及式I的化合物的本发明的另一特别优选的实施方案是：

或其药用盐。

涉及式I的化合物的本发明的另一特别优选的实施方案是：

或其药用盐。

式I的化合物是BACE的抑制剂。因此，本发明还提供了抑制患者的BACE的方法，包括将BACE抑制量的式I的化合物给药于需要所述治疗的患者。优选的是，通过给药式I的化合物来治疗的患者是人。

作为BACE的抑制剂，本发明的化合物可用于抑制Aβ肽的产生，因此可用于治疗由于Aβ肽的产生过剩和/或清除减少而致的过高Aβ肽水平导致的病症。本发明的又一个实施方案是式I的化合物在制备用于治疗能够通过抑制BACE来改善或预防的疾病或病症的药物中的用途。式I的化合物因此被认为可用于治疗或预防阿尔茨海默氏病，轻度认知损害，唐氏综合症，荷兰型遗传性淀粉样变脑出血，脑淀粉样血管病，其它变性型痴呆，例如混合血管和变性起源的痴呆，与帕金森氏病有关的痴呆，与进行性核上性麻痹有关的痴呆，与皮质基底节变性有关的痴呆，以及弥漫性路易体型的阿尔茨海默氏病。

本发明的化合物可通过本领域已知的各种程序来制备，它们中的一些在以下反应路线中举例说明。本领域技术人员会认识到，在以下反应路线中的各步骤可以改变，以提供各种式I的化合物。制备式I的化合物所需的特定步骤次序取决于所要合成的特定化合物、起始化合物以及取代结构部分的相对不稳定性。在以下反应路线中的各步骤的产物能够通过常规方法来回收，其包括萃取、蒸发、沉淀、色谱法、过滤、研制和结晶。

某些立体化学中心未指定，且为了清楚起见，某些取代基在下列反应路线中被除去，并且企图不以任何方式限制反应路线的教导。此外，单一异构体、对映异构体或非对映异构体可以在式I的化合物合成中的任何适当的点通过诸如手性色谱法之类的方法来分离。

另外，在以下反应路线中所述的中间体含有许多氮保护基团。取决于特定的反应条件和所要进行的特定转换，该可变的保护基团可以在所有情况下是相同或不同的。该保护和脱保护条件是技术人员所公知的，并且在文献中有描述。例如参见Greene和Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，参见上文。

在以下的反应路线中，全部取代基如上文所定义，除非另有说明。如将领会到的，式(1a)至(1e)、(2)和(3)的化合物可以容易地通过本领域公知且沿用已久的方法来制备，包括类似于本文所述的方法和程序。必需的起始原料是市场上可买到的，或者可以通过技术人员公知的方法由市场上可买到的原料制备。

反应路线I

反应路线I描述了任一式(1a)-(1e)的适当化合物与式(2)或式(3)的适当化合物反应，在中间体(4)脱保护之后获得了式I的化合物，其中R⁵是氮保护基团，例如乙酰基、苯甲酰基或叔丁氧基羰基。

使用适合的钯试剂，例如氯化双(三苯基膦)钯(II)、四(三苯基膦)钯、PdCl₂或乙酸钯(II)，在适合的碱如碳酸铯、碳酸钠或碳酸钾的存在下，任一式(1a)到(1e)的化合物与式(2)的化合物根据苏楚基偶联反应进行反应。这种反应在适合的溶剂例如1，2-二甲氧基乙烷、水、乙醇、乙腈、二甲基甲酰胺或二烷或它们的混合物中进行。

或者，使用适合的钯试剂如氯化双(三苯基膦)钯(II)、PdCl₂或四(三苯基膦)钯，在适合的添加剂例如氯化锂或氟化铯的存在下，任一式(1a)到(1e)的化合物与式(3)的化合物根据Stille偶联反应进行反应。这种反应在适合的溶剂如甲苯或DMF或它们的混合物中进行。

在任选的步骤中，式I的化合物的药用盐可以通过让适当的式I的游离碱与适当的药用酸在适合的溶剂中在标准条件下反应来形成。另外，这种盐的形成可以在氮保护基团的脱保护时同时发生。这种盐的形成在本领域中是众所周知的。

式(1a)的化合物可以通过两种变型来制备。反应路线II和III描述了用适当的式(i)的化合物起始来得到式(1a)的化合物的合成步骤，其中R⁶是甲基或乙基，R⁵是适合的氮保护基团，例如乙酰基、苯甲酰基或叔丁氧基羰基。

反应路线II

在反应路线II中，式(i)的化合物与2-甲基-丙烷-2-亚磺酸酰胺在Ti(OEt)4的存在下在适合的溶剂如THF中反应，从而获得式(ii)的化合物。式(iii)的化合物通过将n-BuLi(催化剂)添加到适合的溶剂如THF中的二异丙胺中来制备。添加适当的乙酸盐化合物，随后添加过量的三异丙氧基氯化钛。将式(ii)的化合物加入到式(iii)的化合物的溶液中，从而得到式(iv)的化合物。胺的脱保护通过本领域已知的方法来进行，随后通过本领域公知的方法将酯还原为醇，例如通过使用氢化锂铝或硼氢化锂。向醇(v)中添加异硫氰酸苯甲酰酯。该中间体化合物用HCl处理，以促进噻嗪(thiazene)形成和除去苯甲酰基，然后添加适合的氮保护基团，以获得通式(1a)的化合物。

反应路线III

在反应路线III中，将过量的溴化乙烯基镁加入到适合溶剂如THF中的式(i)的化合物中，从而得到式(vi)的化合物。醇(vi)用亚硫酰氯或PBr₃在适合的溶剂如己烷或乙醇中处理，随后添加硫脲以得到式(vii)的化合物。式(vii)的化合物用酸在高温下处理，以提供外消旋氨基噻嗪，其用适合的氮保护基团保护，经受纯化条件如手性色谱法或结晶，从而得到式(1a)的化合物。

反应路线IV

反应路线IV描述用适当的式(ii)化合物起始以得到式(1b)的化合物的合成步骤。将过量的氯化2-甲基烯丙基镁添加到式(ii)的化合物在适合的溶剂如二氯甲烷中的溶液中。所得中间体用HCl在适合的溶剂如二

烷中的溶液处理，以得到式(viii)的化合物。胺(viii)与异硫氰酸苯甲酰酯在适合的溶剂如THF中反应，从而获得式(ix)的化合物。用过量的碘在适合的溶剂如二氯甲烷中处理式(ix)的化合物，从而获得式(x)的化合物。最后，添加溶于适合溶剂如甲苯中的氢化三正丁基锡和AIBN，获得式(1b)的化合物。

反应路线V

反应路线V描述了用适当的式(iv)的化合物起始来获得式(1c)的化合物的合成步骤。X是溴或氯。R⁵是适合的氮保护基团。R⁶是甲基或乙基。式(xi)的化合物通过让N，O-二甲基羟胺与过量的丁基锂在适合的溶剂如THF中反应来制备。将式(iv)的化合物加入到式(xi)的化合物的溶液中，从而得到式(xii)的化合物。将过量的适当的卤化镁(xiii)加入到式(xii)化合物在适合的溶剂如THF中的溶液中。所得酮(xiv)通过本领域众所周知的条件还原为醇(xv)，例如通过硼氢化钠在适合的溶剂如甲醇中进行还原。向醇(xv)中添加异硫氰酸苯甲酰酯。该中间体化合物用HCl处理，然后添加适合的氮保护基团，从而获得式(1c)的化合物。

反应路线VI

反应路线VI描述了以适当的式(xvi)的化合物起始来获得式(1d)的化合物和式(1e)的化合物的合成步骤，其中R⁵是适合的氮保护基团。

式(xvii)的化合物通过首先让溴化(甲基)三苯基

和正丁基锂在适合的溶剂如THF中反应来制备。向该溶液中例如通过加料漏斗或注射器泵缓慢添加式(xvi)的化合物。式(xviii)的化合物通过将乙醛酸乙酯和三氟甲磺酸镱添加到适合溶剂如乙腈中的式(xvii)的化合物中来制备。

式(xix)的化合物通过三步骤方法来制备：第一，式(xviii)的化合物的醇例如通过与三氟甲磺酸酐在适当的胺碱如2，6-二甲基吡啶或二异丙基乙基胺在适合的溶剂例如二氯甲烷中反应而转化为离去基团。添加过量的硫脲，然后将所得中间体加入到过量的硫酸中。式(xix)的化合物的所得氨基通过本领域公知且有描述的方法用适合的氮保护基团保护，从而获得式(xx)的化合物。式(xx)的化合物的反应可以按两个变型进行，以获得式(1d)的化合物或式(1e)的化合物。

(1d)的化合物可以通过用本领域公知或有描述的方法(例如过量的硼氢化锂在适合的溶剂如THF中)将化合物(xx)的酯还原来制备。

(1e)的化合物可以通过让式(xx)的化合物与过量的氯化甲基镁在适合的溶剂如THF中反应来制备。

制备和实施例

下列制备和实施例进一步说明本发明。

本发明的化合物的名称通过ChemDraw

Ultra，10.0版提供。

本文所使用的缩写根据Aldrichimica Acta，第17卷，第1号，1984来定义。其他缩写如下定义：“SCX”是强阳离子交换；“ca.”是大约或近似；“EtOAc”是乙酸乙酯；“MeOH”是甲醇；“DCM”是二氯甲烷；“THF”是四氢呋喃；“Et₂O”是***；“(OEt)”是乙醇基；“equiv”是当量；“FRET”荧光共振能量传递；“RFU”是相对荧光单位；“DMEM”是达尔伯克氏改良伊格尔培养基；“F12”是Ham’s F12培养基；“FBS”是胎牛血清。

除非另有规定，质谱分析数据通过LC/MS：Xbridge C18(2.1x50μmx3.5μm)柱在50℃+/-10℃的温度和1mL/min流速下获得。洗脱***是5-100％ACN w/10mM碳酸氢铵(pH 10)，7.0分钟，然后在100％ACN下保持1.0分钟，与电喷射离子化(100-800amu扫描范围；0.2amu步骤；80v Fragmentor；1.0增量；

80阈值)联合。

某些化合物经由HPLC提纯，方法A：Xterra

RP18(30×300mm)柱，在环境温度下，流速40mL/min。该洗脱***是或组成为等度0∶100(乙腈：(0.1％ HCl/H₂O))，1-5分钟，随后是从0∶100(乙腈：(0.1％HCl/H₂O))到50∶50(乙腈：(0.1％HCl/H₂O))的线性梯度，20分钟。任何其它HPLC条件另外规定。

制备1

(R)-2-甲基-丙烷-2-亚磺酸[1-(5-溴-2，4-二氟-苯基)-乙叉基]-酰胺

在环境温度下，向1-(5-溴-2，4-二氟-苯基)-乙酮(19g，64.7mmol，1equiv.)和(R)-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺(10.2g，84.1mmol，0.76equiv)在THF(0.3M，215mL)中的溶液中一次性添加Ti(OEt)₄(29.5g，129mmol，2.0equiv)。将反应加热至70℃，并搅拌18小时。将反应冷却到环境温度，再倒入水中。所得悬浮液用硅藻土垫过滤，再用乙酸乙酯洗涤。收集滤液，再用乙酸乙酯萃取。将有机层合并，用硫酸钠干燥，过滤，再在减压下浓缩，得到残留物。残留物通过硅胶色谱法提纯，经20分钟用己烷到己烷∶乙酸乙酯(3∶1)的线性梯度洗脱，得到标题化合物(81％收率)：MS(m/z)：338，340(M+1)。

表1中的以下化合物基本上如在(R)-2-甲基-丙烷-2-亚磺酸[1-(5-溴-2，4-二氟-苯基)-乙叉基]-酰胺的制备中所述那样制备。

表1

制备2

(S)-3-((R)-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰基氨基)-3-(5-溴-2，4-二氟-苯基)-丁酸甲酯

将正丁基锂(41.9mL，105mmol，2equiv)(2.5M己烷溶液)加入到二异丙胺(10.6g，105mmol，2equiv)在THF(262mL)中的-78℃溶液中。在15分钟以后，滴加乙酸甲酯(7.7g，105mmol，2equiv)，并将反应搅拌30分钟。向该反应中滴加三异丙氧基氯化钛(31.6g，115mmol，2.2equiv)在THF(50mL)中的溶液。在-78℃搅拌60分钟后，滴加2-甲基-丙烷-2-亚磺酸[1-(3-溴-苯基)-乙叉基]-酰胺(12.2g，40.4mmol，1equiv)在THF(50mL)中的溶液。将该反应在-78℃下搅拌3小时。该反应用氯化铵(100mL)的饱和溶液猝灭，加热至环境温度，并用水稀释(100ml)。所得悬浮液用硅藻土垫过滤，再用乙酸乙酯洗涤。收集滤液，再用乙酸乙酯萃取。将有机层合并，用硫酸钠干燥，过滤，再在减压下浓缩，得到残留物。残留物通过硅胶色谱法提纯，经20分钟用己烷∶乙酸乙酯(5∶1)到己烷∶乙酸乙酯(10∶7)的线性梯度洗脱，得到标题化合物(72％收率)：MS(m/z)：412，414(M+1)。

表2中的下列化合物基本上如在(S)-3-((R)-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰基氨基)-3-(5-溴-2，4-二氟-苯基)-丁酸甲酯的制备中所述那样制备。

表2

制备3

(S)-3-氨基-3-(2，4-二氟苯基)-丁酸甲酯盐酸盐

向(S)-3-((R)-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰基氨基)-3-苯基-丁酸甲酯(15.5g；37.6mmol；1equiv)和甲醇(100mL)的溶液一次性添加氯化氢(4M二

烷溶液)(100mL，400mmol，11equiv)。将反应在室温下搅拌1小时。在减压下除去溶剂，得到标题化合物，其不用进一步提纯而使用(＞95％收率)：MS(m/z)：306，308(M+1)。

表3中的下列化合物基本上如在(S)-3-氨基-3-(2，4-二氟苯基)-丁酸甲酯盐酸盐的制备中所述那样制备。

表3

制备4

(S)-3-氨基-3-(5-溴-2，4-二氟苯基)丁-1-醇

经45分钟向(S)-3-氨基-3-(2，4-二氟苯基)-丁酸乙酯盐酸盐(40.2g，90.5mmol，1equiv)在THF(180mL)中的0℃溶液中添加氢化锂铝(1MTHF溶液)(118mL，118mmol)，同时保持内部反应温度在15℃以下。将反应混合物加热至环境温度，并搅拌1.5小时。将反应冷却至0℃，通过滴加水(4.5mL)、2M氢氧化钠(4.5mL)和水(13.6mL)来猝灭。所得固体通过过滤去除，用乙酸乙酯冲洗滤液用MgSO₄干燥，再过滤。在减压下除去溶剂，得到标题化合物，其不用进一步提纯而使用(71％收率，73％纯度，通过LCMS测定)：MS(m/z)：280，282

制备5

(S)-3-氨基-3-(3-溴-苯基)-丁-1-醇

向(S)-3-氨基-3-(4-氟苯基)-丁酸甲酯盐酸盐(14g，38.6mmol，1equiv)在THF(200mL)中的0℃溶液中小心地添加硼氢化锂(1.67g，77.1mmol，2equiv)。在5分钟以后，将反应混合物加热至50℃，并搅拌。在完成之后，将反应在冰浴中冷却，并通过滴加水来猝灭。反应用1N HCl(100mL)酸化。在搅拌1小时后，该溶液用5N NaOH变成碱性，再用二氯甲烷萃取。将有机层合并，用硫酸钠干燥，过滤，再在减压下浓缩，得到标题化合物(94％收率)：MS(m/z)：244.0和246.0(M+1)。

表4中的下列化合物基本上根据(S)-3-氨基-3-(3-溴-苯基)-丁-1-醇的制备来制备。

表4

制备6

(S)-1-苯甲酰基-3-[1-(5-溴-2，4-二氟-苯基)-3-羟基-1-甲基-丙基]-硫脲

向(S)-3-氨基-3-(5-溴-2，4-二氟-苯基)-丁-1-醇(9.5g，34mmol，1equiv)在THF(50mL)中的溶液中添加双(三甲基甲硅烷基)三氟乙酰胺(8.7g，34mmol，1equiv)。在2小时后，滴加异硫氰酸苯甲酰酯(5.5g，34mmol，1equiv)。将反应搅拌18小时，用水猝灭，再用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用1N HCl和饱和NaCl水溶液萃取。将有机相用硫酸钠干燥，过滤，再在减压下浓缩，得到标题化合物(＞95％收率，90％纯度，通过LCMS测定)：MS(m/z)：443，445(M+1)。

表5中的下列化合物基本上如在(S)-1-苯甲酰基-3-[1-(5-溴-2，4-二氟-苯基)-3-羟基-1-甲基-丙基]-硫脲的制备中所述那样制备。

表5

制备7

(S)-4-(5-溴-2，4-二氟苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-胺

向(S)-1-苯甲酰基-3-[1-(5-溴-2，4-二氟-苯基)-3-羟基-1-甲基-丙基]-硫脲(41g，68mmol)在1，4-二

烷(20mL)中的溶液中添加HCl水溶液(5N，407mL，2.0mol，30equiv)。将所得悬浮液加热至100℃。在搅拌20小时之后，将反应在减压下浓缩。所得混合物用HCl(5N，407mL，2.0mol)的水溶液处理，并在100℃下搅拌18小时。将该悬浮液冷却到10℃，用50％ NaOH水溶液将pH调节到pH 10。所得水溶液用乙酸乙酯萃取。将有机层合并，用硫酸钠干燥，过滤，再在减压下浓缩。该残留物通过硅胶快速柱色谱法洗脱，用己烷∶丙酮(4∶1)到己烷∶丙酮(3∶1)的分级梯度洗脱，得到标题化合物(57％收率，85％纯度，通过LCMS测定)：MS(m/z)：321，323(M+1)。

表6中的下列化合物基本上根据(S)-4-(5-溴-2，4-二氟苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-胺的制备法来制备。

表6

制备8

(S)-[4-(5-溴-2-氟-苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-[1，3]噻嗪-2-基]-氨基甲酸叔丁酯

将(S)-1-苯甲酰基-3-[1-(5-溴-2-氟-苯基)-3-羟基-1-甲基-丙基]-硫脲(0.79g，1.8mmol)和HCl水溶液(5N，25mL，71mmol)的溶液加热至100℃。在搅拌6小时后，将反应被冷却到环境温度，并静置过夜。将反应在减压下浓缩，得到粗(S)-4-(5-溴-2-氟苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-胺盐酸盐[MS(m/z)：303，305(M+1)]。

向(S)-4-(5-溴-2-氟苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-胺盐酸盐在THF(30mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(15mL)中的溶液中添加二碳酸二叔丁酯(0.77g，3.5mmol)。在4小时后，反应物用水稀释，用乙酸乙酯萃取，用硫酸钠干燥，过滤，再在减压下浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱法提纯，用己烷到己烷∶乙酸乙酯(3∶1)的线性梯度洗脱，得到标题化合物(69％收率)：MS(m/z)：403，405(M+1)。

制备9

(S)-4-(5-溴-2，4-二氟苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基氨基甲酸叔丁酯

在环境温度下，向(S)-4-(5-溴-2，4-二氟苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-胺(14.3g，39mmol，1equiv)在1，4-二

烷(190mL)中的溶液添加碳酸氢钠饱和水溶液(190mL)和水(30mL)。将该悬浮液搅拌5分钟，随后添加二碳酸二叔丁酯(17g，78mmol，2equiv)。在1小时后，反应物用水稀释，用乙酸乙酯萃取，用硫酸镁干燥，过滤，再在减压下浓缩。残留物通过硅胶色谱法提纯，用己烷∶乙酸乙酯(4∶1)洗脱，得到标题化合物(78％收率)：MS(m/z)：421，423(M+1)。

表7中的下列化合物基本上如在(S)-4-(5-溴-2，4-二氟苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基氨基甲酸叔丁酯的制备中所述那样制备。

表7

制备10

2-溴-3-基-丁-3-烯-2-醇

在10℃下，向3-溴乙酰苯(50g，250mmol；1equiv)在MTBE(375mL)中的溶液中滴加溴化乙烯基镁(0.7M THF溶液，250mmol；360mL，1equiv)。将反应加热至回流，保持16小时。将反应冷却，用饱和氯化铵水溶液猝灭。该混合物用水稀释，用乙酸乙酯萃取，用硫酸镁干燥，过滤，再在减压下浓缩。该残留物用硅胶色谱法提纯，用己烷∶乙酸乙酯(9∶1)到己烷∶乙酸乙酯(4∶1)的分级梯度洗脱，得到标题化合物(40g，42％收率)：¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：1.64(s，3H)，5.18(d，J＝14Hz，1H)，5.30(d，J＝23Hz，1H)，6.13(dd，J＝14，23Hz，1H)，7.21(t，J＝11Hz，1H)，7.36-7.40(m，2H)，7.63(s，1H)。

制备11

2-[3-(3-溴-苯基)-丁-2-烯基]-异硫脲盐酸盐

向2-溴-3-基-丁-3-烯-2-醇(11g，29mmol，1equiv)和己烷(20mL)的0℃溶液中添加亚硫酰氯(6.9g，58mmol，2equiv)。将反应加热至环境温度，此时，气体强烈地放出。将反应在环境温度下搅拌，直到气体停止放出为止，再在减压下除去溶剂。将所得残留物溶于乙腈(100mL)。添加硫脲(2.2g，29mmol，1equiv)，再将反应加热至50℃。在2小时后，将反应冷却到环境温度。所得沉淀通过过滤来收集，然后用乙腈洗涤，获得标题化合物(90％收率)：MS(m/z)：285.0，287.0(M+1)。

制备12

4-(3-溴-苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-[1，3]噻嗪-2-基胺

将2-[3-(3-溴-苯基)-丁-2-烯基]-异硫脲盐酸盐(17g，52mmol)在12M HCl(53mL，640mmol，12equiv)中的悬浮液加热至100℃。在24小时后，将溶液冷却到环境温度。用2N NaOH水溶液将溶液的pH调节到pH 10，再用乙酸乙酯萃取。将有机层合并，用硫酸镁干燥，过滤，再在减压下浓缩，得到标题化合物(70％收率)：MS(m/z)：285.0，287.0(M+1)。

制备13

N-(4-(3-溴苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基)乙酰胺

经5分钟，向4-(3-溴-苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-[1，3]噻嗪-2-基胺(10g，35mmol，1equiv)和三乙胺(4.3g，42mmol，1.2equiv)在二氯甲烷(70mL)中的0℃溶液中滴加乙酰氯(2.8g，35mmol，1equiv)。将反应加热至环境温度。在1小时后，反应用二氯甲烷稀释，然后用水萃取。将有机层分离，用硫酸镁干燥，过滤，再在减压下浓缩。残留物通过硅胶色谱法提纯，用己烷∶乙酸乙酯(1∶1)洗脱，得到标题化合物(87％收率)：MS(m/z)：327，329(M+1)。

制备14

(S)-N-[4-(3-溴-苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-[1，3]噻嗪-2-基]-乙酰胺

4-(3-溴-苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-[1，3]噻嗪-2-基胺(20g，61mmol)通过HPLC手性分离[柱：8×32cm chiralpak AD；洗脱剂：60∶40∶0.2(异丙醇∶庚烷∶二甲基乙胺)；流速：350ml/min，紫外线260nm]来提纯。分离第二洗脱异构体，以提供对映异构体富集的标题化合物(35％收率)：MS(m/z)：327，329(M+1)。

制备15

(S)-[4-(2，4-二氟-5-嘧啶-5-基-苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-[1，3]噻嗪-2-基]-氨基甲酸叔丁酯

向(S)-4-(5-溴-2，4-二氟苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-胺(12.6g，29.9mmol，1equiv)在1，2-二甲氧基乙烷∶水∶乙醇(15∶7∶5，300mL)中的100℃溶液中添加嘧啶-5-硼酸(25g，203mmol，6.8equiv)，随后添加碳酸铯(58g，180mmol，6equiv)和氯化双(三苯基膦)钯(II)(4.2g，6.0摩尔，0.2equiv)。在40分钟后，将反应冷却到环境温度，用水稀释，并用乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸镁干燥，过滤，再在减压下浓缩。该残留物通过硅胶色谱法提纯，用己烷∶乙酸乙酯(7∶3)到己烷∶乙酸乙酯(1∶1)的分级梯度提纯，得到标题化合物(67％收率)：MS(m/z)：421(M+1)。

表8中的下列化合物基本上如在(S)-[4-(2，4-二氟-5-嘧啶-5-基-苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-[1，3]噻嗪-2-基]-氨基甲酸叔丁酯的制备中所述那样制备。

表8

¹叔丁氧基羰基在反应条件下裂解。

制备16

(S)-4-(3-(2-氟吡啶-3-基)苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-胺

向(S)-N-(4-(3-(2-氟吡啶-3-基)苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基)乙酰胺(450mg，1.3mmol)在甲醇(40mL)中的溶液中添加K₂CO₃(210mg，1.5mmol)在甲醇∶水(2∶1，15ml)中的溶液。将反应在室温下搅拌6小时。在减压下除去溶剂，将残留物溶于乙酸乙酯中。该乙酸乙酯层用饱和NaCl水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，再在减压下浓缩，得到残留物。该残留物通过使用SCX柱色谱法来提纯，得到标题化合物(65％收率)：MS(m/z)：302(M+1)。

制备17

(S)-4-(3-溴-4-氟苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-胺

向(S)-4-(3-溴-4-氟苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基氨基甲酸叔丁酯(1.1g，2.7mmol)和甲醇(10mL)的溶液中添加三氟乙酸(10mL)。将反应混合物加热至60℃。在15小时后，在减压下除去溶剂。将水加入到所得残留物中，该混合物用饱和碳酸氢钠变成碱性。该碱性水相用二氯甲烷萃取。将有机相合并，用硫酸钠干燥，过滤，再在减压下除去溶剂，得到标题化合物(62％收率)：MS(m/z)：303，305(M+1)。

制备18

(S)-N-(4-(3-溴-4-氟苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基)乙酰胺

向(S)-4-(3-溴-4-氟苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-胺(550mg，1.8mmol，1.0equiv)在四氢呋喃(20mL)中的溶液添加吡啶(720mg，9.0mmol，5equiv)和乙酸酸酐(220mg，2.2mmol，1.2equiv)。在10分钟后，将反应物倒入水中，该含水混合物用二氯甲烷萃取。将有机相分离，用1N HCl和饱和NaCl水溶液洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩，得到标题化合物(83％收率)：MS(m/z)345，347(M+1)。

制备19

(S)-4-(4-氟-3-(吡嗪-2-基)苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基氨基甲酸叔丁酯

将(S)-[4-(3-溴-4-氟-苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-[1，3]噻嗪-2-基]-氨基甲酸叔丁酯(100mg，250μmol，1equiv)、四(三苯基膦)钯(14mg，12.40μmol，0.05equiv)和2-三丁基锡烷基吡嗪(96mg，250μmol，1equiv)在二

烷(3mL)中的溶液用实验室等级微波照射至130℃的温度，并保持20分钟。将溶剂在减压下除去，残留物通过硅胶色谱法提纯，经20分钟用己烷到己烷∶乙酸乙酯(1∶4)斜坡的线性梯度洗脱，获得标题化合物(14％收率，90％纯度，通过LCMS测定)：MS(m/z)：403(M+1)。

制备20

(S)-N-(4-(4-氟-3-(3-氟吡嗪-2-基)苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基)乙酰胺

向(S)-N-(4-(3-溴-4-氟苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基)乙酰胺(500mg，1.5mmol，1equiv)、2-氟-3-(三丁基锡烷基)吡嗪(1.7g，4.3mmol，3.0equiv)在甲苯(15mL)中的溶液中添加氯化双(三苯基膦)钯(II)(51mg，72μmol，0.05equiv)和氯化锂(92mg，2.2mmol，1.5equiv)。将反应用实验室等级微波照射至130℃的温度，并保持3小时。将溶剂在减压下除去，残留物通过硅胶色谱法提纯，经20分钟用己烷到己烷∶乙酸乙酯(1∶1)斜坡的线性梯度洗脱，得到标题化合物(31％收率)：MS(m/z)：363(M+1)。

表9中的下列化合物基本上根据(S)-N-(4-(4-氟-3-(3-氟吡嗪-2-基)苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基)乙酰胺的制备法来制备。

表9

制备21

(R)-N-((S)-2-(3-溴-4-氟苯基)-4-甲基戊-4-烯-2-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺

KG2-E01905-021-2

向(R，Z)-N-(1-(3-溴-4-氟苯基)乙叉基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(10g，31mmol，1.0equiv)在二氯甲烷(100mL)中的0℃溶液中缓慢地添加氯化2-甲基烯丙基镁(0.5M THF溶液，250mL，125.92mmol，4equiv)。在2小时后，反应用饱和氯化铵猝灭，再用乙酸乙酯萃取。将溶剂在减压下除去，残留物通过硅胶色谱法提纯，用二氯甲烷到10％二氯甲烷∶乙酸乙酯的线性梯度洗脱，获得标题化合物(35％收率)：MS(m/z)：376，378(M+1)。

制备22

(S)-2-(3-溴-4-氟苯基)-4-甲基戊-4-烯-2-胺

向(R)-N-((S)-2-(3-溴-4-氟苯基)-4-甲基戊-4-烯-2-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.8g，5.1mmol，1equiv)在1，4-二

烷(6mL)的溶液中添加氯化氢(4.0M 1，4-二

烷溶液，15mL)。将反应搅拌5分钟，并在减压下除去溶剂。向该残留物中添加饱和碳酸氢钠水溶液，并用乙酸乙酯萃取该混合物。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，再在减压下浓缩，得到标题化合物(97％收率)：¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ7.66(dd，1H，J＝6.40，J＝2.80Hz)，7.37-7.33(m，1H)，7.02(t，1H，J＝8.40Hz)，4.83(s，1H)，4.62(s，1H)，2.47(d，1H，J＝13.2Hz)，2.35(d，1H，J＝13.2Hz)，1.44(s，3H)，1.36(s，3H)。

制备例23

(S)-N-(2-(3-溴-4-氟苯基)-4-甲基戊-4-烯-2-基氨基甲硫酰基)苯甲酰胺

向(S)-2-(3-溴-4-氟苯基)-4-甲基戊-4-烯-2-胺(1.3g，4.6mmol，1.0equiv)在THF(5mL)中的溶液中添加异硫氰酸苯甲酰酯(0.63mL，4.6mmol，1equiv)。将反应在室温下搅拌3小时。将溶剂在减压下除去，残留物通过硅胶色谱法提纯，用20％二氯甲烷∶己烷到50％二氯甲烷∶己烷的线性梯度洗脱，得到标题化合物(84％收率)：MS(m/z)：457，459(M+23)。

制备24

N-((4S)-4-(3-溴-4-氟苯基)-6-(碘甲基)-4，6-二甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基)苯甲酰胺

向(S)-N-(2-(3-溴-4-氟苯基)-4-甲基戊-4-烯-2-基氨基甲硫酰基)苯甲酰胺(1.3g，3.0mmol，1.0equiv)在二氯甲烷(40mL)中的0℃溶液中添加碘(1.5g，5.9mmol，2.0equiv)。将反应在0℃下搅拌1小时，然后逐渐地升温至室温。反应混合物用饱和硫代硫酸钠水溶液猝灭。该水层用二氯甲烷萃取。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，再在减压下浓缩，得到标题化合物(82％收率)：MS(m/z)：561，563(M+1)。

制备25

(S)-N-(4-(3-溴-4-氟苯基)-4，6，6-三甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基)苯甲酰胺

向N-((4S)-4-(3-溴-4-氟苯基)-6-(碘甲基)-4，6-二甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基)苯甲酰胺(0.13g，0.23mmol，1.0equiv)在甲苯(1.5mL)中的溶液中添加2，2′-偶氮-双异丁腈(0.006g，0.03mmol，0.15equiv)和氢化三正丁基锡。将反应混合物在室温下搅拌3小时，并在减压下浓缩。将溶剂在减压下除去，残留物通过硅胶色谱法提纯，用5％乙酸乙酯∶己烷到20％乙酸乙酯∶己烷的线性梯度洗脱，得到标题化合物(25％收率)：MS(m/z)：435，437(M+1)。

制备26

(S)-N-(4-(4-氟-3-(嘧啶-5-基)苯基)-4，6，6-三甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基)苯甲酰胺

向(S)-N-(4-(3-溴-4-氟苯基)-4，6，6-三甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基)苯甲酰胺(0.067g，0.15mmol，1.0equiv)在1，2-二甲氧基乙烷(1.5mL)、乙醇(0.7mL)和水(1.0mL)中的97℃溶液中添加嘧啶-5-硼酸(0.095g，0.77mmol，5.0equiv)、碳酸铯(0.301g，0.92mmol，6.1equiv)和氯化双(三苯基膦)钯(II)(0.022g，0.03mmol，0.2equiv)。将该反应混合物在97℃下搅拌20分钟。在冷却到室温之后，将反应混合物倒入水中，并用乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸钠干燥，过滤，再在减压下浓缩。将溶剂在减压下除去，残留物通过硅胶快速柱色谱法提纯，用二氯甲烷到15％乙酸乙酯∶二氯甲烷的线性梯度洗脱，获得标题化合物(46％收率)：MS(m/z)：435(M+1)。

制备27

(S)-3-(3-溴-苯基)-N-甲氧基-N-甲基-3-(R)-(2-甲基-丙烷-2-亚磺酰基氨基)-丁酰胺

经由套管向N，O-二甲基羟胺盐酸盐(12g，130mmol，5.0equiv)在THF(200mL)中的-78℃溶液中添加正丁基锂(100mL，250mmol，10equiv)(2.5M己烷溶液)。将反应搅拌15分钟，再滴加(S)-3-((R)-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰基氨基)-3-苯基-丁酸甲酯(9.5g，25mmol，1.0equiv)在THF(50mL)中的溶液。将反应升温至-60℃，并在该温度下保持1小时。反应用饱和氯化铵水溶液猝灭，用水稀释，再用乙酸乙酯萃取。有机相用水、饱和NaCl水溶液萃取，用硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩，得到标题化合物(60％收率)：MS(m/z)：405，407(M+1)。

表10中的下列化合物基本上如在(S)-3-(3-溴-苯基)-N-甲氧基-N-甲基-3-(R)-(2-甲基-丙烷-2-亚磺酰基氨基)-丁酰胺的制备中所述那样来制备。

表10

制备28

(R)-2-甲基-丙烷-2-亚磺酸[(S)-1-(3-溴-苯基)-1-甲基-3-氧代-丁基]-酰胺

向(S)-3-(3-溴-苯基)-N-甲氧基-N-甲基-3-(R)-(2-甲基-丙烷-2-亚磺酰基氨基)-丁酰胺(1.5g，3.7mmol；1.0equiv)在THF(53mL)中的-78℃溶液中添加甲基溴化镁(6.2mL，18.5mmol，5.0equiv)，并将反应升温至环境温度。在1小时后，将反应冷却到-78℃，用饱和氯化铵水溶液猝灭。混合物用水稀释，再用乙酸乙酯萃取。有机相用硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩，得到标题化合物(＞95％收率)：MS(m/z)360，362(M+1)。

表11中的下列化合物基本上如在(R)-2-甲基-丙烷-2-亚磺酸[(S)-1-(3-溴-苯基)-1-甲基-3-氧代-丁基]-酰胺的制备中所述那样制备。

表11

制备29

(R)-N-((2S)-2-(3-溴苯基)-4-羟基戊-2-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺

PG6-E01647-028

向(R)-2-甲基-丙烷-2-亚磺酸[(S)-1-(3-溴-苯基)-1-甲基-3-氧代-丁基]-酰胺(1.34g，3.5mmol，1.0equiv)在甲醇(20mL)中的溶液中添加四氢硼酸钠(1.4g，35mmol，10.0equiv)。将反应在环境温度下搅拌过夜。用水猝灭该反应，用乙酸乙酯萃取。有机相用硫酸钠干燥，在减压下除去溶剂，得到非对映异构体的混合物。该非对映异构体通过硅胶(120g)色谱法分离，用(50∶50)乙酸乙酯∶己烷到(100∶0)乙酸乙酯∶己烷的梯度洗脱。将第二洗脱异构体分离，在减压下除去溶剂，得到作为单一非对映异构体的标题化合物(45％收率)：MS(m/z)：362，364(M+1)。

表12中的下列化合物基本上如在(R)-N-((2S)-2-(3-溴苯基)-4-羟基戊-2-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的制备中所述那样制备。

表12

²分离标题化合物，作为非对映异构体的混合物使用。

³分离标题化合物，作为非对映异构体的65∶35混合物使用。

制备30

(S)-4-氨基-4-(3-溴-苯基)-戊-2-醇

将氯化氢溶液(5mL；13equiv；20mmol)(4M二

烷溶液)和作为单一非对映异构体的(R)-2-甲基-丙烷-2-亚磺酸[(S)-1-(3-溴-苯基)-3-羟基-1-甲基-丁基]-酰胺(570mg，1.6mmol，1.0equiv)搅拌5分钟。在减压下除去溶剂，用饱和碳酸氢钠水溶液使残留物变成碱性。水相用二氯甲烷萃取。将有机相用硫酸钠干燥，过滤，再在减压下浓缩，得到标题化合物：MS(m/z)：358，360(M+1)。

表13中的下列化合物基本上如在(S)-4-氨基-4-(3-溴-苯基)-戊-2-醇的制备中所述那样制备。

表13

⁴标题化合物作为非对映异构体的混合物分离。

制备31

(4S，6R)-4-(3-溴苯基)-4，6-二甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基氨基甲酸叔丁酯

向作为单一非对映异构体的(S)-4-氨基-4-(3-溴-苯基)-戊-2-醇(410mg，794μmol)在THF(10mL)中的溶液中添加双(三甲基甲硅烷基)三氟乙酰胺(204mg，0.79mmol)。在1小时后，滴加异硫氰酸苯甲酰酯(259mg，1.7mmol)。将反应搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩。向所得残留物中添加5N氯化氢(25mL，125mmol)，将反应加热至100℃。在48小时后，在减压下除去溶剂，将残留物在THF(20mL)和饱和碳酸氢钠(10mL)之间分配。向该混合物中添加二碳酸二叔丁酯(347mg，1.6mmol)，并将反应搅拌48小时。用水稀释该反应，再用二氯甲烷萃取。将有机相用硫酸钠干燥，过滤，再在减压下浓缩。产物通过硅胶提纯，经20分钟用己烷到己烷∶乙酸乙酯(5∶2)的线性梯度洗脱，获得标题化合物(52％收率，70％纯度，通过LCMS测定)：MS(m/z)：399，401(M+1)。

制备32

(4S，6R)-4-(3-溴-4-氟苯基)-4，6-二甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基氨基甲酸叔丁酯

在0℃下，将作为非对映异构体的1∶5混合物的(R)-N-((2S)-2-(3-溴-4-氟苯基)-4-羟基戊-2-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2g，1.0equiv)在二

烷(5mL)中的溶液滴加到4N氯化氢在二

烷(20mL，80mmol)中的溶液中。将该反应加热至室温，并搅拌5分钟。在减压下除去溶剂，用饱和碳酸氢钠水溶液使残留物变成碱性。该水相用二氯甲烷萃取。将有机相用硫酸钠干燥，过滤，再在减压下浓缩。

将所得残留物溶于THF(50mL)，并冷却到0℃。滴加异硫氰酸苯甲酰酯(1.7g，10.5mmol)。将反应搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩。该残留物溶于二

烷(5mL)，转移到厚壁的玻璃反应容器中。向该溶液中添加5N氯化氢(75mL，375mmol)。将反应容器盖封，并加热至100℃。在24小时后，在减压下除去溶剂，将残留物在THF(20mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)之间分配。向该混合物中添加二碳酸二叔丁酯(1.7g，7.9mmol)，并将反应搅拌2小时。用水稀释该反应混合物，再用二氯甲烷萃取。将有机相用硫酸钠干燥，过滤，再在减压下浓缩。该残留物通过柱色谱法使用硅胶(340g)提纯，经25分钟用(0∶100)乙酸乙酯∶己烷到(50∶50)乙酸乙酯∶己烷的梯度洗脱。收集第二洗脱非对映异构体，在减压下除去溶剂，得到595mg的混合物：

制备32：标题化合物，(4S，6R)-4-(3-溴-4-氟苯基)-4，6-二甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基氨基甲酸叔丁酯：MS(m/z)：417，419(M+1)；以及

制备32a：N-((4S，6R)-4-(3-溴-4-氟苯基)-4，6-二甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基)苯甲酰胺：MS(m/z)421，423(M+1)

制备33

(4S)-4-(5-溴-2，4-二氟苯基)-4，6-二甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-胺

向作为非对映异构体的混合物的(4S)-4-氨基-4-(5-溴-2，4-二氟苯基)戊-2-醇(1.3g，4.4mmol)在THF(50mL)中的0℃溶液中滴加异硫氰酸苯甲酰酯(1.4g，1.2mmol)，并将反应搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩。该残留物溶于二烷(5mL)，转移到厚壁的玻璃反应容器中。向该混合物中添加5N氯化氢(75mL，375mmol)，将反应加热至100℃。在36小时后，在减压下除去溶剂，并将残留物溶于水。水混合物用乙酸乙酯萃取。水相用5N NaOH碱化，用3∶1氯仿∶IPA萃取。将氯仿∶IPA相用硫酸钠干燥，过滤，在减压下除去溶剂，得到标题化合物。

将乙酸乙酯提取物用硫酸钠干燥，过滤，再在减压下除去溶剂。让所得残留物通过MeOH平衡的SCX柱，用甲醇洗涤，随后用2NNH₃/MeOH(50mL)洗脱。收集2N NH₃/MeOH洗液，在减压下除去溶剂。该残留物与由氯仿∶IPA萃取获得的标题化合物合并，获得作为(6R和6S)(4S)-4-(5-溴-2，4-二氟苯基)-4，6-二甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-胺的混合物的标题化合物。(64％收率，80％纯度，通过LCMS测定)：MS(m/z)：335，337(M+1)。

制备34

(4S，6R)-4-(5-溴-2，4-二氟苯基)-4，6-二甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基氨基甲酸叔丁酯

向(6R和6S)(4S)-4-(5-溴-2，4-二氟苯基)-4，6-二甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-胺在THF(20mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)中的混合物中添加二碳酸二叔丁酯(900mg，4.1mmol)。在2小时后，反应用水稀释，然后用二氯甲烷萃取。将有机相用硫酸钠干燥，过滤，再在减压下浓缩。该产物通过硅胶提纯，经5分钟用己烷到己烷∶乙酸乙酯(4∶1)的线性梯度洗脱。收集第二洗脱非对映异构体，将溶剂在减压下除去，得到该标题化合物：(43％收率)：MS(m/z)：435，437(M+1)。

制备35

[(4S，6R)-4，6-二甲基-4-(3-嘧啶-5-基-苯基)-5，6-二氢-4H-[1，3]噻嗪-2-基]-氨基甲酸叔丁酯

向(4S，6R)-4-(3-溴苯基)-4，6-二甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基氨基甲酸叔丁酯在1，2-二甲氧基乙烷∶水∶乙醇[(3∶1.5∶1)，12mL]中的100℃溶液中一次性添加嘧啶-5-硼酸(128mg，5.9mmol，2.5equiv)、氯化双(三苯基膦)钯(II)(29mg，41μmol，0.1equiv)和碳酸铯(1.24g，1.24mmol，3equiv)。在20分钟后，将反应冷却到环境温度，用水稀释，并用二氯甲烷萃取。将有机相用硫酸钠干燥，过滤，再在减压下浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱法提纯，经20分钟用己烷到己烷∶乙酸乙酯(5∶2)的线性梯度洗脱，得到标题化合物(39％收率)：MS(m/z)：399(M+1)。

表14中的下列化合物基本上如在[(4S，6R)-4，6-二甲基-4-(3-嘧啶-5-基-苯基)-5，6-二氢-4H-[1，3]噻嗪-2-基]-氨基甲酸叔丁酯的制备中所述那样来制备。

表14

⁵作为标题化合物和N-((4S，6R)-4-(3-溴-4-氟苯基)-4，6-二甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基)苯甲酰胺的混合物分离。MS(m/z)：421(M+1)。

制备36

1-溴-3-(丙-1-烯-2-基)苯

将甲基三苯基溴化

(35.7g，97.9mmol，1.3equiv)悬浮于四氢呋喃(100mL)中，再冷却至0℃。经由加料漏斗，将正丁基锂(2.5M己烷溶液，27.0g，97.7mmol，39.2mL，1.3equiv)缓慢加入到该混合物中。将所得溶液在0℃下搅拌1小时。经由加料漏斗缓慢添加3-溴乙酰苯(15.0g，75.3mmol，10.0mL，1.0equiv)在四氢呋喃(50ml)中的溶液。将该所得混合物加热至室温，并搅拌3小时。将反应冷却至0℃，用饱和氯化铵水溶液猝灭。将各层分配在分液漏斗中，水相用己烷萃取。合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，再在室温下静置过夜。滗析有机相，与沉淀分离，并在减压下浓缩。所得固体用己烷稀释，再过滤。沉淀用己烷洗涤。将滤液浓缩，所得混合物通过硅胶快速柱色谱法(己烷)提纯，得到标题化合物(83％收率)：¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ7.59(t，1H，J＝1.72Hz)，7.40-7.36(m，2H)，7.18(t，1H，J＝8Hz)，5.36(s，1H)，5.12-5.10(m，1H)，2.13-3.11(m，3H)。

表15中的下列化合物基本上按照1-溴-3-(丙-1-烯-2-基)苯的制备法来制备。

表15

制备No.	化学名称	物理数据
			36a	2-溴-1-氟-4-(丙-1-烯-2-基)苯	参见下文⁶

⁶ ¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ7.61(dd，1H，J＝6.8，2.2Hz)，7.36-7.32(m，1H)，7.05(t，1H，J＝8.4Hz)，5.29(s，1H)，5.09-5.07(m，1H)，2.10-2.09(m，3H)

制备37

4-(3-溴苯基)-2-羟基戊-4-烯酸乙酯

向2-溴-1-氟-4-(丙-1-烯-2-基)苯(12.3g，62.2mmol，1.0equiv)在乙腈(124mL，0.5M)中的溶液中添加乙醛酸乙酯(38.1g，37mL，187mmol，3equiv)和三氟甲烷磺酸镱水合物(7.72g，12.4mmol，0.2equiv)。将该混合物在室温下搅拌过夜。将混合物在减压下浓缩，用***稀释。将该所得溶液用水洗涤两次。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，再在减压下浓缩。使用0-100％乙酸乙酯/己烷的梯度，将该残留物分两批通过快速柱色谱法上硅胶(330g)提纯，获得标题化合物(87％收率)：¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ7.53(t，1H，J＝1.9Hz)，7.41-7.37(dt，1H)，7.33-7.30(dt，1H)，7.18(t，1H，J＝7.6Hz)，5.37(s，1H)，5.22(s，1H)，4.26-4.21(m，1H)，4.17-3.99(m，2H)，2.99(dd，J＝14.8，4.8Hz)，2.83-2.72(m，2H)，1.23(t，3H，J＝7.6Hz)。

表16中的下列化合物基本上根据4-(3-溴苯基)-2-羟基戊-4-烯酸乙酯的制备法来制备。

表16

制备No.	化学名称	物理数据
			37a	4-(3-溴-4-氟苯基)-2-羟基戊-4-烯酸乙酯	参见下文⁷

⁷ ¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ7.59-7.55(m，1H)，7.32-7.27(m，1H)，7.08-7.03(m，1H)，5.33(s，1H)，5.20(s，1H)，4.26-4.20(m，1H)，4.19-4.02(m，2H)，2.96(dd，J＝14.8，4.8Hz)，2.80-2.73(m，2H)，1.24(t，3H，J＝7.6Hz)

制备38

2-氨基-4-(3-溴苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-6-甲酸乙酯

向4-(3-溴苯基)-2-羟基戊-4-烯酸乙酯(5.1g，17mmol)在乙腈(68mL)中的溶液中添加2，6-二甲基吡啶(2.19g，20.4mmol，1.2equiv)。将反应冷却到0℃，经大约5分钟滴加三氟甲烷磺酸酐(3.30mL，19.6mmol，1.15equiv)。将该混合物在0℃下搅拌20分钟。添加硫脲(2.59g，34.0mmol，2equiv)，并将反应加热至室温。在45分钟后，将该混合物在减压下浓缩。然后在室温下，经由大的移液管，将所得粘性的橙色油添加到搅拌硫酸(17.8M，8mL)中。在20分钟后，将该混合物滴加到强力搅拌的K₂CO₃(约50g)在50mL H₂O中的0℃溶液中。添加另外的水，以便在猝灭过程中在固体形成时能够进行搅拌。通过过滤来收集棕褐色/橙色的固体。用空气流将固体在滤纸上干燥1小时，获得作为非对映异构体的混合物的标题化合物，其不用进一步提纯而使用：MS(m/z)：357，359(M+1)。

表17中的下列化合物基本上如在2-氨基-4-(3-溴苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-6-甲酸乙酯的制备中所述那样制备。

表17

⁸外消旋非对映异构体

制备39

4-(3-溴苯基)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-6-甲酸乙酯

向2-氨基-4-(3-溴苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-6-甲酸乙酯(6.1g，17mmol)在1，4-二

烷(35mL)、水(18mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(18mL)中的悬浮液中添加二碳酸二叔丁酯(7.42g，34.0mmol，2equiv)。将该混合物搅拌大约60小时。反应物用水稀释，再用CH₂Cl₂萃取三次。有机层经Na₂SO₄干燥，过滤，再在减压下浓缩，获得棕色油。该油通过快速柱色谱法上硅胶(150g)提纯，用0-100％乙酸乙酯/己烷的梯度洗脱，得到作为非对映异构体的混合物的标题化合物(64％收率)：MS(m/z)：457，459(M+1)

表18中的下列化合物基本上根据4-(3-溴苯基)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-6-甲酸乙酯的制备法来制备。

表18

⁹外消旋非对映异构体

制备40

(4S，6S)-4-(3-溴苯基)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-6-甲酸乙酯

4-(3-溴苯基)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-6-甲酸乙酯(3.5g，7.7mmol)通过手性HPLC分两阶段提纯：(柱：ChiralcelOJ 8×32cm；洗脱剂：1∶3(3A醇∶庚烷)；流速：400ml/min，紫外线240nm)，提供了含有3个峰中的峰1和2的截分1；然后峰1和2进一步通过附加手性色谱法(柱：Chiralcel OD 8×32cm；洗脱剂1∶9(异丙醇∶庚烷)；流速：400ml/min，紫外线240nm)来提纯。在减压下浓缩各级分之后，第二洗脱异构体的分离提供了标题化合物(14％收率)。

制备41

(+/-)(4S，6S)-4-(3-溴苯基)-6-(羟甲基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基氨基甲酸叔丁酯

向4-(3-溴苯基)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-6-甲酸乙酯(2.0g，4.4mmol)在四氢呋喃(87mL)和乙醇(25mL)中的0℃溶液中添加硼氢化锂(289mg，13.1mmol，3equiv)。将该反应加热至室温，并搅拌4小时。反应混合物用饱和NH₄Cl猝灭。分离各层，水层用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用饱和NaCl水溶液洗涤，再用Na₂SO₄干燥。将该混合物过滤，再浓缩，获得浅黄色油。该油通过柱色谱法上硅胶(120g)提纯，使用0-100％乙酸乙酯/己烷的梯度，得到标题化合物(29％收率)：MS(m/z)：415，417(M+1)。

制备42

(4S，6S)-4-(3-溴苯基)-6-(羟甲基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基氨基甲酸叔丁酯

(+/-)(4S，6S)-4-(3-溴苯基)-6-(羟甲基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基氨基甲酸叔丁酯(870mg，2.1mmol)通过HPLC手性分离来提纯：(柱：Chiralpak AD 8×36cm×20μm；洗脱剂：100％3A乙醇；流速：400ml/min，紫外线250nm)。分离第二洗脱异构体，以提供对映异构体富集的标题化合物(38.5％收率)MS(m/z)：415，417(M+1)。

制备43

(+/-)(4S，6S)-6-(羟甲基)-4-甲基-4-(3-(嘧啶-5-基)苯基)-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基氨基甲酸叔丁酯

向(+/-)(4S，6S)-4-(3-溴苯基)-6-(羟甲基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基氨基甲酸叔丁酯(150mg，0.36mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(4.5mL)、乙醇(1.5mL)和水(2.3mL)中的110℃溶液中添加嘧啶-5-硼酸(112mg，0.90mmol，2.5equiv)、碳酸铯(353mg，1.08mmol，3equiv)和氯化双(三苯基膦)钯(II)(25mg，0.036mmol，0.1equiv)。将该反应在110℃下搅拌。20分钟后，反应混合物用EtOAc和H₂O稀释。分离各层，水相用EtOAc萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，再在减压下浓缩。该粗残留物通过柱色谱法上硅胶(5％ MeOH/DCM)提纯，得到标题化合物(29％收率)：MS(m/z)：415(M+1)。

表19中的下列化合物基本上根据(+/-)(4S，6S)-6-(羟甲基)-4-甲基-4-(3-(嘧啶-5-基)苯基)-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基氨基甲酸叔丁酯的制备法来制备。

表19

制备44

(+/-)(4S，6S)-4-(3-溴苯基)-6-(2-羟基丙-2-基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基氨基甲酸叔丁酯

向2-氨基-4-(3-溴苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-6-甲酸乙酯(250mg，0.55mmol)在四氢呋喃(5.5mL)中的0℃溶液中添加氯化甲基镁(0.58mL，1.75mmol，3.2equiv)。15分钟以后，添加附加的氯化甲基镁(0.38mL，1.2mmol，2equiv)。30分钟后，反应混合物用饱和NH₄Cl水溶液猝灭，再用乙酸乙酯稀释。分离各层，水层用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用饱和NaCl水溶液洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤，再在减压下浓缩。该粗残留物通过柱色谱法上硅胶(80g)提纯，用0-100％乙酸乙酯/己烷的梯度洗脱，得到标题化合物(26％收率)：MS(m/z)：443，445(M+1)。

表20中的下列化合物基本上根据(+/-)(4S，6S)-4-(3-溴苯基)-6-(2-羟基丙-2-基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基氨基甲酸叔丁酯的制备法来制备。

表20

制备45

(+/-)(4S，6S)-4-(4-氟-3-(嘧啶-5-基)苯基)-6-(2-羟基丙-2-基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基氨基甲酸叔丁酯

向(4S，6S)-4-(3-溴-4-氟苯基)-6-(2-羟基丙-2-基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基氨基甲酸叔丁酯(1.11g，2.41mmol，1.0equiv)在1，2-二甲氧基乙烷(22mL)和水(7mL)中的100℃溶液中添加嘧啶-5-硼酸(1.2g，9.6mmol，4equiv)、氯化双(三苯基膦)钯(II)(508mg，0.723mmol，0.3equiv)和碳酸铯(2.36g，7.2mmol，3equiv)。25分钟以后，将混合物冷却到室温。反应混合物用EtOAc稀释，在EtOAc和水之间分配。水相用EtOAc萃取三次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，再在减压下浓缩，获得粗产物。该粗残留物通过柱色谱法上硅胶(80g)提纯，用EtOAc洗脱，得到：

制备45：标题化合物(460mg，41％收率)：MS(m/z)：461(M+1)；以及

制备45a：(+/-)2-((4S，6S)-2-氨基-4-(4-氟-3-(嘧啶-5-基)苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-6-基)丙-2-醇(145mg)：MS(m/z)：361(M+1)。

表21中的下列化合物基本上根据(+/-)(4S，6S)-4-(4-氟-3-(嘧啶-5-基)苯基)-6-(2-羟基丙-2-基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基氨基甲酸叔丁酯的制备法来制备。

表21

¹⁰外消旋化合物通过以下在制备45中所述的手性色谱法条件来制备和提纯。

制备46

(4S，6S)-4-(4-氟-3-(嘧啶-5-基)苯基)-6-(2-羟基丙-2-基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基氨基甲酸叔丁酯

(+/-)(4S，6S)-4-(4-氟-3-(嘧啶-5-基)苯基)-6-(2-羟基丙-2-基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基氨基甲酸叔丁酯(455mg，0.99mmol)通过HPLC手性分离(柱：Chiralpak AD-H 2.1×25cm×5μm；洗脱剂：20％EtOH/CO₂；流速：70ml/min，紫外线225nm)来提纯。分离第二洗脱异构体，以提供对映异构体富集的标题化合物(29％)MS(m/z)：461(M+1)。

实施例

实施例1

(S)-4-(3-(2-氟吡啶-3-基)苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-胺二盐酸盐

在0℃下，向(S)-4-(3-(2-氟吡啶-3-基)苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-胺(160mg，0.531mmol)在THF(4mL)中的溶液中添加HCl在二烷(2mL)中的饱和溶液。将该反应混合物在室温下搅拌4小时。在减压下除去溶剂。所得固体用无水***反复洗涤，在减压下干燥，获得标题化合物(87％收率)：MS(m/z)：302(M+1)。

实施例2

(S)-4-[3-(5-氯-2-氟-吡啶-3-基)-苯基]-4-甲基-5，6-二氢-4H-[1，3]噻嗪-2-基胺二盐酸

2785443，PG6-E01268-074

将(S)-N-(4-[3-(5-氯-2-氟-吡啶-3-基)-苯基]-4-甲基-5，6-二氢-4H-[1，3]噻嗪-2-基}-乙酰胺(430mg，1.1mmol)在三氟乙酸(50mL)和甲醇(50mL)中的溶液在60℃下搅拌8小时。在减压下除去溶剂。将残留物溶于水中，用饱和碳酸氢盐中和，再用乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸钠干燥，过滤，再在减压下浓缩，获得残留物。该残留物通过硅胶快速柱色谱法提纯，用乙酸乙酯洗脱。将所得胺溶于二氯甲烷中，将HCl气体鼓泡到溶液中30秒。在减压下除去溶剂，得到标题化合物(52％)：MS(m/z)：336(M+1)。

在表22中的下列化合物基本上如在(S)-4-[3-(5-氯-2-氟-吡啶-3-基)-苯基]-4-甲基-5，6-二氢-4H-[1，3]噻嗪-2-基胺二盐酸盐的制备中所述那样制备。

表22

¹¹通过反相制备HPLC提纯：方法A

实施例5

(S)-4-(2，4-二氟-5-嘧啶-5-基-苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-[1，3]噻嗪-2-基胺

在环境温度下向(S)-[4-(2，4-二氟-5-嘧啶-5-基-苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-[1，3]噻嗪-2-基]-氨基甲酸叔丁酯(263mg，625μmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中鼓入HCl气体达1分钟。将反应用隔膜密封并搅拌18小时。在减压下除去溶剂，得到标题化合物(＞95％收率)：MS(m/z)：321(M+1)。

表23中的下列化合物基本上根据(S)-4-(2，4-二氟-5-嘧啶-5-基-苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-[1，3]噻嗪-2-基胺的制备法来制备。

表23

¹²通过在乙腈中结晶来提纯

¹³通过反相制备HPLC方法A提纯

¹⁴使用1M HCl的***溶液代替HCl(g)

实施例18

(S)-4-甲基-4-(3-嘧啶-5-基-苯基)-5，6-二氢-4H-[1，3]噻嗪-2-基胺二盐酸盐

将(S)-N-[4-甲基-4-(3-嘧啶-5-基-苯基)-5，6-二氢-4H-[1，3]噻嗪-2-基]-乙酰胺(2.7g，8.3mmol，1.0equiv)在5N氯化氢(50mL，250mmol，30equiv)中的溶液在100℃下搅拌2小时。将反应冷却，并在减压下除去挥发物。将所得残留物溶于水中，并用乙酸乙酯萃取。水相用饱和碳酸氢钠水溶液中和，并用乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸钠干燥，过滤，再在减压下浓缩，获得残留物。残留物通过硅胶塞过滤，并用乙酸乙酯洗涤。该硅胶塞进一步用含有乙酸乙酯和10％异丙胺的乙酸乙酯洗涤。收集含有10％异丙胺的乙酸乙酯洗液，并在减压下除去溶剂。将所得游离胺溶于含有14mL 1N HCl的100mL的水溶液中。该所得溶液冷冻干燥，得到标题化合物(81％收率)：MS(m/z)：285(M+1)。

表24中的下列化合物基本上如在(S)-4-甲基-4-(3-嘧啶-5-基-苯基)-5，6-二氢-4H-[1，3]噻嗪-2-基胺二盐酸盐的制备中所述那样制备。

表24

¹⁵通过从2-5％甲醇/乙腈中结晶出粗HCl盐来提纯。

¹⁶通过HPLC方法A来提纯

实施例22

(4S，6R)-4-(4-氟-3-(嘧啶-5-基)苯基)-4，6-二甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-胺二盐酸盐

在环境温度下向(4S，6R)-4-(4-氟-3-(嘧啶-5-基)苯基)-4，6-二甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基氨基甲酸叔丁酯和N-((4S，6R)-4-(3-溴-4-氟苯基)-4，6-二甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基)苯甲酰胺(360mg)在二氯甲烷(10mL)中的1∶1混合物中鼓泡入HCl气体达1分钟。将反应用隔膜密封并搅拌18小时。在减压下除去溶剂。将所得残留物溶于水中，并用乙酸乙酯萃取。将该有机相用硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩，得到作为残留物的N-((4S，6R)-4-(3-溴-4-氟苯基)-4，6-二甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基)苯甲酰胺。向所得残留物中添加5N HCl(5mL)，将反应加热至100℃，保持2小时。在减压下除去溶剂，得到粗标题化合物。

来自初始乙酸乙酯洗涤的水相用饱和碳酸氢钠中和，再用(3∶1)CHCl₃∶异丙醇萃取。将有机相用硫酸钠干燥，过滤，再在减压下浓缩。该材料与粗产物合并，并通过制备HPLC：Xterra

RP18(30×300mm)柱在环境温度和40ml/min流速下提纯。该洗脱***的组成为等度0∶100(乙腈∶(0.1％HCl/H₂O))，1-5分钟，随后是从10∶90(乙腈∶(0.1％HCl/H₂O))到30∶70(乙腈∶(0.1％HCl/H₂O))的线性梯度，20分钟。将各级分合并，并在减压下浓缩，得到标题化合物(50％收率)：MS(m/z)：317(M+1)。

实施例23

(+/-)2-((4S，6S)-2-氨基-4-(4-氟-3-(嘧啶-5-基)苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-6-基)丙-2-醇

将氯化氢气体鼓泡到(+/-)(4S，6S)-6-(2-羟基丙-2-基)-4-甲基-4-(3-(嘧啶-5-基)苯基)-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基氨基甲酸叔丁酯(33mg，0.075mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中，并将所得混合物密封，在室温下搅拌16小时。将反应混合物在减压下浓缩，通过MeOH平衡的SCX柱来提纯，用7N NH₃的MeOH溶液洗脱。将所得游离碱溶于MeOH，再添加Et₂O(大约5equiv)中的1N HCl。将该混合物浓缩，与Et₂O共蒸发两次，获得标题化合物(87％收率)：MS(m/z)：343(M+1)。

实施例24

2-((4S，6S)-2-氨基-4-(4-氟-3-(嘧啶-5-基)苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-6-基)丙-2-醇

将(4S，6S)-6-(2-羟基丙-2-基)-4-甲基-4-(3-(嘧啶-5-基)苯基)-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基氨基甲酸叔丁酯(221mg，0.50mmol)在三氟乙酸(2mL)中的溶液在室温下搅拌80分钟。将该混合物直接添加到MeOH平衡的SCX柱中。该柱用MeOH(100ml)洗涤，产物用7N NH₃的MeOH(100ml)溶液洗脱。将溶液在减压下浓缩。该残留物用CH₂Cl₂稀释，鼓泡入HCl(g)达5分钟。将反应混合物浓缩，得到标题化合物(67.5％收率)：MS(m/z)：343(M+1)。

表25中的下列化合物基本上如在2-((4S，6S)-2-氨基-4-(4-氟-3-(嘧啶-5-基)苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-6-基)丙-2-醇的制备中所述那样制备。

表25

体外试验程序：

对于体外酶促和细胞试验，在DMSO中制备试验化合物，以配制10mM贮备溶液。该贮备溶液在DMSO中系列稀释，以便在96孔圆底板中用10mM到1pM的最终化合物浓度获得10点稀释曲线，然后进行体外酶促试验和全细胞分析。

体外蛋白酶抑制试验：

BACE FRET试验

如上所述制备试验化合物的系列稀释液。在KH₂PO₄缓冲液中将化合物进一步稀释20倍。将10μL的各稀释液加入到含有反应混合物(25μL的50mM KH₂PO₄，pH 4.6，1mM TRITON

X-100，1mg/mL牛血清白蛋白，以及15μM的FRET底物)的相应低蛋白结合黑板的A排到H排的每一孔中(参见Yang等人，J.Neurochemistry，91(6)1249-59(2004))。将该内容物在板振荡器上充分混合10分钟。将KH₂PO₄缓冲液中的15μL的200pM人BACE(1-460):Fc(参见Vasser等人，Science，286，735-741(1999))加入到含有底物和试验化合物的板中，以引发反应。在板振荡器上简短混合之后，在激发波长355nm和发射波长460nm下记录时间0时的混合物的RFU。反应板用铝箔覆盖，保持在室温下的黑暗加湿烘箱内16到24小时。在相同的激发和发射设置下记录在孵育结束时的RFU。在时间0和孵育结束时的RFU的差代表在化合物治疗下的BACE活性。绘制RFU差与抑制剂浓度的关系曲线，将曲线用四参数逻辑斯谛方程式拟合，获得EC₅₀和IC₅₀值。(参见Sinha等人，Nature，402，537-540(2000))。

基本上如上所述测试这里的实施例化合物，并且显示了低于1μM的对于BACE的IC₅₀值。基本上如上所述测试以下的实施例化合物，且显示了以下对于BACE的活性：

表26

实施例	BACE IC₅₀(nM)
		5	239
19	420
		12	833
21	867

这些数据证明表26的化合物体外抑制提纯的重组BACE酶活性。

人BACE的表达

通过室温-PCR从总脑cDNA克隆人(登录号：AF190725)。将对应于氨基酸序列#1-460的核苷酸序列***编码人IgG₁(Fc)多肽的cDNA中(Vassar等人，1999)。将BACE(1-460)和人Fc的这一融合蛋白(命名为huBACE:Fc)构建为pJB02载体。人BACE(1-460):Fc(huBACE:Fc)在HEK293细胞中瞬时表达。将每一构建体250μg cDNA与Fugene 6混合，并加入到1L HEK293细胞中。在转染之后4天，采集条件培养基用于纯化。

huBACE:Fc的纯化

huBACE:Fc通过蛋白A色谱法纯化。将酶以小等份试样在-80℃下储存。

用于测定β-分泌酶活性抑制的全细胞试验

HEK293Swe全细胞试验

用于测定β-分泌酶活性抑制的常规全细胞试验利用人胚肾细胞系HEK293p(ATCC登录号CRL-1573)，其稳定地表达含有天然双突变Lys651Met652到Asn651Leu652，通常称为瑞典突变(表示为HEK293/APP751sw)的人APP751cDNA，且显示过量产生Aβ(Citron等人，Nature，360，672-674(1992))。体外Aβ减少试验在文献中已有描述(参见Dovey等人，Journal of Neurochemistry，76，173-181(2001)；Seubert等人，Nature，361，260(1993)；以及Johnson-Wood等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，94，1550-1555(1997))。

将细胞(HEK293/APP751sw，3.5×10⁴细胞/孔，含有200μL培养基，含有10％FBS的DMEM)在存在/不存在所需浓度的抑制剂(在DMSO中稀释)的情况下在37℃下孵育4-24小时。在孵育结束时，分析条件培养基的β-分泌酶活性的证据，例如通过分析Aβ肽而进行分析。总Aβ肽(Aβ1-x)通过夹心ELISA测定，使用单克隆266作为捕获抗体，且使用生物素化3D6作为报告抗体。或者，Aβ1-40和Aβ1-42肽通过夹心ELISA来测定，使用单克隆2G3作为Aβ1-40的捕获抗体，并且使用单克隆21F12作为Aβ1-42的捕获抗体。Aβ1-40和Aβ1-42的ELISA均使用生物素化3D6作为报告抗体。在化合物处理之后的条件培养基中释放的Aβ的浓度对应于在这种条件下的BACE的活性。绘制10点抑制曲线，与四参数逻辑斯谛方程拟合，获得Aβ降低效应的EC₅₀和IC₅₀值。基本上如上所述测试以下的实施例化合物，且显示了以下的Aβ降低效应活性：

表27

这些数据证明表27的化合物体外抑制细胞内的天然内源性人BACE。

PDAPP原代神经元试验

在由PDAPP转基因胚胎小鼠产生的原代神经元培养物中也进行确认性全细胞试验。由胚龄16天PDAPP晶胚制备原代皮层神经元，在96孔板(15×10⁴细胞/孔，在DMEM/F12(1∶1)附加10％FBS中)中培养。体外4-6日之后，培养基用含有B27补液的无血清DMEM/F12(1∶1)替换，神经元在存在/不存在所需浓度的抑制剂(在DMSO中稀释)的情况下在37℃下孵育24小时。在孵育结束时，分析条件培养基的β-分泌酶活性的证据，例如通过分析Aβ肽进行分析。总Aβ肽(Aβ1-x)通过夹心ELISA测定，使用单克隆266作为捕获抗体，且使用生物素化3D6作为报告抗体。或者，Aβ1-40和Aβ1-42肽通过夹心ELISA来测定，使用单克隆2G3作为Aβ1-40的捕获抗体，并且使用单克隆21F12作为Aβ1-42的捕获抗体。Aβ1-40和Aβ1-42的ELISA均使用生物素化3D6作为报告抗体。在化合物处理之后的条件培养基中释放的Aβ的浓度对应于在这种条件下的BACE的活性。绘制10点抑制曲线，与四参数逻辑斯谛方程拟合，获得Aβ降低效应的EC₅₀和IC₅₀值。基本上如上所述测试以下的实施例化合物，且显示了以下的Aβ降低效应活性：

表28

这些数据证明表28的化合物体外抑制细胞内的天然内源性鼠BACE。

β-分泌酶的体内抑制

几种动物模型，包括小鼠、豚鼠、狗和猴子，可用来筛选在化合物处理之后的β-分泌酶活性的体内抑制。本发明中使用的动物可以是野生型，转基因的或基因敲除动物。例如，如在Games等人，Nature 373，523-527(1995)中所述那样制备的PDAPP小鼠模型，以及其他非转基因或基因敲除动物，可用于分析在抑制化合物的存在下产生Aβ和sAPPβ的体内抑制。一般，对2-12个月龄PDAPP小鼠、基因敲除小鼠或非转基因动物给予在载体如玉米油、环糊精、磷酸盐缓冲液、PHARMASOLVE或其他适合的载体中配制的化合物。在化合物给药之后1-24小时，处死动物，取下脑以及脑脊液和血浆用于分析Aβ、C99和sAPP片段。(参见Dovey等人，Journal of Neurochemistry，76，173-181(2001)；以及Johnson-Wood等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，94，1550-1555(1997))。

对于标准功效研究，对动物给予各种浓度的化合物，并与同时给药的载体治疗对照组比较。对于某些时间进程研究，从选择的动物获取脑组织、血浆或脑脊液，在时间0开始建立基线。将化合物给药于其他组，并在给药之后的各种时间处死。从所选择的动物获取脑组织、血浆或脑脊液，分析包括Aβ肽、sAPPβ和其他APP片段在内的APP裂解产物的存在，例如通过特异性夹心ELISA试验来分析。在试验期结束时，处死动物，分析Aβ肽、C99和sAPPβ在脑组织、血浆或脑脊液中的存在。还分析APP转基因动物的脑组织在化合物处理之后的β淀粉样蛋白斑块的量。

给药抑制化合物的动物(PDAPP或其它APP转基因或非转基因小鼠)可以证明，与载体治疗对照或零时对照相比，脑组织、血浆或脑脊液中的Aβ或sAPPβ减少和脑组织中的β淀粉样蛋白斑块减少。例如，在将100mg/kg皮下剂量的实施例19的化合物给药于幼年雄性PDAPP小鼠之后3小时，与载体治疗小鼠相比，大脑皮质中的Aβ1-x肽、C99和sAPPb水平分别减少大约30％、50％和20％。类似地，在将30mg/kg皮下剂量的实施例5的化合物给药于幼年雄性PDAPP小鼠之后3小时，与载体治疗小鼠相比，Aβ1-x肽、C99和sAPPb水平分别减少大约50％、45％和30％。与脑Aβ、C99和sAPPb中的改变一致，在口服给药10mg/kg剂量的实施例5的化合物之后3小时，血浆和CSF Aβ1-x水平分别减低大约50％和60％。

对WO 2007/049532中例举的化合物及其对映异构体基本上如以上试验中所述进行测试，并显示出以下活性：

表29¹⁷

¹⁷表29中的所有数据作为IC₅₀(nM)报告。

本发明的化合物优选作为通过各种途径给药的药物组合物配制。最优选，这种化合物用于口服。这种药物组合物及其制备方法是本领域所公知的。例如参见Remington：The Science and Practice of Pharmacy(A.Gennaro等人编著，第19版，Mack Publishing Co.，1995)。

式I的化合物一般在宽剂量范围内是有效的。例如，每日剂量正常是在约0.01到约30mg/kg的体重的范围内。在有些情况下在上述范围的下限以下的剂量水平可能是足够的，而在其它情况下可以使用更大的剂量，而不引起任何有害的副作用，因此，以上剂量范围不打算以任何方式限制本发明的范围。很清楚，实际上给药的化合物量将由医生根据相关情况来决定，包括所要治疗的病症、所选择的给药途径、实际给药的一种或多种化合物、个体患者的年龄、体重和反应以及患者症状的严重度。

Claims

1.式I的化合物或其药用盐：

其中：

n是0、1或2；

R¹是嘧啶基，任选被氯或氟取代的吡嗪基，或任选被各自独立选自氯、氟和C₁-C₃烷氧基的一个或两个取代基取代的吡啶基；

R²在所有情况下独立地选自氯或氟；

R³是氢或任选被羟基取代的C₁-C₄烷基；以及

R⁴是氢或C₁-C₃烷基。

2.根据权利要求1所述的化合物或其药用盐，其中R¹是嘧啶基，在所有情况下任选被独立地选自氯、氟或甲氧基中的基团取代一次或两次的吡啶基，或任选被氟取代的吡嗪基；R²是氯或氟；R³是氢，甲基，被羟基取代的甲基，或被羟基取代的异丙基；R⁴是氢；以及n是0、1或2。

3.根据权利要求1-2的任一项所述的化合物或其药用盐，其中R¹是嘧啶基，任选被氟取代的吡啶基，或者任选被氟取代的吡嗪基；R²是氟；R³是氢或甲基；R⁴是氢；以及n是1或2。

4.根据权利要求1-3的任一项所述的化合物或其药用盐，其中R¹是嘧啶基，R²是氟，R³是氢，R⁴是氢，以及n是2。

5.根据权利要求1-4的任一项所述的化合物或其药用盐，其中与氨基噻嗪的氮相邻的手性中心的构型为(S)。

6.化合物4-(2，4-二氟-5-(嘧啶-5-基)苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-胺：

或其药用盐。

7.根据权利要求6所述的化合物或其药用盐，其中该化合物是(S)-4-(2，4-二氟-5-(嘧啶-5-基)苯基)-4-甲基-5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-胺：

8.药物制剂，其包含根据权利要求1-7的任一项所述的化合物或其药用盐与药用载体、稀释剂或赋型剂。

9.用于治疗的根据权利要求1-7的任一项所述的化合物。

10.用于治疗阿尔茨海默氏病的权利要求1-7的任一项所述的化合物。