CN101951775A

CN101951775A - 四氢噻吩并吡啶

Info

Publication number: CN101951775A
Application number: CN2009801062445A
Authority: CN
Inventors: J·S·德本哈姆; J·J·黑尔; C·B·马森-杜根; T·F·沃尔什
Original assignee: Schering Corp
Current assignee: Merck Sharp and Dohme LLC
Priority date: 2008-02-25
Filing date: 2009-02-11
Publication date: 2011-01-19
Also published as: US8445680B2; US20110009425A1; EP2257169B1; JP2011513222A; CA2712583A1; EP2257169A1; AU2009217541A1; EP2257169A4; WO2009108497A1

Abstract

本发明涉及四氢噻吩并吡啶化合物，其用作治疗贫血等病症的HIF脯氨酰羟化酶抑制剂。

Description

四氢噻吩并吡啶

发明背景

向细胞和组织供氧不足与贫血和局部贫血有关，贫血被定义为血液携氧能力不足，而局部贫血则是由于血管收缩或堵塞导致供血受限制。贫血可能是由于红细胞的损失(出血)、红细胞被过度破坏(溶血)或红细胞生成(从在骨髓中发现的前体生成红细胞)不足而引起的。贫血的症状可包括虚弱、眩晕、疲劳、苍白、认知功能受损以及生命质量的整体降低。慢性和/或严重贫血可导致心肌、脑或周围局部缺血的加重以及导致心力衰竭。局部缺血定义为组织或器官的绝对或相对缺氧，并且可由病症例如动脉粥样硬化、糖尿病、血栓栓塞、低血压等引起。心脏、脑和肾对由于供血不足而引起的局部缺血性应激尤其敏感。

贫血的主要药物治疗是给药重组人***(EPO)的某些变体。对于与肾病有关的贫血、化疗引起的贫血、HIV治疗导致的贫血或者失血引起的贫血，给药重组EPO来增加激素的供应，校正血红细胞的不足以及提高血液携氧能力。EPO替代治疗并不总是足以刺激最佳促红细胞生成(例如，在患有铁加工缺陷的患者中)，并且具有相关风险。

缺氧诱导因子(HIF)已经被鉴定为对于低氧的细胞响应的主要调节物。HIF是一种杂二聚基因转录因子，其由高度调控的α-亚基(HIF-α)和组成型表达的β-亚基(HIF-β，也称为ARNT或芳基烃受体核转运蛋白)组成。据报道，HIF靶基因与红细胞生成(例如，***(EPO)和EPO受体)、糖酵解和血管生成(例如，血管内皮生长因子(VEGF))的各个方面有关。涉及铁吸收、转运和利用以及血红素合成的蛋白的基因也是HIF的靶物。

在正常的氧化作用下，HIF-α是与分子氧反应的底物，该反应受铁(II)-、2-酮基戊二酸(2-ketoglutarate)-和抗坏血酸(ascorbate)-族依赖性双加氧酶催化，它们分别被称为PHD-1(EGLN2或产卵异常9同系物2、PHD2(EGLN1)和PHD3(EGLN3)。HIF-α的脯氨酸残基被羟基化(例如HIF-1α的Pro-402和Pro-564)，所得产物是肿瘤抑制蛋白von-HippelLindau的靶物，该肿瘤抑制蛋白von-HippelLindau是参与蛋白质泛素化的E3泛素连接酶多蛋白复合体的组分。在低氧化作用下，HIF-α羟基化反应的效率较低，HIF-α能够与

发生二聚化，HIF二聚体被转运到细胞核中，其中，该二聚体与HIF靶基因的缺氧反应增强子元件结合。

已知，在缺氧条件下以及暴露于缺氧模拟剂之后，HIF的细胞水平会增加。缺氧模拟剂包括但不限于特定金属离子(例如，钴、镍、锰)、铁螯合剂(例如，去铁敏)和2-酮戊二酸(2-ketoglurate)类似物(例如，N-草酰基甘氨酸)。本发明化合物抑制HIF脯氨酰羟化酶(PHD-1、PHD-2、PHD-3)，还可以调节HIF水平。因此，这些化合物可用于治疗和/或预防其中期望调节HIF的疾病或病症，比如贫血和局部缺血。作为重组***治疗的替代选择，本发明化合物提供了用于控制贫血的更简单和更广谱的方法。

发明简述

本发明涉及式I的化合物：

其抑制HIF脯氨酰羟化酶，涉及其在增强***的内源生成中的应用，及其用于治疗与***的内源生成降低有关的病症，比如贫血等病症，以及包括这样的化合物和可药用载体的药物组合物。

发明详述

本发明提供式I的化合物及其可药用盐和溶剂化物：

其中

R⁸选自氢，任选地被羟基、-SH、-NH₂或-CO₂H取代的C_1-6烷基，和任选地被羟基、-SH、-NH₂或-CO₂H取代的C_3-6环烷基；

n为1或2；

X或Y之一为-S(O)_n，另一个为CR⁴R⁵；

R¹选自：

-C_1-10烷基，

-C_2-10链烯基，

-C_5-10环烯基，

-C_2-10炔基，

-C_0-10烷基芳基，

-C_0-10烷基杂环基，

-C_0-10烷基-C_0-10环烷基，和

全氟C_1-6烷基；

其中在R¹中，所述烷基、链烯基、炔基、环烯基、芳基、杂环烷基、杂环基和环烷基各自任选地被一个或多个R⁹取代基取代；

R²和R³独立地选自氢、苯基、杂环基和-C_1-10烷基，其中C_1-10烷基为未取代的或被一个或多个氟原子取代，苯基为未取代的或被一个或多个选自氟、氯、羟基、C_1-10烷基和-OC_1-10烷基的取代基取代；

R⁴、R⁵、R⁶和R⁷独立地选自氢、氰基、氧代(oxo)、-C_1-10烷基、-C_2-10链烯基、-C_3-10环烷基、-(C_1-10烷基)芳基、(C_0-10烷基)杂环基、-C_5-10环烯基、-C_2-10炔基、-SO_n(C_1-10烷基)和-SO_n芳基，其中所述烷基、链烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基和杂环基任选地被一个或多个取代基R⁹取代，和

任选地一组取代基R⁴和R⁵、或R⁶和R⁷一起连接形成任选地被一个或多个取代基R⁹取代的5至8个原子的环；其中所述环是部分不饱和的或完全不饱和的，具有0、1或2个杂原子，其独立地选自-NR⁶、-O-和-S(O)_n-；

R⁹选自卤素、羟基、氧代、氰基、芳基、杂环基、-C_1-6烷基、-C_1-6烷氧基、芳氧基、杂环氧基、-CO₂R^a、-NR^bR^c、-CONR^bR^c、-OCO₂R^a、-OCONR^bR^c、-NR^dCO₂R^a、-NR^dCONR^bR^c、-SC_0-6烷基和-S(O)_nR^d，其中所述芳基、杂环基、烷氧基、芳氧基、杂环氧基任选地被一个或多个取代基R¹⁰取代；

R¹⁰选自羟基、芳基、杂环基、卤素、-C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、卤素、CO₂H、氰基、O(C＝O)_0-1C_1-6烷基、NO₂、三氟甲氧基、三氟乙氧基、-O_(0-1)(C_1-10)全氟烷基、C_0-10烷基氨基羰基氨基、C_0-10烷氧基羰基氨基C_0-10烷基、C_0-10烷基羰基氨基C_0-10烷基、C_0-10烷基氨基磺酰氨基C_0-10烷基、C_0-10烷基磺酰氨基C_0-10烷基、C_0-10烷基磺酰基、C_0-10烷基氨基磺酰基、C_0-10烷基氨基羰基、-(C＝O)N(C_0-6烷基)₂、-S(C_0-6烷基)和NH₂；

R^a选自氢；-C_1-10烷基、-(C_1-6烷基)C_3-8环烷基；和-(C_1-6烷基)苯基；和

R^b、R^c和R^d各自独立地选自氢、-C_1-10烷基、-C_3-10环烷基、芳基和杂环基，其中所述烷基、环烷基、芳基和杂环基任选地被一个或多个取代基R¹⁰取代。

本发明化合物的示例性但非限制性实例为下述的：

N-({1-[(6-氯吡啶-3-基)甲基]-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸；

N-{[1-(4-溴苄基)-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基]羰基}甘氨酸；

N-{[1-(4-氰基苄基)-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基]羰基}甘氨酸；

N-({4-羟基-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸；

N-[(4-羟基-2-氧代-1-{[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基)羰基]甘氨酸；

N-({4-羟基-1-[4-(甲基磺酰基)苄基]-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸；

N-({4-羟基-2-氧代-1-[(4-苯基-1，3-噻唑-2-基)甲基]-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸；

N-{[4-羟基-1-(4-异丙基苄基)-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基]羰基}甘氨酸；

N-{[1-(4-叔丁基苄基)-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基]羰基}甘氨酸；

N-({4-羟基-2-氧代-1-[(5-苯基-1，2，4-

二唑-3-基)甲基]-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸；

N-{[1-(1，3-苯并噻唑-2-基甲基)-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基]羰基}甘氨酸；

N-{[1-(4-溴苯基)-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基]羰基}甘氨酸；

N-({1-[3-氟-5-(三氟甲基)苄基]-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸；

N-{[1-(3-氯苄基)-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基]羰基}甘氨酸；

N-{[1-(4-氯-2-甲基苄基)-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基]羰基}甘氨酸；

N-{[1-(4-氯苄基)-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基]羰基}甘氨酸；

N-{[1-(4-乙基苄基)-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基]羰基}甘氨酸；

N-({1-[4-氯-3-(三氟甲基)苄基]-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸；

N-{[1-(3，4-二氯苄基)-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基]羰基}甘氨酸；

N-({4-羟基-2-氧代-1-[4-(三氟甲氧基)苄基]-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸；

N-({4-羟基-2-氧代-1-[(2-苯基-1，3-

唑-4-基)甲基]-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸；

N-{[1-(1-苯并噻吩-2-基甲基)-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基]羰基}甘氨酸；

N-({4-羟基-2-氧代-1-[4-(1H-吡唑-1-基)苄基]-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸；

N-({4-羟基-2-氧代-1-[(1-苯基-1H-吡唑-4-基)甲基]-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸；

N-({4-羟基-1-[(4′-甲基联苯基-4-基)甲基]-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸；

N-[(1-{[5-(2-氟苯基)吡嗪-2-基]甲基}-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基)羰基]甘氨酸；

N-({4-羟基-2-氧代-1-[4-(1H-吡唑-5-基)苄基]-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸；

N-({1-[(4′-乙酰基联苯基-4-基)甲基]-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸；

N-{[1-(联苯基-4-基甲基)-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基]羰基}甘氨酸；

N-({1-[(4′-氯联苯基-4-基)甲基]-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸；

N-({1-[4-(3，5-二甲基-1H-吡唑-4-基)苄基]-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸；

N-({1-[4-(4-氟苯氧基)苄基]-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸；

N-({1-[4-(4-氯苯氧基)苄基]-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸；

N-({1-[(4′-乙氧基联苯基-4-基)甲基]-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸；

N-({4-羟基-2-氧代-1-[4-(2-噻吩基)苄基]-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸；

N-[(4-羟基-2-氧代-1-{[4’-(三氟甲氧基)联苯基-4-基]甲基}-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基)羰基]甘氨酸；

N-{[1-({2′-[(二乙基氨基)羰基]联苯基-4-基}甲基)-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基]羰基}甘氨酸；

N-({4-羟基-2-氧代-1-[4′-(三氟甲氧基)联苯基-4-基]-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸；

N-[(1-{[6-(3-氯苯基)吡啶

-3-基]甲基}-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基)羰基]甘氨酸三氟乙酸盐；

N-[(1-{[6-(4-氟苯基)吡啶

N-[(1-{[6-(2-氯苯基)吡啶

N-({4-羟基-2-氧代-1-[3′-(三氟甲氧基)联苯基-4-基]-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸；

N-[(1-{[6-{2-氟苯基)吡啶-3-基]甲基}-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基)羰基]甘氨酸；

N-{[4-羟基-2-氧代-1-({6-[4-(三氟甲基)苯基]吡啶

-3-基}甲基)-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基]羰基}甘氨酸三氟乙酸盐；

N-{[4-羟基-2-氧代-1-({6-[2-(三氟甲基)苯基]吡啶

N-({1-[(3′-氰基联苯基-4-基)甲基]-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸；

N-{[4-羟基-1-({6-[2-(甲硫基)苯基]吡啶

-3-基}甲基)-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基]羰基}甘氨酸三氟乙酸盐；

N-[(4-羟基-1-{[6-(2-甲基苯基)吡啶

-3-基]甲基}-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基)羰基]甘氨酸三氟乙酸盐；

N-{[4-羟基-2-氧代-1-({6-[3-(三氟甲氧基)苯基]吡啶

N-[(1-{[6-(2-乙基苯基)吡啶

N-[(1-{[6-(2，5-二氟苯基)吡啶

N-{[4-羟基-2-氧代-1-(4-喹啉

-5-基苄基)-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基]羰基}甘氨酸氯化物；

N-[(1-{[5-(2-氯苯基)吡嗪-2-基]甲基}-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基)羰基]甘氨酸；

N-[(4-羟基-1-{[5-(2-甲基苯基)吡嗪-2-基]甲基}-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基)羰基]甘氨酸；

N-{[4-羟基-1-({5-[2-(甲硫基)苯基]吡嗪-2-基}甲基)-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基]羰基}甘氨酸；

N-[(1-{[5-(2，5-二氟苯基)吡嗪-2-基]甲基}-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基)羰基]甘氨酸；

N-{[4-羟基-2-氧代-1-({5-[2-(三氟甲基)苯基]吡嗪-2-基}甲基)-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基]羰基}甘氨酸；

N-({4-羟基-1-[(4′-甲基联苯基-4-基)甲基]-6，6-二氧(dioxido)-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸；

N-({4-羟基-1-[(4′-甲基联苯基-4-基)甲基]-6-氧-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸；

N-{[1-(4-氯苄基)-4-羟基-6，6-二氧-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基]羰基}甘氨酸；

N-{[4-羟基-1-(4-异丙基苄基)-6，6-二氧-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基]羰基}甘氨酸；

N-({4-羟基-6，6-二氧-2-氧代-1-[(4-苯基-1，3-噻唑-2-基)甲基]-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸；

N-({4-羟基-6，6-二氧-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸；

N-{[1-(联苯基-4-基甲基)-4-羟基-6，6-二氧-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基]羰基}甘氨酸；

N-({4-羟基-6，6-二氧-2-氧代-1-[4-(三氟甲氧基)苄基]-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸；

N-{[1-(4-乙基苄基)-4-羟基-6，6-二氧-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基]羰基}甘氨酸；

及其可药用盐和溶剂化物。

除非另有规定，否则如本文使用的“烷基”包括支链和直链饱和脂肪族烃基团，包括具有指定碳原子数的所有异构体。在整个说明书中，通常使用烷基的缩写，例如甲基可以由“Me”或“CH₃”表示，乙基可以由“Et”或CH₂CH₃表示，丙基可以由“Pr”或CH₂CH₂CH₃表示，丁基可以由“Bu”或CH₂CH₂CH₂CH₃表示，等。例如，“C_1-6烷基”(或“C₁-C₆烷基”)指直链或支链烷基，包括具有指定碳原子数的所有异构体。C_1-6烷基包括所有己基烷基和戊基烷基异构体以及正-丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基、正丙基和异丙基、乙基和甲基。“C_1-4烷基”指正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基、正丙基和异丙基、乙基和甲基。“亚烷基”是指支链和直链饱和脂族烃基团，包括具有指定碳原子数的所有异构体，并且具有两个末端链连接点。作为示例，术语“未取代的A-C₄亚烷基-B”代表A-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-B。术语“烷氧基”代表具有指定碳原子数并通过氧桥连接的直链或直链烷基。

除非另外特别地说明为仅是“未取代的”或仅是“取代的”，或者当列举取代基时，否则烷基(作为独立的基团或作为基团比如烷氧基、烷硫基和芳烷基的部分)基团是未被取代的或在每个碳原子上被1至3个选自下述的取代基取代：卤素、C₁-C₂₀烷基、CF₃、NH₂、N(C₁-C₆烷基)₂、NO₂、氧代、CN、N₃、-OH、-O(C₁-C₆烷基)、C₃-C₁₀环烷基、C₂-C₆链烯基、C₂-C₆炔基、(C₀-C₆烷基)S(O)_0-2-、(C₀-C₆烷基)S(O)_0-2(C₀-C₆烷基)-、(C₀-C₆烷基)C(O)NH-、H₂N-C(NH)-、-O(C₁-C₆烷基)CF₃、(C₀-C₆烷基)C(O)-、(C₀-C₆烷基)OC(O)-、(C₀-C₆烷基)O(C₁-C₆烷基)-、(C₀-C₆烷基)C(O)_1-2(C₀-C₆烷基)-、(C₀-C₆烷基)OC(O)NH-、-NH(C₁-C₆烷基)NHC(O)NH(C₁-C₆烷基)、NHC(O)OC₁-C₆烷基、-NH(C₁-C₆烷基)NHSO₂(C₁-C₆烷基)、-(C₀-C₆烷基)NHSO₂(C₁-C₆烷基)、芳基、芳烷基、杂环、杂环基烷基、卤代-芳基、卤代-芳烷基、卤代-杂环、卤代-杂环基烷基、氰基-芳基、氰基-芳烷基、氰基-杂环和氰基-杂环基烷基。

如在表述比如“C_0-6烷基”中使用的术语“C0”指直接共价键；或者当该术语出现在取代基末端出现时，C_0-6烷基指氢或C_1-6烷基。类似地，当定义基团中存在的某些原子数的整数等于0时，意味着该原子与相邻原子通过键直接连接。例如，在结构中，其中s为等于0、1或2的整数，当s为0时，该结构为

术语“C_3-8环烷基”(或“C₃-C₈环烷基”)指具有总共三至八个碳原子的烷烃的环状环(即，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基)。术语“C_3-7环烷基”、“C_3-6环烷基”、“C_5-7环烷基”等具有类似的含义。

术语“卤素”(或“卤”)指氟、氯、溴和碘(可选地称为氟代(F)、氯代(C1)、溴代(Br)和碘代(I))。

术语“芳基”指芳香族单碳环和多碳环体系，其中在多环体系中的每个碳环彼此稠合或经由单键连接。合适的芳基基团包括苯基、萘基和亚联苯基(biphenylenyl)。

除非另有说明，否则如本文使用的术语“碳环”(及其变型，比如“碳环的”或“碳环基”)是指(i)C₃-C₈单环的饱和或不饱和环，或(ii)C₇-C₁₂二环饱和或不饱和环体系。(ii)中的每个环是独立的，或者与其它个环稠合，并且每个环是饱和或不饱和的。碳环可以在导致稳定化合物的任何碳原子上与分子的其余部分连接。稠合的二环碳环是碳环的子集；即，术语“稠合的二环碳环”一般指其中每个环是饱和的或不饱和的，并且该环体系中的每个环共享两个相邻碳原子的C₇至C₁₀-二环环体系。其中一个环饱和，并且另一个也饱和的稠合二环碳环是饱和的二环环体系。其中一个环是苯，并且另一个饱和的稠合二环碳环是不饱和的二环环体系。其中一个环是苯，并且另一个不饱和的稠合二环碳环是不饱和的环体系。饱和的碳环也称为环烷基环，例如环丙基、环丁基等。除非另有说明，否则碳环是未取代的或者被C_1-6烷基、C_1-6链烯基、C_1-6炔基、芳基、卤素、NH₂或OH取代。稠合二环不饱和碳环的一个子集是这样的二环碳环，其中一个环是苯环，另一个环是饱和或不饱和的，并且经由导致稳定化合物的任何碳原子连接。该子集的代表性实例包括下列：

术语“杂环”(及其变型比如“杂环的”或“杂环基”)广义上是指(i)稳定的4-至8-元饱和的或不饱和的单环，或(ii)稳定的7-至12-元二环环体系，其中(ii)中的每个环是独立的，或者与其它的一个或多个环稠合，并且每个环是饱和或不饱和的，且单环或二环环体系含有一个或多个选自N、O和S的杂原子(例如1-6个杂原子或者1-4个杂原子)，和平衡数目的碳原子(单环通常含有至少一个碳原子，并且环体系通常含有至少两个碳原子)；并且其中任何一个或多个氮和硫杂原子任选是氧化的，任何一个或多个氮杂原子任选是季铵化的。除非另有说明，否则所述杂环可以在任何杂原子或碳原子上连接，条件是该连接导致形成稳定结构。除非另有说明，否则当杂环具有取代基时，应当理解，取代基可以连接在环中的任何原子上，无论是杂原子还是碳原子，条件是产生稳定的化学结构。

所述杂环基部分的非限制性实例包括，但不限于下述：氮杂苯并咪唑基(azabenzimidazolyl)、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋咱基、苯并吡唑基、苯并噻唑基、苯并噻吩基(benzothienyl)、苯并***基、苯并噻吩基(benzothiophenyl)、苯并

唑基、咔唑基、咔啉基(carbolinyl)、苯并二氢吡喃基、噌啉基、呋喃基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、吲嗪基(indolazinyl)、吲唑基、异苯并呋喃基、异苯并二氢吡喃基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异

唑基、萘并吡啶基、

二唑基、

唑基、

唑啉、异

唑啉、氧杂环丁基、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并吡啶基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、喹喔啉基、四氢吡喃基、四唑基、四唑并吡啶基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、***基、氮杂环丁烷基、氮丙啶基、1，4-二

烷基、六氢氮杂

基、哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、吗啉基、硫代吗啉基、二氢苯并咪唑基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基(dihydrobenzothiophenyl)、二氢苯并

唑基、二氢呋喃基、二氢咪唑基、二氢吲哚基、二氢异烷基、二氢异噻唑基、二氢

二唑基、二氢

唑基、二氢吡嗪基、二氢吡唑基、二氢吡啶基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、二氢嘧啶基、二氢吡咯基、二氢喹啉基、二氢四唑基、二氢噻二唑基、二氢噻唑基、二氢噻吩基、二氢***基、二氢氮杂环丁烷基、亚甲基二氧基苯甲基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢喹啉基、2，3-二氢苯并呋喃基、2，3-二氢苯并-1，4-二氧杂环己烯基(dioxinyl)、咪唑并(2，1-b)(1，3)噻唑和苯并-1，3-间二氧杂环戊烯基。

饱和的杂环形成杂环的子集，即，术语“饱和的杂环”一般是指如上所定义的杂环，其中整个环体系(无论是单环还是多环)是饱和的。术语“饱和的杂环”指4-至8-元饱和单环或者稳定的7-至12-元二环环体系，所述环由碳原子和一个或多个选自N、O和S的杂原子组成。代表性实例包括哌啶基、哌嗪基、氮杂环庚烷基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、唑烷基、异唑烷基、吗啉基、硫代吗啉基、噻唑烷基、异噻唑烷基和四氢呋喃基(或四氢化呋喃基)。

杂芳环形成杂环的另一个子集，即，术语“杂芳族的”(或者“杂芳基”)一般是指如上所定义的杂环，其中整个环体系(无论是单环还是多环)是芳族环体系。术语“杂芳环”是指5-或6-元单环芳环或者7-至12-元二环，其是由碳原子和一个或多个选自N、O和S的杂原子组成。在含有至少一个氮原子的取代的杂芳基环(例如吡啶)的情况下，这样的取代可以是导致形成N-氧化物的那些。杂芳环的代表性实例包括吡啶基、吡咯基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、噻吩基(thienyl)(或噻吩基(thiophenyl))、噻唑基、呋喃基、咪唑基、吡唑基、***基、四唑基、

唑基、异

唑基、

二唑基、噻唑基、异噻唑基和噻二唑基。

二环杂环的代表性实例包括苯并***基、吲哚基、异吲哚基、吲唑基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、苯并二氢吡喃基、异苯并二氢吡喃基、四氢喹啉基、喹啉基、四氢异喹啉基、异喹啉基、2，3-二氢苯并呋喃基、2，3-二氢苯并-1，4-二氧杂环己烯基(即，

)、咪唑并(2，1-b)(1，3)噻唑(即，

)和苯并-1，3-间二氧杂环戊烯基(即，

)。在本文的某些内容中，

可替代地指具有连接到两个相邻碳原子的取代基亚甲基二氧基的苯基。

术语″芳基烷基″和″烷基芳基″包括其中烷基为如上定义的烷基部分，并且包括其中芳基为如上定义的芳基部分。芳基烷基的实例包括，但不限于苄基、苯乙基、苯丙基、萘甲基和萘乙基。烷基芳基的实例包括，但不限于甲苯、乙基苯、丙基苯、甲基吡啶、乙基吡啶、丙基吡啶和丁基吡啶。

除非另外特别地指出仅是“未取代的”或者仅是“取代的”，或者当特别地列举取代基时，否则环烷基、芳基(包括苯基)和杂环(包括杂芳基)是未取代的或者取代的。如本文使用的术语“取代的C₃-C₁₀环烷基”、“取代的芳基(包括苯基)”和“取代的杂环”意味着包括除了与化合物其余部分的连接点之外还含有1至3个取代基的环基团。优选地，所述取代基选自下述组：其包括，但不限于卤素、C₁-C₂₀烷基、CF₃、NH₂、N(C_1-6烷基)₂、NO₂、氧代、CN、N₃、-OH、-O(C₁-C₆烷基)、C₃-C₁₀环烷基、C₂-C₆链烯基、C₂-C₆炔基、(C₀-C₆烷基)S(O)_0-2-、芳基-S(O)_0-2、(C₀-C₆烷基)S(O)_0-2(C₀-C₆烷基)-、(C₀-C₆烷基)C(O)NH-、H₂N-C(NH)-、-O(C₁-C₆烷基)CF₃、(C₀-C₆烷基)C(O)-、(C₀-C₆烷基)OC(O)-、(C₀-C₆烷基)₂NC(O)-(C₀-C₆烷基)O(C₁-C₆烷基)-、(C₀-C₆烷基)C(O)_1-2(C₀-C₆烷基)-、(C₀-C₆烷基)OC(O)NH-、芳基、芳烷基、杂芳基、杂环基烷基、卤代-芳基、卤代-芳烷基、卤代-杂环、卤代-杂环基烷基、氰基-芳基、氰基-芳烷基、氰基-杂环和氰基-杂环基烷基。

除非有明确相反的说明，否则″不饱和的″环是部分不饱和的或完全不饱和的环。例如，“不饱和的单环C₆碳环”指环己烯、环己二烯和苯。

除非有明确相反的说明，否则本文提及所有范围都是包括性的。例如，描述为包含“1至4个杂原子”的杂环指杂环可以含有1、2、3或4个杂原子。

当任何变量在任何成分中或者在描绘和描述本发明化合物的任何式中出现超过一次时，其在每次出现时的定义独立于在每一其他出现时的定义。而且，取代基和/或变量的组合只有当这样组合可以产生稳定的化合物时才是允许的。

术语“取代的”(例如，在″芳基，其任选地被一个或多个取代基取代”中)包括被指定取代基单次取代和多次取代至这样的单次取代和多次取代(包括在相同的位点多次取代)是化学允许的程度。

术语“氧基(oxy)”指氧(O)原子。术语“硫基”指硫(S)原子。术语“氧代”指“＝O”。术语“羰基”指“C＝O”。

在本发明的一个实施方案中，R¹选自-C_1-10烷基、-C_0-10烷基芳基、-C_0-10烷基杂环基；-C_0-10烷基-C_3-10环烷基和全氟C_1-6烷基。

在该实施方案的一个子集中，R¹选自-C_0-10烷基芳基和-C_0-10烷基杂环基。

在本发明的一个实施方案中，R¹的芳基部分选自苯基、萘基、四氢萘基、2，3-二氢化茚基、2，3-二氢-1H-茚基或联苯基。

在该实施方案的一个子集中，R¹的芳基部分选自苯基、联苯基和-2，3-二氢茚基。

R¹的杂环基部分包括，但不限于下述：氮杂苯并咪唑基(azabenzimidazolyl)、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋咱基、苯并吡唑基、苯并***基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并

唑基、咔唑基、咔啉基、苯并二氢吡喃基、噌啉基、呋喃基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、吲嗪基、吲唑基、异苯并呋喃基、异苯并二氢吡喃基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异唑基、萘并吡啶基、二唑基、唑基、

唑啉基、异

唑啉基、氧杂环丁基、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并吡啶基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四氢吡喃基、四唑基、四唑并吡啶基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、***基、氮杂环丁烷基、氮丙啶基、1，4-二

烷基、六氢氮杂

基、哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、吗啉基、硫代吗啉基、二氢苯并咪唑基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并

唑基、二氢呋喃基、二氢咪唑基、二氢吲哚基、二氢异

唑基、二氢异噻唑基、二氢

二唑基、二氢

唑基、二氢吡嗪基、二氢吡唑基、二氢吡啶基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、二氢嘧啶基、二氢吡咯基、二氢喹啉基、二氢四唑基、二氢噻二唑基、二氢噻唑基、二氢噻吩基、二氢***基、二氢氮杂环丁烷基、亚甲基二氧基苯甲基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢喹啉基、2，3-二氢苯并呋喃基、2，3-二氢苯并-1，4-二氧杂环己烯基、咪唑并(2，1-b)(1，3)噻唑、嘧啶基苯基、吡啶基苯基和苯并-1，3-间二氧杂环戊烯基。

在该实施方案的一个变型中，R¹中的杂环基部分包括氮杂苯并咪唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并吡唑基、苯并***基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并

唑基、咔唑基、咔啉基、呋喃基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、吲嗪基、吲唑基、异苯并呋喃基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异

唑基、萘吡啶基、

二唑基、

唑基、

唑啉基、异唑啉基、氧杂环丁基、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、四氢吡喃基、四唑基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、***基、氮杂环丁烷基、哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、吗啉基、硫代吗啉基、二氢苯并咪唑基、亚甲基二氧基苄基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢喹啉基、嘧啶苯基、吡啶苯基。

在另一个实施方案中，R¹中的杂环基部分选自：吡啶基、苯基、噻唑基、

二唑基、苯并噻唑基、

唑基、喹啉基、苯并噻吩基、吡唑基、吡嗪基和吡啶基。

在本发明的一个实施方案中，R¹选自-C_1-3烷基芳基和-C_1-3烷基杂环基。

在本发明的一个实施方案中，R⁸选自氢，和C_1-6烷基，其任选地被羟基、-SH-、-NH₂或-CO₂H取代。

在该实施方案的一个变型中，R⁸是氢。

在本发明的一个实施方案中，R²和R³各自独立地选自氢和-C_1-10烷基，其中C_1-10烷基为未取代的或者被一个或多个氟原子取代，苯基为未取代的或者被一个或多个选自氟、氯、羟基、C_1-10烷基和-OC_1-10烷基的取代基取代。

在该实施方案的一个子集中，R²和R³各自为氢。

在一个实施方案中，R⁴、R⁵、R⁶和R⁷独立地选自氢、-C₁-C₁₀烷基、(C_0-10烷基)芳基、(C_0-10烷基)杂环基，其中所述烷基、芳基和杂环基任选地被一个或多个取代基R⁹取代。

在上述实施方案的一个子集中，R⁴、R⁵、R⁶和R⁷各自为氢。

具有用甲基终止的取代基的化合物的结构示意图可以使用字符“CH₃”，例如“-CH₃”显示末端甲基，或者使用直线代表存在的甲基，例如“——”，即“

”和“

”具有相同的含义。

对于含有具有重复术语的术语的变量定义，例如(CRⁱR^j)_r，其中r是整数2，Rⁱ是定义的变量，并且R^j是定义的变量，Rⁱ的值在其出现的每一次可以不同，并且R^j的值在其出现的每一次可以不同。例如，如果Rⁱ和R^j独立地选自甲基、乙基、丙基和丁基，则(CRⁱR^j)₂可以是

旋光异构体-非对映体-几何异构体-互变异构体

本文描述的化合物可以包含不对称中心，并且因此可以作为对映异构体存在。当根据本发明化合物具有两个或更多个不对称中心时，它们还可以作为非对映异构体存在。本发明包括所有这样可能的立体异构体，如基本上纯的拆分的对映异构体，其外消旋混合物以及非对映异构体的混合物。上述式I没有显示在一定位置上的确定立体化学。本发明包括式I的所有立体异构体及其可药用盐和溶剂化物。除非另外特别地说明，否则指定一种异构体适用于任何可能的异构体。当未指定同分异构组分时，包括所有可能的异构体。可以通过例如从合适的溶剂中分级结晶来分离对映异构体的非对映异构体对，并且可以通过常规方法，例如通过使用旋光性酸或碱作为拆分剂或者在手性HPLC柱上，将由此得到的对映异构体对分离成单独的立体异构体，此外，利用已知构型的光学纯起始材料或试剂，通过立体选择性合成，可以获得通式I的化合物的任何对映异构体或非对映异构体。

当本文描述的化合物包含烯属双键时，除非另有说明，否则这样的双键包括E和Z两种几何异构体。

某些本文描述的化合物可以具有不同的氢连接点，称为互变异构体。例如，包括羰基-CH₂C(O)-(酮式)的化合物可经过互变异构，形成羟基-CH＝C(OH)-基团(烯醇式)。单独的酮式和烯醇式、及其混合物都包括在本发明范围内。

盐

可药用盐包括金属(无机)盐和有机盐两者；其列表在Remington′sPharmaceutical Sciences，第17版，第1418页(1985)中给出。本领域技术人员公知合适的盐形式基于物理稳定性和化学稳定性、流动性、吸水性和溶解性来选择。如已知的，术语“可药用盐”指由可药用无毒的碱或酸制备的盐。当本发明化合物是酸性的时，其相应的盐可以由无机碱或有机碱而方便地制备。衍生自这样的无机碱的盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐(二价铜盐和亚铜盐)、三价铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐(六价、三价锰盐和二价锰盐)、钾盐、钠盐、锌盐等盐。优选的是铵盐、钙盐、镁盐、钾盐和钠盐。由有机碱制备的盐包括天然和合成来源的伯胺、仲胺和叔胺的盐。可由其形成盐的可药用有机无毒碱包括，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N，N’-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、葡萄糖胺、组氨酸、海巴明(hydrabamine)、异丙胺、二环己胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨基丁三醇等。

当本发明中的化合物是碱性的时，其相应的盐可以方便地由无机酸或有机酸制备。这样的酸包括，例如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、黏酸、硝酸、扑酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸等。优选的是柠檬酸、氢溴酸、盐酸、马来酸、磷酸、硫酸和酒石酸。

溶剂化物

本发明在其范围内包括式I化合物的溶剂化物。如本文使用的术语“溶剂化物”是指由溶质(即式I化合物)或其可药用盐与不干扰溶质生物活性的溶剂形成的可变化学计量的络合物。溶剂的实例包括，但不限于水、乙醇和乙酸。当溶剂是水时，溶剂化物被称为水合物；水合物包括，但不限于半水合物、一水合物、倍半水合物、二水合物和三水合物。

前药

本发明在其范围内包括本发明化合物的前药。这样的前药通常是本发明化合物的官能衍生物，其易于在体内转化成所需化合物。因此，在本发明的治疗方法中，术语“给药”包括用以下化合物治疗所描述的各种病症：式I化合物，或者这样的化合物，其不是式I化合物，但是在对患者给药后，在体内转化成式I化合物。选择和制备合适的前药衍生物的常规方法描述在例如“Design of Prodrugs，”编辑H.Bundgaard，Elsevier，1985中。

应用

本发明化合物是缺氧诱导因子(HIF)脯氨酰羟化酶的抑制剂，因而可用于治疗和预防其中期望调节HIF的疾病和病症，例如贫血和局部缺血。本发明化合物可以以选择和控制的方式诱导缺氧诱导因子稳定化，和迅速并且可逆地刺激***生成和分泌。因此，本发明的另一个方面提供了治疗或预防哺乳动物中疾病或病症的方法，所述治疗或预防是通过HIF脯氨酰羟化酶抑制来影响或促进的，所述方法包括给药有效抑制HIF脯氨酰羟化酶的量的式I化合物。本发明的这个方面还包括式I化合物在制备用于治疗或预防由HIF脯氨酰羟化酶调节的疾病或病症的药物中的用途。

一个实施方案是增强哺乳动物***的内源生成的方法，其包括向所述哺乳动物给药有效增强***的内源生成的量的式I的化合物。

另一个实施方案是治疗哺乳动物中贫血的方法，其包括向所述哺乳动物给药治疗有效量的式I的化合物。“贫血”包括但不限于慢性肾病贫血，化疗诱导的贫血(例如，由于传染性疾病比如HIV和丙肝病毒的抗病毒药物治疗而导致的贫血)，慢性疾病的贫血，与癌症有关的贫血，由癌症放疗导致的贫血，慢性免疫病症例如类风湿性关节炎、炎症性肠病和狼疮的贫血，以及由于月经或衰老导致的贫血，或者在具有铁加工缺陷的其他个体例如铁充满但是不能正常利用铁的个体中的贫血。

另一个实施方案是治疗哺乳动物中局部缺血疾病的方法，其包括向所述哺乳动物给药治疗有效量的式I的化合物。

联合治疗

式I化合物可以与用于治疗/预防/抑制或改善式I化合物可用于治疗的疾病或病症的其他药物联合使用。这样的其他药物可以以其常用的途径和量，与式I化合物同时或先后给药。当式I化合物与一种或多种其他药物同时使用时，除了式I化合物之外还包含这样的其他药物的药物组合物是优选的。因此，本发明的药物组合物除了式I化合物以外还包括一种或多种其他活性成分。

给药途径/剂量

根据本发明，可通过能够使得活性成分化合物与温血动物体内作用位点接触的任何方法来给药本发明化合物以治疗或预防疾患、疾病和病症。例如，给药可以是口服给药，局部给药，包括经皮给药、眼部给药、含服(buccal)、鼻内给药、吸入给药、***给药、直肠给药、脑池给药和胃肠外给药。如本文使用的术语“胃肠外”是指给药模方式，包括皮下、静脉内、肌内、关节内注射或输注，胸骨内或腹膜内。为了本申请的目的，温血动物是具有适应性机能的动物王国的成员，并且包括哺乳动物和鸟类。

所述化合物可以作为单独的治疗剂或者在治疗剂组合中，通过用于药物的常规方式给药。它们可以单独给药，但是通常与药物载体一起给药，所述药物载体是基于所选的给药途径和标准药物实践来选择的。

给药剂量将取决于接受者的年龄、健康和体重，疾病程度，同步进行的治疗的种类(如果有的话)，治疗频率以及所期望的效果性质。通常，活性成分化合物的日剂量通常为约0.1-2000毫克/天。通常，10-500毫克/天，分一次或多次施用，能有效获得期望的结果。这些剂量是治疗和预防上述疾患、疾病和病症例如贫血的有效量。

药物组合物

本发明的另一个方面提供了药物组合物，其包括式I的化合物与可药用载体。如在药物组合物中的术语“组合物”是指包括含有一种或多种活性成分和构成载体的一种或多种惰性成分(可药用赋形剂)的产品以及直接或间接由任何两种或更多种成分的组合、复合或聚集，或者由一种或多种成分的解离，或者由一种或多种成分的其他类型反应或相互作用而获得的任何产品。因此，本发明的药物组合物包括通过将式I的化合物、一种或多种另外的活性成分及可药用赋形剂混合而制备的任何组合物。

本发明的药物组合物包括作为活性成分的式I的化合物(或其可药用盐或溶剂化物)、可药用载体和任选其他治疗成分或助剂。所述组合物包括适于以下给药途径的组合物：口服给药、直肠给药、局部给药和胃肠外给药(包括皮下、肌内和静脉内给药)，虽然在任何给定情况，最合适的途径将取决于具体宿主，以及给药活性成分来治疗的病症的性质和严重程度。药物组合物可以适宜地以单位剂型提供，并且通过药物领域众所周知的任何方法来制备。

活性成分可以在固体剂型比如胶囊、片剂、锭剂、糖锭剂、颗粒剂和粉剂，或者液体剂型比如酏剂、糖浆剂、乳剂、分散剂和悬浮剂中口服给药。活性成分还可以在无菌液体剂型比如分散液、悬浮液或溶液中胃肠外给药。还可以用于给药活性组分的其他剂型是用于局部给药的软膏剂、霜剂、滴剂、透皮贴剂或粉剂，用于眼部给药的眼用溶液或悬浮液配制剂，即滴眼剂，用于吸入或鼻内给药的气溶胶喷雾剂或粉剂组合物，或者用于直肠或***给药的霜剂、软膏剂、喷雾剂或栓剂。

明胶胶囊包含活性成分和粉末载体，比如乳糖、淀粉、纤维素衍生物、硬脂酸镁、硬脂酸等。类似的稀释剂还可用于制备压制片剂。片剂和胶囊都可制成缓释产品，以提供药物在数小时期间持续释放。压制片剂可以是糖包衣的或者膜包衣的以掩蔽任何使人不愉快的味道和保护片剂不受大气的影响，或者肠包衣片的以在胃肠道中选择性地崩解。

用于口服给药的液体剂型可以包含着色剂和矫味剂以提高患者可接受性。

通常，水、合适的油、盐水、右旋糖(葡萄糖)水溶液和相关糖溶液以及二醇比如丙二醇或聚乙二醇是用于胃肠外用溶液的合适载体。用于胃肠外给药的溶液优选地包含活性成分的水溶性盐、合适的稳定剂以及如有必要的缓冲物质。抗氧化剂比如单独或者组合使用的亚硫酸氢钠、亚硫酸钠或抗坏血是合适的稳定剂。柠檬酸及其盐和EDTA钠也是有用的。另外，胃肠外溶液可以包含防腐剂，比如苯扎氯铵、对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯和氯丁醇。

合适的药物载体描述在Remington’s Pharmaceutical Sciences，A.Osol中，这是本领域的标准参考教科书。

对于通过吸入给药，本发明的化合物可以方便地以气溶胶喷雾剂形式递送，气溶胶喷雾剂从加压包装或喷雾器中呈送。所述化合物还可以作为粉剂递送，其可以配制粉剂，并且粉末组合物可以借助于吹入粉末吸入器装置而吸入。对于吸入，优选的递送***是计量剂量吸入(MDI)气雾剂，其可以配制成式I的化合物在合适的推进剂比如含氟烃或烃中的悬浮剂或溶液剂。

对于眼部给药，可以用式I的化合物在合适眼用载体中的合适重量百分比的溶液或悬浮液配制眼用制剂，使得所述化合物保持与眼睛表面接触足够长的时间，以容许化合物透入眼睛的角膜和内部区域。

对于本发明化合物的给药，有用的药物剂型包括，但不限于硬明胶胶囊和软明胶胶囊、片剂、胃肠外注射剂和口服悬浮剂。

通过向每一标准两片式(two-piece)硬明胶胶囊填充100毫克粉末状活性成分、150毫克乳糖、50毫克纤维素和6毫克硬脂酸镁可以制得大量单位胶囊。

制备活性成分在可消化油比如豆油、棉籽油或橄榄油中的混合物，并且通过容积式泵注射到明胶内以形成含有100毫克活性成分的软明胶胶囊。洗涤胶囊并干燥。

通过常规程序制备大量片剂，使得剂量单位是100毫克活性成分、0.2毫克胶态二氧化硅、5毫克硬脂酸镁、275毫克微晶纤维素、11毫克淀粉和98.8毫克乳糖。可采用合适的包衣以提高适口性或延迟吸收。

适于通过注射而胃肠外给药的组合物是这样制备的：将1.5％重量的活性成分在10％体积的丙二醇中搅拌。用注射用水补足溶液的体积并且灭菌。

制备口服给药用的含水悬浮剂，使得每5毫升含有100毫克细分的活性成分、100毫克羧甲基纤维素钠、5毫克苯甲酸钠、1.0克山梨醇溶液U.S.P.和0.025毫升香草醛。

当本发明的化合物逐步给药或者与另外的治疗剂联合给药时，一般可以使用相同剂型。当药物以物理组合形式给药时，应当根据组合的药物的相容性来选择剂型和给药途径。因此，应当理解，术语联合给药包括同时或者先后给药两种治疗剂，或者作为两种活性组分的固定剂量组合来给药。

本发明的化合物可以作为单独的活性成分给药或者与第二种活性成分联合给药，所述第二种活性成分包括已知用于提高患者中***水平的其它活性成分。

在制备本发明化合物的说明中使用的缩写

AcOH 乙酸

Aq 含水的

盐水饱和的氯化钠水溶液

CH₂Cl₂ 二氯甲烷

DMF N，N-二甲基甲酰胺

Dppf 1，1″-双(二苯基膦基)二茂铁

DBU 1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯

DIEA N，N-二异丙基乙胺

DMAP 4-N，N-二甲基氨基吡啶

DMF N，N-二甲基甲酰胺

DMSO 二甲亚砜

EtOAc 乙酸乙酯

EtOH 乙醇

Et₂O或醚 ***

G 克

h或hr 小时

HCl 盐酸

HPLC 高效液相色谱

IPA 2-丙醇

i-PrOH 异丙醇

Mg 毫克

mL 毫升

Mmol 毫摩尔

MeCN 乙腈

MeOH 甲醇

Min 分钟

ms或MS 质谱

Na₂SO₄ 硫酸钠

R_t 保留时间

Rt或r 室温

TFA 三氟乙酸

THF 四氢呋喃

μL 微升

合成

本发明的化合物除了通过在文献中已知的或者在实验程序中举例说明的其它标准操作制备之外，还可以通过使用如下述方案所示的反应制备。因此，下述示例性方案不应受到所列出的化合物或用于示例性目的采用的任何特定取代基的限制。如在方案中所示的取代基编号不一定与在权利要求书中使用的相关联，通常，为了清楚，显示单个取代基连接至化合物代替在之前定义的式I定义下允许的多个取代基。

下述方案和说明例示了可用于合成本发明中描述的新化合物的方法。描述了本发明中化合物的两个一般性子集。第一个子集由在式Ia-b中显示的结构式Ia代表的N-[(4-羟基-1-甲基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基)羰基]甘氨酸组成。第二个子集由也在式Ia-b中显示的式Ib代表的N-[(7-羟基-4-甲基-5-氧代-2，3，4，5-四氢噻吩并[3，2-b)]吡啶-6-基)羰基]甘氨酸组成。可以采用基于有机合成文献中已知的合成转化的若干策略来制备通式Ia和Ib的标题化合物。显示在下述反应方案中的优选的合成方法由通式1和9的取代的氧代四氢噻吩-羧酸烷基酯开始。在某些情况下，所述氧代四氢噻吩羧酸烷基酯(1和9)是市售可获得的；可选地，它们可以使用分别在反应方案3和4中图解的方法之一合成。

用于合成代表本发明化合物的第一个子集的通式Ia化合物的优选方法列在下述给出的反应方案1中。

方案1

方案1(续)

在该方法中，通式1的4-氧代四氢噻吩-3-羧酸烷基酯与通式2的伯胺反应，得到插烯酰胺(vinylogous amide)，接着用甲基丙二酰氯酰化，得到取代的2，5-二氢噻吩-3-羧酸酯衍生物3。该反应过程的第一步典型地在升高的温度，在溶剂比如乙醇中进行，所述升高的温度例如约50℃至乙醇回流温度之间的温度，所述反应通常在约1-24小时内完成。在某些情况下，可以通过向反应混合物中加入几摩尔％的乙酸来催化插烯酰胺的形成。

可选地，如果获得的通式2的伯胺是盐比如盐酸盐的形式，则通常向反应混合物中加入1当量的叔胺碱比如三乙胺。然后，在分离之后，用非质子溶剂比如乙腈等处理所述插烯酰胺，并且用甲基丙二酰氯酰化。所述酰化在室温至约65℃的温度进行，该反应通常在1-4小时期间内完成。然后，使用后处理的标准条件分离取代的2，5-二氢噻吩-3-羧酸酯衍生物3，并且可以通过色谱法或者通过重结晶纯化。

用于合成通式Ia的新化合物的第二步是通式3的化合物的分子内迪克曼反应(Dieckmann reaction)，得到通式4的4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-羧酸烷基酯，如反应方案1所示。该环化反应典型地使用作为碱的1-2当量的碱金属醇盐和作为溶剂的相应醇进行。选择使用的醇和醇盐以与通式4的化合物中酯上的烷基取代基相对应，以防止形成酯的混合物。该环化反应典型地在室温或稍高于室温进行，其通常快速完成，例如在0.25至4小时内完成。

合成通式Ia的化合物的下一步是将通式4的化合物的酯基转化成通式6的N-[(4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基)羰基]甘氨酸烷基酯，如反应方案1所示。可以如下进行所述转化：首先将3-位的酯水解成相应羧酸，然后，使用标准酰胺键偶联方法将其与通式5的取代的甘氨酸衍生物偶联。将4转化成6的更优选的方法包括在合适的溶剂中，加热酯4与甘氨酸衍生物5，一步生成酰胺6。后者的转化通常在80至100℃之间的温度，在溶剂比如正丙醇中进行1-5小时。

合成通式Ia的化合物的最后一步是将通式6中间体的甘氨酸酯转化成相应羧酸。优选的方法包括选择其中R基团为叔丁基的通式5的甘氨酸衍生物。然后，可通过在溶剂如二氯甲烷中，用酸比如三氟乙酸处理来水解通式6的甘氨酸酯，得到通式7的化合物。该反应通常在室温或稍高于室温进行，该反应通常在约0.25-2小时内完成。

如果通式6的酯中存在的取代基R为甲基、乙基等，则在碱性条件下的标准水解反应使酯6转化成通式7的甘氨酸衍生物。通式7的化合物相当于其中n等于0的通式Ia的标题化合物。当期望制备其中n等于1或2的通式Ia的化合物(8)时，用氧化剂比如双(单过氧酞酸)镁(MMPP)、间-氯过氧苯甲酸(MCPBA)等氧化通式7的化合物。这些氧化反应通常在室温或低于室温，使用溶剂比如二氯甲烷或二氯甲烷和醇的混合物进行。

一种用于合成代表本发明化合物的第二个子集的通式Ib的化合物的方法列在反应方案2中。

方案2

在该方法中，通式9的3-氧代四氢噻吩-2-羧酸烷基酯与通式2的伯胺反应，得到插烯酰胺，其接着用甲基丙二酰氯酰化，得到取代的4，5-二氢噻吩-2-羧酸烷基酯衍生物10。

该反应过程的第一步典型地在升高的温度，在溶剂比如乙醇中进行，所述升高的温度为例如50℃至乙醇回流温度的温度，该反应通常在约1-24小时内完成。在某些情况下，可以通过向反应混合物中加入几摩尔％的乙酸来催化插烯酰胺的形成。可选地，如果获得盐比如盐酸盐形式的通式2的伯胺，则典型地向该反应混合物中加入一当量的叔胺碱比如三乙胺。

然后，在分离之后，用非质子溶剂比如乙腈等处理插烯酰胺，并且用甲基丙二酰氯酰化。所述酰化在室温至约65℃之间的温度进行，该反应通常在1-4小时期间内完成。然后，使用后处理的标准条件分离取代的4，5-二氢噻吩-2-羧酸烷基酯衍生物10，并且其可以通过色谱法或者通过重结晶纯化。

用于合成通式Ib的化合物的第二步是通式10的化合物的分子内迪克曼反应，得到通式11的7-羟基-5-氧代-2，3，4，5-四氢噻吩并[3，2-b]吡啶-6-羧酸烷基酯，如反应方案2所示。该环化反应典型地使用作为碱的1-2当量的碱金属醇盐和作为溶剂的相应醇进行。选择使用的醇和醇盐以与通式10的化合物中酯上的烷基取代基相对应，以防止形成酯的混合物。该环化反应典型地在室温或稍高于室温进行，其通常快速完成，例如在0.25至4小时内。

合成通式Ib的新化合物的下一步是将通式11的化合物的酯基转化成通式12的N-[(7-羟基-5-氧代-2，3，4，5-四氢噻吩并[3，2-b]吡啶-6-基)羰基]甘氨酸烷基酯，如反应方案2所示。可以如下进行所述转化：首先将3-位的酯水解成相应羧酸，然后，使用标准酰胺键偶联方法将其与通式5的取代的甘氨酸衍生物偶联。将11转化成12的更优选的方法包括在合适的溶剂中，加热酯11与甘氨酸衍生物5，一步生成酰胺12。后者的转化通常在80至100℃之间的温度，在溶剂比如正丙醇中进行1-5小时。

合成通式Ib的化合物的最后一步是将通式12中间体的甘氨酸酯转化成相应羧酸13。一种实现该合成的方法包括选择其中R基团为叔丁基的通式5的甘氨酸衍生物。然后，可以在溶剂如二氯甲烷中，用酸比如三氟乙酸处理来水解通式12的甘氨酸酯，得到通式13的化合物。该反应通常在室温或稍高于室温进行，该反应通常在约0.25-2小时内完成。如果通式12的酯中存在的取代基R为甲基、乙基等，则在碱性条件下的标准水解反应使酯12转化成通式13的甘氨酸衍生物。

通式13的化合物相当于其中n等于0的通式Ib的标题化合物。当期望制备其中n等于1或2的通式Ib的化合物(14)时，用氧化剂比如双(单过氧酞酸)镁(MMPP)、间-氯过氧苯甲酸(MCPBA)等氧化通式13的化合物。这些氧化反应通常在室温或低于室温，使用溶剂比如二氯甲烷或二氯甲烷和醇的混合物进行。

如上所述，在反应方案1中用作起始原料的通式1的取代的4-氧代四氢噻吩-3-羧酸烷基酯可以是市售可获得的。在当期望使用不能市售获得的载有取代基R⁴至R⁷的通式1的4-氧代四氢噻吩-3-羧酸烷基酯的情况下，可以使用有机合成领域已知的方法制备这些化合物。例如，通式15的α，β-不饱和酯与通式16的取代的巯基乙酸烷基酯的迈克尔加成反应得到通式17的二酯，如反应方案3所示(Woodward，R.B.；Eastman，R.H.J.Amer.Chem.Soc，1946，68，2229-35)。然后，使用迪克曼反应将通式17的二酯环化成通式1的4-氧代四氢噻吩-3-羧酸烷基酯(Satoshi，T.；Ushirogochi，H.；Sano，S.；Nagao，Y.Chem.Lett.1995，4，295-6)。

方案3

类似地，通式9的3-氧代四氢噻吩-2-羧酸烷基酯可以是市售可获得的，或者它们可以根据在有机合成文献中公布的若干方法比如在反应方案4种图解的方法合成：

方案4

在该合成方法中，也使用修改的迪克曼反应环化通式20的硫醚，得到通式9的化合物(Deshmukh，M.N.；Gangakhedkar，K.K.；Kumar，U.S.Syn.Comm.1996，26，1657-61.Yamada，Y.；Ishii，T.；Kimura，M.；Hosaka，K.Tetrahedron Lett.1981，22，1353-4)。可以进而通过使通式19的巯基乙酸烷基酯与通式18的α，β-不饱和酯进行迈克尔加成(Struharik，M，；Hrnciar，P.Chemical Papers 1986，40，639-48.Woodward，R.B.；Eastman，R.H.J.Am.Chem.Soc.1946，68，2229-35)或者通过有机化学文献中已知的其它方法制备通式20的硫醚。

最后，应当认识到，可以使用有机合成领域已知的反应，由在反应方案1和2中作为通式显示的一种或多种中间体化合物合成地制备在本发明范围内的通式Ia，b的另外化合物。例如，一种方法实施了将取代基团R¹至R⁷中之一并入到芳基或杂环基环的交叉偶合反应。

反应方案5图解了在交叉偶合反应中，存在于通式21a，b或24a，b的中间体的R¹取代基中的芳基基团与通式22的合适的芳基或杂环基有机金属试剂反应的实例。优选的交叉偶合反应包括Suzuki，Stille，Negishi和有机合成领域已知的类似的交叉偶合反应。在这些实例中，基团X和Y为如上定义的，Z指定为合适的离去基团，比如卤原子或三氟甲磺酸根，在偶合配偶体(coupling partner)22中的基团M指定为锡烷(stannane)、硼酸、硼酸酯等，这些反应的产物为在R取代基内并入有二芳基要素的通式23a，b和25a，b的衍生物。应当认识到，在反应方案5中图解的合成方法的变体在本发明的范围之内。例如，在新形成的二芳基要素中的一个或两个芳基基团可以是如上定义的杂环基环。

方案3

一般方法

在氮气下，使用无水溶剂和试剂进行对湿气或空气敏感的反应。通过分析薄层色谱(TLC)或液相色谱质谱(LC-MS)测定反应进展，所述分析薄层色谱采用E.Merck预涂覆的TLC板(硅胶60F-254，层厚0.25mm)进行。在具有电喷射离子化的Waters

ZQ^TM上，以阳离子检测模式进行质谱分析。在Waters C18XTerra 3.5μm 3.0×50mm柱的Agilent 1100系列HPLC上进行高效液相色谱法(HPLC)，梯度为经3.75min的10∶90-100v/v的CH₃CN/H₂O+v 0.05％TFA，然后采用100CH₃CN+v 0.05％TFA保持1.75min；流速1.0mL/min，UV波长254nm)。在旋转蒸发器上于减压下进行溶液浓缩。使用Biotage Flash Chromatography装置(Dyax Corp.)在预装柱中的硅胶(32-63mM，孔径)上进行快速色谱。

参照实施例1

4-{[(6-氯吡啶-3-基)甲基]氨基}-2，5-二氢噻吩-3-羧酸甲酯(RE-I)

向在EtOH(69mL)中的4-氧代四氢噻吩-3-羧酸甲酯(5.17g，323mmol)中加入乙酸(1.85mL，32.3mmol)。在80℃，加热该反应过夜。冷却该反应，浓缩，然后用EtOAc稀释。接着，用盐水和Na₂CO₃(2M)(1∶1)洗涤所述溶液，之后用盐水洗涤。浓缩该溶液，通过在硅胶上的快速色谱纯化残余物，用在己烷中的0-40％的EtOAc梯度洗脱，得到标题化合物(RE-1)。HPLC/MS：285.2(M+1)；R_t＝2.84min。

参照实施例2

1-[(6-氯吡啶-3-基)甲基]-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶 -3-羧酸甲酯(RE-2)

步骤A：4-[[(6-氯吡啶-3-基)甲基](3-甲氧基-3-氧代丙酰基)氨基]-2，5- 二氢噻吩-3-羧酸甲酯

向在MeCN(20mL)中的参照实施例1的产物(5.30g，18.6mmol)中加入3-氯-3-氧代丙酸甲酯(3.59mL，33.5mmol)。在54℃，搅拌该混合物90分钟。加入另一份3-氯-3-氧代丙酸甲酯(1mL，9.32mmol)，然后，加热该反应至65℃另外3.5小时。浓缩该反应，然后用EtOAc稀释，用饱和的NaHCO₃水溶液、盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并浓缩。通过在硅胶上的快速色谱纯化残余物，用在己烷中的0-100％的EtOAc梯度洗脱，得到产物。

步骤B：1-[(6-氯吡啶-3-基)甲基]-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并 [3，4-b]吡啶-3-羧酸甲酯(RE-2)

在室温，向在MeOH(60mL)中的步骤A的产物(6.645g，17.3mol)中加入甲醇钠(5.92mL，25.9mmol，25wt％)。在20分钟之后，浓缩该反应，然后用EtOAc稀释，用HCl水溶液(2M)洗涤，接着用水洗涤，得到未纯化的标题化合物(RE-2)，将其直接用于参照实施例3中。HPLC/MS：353.0(M+1)；R_t＝2.68min。

参照实施例3

N-({1-[(6-氯吡啶-3-基)甲基]-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b] 吡啶-3-基}羰基)甘氨酸叔丁基酯(RE-3)

向在1-丙醇(55mL)中的参照实施例2的产物(5.64g，16.0mmol)中加入甘氨酸叔丁基酯(3.93mL，28.8mmol)。在102℃，搅拌该反应75min，然后，将其放到冷冻机(-18)中2天以结晶。浓缩该混合物，将产物悬浮在i-PrOH中，并通过过滤分离。干燥产物，然后用CH₂Cl₂(100mL)稀释。过滤该混浊溶液穿过C盐

然后部分浓缩至约80mL。通过加入约100mL的i-PrOH以结晶出产物。在室温1小时之后，通过过滤分离产物，在真空中干燥，得到标题化合物(RE-3)。HPLC/MS：452.0(M+1)；R_t＝3.44min。

实施例1

N-({1-[(6-氯吡啶-3-基)甲基]-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b] 吡啶-3-基}羰基)甘氨酸(1-1)

在室温，向参照实施例3的产物(0.100g，0.221mmol)中加入CH₂Cl₂(0.75mL)和TFA(0.75mL)。在1小时之后，用MeOH(5mL)稀释反应，以结晶出产物。浓缩该混合物，然后用MeOH稀释。通过过滤分离结晶，用MeOH洗涤两次，和用己烷洗涤一次，得到标题化合物。HPLC/MS：396.0(M+1)；R_t＝2.67min。

实施例2

N-{[1-(4-溴苄基)-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基] 羰基}甘氨酸(2-1)

在室温，向N-{[1-(4-溴苄基)-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基]羰基}甘氨酸叔-丁基酯(以与参照实施例3和前述参照实施例类似的方式制得，1.007g，2.033mmol)中加入CH₂Cl₂(10.0mL)和TFA(2.0mL)。在1小时后，加热该反应至40℃另外4小时。浓缩反应，然后用Et₂O和MeOH稀释以结晶出样品。倾析出液体，并用己烷洗涤固体两次，得到标题化合物。HPLC/MS：438.9.0(M+1)；R_t＝3.38min。

实施例3

N-{[1-(4-氰基苄基)-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3- 基]羰基}甘氨酸(3-1)

向实施例3的产物(65mg，0.148mmol)中加入Zn(CN)₂(17.4mg，0.148mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(7.45mg，0.00814mmol)、1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁(10.8mg，0.020mmol)、DMF(2.0mL)和水(0.2mL)。在室温，用N₂吹扫反应5分钟，然后加热到109℃约4小时。用EtOAc稀释反应，用1∶1的盐水/HCl水溶液(2M)洗涤，并浓缩。通过在C18柱上的半制备反相HPLC纯化残余物，用15至100％的MeCN/H₂O(各自包含0.05％的TFA)洗脱，得到标题化合物(3-1)。HPLC/MS：386.0(M+1)；R_t＝2.96min。

使用类似于在参照实施例和实施例1和2中描述的方法与合适的胺起始原料偶联，制备如在表1中所示的化合物实施例4至24。

表1

实施例25

N-({4-羟基-1-[(4′-甲基联苯基-4-基)甲基]-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻唑并 [3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸(25-1)

将实施例2的产物(2-1)(0.08g，0.16mmol)溶于在CEM Corporation Discover 300Watt微波反应器的10mL反应管中的DMA(2mL)中。加入Na₂CO₃的水溶液(2M，0.8mL，1.6mmol)、4-甲苯基硼酸(40mg，0.29mmol)和双(三苯基膦)氯化钯(II)(11mg，0.016mmol)，用氮气吹扫该管，盖帽，并***微波反应器中。在115℃以50瓦最大功率加热15分钟。用EtOAc稀释反应，用2M HCl洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并浓缩。通过在C18柱上的半制备反相HPLC纯化残余物，用在水中的0-100％MeCN洗脱。浓缩期望的级分，将其溶于EtOAc中，并用水洗涤。干燥(Na₂SO₄)有机层，过滤并浓缩，得到标题化合物(25-1)。450.9(M+1)；R_t＝3.52min。

实施例26

N-[(1-{[5-(2-氟苯基)吡嗪-2--基]甲基}-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩 [3，4-b]吡啶-3-基)羰基]甘氨酸(26-1)

步骤A：N-[(1-{[5-(2-氟苯基)吡嗪-2-基]甲基}-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7- 四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基)羰基]甘氨酸叔丁基酯

将N-[(1-{[5-(2-氟苯基)吡嗪-2-基]甲基}-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基)羰基]甘氨酸叔丁基酯(以与参照实施例3和前述参照实施例类似的方式制得，0.1g，0.22mmol)溶于在CEMCorporation Discover 300Watt微波反应器的10mL反应管中的DMA(1mL)中。加入Na₂CO₃的水溶液(2M，0.33mL，0.66mmol)、(2-氟苯基)硼酸(56mg，0.4mmol)和双(三苯基膦)氯化钯(II)(12mg，0.018mmol)，用氮气吹扫该管，盖帽，***微波反应器中，并在110℃以20瓦最大功率加热12分钟。用EtOAc稀释反应物，用2M HCl洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并浓缩。在二氧化硅快速色谱柱上纯化残余物，用在己烷中的0-35％的EtOAc洗脱。浓缩期望的级分，得到所述化合物。513.1(M+1)；R_t＝3.72min。

步骤B：N-[(1-{[5-(2-氟苯基)吡嗪-2-基]甲基}-4-羟基-2-氧代-1，2，5，7- 四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基)羰基]甘氨酸(26-1)

将步骤A的产物(110mg，0.215mmol)溶于DCM(1mL)中，加入TFA(1mL)。在环境温度，搅拌反应3¹/₂小时。浓缩该反应，在半制备C-18反相色谱柱上纯化残余物，用在水中的0-100％MeCN洗脱。浓缩期望的级分，得到标题化合物(26-1)。457.0(M+1)；R_t＝3.09min。

使用在实施例25或实施例26中描述的一般Suzuki偶联程序和合适的起始原料，获得如在表2中所示的化合物实施例27至实施例57。

表2

实施例58

N-({4-羟基-1-[(4′-甲基联苯基-4-基)甲基]-6，6-二氧-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩并[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸(58-1)

将实施例25的产物(25-1)(36mg，0.08mmol)溶于DMF(1mL)中，加入mCPBA(41.2mg，0.184mmol)。在35℃，加热该反应5小时。将反应冷却，并加入水(0.2mL)。过滤反应物，通过在C18柱上的半制备反相HPLC纯化残余物，用在水中的0-100％的MeCN洗脱。浓缩期望的级分，得到标题化合物(58-1)。HPLC/MS：483.0(M+1)；R_t＝3.12min。

实施例59

N-({4-羟基-1-[(4′-甲基联苯基-4-基)甲基]-6-氧-2-氧代-1，2，5，7-四氢噻吩[3，4-b]吡啶-3-基}羰基)甘氨酸(59-1)

从实施例58(58-1)中分离出作为副产物的标题化合物(59-1)。HPLC/MS：467.1(M+1)；R_t＝2.90min。

使用与在实施例58中描述的类似的方法和合适的硫化物化合物，制备如在表3中所示的化合物实施例60至66。

表3

生物检验

发现本发明示例性化合物实施例1至66抑制PHD2和HIF之间的相互作用，显示出的IC₅₀值为1纳摩尔浓度至10微摩尔浓度。可用于检测有利的活性的检验的非限制性实例公开在下述出版物中：Oehme，F.，等人，Anal.Biochem.330：74-80(2004)；M，等人，J.Bio.Chem.278(33)：30772-30780(2005)；Hyuniu，C，等人，Biochem，Biophys.Res. Comm.330(2005)275-280；和Hewitson，K.S.，等人，Methods in Enzymology，(Oxygen Biology and Hypoxia)；Elsevier Publisher(2007)，第25-42页(ISSN：0076-6879)。

可以使用本文下述描述的检验评价本发明化合物的生物活性：

向96-孔培养板的每个孔中加入1μL在DMSO中的测试化合物和20μl检验缓冲液(50mM Tris pH 7.4/0.01％Tween-20/0.1mg/ml牛血清白蛋白/10μM硫酸亚铁/1mM抗坏血酸钠/20μg/ml过氧化氢酶)，含有0.15μg/ml FLAG-标记的全长PHD2，所述PHD2是在感染杆状病毒的Sf9细胞中表达和纯化的。在室温预培养30分钟之后，通过加入4μL底物(最终浓度为0.2μM的2-氧代戊二酸和0.5μM HIF-1α肽生物素-DLDLEMLAPYIPMDDDFQL)来开始酶促反应。在室温培养2小时之后，通过加入25μL的中止/检测混合物至最终浓度为1mM的邻菲咯啉、0.1mM EDTA、0.5nM抗-(His)₆LANCE试剂(Perkin-Elmer Life Sciences)、100nM AF647-标记的链霉抗生物素蛋白(Invitrogen)和2μg/ml(His)₆-VHL复合物(S.Tan(2001)Protein Expr.Purif.21，224-234)来终止该反应和展开信号。测定在665和620nm的时间分辨荧光信号的比例，并且计算相对于平行运转的未抑制对照样品的抑制百分比。

类似地，可以测定对HIF-PHD1和HIF-PHD3催化活性的抑制。

表4包括实施例1-66的PHD2结合活性，以IC₅₀(nM)表示：

表4

+＝≤10IC₅₀(nM)

++＝＞10to≤100IC₅₀(nM)

Claims

1.式I的化合物及其可药用盐和溶剂化物：

其中

n为1或2；

X或Y之一为-S(O)_n，且另一个为CR⁴R⁵；

R¹选自

-C_1-10烷基，

-C_2-10链烯基，

-C_5-10环烯基，

-C_2-10炔基，

-C_0-10烷基芳基，

-C_0-10烷基杂环基，

-C_0-10烷基-C_0-10环烷基，和

全氟C_1-6烷基；

R²和R³独立地选自氢、苯基、杂环基和-C_1-10烷基，其中C_1-10烷基为未取代的或被一个或多个氟原子取代，且苯基为未取代的或被一个或多个选自氟、氯、羟基、C_1-10烷基和-OC_1-10烷基的取代基取代；

R⁴、R⁵、R⁶和R⁷独立地选自氢、氰基、氧代、-C_1-10烷基、-C_2-10链烯基、-C_3-10环烷基、-(C_1-10烷基)芳基、(C_0-10烷基)杂环基、-C_5-10环烯基、-C_2-10炔基、-SO_n(C_1-10烷基)和-SO_n芳基，其中所述烷基、链烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基和杂环基任选地被一个或多个取代基R⁹取代，和

任选地一组取代基R⁴和R⁵、或R⁶和R⁷一起连接形成任选地被一个或多个取代基R⁹取代的5至8个原子的环；

其中所述环是部分不饱和的或完全不饱和的，具有0、1或2个杂原子，其独立地选自-NR⁶、-O-和-S(O)_n-；

R⁹选自卤素、羟基、氧代、氰基、芳基、杂环基、-C_1-6烷基、-C_1-6烷氧基、芳氧基、杂环氧基、-CO₂R^a、-NR^bR^c、-CONR^bR^c、-OCO₂R^a、-OCONR^bR^c、-NR^dCO₂R^a、-NR^dCONR^bR^c、-S C_0-6烷基和-S(O)_nR^d，其中所述芳基、杂环基、烷氧基、芳氧基、杂环氧基任选地被一个或多个取代基R¹⁰取代；

R¹⁰选自羟基、芳基、杂环基、卤素、-C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、卤素、CO₂H、氰基、O(C＝O)_0-1C_1-6烷基、NO₂、三氟甲氧基、三氟乙氧基、-O(0-1)(C_1-10)全氟烷基、C_0-10烷基氨基羰基氨基、C_0-10烷氧基羰基氨基C_0-10烷基、C_0-10烷基羰基氨基C_0-10烷基、C_0-10烷基氨基磺酰基氨基C_0-10烷基、C_0-10烷基磺酰基氨基C_0-10烷基、C_0-10烷基磺酰基、C_0-10烷基氨基磺酰基、C_0-10烷基氨基羰基、-(C＝O)N(C_0-6烷基)₂、-S(C_0-6烷基)和NH₂；

2.权利要求1的化合物，其中X为-S(O)_n，和Y为CR⁴R⁵。

3.权利要求1的化合物，其中Y为-S(O)_n，和X为CR⁴R⁵。

4.权利要求1的化合物，其中R¹选自-C_0-10烷基芳基和-C_0-10烷基杂环基。

5.权利要求4的化合物，其中C_0-10烷基芳基为-C_1-3烷基芳基，和所述芳基部分选自苯基、萘基、四氢化萘基、2，3-二氢化茚基、联苯基和2，3-二氢茚基。

6.权利要求5的化合物，其中-C_1-3烷基芳基选自-C_1-3烷基苯基、-C_1-3烷基联苯基和-C_1-3烷基联苯基2，3-二氢茚基。

7.权利要求4的化合物，其中R¹为-C_0-10烷基杂环基。

8.权利要求7的化合物，其中在-C_0-10烷基杂环基中，所述杂环基部分选自氮杂苯并咪唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋咱基、苯并吡唑基、苯并***基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并

唑基、咔唑基、咔啉基、苯并二氢吡喃基、噌啉基、呋喃基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、吲嗪基、吲唑基、异苯并呋喃基、异苯并二氢吡喃基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异

唑基、萘并吡啶基、

二唑基、

唑基、

唑啉基、异

烷基、六氢氮杂

唑基、二氢呋喃基、二氢咪唑基、二氢吲哚基、二氢异

烷基、二氢异噻唑基、二氢

二唑基、二氢唑基、二氢吡嗪基、二氢吡唑基、二氢吡啶基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、二氢嘧啶基、二氢吡咯基、二氢喹啉基、二氢四唑基、二氢噻二唑基、二氢噻唑基、二氢噻吩基、二氢***基、二氢氮杂环丁烷基、亚甲基二氧基苯甲基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢喹啉基、2，3-二氢苯并呋喃基、2，3-二氢苯并-1，4-二氧杂环己烯基、咪唑并(2，1-b)(1，3)噻唑、嘧啶基苯基、吡啶基苯基和苯并-1，3-间二氧杂环戊烯基。

9.权利要求8的化合物，其中在-C_0-10烷基杂环基中，所述杂环基部分选自吡啶基、苯基、噻唑基、