CN101948846A - 参与植物纤维发育的多核苷酸和多肽和使用它们的方法 - Google Patents

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Abstract

提供了分离的多核苷酸。每种分离的多核苷酸包含编码多肽的核酸序列，所述多肽具有与SEQ ID NO：26、106、107、109、110、112、114、115、118、119、122、123、124、126、95或96至少80％同源的氨基酸序列，其中该多肽能调节棉花纤维发育。还提供了使用这样的多核苷酸提高纤维生产性植物的纤维质量和/或产量的方法，以及使用这样的多核苷酸生产具有提高的生物量/活力/产量的植物的方法。

Description

参与植物纤维发育的多核苷酸和多肽和使用它们的方法
本申请是国际申请日为2005年6月14日的国际申请PCT/IL2005/000627进入中国、申请号为200580027481.4的题为“参与植物纤维发育的多核苷酸和多肽和使用它们的方法”的发明专利申请的分案申请。
技术领域
本发明涉及参与植物纤维发育的多核苷酸和多肽和使用它们的方法。
本发明涉及一种新的计算方法，其利用比较基因组学来鉴别在纤维发育中起作用的基因。
背景技术
棉花和棉花副产物提供了用于生产大量基于消费者的产品的原料，所述产品除了纺织品以外，包括棉花粮食、家畜饲料、肥料和纸。仅仅在美国，基于棉花的产品的生产、销售、消费和贸易每年产生1000亿美元的盈余，从而使棉花成为最增值的农作物。
据估计，人类使用棉花作为纤维，在中美洲可以追溯到7000年前，在印度可以追溯到5000年前。即使在最近50年来，有合成纤维的增长，但棉花仍然占世界纺织品纤维的约50％[Agrow Reports，Global Seed markets DS208，October 2000]。
尽管棉花作为农作物的价值的90％存在于纤维(皮棉)，但产量和纤维质量已经下降，尤其是在最近十年来[Meredith(2000)，Proc.World Cotton Research Conference II，Athens，Greece pp.97-101]。该下降已经归因于棉花品种的遗传多样性的普遍侵蚀，和该农作物对环境条件的增加的易损性[Bowman等，Crop Sci.36：577-581(1996)；Meredith，同上]。
存在许多棉花植物品种，从它们可以得到具有一系列特征的棉花纤维，并将其用于多种应用。可以根据许多性质来表征棉花纤维，其中有些被认为是生产日益高质量的产品和最佳地开发现代纺织技术的纺织工业中非常需要的。商业上需要的性质包括长度、长度均匀性、细度、成熟度比率、减少的棉籽绒生产、马克隆尼气流式纤维细度测试仪、束纤维强度和单纤维强度。已经将许多努力用于改良棉花纤维的特征，主要集中在纤维长度和纤维细度上。具体地，对特定长度的棉花纤维存在大量需求。
改良棉花纤维的特征或产量的方法，可以分成下面的三类：
1.通过杂交育种改良品种
到目前为止，该方法已经被最广泛地利用。现在，棉花植物的几乎所有栽培品种都是通过该方法育种的。但是，使用传统育种来提高棉花纤维产量相对较慢且效率低，且可以达到的变异性程度有限。
2.利用植物激素处理
植物激素，例如生长素、赤霉素、细胞***素和乙烯，已经广泛地用于大田作物或园艺产品。已知植物激素(尤其是赤霉素、生长素和油菜素内酯)对棉花植物的纤维特征的影响[例如美国专利号5880110通过用油菜素类固醇处理生产具有改良的纤维特征的棉花纤维]。但是，尚未记载可测量的作用，从而使得这些激素的大规模实践应用非常不可能。
3.通过基因工程改良品种
基因工程改造的棉花在主要生产国的广泛接受和它是非食物农作物的事实，使它成为有吸引力的用于改良纤维产量和/或质量的基因工程改造的候选品。
近年来，植物基因工程改造已经取得显著进展，结果，已经报道了商业上重要的农作物植物的几个成功的品种改良的例子(例如，棉花、大豆、玉米、低芥酸芥子、番茄)。例如，已经开发了通过向棉花植物中导入编码BT毒素(即由苏云金芽胞杆菌(Baillusthuringiensis)生成的杀虫蛋白毒素)的基因来提高抗虫性的方法，并将其付诸实际应用。另外，通过导入编码5-烯醇-丙酮酸-莽草酸3-磷酸合成酶的基因，已经基因工程改造了具有提高的除草剂(草甘膦)抗性的棉花植物。
植物基因工程改造的有效性和成功结合棉花是通过重组技术进行基因操纵的优良候选物的事实，已经引导研究人员假设，如果可以鉴别出与改良的棉花纤维性质有关的基因，则可以使用重组技术上调所述基因，从而提高棉花纤维的特征或产量。相反地，如果可以鉴别出与棉花纤维性质的降低有关的基因，则可以使用基因沉默方法下调所述基因。为此目的，必须在基因水平阐明纤维延长和形成的机理，且必须鉴别出与这些机理密切相关的基因。
棉花纤维由已经从种皮的表皮细胞分化的单个细胞形成，它的发育经过4个阶段，即起始、延长、次生细胞壁增厚和成熟阶段。更具体地，开花后，立即在胚珠的表皮细胞中开始棉花纤维的延长，此后棉花纤维迅速延长约21天。然后终止纤维延长，形成次生细胞壁，且生长成熟，以变成成熟的棉花纤维。
已经分离了几个与棉花纤维的延长和形成有关的候选基因。例如，通过差示筛选方法和差示展示方法，已经从棉花植物鉴别出在棉花纤维延长阶段特异性表达的5个基因[美国专利号5,880,100和美国专利申请系列号08/580,545、08/867,484和09/262,653]。
WO0245485描述了通过调节蔗糖合酶(对细胞壁合成重要的一种糖)在这样的植物中的活性和/或表达，调节纤维-生产性植物(例如棉花)中的纤维质量的方法和工具。
美国专利号6,472,588和WO0117333提供了通过用编码蔗糖磷酸合酶的DNA转化，提高由棉花植物生产的棉花纤维的质量的方法。纤维质量包括强度、长度、纤维成熟度比率、不成熟纤维含量、纤维均匀性和马克隆尼气流式纤维细度测试仪。
WO9508914公开了一种纤维生产性植物，其在它的基因组中包含异源基因构建体。该基因构建体包含纤维-特异性的启动子和编码植物过氧化物酶(例如棉花过氧化物酶)的编码序列。
WO9626639提供了这样的方法，其中使用子房特异性的启动子序列来在棉花胚珠组织中表达植物生长修饰激素。该方法允许修饰棉花植物的棉铃组(boll set)的特征，并提供改变纤维质量特征(例如纤维尺寸和强度)的机理。
美国专利号5,981，834、美国专利号5,597,718、美国专利号5,620,882、美国专利号5,521,708和美国专利号5,495,070都公开了基因工程改造纤维-生产性植物的方法，和用于鉴别棉花中的纤维基因的cDNA克隆的鉴别。cDNA克隆可以用于从纤维生产性植物开发对应的基因组克隆，以使得能够使用这些基因来基因工程改造棉花和其它植物。以有义或反义方向使用来自这些分离的基因的编码序列，以改变转基因纤维生产性植物的纤维特征。
美国专利申请2002049999和2003074697都公开了具有改良的棉花纤维特征的棉属(Gossypium)的棉花植物。该棉花植物具有一个表达盒，所述表达盒含有编码选自endoxyloglucan转移酶、过氧化氢酶和过氧化物酶的酶的基因，从而该基因在棉花纤维细胞中表达，以改良棉花纤维特征。
WO 01/40250提供了通过调节转录因子基因表达来改良棉花纤维质量的方法。
WO 96/40924提供了新DNA构建体，其可以用作分子探针，或者可选择地***植物宿主，以在棉花纤维发育的各个阶段，提供目标DNA序列的转录的修饰。该DNA构建体包含与在棉花纤维中表达的基因有关的棉花纤维转录起始调节区。还提供了一种新棉花，其具有天然颜色的棉花纤维。通过在棉花纤维细胞中导入和表达色素基因构建体，实现该颜色。
EP0834566提供了一种基因，其控制棉花植物的纤维形成机理，且其可以用于工业上有用的改良。
但是，除了蔗糖合酶以外，迄今为止没有证明任何特定基因的表达在棉花纤维形成或增强的纤维特征中起关键作用。
因而，仍然需要鉴别与棉花植物的纤维特征有关的其它基因，且需要更彻底地搜索质量-相关的基因。
在将本发明变为实践的同时，发明人设计和采用了新的计算方法，其利用比较基因组学来鉴别在纤维发育中起关键作用的基因。如本文所证实的，这样的基因的表达与纤维长度相关，且它们的超表达足以修饰番茄种子纤维，棉花纤维的最终模型。这些结果表明，本发明的多核苷酸可以用于产生转基因棉花植物，其特征在于所需长度的纤维。
发明内容
根据本发明的一个方面，提供了分离的多核苷酸，其包含编码具有与SEQ ID NO：26、106、107、109、110、112、114、115、118、119、122、123、124、126、95或96至少80％同源的氨基酸序列的多肽的核酸序列，其中该多肽能调节棉花纤维发育。
根据下述的本发明的优选实施方案的其它特征，核酸序列选自SEQ ID NO.1、2、4、5、7、9、10、16、17、20、21、22、24、25、27和13。
根据所述优选实施方案的其它特征，多肽如SEQ ID NO.26、106、107、109、110、112、114、115、118、119、122、123、124、126、95或96所述。
根据所述优选实施方案的其它特征，氨基酸序列如SEQ ID NO.26、106、107、109、110、112、114、115、118、119、122、123、124、126、95或96所述。
根据所述优选实施方案的其它特征，棉花纤维发育包含纤维形成。
根据所述优选实施方案的其它特征，棉花纤维发育包含纤维延长。
根据本发明的另一个方面，提供了分离的多核苷酸，其包含与SEQ ID NO：85或91具有至少80％同一性的核酸序列，其中该核酸序列能调节至少一个可操作地与其连接的多核苷酸序列在胚珠内皮细胞中的表达。
根据所述优选实施方案的其它特征，胚珠内皮细胞是植物纤维或毛状体的。
根据本发明的另一个方面，提供了寡核苷酸，其能与分离的多核苷酸特异性地杂交。
根据本发明的另一个方面，提供了包含分离的多核苷酸的核酸构建体。
根据所述优选实施方案的其它特征，核酸构建体还包含至少一个可操作地连接到分离的多核苷酸上的顺式-作用调节元件。
根据所述优选实施方案的其它特征，多核苷酸序列选自SEQ IDNO：1、2、4、5、7、9、10、16、17、20、21、22、24、25、27和13。
根据所述优选实施方案的其它特征，顺式-作用调节元件如SEQID NO：74、75、85或91或其功能等同物所述。
根据本发明的另一个方面，提供了包含核酸构建体的转基因细胞。
根据本发明的另一个方面，提供了包含核酸构建体的转基因植物。
根据本发明的另一个方面，提供了提高纤维生产性植物的纤维质量和/或产量的方法，该方法包含，调节至少一种编码多肽的多核苷酸在纤维生产性植物中的表达水平或活性，所述多肽具有与SEQ IDNO：26、106、107、109、110、112、114、115、118、119、122、123、124、126、95或96至少80％同源的氨基酸序列，从而提高纤维生产性植物的质量和/或产量。
根据所述优选实施方案的其它特征，纤维生产性植物的质量包含至少一个选自下述的参数：纤维长度、纤维强度、每单位长度的纤维重量、成熟度比率、均匀性和马克隆尼气流式纤维细度测试仪。
根据所述优选实施方案的其它特征，调节至少一种多核苷酸的表达或活性是上调。
根据所述优选实施方案的其它特征，通过向棉花中导入核酸构建体，实现上调。
根据所述优选实施方案的其它特征，调节至少一种多核苷酸的表达或活性是下调。
根据所述优选实施方案的其它特征，通过基因沉默，实现下调。
根据所述优选实施方案的其它特征，通过向棉花中导入寡核苷酸，实现基因沉默。
根据所述优选实施方案的其它特征，纤维生产性植物选自棉花、丝绵树(木棉花，吉贝(Ceiba pentandra))、沙漠柳树、石炭酸灌木(creosote bush)、winterfat、轻木(balsa)、苎麻、洋麻、***、洛神葵、黄麻、sisal abaca和亚麻。
根据本发明的另一个方面，提供了增加植物的生物量的方法，该方法包含，调节至少一种编码多肽的多核苷酸在植物中的表达水平或活性，所述多肽具有与SEQ ID NO：26、106、107、109、110、112、114、115、118、119、122、123、124、126、95或96至少80％同源的氨基酸序列，从而增加该植物的生物量。
根据所述优选实施方案的其它特征，该植物是单子叶植物。
根据所述优选实施方案的其它特征，该植物是双子叶植物。
根据本发明的另一个方面，提供了鉴别参与棉花纤维发育的基因的方法，该方法包含：
(a)提供源自棉花纤维的表达的核酸序列；
(b)提供源自胚珠组织的表达的核酸序列；
(c)计算地装配(a)和(b)的表达的核酸序列，以产生簇；和
(d)鉴别簇中包含(a)和(b)的表达的核酸序列的簇，从而鉴别参与棉花纤维发育的基因。
根据所述优选实施方案的其它特征，该方法还包含，在(d)之后，鉴别在棉花纤维中有差异地表达的基因。
根据所述优选实施方案的其它特征，有差异地表达包含：
(a)特异性的表达；和/或
(b)表达随纤维发育的变化。
根据本发明的另一个方面，提供了生产昆虫抗性植物的方法，其包含调节至少一种编码多肽的多核苷酸在植物的毛状体中的表达水平或活性，所述多肽具有与SEQ ID NO：26、106、107、109、110、112、114、115、118、119、122、123、124、126、95或96至少80％同源的氨基酸序列，从而生产昆虫抗性植物。
根据本发明的另一个方面，提供了生产棉花纤维的方法，该方法包含：
(a)产生表达至少一种多肽的转基因棉花植物，所述多肽具有与SEQ ID NO：26、106、107、109、110、112、114、115、118、119、122、123、124、126、95或96至少80％同源的氨基酸序列；和
(b)收获转基因棉花植物的纤维，从而生产棉花纤维。
本发明通过提供参与棉花纤维发育的基因和使用它们的方法，成功地解决了现在已知的构型的缺点。
除非另有定义，在本文中使用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领域的普通技术人员的通常理解相同的含义。尽管与本文所述的那些相似或等同的方法和材料可以用于实践或测试本发明，但下面描述了合适的方法和材料。在冲突的情况下，以专利说明书、包括定义为准。另外，材料、方法和实施例仅仅用于解释，而无意进行限制。
附图说明
仅仅作为实例，参考附图，描述了本发明。现在，具体地参考附图，应当强调，显示的细节是作为实例，且仅仅用于本发明的优选实施方案的说明性讨论，描述它们的原因是，提供被认为是最有用的、且最容易地理解的本发明的原理和概念方面的描述的那些内容。在这点上，不尝试超过基本上理解本发明所需的详细程度来显示本发明的结构细节，其中说明书和附图使本领域的技术人员明白如何在实践中实现本发明的几种形式。
在附图中：
图1是描述实现鉴别可以用于提高棉花纤维产量和质量的基因的本发明的生物信息学方法的图解。
图2a-d是显示纤维特异性的基因(CT_11图2b)、延长相关基因(CT_1，图2c)和起始相关基因(CT_22，图2d)的表达模式的条线图。
图3是描述CT_76在棉花品种(陆地棉(G.hirsutum)Tamcot、Coker和Acala变种，和海岛棉(G.barbadense)Pima S5变种)植物中的表达的图，如通过RT-PCR所测得的。
图4是pPi二元质粒的示意图。
图5a-l是超表达本发明的基因的野生型和转基因鼠耳芥(arabidopsis)植物的照片。图5a显示了野生型植物的2周龄瓣状体(rosette)；图5b显示了CT11超表达的鼠耳芥植物的2周龄瓣状体；图5c显示了CT11的2周龄根；图5d显示了3周龄野生型鼠耳芥；图5e显示了3周龄CT_20；图5f显示了3周龄CT_22；图5g显示了野生型和CT_9的30天龄瓣状体；图5h显示了野生型和CT_9的30天花序；图5i显示了CT9的2周龄根；图5j显示了野生型和CT_40的30天龄瓣状体；图5k显示了野生型和CT81超表达的植物的5周龄瓣状体；图5l显示了野生型和CT81超表达的鼠耳芥植物的叶子；
图6a-e是描绘超表达CT_20的野生型和转基因番茄植物的照片。图6a显示了野生型植物的叶子；图6b显示了CT_20转基因番茄的叶子；图6c显示了野生型和CT_20超表达的番茄植物的种子纤维；图6d显示了野生型番茄种子的切片；图6e显示了CT_20超表达的番茄种子的切片；图6f是野生型和CT_82的种子纤维。
图7a-b是描绘在CT_2启动子的表达下超表达GUS的转基因番茄植物的照片。图7a是在CT2启动子下超表达GUS的成熟绿色阶段的剪断的转基因番茄果实(x5放大倍数)。图7b类似于图7a，显示了x25放大倍数；
图8a-b是描绘野生型和转基因番茄果实或番茄种子的各种放大倍数的照片。图8a是单个的覆盖有种子纤维的野生型番茄种子，x10放大倍数；图8b显示了在35S下超表达苹果青霉素的番茄种子(x10放大倍数)。
具体实施方式
本发明涉及多肽和编码它们的多核苷酸，其参与植物纤维发育，且可以用于提高纤维生产性植物的纤维质量和/或产量/生物量。
参考附图和伴随的描述，可以更好地理解本发明的原理和操作。
在详细解释本发明的至少一个实施方案之前，应当理解，本发明的应用不限于在下面描述中所示或实施例示例的细节。本发明能有其它实施方案，或能以各种方式实践或实现。同样，应当理解，本文中采用的措辞和术语是用于描述目的的，而不应当视作限制。
棉花和棉花副产物提供了用于生产大量基于消费者的产品的原料，除了纺织品以外，棉花被用于生产粮食、家畜饲料、肥料和纸。仅仅在美国，基于棉花的产品的生产、销售、消费和贸易每年产生1000亿美元的盈余，从而使棉花成为最增值的农作物。
在过去的十年中，棉花纤维生产急剧下降，从而促使棉花种植者和研究人员寻找可以用于提高纤维产量和质量的方法。
增加不同环境条件下的纤维质量和/或产量，会增加棉花农作物生产的收益性，并提供新范围的用于加工业的材料性质。
在将本发明变为实践时，发明人已经设计了新的计算方法，其利用比较基因组学来鉴别在纤维发育中起作用的基因。使用该方法鉴别出的基因可以成功地用于产生转基因植物，其特征在于所需性质的纤维。
因而，根据本发明的一个方面，提供了鉴别参与棉花纤维发育的基因的方法。
如本文所使用的，术语“棉花”指野生型、栽培品种(例如，杂种)或转基因棉花(棉属)植物。
如本文所使用的，短语“纤维发育”指棉花种子纤维的发育。
如本文所使用的，当在棉花纤维的上下文中使用时，术语“发育”指纤维的起始和/或其延长，以及纤维次生细胞壁增厚和成熟。
如下实现根据本发明的该方面的方法：
(a)提供源自棉花纤维的表达的核酸序列；
(b)提供源自胚珠组织(即从种子植物的子房发育的组织。实例包括但不限于心皮、种皮、胚、胚乳)的表达的核酸序列；
(c)计算地装配(a)和(b)的表达的核酸序列，以产生簇；和
(d)鉴别所述簇中包含(a)和(b)的表达的核酸序列的簇，从而鉴别参与棉花纤维发育的基因。
根据本发明的该方面，用作鉴别参与棉花纤维发育的基因的潜在来源的表达的核酸序列，优选地是从组织或细胞系制剂得到的表达的信使RNA [即已表达序列标志(EST)、cDNA克隆、毗连群、信使mRNA前体等]的文库，其可以包括基因组和/或cDNA序列。
可以从现有的可公开得到的数据库(见下面的实施例部分的实施例1，或私有的数据库)，检索根据本发明的该方面的表达的核酸序列。
或者，可以从序列文库(例如，cDNA文库、EST文库、mRNA文库和其它文库)，产生本发明使用的表达的核酸序列。
cDNA文库是表达的序列信息的合适来源。
在这样的情况下，一般地通过组织或细胞样品制备、RNA分离、cDNA文库构建和测序，产生序列数据库。
应当明白，可以从分离自完整植物、特定组织或细胞群体的RNA，构建这样的cDNA文库。
一旦从棉花纤维和胚珠组织得到表达的序列数据，就可以使序列成簇，以形成毗连群。见下面的实施例部分的实施例1。
然后装配这样的毗连群，以鉴别存在于同一簇中的(棉花纤维和胚珠组织的)同源序列，认为这样的毗连群参与棉花纤维发育。
可商业上得到许多能形成表达的序列的簇的常用的计算机软件片段阅读装配器。这些包包括但不限于，TIGR装配器[Sutton G.等(1995)Genome Science and Technology 1：9-19]、GAP[Bonfield JK.等(1995)Nucleic Acids Res.23：4992-4999]、CAP2[Huang X.等(1996)Genomics 33：21-31]、The Genome Construction Manager[Laurence CB.等(1994)Genomics 23：192-201]、Bio ImageSequence Assembly Manager、SeqMan[Swindell SR.和Plasterer JN.(1997)Methods Mol.Biol.70：75-89]、LEADS和GenCarta(Compugen Ltd.以色列)。
一旦鉴别出参与棉花纤维发育的基因，就可以如下面的实施例部分的实施例2所述，分析它们的表达模式，从而鉴别在棉花纤维中(即特异性表达)或在棉花纤维发育过程中(即在棉花纤维发育过程中表达的变化)有差别地表达的基因。
鉴别有差别地表达的基因的方法是本领域众所周知的。
使用上述的方法，发明人能成功地鉴别参与棉花纤维发育的基因。
如下面的实施例部分所述，根据它们与已知蛋白和酶的序列同源性，使用本发明的教导鉴别出的基因可以分成6个功能类(下面的表3)。2个基因归入细胞命运定型类：与已知参与鼠耳芥的毛状体发育的MYB转录因子和GL3同源。2个基因的表达模式和鼠耳芥和番茄T1植物两者中的CT20转基因的表型，支持它们主要在起始阶段的参与。2个其它的基因(下面的表3)是来自MYB和MADS BOX家族的转录因子。许多研究证实了这2个转录因子家族作为在不同发育过程(其中有毛状体和纤维形态发生)中起关键作用的同源异型基因的功能(Suo.J.等2003，Ferrario S等2004)。它们在纤维发育的早期阶段的作用，也得到它们的RNA表达模式的支持，所述表达模式在开花那天之前和过程中诱导。一个基因属于淀粉和蔗糖代谢途径。近期的工作证实，属于该途径的另一个基因(SUS)，是纤维起始和发育的限制因子。另一个基因(下面的表3)归入脂质运输，其RNA表达在早期的纤维延长阶段高度诱导，这与脂质是纤维形成的关键组分的事实相符合。几个基因(下面的表3)分类成参与脱水、脱落酸刺激的盐度反应的基因和参与电子转移的基因。从它们中，通过要在延长阶段诱导的RNA表达模式，选择3个基因。
考虑到上述内容以及将基因表达与纤维长度相关联的实验结果，暗示着本发明的基因可以用于产生具有商业上需要的纤维质量的纤维生产性植物。
因而，本发明包括使用本发明的方法鉴别的多核苷酸和它们编码的多肽以及在本文中鉴别的多肽的功能等同物(即，能调节棉花纤维发育的多肽，如根据下面的实施例部分所述的测定所测得的)和它们的编码序列。这样的功能等同物可以与SEQ ID NO：106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、95或96具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约81％、至少约82％、至少约83％、至少约84％、至少约85％、至少约86％、至少约87％、至少约88％、至少约89％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约75％、至少约75％、至少约75％、至少约75％、约100％同源性。
编码功能等同物的多核苷酸可以与SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或27具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约81％、至少约82％、至少约83％、至少约84％、至少约85％、至少约86％、至少约87％、至少约88％、至少约89％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约75％、至少约75％、至少约75％、至少约75％、约100％的同一性。
使用任意的同源性对比软件，包括，例如，国家生物技术信息中心(National Center of Biotechnology Information)(NCBI)的BlastP软件，例如通过使用默认参数，可以确定同源性(例如，百分比同源性)。
使用任意的同源性对比软件，包括，例如，国家生物技术信息中心(NCBI)的BlastN软件，例如通过使用默认参数，可以确定同一性(例如，百分比同源性)。
如本文所使用的，短语“分离的多核苷酸”指分离的且以RNA序列、互补的多核苷酸序列(cDNA)、基因组多核苷酸序列和/或复合的多核苷酸序列(例如，上述的组合)的形式提供的单链的或双链的核酸序列。
如本文所使用的，短语“互补的多核苷酸序列”指这样的序列，它由使用逆转录酶或任何其它依赖于RNA的DNA聚合酶来逆转录信使RNA产生。随后，可以使用依赖于DNA的DNA聚合酶，体内或体外扩增这样的序列。
如本文所使用的，短语“基因组多核苷酸序列”指从染色体衍生(分离)的序列，因而它代表着染色体的邻接部分。
如本文所使用的，短语“复合的多核苷酸序列”指这样的序列，它是至少部分地互补的，且至少部分地基因组的。复合的序列可以包括编码本发明的多肽所需的一些外显子序列，以及***其中的一些内含子序列。内含子序列可以是任意的来源的，包括其它基因的，且一般地包括保守的剪接信号序列。这样的内含子序列还可以包括顺式作用表达调节元件。
根据本发明的该方面的一个优选实施方案，核酸序列如SEQ IDNO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、15、16、17、19、21、22、23、24、25或26所述。
根据本发明的该方面的另一个优选实施方案，分离的多核苷酸如SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或27所述。
根据本发明的该方面的另一个优选实施方案，多肽如SEQ IDNO：106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、95或96所述。
根据本发明的该方面的另一个优选实施方案，氨基酸序列如SEQID NO：106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、95或96所述。
使用杂交测定，在中等至严格的杂交条件下，在有寡核苷酸探针或引物存在下，通过温育上述的分离的多核苷酸，也可以定量本发明的该方面的分离的多核苷酸。
中等至严格的杂交条件的特征在于杂交溶液，例如含有10％硫酸葡聚糖、1M NaCl、1％SDS和5x 106cpm 32P标记的探针，在65℃，使用0.2xSSC和0.1％SDS的最终洗涤溶液，在65℃最终洗涤，然而如下实现中等杂交：使用含有10％硫酸葡聚糖、1M NaCl、1％SDS和5x106cpm 32P标记的探针的杂交溶液，在65℃，使用1xSSC和0.1％SDS的最终洗涤溶液，和在50℃最终洗涤。
因而，本发明包括上文所述的核酸序列；其片段，可与其杂交的序列，与其同源的序列，编码类似的具有不同密码子选择的多肽的序列，特征在于突变的改变的序列，所述突变例如，缺失、***或置换一个或多个核苷酸，无论是天然发生的还是人工诱导的，无论是随机地还是以靶定的方式。
由于本发明的多核苷酸序列编码以前未鉴别的多肽，所以本发明也包括由上文所述的分离的多核苷酸和其各自核酸片段编码的新多肽或其部分。
因而，本发明也包括由本发明的多核苷酸序列编码的多肽。这些新多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：26、106、107、109、110、112、114、115、118、119、122、123、124、126、95或96所述。
本发明也包括这些多肽的同源物，这样的同源物可以与SEQ IDNO：26、106、107、109、110、112、114、115、118、119、122、123、124、126、95或96具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约81％、至少约82％、至少约83％、至少约84％、至少约85％、至少约86％、至少约87％、至少约88％、至少约89％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或更进一步约100％的同源性。
本发明也包括上述多肽和具有突变的多肽的片段，所述突变例如，缺失、***或置换一个或多个氨基酸，无论是天然发生的还是人工诱导的，无论是随机地还是以靶定的方式。
在棉花纤维的至少一个结构参数例如纤维长度或纤维细度或纤维生长速率上，可以直接确定本发明的多核苷酸和它们的产物调节棉花纤维发育的能力(下文进一步描述)。但是，通过例如用于棉花纤维发育的植物模型***，也可以间接确定棉花纤维发育。例如，已经充分确立，毛状体细胞和根毛与棉花纤维细胞共有共同的特征，且同样可以用作棉花纤维发育的模型***[综述见Wagner.GJ.等(2004)]，如在下面的实施例部分的实施例12中详细证实的。
通过分析表达特征，发明人能确定本发明的生物分子序列(即多核苷酸和多肽)在纤维起始和/或延长中的参与。通过确立基因表达和纤维长度之间的关联，进一步证实了这些结果(见实施例7)。
这些结果表明，本发明的生物分子序列(例如，多核苷酸、多肽、启动子、寡核苷酸、抗体，在本文中也称作试剂)可以用于提高纤维生产性植物的纤维质量和/或产量。
因而，根据本发明的另一个方面，提供了提高纤维生产性植物的纤维质量和/或产量的方法。
如下实现本发明的该方面的方法：调节至少一种本发明的多核苷酸或多肽(上文所述的)在纤维生产性植物中的表达水平或活性，从而提高纤维生产性植物的质量和/或产量。
如本文所使用的，短语“纤维生产性植物”指共有下述共同特征的植物：具有伸长的形状和厚细胞壁(一般地称作次生壁)中丰富的纤维素。这样的壁可以是或不是木质化的，且这样的细胞的原生质体可以在成熟时是或不是有生活力的。这样的纤维具有许多工业用途，例如木材和加工好的木材产品、纸、纺织品、麻袋布和拳击材料、绳索、刷子和扫帚、填料和填充剂(stuffing)、填缝材料、其它材料的加强和纤维素衍生物的生产。
根据本发明的该方面的一个优选实施方案，纤维生产性植物是棉花。
术语“纤维”通常包括厚壁传导细胞例如导管和管胞，和许多单个的纤维细胞的纤丝聚集体。因此，术语“纤维”指(a)木质部的厚壁传导和非-传导细胞；(b)木质部外起源的纤维，包括来自韧皮部、树皮、基本组织和表皮的那些；和(c)来自茎、叶子、根、种子和花或花序的纤维(例如在刷子和扫帚的生产中使用的蜀黍(Sorghumvulgare)的那些)。
纤维生产性植物的实例包括但不限于，农作物，例如棉花、丝绵树(木棉花，吉贝)、沙漠柳树、石炭酸灌木、winterfat、轻木、洋麻、洛神葵、黄麻、sisal abaca、亚麻、玉米、甘蔗、***、苎麻、木棉花、椰子壳纤维(coir)、竹子、铁兰和龙舌兰属(Agave)物种(例如波罗麻)。
如本文所使用的，短语“纤维质量”指农业上需要的或纤维工业中需要的至少一个纤维参数(下文进一步描述)。这样的参数的实例包括但不限于，纤维长度、纤维强度、纤维适合度、每单位长度的纤维重量、成熟度比率和均匀性(下文进一步描述)。
一般地根据纤维长度、强度和细度测量棉花纤维(皮棉)质量。因此，当纤维更长、更强和更细时，认为皮棉质量更高。
如本文所使用的，短语“纤维产量”指从纤维生产性植物生产的纤维的量。
如本文所使用的，术语“提高”指，与天然植物(即未用本发明的生物分子序列修饰)相比，纤维质量/产量变化至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％。
如本文所使用的，术语“调节”指上调、下调或其组合。例如，当需要增加纤维纤度时，可以如下实现本发明：上调至少一种本发明的参与纤维起始的多核苷酸(例如，SEQ ID NO：4、10、9、12、16和25)。或者，当需要短纤维时，例如，在玉米中，则如下实现本发明：下调至少一种本发明的参与纤维延长的多核苷酸(例如，SEQ IDNO.1、2、3、5、6、7、17、18、19、20、21、22、23、24和27)。或者，可以如下实现本发明：上调至少一种本发明的多核苷酸(例如参与纤维延长)的表达和下调至少一种本发明的多核苷酸(例如参与纤维延长)。以此方式，可以得到具有提高的每种短长度的纤维产量的纤维生产性植物。
依靠调节至少一种本发明的多核苷酸的表达水平，可以在基因组水平(例如，借助于启动子、增强子或其它调节元件，来激活转录)、转录物水平或蛋白水平实现本发明。
下面是能上调本发明的生物分子序列(即核酸或蛋白序列)的表达水平和/或活性的试剂的不完全列表。
能上调目标多核苷酸的表达的试剂可以是外源多核苷酸序列，其设计或构建成用于表达其至少功能部分(例如，提高纤维产量/质量、增加生物量等)。因此，外源多核苷酸序列可以是编码多肽分子的DNA或RNA序列，其能提高纤维产量或量。或者，外源多核苷酸可以是顺式作用调节区(例如，SEQ ID NO：74、75、85、88或91)，其可以被导入植物中来增加参与纤维发育的任何多核苷酸的表达(例如，蔗糖磷酸合酶，如美国专利号6,472,588所述)。
为了在植物细胞中表达外源多核苷酸，优选地将本发明的多核苷酸序列连接进适合于植物细胞表达的核酸构建体中。这样的核酸构建体包括顺式作用调节区，例如用于指导多核苷酸序列在细胞中以组成型的或诱导型的方式转录的启动子序列。启动子可以与转化的植物/细胞同源或异源。
可以根据本发明的该方面使用的优选启动子序列是内皮细胞启动子。
例如，本发明的每种多核苷酸序列的启动子序列可以优选地用于本发明的核酸构建体中。
根据本发明的该方面的一个优选实施方案，启动子与SEQ ID NO.85或91是至少约80％、至少约81％、至少约82％、至少约83％、至少约84％、至少约85％、至少约86％、至少约87％、至少约88％、至少约89％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％同一性的，其能调节至少一个可操作地与其连接的多核苷酸序列在胚珠内皮细胞中的表达(即能对与其连接的编码序列产生调节作用)。
从下面的实施例部分可以清楚地看出，这样的启动子序列能调节与其可操作地连接的编码核酸序列(例如，GUS)的表达。
棉花纤维-增强的启动子的其它实例包括棉花纤维-表达的基因E6(John等，Plant Mol.Biol.，30：297-306(1996)和John等，Proc.Natl.Acad.Sci.，93：12768-12773(1996)e)、H6(John等，PlantPhysiol.，108：669-676，(1995))、FbL2A(Rinehart等，Plant Physiol.，112：1331-1341(1996)和John等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，93：12768-12773(1996))、rac(Delmer等，Mol.Gen.Genet，248：43-51(1995))；CelA(Pear等，Proc.Natl.Acad.Sci USA，93：12637-12642(1996))；CAP(Kawai等，Plant Cell Physiol.39：1380-1383(1998))；ACP(Song等，Biochim.Biophys.Acta 1351：305-312(1997)；和LTP(Ma等，Biochim.Biophys.Acta 1344：111-114(1997))的启动子。美国专利号5,495,070公开了其它棉花纤维特异性的启动子。
可以根据本发明的该方面使用的其它启动子是能确保仅在特定器官(例如叶子、根、块茎、种子、茎、花)或特定细胞类型(例如薄壁组织、表皮、毛状体或维管细胞)中表达的那些。
在Evogene Ltd的WO 2004/111183中，公开了优选的用于增强毛状体细胞中的表达的启动子。
优选的增强维管组织中的表达的启动子包括CAD 2启动子(Samaj等，Planta，204：437-443(1998))、Pt4C11启动子(Hu等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，95：5407-5412(1998))、C4H启动子(Meyer等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，95：6619-6623(1998))、PtX3H6和PtX14A9启动子(Loopstra等，Plant Mol.Biol.，27：277-291(1995))、RolC启动子(Graham，Plant Mol.Biol.，33：729-735(1997))、Hvhsp17启动子(Raho等，J.Expt.Bot，47：1587-1594(1996))和COMT启动子(Capellades等，Plant Mol.Biol.，31：307-322(1996))。
优选的增强茎组织中的表达的启动子包括pith启动子(Datta，Theor.Appl.Genet.，97：20-30(1998)和Ohta等，Mol.Gen.Genet.，225：369-378(1991))和阴离子过氧化物酶启动子(Klotz等，PlantMol.Biol.，36：509-520(1998))。优选的增强韧皮部、树皮和木栓而不是木质部或髓中的表达的启动子包括Psam-1启动子(Mijnsbrugge等，Plant and Cell Physiol.，37：1108-1115(1996))。
优选的增强种子中的表达的启动子包括phas启动子(Geest等，Plant Mol.Biol.32：579-588(1996))；GluB-1启动子(Takaiwa等，Plant Mol.Biol.30：1207-1221(1996))；γ-玉米醇溶蛋白启动子(Torrent等Plant Mol.Biol.34：139-149(1997))和油质蛋白启动子(Sarmiento等，The Plant Journal 11：783-796(1997))。
在Evogene Ltd的WO 2004/081173中，公开了可以介导组成型的、诱导型的、组织-特异性的或发育阶段-特异性的表达的其它启动子序列。
也可以使用截短的或合成的启动子，包括赋予组织-增强的表达的特定核苷酸区，如通过赋予木质部-增强的表达的大启动子内的调节元件的鉴别所例证的(Seguin等，Plant Mol.Biol.，35：281-291(1997)；Torres-Schumann等，The Plant Journal，9：283-296(1996)；和Leyva等，The Plant Cell，4：263-271(1992))。
核酸构建体可以是，例如，质粒、杆粒、噬菌粒、粘粒、噬菌体、病毒或人工染色体。优选地，本发明的核酸构建体是质粒载体，更优选地，是二元载体。
短语“二元载体”指一种表达载体，其携带修饰的来自Ti质粒的T-区，其能在大肠杆菌(E.coli)和土壤杆菌(Agrobacterium)细胞中繁殖，且通常包含2个边界区之间的植物转化的报告基因。适用于本发明的二元载体包括pBI2113、pBI121、pGA482、pGAH、pBIG、pBI101(Clonetech)、pPI(见下面的实施例部分的实施例5)或其修饰。
本发明的核酸构建体可以用于转化宿主细胞(例如，细菌、植物)或植物。
如本文所使用的，术语“转基因的”或“转化的”可互换地使用，指向其中已经转移了克隆的遗传材料的细胞或植物。
在稳定的转化中，本发明的核酸分子整合进植物基因组，且同样它代表着稳定的且可遗传的性状。在瞬时转化中，核酸分子由转化的细胞表达，但是未整合进基因组中，且同样代表着瞬时性状。
存在多种将外来基因导入单子叶和双子叶植物的方法(Potrykus，I.(1991).Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol 42，205-225；Shimamoto，K.等(1989).Fertile transgenic rice plants regeneratedfrom transformed protoplasts.Nature(1989)338，274-276)。
外源DNA向植物基因组DNA中的稳定整合的基本方法包括2个主要方法：
(i)土壤杆菌-介导的基因转移。见：Klee，H.J.等(1987).AnnuRev Plant Physiol 38，467-486；Klee，H.J.和Rogers，S.G.(1989).Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plants，Vol.6，MolecularBiology of Plant Nuclear Genes，pp.2-25，J.Schell和L.K.Vasil，编，Academic Publishers，San Diego，Cal.；和Gateuby，A.A.(1989).Regulation and Expression of Plant Genes in Microorganisms，pp.93-112，Plant Biotechnology，S.Kung和C.J.Arntzen，编，Butterworth Publishers，Boston，Mass。
(ii)直接DNA摄入。见，例如：Paszkowski，J.等(1989).CellCulture and Somatic Cell Genetics of Plants，Vol.6，MolecularBiology of Plant Nuclear Genes，pp.52-68，J.Schell和L.K.Vasil，编，Academic Publishers，San Diego，Cal.；和Toriyama，K.等(1988).Bio/Technol 6，1072-1074(methods for direct uptake of DNA intoprotoplasts)。也见：Zhang等(1988).Plant Cell Rep 7，379-384；和Fromm，M.E.等(1986).Stable transformation of maize after genetransfer by electroporation.Nature 319，791-793(DNA uptakeinduced by brief electric shock of Plant Cells).也见：Klein等(1988).Bio/Technology 6，559-563；McCabe，D.E.等(1988).Stabletransformation of soybean(Glycine max)by particle acceleration.Bio/Technology 6，923-926；和Sanford，J.C.(1990).Biolistic planttransformation.Physiol Plant 79，206-209(DNA injection into PlantCells or tissues by particle bombardment).也见：Neuhaus，J.M.等(1987).Theor Appl Genet 75，30-36；和Neuhaus，J.M.和Spangenberg，G.C.(1990).Physiol Plant 79，213-217(使用微量移液管***)。见美国专利号5,464,765(glass fibers or silicon carbidewhisker transformation of cell cultures，embryos or callus tissue)。也见：DeWet，J.M.J.等(1985).“Exogenous gene transfer in maize(Zea mays)using DNA-treated pollen,”Experimental Manipulationof Ovule Tissue，G.P.Chapman等，编，Longman，New York-London，pp.197-209；和Ohta，Y.(1986).High-Efficiency GeneticTransformation of Maize by a Mixture of Pollen and Exogenous DNA.Proc Natl Acad Sci USA 83，715-719(direct incubation of DNA withgerminating pollen)。
土壤杆菌-介导的***包括使用质粒载体，所述质粒载体含有整合进植物基因组DNA中的定义的DNA片段。接种植物组织的方法依赖于植物物种和土壤杆菌送递***而异。广泛使用的方法是叶-盘(leaf-disc)方法，其可以用能提供用于完整-植物分化的起始的良好来源的任意组织外植体进行(Horseh，R.B.等(1988).“Leaf disctransformation.”Plant Molecular Biology Manual A5，1-9，KluwerAcademic Publishers，Dordrecht)。一种补充方法采用与真空渗入相结合的土壤杆菌送递***。土壤杆菌***特别适用于建立转基因的双子叶植物。
存在各种指导DNA转移进植物细胞中的方法。在电穿孔中，简单地将原生质体暴露于强电场中，从而打开小孔以允许DNA进入。在显微注射中，使用微量移液管，将DNA直接机械地注射进细胞中。在微粒轰击中，将DNA吸附到微粒(例如硫酸镁晶体或钨颗粒)上，且将微粒物理地加速进细胞或植物组织中。
稳定转化后，发生植物繁殖。植物繁殖的最普通方法是通过种子。但是，通过种子繁殖进行再生的缺点是，杂合性导致的农作物缺少一致性，这是因为种子由植物根据孟德尔规则控制的遗传变异生成。换言之，每粒种子都是遗传上不同的，且各自具有它自身的特定性状地生长。因此，优选地实现再生，从而使再生的植物具有与亲本转基因植物一致的性状和特征。优选的再生转化的植物的方法是通过微繁殖(micropropagation)，它会提供转化植物的快速的、一致的繁殖。
微繁殖是由从选择的亲本植物或栽培品种切离的单个组织样品生长第二代植物的方法。该方法允许大量繁殖具有优选的组织且表达融合蛋白的植物。新产生的植物在遗传上与原始植物一致，且具有原始植物的所有特征。微繁殖允许在短时间段内大量生产高质量的植物材料，并使选择的栽培品种快速增殖，同时保持原始的转基因的或转化的植物的特征。该植物克隆的方法的优点包括植物增殖的速度和生成的植物的质量和均匀性。
微繁殖是一种多阶段的方法，其需要改变阶段之间的培养基或生长条件。微繁殖方法包含4个基本阶段：阶段1，初期组织培养；阶段2，组织培养物增殖；阶段3，分化和植物形成；和阶段4，温室培养和固化。在阶段1的过程中，确立组织培养物，并证明没有污染物。在阶段2的过程中，增殖最初的组织培养物，直到生成足够数目的组织样品，以满足生产目标。在阶段3的过程中，将新生长的组织样品分开，并使其生长成单个的小植株。在阶段4，将转化的小植株转移到温室进行固化，在这里逐渐增强植物对光线的耐受性，以便它们可以在自然环境中继续生长。
尽管稳定的转化目前是优选的，但本发明也设想例如叶细胞、分生细胞或整株植物的瞬时转化。
通过上述的直接DNA转移方法的任一种，或通过使用修饰的植物病毒进行病毒感染，可以实现瞬时转化。
已经表明对植物宿主的转化有用的病毒包括花椰菜花叶病毒(CaMV)、烟草花叶病毒(TMV)和杆状病毒(BV)。使用植物病毒转化植物记载在，例如：美国专利号4,855,237(菜豆金黄花叶病毒，BGMV)；EPA 67,553(TMV)；日本公开的申请号63-14693(TMV)；EPA 194,809(BV)；EPA 278,667(BV)；和Gluzman，Y.等(1988).Communications in Molecular Biology：Viral Vectors，Cold SpringHarbor Laboratory，New York，pp.172-189。在WO 87/06261中，描述了假病毒颗粒在许多宿主(包括植物)中表达外来DNA中的用途。
通过上面的以及下面的文献，证实了用于在植物中导入和表达非病毒的外源核酸序列的植物RNA病毒的构建：Dawson，W.O.等(1989).A tobacco mosaic virus-hybrid expresses and loses an addedgene.Virology 172，285-292；French，R.等(1986)Science 231，1294-1297；和Takamatsu，N.等(1990).Production of enkephalin intobacco protoplasts using tobacco mosaic virus RNA vector.FEBSLett 269，73-76。
如果转化病毒是DNA病毒，则本领域的技术人员可以对病毒本身进行合适的修饰。或者，可以首先将病毒克隆进细菌质粒，以便用外来DNA容易地构建需要的病毒载体。然后，可以从质粒切离病毒。如果病毒是DNA病毒，则可以将细菌的复制起点附着到病毒DNA上，然后由细菌复制它。DNA的转录和翻译会生成外壳蛋白，其使病毒DNA壳体化。如果病毒是RNA病毒，则通常将病毒克隆成cDNA，并***质粒。然后，使用该质粒来制备所有的植物基因构建体。然后，从质粒的病毒序列转录RNA病毒，随后翻译病毒基因以生成外壳蛋白，其使病毒RNA壳体化。
在上面的文献以及美国专利号5,316,931中，证实了用于在植物中导入和表达非病毒的外源核酸序列的植物RNA病毒的构建，例如包含在本发明的构建体中的那些。
在一个实施方案中，提供了用于***的植物病毒核酸，其包含从病毒核酸缺失天然的外壳蛋白编码序列、非天然的(外来的)植物病毒外壳蛋白编码序列和非天然的启动子，优选地非天然的外壳蛋白编码序列的亚基因组启动子，且能在植物宿主中表达，包装重组的植物病毒核酸，并确保重组的植物病毒核酸对宿主的全身感染。或者，通过，在其中***非天然的核酸序列，可以使天然的外壳蛋白编码序列成为不可转录的，从而生成非天然的蛋白。重组的植物病毒核酸构建体可以含有一个或多个额外的非天然的亚基因组启动子。每个非天然的亚基因组启动子都能在植物宿主中转录或表达临近的基因或核酸序列，且不能彼此重组和与天然的亚基因组启动子重组。此外，重组的植物病毒核酸构建体可以含有一个或多个顺式作用调节元件，例如增强子，其结合反式作用调节剂，并调节位于其下游的编码序列的转录。如果包含超过一个核酸序列，则可以将非天然的核酸序列***得邻近天然的植物病毒亚基因组启动子或天然的和非天然的植物病毒亚基因组启动子。在亚基因组启动子的控制下，在宿主植物中转录或表达非天然的核酸序列，以生成所需的产物。
在第二个实施方案中，如在第一个实施方案中一样提供重组的植物病毒核酸构建体，只是除了将天然的外壳蛋白编码序列放置得邻近非天然的外壳蛋白亚基因组启动子之一，而不是邻近非天然的外壳蛋白编码序列。
在第三个实施方案中，提供了重组的植物病毒核酸构建体，其包含放置得邻近它的亚基因组启动子的天然的外壳蛋白基因，和一个或多个***病毒核酸构建体的非天然的亚基因组启动子。***的非天然的亚基因组启动子能在植物宿主中转录或表达临近基因，且不能彼此重组和与天然的亚基因组启动子重组。可以将非天然的核酸序列***得邻近非天然的亚基因组植物病毒启动子，以便在亚基因组启动子的控制下，在宿主植物中转录或表达所述序列，以生成所需的产物。
在第四个实施方案中，如在第三个实施方案中一样提供重组的植物病毒核酸构建体，只是除了用非天然的外壳蛋白编码序列替代天然的外壳蛋白编码序列。
由如上所述的重组的植物病毒核酸构建体编码的表达的外壳蛋白使病毒载体壳体化，以生成重组的植物病毒。重组的植物病毒核酸构建体或重组的植物病毒用于感染合适的宿主植物。重组的植物病毒核酸构建体能在宿主中复制，在宿主中全身传播，和在宿主中转录或表达一个或多个外来基因(分离的核酸)，以生成所需的蛋白。
除了上面的以外，也可以将本发明的核酸分子导入叶绿体基因组，从而使得能进行叶绿体表达。
已知将外源核酸序列导入叶绿体基因组中的技术。该技术包含下述步骤。首先，化学地处理植物细胞，以将每个细胞的叶绿体数减少到约1个。然后，将外源核酸导入细胞中，优选地通过颗粒轰击，其目的是将至少一个外源核酸分子导入叶绿体中。本领域的普通技术人员选择能通过同源重组整合进叶绿体基因组中的外源核酸，这可以通过叶绿体固有的酶容易地实现。为此目的，除了目标基因以外，外源核酸包含至少一个源自叶绿体基因组的核酸序列。另外，外源核酸包含选择标记，其通过相继的选择步骤，用于允许技术人员确定经过这样的选择后的叶绿体基因组的所有或基本上所有拷贝都包含外源核酸。与该技术有关的其它细节见本文引作参考的美国专利号4,945,050和5,693,507。这样，多肽可以由叶绿体的蛋白表达***生产，并整合进叶绿体内膜中。
在基因组和/或转录物水平，使用许多干扰转录和/或翻译的分子(例如，反义、siRNA)，或在蛋白水平，使用例如抗体、免疫技术等，可以实现目标基因的下调。
例如，能下调目标多肽的活性的试剂是能特异性地结合本发明的多肽的抗体或抗体片段。优选地，抗体特异性地结合目标多肽的至少一个表位。如本文所使用的，术语“表位”指抗体的互补位结合的抗原上的任意抗原决定簇。
通过在植物中有效的基于RNA的沉默策略，可以实现RNA水平的下调。见例如，Kusaba(2004)RNA in terference in crop plants.Curr.Opin.Biotechnol.15(2)：139-43；Matzke(2001)RNA based silencingstrategies in plant.Cur r.Opin.Genet.11：221-7。
例如，能下调目标多核苷酸的试剂是RNA干扰(RNAi)过程中的小干扰RNA(siRNA)分子。
可以以几种方式向植物送递dsRNA(综述见Waterhouse P，Helliwell C.2003，Exploring plant genomes by RNA-induced genesilencing.Nature Genet 4：29-38)：用dsRNA或含有内含子的发夹RNA(ihpRNA)-表达载体的微粒轰击；用携带表达ihpRNA转基因的T-DNA的土壤杆菌株渗入植物组织；病毒诱导的基因沉默(VIGS)，其中靶序列整合进用于感染植物，或用于从土壤杆菌-导入的转基因表达的病毒序列中，和通过用ihpRNA表达转基因的稳定转化。关于它们的作用的持久性和它们可以应用的植物的范围，各种RNAi技术各自具有优点和缺点，例如轰击可以应用于任何植物，但是仅仅产生瞬时作用。或者，用ihpRNA-表达转基因的转化提供稳定的且可遗传的基因沉默，但是需要有效的植物转化技术。已经表明，ihpRNA转基因对各种植物物种中的广范围的靶基因是非常有效的(综述见Waterhouse P，Helliwell C.2003.Exploring plant genomes byRNA-induced gene silencing.Nature Genet 4：29-38；Wesley S，Helliwell C，Smith N，等2001.Construct design for efficient，effectiveand high-throughput gene silencing in plant.Plant J 21：581-590)，从而表明RNAi机制可能在所有植物物种中是保守的。这得到非维管苔藓小立碗藓(Physcomitrella patens)中的RNAi的近期报道的支持(Bezanilla M，Pan A，Quatrano R.2003.RNA interference in the mossPhyscomitrella patens.Plant Physiol 133：470-474)。
纤维特异性的启动子(例如，对于SEQ ID NO：85、91)的反义基因构建体可以用于抑制和减少纤维细胞中一个或多个纤维基因的表达。反义构建体的使用记载在美国专利号5,495,070和Smith，等Nature 334724-726，1988；Bird，等Bio/Technology 9：635-639，1991；Van der Krol，等Gene 72：45-50，1988。
应当理解，通过使用本领域众所周知的方法，使每种上述的基因修饰植物与野生型、杂种或转基因植物杂交，也可以产生具有根据本发明的所需性状的纤维生产性植物。
一旦产生本发明的转基因植物，就收获纤维(例如通过机械摘棉和/或手工剥离)，并测定纤维产量和质量。
下面描述了定量棉花纤维的方法。
纤维长度-使用仪器，例如纤维长度照影机和HVI(高体积仪器)***，测量纤维的长度。HVI仪器按照“平均值”和“上半平均值”(UHM)长度计算长度。平均值是所有纤维的平均长度，而UHM是更长一半的纤维分布的平均长度。
纤维强度-如所述的，通常将纤维强度定义为破坏一束纤维或单根纤维所需的力。在HVI测试中，将破坏力转化成“每特单位的克力”。这是破坏大小为1特单位的一束纤维所需的力。在HVI测试中，以每特单位的克(克/特)给出强度。可以将纤维分成低强度(例如，19-22克/特)、平均强度(例如，23-25克/特)、高强度(例如，26-28克/特)和非常高强度(例如，29-36克/特)。
马克隆尼气流式纤维细度测试仪-从多孔气流试验，得到纤维的马克隆尼气流式纤维细度测试仪读数。如下进行该试验。将称重的棉花样品压至给定的体积，并使控制的气流穿过样品。将对气流的阻力读作马克隆尼气流式纤维细度测试仪单位。马克隆尼气流式纤维细度测试仪读数反映成熟度和细度的组合。由于给定品种的棉花中的纤维的纤维直径相当一致，所以马克隆尼气流式纤维细度测试仪指数更适合指示成熟度变化，而不是细度变化。2.6-2.9的马克隆尼气流式纤维细度测试读数是低值，而3.0-3.4低于平均值，3.5-4.9是平均值，且5.0和以上是高值。对于大多数纺织用途，使用3.5-4.9的马克隆尼气流式纤维细度测试。通常不希望比它高的任何值。但是应当理解，不同的用途需要不同的纤维性质。因而，应当理解，在一个应用中是缺点的纤维性质可能在另一个应用中会是优点。
如下面的实施例部分所解释的，本发明的生物分子序列能增加毛状体/叶毛(leaf hair)数目和长度，以及种子纤维。同样，本发明的生物分子序列可以用于产生具有增加的毛状体数目/长度的转基因植物，其能更好地拦住食草动物，引导传粉者的途径，或通过增强的光反射，影响光合作用、叶温或水丧失。另外，这样的转基因植物可以用于在毛状体中区室化地生产重组蛋白和化学制品，如Evogene Ltd的WO 2004/111183所详细描述的。
有趣地且意外地，发明人发现本发明的多核苷酸序列能增加植物的生物量。应当理解，本发明的多肽增加植物产量/生物量/活力的能力，是它们促进植物细胞大小或体积的增加的能力所固有的(如本文所述)
因而，本发明也设想增加植物(松柏类植物、苔藓、藻类、单子叶植物或双子叶植物以及在www.nationmaster.com/encyclopedia/Plantae中列出的其它植物)的生物量/活力/产量的方法。如上所述，通过调节至少一种本发明的多核苷酸的表达和/或活性，可以实现该方法。
如本文所使用的，短语“植物生物量”指植物在生长季节生成的组织的量，其也会决定或影响植物产量或每单位生长区的产量。
如本文所使用的，短语“植物活力”指植物在给定的时间生成的组织的量。因此，增加活力也会决定或影响植物产量或每单位生长时间或生长区的产量。
如本文所使用的，短语“植物产量”指作为植物生产的产物生成和收获的组织的量。因此，增加产量会影响人们在特定生长区和/或生长时间可以从植物得到的经济利益。
因而，本发明对于促进商业上需要的农作物的产量(例如，营养器官例如杨木或生殖器官的生物量，例如种子的数目或种子生物量)，具有高农业价值。
如本文所使用的，术语“约”指±10％。
阅读下面的非限制性的实施例后，本领域的普通技术人员会明白本发明的其它目的、优点和新特征。另外，从下面的实施例中，可以找到上面描述的和下面的权利要求部分要求保护的本发明的各种实施方案和方面的每一个的实验支持。
实施例
现在，参考下面的实施例，其与上面的描述一起，以非限制性的方式解释本发明。
一般地，本文中使用的命名和在本发明中使用的实验室操作包括分子、生物化学、微生物学和重组DNA技术。在文献中充分解释了这样的技术。见，例如，“Molecular Cloning：A laboratory Manual”Sambrook等，(1989)；“Current Protocols in Molecular Biology”Volumes I-III Ausubel，R.M.，编(1994)；Ausubel等，“CurrentProtocols in Molecular Biology”，John Wiley and Sons，Baltimore，Maryl and(1989)；Perbal，“A Practical Guide to Molecular Cloning”，John Wiley&Sons，New York(1988)；Watson等，“RecombinantDNA”，Scientific American Books，New York；Birren等(编)“Genome Analysis：A Laboratory Manual Series”，Vols.1-4，ColdSpring Harbor Laboratory Press，New York(1998)；美国专利号4,666,828；4,683,202；4,801,531；5,192,659和5,272,057中所述的方法；“Cell Biology：A Laboratory Handbook”，Volumes I-III Cellis，J.E.，编(1994)；“Current Protocols in Immunology”Volumes I-IIIColigan J.E.，编(1994)；Stites等(编)，“Basic and ClinicalImmunology”(第8版)，Appleton&Lange，Norwalk，CT(1994)；Mishell和Shiigi(编)，“Selected Methods in Cellular Immunology”，W.H.Freeman and Co.，New York(1980)；可利用的免疫测定广泛地记载在专利和科学文献中，见，例如，美国专利号3,791,932；3,839,153；3,850,752；3,850,578；3,853,987；3,867,517；3,879,262；3,901,654；3,935,074；3,984,533；3,996,345；4,034,074；4,098,876；4,879,219；5,011,771和5,281,521；“Oligonucleotide Synthesis”Gait，M.J.，编(1984)；“Nucleic Acid Hybridization”Hames，B.D.和Higgins S.J.，编(1985)；“Transcription and Translation”Hames，B.D.和Higgins S.J.，编(1984)；“Animal Cell Culture”Freshney，R.L，编(1986)；“Immobilized Cells and Enzymes”IRL Press，(1986)；“A PracticalGuide to Molecular Cloning”Perbal，B.，(1984)和“Methods inEnzymology”Vol.1-317，Academic Press；“PCR Protocols：A GuideTo Methods and Applications”，Academic Press，San Diego，CA(1990)；Marshak等，“Strategies for Protein Purification andCharacterization-A Laboratory Course Manual”CSHL Press(1996)；它们都引作参考，如同在本文中充分描述一样。贯穿本文件中，提供了其它一般文献。认为其中的方法是本领域众所周知的，且为阅读者的方便而提供。其中包含的所有信息都在本文中引作参考。
实施例1
参与纤维形成的棉花基因的计算机(in silico)鉴别
实验方法
表达的序列的种间对比-在数据采掘阶段，使用2种主要工具。从包括Compugen′s GeneCarta平台(Compugen Ltd.以色列)的ORACLE数据库，查询大量基因概况。将该数据载入Microsoft Excel电子制表软件，用于进一步的手工精制。使用该数据，可以实现跨物种基因组对比，其目的在于定义来自其它植物物种的器官，对于所述器官可利用可公开得到的EST文库作为模型和信息的新来源，以定义在纤维形成中具有关键作用的新基因(图1)。该对比分析主要使用棉花、鼠耳芥和番茄数据库。
EST序列的成簇和种间成簇-棉花基因组数据库包括少于50,000个EST(Genbank release#135)，其主要源自2个物种树棉(Gossypium arboreum)(约35,000EST)和陆地棉(约9,000EST，下面的表1)。在2个可替代的方法中，使用LEADSTM软件平台(CompugenLtd，以色列)，使这些EST成簇并装配。
在第一个方案中，使来自2个物种的EST成簇并装配到一起(从而模仿进化过程，因为树棉是陆地棉的祖先)。该方法揭示了6478个簇，其中3243个新簇(在公开数据库中，没有mRNA)被定义为高质量簇(下面的表1)。
在第二个方法中，使来自每个物种的EST成簇并分别装配。2个方法之间的对比表明，使用第一个方法增加棉花簇的有价值的信息，而在分析中没有显著偏倚。番茄基因组数据库含有126,156个EST，其源自约30个充分确定的文库，所述EST通过成簇和装配方法揭示了14034簇，其中有一大组12787个新的高质量簇(表1)。鼠耳芥的基因组数据包括99417个EST(ftp://ftp.ncbi.nih.gov/genbank/)、8573个全长cDNA(Rikken和genbank mRNAsftp://ftp.ncbi.nih.gov/genbank/)和整个DNA序列。使用LEADS软件，揭示了23,148簇和6777singeltones(单个的EST，没有其它EST与其成簇)，它们都得到了EST序列的支持，与公开的聚生体(consortium)相反(TAIR，www.arabidopsis.org/)。
寻找来自共有与棉花纤维的生物过程类似的其它植物和器官的EST文库。预期这样的EST用作模型和新信息来源，用于鉴别参与纤维发育的基因。为此，产生了一列被怀疑参与纤维形成的已知基因。这些基因源自鼠耳芥，且在各个研究中表明在毛状体形成中具有关键作用(即，GL2、CPC、bHLH、TTG1、GL1，综述见Larkin J.C.等2003，Schellmann S.等2002)。广泛的对比基因组分析揭示，与棉花纤维基因和鼠耳芥毛状体基因具有高度同源性的番茄基因，在叶毛状体和特定的花发育文库中具有显著的EST含量。其它分析对比了这3个物种(棉花、鼠耳芥和番茄)的基因组数据(集中在上述的番茄文库)，以作为目前的数据库搜索的关键参数(图1)。
表1
棉花、番茄和鼠耳芥的基因组数据库
Figure G2009101780090D00291
＊源自不同物种的簇：棉花树棉和陆地棉，番茄(L.esculentum)、L.hirsutum和L.pennellii
在纤维发育中起作用的棉花基因的计算机鉴别
为了发现番茄基因组数据是否可以用作研究棉花纤维发育的基因组数据的相关来源，进行了广泛的基因组对比，以鉴别与决定鼠耳芥毛状体发育的关键基因(例如，GL2、CPC、bHLH、TTG1、GL1)具有高度同源性的番茄和棉花基因。
在棉花和番茄中鉴别出了同源基因。因为几乎所有棉花EST都由棉花纤维生成，所以不可能计算机预测那些基因的表达特征。但是，用于生产番茄EST数据库的广泛组织来源使得能够鉴别其中表达毛状体特异性的基因的组织。
在番茄中，揭示毛状体和胚珠EST在代表毛状体特异性的基因的簇中富集。有趣地，发现棉花纤维由胚珠外壳细胞生成。由于番茄种子覆盖着毛样组织，与棉花种子类似，所以推测那些毛在发育上与毛状体和棉花纤维形成有关。
在番茄中，发现约1100个簇包括至少一个来自毛状体文库的EST。其中，约1000个序列包括也源自番茄花文库(其中存在胚珠组织)的序列。对比该组基因和棉花数据，揭示了约2300个棉花基因与番茄毛状体基因具有高度同源性。使用这2组基因以及其它生物信息学信息[跨物种同源性，Gene Onthology(GO)]采掘数据库揭示，预测80个棉花簇在纤维形成中起关键作用。基于下述标准，选择那些基因：
具有至少2个EST的棉花簇；
与具有高于1e-5的e-分数的番茄簇的同源性；
与具有至少一个来自毛状体文库的EST或一个来自含胚珠的组织的EST的番茄簇的同源性；
认为下面的标准是有利的，尽管不是必需的：
簇中大量的EST；
转录因子/信号转导蛋白；
与细胞膨胀、膨压、细胞壁合成有关的基因注释。
进一步分析新基因以及已知参与纤维形成的对照棉花基因在棉花植物中的RNA表达特征。
实施例2
根据本发明的教导鉴别的基因的mRNA表达分析
为了研究如上面实施例1所述鉴别的候选基因的RNA表达特征，通过实时PCR(RT-qPCR)实现逆转录。
实验方法
定量实时PCR分析(qRT PCR)-为了证实表达特异性和性状-关联的水平，进行定量(实时)PCR后的逆转录(RTqPCR)。在纤维发育的不同阶段(从开花当天直到开花后第20天)，提取总RNA。为了研究表达的特异性，收集来自棉花植物的其它组织的RNA，并分析对照表达(即嫩叶、嫩茎、成熟茎、嫩根、萼片、花瓣和雄蕊)。为此目的，使用根据www.eeob.iastate.edu/faculty/WendelJ/ultramicrorna.html的热硼酸盐RNA提取规程，从棉花组织提取RNA。使用300U Super Script II逆转录酶(Invitrogen)、225ng随机脱氧核苷酸六聚体(Invitrogen)、500μM dNTPs混合物(Takara，日本)、0.2体积x 5RT缓冲液(Invitrogen)、0.01M DTT、60U RNA酶抑制剂(Promega)，DEPC处理的重蒸馏水加至37.5μl，使用1.5μg总RNA实现逆转录。在42℃温育逆转录反应物50分钟，然后在70℃温育15分钟。在Tris EDTA，pH＝8中以1∶20稀释eDNA。将5mL稀释的cDNA用于qRT-PCR。
使用x1SYBR GREEN PCR主混合物(Applied Biosystems)、正向和反向引物各0.3μM，在cDNA(5μL)上进行定量RT-PCR。在下述条件下，使用ABI7000实时PCR机：50℃进行2分钟，95℃进行10分钟，40次的95℃进行15秒和60℃进行1分钟，然后在95℃进行15秒，60℃进行60秒，和70次的60℃进行10秒，在每个循环中有+0.5℃增加。对于每个基因，以5个稀度(稀度-1∶60、1∶200、1∶600、1∶2000、1∶10000)，从来自所有样品的RT库制备标准曲线。标准曲线图[ct(循环阈值)vs.log(浓度)]应当具有R＞＝0.98，其效率范围为100％+/-5％。使用扩增反应的效率(E)和对应的C.T.(样品超过阈值时的循环)，计算在qPCR中测量的表达水平(Qty)：Qty＝E-C.T.。检查得到的解离曲线是否不存在不需要的额外PCR产物或引物-二聚体。重复反应至少2次。计算方法基于下述事实，即GOI(目标基因)和持家基因的反应效率类似。
为了标准化不同组织之间的表达水平，设计了特异性的引物，其用于与下述持家基因特异性杂交：肌动蛋白(GenBank登记号D88414SEQ ID NO：28，正向和反向引物分别如SEQ ID NO：68和69所述)、GAPDH(GenBank登记号COTCWPPR，部分序列，SEQ ID NO：29，正向和反向引物分别如SEQ ID NO：97和98所述)和RPL19(GenBank登记号AI729179，SEQ ID NO：30，正向和反向引物分别如SEQ ID NO：99和100所述)。
使用该方法，可能鉴别在纤维延长过程中表现出升高的表达的基因，以及表现出独特的棉花纤维特异性的基因。将在开花过程中表现出升高的表达、且在纤维延长过程中降低的基因，视作参与纤维分化和起始的良好候选物。应当注意，上述定量方法不能提供绝对表达水平，但是提供了用于评价随着纤维发育的相对基因表达的良好参数，因为检测到不同基因达到的最大表达水平的差异高达超过1000倍(下面的表2)。
结果
评价了88个棉花基因在不同棉花(陆地棉Acala变种)组织中的表达特征。根据基因表达结果，预测23个基因提高纤维产量和质量。表2显示了所有候选基因的表达特征。
Figure G2009101780090D00331
根据它们的RNA特征分析，使用2个主要标准来选择棉花基因作为可能参与纤维发育的候选物。表现出高度的纤维表达特异性的基因和表现出随着纤维发育而变化的表达水平的基因(下面的表3)。
23个基因满足这些选择标准：
CT-1(SEQ ID NO.1和106)、CT_2(SEQ ID NO.2和107)、CT_3(SEQ ID NO.3和108)、CT_4(SEQ ID NO.4和109)CT_6(SEQ IDNO.5和110)、CT_7(SEQ ID NO.6和111)、CT_9(SEQ ID NO.7和112)、CT_11(SEQ ID NO.8和113)、CT_20(SEQ ID NO.9和114)、CT_22(10和115)、CT_26(SEQ ID NO.11和116)、CT_27(SEQ IDNO.12和117)、CT_40(SEQ ID NO.16和118)、CT_49(SEQ ID NO.17和119)、CT_70(SEQ ID NO.18和120)、CT_71(SEQ ID NO.19和121)、CT_74(SEQ ID NO.20和122)、CT_75(SEQ ID NO.21和123)、CT_76(SEQ ID NO.22和124)、CT_77(SEQ ID NO.23和125)、CT_81(SEQ ID NO.24和126)、CT_82(SEQ ID NO.25和95)、CT_84(SEQ ID NO.27和96)和CT_88(SEQ ID NO.13和26)。
主要选择CT-4、22、20、27、40、82(分别是SEQ ID NO：4、10、9、12、16和25)作为可能在纤维起始中起作用的候选基因(表3)，而CT 27(SEQ ID NO：12)也用作对照，它是GL3的同源基因(在图2d中，显示了CT 22，SEQ ID NO：10)。
根据它们的表达模式(表3，在图2C中，显示了CT 1)，预测CT-1、2、3、6、7、9、49、70、71、74、75、76、77、81、84(分别是SEQ ID NO.1、2、3、5、6、7、17、18、19、20、21、22、23、24和27，见图2a，c)会参与纤维延长和质量(强度和细度(finesse))。
与来自鼠耳芥的Glabrous1(GenBank登记号AB006078)同源的CT11、40、74和CT 26(分别是SEQ ID NO.8、16、20和11，见图2a，b)是纤维特异性的基因，其在纤维发育的所有阶段都表现出均匀的且纤维-特异性的表达(表3，在图2B中，将CT 11显示为实例)。在上面的表2中，显示了所有选择的基因的表达特征。
Figure G2009101780090D00351
使用组成型35S CaMV启动子(SEQ ID NO.31)，在转基因的鼠耳芥和番茄中超表达选择的基因。进一步评价转基因植物的表皮修饰、毛状体密度和长度和种子纤维产量(如下文进一步描述的)。
实施例3
使用可公开得到的微阵列分析基因表达
通过统计学分析来自鼠耳芥的微阵列数据，检索关于选择的基因(上面的实施例2)的表达的其它信息。基本上，将鼠耳芥的新候选基因的最佳同源物与鼠耳芥的不同组织的一组77个微阵列实验相对比(AtGenExpress数据库，AFGN主要研究人员是：Prof.Dr.Lutz Nover，Botanisches Institut，Molekulare Zellbiologie，FB Biologie undInformatik der J.W.GoetheFrankfurt；Biozentrum N2003OG，Marie-Curie-Strasse 9，60439 Frankfurt am Main，www.arabidopsis.org/info/expression/ATGenExpress.jsp)。
选择在伸长的细胞或花序分生组织中高度表达的多核苷酸序列，以用于进一步分析。
下面的表4列出了表现出最高基因表达水平的组织。
表4
  具有高表达的组织  ＜倍数变化/特异性   与纤维有关
  CT_1   种子、长角果   10-20   伸长的细胞
  CT_11   心皮、花、种子、长角果   组织特异性   花特异性
  CT_2   根、幼苗和萼片   组织特异性   伸长的细胞
  CT_22   心皮、花、花序、枝   4-10   花序
  CT_4   花瓣、雄蕊   ＞10   伸长的细胞
  CT49   长角果   ＞2   伸长的细胞
  CT_7   心皮、花、花序、花瓣、枝、长角果   10-30   花序
  CT_70   花、根、雄蕊   几乎组织特异性
  CT_76   心皮、花、花序、枝、长角果   ＞2   伸长的细胞和花序
  CT_77   种子、花粉、Stemen、花瓣、萼片、长角果   10-50   伸长的细胞
  CT_82   花序、枝、茎   3-6   花序
  CT_88   花瓣、雄蕊   伸长的细胞
实施例4
确立候选基因的表达和纤维长度之间的关联
为了定义选择的基因的RNA表达水平和纤维长度之间的关联，分析了来自4个不同的棉花系的纤维。选择的这些纤维表现出非常好的纤维质量和高皮棉指数(Pima类型，源自其它棉花物种，即海岛棉)和与来自各种陆地棉系的不同的质量水平和皮棉指数：好质量和高皮棉指数(Acala类型)、中等皮棉指数(Coker类型)和差质量和短皮棉指数(Tamcot类型)。
实验方法
RNA提取-在5、10、15和20DPA，对代表着不同纤维特征的纤维发育阶段取样，并如实施例2所述提取RNA。
纤维评价-使用纤维长度照影机，测量上述系的纤维长度。使用纤维长度照影机***来根据“上半平均值”长度计算长度。上半平均值(UHM)是更长一半的纤维分布的平均长度。在给定的百分比点，纤维长度照影机以跨长测量长度(www.cottoninc.com/ClassificationofCotton/？Pg＝4#Length.)。
结果
在2004年夏天期间，在以色列的Rehovot生长4个不同的棉花系，并测量它们的纤维长度。纤维UHM值总结在下面的表5中：
表5
  长度(UHM)
  Pimas5   1.40±0a
  Acala   1.23±0.01b
  Coker310   1.18±0.01c
  Tamcot   1.15±0.02c
测试了5个基因的基因表达和纤维长度之间的关联(在图3中，显示了CT_76)。结果总结在下面的表6中：
表6
Figure G2009101780090D00381
使用实时PCR，在棉花(陆地棉Tamcot、Coker和Acala变种，和海岛棉Pima S5变种)植物的0、5、10和15DPA的组织上进行定量PCR后的逆转录。在所有检查的组织中，显示了与每个基因的mRNA相对量和关于T0的相对表达。
实施例5
将选择的基因克隆进在组成型调节下的二元载体和重组表达它
ORF分析-使用Gene Runner软件3.05版(Hasting Software，Inc：www.generunner.com/)，分析本发明的基因序列的ORF。使用Blast(www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)，将每个基因的ORF与Genbank数据库进行对比。通过与最高同源性的ORF对比，确定ATG起始密码子的位置。表明本文所述的所有序列都具有预测的全长ORF，且包括预测的ATG起始密码子。
克隆进pPI表达载体-为了克隆本发明的基因，根据www.eeob.iastate.edu/faculty/WendelJ/rnaextraction.html，使用热硼酸盐从棉花组织提取RNA，从各个发育阶段的纤维生产性细胞提取总RNA。按照生产商提供的规程，使用M-MuLV逆转录酶(RT)酶(Roche)和T16NN DNA引物，从mRNA生产互补的DNA(cDNA)分子。按照生产商提供的规程，使用PFU校正DNA聚合酶(Promegawww.promega.com/pnotes/68/7381_07/738l_07.html)，通过PCR，对上述序列中的19个基因进行cDNA扩增，即CT克隆编号1、2、3、6、7、9、11、20、22、27、40、71、74、75、76、81、82、84和88。将每个基因的引物设计成跨完整ORF。将其它限制性内切核酸酶位点添加到每个引物的5′端，以促进CT向二元载体(pPI)中的进一步克隆。下面的表7列出了用于克隆每个基因的引物：
Figure G2009101780090D00401
使用PCR纯化试剂盒(Qiagen，德国)纯化得到的PCR平端产物，用适当的限制性内切核酸酶(Roche)消化，并克隆进pPI二元载体(图4)，同时替换现有的GUS报告基因。pPI是pBI101.3(Clontech，登记号U 12640)的修改版。通过将源自pGL3基本质粒载体(Promega，Acc No U47295，其中合成的多腺苷酸化信号序列位于碱基对4658-4811之间)的合成的多腺苷酸化信号序列***pBI101.3的HindIII限制位点(同时重构在多腺苷酸化***片段下游的HindIII位点)，来构建pPI，以避免上游Nos-启动子的连读效应的可能性。为了用pPI二元载体中的每一个CT基因替代GUS基因，用适当的限制酶消化pPI[5′限制酶是SmaI或XbaI，且3′限制酶是SacI或EcoRV(Roche-使用生产商提供的规程)]。使用PCR纯化试剂盒(Qiagen，德国)，纯化开口的二元载体。按照生产商提供的规程，使用T4DNA连接酶(Roche)，在10μL连接反应体积中，连接5-75ng每个CT基因的PCR产物和100ng开口的pPI质粒载体。将连接产物导入大肠杆菌细胞中。
在细菌中的重组表达-使用MicroPulser电穿孔仪(Biorad)、0.2cm杯(Biorad)和EC-2电穿孔程序(Biorad)，通过电穿孔，用1μl连接反应混合物转化60μL大肠杆菌株DH5-α感受态细胞(约109细胞/mL)。在37℃，在0.8mL LB液体培养基中使大肠杆菌细胞生长1小时，并将0.2mL细胞悬浮液铺平板到补加了抗生素卡那霉素50mg/L(Sigma)的LB-琼脂平板上。然后，在37℃温育平板16小时。使细菌菌落生长，并使用设计成跨二元载体中的***序列的引物，通过PCR扩增证实表达。用于pPI二元载体中的***片段的DNA扩增的引物是：5′-GGTGGCTCCTACAAATGCCATC-3′(正向，SEQID NO.70)和5′-AAGTTGGGTAACGCCAGGGT-3′(反向，SEQID NO.71)。
在1.5％琼脂糖凝胶上分离PCR产物，并通过与DNA梯(MBIFermentas)对比，来估计产物大小。使用与以前用于PCR扩增相同的引物(见上面的表7)，对具有预测大小的PCR产物测序。
使用基于每个基因***片段的序列而设计的其它引物，完成全长ORF***片段的测序。对***的序列测序，以证实以正确的方向导入了克隆，并排除在PCR扩增过程中包含序列错误的可能性。使用ABI 377测序仪(Amersham Biosciences Inc)，确定DNA序列。
将组成型花椰菜花叶病毒35S启动子克隆进携带CT基因的19个pPI二元构建体中的每一个中。
通过用限制性内切核酸酶HindIII和BamHI(Roche)消化pBI121载体，来克隆源自pBI121载体(Clontech，登记号AF485783)的花椰菜花叶病毒35S启动子序列，并连接进用相同酶消化的二元构建体中(SEQ ID NO.31)。
实施例6
携带目标基因的二元质粒的土壤杆菌转化和
在鼠耳芥和番茄植物中的表达
通过根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefacience)转化，将19个二元构建体(其包含在每个CT基因上游的35S启动子)中的每一个转化进鼠耳芥或番茄植物。
使用MicroPulser电穿孔仪(Biorad)、0.2cm杯(Biorad)和EC-2电穿孔程序(Biorad)，通过电穿孔，用20ng二元质粒转化60μL根癌土壤杆菌GV301或LB4404感受态细胞(约109细胞/mL)。
在28℃，在0.8mL LB液体生长基中生长土壤杆菌细胞3小时，并将0.2mL细胞悬浮液铺平板在补加了抗生素庆大霉素50mg/L(对于土壤杆菌株GV301)或链霉素300mg/L(对于土壤杆菌株LB4404)和卡那霉素50mg/L(Sigma)的LB-琼脂平板上。然后，在28℃温育平板48小时。生长土壤杆菌菌落，并使用设计成跨二元载体中的***序列的引物，在土壤杆菌细胞上进行PCR扩增。
PCR扩增使用的引物是：5′- GGTGGCTCCTACAAATGCCATC-3′(正向，SEQ ID NO.70)和5′-AAGTTGGGTAACGCCAGGGT-3′(反向，SEQIDNO.71)。
在1.5％琼脂糖凝胶上分离PCR产物，并通过与DNA梯(MBIFermentas)对比，来确定产物大小。使用用于PCR扩增的引物，对具有预测大小的PCR产物测序。对***的序列测序，以证实将正确的克隆导入了土壤杆菌细胞中。
使用ABI 377测序仪(Amersham Biosciences Inc.)，进行DNA测序。
植物转化和栽培：
用推定的棉花基因转化鼠耳芥植物-使用Clough和Bent以及Desfeux等所述的Floral Dip方法，经微小改进，转化鼠耳芥Columbia植物(T0植物)。简而言之，将T0植物播种在装满湿的基于泥炭的生长混合物的250ml罐中。该罐覆盖着铝箔和塑料穹顶，在4℃保持3-4天，然后打开盖子，在18-24℃，在16/8小时光照/黑暗循环下，在生长室中温育。在开花前6天，T0植物准备用于转化。在补加了卡那霉素(50mg/L)和庆大霉素(50mg/L)的LB培养基中，培养携带二元构建体的土壤杆菌的单个菌落。在剧烈摇动下，在28℃温育培养物48小时，然后在4,000rpm离心5分钟。将包含土壤杆菌细胞的沉淀重新悬浮在转化培养基中，后者含有半强度(2.15g/L)Murashig-Skoog(Duchefa)；0.044μM苄氨基嘌呤(Sigma)；112μg/L B5Gambourg维生素(Sigma)；5％蔗糖；和0.2ml/L Silwet L-77(OSI Specialists，CT)，溶于重蒸馏水中，pH5.7。通过将每株植物颠倒到土壤杆菌悬浮液中，从而使地上植物组织浸没3-5秒，来实现T0植物的转化。将每株接种的T0植物立即置于塑料盘中，然后覆盖清洁的塑料穹顶，以维持湿度，并在黑暗中，在室温保持18小时，以促进感染和转化。然后，将转化的(即转基因的)植物打开盖子，并转移到温室，以进行恢复和成熟。
使转基因的T0植物在温室中生长3-5周，直到长角果是褐色且干燥。从植物收获种子，并保持在室温，直到播种。为了产生携带基因的T1转基因植物，通过在70％乙醇中浸泡1分钟，然后在5％次氯酸钠和0.05％triton中浸泡5分钟，将从转基因的T0植物收集的种子表面灭菌。在无菌的蒸馏水中彻底洗涤表面灭菌的种子，然后置于培养平板上，后者含有半强度Murashig-Skoog(Duchefa)；2％蔗糖；0.8％植物琼脂；50mM卡那霉素；和200mM carbenicylin(Duchefa)。将培养平板在4℃温育48小时，然后转移到25℃生长室，用于另外温育一周。将有生活力的T1鼠耳芥植物转移到新培养平板，用于另外温育一周。温育后，从培养平板取出T1植物，并种植在装在250ml罐中的生长混合物中。使转基因植物在温室中生长至成熟。
用推定的棉花基因转化Micro-Tom番茄植物-根据Curtis等1995和Meissner等2000，实现番茄(番茄MicroTom变种)转化和转基因植物的栽培。
实施例7
鼠耳芥转化的植物的生长和表型表征
如上所述生长T1鼠耳芥植物，并表征表型。
转基因植物的PCR分析-将鼠耳芥T2种子直接播种在装在250ml罐中的生长混合物中。通过PCR，筛选阳性的转基因植物的两周龄叶子中的卡那霉素抗性。用于卡那霉素的PCR扩增的引物是：5′-CTATTCGGCTATGACTGGGC-3′(正向，SEQ ID NO.72)和5′-ATGTCCTGATAGCGGTCCGC-3′(反向，SEQ ID NO.73)。
根性能-为了使根性能可视化，通过在70％乙醇中浸泡1分钟，然后在5％次氯酸钠和0.05％triton中浸泡5分钟，将T2种子表面灭菌。在无菌的蒸馏水中彻底洗涤表面灭菌的种子，然后置于培养平板上，后者含有半强度Murashig-Skoog(Duchefa)；2％蔗糖；0.8％植物琼脂；50mM卡那霉素；和200mM carbenicylin(Duchefa)。将培养平板在4℃温育48小时，然后转移到25℃生长室，直到达到用于表型表征的正确大小。
Figure G2009101780090D00451
实施例8
MicroTom转化的植物的生长和表型表征
实验方法
转基因的番茄植物-如上面的实施例6所述转化植物。转化后，在装在1000ml罐中的混合物中，生长T1MicroTom番茄植物。
Figure G2009101780090D00471
讨论
(实施例1-8)
参与棉花纤维发育的基因的计算机鉴别-对于棉花纤维起始和延长的遗传控制知之甚少。由于棉花纤维和鼠耳芥毛状体都从单个表皮细胞发育而成，所以假定它们共有类似的遗传调节(综述见WagnerG.J.等2004)。在鼠耳芥中，大量研究已经揭示了关于调节毛状体起始和延长的遗传机制的广泛信息。通过表明鼠耳芥和烟草植物中的棉花纤维特异性的启动子赋予毛状体特异性的表达，几项研究证实了毛状体和纤维之间的相似性(Kim和Triplett，2001；Hsu等1999；Liu等2000，Wang等2004)。研究纤维发育的大多数研究使用鼠耳芥毛状体作为模型***来以小规模方式鉴别棉花基因(Kim和Triplett，2001；Wang等2004)。
在该研究中，发明人已经使用番茄毛状体和花EST文库作为模型***来研究棉花纤维发育。分析番茄同源簇和已知的鼠耳芥毛状体基因的EST文库特征，表明番茄毛状体和花EST文库明显有助于该组簇。
在分析通过它们作为棉花纤维基因的RNA表达模式选择的新棉花簇的EST文库特征时，证实了该结果。9和10簇分别含有源自花和毛状体文库的EST。而且，番茄毛状体簇组(毛状体EST/总EST＞0.1)包含来自番茄基因的大部分，其表现出与棉花的高度同源性(约50％)，即使它们在总群体中的百分比仅仅是约5％。可以指出，两个器官共有共同的发育过程。即使对番茄果实和毛状体发育的遗传控制进行了大量研究，但不能找到使用这些器官作为基因组数据的来源以研究棉花纤维发育的出版物。将所有23个棉花基因与分别从红花菜豆(Scarlet Runner bean)发育中的种子的胚和胚柄分离的独特的EST数据进行对比(www.mcdb.ucla.edu/Research/Goldberg/ests/intro-index.htm)。所有序列，除了一个以外，都与源自胚柄(它是母体组织)的序列共有高度同源性。该结果支持了计算机结果，并鉴别出这些棉花簇在纤维发育中的作用，其也源自母系细胞。
通过分析RNA表达特征，鉴别在纤维发育中起作用的棉花基因-在开花时或之前的基因表达代表着分化/起始阶段。主要在5至20DPA的非常快的生长速率代表着主要在hirsutum栽培品种中的延长阶段。在约20DPA的峰值纤维膨胀时间段略之前和过程中，在它们的最高水平表达的基因(例如CT 1、2、3)代表着一种模式。在所有纤维发育中具有相同表达水平的CT40、11或70，显示了基因表达的另一种模式。同样地，编码肌动蛋白、endoxyloglucan转移酶或Suc合酶的已知基因，在整个纤维发育中也表现出不变的RNA水平(Shimizu等，1997)。
由于起始主要发生在开花之前到1DPA，所以表明在该时间中具有表达峰值的基因可以在纤维起始中起作用。CT 4、20、22和11具有指示它们参与该阶段的表达模式。
当前的棉花EST数据库的一个限制是，缺少从起始阶段的花提取的EST(存在从1DPA子房得到的一个文库，但是质量差)，大多数EST仅在以后6至10DPA得到。该EST组成可以解释为什么大多数选择的基因具有指示它们与延伸阶段的关联的表达模式。
选择的基因在纤维发育中的作用，可能的机理-根据它们与已知蛋白和酶的序列同源性，可以将23个纤维相关簇分成6个功能类(上面的表3)。根据GO聚生体(www.geneontology.org/)，进行分类。最大组包含与任何已知蛋白没有同源性的独特序列。根据已知与纤维发育有关的类，对其它簇分类。将2个基因(上面的表3)归入细胞命运定型类：属于MYB转录因子的新基因和GL3的棉花同源基因，已知其参与鼠耳芥的毛状体发育。鼠耳芥和番茄T1植物中的两种基因的表达模式和CT20转基因的表型，支持它们主要在起始阶段的参与。
积累的证据将棉花MYB基因与纤维发育相关联(Suo.J.等2003，Cerdoni.M.L.等2003，Loguerico L.L.等1999)。以相同途径起作用的许多基因的超表达，与起始阶段阶段有关，可以进一步诱导起始。Kirik等(2004)表明，通过超表达2或3个来自起始阶段的基因，它们会增加毛状体和根毛的数目。与起始阶段有关的基因，可以用于棉花种子上的纤维起始的均匀性，启动更多的种子表皮细胞形成纤维。那些基因在植物分生组织例如茎和叶子中的超表达，可以用作免受昆虫(如已经在低芥酸芥子中证实的，www.westerngrains.com/news/nr_050413.html)和非生物的应激的保护。但是，没有实质的证据能证实任何MYB基因在纤维发育中的直接参与。
2个其它基因(上面的表3)是来自MYB和MADS BOX家族的转录因子。许多研究证实了这2个转录因子家族作为在不同的发育过程(其中有毛状体和纤维形态发生)中具有关键作用的同源异型基因的功能(Suo.J.等2003，Ferrario S等2004)。它们在纤维发育早期中的作用，也得到了它们的RNA表达模式的支持，后者在开花那天之前和过程中诱导。一个基因(CT_2，上面的表3)归入淀粉和蔗糖代谢途径。近期的工作证实，属于该途径的另一个基因(SUS)是纤维起始和发育的限制因子。将CT_40、75归入脂质运输，它的RNA表达在早期纤维延长阶段高度诱导，这与脂质是纤维形成的关键组分的事实相符合。几个基因(上面的表3，CT_4、70、71)归入参与脱水、脱落酸刺激的盐度反应的基因，和参与电子转移的基因。在它们中，通过RNA表达模式选择3个要在延长阶段诱导的基因(CT 7、9和49)。几项研究将改变质子和钾泵机理视作纤维的快速生长速率的关键因子(Smart L.B，等1998)。组合与纤维延长有关的几个基因(例如与淀粉和蔗糖代谢有关的基因，其会增强细胞壁形成)和脂质运输基因或与脱水有关的基因(其可能影响细胞内的压力)的超表达，可以导致比超表达的单个细胞更长的纤维。
实施例9
克隆和分析在本发明的基因的上游的启动子序列
棉花的纤维组织和其它组织中的有差别的基因表达，是复杂的基因调节的结果。预测在23个选择的基因上游的基因组区域具有启动子活性，其以独特的定量和定性方式将基因表达指向纤维细胞。指向纤维细胞的精确的基因表达，对于具有增强的纤维性能的棉花植物的发育是至关重要的，而不会负面地影响其它植物组织。
实验方法
启动子序列的克隆-如下所述，从棉花(陆地棉Acala变种)的基因组DNA，克隆在CT2和CT6的上游的基因组序列。使用DNA提取试剂盒(Dneasy植物小试剂盒，Qiagen，德国)，从4周龄栽培的棉花植物(陆地棉Acala变种)的植物叶组织提取总基因组DNA。按照一般规程(www.pmci.unimelb.edu.au/corefacilities/manual/mb390.asp)，利用下面改进，在基因组DNA上进行反向PCR(IPCR)、DNA消化、自身连接和PCR反应。为了避免IPCR中的错误，首先鉴别有关的cDNA的5′序列的基因组序列(即包括内含子)，以生成基因组岛(GI)。使用基于cDNA簇序列设计的直接寡核苷酸引物，PCR-扩增所需的来自基因组DNA的区域(对于CT_2和CT_6，各GI序列如CT_2和CT_6的SEQ ID NO.74和75所述。引物如SEQ ID NO.14-15(CT_2)和101-102CT_6所述)。使用普通的PCR规程，在DNA热循环仪中进行PCR反应。例如：92℃/3分钟→31x[94℃/30秒→56℃/30秒→72℃/3分钟]→72℃/10分钟)。
使用PCR纯化试剂盒(Qiagen)纯化PCR产物，并使用ABI 377测序仪(Amersham Biosciences Inc)对扩增的PCR产物测序。
在有些情况下，当IPCR导致较差的扩增时，使用不同的技术[UP-PCR(Dominguez和Lopez-Larrea.1994)]。为了扩增已知簇序列的未知上游区域，使用UP-PCR技术。通常，该方法包含4种寡核苷酸引物：2种序列特异性的引物(SPs，外部的和内部的)(下面列出)，二者都具有相同的方向，其3′端朝向未知的、但是需要的基因的5′区域，和2种万能的步移(walking)引物(WP285′-TTTTTTTTTTTGTTTGTTGTGGGGGTGT(SEQ ID NO.76和sWP5′-TTTTTGTTTGTTGTGGG，SEQ ID NO.77)。使用下面的反应混合物，进行反应：样品混合物(SM)-棉花物种的基因组DNA(30-40ng)，WP28引物(20pmol)，并用重蒸馏水加至10μl终体积。聚合酶混合物(PM)-dNTPs(Roche，瑞士，各10nmol)、Expand LongTemplate Enzyme mix(Roche，瑞士，1U)、补加了酶的10x缓冲液，并用重蒸馏水加至8μl终体积。
将SM置于热循环仪(Biometra，美国)，在那里进行扩增程序：在90℃进行1分钟，保持在80℃(暂停)，直到加入PM，在15℃进行30秒，在25℃进行10分钟，在68℃进行3分钟，保持在90℃，直到加入外部SP(2μl 10μM浓度)。该过程后面是外部PCR反应：在92℃进行30秒，在94℃进行10秒，在65.5℃进行30秒，在68℃进行3分钟，30个循环后，在68℃最后延伸10分钟。
使用5000-25000倍稀释的外部PCR产物作为模板，且使用特异性的内部sWP和SP(各30pmol)引物，1U Ex Taq(Takara)，以50μl反应体积，进行PCR扩增。使内部PCR反应进行扩增程序：在92℃进行2分钟，然后在94℃进行30秒，在58℃进行30秒，且在72℃进行3分钟，30个循环后，在72℃最后延伸10分钟。纯化(PCR纯化试剂盒，Qiagen，德国)IPCR/Up-PCR产物，并测序(ABI 377测序仪，Amersham Biosciences Inc)。
CT_2的引物如下(UP-PCR)：
外部引物：
sWP28-5′-TTTTTTTTTTTGTTTGTTGTGGGGGTGT-3′(SEQ ID NO.78)
SP(外部)-5′-CTGGGGTTACTTGCTAATGG-3′(SEQ IDNO：79)
内部(嵌套)引物：
sWP-5′-TTTTTGTTTGTTGTGGG-3′(SEQ ID NO：80)
SP(内部)-5′-GCTCCGGGCTTTGGTTAACG-3′(SEQ IDNO：81)
在SEQ ID NO：14中，提供了由上面的方法产生的CT_2的内部基因组序列。
CT_6的引物如下(UP-PCR)：
外部引物：
sWP28-5′-TTTTTTTTTTTGTTTGTTGTGGGGGTGT-3′(SEQ ID NO.78
SP(外部)-5′-GGCTTTGGGATGTTTGAGGTGG-3′(SEQID NO.82)
内部(嵌套)引物：
sWP-5′-TTTTTGTTTGTTGTGGG-3′(SEQ ID NO：83)
SP(内部)-5′-GGTGGTGGGCTCTTGCAACAG-3′(SEQ IDNO：84)
在SEQ ID NO：85中，提供了由上面的方法产生的CT_2的内部基因组序列。
为了克隆推定的启动子和5′UTR，使用一组新引物(见下面)进行PCR扩增，对所述引物延伸8-12bp，其包括在5′端上的一个限制位点(HindIII、SalI、XbaI、BamHI或SmaI)。对于每个启动子，选择在启动子序列中不存在的限制位点。而且，如此设计引物序列中的限制位点，以便以正确的方向，在GUS报告基因的上游将得到的PCR产物克隆进二元载体pPI。
通过将源自pGL3基本质粒载体(Promega，Acc No U47295；bp4658-4811)的合成的多腺苷酸化信号序列***二元载体pBI101.3(Clontech，登记号U12640)的HindIII限制位点，来构建质粒pPI。
下面是启动子和5′UTR(P+U)扩增和克隆进pPI使用的引物，和扩增和克隆的序列。以粗体字母显示每个引物内的限制位点：
CT_2：
P+U正向(HindIII)：5′-ATTCAAGCTTTTTTTGTTTGTTGTGGGGG-3′(SEQ ID NO：86)
P+U反向(BamHI)：5′-TTGGATCCTTGGGCATTGAGCTTCTGTAC-3′(SEQ ID NO：87)
CT_2的P+U序列如SEQ ID NO：88所述。
CT6：
P+U正向(HindIII)：5′-TTAAAGCTTTGGGCTCTTGCAACAGAGGC-3′(SEQ ID NO：89)
P+U反向(BamHI)：5′-AAGGATCCGACGACGACAACAACAA CAAC-3′(SEQ ID NO：90)
CT_6的P+U序列如SEQ ID NO：91所述。
将基因组DNA或IPCR/UP-PCR产物用作使用新设计的寡核苷酸引物的PCR-扩增的DNA模板。纯化(PCR纯化试剂盒，Qiagen，德国)PCR产物，并以存在于引物中的限制位点(Roche，瑞士)进行消化。重新纯化消化的PCR产物，并克隆进用相同限制酶消化的二元载体pPI。使用T4DNA连接酶(Roche，瑞士)，连接PCR产物和开口的质粒载体。
实施例10
用携带棉花纤维启动子的二元载体转化根癌土壤杆菌细胞
使用在GUS报告基因上游的pPi二元载体，其包括CT2或CT6启动子，来转化土壤杆菌细胞。
通过电穿孔，将二元载体导入根癌土壤杆菌GV301或LB4404感受态细胞(约109细胞/mL)。使用MicroPulser电穿孔仪(Biorad)，0.2cm杯(Biorad)和EC-2电穿孔程序(Biorad)，进行电穿孔。在28℃，在LB液体培养基中培养处理的细胞3小时，然后铺平板到补加了庆大霉素(50mg/L；对于土壤杆菌株GV301)或链霉素(300mg/L；对于土壤杆菌株LB4404)和卡那霉素(50mg/L)的LB琼脂上，在28℃持续48小时。使用SEQ ID NO：70-71所述的引物，其设计成跨pPI质粒中的***序列，通过PCR，分析在选择培养基上形成的土壤杆菌菌落。分离得到的PCR产物，并如上面实施例4所述测序，以证实将正确的序列正确地导入土壤杆菌细胞中。
实施例11
在番茄叶子和番茄果实中表达棉花纤维特异性的启动子进行GUS染色，以解释毛状体和番茄果实中的特异性表达。实验方法
用推定的棉花启动子转化Micro-Tom番茄植物-如上所述。
用推定的棉花启动子转化鼠耳芥植物-如上所述。
鼠耳芥的Gus染色-如以前所述(Jefferson RA.等1987，Meissner等2000)，进行鼠耳芥植物的Gus染色。
番茄叶子的Gus染色-如以前所述(Jefferson RA.等1987，Meissner等2000)，进行番茄植物的Gus染色。
如下进行组织固定。将番茄叶子浸没在90％冰冷的丙酮中，然后在冰上温育15-20分钟，随后去除丙酮。此后，在黑暗中，用工作溶液[100mM磷酸钠(Sigma，美国)缓冲液pH＝7、铁氰化物(Sigma，美国)5mM、亚铁氰化物(Sigma，美国)5mM、EDTA(BioLab)pH＝81mM、Triton X-100(Sigma，美国)1％]冲洗组织2次，15-20分钟。然后，去除冲洗溶液，替换为X-gluc染色溶液[工作溶液+溶解在N，N-二甲基甲酰胺(BioLab)中的5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡糖醛酸(X-GicA，Duchefa)0.75mg/ml、二硫苏糖醇(BioLab)100mM]，并在37℃，在黑暗中温育过夜(用铝箔包装管)。通过将植物组织浸没在70％乙醇中，并在50℃加热约120分钟，实现变色(distain)。重复变色步骤，直到植物组织变成透明的，除了染成蓝色的区域以外。在室温，将变色的植物保藏在70％乙醇(BioLab)。
番茄果实的GAS染色-如以前所述(JeffersonRA.等1987，Meissner等2000)，实现番茄果实的Gus染色。简而言之，在黑暗中，将薄番茄果实切片浸没于染色溶液[100mM磷酸钠(Sigma，美国)缓冲液pH＝8、铁氰化物(Sigma，美国)5mM、亚铁氰化物(Sigma，美国)5mM、EDTA(BioLab)pH＝815mM、甲醇(BioLab)20％、溶解在N，N-二甲基甲酰胺(BioLab)中的5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡糖醛酸(X-GlcA，Duchefa)0.75mg/ml](用铝箔包装管)，且在37℃温育过夜。通过将植物组织浸没在70％乙醇中，并在50℃加热约20分钟，实现变色。重复变色步骤，直到果实切片变成透明的，除了染成蓝色的区域以外。在室温，将变色的果实保藏在70％乙醇(BioLab)。
结果
在T1番茄植物的种子上，进行GUS染色。
在遗传转化的番茄植物中的启动子CT2和CT6的调节下，表达GUS(图7a-b)。
下面的表10总结了番茄T1代的结果。
表10
  启动子   独立的T1植物的数目   叶子   叶子毛状体   嫩果实的种子覆盖物   成熟绿色的种子覆盖物   成熟果实的种子覆盖物
  CT2   4   0   2   3   5   3
  CT6   1   0   1   1   2.5   1
数字代表着平均级别，0-未表达，5-高表达
实施例12
作为棉花纤维的模型***的番茄种子纤维
棉花的基因修饰是冗长且耗时的。因此，为了发现能提高棉花纤维产量和质量的基因，需要其它植物中的棉花纤维发育的模型***。
毛状体细胞和根毛共有与棉花纤维细胞共同的特征，且被广泛地接受为棉花纤维发育的模型***[综述见Wagner.GJ.等2004，和Wang等2004]。
但是，由于毛状体细胞的小尺寸、远可接近性和缺少尺寸的均匀性，测量生长速率、长度和厚度以及其它结构参数的变化并非一项容易的工作。
为了克服这些限制，分析番茄种子纤维用作棉花纤维发育的模型组织的可能性。为此目的，如上所述，在源自CT2的棉花纤维特异性的启动子元件的调节下，超表达GUS报告基因。
如上所述，实现二元构建体的番茄转化、植物再生和GUS染色。
番茄种子纤维(图8a)是母体表皮细胞，覆盖着种子的胚珠表面。在解剖学方面，番茄种子纤维比毛状体细胞或根毛更接近棉花纤维。
生产4种独立的转基因番茄果实，其超表达在棉花特异性的启动子CT_2下的GUS基因。只在发育种子纤维的种子壳上，观察到成熟-绿色阶段(果实是实际大小，即将进行成熟过程)的果实的GUS染色(图7a和b)。
生产5种独立的转基因番茄果实，其超表达35S-苹果青霉素(AF043284)，测量种子纤维长度，并与野生型对比。转基因植物的种子纤维明显比野生型长(图8a-b)。
表11
  植物   独立植物的数目   种子纤维长度(mm)
  野生型   3   0.300±0.019
  35S：苹果青霉素   5   0.357±0.017(图8b)
应当指出，为了清楚而在独立的实施方案上下文中描述的本发明的某些特征，也可以在单个实施方案中组合地提供。相反地，为了简洁而在单个实施方案上下文中描述的本发明的各种特征，也可以分开地或以任何合适的子组合提供。
尽管已经结合特定实施方案描述了本发明，但显然，本领域的技术人员会明白许多替代方案、改进和变化。因此，意在包括落入所附权利要求书的精神和广阔范围内的所有这样的替代方案、改进和变化。在本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请和GenBank登记号，都在本文中整体引入说明书作为参考，其程度与特别地和个别地指明将每篇单独的出版物、专利或专利申请或GenBank登记号在本文中引作参考相同。另外，任何文献在本申请中的引用或标识都不应理解为承认这样的文献可作为本发明的现有技术。
在本申请中通过作者姓名引用的文献(在该文件中引用了其它文献)
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序列表
<110>Evogene Ltd.
<120>参与植物纤维发育的多核苷酸和多肽和使用它们的方法
<130>
<160>126
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>1086
<212>DNA
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>1
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ggtgactctg tggtagatgt gggcaataat gactatctcc ctaccatctt caaggctaac  180
tatcctcctt atggacggga ctttgccaac aaaaagccta ctgggaggtt ttgcaatgga  240
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cttagcccag aagcatcagg gaagaacctt ctgcttggag ccaattttgc ttcagctggc  360
tctggctatg atgacaaagc tgccatggtg aatcatgcca tcacattgac ccagcaatta  420
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gagctc                                                            1086
<210>2
<211>1975
<212>DNA
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
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<211>560
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<400>3
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<210>4
<211>1143
<212>DNA
<213>陆地棉(Gossypium hirsttum)
<220>
<221>misc_feature
<222>(24)..(24)
<223>n是a、c、g或t
<400>4
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agattttacc agtttctttt gtaagatccc atgtcataag gtgc                   2024
<210>13
<211>810
<212>DNA
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
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cccggggcta gctcttactc aaatggcaac caaaacgatg atgttgcaaa tatttccact   60
tttcttcttt ttgttcagtg tctgcaactc cattttcctt ggtgctaatg gagatgacaa  120
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ggggggagct tgtggttatg gaaacctgta cagtcaaggg tatggaacga gcacagcagc  240
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<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>14
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<210>15
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<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>15
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<210>16
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<212>DNA
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
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cccgggtaca aacatggcta gttccggtgt ccttaagttg gtttccatga ttctcatggt   60
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<210>17
<211>1223
<212>DNA
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1015)..(1015)
<223>n是a、c、g或t
<220>
<221>misc_feature
<222>(1098)..(1098)
<223>n是a、c、g或t
<220>
<221>misc_feature
<222>(1158)..(1158)
<223>n是a、c、g或t
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<210>18
<211>1768
<212>DNA
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>18
ttatagtacc ggatactgcg cacgacacaa gccgaattca gcacgatcgt tgaaaaaata   60
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<210>19
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<212>DNA
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>19
tctagatgaa ggttctctcc ccaattcttg cttgcctagc gcttgctgtg gtggtaagcc   60
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<210>20
<211>942
<212>DNA
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>20
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<212>DNA
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>21
cccgggagaa agatgatgaa aaggggtttt attgttttgg ccttgacggt ggttttcgcc     60
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<210>22
<211>2012
<212>DNA
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>22
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<210>23
<211>2013
<212>DNA
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>23
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gggtgctcca aaaggatcat ttgtccaagc attacaaggt aagttcgtta aagccttgaa   1140
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tttagctaga gtcatgggtg acatggtatt gcttccaaac ggcaaagttt tggtcatcaa   1260
cggagcacgt tccgggtcag caggatggga cttaggaagg gacccggtct taaatccagt   1320
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aggcttttat cttttgtttg tggttcatca agacatcccc agccaaggca tttgggtcca  1860
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<210>24
<211>1566
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<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>24
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tttaaaacac gaggatcagg ggagcttgat aaacaaggca attttaaagt attcgttcca    300
gaggatttgg ttgaaaatgg ggaactgaag gaagaatgct atgcacagct tcacagtgta    360
tcggcagcac cttgtcccgc ccatgatggc ttggagtcgg ccaagttagt gttgaagtcc    420
aggagtgatg ggaaacacgg gtttgggtta aaaggaaagc tcagattctc acctctaacc    480
tgtgcttctg ccttcttttg gcctcacttt aagtttcctc ccttgcctaa gtggaaccat    540
ccccctttgc ccaagtttcc acttccccca ttcaaaggct tccaccacca ttatccaata    600
atccctccca tctacaagaa acctcttccg ccaccgtccc cggtgtacaa gccccctcca    660
gttcccgtaa acccacctgt tccaatctat aaacctccac cagttccagt ctataaacct    720
cctccagttc cagtaaaacc acttcctcca cctgttccaa tctacaaacc tccaccagtt    780
ggaggaccgc atcctccacc tgttccagtc tataaacctc caccagttcc agtatacaag    840
aagccatgtc ctccaccagt tccagtctat aaatctcctc cggttccagt atacaagaaa    900
ccgcatcctc ctccagttcc agtctataag aaaccacatc cacctccagt tccagtatac   960
aagaaaccat gtcctccccc agttccagtc tataaatctc ctccagttcc ggaaccacat  1020
cctccgccag ttccagtcta taagaaacca catccacctc cagttccagt atacaagaaa  1080
ccatgtcctc ccccagttcc agtctataaa tctcctccag ttccggaacc acatcctccg  1140
ccagttccag tccataagcc tcctccagtt ccggtataca agaaaagagt ccctcctccg  1200
gttccaatct acaagccccc tccagttcct gtatacaaca aaccactacc tcccccggtt  1260
ccagtgtata cgaagccact tccaccacct gttccaacct acaaaccaaa acccctccct  1320
cccattcctt acaagccact ccctccactt cccaagatcc ctccattccc taagaagcca  1380
tgccctcccc ttcctaagct acctcctctt cccaagattc ctcccaagta tttccaccac  1440
caccctcccc ttcctaagct acctcctctc cctaagattc ctcccaagta tttccaccac  1500
catcccaagt tcggaaaatg gccttctttg ccaccctttg ctccccatca tccttaagct  1560
gagctc                                                             1566
<210>25
<211>689
<212>DNA
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>25
cccggggatg gtgagaggca aaattcagat gaagcgaatt gaaaatgcaa cgagccggca     60
agtcaccttc tctaagcgac gaaacgggtt gttgaagaag gcttatgaac tatatgttct    120
atgcgatgct gaagtagctg tcatcatatt ttctcataaa ggaaaactct acgagttctc    180
aagttccgac aacatgcaaa acaccataga acgataccgt cagtacaaga aagatgtcca    240
gagtaacatc cctgaatttg acagatacac acagcaacta aggcttgaag cagaaaatat    300
ggccaagaag attgagttcc ttgaggtttc taaaaggaga atgttgggtc aaaatcttgg    360
ttcttgttct atagatgaac ttcaagaggt tgaaaaccag cttgaacgca gcttaagaaa  420
cattagggca agaaagggct atttattcaa ggagcagata ctgcaactaa aagctaagga  480
aagatatatg caagaggaga atgccaagtt atctgctaag aacaatggta caacatgcag  540
ccagcagaac gcggaggtgg agacagaact gttcctcggg ttgcccgaaa accgctgttc  600
ctagcaggta ggtctttgga tatggaatga aaatgatatt ccctattgga ataatgcttg  660
cttgtacgtt atcgccattg ctagagctc                                    689
<210>26
<211>258
<212>PRT
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>26
Met Ala Thr Lys Thr Met Met Leu Gln Ile Phe Pro Leu Phe Phe Phe
1               5                   10                  15
Leu Phe Ser Val Cys Asn Ser Ile Phe Leu Gly Ala Asn Gly Asp Asp
            20                  25                  30
Asn Gly Gly Trp Gln Thr Ala His Ala Thr Phe Tyr Gly Gly Ala Asp
        35                  40                  45
Ala Thr Gly Thr Met Gly Gly Ala Cys Gly Tyr Gly Asn Leu Tyr Ser
    50                  55                  60
Gln Gly Tyr Gly Thr Ser Thr Ala Ala Leu Ser Thr Ala Leu Phe Asn
65                  70                  75                  80
Asn Gly Leu Ser Cys Gly Ala Cys Tyr Glu Leu Arg Cys Asn Asn Asp
                85                  90                  95
Pro Gln Trp Cys Ile Ser Arg Thr Ile Thr Val Thr Ala Thr Asn Phe
            100                 105                 110
Cys Pro Pro Asn Tyr Ala Leu Ser Ser Asp Asn Gly Gly Trp Cys Asn
        115                 120                 125
Pro Pro Arg Glu His Phe Asp Leu Ala Glu Pro Ala Phe Leu Arg Ile
    130                 135                 140
Ala Glu Tyr Arg Ala Gly Ile Val Pro Val Met Phe Arg Arg Val Ser
145                 150                 155                 160
Cys Val Lys Lys Gly Gly Ile Arg Tyr Thr Met Asn Gly His Ser Tyr
                165                 170                 175
Phe Asn Met Val Leu Ile Thr Asn Val Gly Gly Ala Gly Asp Ile Thr
            180                 185                 190
Ser Val Ser Ile Lys Gly Ser Arg Thr Gly Trp Leu Pro Met Ser Arg
        195                 200                 205
Asn Trp Gly Gln Asn Trp Gln Ser Asn Ala Tyr Leu Asn Gly Gln Ser
    210                 215                 220
Leu Ser Phe Lys Val Thr Ala Ser Asp Gly Arg Thr Ile Thr Ala Tyr
225                 230                 235                 240
Asn ValVal Pro Ala Gl y Trp Gln Phe Gly Gln Thr Phe Glu Gly Gly
               245                 250                 255
Gln Phe
<210>27
<211>1432
<212>DNA
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>27
cccgggttcc atgaaaaggg tctcgaacat ctatatagag gcaaagaaac atctctctga   60
tctgctaaca aacgaggatc aaaatgagga tcttttgagt acacaggttc caaaaacctt  120
aggtaggatt ctttctcttc ctgagtataa tacatcccct gtcagcagcc ctggtcagaa  180
cttggagcat agttttacaa ctgcgcatat gagatttgca ggctcggaca aattgcaaat  240
ggtgagtgaa aatgatcggt ttgtcagcct tctaagtatg agggcagaga agaccgatgg  300
ccagctttgc atttctgaaa acaaaagcga taatgaagtt gaaagtgata atgcaatttc  360
aaacaacctt gacactagtg tgaataatga caaagaggat ccaatttttt gttctataaa  420
agatgaattg agttccaaag agtctgtgag tattgttaaa gctactgaaa tgatggttca  480
tgaagaaagc aagtccctgg atatttcttc agagacgagc ggctcttcaa ttatcacaga  540
tgataaaaat gttgacatat atgaagtttg tgatgaaaaa caaaatcctt ggtacttgaa  600
acaggattca tcggaagtgg accaacagcc tttttctcca ttatcatctc catcagactc  660
atcagtcatg aaaaaggttg aatgtttgga gagtgttact gatataccag agcgatcaag  720
ccccgtatct gttcttgagc caatatttgc agatgatctt atcagccctg caagcatcag  780
atcttattcc ggtgaaacat ccattcaacc gctaagaatt cgattcgaag aacatgactc  840
tttggccaca aatcagagca atcgaattaa aacttgtatg aatgataagg aatcaatatt  900
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atataatgtg cttccagctt agcttagctg aaggacaacg acgatagagc tc          1432
<210>28
<211>1079
<212>DNA
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>28
ggattccggt gacggtgttt ctcacaccgt gccaatctat gaaggatatg cccttccaca   60
tgccatcctc cgtcttgacc ttgcaggtcg tgatctaacc gatgccttga tgaagattct  120
taccgagaga ggttacatgt tcaccaccac tgctgaacgg gaaattgtcc gtgacatgaa  180
ggagaagctt gcttatgttg ccctggacta tgagcaggaa ctggagactg ccaagagcag  240
ctcatctgtt gagaagaact atgagttgcc tgacggacaa gtcattacta ttggagctga  300
gagattccgt tgcccggaag tcctcttcca gccatctttc atcgggatgg aagctgctgg  360
aatccatgaa actacctaca actctatcat gaagtgcgat gtggatatca ggaaggatct  420
ctacggtaac attgtgctca gtgggggttc aaccatgttc cctggtattg cagaccgcat  480
gagcaaggag atcactgctc ttgctccaag cagcatgaag attaaggtcg ttgcgccacc  540
agagagaaag tacagtgtct ggattggagg atctatcttg gcatcactca gcaccttcca  600
gcagatgtgg atttccaagg gtgagtatga tgaatccggt ccatccattg tccacaggaa  660
gtgcttctaa gttttgtaat tgcttttgat ggtgatctac attttgcatt tagttggctt  720
tttttgtgtg cgatgttaag tgaagtccaa agtctggttt atgtggggag agttagggat  780
cattgtagga tggtgtactt gatattgacg tattattatt ttagcctttc accgtatcac  840
caccattaag atgatgggtc ctatggagat ggcggtgggc ggacaattgg tgcttaattc  900
cttccttata atccatcttt gaaccatgtt gcttaaaagg atgtttggag ctggagactg  960
gattgtggtg cttttttatt ttattttatt atttaatatt caagggtttt gagaacatta 1020
atgttcatag ctattattgt acgagatttt ttttgaaaaa ttagagtcag tttgcggtc  1079
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<211>657
<212>DNA
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>29
cggccgcgtc gactttttta ataaaactga aacaaccctt cttcacacaa aaatatgctc   60
cgtacaattc gtttattctc tcatagcatc tcttctaaat taaaattgct aaagcttgga  120
tacacaaagc acaatcactc actcacttaa gccttagaca tgtgtcggat caagtcgata  180
acacgggaac tgtaacccca ttcgttgtca taccaagtca caagcttaac aaagttgtca  240
ttcaaagcaa ttccagcctt ggcatcaaaa atgcttgacc tgttgtctcc gatgaagtca  300
gttgagacta aatcttcgtc cacataacca agaattccct tcaagttgcc ttcagattcc  360
gccttgatag cagccttaat ttcatcatat gtagccttct tctcaagtct cacagtgagg  420
tcaaccacag agacatcaac agtgggaaca cggaaagcca ttccagtcag cttgccattc  480
agtgctggca aaactttgcc gacggccttg gcagctccag tgctgctagg aatgatattg  540
aaggaagcag ctctaccacc tctccagtcc ttcatggaat gaccatcaac agtcttttgt  600
gtagcagtaa tagaatgaac agtggtcata agaccctcaa cgatgccaaa tttatca     657
<210>30
<211>649
<212>DNA
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<220>
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gagaaaagga agacaacgat ggtgtctctg aagttacaga agcggctcgc cgctagcgtc     60
ctgaagtgtg gccgtggcaa ggtttggctt gatcctaatg aaatcaatga aatctccatg    120
gccaactcca ggcagaatgt taggaaactt gttaaggatg gttttatcat ccggaagcct    180
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cattctggct atggtaagag gaagggtacc agggaggcaa gattgcctac aaagatcctt    300
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attgacaagc acatgtacca tgacatgtac atgaaggtga agggtaatgt atttaaaaac    420
aancgtgtct tgatggaaag catccacaag tccaaggctg agaaggcaaa aaaaaaaaca    480
ctctcaaatc antttgaggc caancgaact aaaaacaagg cgagcaggga gagaaagatg    540
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<210>31
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<212>DNA
<213>花椰菜花叶病毒
<400>31
aagcttgcat gcctgcaggt ccccagatta gccttttcaa tttcagaaag aatgctaacc   60
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cctctgccga cagtggtccc aaagatggac ccccacccac gaggagcatc gtggaaaaag  720
aagacgttcc aaccacgtct tcaaagcaag tggattgatg tgatatctcc actgacgtaa  780
gggatgacgc acaatcccac tatccttcgc aagacccttc ctctatataa ggaagttcat  840
ttcatttgga gagaacacgg gggactctag aggatcc                           877
<210>32
<211>31
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>32
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<210>33
<211>30
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
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<210>34
<211>30
<212>DNA
<213>人工序列
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<223>单链DNA寡核苷酸
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<210>35
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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<212>DNA
<213>人工序列
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<223>单链DNA寡核苷酸
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<211>31
<212>DNA
<213>人工序列
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<211>30
<212>DNA
<213>人工序列
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<223>单链DNA寡核苷酸
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<211>28
<212>DNA
<213>人工序列
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<211>28
<212>DNA
<213>人工序列
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<212>DNA
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<211>31
<212>DNA
<213>人工序列
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<223>单链DNA寡核苷酸
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tacccgggta ccattactct actacagctg c    31
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<212>DNA
<213>人工序列
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<211>29
<212>DNA
<213>人工序列
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<211>29
<212>DNA
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<211>26
<212>DNA
<213>人工序列
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<212>DNA
<213>人工序列
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<211>28
<212>DNA
<213>人工序列
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<212>DNA
<213>人工序列
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<223>单链DNA寡核苷酸
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<210>51
<211>29
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>51
ttggatatcg caccttatga catgggatc     29
<210>52
<211>28
<212>DNA
<213>人工序列
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<223>单链DNA寡核苷酸
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<211>28
<212>DNA
<213>人工序列
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<223>单链DNA寡核苷酸
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tcgagctcat caacctcact gcaccttg      28
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<212>DNA
<213>人工序列
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<211>30
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<213>人工序列
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tacccgggca tacagagatg gagaggc      27
<210>57
<211>28
<212>DNA
<213>人工序列
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<213>人工序列
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<210>59
<211>27
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<223>单链DNA寡核苷酸
<400>59
aagatatcaa atcccatgca aaacccc     27
<210>60
<211>28
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>60
aacccgggcg gcaact taaa agaaaacc    28
<210>61
<211>26
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>61
aagagctcct ttgttggctt ctcaag      26
<210>62
<211>26
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>62
gacccgggac tgtaaaaaag catagg      26
<210>63
<211>28
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>63
gcgagctcag cttaaggatg atggggag    28
<210>64
<211>28
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>64
atcccgggga tggtgagagg caaaattc    28
<210>65
<g11>28
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>65
acgagctcta gcaatggcga taacgtac    28
<210>66
<211>27
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>66
atcccgggtt ccatgaaaag ggtctcg    27
<210>67
<211>28
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>67
gtgagctcta tcgtcgttgt ccttcagc   28
<210>68
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>68
tcgtgatcta accgatgcct t     21
<210>69
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>69
acaatttccc gttcagcagt g     21
<210>70
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>70
ggtggctcct acaaatgcca tc    22
<210>71
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>71
aagttgggta acgccagggt       20
<210>72
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>72
ctattcggct atgactgggc    20
<210>73
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>73
atgtcctgat agcggtccgc    20
<210>74
<211>1344
<212>DNA
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>74
tgctcccttg ctacaccacc ctcggaggag gagcagcaga cccttaaagg gtttcgcagt   60
gatatttggg tccgtcgttt tcctactctc actggtcata ttaatcgtta accaaagccc  120
ggagccatta gcaagtaacc ccagtagtgt aacggaggca gggtcgtatt caatggcggc  180
gcagccaaga gggatagctg aaggagtttc agccaagtca aacccatcac tttttgacaa  240
agttgggttt aattggacaa acgctatgtt ttactggcaa agaactgcct accactttca  300
gcctcaaaag aattggatga atggtaggtt acctaattat aatttaagtt acttcttttg  360
attttcgtca ctaaaccttt cattttagtt tactattttt aaacttaaat atgatttcct  420
tttaataatc gaatttaatt tgttgtcttt ttcttactat gcttgcacgt tggttcggca  480
caacttacgt atcttgcttc agatcctgac ggtgagttct catcacatct aaattcttgt  540
tgggacaata ctgttagtca accatttcat caatcaatgc gtaaaacaca aaaatatcga  600
atcagaaatt tgtgaccaac ccaatctgct agttcttcca aatttgagca tttcaacctt  660
gatttgcaat taaagttagc ttctacattg aattgaatca tatcttaccc tttttcttct  720
actagatcca cttataattt tatttttcaa tactcattta attaaagtaa ataatttaaa  780
taatttgttt catataaaat atatatattc tacatcaata agatactaat atcgaatcca  840
ccatttgtgg tataataaat gcaattatat tacaaaaaag ttaataaaat attagtagca  900
tagaattaat taatttaaaa aaatatgatt tttttagcag aattaaaaaa aacaaatatc  960
ttataaaaaa aataaatatt aaaagaaaaa agacatatga taacccttag tttacaatct 1020
ataagttaca aaaaaatagt tacttgaccg tttggtttgt ttacctgtcg ttctaacgtt 1080
taagtcctaa ctaactagtt ttgcaaaacc ttgcttctgt acatcaccat gtaatagcat 1140
gtggtttttt tagtaattat attaaactct aatagtttaa ttaaagtagt atgtgacata 1200
atggaacaaa aatacgatgg tcgcaggtcc gttatatcac aagggatggt accatctttt 1260
ctatcaatac aaccctgatt cagccatatg gggcaacatc acttggggcc acgctgtatc 1320
aaaggacctc attcacggtt ctat                                        1344
<210>75
<211>556
<212>DNA
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>75
tccacaacat tgacgtcagc cggcgccgcc gccgccacca tcaaactctc cctctctccc   60
ttccctcacc cttcttcctc ccatccttac caaattctca acaacttagt cacttcttct  120
gttgcaagag cccaccacct caaacayccc aaagccaagg ccgataatac tacctcttct  180
cttctcaggg ctyccctatt tyctcacagt tatgggggct acactatctc cctcaaattt  240
ggaactccgc ctcaaaccct tcctttcrty atggacacyg ggagcagcct ctcctggttc  300
ccttgcacct ctcgttacct ttgttcccaa tgcgcwttcc ccaatgttga ccctgcaaaa  360
atccccactt ttgcccctaa ackttcatct tccarkaagc tcgtaggttg yagaaacccc  420
aagtgtagtt ggctttttgg ccccgacgtt gagtctcgtt gccaagactg tgaacccact  480
tccgaaaact gcactcaaac ytgccctcct tacataattc aatacggttt aggttccact  540
gctgggcttc tattag                                                  556
<210>76
<211>28
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>76
tttttttttt tgtttgttgt gggggtgt                                      28
<210>77
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>77
tttttgtttg ttgtggg                                                  17
<210>78
<211>28
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>78
tttttttttt tgtttgttgt gggggtgt    28
<210>79
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>79
ctggggttac ttgctaatgg             20
<210>80
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>80
tttttgtttg ttgtggg                17
<210>81
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>81
gctccgggct ttggttaacg             20
<210>82
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>82
ggctttggga tgtttgaggt gg                                             22
<210>83
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>83
tttttgtttg ttgtggg                                                  17
<210>84
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>84
ggtggtgggc tcttgcaaca g                                             21
<210>85
<211>969
<212>DNA
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>85
ggtggtgggc tcttgcaaca gaggcaattt tctaccggaa atgaaggaag gaatgaagga   60
ggcggtagag agaagagcac agaaaatgtc ttacagaaat tgaaagggta agacattttc  120
cttaaaatgt aacacatttt ctcttgtttt ggagttcatt ttccaaatgg aaaatgtttt  180
ccgccaatca aaagctgaaa aagttaaaaa tgattttctg gaaaatcaat tccgtcaatc  240
aaacagaccc ttagtctatt ctctccaatt aaatcattct tagtccttat acttttttaa  300
atttctatct cgatacaaaa gacaaccatt gaatctatta aattaccttt gtgtaaatga  360
tatatgaaaa taataaattg atatgacata acgcatgcga taatatatgt aaaaatcacc  420
aattacaggt acaaaaaaat ggttatggac taaatccgta acttgcgcat gataaacgaa  480
gtggcataat ggataattca gtgttttaca atgtcaaaat agcagcaccg taatcgaaca  540
tgataccttg gtccagttgt gctgtttacc gttggtatag tatttctact ctctctctat  600
aaagagagaa cgggacaaac atcatcccca ccgctatgcc tattccccca ctcaaattca  660
tttcactttt aaataccaat taatattact tacacttact tcccctttac aaatagataa  720
tccaaaagca gagcaaaaac agagataacc attctttttc ttttgttgtt gttgttgtcg  780
tcgtcatggc ttctcttcct ttcatcttct tcttatcttt ctttataatc tccacaacat  840
tgacgtcagc cggcgccgcc gccgccacca tcaaactctc cctctctccc ttccctcacc  900
cttcttcctc ccatccttac caaattctca acaacttagt cacttcttct gttgcaagag  960
cccaccacc                                                          969
<210>86
<211>29
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>86
attcaagctt tttttgtttg ttgtggggg                                     29
<210>87
<211>29
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>87
ttggatcctt gggcattgag cttctgtac                                     29
<210>88
<211>1040
<212>DNA
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>88
aagctttttt tgtttgttgt gggggtgtta tttgaagtag catagcattt aaatcgaatt   60
aattgaagca gctcctttaa tttagttttg ttggttgtca atgccaataa aaaggagaca  120
gggtttgaat aatgcaatgc aattcaagac ccaatgatcc taacaaacat tcaaggagca  180
cactcaaatc ccaacaacca ttccatcctg atggatgtgg aaaagcaaat ttaattaagg  240
agcctctcaa acttagagct cttgccacag cacatgatgc atttttcaac agatcagaac  300
aagtacaagg acaattaatc ctagattatc tcaacagcat gccacatgac ccatgttcca  360
tttcgtatac atatgtctgc catttaattt aaaggtaaac atttgtgatg ccaatgccaa  420
tgccttattc acctcacaaa tcagtatcca taaactagct gttttcaggc caggaggacc  480
aacatgctca agacttggca ttccctaatg ctgtgtgtcc attggtcatt gcacgtaaat  540
tggctctgtc ttcatgcttc caaattatta ttattaatga agaaaaataa tttactctct  600
gaaatcttgc aacgcaagcc acaacccaga agctagagaa gacaaataat acgatgataa  660
tttataacta tatgtatagt agtgtaaatg gcaatatata ttaatataaa atcctacccc  720
aaaagcaagc aaatgagttt gactaccagg tgcagctgca tgcatgcatg catgggatgc  780
cctacctttt caactgtccc tcttgtttca ctgtatagca ttcaccagat ctgatctaat  840
gggaccacct ctctctccca gctaaattgg acaacaacca atccaagctc aagacatata  900
aatctcttct ctttctctct atgttgttct ctctttaatt ttacctacca ttaccctttt   960
ctacttaatc tctcattgct tacttatatt gtaagtgtga ccaagtaaac caagtacaga  1020
agctcaatgc ccaaggatcc                                              1040
<210>89
<211>29
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>89
ttaaagcttt gggctcttgc aacagaggc                                      29
<210>90
<211>29
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>90
aaggatccga cgacgacaac aacaacaac                                      29
<210>91
<211>792
<212>DNA
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>91
aagctttggg ctcttgcaac agaggcaatt ttctaccgga aatgaaggaa ggaatgaagg   60
aggcggtaga gagaagagca cagaaaatgt cttacagaaa ttgaaagggt aagacatttt  120
ccttaaaatg taacacattt tctcttgttt tggagttcat tttccaaatg gaaaatgttt  180
tccgccaatc aaaagctgaa aaagttaaaa atgattttct ggaaaatcaa ttccgtcaat  240
caaacagacc cttagtctat tctctccaat taaatcattc ttagtcctta tactttttta  300
aatttctatc tcgatacaaa agacaaccat tgaatctatt aaattacctt tgtgtaaatg  360
atatatgaaa ataataaatt gatatgacat aacgcatgcg ataatatatg taaaaatcac  420
caattacagg tacaaaaaaa tggttatgga ctaaatccgt aacttgcgca tgataaacga  480
agtggcataa tggataattc agtgttttac aatgtcaaaa tagcagcacc gtaatcgaac  540
atgatacctt ggtccagttg tgctgtttac cgttggtata gtatttctac tctctctcta  600
taaagagaga acgggacaaa catcatcccc accgctatgc ctattccccc actcaaattc  660
atttcacttt taaataccaa ttaatattac ttacacttac ttccccttta caaatagata  720
atccaaaagc agagcaaaaa cagagataac cattcttttt cttttgttgt tgttgttgtc  780
gtcgtcggat cc                                                      792
<210>92
<211>32
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>92
aaatctagat aagttgataa agctaatttc tc                                 32
<210>93
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>93
tttcccggga cctggaggca atc                                          23
<210>94
<211>1969
<212>DNA
<213>烟草(Nicotiana tabacum)
<400>94
tctagataag ttgataaagc taatttctca ttttagctac catcgctagt aatcgtggca   60
ataactaccc taactatagc atttattgct accaaataaa atttggcagc taatcataat  120
tttttgtcat gaatcaatag ttattgtagc aatagttatc tcttagccac aataaattat  180
ttaaaataaa atattatagc taaataaata tttttgcttt aagttctaaa agcttgtggc  240
aatagttaaa tgatatagtc acagatttat tggtataatt gaattatgtt gctaatttct  300
tagttttttg ccacgagtta aaaattacca atagctatag taacttttta atcacaataa  360
aatatttgaa agaaaatatt gtagctaaat gaatattttt tccttcaagt tattaaaagt  420
tgtggcaata taggttaaat tagccacatg tttcttgctt taatagaatt ttgtagctaa  480
tcattaactt ttaccacgag ttgaacttaa tataacaaca ataacctttt aaccataata  540
aagcgattta aatcaaatat tactaaataa ataactttgc tttcaagttt ctataaaatc  600
atggcaatag tcattacgat aaaatgatat aaccacgaat atattgcaac gataaattct  660
gtaactaatc attagttttt gcgacgaggt aaattttccg tcacagtagc aatcttctag  720
gcacattaaa aatttgaaac aaaattttgt agtcaaataa atatttatct tcttatttta  780
agaaaataaa aatagttaga taatagttac tactatttgt catgaaaata tcaatagata  840
caaatttaaa gtgactataa atttacgagt ttactatact ttagtcgtac agtttgcaat  900
aatagtattt taaccacaat tagttatatg tacaaaataa cataagtgaa taactttttt  960
tcaatgagaa aataagagtt gctcaaacaa tatcaagtta caaaaattta attttaactg 1020
taaaagttat atttttccaa aataacataa actatagtaa ttatatatag tttgaagtat 1080
taataaaatt taaatatgca aaagttaatt ttaataaacc atttgtatgc ctaacttgta  1140
gcctctaaac tattttattt gctttattta tcaaactcat attttatttt attgcacctt  1200
gttagttttg gacgttaatt atatatattt ggtgtaaaat ttaaaatata ttaacatttg  1260
tggagaattt atgtatgcct ggttcttaac tatttttttt tatataactg gttagagtaa  1320
tttcttatat ttcagtattt atttttaaat aagtcctcat aaattgaaga ctttaaaagt  1380
ttttgtgtca ttcctctttt tatttaagaa attgaagaat tccgctaaat ttcatatttc  1440
cgctgttatt taactgttta tttcccttgt taatataatt ggtaagaagt tttaaaataa  1500
aggagttaat gattttctag gttcatggct tgcctagctt ctacgagtaa gcgccatcac  1560
gactcccgag gataaggaaa tccgggtcgt agcattcact cacaaaaatt actaaaaaca  1620
aagtttaccc ttctcccaaa agtaaatttc atatttggct ccacataatg tgttcaatga  1680
gtcaagtgaa gtacttttca tgacaaaaaa aagttgctga aaaatgcata tctcatattt  1740
tttttttaga gaaatcccat ttcttgccta aacgaaagcc tataaaagag catatattgc  1800
aacaacagtt tgcagaaact atcaagtcaa ataatccccc ctttaattcc ctcccaaaat  1860
gcagttcttc aacttctttt cccttttcct ttttgtgtca tttctctttt tatttaagaa  1920
atggaagaat tccaatagcc aaaccaaaag attgcctcca ggtcccggg              1969
<210>95
<211>198
<212>PRT
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>95
Met Val Arg Gly Lys Ile Gln Met Lys Arg Ile Glu Asn Ala Thr Ser
1               5                   10                  15
Arg Gln Val Thr Phe Ser Lys Arg Arg Asn Gly Leu Leu Lys Lys Ala
            20                  25                  30
Tyr Glu Leu Tyr Val Leu Cys Asp Ala Glu Val Ala Val Ile Ile Phe
        35                  40                  45
Ser His Lys Gly Lys Leu Tyr Glu Phe Ser Ser Ser Asp Asn Met Gln
    50                  55                  60
Asn Thr Ile Glu Arg Tyr Arg Gln Tyr Lys Lys Asp Val Gln Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Pro Glu Phe Asp Arg Tyr Thr Gln Gln Leu Arg Leu Glu Ala Glu
                85                  90                  95
Asn Met Ala Lys Lys Ile Glu Phe Leu Glu Val Ser Lys Arg Arg Met
            100                 105                 110
Leu Gly Gln Asn Leu Gly Ser Cys Ser Ile Asp Glu Leu Gln Glu Val
       115                 120                 125
Glu Asn Gln Leu Glu Arg Ser Leu Arg Asn Ile Arg Ala Arg Lys Gly
    130                 135                 140
Tyr Leu Phe Lys Glu Gln Ile Leu Gln Leu Lys Ala Lys Glu Arg Tyr
145                 150                 155                 160
Met Gln Glu Glu Asn Ala Lys Leu Ser Ala Lys Asn Asn Gly Thr Thr
                165                 170                 175
Cys Ser Gln Gln Asn Ala Glu Val Glu Thr Glu Leu Phe Leu Gly Leu
            180                 185                 190
Pro Glu Asn Arg Cys Ser
        195
<210>96
<211>463
<212>PRT
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>96
Met Lys Arg Val Ser Asn Ile Tyr Ile Glu Ala Lys Lys His Leu Ser
1               5                   10                  15
Asp Leu Leu Thr Asn Glu Asp Gln Asn Glu Asp Leu Leu Ser Thr Gln
            20                  25                  30
Val Pro Lys Thr Leu Gly Arg Ile Leu Ser Leu Pro Glu Tyr Asn Thr
        35                  40                  45
Ser Pro Val Ser Ser Pro Gly Gln Asn Leu Glu His Ser Phe Thr Thr
    50                  55                  60
Ala His Met Arg Phe Ala Gly Ser Asp Lys Leu Gln Met Val Ser Glu
65                  70                  75                  80
Asn Asp Arg Phe Val Ser Leu Leu Ser Met Arg Ala Glu Lys Thr Asp
                85                  90                  95
Gly Gln Leu Cys Ile Ser Glu Asn Lys Ser Asp Asn Glu Val Glu Ser
            100                 105                 110
Asp Asn Ala Ile Ser Asn Asn Leu Asp Thr Ser Val Asn Asn Asp Lys
        115                 120                 125
Glu Asp Pro Ile Phe Cys Ser Ile Lys Asp Glu Leu Ser Ser Lys Glu
    130                 135                 140
Ser Val Ser Ile Val Lys Ala Thr Glu Met Met Val His Glu Glu Ser
145                 150                 155                 160
Lys Ser Leu Asp Ile Ser Ser Glu Thr Ser Gly Ser Ser Ile Ile Thr
                165                 170                 175
Asp Asp Lys Asn Val Asp Ile Tyr Glu Val Cys Asp Glu Lys Gln Asn
            180                 185                 190
Pro Trp Tyr Leu Lys Gln Asp Ser Ser Glu Val Asp Gln Gln Pro Phe
        195                 200                 205
Ser Pro Leu Ser Ser Pro Ser Asp Ser Ser Val Met Lys Lys Val Glu
    210                 215                 220
Cys Leu Glu Ser Val Thr Asp Ile Pro Glu Arg Ser Ser Pro Val Ser
225                 230                 235                 240
Val Leu Glu Pro Ile Phe Ala Asp Asp Leu Ile Ser Pro Ala Ser Ile
                245                 250                 255
Arg Ser Tyr Ser Gly Glu Thr Ser Ile Gln Pro Leu Arg Ile Arg Phe
            260                 265                 270
Glu Glu His Asp Ser Leu Ala Thr Asn Gln Ser Asn Arg Ile Lys Thr
        275                 280                 285
Cys Met Asn Asp Lys Glu Ser Ile Phe Glu His Ile Lys Ala Val Leu
    290                 295                 300
Gln Ala Ser Ser Phe Ser Trp Asp Glu Val Tyr Ile Arg Ser Leu Ser
305                 310                 315                 320
Ser Asp Leu Leu Ile Asp Pro Leu Leu Val Asp Glu Val Glu Tyr Leu
                325                 330                 335
Pro Asn Gln Leu Cys Gln Asp Gln Lys Leu Leu Phe Asp Cys Ile Asn
            340                 345                 350
Glu Val Val Arg Glu Val Cys Glu Tyr Tyr Phe Gly Ser Pro Ser Val
        355                 360                 365
Ser Phe Val Lys Pro Asn Ile Arg Pro Ile Pro Asn Met Gln Asn Thr
    370                 375                 380
Ile Gln Glu Val Trp Glu Gly Val Tyr Trp His Leu Leu Pro Thr Pro
385                 390                 395                 400
Leu Pro Cys Thr Leu Asp Leu Val Val Arg Lys Asp Leu Ala Lys Thr
                405                 410                 415
Gly Thr Trp Met Asp Leu Gln Leu Asp Thr Gly Tyr Ile Gly Val Glu
            420                 425                 430
Ile Gly Glu Ala Ile Phe Glu Asp Leu Val Glu Asp Thr Ile Thr Ser
        435                 440                 445
Tyr Ile Asn Gly Ser Trp Glu Cys Glu Tyr Asn Val Leu Pro Ala
     450                 455                 460
<210>97
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>97
tcagattccg ccttgatagc a          21
<210>98
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>98
ctctgtggtt gacctcactg tga       23
<210>99
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>99
cctaccagga ttcactcccg atc      23
<210>100
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>100
cctcttacca tagccagaat gacg     24
<210>101
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>101
tccacaacat tgacgtcagc c                21
<210>102
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>102
ctaatagaag cccagcagtg g                21
<210>103
<211>32
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>103
aaatctagat aagttgataa agctaatttc tc    32
<210>104
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>104
tttcccggga cctggaggca atc              23
<210>105
<211>1969
<212>DNA
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>105
tctagataag ttgataaagc taatttctca ttttagctac catcgctagt aatcgtggca   60
ataactaccc taactatagc atttattgct accaaataaa atttggcagc taatcataat  120
tttttgtcat gaatcaatag ttattgtagc aatagttatc tcttagccac aataaattat  180
ttaaaataaa atattatagc taaataaata tttttgcttt aagttctaaa agcttgtggc  240
aatagttaaa tgatatagtc acagatttat tggtataatt gaattatgtt gctaatttct  300
tagttttttg ccacgagtta aaaattacca atagctatag taacttttta atcacaataa  360
aatatttgaa agaaaatatt gtagctaaat gaatattttt tccttcaagt tattaaaagt  420
tgtggcaata taggttaaat tagccacatg tttcttgctt taatagaatt ttgtagctaa  480
tcattaactt ttaccacgag ttgaacttaa tataacaaca ataacctttt aaccataata  540
aagcgattta aatcaaatat tactaaataa ataactttgc tttcaagttt ctataaaatc  600
atggcaatag tcattacgat aaaatgatat aaccacgaat atattgcaac gataaattct  660
gtaactaatc attagttttt gcgacgaggt aaattttccg tcacagtagc aatcttctag  720
gcacattaaa aatttgaaac aaaattttgt agtcaaataa atatttatct tcttatttta  780
agaaaataaa aatagttaga taatagttac tactatttgt catgaaaata tcaatagata  840
caaatttaaa gtgactataa atttacgagt ttactatact ttagtcgtac agtttgcaat  900
aatagtattt taaccacaat tagttatatg tacaaaataa cataagtgaa taactttttt  960
tcaatgagaa aataagagtt gctcaaacaa tatcaagtta caaaaattta attttaactg 1020
taaaagttat atttttccaa aataacataa actatagtaa ttatatatag tttgaagtat 1080
taataaaatt taaatatgca aaagttaatt ttaataaacc atttgtatgc ctaacttgta 1140
gcctctaaac tattttattt gctttattta tcaaactcat attttatttt attgcacctt  1200
gttagttttg gacgttaatt atatatattt ggtgtaaaat ttaaaatata ttaacatttg  1260
tggagaattt atgtatgcct ggttcttaac tatttttttt tatataactg gttagagtaa  1320
tttcttatat ttcagtattt atttttaaat aagtcctcat aaattgaaga ctttaaaagt  1380
ttttgtgtca ttcctctttt tatttaagaa attgaagaat tccgctaaat ttcatatttc  1440
cgctgttatt taactgttta tttcccttgt taatataatt ggtaagaagt tttaaaataa  1500
aggagttaat gattttctag gttcatggct tgcctagctt ctacgagtaa gcgccatcac  1560
gactcccgag gataaggaaa tccgggtcgt agcattcact cacaaaaatt actaaaaaca  1620
aagtttaccc ttctcccaaa agtaaatttc atatttggct ccacataatg tgttcaatga  1680
gtcaagtgaa gtacttttca tgacaaaaaa aagttgctga aaaatgcata tctcatattt  1740
tttttttaga gaaatcccat ttcttgccta aacgaaagcc tataaaagag catatattgc  1800
aacaacagtt tgcagaaact atcaagtcaa ataatccccc ctttaattcc ctcccaaaat  1860
gcagttcttc aacttctttt cccttttcct ttttgtgtca tttctctttt tatttaagaa  1920
atggaagaat tccaatagcc aaaccaaaag attgcctcca ggtcccggg              1969
<210>106
<211>356
<212>PRT
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>106
Met Asp Gly Tyr Cys Ser Arg Arg Val Ile Met Phe Leu Val Phe Ala
1               5                   10                  15
Phe Ala Ala Ile Ser Arg Gly Tyr Gly Gln Glu Ser Thr Thr Leu Val
            20                  25                  30
Pro Ala Ile Ile Thr Phe Gly Asp Ser Val Val Asp Val Gly Asn Asn
        35                  40                  45
Asp Tyr Leu Pro Thr Ile Phe Lys Ala Asn Tyr Pro Pro Tyr Gly Arg
    50                  55                  60
Asp Phe Ala Asn Lys Lys Pro Thr Gly Arg Phe Cys Asn Gly Lys Leu
65                  70                  75                  80
Ala Thr Asp Ile Thr Ala Glu Thr Leu Gly Phe Thr Thr Tyr Pro Pro
                 85                  90                  95
Ala Tyr Leu Ser Pro Glu Ala Ser Gly Lys Asn Leu Leu Leu Gly Ala
           100                 105                 110
Asn Phe Ala Ser Ala Gly Ser Gly Tyr Asp Asp Lys Ala Ala Met Val
        115                 120                 125
Asn His Ala Ile Thr Leu Thr Gln Gln Leu Glu Tyr Phe Lys Glu Tyr
    130                 135                 140
Gln Ala Lys Leu Ala Lys Val Ala Gly Ser Thr Lys Ser Ala Ser Ile
145                 150                 155                 160
Thr Lys Asp Ala Leu Tyr Val Leu Ser Ala Gly Ser Gly Asp Phe Leu
                165                 170                 175
Gln Asn Tyr Tyr Val Asn Pro Leu Leu Asn His Ala Tyr Thr Pro Asp
            180                 185                 190
Gln Tyr Gly Ser Phe Leu Ile Asp Thr Phe Thr Asn Phe Val Lys Asn
        195                 200                 205
Leu Tyr Gly Leu Gly Ala Arg Lys Ile Gly Val Thr Ser Leu Pro Pro
    210                 215                 220
Leu Gly Cys Val Pro Leu Ala Arg Thr Leu Phe Gly Tyr His Glu Lys
225                 230                 235                 240
Gly Cys Ile Ser Arg Phe Asn Thr Asp Ala Gln Gln Phe Asn Lys Lys
                245                 250                 255
Leu Asn Ala Ala Ala Ala Asn Leu Gln Lys Gln His Pro Gly Leu Lys
            260                 265                 270
Ile Val Val Phe Asp Ile Phe Lys Ala Leu Tyr Asp Ile Val Lys Ser
        275                 280                 285
Pro Ser Asn Tyr Gly Phe Val Glu Ala Thr Lys Gly Cys Cys Gly Thr
    290                 295                 300
Gly Thr Val Glu Thr Thr Ala Phe Leu Cys Asn Pro Lys Ala Pro Gly
305                 310                 315                 320
Thr Cys Ser Asn Ala Ser Gln Tyr Val Phe Trp Asp Ser Val His Pro
                325                 330                 335
Ser Gln Ala Ala Asn Gln Val Leu Ala Asp Ala Leu Ile Val Gln Gly
            340                 345                 350
Ile Ala Leu Ile
        355
<210>107
<211>645
<212>PRT
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>107
Met Glu Ala Ser Ser Ser Thr Ser His Asp Pro Ala Leu Phe His Ala
1               5                   10                  15
Pro Leu Leu Tyr His Pro Arg Arg Arg Ser Ser Arg Pro Leu Lys Gly
            20                  25                  30
Phe Ala Val Ile Ile Gly Ser Val Val Phe Leu Leu Ser Leu Val Thr
        35                  40                  45
Leu Ile Val Asn Gln Ser Pro Glu Pro Leu Ala Ser Asn Pro Ser Ser
    50                  55                  60
Val Thr Glu Ala Gly Ser Tyr Ser Met Ala Ala Gln Pro Arg Gly Ile
65                  70                  75                  80
Ala Glu Gly Val Ser Ala Lys Ser Asn Pro Ser Leu Phe Asp Lys Val
                85                  90                  95
Gly Phe Asn Trp Thr Asn Ala Met Phe Tyr Trp Gln Arg Thr Ala Tyr
            100                 105                 110
His Phe Gln Pro Gln Lys Asn Trp Met Asn Asp Pro Asp Gly Pro Leu
        115                 120                 125
Tyr His Lys Gly Trp Tyr His Leu Phe Tyr Gln Tyr Asn Pro Asp Ser
    130                 135                 140
Ala Ile Trp Gly Asn Ile Thr Trp Gly His Ala Val Ser Thr Asp Leu
145                 150                 155                 160
Ile His Trp Phe Tyr Leu Pro Leu Ala Met Val Pro Asp Gln Trp Tyr
                165                 170                 175
Asp Ile Asn Gly Cys Trp Thr Gly Ser Ala Thr Leu Leu Pro Asp Gly
            180                 185                 190
Arg Ile Val Met Leu Tyr Thr Gly Ser Thr Asn Asp Ser Val Gln Val
        195                 200                 205
Gln Asn Leu Ala Tyr Pro Ala Asn Leu Ser Asp Pro Leu Leu Leu Gln
    210                 215                 220
Trp Leu Lys Tyr Pro Gly Asn Pro Val Val Val Pro Pro Thr Gly Ile
225                 230                 235                 240
Glu Asp Glu Glu Phe Arg Asp Pro Thr Thr Ala Trp Leu Gly Pro Asp
                245                 250                 255
Gly Ser Trp Arg Ile Val Val Gly Thr Arg Phe Asn Thr Thr Ile Gly
            260                 265                 270
Thr Ala Leu Val Phe Gln Thr Thr Asn Phe Ser Asp Tyr Glu Leu Leu
        275                 280                 285
Asp Gly Val Leu His Ala Val Pro Gly Thr Gly Met Trp Glu Cys Val
    290                 295                 300
Asp Phe Tyr Pro Val Ala Ile Asn Gly Ser Val Gly Leu Asp Thr Thr
305                 310                 315                 320
Ala Leu Gly Pro Gly Ile Lys His Val Leu Lys Ala Ser Leu Asp Asp
                325                 330                 335
Thr Lys Val Asp His Tyr Ala Ile Gly Thr Tyr Asp Met Ile Thr Asp
            340                 345                 350
Lys Trp Thr Pro Asp Asn Pro Glu Glu Asp Val Gly Ile Gly Leu Lys
        355                 360                 365
Val Asp Tyr Gly Arg Tyr Tyr Ala Ser Lys Thr Phe Phe Asp Gln Ser
    370                 375                 380
Lys Gln Arg Arg Ile Leu Tyr Gly Trp Val Asn Glu Thr Asp Ser Glu
385                 390                 395                 400
Ala Asp Asp Leu Glu Lys Gly Trp Ala Ser Ile Gln Thr Ile Pro Arg
                405                 410                 415
Ser Val Leu Tyr Asp Asn Lys Thr Gly Thr His Leu Leu Gln Trp Pro
            420                 425                 430
Val Glu Glu Val Glu Ser Leu Arg Leu Asn Ala Thr Val Phe Lys Asp
        435                 440                 445
Val Val Val Glu Ala Gly Ser Val Val Pro Leu Asp Ile Gly Thr Ala
    450                 455                 460
Thr Gln Leu Asp Ile Leu Ala Glu Phe Glu Ile Glu Thr Leu Val Leu
465                 470                 475                 480
Asn Ser Thr Glu Asp Glu Val Ser Asp Cys Gly Asp Gly Ala Val Asp
                485                 490                 495
Arg Ser Thr Tyr Gly Pro Phe Gly Val Leu Val Ile Ala Asp Asp Ser
            500                 505                 510
Leu Ser Glu Leu Thr Pro Ile Tyr Phe Arg Pro Leu Asn Thr Ser Asp
        515                 520                 525
Gly Ser Leu Glu Thr Tyr Phe Cys Ala Asp Glu Thr Arg Ser Ser Lys
    530                 535                 540
Ala Pro Asp Val Thr Lys Arg Val Tyr Gly Gly Lys Ile Pro Val Leu
545                 550                 555                 560
Asp Asp Glu Asn Tyr Asn Met Arg Val Leu Val Asp His Ser Val Val
                565                 570                 575
Glu Ser Phe Gly Gly Gly Gly Arg Thr Val Ile Thr Ser Arg Val Tyr
            580                 585                 590
Pro Thr Glu Ala Ile Tyr Gly Ala Ala Arg Leu Phe Leu Phe Asn Asn
        595                 600                 605
Ala Ser Gly Val Asn Val Lys Ala Thr Leu Lys Ile Trp Glu Met Asn
    610                 615                 620
Ser Ala Phe Ile Arg Pro Phe Pro Phe Glu Glu Thr Leu Phe Gln Glu
625                 630                 635                 640
Met Val Ala Ser Thr
                645
<210>108
<211>180
<212>PRT
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>108
Met Glu Leu Ser Ile Gln Lys Ile Glu Ala Leu Ile Arg Leu Ser Thr
1               5                   10                  15
Ile Val Met Leu Val Leu Thr Ala Cys Leu Ile Gly Leu Asp Ser Gln
            20                  25                  30
Thr Lys Val Ile Phe Tyr Val Gln Lys Lys Ala Ser Phe Lys Asp Leu
        35                  40                  45
Arg Ala Leu Val Gly Leu Leu Tyr Ile Thr Ser Leu Ala Ala Ala Tyr
    50                  55                  60
Asn Leu Leu Gln Leu Cys Cys Ser Ser Phe Ser Ala Ser Tyr Lys Gly
65                  70                  75                  80
Thr Ser Leu Gln Ser Tyr Ala Tyr Leu Ala Trp Leu Arg Tyr Ile Leu
                85                  90                  95
Asp Gln Ala Val Val Tyr Ala Val Phe Ala Gly Asn Leu Ala Ala Leu
            100                 105                 110
Glu His Ser Phe Leu Val Leu Thr Gly Glu Glu Asn Phe Gln Trp Leu
        115                 120                 125
Lys Trp Cys Asn Lys Tyr Thr Arg Phe Cys Thr Gln Ile Gly Gly Ser
    130                 135                 140
Leu Leu Cys Gly Phe Val Ala Ser Leu Leu Met Phe Ser Ile Ala Ser
145                 150                 155                 160
Ile Ser Ala Phe Asn Leu Phe Arg Leu Tyr Ser Pro Thr Lys Phe Met
                165                 170                 175
His Leu Lys Leu
            180
<210>109
<211>189
<212>PRT
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>109
Met Ala Glu Ile Leu Arg Lys Pro Ser Val Leu Lys Lys Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
Glu Leu Asp Gln Val Val Gly Lys Asp Arg Phe Val Val Glu Ser Asp
            20                  25                  30
Ile Pro Lys Leu Thr Tyr Leu Gln Ala Val Val Lys Glu Val Phe Arg
        35                  40                  45
Leu His Pro Gly Val Pro Leu Ile Ile Pro Arg Arg Thr Asn Glu Ala
    50                  55                  60
Cys Glu Val Ala Gly Tyr His Ile Pro Lys His Cys Ile Val Tyr Val
65                  70                  75                  80
Asn Val Trp Gly Met Ala Arg Asp Pro Asn Val Trp Glu Asp Pro Leu
                85                  90                  95
Glu Phe Lys Pro Glu Arg Phe Ile Gly Ser Ser Val Asp Val Lys Gly
            100                 105                 110
Gln Asp Phe Asn Leu Leu Pro Phe Gly Thr Gly Arg Arg Ser Cys Val
        115                 120                 125
Gly Trp Pro Leu Ala His Arg Met Val His Tyr Tyr Leu Ala Ala Leu
    130                 135                 140
Leu His Ala Phe Gln Trp Glu Ser Pro Pro Asp Val Leu Asn Asp Leu
145                 150                 155                 160
Gly Glu Arg Val Gly Leu Thr Ile Gln Lys Gly Lys Ser Leu Leu Ser
                165                 170                 175
Thr Pro Lys Pro Arg Leu Pro Ala Ser Val Tyr Glu Arg
            180                 185
<210>110
<211>468
<212>PRT
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>110
Met Ala Ser Leu Pro Phe Ile Phe Phe Leu Ser Phe Phe Ile Ile Ser
1               5                  10                  15
Thr Thr Leu Thr Ser Ala Gly Ala Ala Ala Ala Thr Ile Lys Leu Ser
            20                  25                  30
Leu Ser Pro Phe Pro His Pro Ser Ser Ser His Pro Tyr Gln Ile Leu
        35                  40                  45
Asn Asn Leu Val Thr Ser Ser Val Ala Arg Ala His His Leu Lys His
    50                  55                  60
Pro Lys Ala Lys Ala Asp Asn Thr Thr Ser Ser Leu Leu Arg Ala Pro
65                  70                  75                  80
Leu Phe Ser His Ser Tyr Gly Gly Tyr Thr Ile Ser Leu Lys Phe Gly
                85                  90                  95
Thr Pro Pro Gln Thr Leu Pro Phe Val Met Asp Thr Gly Ser Ser Leu
            100                 105                 110
Ser Trp Phe Pro Cys Thr Ser Arg Tyr Leu Cys Ser Gln Cys Ala Phe
        115                 120                 125
Pro Asn Val Asp Pro Ala Lys Ile Pro Thr Phe Ala Pro Lys Leu Ser
    130                 135                 140
Ser Ser Ser Lys Leu Val Gly Cys Arg Asn Pro Lys Cys Ser Trp Leu
145                 150                 155                 160
Phe Gly Pro Asp Val Glu Ser Arg Cys Gln Asp Cys Glu Pro Thr Ser
                165                 170                 175
Glu Asn Cys Thr Gln Thr Cys Pro Pro Tyr Ile Ile Gln Tyr Gly Leu
            180                 185                 190
Gly Ser Thr Ala Gly Leu Leu Leu Val Glu Asn Leu Ala Phe Pro Gln
        195                 200                 205
Lys Thr Phe Gln Asp Phe Leu Val Gly Cys Ser Ile Leu Ser Asn Arg
    210                 215                 220
Gln Pro Ala Gly Ile Ala Gly Phe Gly Arg Ser Ala Glu Ser Ile Pro
225                 230                 235                 240
Ser Gln Leu Gly Leu Lys Lys Phe Ser Tyr Cys Leu Val Ser Arg Arg
                245                 250                 255
Phe Asp Asp Thr Gly Val Ser Ser Asn Met Leu Leu Glu Thr Gly Ser
            260                 265                 270
Gly Ser Gly Asp Ala Lys Thr Pro Gly Leu Ser Tyr Thr Pro Phe Tyr
        275                 280                 285
Arg Asn Gln Val Ala Ser Asn Pro Val Phe Lys Glu Phe Tyr Tyr Val
    290                 295                 300
Thr Leu Arg Lys Ile Leu Val Gly Asp Lys His Val Lys Val Pro Tyr
305                 310                 315                 320
Ser Tyr Leu Val Pro Gly Ser Asp Gly Asn Gly Gly Thr Ile Val Asp
                325                 330                 335
Ser Gly Ser Thr Phe Thr Phe Met Glu Arg Pro Val Phe Glu Val Val
            340                 345                 350
Ser Lys Glu Phe Glu Lys Gln Met Gly Asn Tyr Arg Arg Val Arg Glu
        355                 360                 365
Ile Glu Asn Arg Ser Gly Leu Ala Pro Cys Phe Asn Thr Ser Gly Tyr
    370                 375                 380
Thr Ser Ile Glu Ile Pro Glu Leu Ser Phe Gln Phe Lys Gly Gly Ala
385                 390                 395                 400
Lys Met Ala Leu Pro Leu Val Asn Tyr Phe Ser Phe Asp Gly Asp Asp
                405                 410                 415
Lys Val Val Cys Leu Met Ile Val Ser Asn Asn Val Val Gly Gln Gly
            420                 425                 430
Ser His Ser Gly Pro Ala Ile Ile Leu Gly Ser Phe Gln Gln Gln Asn
        435                 440                 445
Tyr Tyr Ile Glu Phe Asp Ile Ala Asn Asn Arg Phe Gly Trp Ala Glu
    450                 455                 460
Arg Ser Cys Ala
465
<210>111
<211>451
<212>PRT
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>111
Met Ala Gly Val Glu Ala Gly Lys Glu Glu Glu Ala Thr Ala Val Arg
1               5                   10                  15
Ile Thr Gly Lys Ser His Val Lys Pro Gly Lys Leu Ile Gly Arg Lys
            20                  25                  30
Glu Cys Gln Leu Val Thr Phe Asp Leu Pro Tyr Leu Ala Phe Tyr Tyr
        35                  40                  45
Asn Gln Lys Leu Leu Phe Tyr Lys Asn Asp Gly Gly Gly Glu Phe Glu
    50                  55                  60
Asp Lys Val Glu Lys Leu Lys Gly Gly Leu Arg Val Val Leu Glu Glu
65                  70                  75                  80
Phe Tyr Gln Leu Gly Gly Lys Leu Gly Lys Asp Asp Asp Gly Val Leu
                85                  90                  95
Arg Val Asp Tyr Asp Asp Asp Met Asp Gly Val Glu Val Val Glu Ala
            100                 105                 110
Val Ala Glu Gly Ile Thr Val Asp Glu Leu Thr Gly Asp Asp Gly Thr
       115                 120                 125
Ser Ser Phe Lys Glu Leu Ile Pro Phe Asn Gly Val Leu Asn Leu Glu
    130                 135                 140
Gly Leu His Arg Pro Leu Leu Ser Ile Gln Leu Thr Lys Leu Lys Asp
145                 150                 155                 160
Gly Val Ala Met Gly Cys Ala Phe Asn His Ala Ile Leu Asp Gly Thr
                165                 170                 175
Ser Thr Trp His Phe Met Ser Ser Trp Ala Gln Ile Cys Asn Gly Thr
            180                 185                 190
Ser Ser Ser Val Val Val Pro Pro Phe Leu Asp Arg Thr Thr Ala Arg
        195                 200                 205
Asn Thr Arg Val Lys Leu Asp Leu Ser Pro Val Val Ser Cys Asn Gly
    210                 215                 220
Asp Asp Ala Thr Lys Gln Gly Gln Pro Ala Pro Gln Met Arg Glu Lys
225                 230                 235                 240
Leu Phe Arg Phe Ser Glu Ala Ala Val Asp Lys Ile Lys Ser Arg Val
                245                 250                 255
Asn Ser Thr Pro Pro Pro Ser Asp Gly Ser Lys Pro Phe Ser Thr Phe
            260                 265                 270
Gln Ser Leu Ala Val His Ile Trp Arg His Val Ser Gln Ala Arg Asn
        275                 280                 285
Leu Lys Pro Glu Asp Tyr Thr Val Phe Thr Val Phe Ala Asp Cys Arg
    290                 295                 300
Lys Arg Val Asp Pro Pro Met Pro Asp Ser Tyr Phe Gly Asn Leu Ile
305                 310                 315                 320
Gln Ala Ile Phe Thr Ala Thr Ala Ala Gly Leu Leu Leu Glu Asn Pro
                325                 330                 335
Pro Ser Phe Gly Ala Ser Val Ile Gln Lys Ala lle Glu Ser His Asp
            340                 345                 350
Ala Lys Ala Ile Asp Glu Arg Asn Lys Ala Trp Glu Ala Ala Pro Lys
        355                 360                 365
Ile Phe Gln Phe Lys Asp Ala Gly Val Asn Cys Val Ala Val Gly Ser
    370                 375                 380
Ser Pro Arg Phe Lys Val Tyr Glu Val Asp Phe Gly Trp Gly Lys Pro
385                 390                 395                 400
Val Gly Val Arg Ser Gly Ser Asn Asn Arg Phe Asp Gly Met Val Tyr
                405                 410                 415
Leu Tyr Gln Gly Lys Ser Gly Gly Arg Ser Ile Asp Val Glu Ile Thr
            420                 425                 430
Met Glu Ala Gln Ala Met Glu Lys Leu Glu Lys Asp Lys Glu Phe Leu
        435                 440                 445
Met Glu Val
    450
<210>112
<211>467
<212>PRT
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>112
Met Ser Thr Gln Ser Arg Ala Val Gly Gly Thr Glu His Asn Trp Cys
1               5                   10                  15
Arg Ala Val Val Gly Gly Thr Gly Ile Ala Val Leu Ala Ile Ile Ser
            20                  25                  30
Ser Lys Asn Pro Asp Val Ser His Leu Lys Asn Ala Leu His Lys Leu
        35                  40                  45
Gln Ile Ser His Pro Ile Leu Arg Ser Arg Leu His Tyr Ser Pro Thr
    50                  55                  60
Ala Asn Ser Tyr Ser Phe Val Thr Ser Pro Ser Pro Phe Ile Gln Ile
65                  70                  75                  80
Lys Tyr Phe Asn His Ser Thr Thr Cys Gln Ile Leu Glu Asn Asn Gln
                85                  90                  95
Asn Ile Ser Pro Leu His Leu Ile Leu Glu His Glu Leu Asn Gln Asn
            100                 105                 110
Ala Trp Val Ser Ser Ser Cys Thr Thr Lys His Asp Val Phe Phe Ala
        115                 120                 125
Ser Val Tyr Ala Leu Pro Gly Ala Thr Arg Trp Val Leu Val Leu Arg
    130                 135                 140
Leu His Ala Ala Ala Cys Asp Arg Thr Thr Ala Val Ser Leu Leu Arg
145                 150                 155                 160
Glu Leu Leu Thr Leu Met Ala Ile Glu Glu Glu Glu Thr Gly Phe Gln
                165                 170                 175
Gln Gly Gln Lys Glu Ile Thr Met Asn Lys Gly Glu Ile Ser Leu Ala
            180                 185                 190
Met Glu Asp Ile Leu Pro Lys Gly Ile Val Lys Lys Thr Leu Trp Ala
        195                 200                 205
Arg Gly Val Asp Met Leu Ser Tyr Ser Val Asn Ser Leu Arg Phe Thr
    210                 215                 220
Asn Leu Arg Phe Lys Asp Ala Lys Ser Pro Arg Ser Thr Gln Val Val
225                 230                 235                 240
Arg Leu Leu Ile Asn Pro Asp Asp Thr Gln Lys Ile Leu Thr Gly Cys
                245                 250                 255
Lys Ala Arg Gly Ile Lys Leu Cys Gly Ala Leu Gly Ala Ala Gly Leu
            260                 265                 270
Ile Ser Ala His Ser Ser Lys Ser Arg Ser Asp His Gln Lys Lys Lys
        275                 280                 285
Tyr Gly Val Val Thr Leu Thr Asp Cys Arg Ser Ile Leu Glu Pro Pro
    290                 295                 300
Leu Ser Asn His His Phe Gly Phe Tyr His Ser Ala Ile Leu Asn Thr
305                 310                 315                 320
His Ala Ile Lys Gly Gly Glu Lys Leu Trp Glu Leu Ala Glu Lys Val
                325                 330                 335
Tyr Thr Val Phe Thr His Tyr Lys Ser Cys Asn Lys His Leu Ser Asp
            340                 345                 350
Met Ala Asp Leu Asn Phe Leu Met Cys Arg Ala Met 6lu Asn Pro Gly
        355                 360                 365
Leu Thr Pro Ser Ala Ser Leu Arg Thr Cys Leu Ile Ser Val Phe Glu
    370                 375                 380
Asp Thr Val Ile Asp Glu Ser Ser Asn Gln Gln Asn Gln Val Gly Val
385                 390                 395                 400
Glu Asp Tyr Met Gly Cys Ala Ser Ala His Gly Ile Ala Pro Ser Ile
                405                 410                 415
Ala Ile Phe Asp Thr Ile Arg Asp Gly Arg Leu Asp Cys Ile Cys Val
            420                 425                 430
Tyr Pro Ser Pro Leu His Ser Arg Glu Gln Met Gln Glu Leu Val Asp
        435                 440                 445
Asn Met Lys Cys Ile Leu Val Asp Ala Gly Lys Asn Val Ala Asp Glu
    450                 455                 460
Thr Glu Ser
465
<210>113
<211>223
<212>PRT
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>113
Met Gly Arg Gly Lys Ile Glu Ile Lys Arg Ile Glu Asn Thr Thr Asn
1               5                   10                  15
Arg Gln Val Thr Phe Cys Lys Arg Arg Asn Gly Leu Leu Lys Lys Ala
            20                  25                  30
Tyr Glu Leu Ser Val Leu Cys Asp Ala Glu Val Ala Leu Ile Val Phe
        35                  40                  45
Ser Ser Arg Gly Arg Leu Tyr Glu Tyr Ser Asn Asn Asn Ile Arg Ser
    50                  55                  60
Thr Ile Asp Arg Tyr Lys Lys Ala Cys Ser Asp Thr Ser Asn Thr Asn
65                  70                  75                  80
Thr Val Thr Glu Ile Asn Ala Gln Tyr Tyr Gln Gln Glu Ser Ala Lys
                85                  90                  95
Leu Arg Gln Gln Ile Gln Met Leu Gln Asn Ser Asn Arg His Leu Met
            100                 105                 110
Gly Asp Ser Leu Ser Ser Leu Thr Val Lys Glu Leu Lys Gln Val Glu
        115                 120                 125
Asn Arg Leu Glu Arg Gly Ile Thr Arg Ile Arg Ser Lys Lys His Glu
    130                 135                 140
Met Leu Leu Ala Glu Ile Glu Phe Leu Gln Lys Arg Glu Ile Glu Leu
145                 150                 155                 160
Glu Asn Glu Ser Val Cys Leu Arg Thr Lys Ile Ala Glu Ile Glu Arg
               165                 170                 175
Leu Gln Gln Ala Asn Met Val Thr Gly Pro Glu Leu Asn Ala Ile Gln
            180                 185                 190
Ala Leu Ala Ser Arg Asn Phe Phe Ser Pro Asn Val Ile Glu His Pro
195                 200                 205
Ser Ala Tyr Ser His Leu Ser Asp Lys Lys Ile Leu His Leu Gly
                210                 215                 220
<210>114
<211>310
<212>PRT
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>114
Met Asp Val Thr Ser Thr Pro Asn Arg Lys Glu Met Asp Arg Ile Lys
1               5                   10                  15
Gly Pro Trp Ser Pro Glu Glu Asp Asp Leu Leu Gln Gln Leu Val Gln
            20                  25                  30
Lys His Gly Pro Arg Asn Trp Ser Leu Ile Ser Lys Ser Ile Pro Gly
        35                  40                  45
Arg Ser Gly Lys Ser Cys Arg Leu Arg Trp Cys Asn Gln Leu Ser Pro
    50                  55                  60
Gln Val Glu His Arg Ala Phe Thr Pro Glu Glu Asp Glu Thr Ile Ile
65                  70                  75                  80
Arg Ala His Ala Arg Phe Gly Asn Lys Trp Ala Thr Ile Ala Arg Leu
                85                  90                  95
Leu Asn Gly Arg Thr Asp Asn Ala Ile Lys Asn His Trp Asn Ser Thr
            100                 105                 110
Leu Lys Arg Lys Cys Leu Pro Val Gly Glu Glu Cys Asn Phe Val Ala
        115                 120                 125
Asn Gly Gly Tyr Asp Gly Asn Leu Gly Gly Glu Glu Arg Gln Pro Leu
    130                 135                 140
Lys Arg Ser Val Ser Ala Gly Leu Tyr Met Ser Pro Gly Ser Pro Ser
145                 150                 155                 160
Gly Ser Asp Val Ser Asp Ser Ser Val Pro Val Leu Ser Ser Ser Tyr
                165                 170                 175
Val Tyr Lys Pro Ile Pro Arg Thr Gly Gly Val Asn Val Asp Val Asn
            180                 185                 190
Val Thr Pro Ala Gly Val Glu Ala Ala Ser Ser Ser Asn Asp Pro Pro
        195                 200                 205
Thr Ser Leu Ser Leu Ser Leu Pro Gly Val Glu Ser Cys Glu Val Val
    210                 215                 220
Ser Thr Gln Pro Ile Thr Glu Ser Thr Gln Asn Arg Ser Glu Glu Arg
225                 230                 235                 240
Gly Gly Gly Val Met Gly Phe Ser Ala Glu Phe Met Ala Val Met Gln
                245                 250                 255
Glu Met Ile Arg Val Glu Val Arg Asn Tyr Met Thr Gln Met Gln Gln
            260                 265                 270
Gln Gln Gln Gln Gln Asn Gly Ala Val Pro Gly Gly Ala Gly Met Gly
        275                 280                 285
Met Cys Leu Asp Gly Gly Phe Arg Asn Leu Met Ala Val Asn Pro Val
    290                 295                 300
Gly Met Ser Lys Ile Glu
305                 310
<210>115
<211>593
<212>PRT
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>115
Met Gly Gly Pro Pro Tyr Asp Cys Leu Ala Asn Pro Leu Gly Ala Val
1               5                   10                  15
Arg Leu Thr Phe Glu Lys Ala Ile Trp Ser Glu Ser Glu Thr Pro Pro
            20                  25                  30
Ile His Pro Ser Ala Phe Asn Gly Lys Asp Trp Gly Ala Leu Glu Leu
        35                  40                  45
Phe Arg His Phe Leu Phe Gln Gly Ser Gly Leu Ser Gln Val Pro Ile
    50                  55                  60
Leu Asn Pro Lys Thr Leu Arg Trp Val Gln Pro Asn Ser Leu Val Arg
65                  70                  75                  80
Tyr Arg Gly Met Ile Gln Asp Met Leu Gly Asn Glu Phe Tyr Ala Gly
                85                  90                  95
Ala Tyr Lys Asp Gly Asn Leu Trp Arg Thr Asn Lys Phe Met Asp Val
            100                 105                 110
Ser Gln Tyr Pro Met Gly Ser Ser Pro Asp Met Cys Ile Trp Glu Arg
        115                 120                 125
Arg Leu Leu Tyr Cys Val Pro Val Pro Gly Gln Asn Ser Trp Thr Glu
    130                 135                 140
Pro Ser Ser Glu Met Glu Pro Asn Trp Ser Ser Gln Thr Arg Glu Lys
145                 150                 155                 160
Arg Arg Arg Met Asp Asp Glu Asp Asn Asp Pro Met Asp Leu Val Pro
                165                 170                 175
Asp Asp Glu Ile Lys Ser Ser Pro Ile Thr Lys Lys Met Arg Glu Asp
            180                 185                 190
Gly Leu Pro Ser Pro Ser Gln Ser Arg Asp Thr Lys Thr Thr Ser Ser
        195                 200                 205
Ser Ser Ile Thr Ser Thr Phe Gln Ser Val Asp Glu Asp Asn Leu Pro
    210                 215                 220
Cys Leu Val Lys Ile Tyr Asp Ser Pro Glu Ser Glu Leu Lys Leu Asn
225                 230                 235                 240
Asp Val Phe Glu Phe Ile Gly Val Leu Thr Phe Asp Ser Glu Leu Ala
                245                 250                 255
Val Glu Lys Asp Asp Asn Asp Glu Leu Ser Asn Ser Phe Tyr Asp Asp
            260                 265                 270
Ala Leu Val His Leu Pro Pro Asn Lys Val Pro Arg Leu His Cys Leu
        275                 280                 285
Ile His Arg Lys Leu Ala Val Gln Asp Phe Leu Pro Gly Ser Pro Ile
    290                 295                 300
Ile Glu Pro Lys Pro His Leu Val Lys Glu Thr Arg Glu Ala Leu Phe
305                 310                 315                 320
Arg His Leu Thr Ala Val Leu Gly Asn Asp Glu Val Ala Ala His Phe
                325                 330                 335
Val Leu Leu His Leu Leu Ser Lys Val His Ala Arg Val Asp Asp Val
            340                 345                 350
Ala Val Gly Lys Leu Ser Leu Asn Leu Thr Gly Leu Asn Lys Glu Ser
        355                 360                 365
Val Ser Val Phe Gly Thr Arg Leu Ser Asp Thr Phe Lys Asn Leu Leu
    370                 375                 380
Pro Phe Thr Asn Cys Met Pro Leu Thr Leu Glu Tyr Leu Asn Ile Ala
385                 390                 395                 400
Ser Leu Ala Pro Gln Lys Asp Tyr Gln Ala Asn Arg Leu Val Pro Gly
                405                 410                 415
Val Leu Gln Leu Pro Glu Gly Ser His Leu Met Val Asp Glu Thr Arg
            420                 425                 430
Leu Glu Ser Gly Ser Leu Asn Ser Thr Gly Ile Glu Asn Thr Lys Leu
        435                 440                 445
Leu Lys Asn Leu Ile Glu Phe Gln Lys Val Glu Tyr Asp Phe Gln Tyr
    450                 455                 460
Tyr Lys Val Glu Met Ala Thr Asp Val Gln Leu Leu Ile Phe Ser Glu
465                 470                 475                 480
Gly Lys Ser Asn Ile Val Pro Ala Asp Val Ile Val Pro Phe Gln Pro
                485                 490                 495
Ser Cys Leu Glu Ser Thr Glu Met Pro Val Ala Glu Ala Leu Glu Ala
            500                 505                 510
Trp Arg Trp Tyr Leu Ala Thr Val Arg Ser Leu Pro His Ser Ile Gly
         515                 520                 525
Ser Glu Ile Gln Lys Val Val Glu Asp Asp Leu Val Ala Ala Arg Gln
    530                 535                 540
Met Asp Arg Ser Leu Gly Ser Arg Asp Phe Ser Arg Trp Leu Thr Met
545                 550                 555                 560
Ala Arg Leu Ile Ser Ser Ser Phe Gly Glu Thr Ser Leu Ser Lys Glu
                565                 570                 575
His Trp Glu Met Ala Lys Glu Met Glu Arg Leu Arg Arg Glu Arg Leu
            580                 585                 590
Lys
<210>116
<211>89
<212>PRT
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<220>
<221>misc_feature
<222>(48)..(48)
<223>Xaa可以是任意天然存在的氨基酸
<400>116
Met Ser Met Lys Lys Glu Gly Glu Ile Leu Tyr Lys Lys Gly Leu Trp
1               5                   10                  15
Ala Met Glu Glu Asp Lys Leu Leu Ile Asp Tyr Val Asn Val His Gly
            20                  25                  30
Lys Gly Gln Trp Asn Lys Ile Ala Asn Arg Thr Gly Leu Lys Arg Xaa
        35                  40                  45
Gly Lys Ser Cys Arg Leu Arg Trp Met Asn Tyr Leu Ser Pro Asn Val
    50                  55                  60
Lys Lys Gly Asp Phe Ser Glu Glu Glu Glu Asp Leu Val Ile Arg Leu
65                  70                  75                  80
His Lys Leu Leu Glu Thr Gly Gly Leu
                85
<210>117
<211>628
<212>PRT
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>117
Met Ser Thr Gly Val Gln His Gln Glu Arg Val Pro Met Asn Leu Lys
1               5                   10                  15
Lys Gln Leu Ala Leu Ala Val Arg Asn Ile Gln Trp Ser Tyr Ala Ile
            20                  25                  30
Phe Trp Ser Ile Ser Thr Arg Gln Pro Gly Val Leu Glu Trp Gly Glu
        35                  40                  45
Gly Tyr Tyr Asn Gly Asp Ile Lys Thr Arg Lys Thr Val Gln Ser Val
    50                  55                  60
Glu Leu Asn Thr Asp Gln Leu Ser Leu Gln Arg Ser Glu Gln Leu Arg
65                  70                  75                  80
Gln Leu Tyr Glu Ser Leu Ser Ala Gly Glu Ser Ser Pro Gln Ala Lys
                85                  90                  95
Arg Pro Ser Ala Ala Leu Ser Pro Glu Asp Leu Thr Asp Thr Glu Trp
            100                 105                 110
Tyr Tyr Leu Val Cys Met Ser Phe Val Phe Asn Ile Gly Gln Gly Leu
        115                 120                 125
Pro Gly Arg Thr Leu Ser Thr Gly Gln Pro Val Trp Leu Cys Asn Ala
    130                 135                 140
His Cys Ala Asp Ser Lys Val Phe Gly Arg Ser Leu Leu Ala Lys Ser
145                 150                 155                 160
Ala Ser Ile Gln Thr Ala Val Cys Phe Pro Phe Ser Gly Gly Val Val
                165                 170                 175
Glu Leu Gly Val Thr Asp Leu Val Phe Glu Asp Leu Ser Leu Ile Gln
            180                 185                 190
Arg Val Lys Thr Leu Leu Leu Asp Asp Pro Gln Pro Ile Val Ser Lys
        195                 200                 205
Arg Ser Ile Gln Val Asp Gly Met Asn Asn Asp Leu Ala Cys Pro Ala
    210                 215                 220
Leu Asp Pro Leu Ile Leu Ala Thr Lys Leu Ser Pro Ile Leu Gly Cys
225                 230                 235                 240
Glu Gln Leu Glu Thr Val Ser Pro Asp Asp Ser Pro Asp Gly Leu Glu
                245                 250                 255
Pro Lys Gln Ser Arg Glu Asp Ser Leu Leu Ile Glu Gly Ile Asn Gly
            260                 265                 270
Gly Ala Ser Gln Val Gln Ser Trp Gln Phe Met Asp Glu Glu Phe Cys
        275                 280                 285
Asn Cys Val His His Ser Leu Asn Ser Ser Asp Cys Ile Ser Gln Thr
    290                 295                 300
Ile Ala Asp His Arg Lys Val Val Pro Leu Tyr Arg Gly Glu Asn Asp
305                 310                 315                 320
Asn Gly Leu Gln Asp Val Glu Glu Cys Asn Gln Thr Lys Leu Thr Ser
                325                 330                 335
Phe Asp Arg Gln Asn Asp Asp Arg His Phe His Glu Val Leu Ser Ala
            340                 345                 350
Leu Phe Lys Ser Ser His Pro Leu Ile Leu Gly Pro Gln Phe Arg Asn
        355                 360                 365
Ser Asn Lys Glu Ser Ser Phe Ile Arg Trp Gln Lys Asn Gly Leu Val
    370                 375                 380
Lys Pro Gln Lys Glu Arg Asp Glu Thr Pro Gln Lys Leu Leu Lys Lys
385                 390                 395                 400
Ile Leu Phe Leu Val Pro His Met His Asp Arg Gly Leu Ile Glu Ser
                405                 410                 415
Pro Glu Thr Asn Ala Val Arg Asp Ala Ala Trp Arg Pro Glu Ala Asp
            420                 425                 430
Glu Ile Cys Gly Asn His Val Leu Ser Glu Arg Lys Arg Arg Glu Lys
        435                 440                 445
Ile Asn Glu Arg Leu Met Met Leu Lys Ser Leu Val Pro Ala Asn Asn
    450                 455                 460
Lys Ala Asp Lys Val Ser Ile Leu Asp Val Thr Ile Glu Tyr Leu Gln
465                 470                 475                 480
Thr Leu Glu Arg Arg Val Ala Glu Leu Glu Ser Cys Arg Lys Ser Glu
                485                 490                 495
Ala Arg Thr Lys Ile Glu Arg Thr Ser Asp Asn Tyr Gly Asn Asn Lys
           500                 505                 510
Thr Asn Asn Gly Lys Lys Ser Ser Leu Ser Lys Arg Lys Ala Tyr Asp
        515                 520                 525
Val Val Asp Glu Ala Asp Gln Glu Ile Gly Tyr Val Ala Ser Lys Asp
    530                 535                 540
Gly Ser Thr Asp Lys Val Thr Leu Ser Met Asn Asn Lys Glu Leu Leu
545                 550                 555                 560
Ile Glu Phe Lys Cys Pro Trp Arg Glu Gly Ile Leu Leu Glu Val Met
                565                 570                 575
Asp Ala Leu Ser Ile Leu Asn Leu Asp Cys His Ser Val Gln Ser Ser
            580                 585                 590
Thr Thr Glu Gly Ile Leu Ser Leu Thr Ile Lys Ser Lys Tyr Lys Gly
        595                 600                 605
Ser Ser Val Ala Lys Ala Gly Pro Ile Glu Gln Ala Leu Gln Arg Ile
    610                 615                 620
Ala Ser Lys Cys
625
<210>118
<211>123
<212>PRT
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>118
Met Ala Ser Ser Gly Val Leu Lys Leu Val Ser Met Ile Leu Met Val
1               5                   10                  15
Cys Met Thr Met Met Ser Ala Pro Lys Ala Ala Lys Ala Ala Ile Thr
            20                  25                  30
Cys Ser Asp Val Val Asn His Leu Ile Pro Cys Leu Ser Tyr Val Gln
        35                  40                  45
Asn Gly Gly Thr Pro Ala Ala Ala Cys Cys Ser Gly Val  Lys Ala Leu
    50                  55                  60
Tyr Gly Glu Val Gln Thr Ser Pro Asp Arg Gln Asn Val Cys Lys Cys
65                  70                  75                  80
Ile Lys Ser Ala Val Asn Gly Ile Pro Tyr Thr Ser Asn Asn Leu Asn
                85                  90                  95
Leu Ala Ala Gly Leu Pro Ala Lys Cys Gly Leu Gln Leu Pro Tyr Ser
            100                 105                 110
Ile Ser Pro Ser Thr Asp Cys Asn Lys Val Gln
        115                 120
<210>119
<211>362
<212>PRT
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>119
Met Ala Asn His Thr Val Thr Phe Leu Pro Lys Leu Ser Ile Glu Ala
1               5                   10                  15
Ile Gln Thr Val Thr Pro Met Arg Ile Thr Glu Pro Arg Gln Thr Arg
            20                  25                  30
Gln Val Leu Ala Gly Glu Leu Val Gly Pro Gly Ile Phe Gln Arg Cys
        35                  40                  45
Leu Asn Val Val Gln Tyr Tyr Met Lys Glu Lys Glu Glu Asp Ser Gly
    50                  55                  60
Trp Leu Leu Ala Gly Trp Ile Lys Glu Thr Leu Gly Arg Ala Leu His
65                  70                  75                  80
Glu Gln Pro Met Ile Ser Gly Arg Leu Arg Lys Gly Glu Arg Asn Asp
                85                  90                  95
Gly Glu Leu Glu Ile Val Ser Asn Asp Cys Gly Ile Arg Leu Ile Glu
            100                 105                 110
Ala Arg Ile Gln Met Asn Leu Ser Asp Phe Leu Asp Leu Lys Gln Arg
        115                 120                 125
Glu Asp Ala Glu Ala Gln Leu Val Phe Trp Lys Asp Ile Asp Glu Gln
    130                 135                 140
Asn Pro Gln Phe Ser Pro Leu Phe Tyr Val Gln Val Thr Asn Phe Gln
145                 150                 155                 160
Cys Gly Gly Tyr Ser Ile Gly Ile Ser Cys Ser Ile Leu Leu Ala Asp
                165                 170                 175
Leu Leu Leu Met Lys Gl uPhe Leu Lys Thr Trp Ala Asp Ile His Asn
            180                 185                 190
Lys Val Ile Ile Asn Lys Asn Asp Glu Gln Lys Leu Pro Leu Phe Tyr
        195                 200                 205
Leu Pro Gly Leu Lys Asn Thr Asn Gly Ala Ser Pro Asn Ile Ile Thr
    210                 215                 220
Ser Asn Ser Ser Lys Asn Ser Ala Lys Thr Met Ile Phe Gln Ile Gln
225                 230                 235                 240
Ala Glu Thr Glu Ser Pro Gly Ser Asp Trp Cys Arg Lys Met Ala Leu
                245                 250                 255
Ala Cys Leu Glu Glu Ala Glu Ser Asn Leu Gly Ser Val Val Gly Gly
            260                 265                 270
Glu Phe Ser Leu Phe Val Asn Glu Ser Phe Glu Ser Ile Lys Val Glu
        275                 280                 285
Ser Cys Ser Lys Gln Gly Met Ser Lys Glu Ala Glu Met Gly Val Leu
    290                 295                 300
Asn Arg Ala Lys Trp Asp Asp Leu Gly Ala Asn Glu Val Ser Phe Gly
305                 310                 315                 320
Asp Gly Asn Lys Pro Ala His Val Ser Tyr Trp Leu Arg Ser Thr Leu
                325                 330                 335
Gly Gly Leu Ile Ile Val Ile Pro Ser Leu Gln Glu Asp Lys Tyr Thr
            340                 345                 350
Val Asn Ile Ile Val Thr Ile Pro Ser Lys
        355                 360
<210>120
<211>497
<212>PRT
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>120
Met Gly Phe Gln Arg Asn Ile Leu Gly Phe Leu Leu Leu Ile Leu Ala
1               5                   10                  15
Ser Leu Thr Ser Leu Ser Ser Ser Leu Pro Ser Glu Tyr Ser Ile Val
            20                  25                  30
Glu His Glu Ile Asp Ala Phe Leu Ser Glu Glu Arg Val Leu Glu Ile
        35                  40                  45
Phe Gln Gln Trp Lys Glu Lys Asn Gln Lys Val Tyr Arg Gln Ala Glu
    50                  55                  60
Glu Ala Glu Lys Arg Phe Glu Asn Phe Lys Gly Asn Leu Lys Tyr Ile
65                  70                  75                  80
Leu Glu Arg Asn Ala Lys Arg Lys Ala Asn Lys Trp Glu His His Val
                85                  90                  95
Gly Leu Asn Lys Phe Ala Asp Met Ser Asn Glu Glu Phe Arg Lys Ala
            100                 105                 110
Tyr Leu Ser Lys Val Lys Lys Pro Ile Asn Lys Gly Ile Thr Leu Ser
        115                 120                 125
Arg Asn Met Arg Arg Lys Val Gln Ser Cys Asp Ala Pro Ser Ser Leu
    130                 135                 140
Asn Trp Arg Asn Tyr Gly Val Val Thr Ala Val Lys Asp Gln Gly Ser
145                 150                 155                 160
Cys Gly Ser Cys Trp Ala Phe Ser Ser Thr Gly Ala Met Glu Gly Ile
                165                 170                 175
Asn Ala Leu Val Thr Gly Asp Leu Ile Ser Leu Ser Glu Gln Glu Leu
            180                 185                 190
Val Asp Cys Asp Thr Ser Asn Tyr Gly Cys Glu Gly Gly Tyr Met Asp
        195                 200                 205
Tyr Ala Phe Glu Trp Val Ile Asn Asn Gly Gly Ile Asp Ser Glu Thr
    210                 215                 220
Asp Tyr Pro Tyr Thr Gly Val Asp Gly Thr Cys Asn Thr Thr Lys Glu
225                 230                 235                 240
Glu Thr Lys Val Val Ser Ile Asp Gly Tyr Gln Asp Val Glu Gln Ser
                245                 250                 255
Asp Ser Ala Leu Leu Cys Ala Val Ala Gln Gln Pro Val Ser Val Gly
            260                 265                 270
Ile Asp Gly Ser Ala Ile Asp Phe Gln Leu Tyr Thr Gly Gly Ile Tyr
        275                 280                 285
Asp Gly Ser Cys Ser Asp Asp Pro Asp Asp Ile Asp His Ala Val Leu
    290                 295                 300
Ile Val Gly Tyr Gly Ser Glu Gly Ser Glu Glu Tyr Trp Ile Val Lys
305                 310                 315                 320
Asn Ser Trp Gly Thr Ser Trp Gly Ile Asp Gly Tyr Phe Tyr Leu Lys
                325                 330                 335
Arg Asp Thr Asp Leu Pro Tyr Gly Val Cys Ala Val Asn Ala Met Ala
            340                 345                 350
Ser Tyr Pro Thr Lys Glu Ser Ser Ser Pro Ser Pro Tyr Pro Ser Pro
        355                 360                 365
Ser Val Pro Pro Pro Pro Pro Pro Ser Thr Pro Pro Pro Pro Pro Pro
    370                 375                 380
Pro Ser Pro Ser Pro Ser Asp Cys Gly Asp Phe Ser Tyr Cys Ser Ser
385                 390                 395                 400
Asp Glu Thr Cys Cys Cys Leu Phe Glu Phe Tyr Asp Tyr Cys Leu Ile
                405                 410                 415
Tyr Gly Cys Cys Glu Tyr Glu Asn Ala Val Cys Cys Thr Gly Thr Glu
            420                 425                 430
Tyr Cys Cys Pro Ser Asp Tyr Pro Ile Cys Asp Val Gln Glu Gly Leu
        435                 440                 445
Cys Leu Lys Asn Ala Gly Asp Tyr Leu Gly Val Ala Ala Arg Lys Arg
    450                 455                 460
Lys Val Ala Lys His Lys Leu Pro Trp Thr Lys Ile Glu Glu Thr Glu
465                 470                 475                 480
Ile Thr Tyr Gln Pro Leu Gln Trp Lys Arg Asn Pro Phe Ala Ala Met
                485                 490                 495
Arg
<210>121
<211>335
<212>PRT
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>121
Met Lys Val Leu Ser Pro Ile Leu Ala Cys Leu Ala Leu Ala Val Val
1               5                   10                  15
Val Ser His Ala Ala Leu Ser Pro Glu Gln Tyr Trp Ser Tyr Lys Leu
            20                  25                  30
Pro Asn Thr Pro Met Pro Lys Ala Val Lys Glu Ile Leu His Pro Glu
        35                  40                  45
Leu Met Glu Glu Lys Ser Thr Ser Val Asn Val Gly Gly Gly Gly Val
    50                  55                  60
Asn Val Asn Thr Gly Lys Gly Lys Pro Gly Gly Asp Thr His Val Asn
65                  70                  75                  80
Val Gly Gly Lys Gly Val Gly Val Asn Thr Gly Lys Pro Gly Gly Gly
                85                  90                  95
Thr His Val Asn Val Gly Asp Pro Phe Asn Tyr Leu Tyr Ala Ala Ser
            100                 105                 110
Glu Thr Gln Ile His Glu Asp Pro Asn Val Ala Leu Phe Phe Leu Glu
        115                 120                 125
Lys Asp Met His Pro Gly Ala Thr Met Ser Leu His Phe Thr Glu Asn
    130                 135                 140
Thr Glu Lys Ser Ala Phe Leu Pro Tyr Gln Thr Ala Gln Lys Ile Pro
145                 150                 155                 160
Phe Ser Ser Asp Lys Leu Pro Glu Ile Phe Asn Lys Phe Ser Val Lys
                165                 170                 175
Pro Gly Ser Val Lys Ala Glu Met Met Lys Asn Thr Ile Lys Glu Cys
            180                 185                 190
Glu Gln Pro Ala Ile Glu Gly Glu Glu Lys Tyr Cys Ala Thr Ser Leu
        195                 200                 205
Glu Ser Met Ile Asp Tyr Ser Ile Ser Lys Leu Gly Lys Val Asp Gln
    210                 215                 220
Ala Val Ser Thr Glu Val Glu Lys Gln Thr Pro Met Gln Lys Tyr Thr
225                 230                 235                 240
Ile Ala Ala Gly Val Gln Lys Met Thr Asp Asp Lys Ala Val Val Cys
                245                 250                 255
His Lys Gln Asn Tyr Ala Tyr Ala Val Phe Tyr Cys His Lys Ser Glu
            260                 265                 270
Thr Thr Arg Ala Tyr Met Val Pro Leu Glu Gly Ala Asp Gly Thr Lys
        275                 280                 285
Ala Lys Ala Val Ala Val Cys His Thr Asp Thr Ser Ala Trp Asn Pro
    290                 295                 300
Lys His Leu Ala Phe Gln Val Leu Lys Val Glu Pro Gly Thr Ile Pro
305                 310                 315                 320
Val Cys His Phe Leu Pro Arg Asp His Ile Val Trp Val Pro Lys
                325                 330                 335
<210>122
<211>302
<212>PRT
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>122
Met Glu Arg Gln Arg Ser Lys Gln Val Cys Leu Leu Met Trp Val Leu
1               5                   10                  15
Val Ala Ala Phe Phe Ser His Asn Arg Val Ile Ala Val Thr Ser Thr
            20                  25                  30
Gly Leu Gly Glu Gln Lys Asn Tyr Tyr Pro Ala Pro Asp Pro His Ala
        35                  40                  45
Gly Thr Pro ProSer Gly Ser Hi s Gly Thr Pro Pro Ser Ser Gly Gly
    50                  55                  60
Gly Ser Pro Pro Ser His Gly Thr Pro Ser His Gly Gly Gly Tyr His
65                  70                  75                  80
Pro Ser Pro Thr Pro Ser Thr Pro Ser Gly Gly Asn Cys Gly Thr Pro
                85                  90                  95
Pro His Asp Pro Ser Thr Pro Ser Thr Pro Ser His Thr Pro Pro His
            100                 105                 110
Gly Thr Pro Pro Ser Ser Gly Gly Gly Ser Pro Pro Ser Tyr Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Ser Pro Pro Ser Tyr Gly Gly Gly Ser Pro Pro Ser Tyr Gly Gly
    130                 135                 140
Gly Ser Pro Pro Ser Tyr Gly Gly Gly Ser Pro Pro Ser Tyr Gly Gly
145                 150                 155                 160
Gly Ser Pro Pro Thr Thr Pro Ile Asp Pro Gly Thr Pro Ser Ile Pro
                165                 170                 175
Ser Pro Pro Phe Phe Pro Ala Pro Thr Pro Pro Ile Gly Gly Thr Cys
            180                 185                 190
Asp Phe Trp Arg Ser His Pro Thr Leu Ile Trp Gly Leu Leu Gly Trp
        195                 200                 205
Trp Gly Thr Val Gly Asn Ala Phe Gly Val Thr Asn Ala Pro Gly Leu
    210                 215                 220
Gly Thr Ser Met Ser Leu Pro Gln Ala Leu Ser Asn Thr Arg Thr Asp
225                 230                 235                 240
Gly Leu Gly Ala Leu Tyr Arg Glu Gly Thr Ala Ser Phe Leu Asn Ser
                245                 250                 255
Met Val Asn Asn Arg Phe Pro Phe Ser Thr Lys Gln Val Arg Glu Thr
            260                 265                 270
Phe Val Ala Ala Leu Gly Ser Asn Ser Ala Ala Ala Ala Gln Ala Arg
        275                 280                 285
Leu Phe Lys Leu Ala Asn Glu Gly His Leu Lys Pro Ara Thr
    290                 295                 300
<210>123
<211>196
<212>PRT
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>123
Met Met Lys Arg Gly Phe Ile Val Leu Ala Leu Thr Val Val Phe Ala
1               5                   10                  15
Ala Thr Val Val Thr Ala Ala Asp Glu Ser Gly Leu Ala Asn Glu Cys
             20                  25                  30
Ser Lys Asp Phe Gln Ser Val Met Thr Cys Leu Ser Phe Ala Gln Gly
        35                  40                  45
Lys Ala Ala Ser Pro Ser Lys Glu Cys Cys Asn Ser Val Ala Gly Ile
    50                  55                  60
Lys Glu Asn Lys Pro Lys Cys Leu Cys Tyr Ile Leu Gln Gln Thr Gln
65                  70                  75                  80
Thr Ser Gly Ala Gln Asn Leu Lys Ser Leu Gly Val Gln Glu Asp Lys
                85                  90                  95
Leu Phe Gln Leu Pro Ser Ala Cys Gln Leu Lys Asn Ala Ser Val Ser
            100                 105                 110
Asp Cys Pro Lys Leu Leu Gly Leu Ser Pro Ser Ser Pro Asp Ala Ala
       115                 120                 125
Ile Phe Thr Asn Ser Ser Ser Lys Ala Thr Thr Pro Ser Thr Ser Thr
    130                 135                 140
Thr Thr Ala Thr Pro Ser Ser Ala Ala Asp Lys Thr Asp Ser Lys Ser
145                 150                 155                 160
Ser Gly Ile Lys Leu Gly Pro His Phe Val Gly Ser Thr Ala Ala Leu
                165                 170                 175
Leu Val Ala Thr Ala Ala Val Phe Phe Leu Val Phe Pro Ala Gly Phe
            180                 185                 190
Ala Ser Ile Val
        195
<210>124
<211>629
<212>PRT
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>124
Met Pro Val Val Asp Phe Ala Cys Val Phe Leu Val Ser Val Val Met
1               5                  10                  15
Phe Asn Leu Arg Val Ser Thr Glu Pro Val Glu Asp Lys Gln Ala Leu
            20                  25                  30
Leu Ala Phe Ile Ser Gly Ile Arg His Ala Asp Arg Val Lys Trp Asn
        35                  40                  45
Ser Ser Thr Ser Ala Cys Asp Trp Phe Gly Val Gln Cys Asp Ala Asn
    50                  55                  60
Arg Ser Phe Val Tyr Thr Leu Arg Val Pro Gly Trp Gly Pro Tyr Gly
65                  70                  75                  80
Val Arg Phe Arg Pro Lys Gln Ile Gly Arg Leu Asn Arg Leu Arg Val
                85                  90                  95
Leu Ser Leu Arg Ala Asn Arg Leu Ser Gly Glu Ile Pro Ala Asp Phe
            100                 105                 110
Tyr Asn Leu Thr Gln Leu Arg Ser Leu Tyr Leu Gln Gly Asn Glu Phe
        115                 120                 125
Thr Gly Pro Phe Pro Pro Ser Val Thr Arg Leu Thr Arg Leu Thr Arg
    130                 135                 140
Leu Asp Leu Ser Ser Asn Asn Phe Thr Gly Pro Ile Pro Leu Gly Val
145                 150                 155                 160
Asn Asn Leu Thr Gln Leu Thr Lys Leu Phe Leu Gln Asn Asn Lys Phe
                165                 170                 175
Ser Gly Ser Leu Pro Ser Ile Asp Ser Asp Gly Leu Asn Asp Phe Asn
            180                 185                 190
Val Ser Asn Asn Asn Leu Lys Gly Ser Ile Pro Asp Ser Leu Ser Lys
        195                 200                 205
Phe Pro Glu Ser Ser Phe Ala Gly Asn Ile Gly Leu Cys Gly Gly Pro
    210                 215                 220
Leu Arg Pro Cys Asn Pro Phe Pro Pro Ser Pro Ser Pro Thr Glu Pro
225                 230                 235                 240
Ile Pro Pro Lys Thr Ser Gly Gln Ser Ser Lys Ser Leu Pro Thr Gly
                245                 250                 255
Ala Ile Ile Ala Ile Ala Val Gly Ser Ala Ile Val Ala Leu Leu Leu
            260                 265                 270
Leu Leu Phe Leu Ile Ile Cys Phe Arg Lys Trp Lys Arg Lys Ser Pro
        275                 280                 285
Arg Arg Gln Lys Ala Ile Pro Ser Thr Thr His Ala Leu Pro Val Glu
    290                 295                 300
Glu Ala Gly Thr Ser Ser Ser Lys Asp Asp Ile Thr Gly Gly Ser Thr
305                 310                 315                 320
Glu Ile Glu Arg Met Met Asn Asn Lys Leu Met Phe Phe Lys Gly Gly
                325                 330                 335
Val Tyr Ser Phe Asp Leu Glu Asp Leu Met Arg Ala Ser Ala Glu Met
            340                 345                 350
Leu Gly Lys Gly Ser Thr Gly Thr Ser Tyr Arg Val Val Leu Ala Val
        355                 360                 365
Gly Thr Thr Val Ala Val Lys Arg Leu Lys Asp Val Ala Val Ser Lys
    370                 375                 380
Arg Glu Phe Val Met Lys Met Gly Met Leu Gly Lys Ile Met His Glu
385                 390                 395                 400
Asn Val Val Pro Leu Arg Ala Phe Tyr Tyr Ser Asp Glu Glu Lys Leu
                405                 410                 415
Leu Val Tyr Asp Tyr Met His Gly Gly Ser Leu Phe Ala Leu Leu His
            420                 425                 430
Gly Ser Arg Ser Ser Ala Arg Thr Pro Leu Glu Trp Asp Pro Arg Met
        435                 440                 445
Lys Ile Ala Leu Gly Val Ala Arg Gly Leu Ala His Leu His Ser Ser
    450                 455                 460
Gln Asn Met Val His Gly Asn Ile Lys Ser Ser Asn Ile Leu Leu Arg
465                 470                 475                 480
Pro Asp His Glu Ala Cys lle Ser Glu Phe Gly Leu Asn Ser Leu Phe
                485                 490                 495
Asn Thr Asn Thr Pro Pro Ser Arg Ile Ala Gly Tyr Gln Ala Pro Glu
            500                 505                 510
Val Ile Gln Thr His Lys Val Thr Val Lys Ser Asp Val Tyr Ser Phe
        515                 520                 525
Gly Val Leu Leu Leu Glu Leu Leu Thr Gly Arg Ala Pro Ile Gln Pro
    530                 535                 540
Ser lle Thr Glu Glu Gly Phe Asp Leu Pro Arg Trp Val Gln Ser Val
545                 550                 555                 560
Val Arg Glu Glu Trp Ala Ala Glu Val Phe Asp Ala Glu Leu Met Ala
                565                 570                 575
Tyr His Asp Ile Glu Glu Glu Met Val Gln Ala Leu Gln Met Ala Met
            580                 585                 590
Val Cys Val Ser Thr Val Pro Asp Gln Arg Pro Val Met Ser Glu Val
        595                 600                 605
Val Arg Met Ile Gly Asp Met Ile Asp Arg Gly Gly Thr Asn Asp Gly
    610                 615                 620
Thr Ala Ala Ala Ile
625
<210>125
<211>545
<212>PRT
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>125
Met Ala Glu Met Ser Thr Leu Cys Thr Phe Leu Phe Ser Leu Leu Leu
1               5                  10                  15
Phe Ala Ser His Pro Leu Ile Leu Pro Thr Ala Ala Asp Gly Arg Trp
            20                  25                  30
Gln Leu Leu Gln Lys Ser Ile Gly Ile Ser Ser Met His Met Gln Leu
        35                  40                  45
Leu Lys Asn Asp Arg Val Val Met Tyr Asp Arg Thr Asp Phe Gly Pro
    50                  55                  60
Ser Thr Leu Pro Leu Ala Ser Gly Lys Cys His Asn Asp Pro Thr Asn
65                  70                  75                  80
Thr Ala Val Gln Val Asp Cys Thr Ala His Ser Val Glu Tyr Asp Val
                85                  90                  95
Leu Ser Asn Lys Phe Arg Ala Leu Thr Val Gln Ser Asn Val Trp Cys
            100                 105                 110
Ser Ser Gly Gly Val Met Pro Asp Gly Lys Leu Val Gln Thr Gly Gly
        115                 120                 125
Phe Ser Glu Gly Glu Leu Arg Val Arg Val Phe Ser Pro Cys Glu Ser
    130                 135                 140
Cys Asp Trp His Glu Thr Pro Asn Gly Leu Ala Ala Lys Arg Trp Tyr
145                 150                 155                 160
Ala Thr Asn His Val Leu Pro Asp Gly Arg Gln Ile Val Val Gly Gly
                165                 170                 175
Arg Glu Gln Phe Asn Tyr Glu Phe Val Pro Lys Asn Ile Ala Ala Asp
            180                 185                 190
Thr Phe Lys Leu His Phe Leu Ser Glu Thr Asn Glu Arg Gly Val Glu
        195                 200                 205
Asn Asn Leu Tyr Pro Phe Val Phe Leu Asn Val Asp Gly Asn Leu Phe
    210                 215                 220
Ile Phe Ala Asn Asn Arg Ala Ile Leu Leu Asp Tyr Val Asn Asn Lys
225                 230                 235                 240
Val Val Lys Thr Tyr Pro Lys Ile Pro Gly Gly Glu Pro Arg Ser Tyr
                245                 250                 255
Pro Ser Thr Gly Ser Ala Val Leu Leu Pro Leu Lys Asn Leu Thr Ala
            260                 265                 270
Ala Thr Ile Gln Ala Glu Val Leu Val Cys Gly Gly Ala Pro Lys Gly
        275                 280                 285
Ser Phe Val Gln Ala Leu Gln Gly Lys Phe Val Lys Ala Leu Asn Thr
    290                 295                 300
Cys Ala Arg Ile Ser Ile Thr Asp Pro Lys Pro Lys Trp Val Leu Glu
305                 310                 315                 320
Thr Met Pro Leu Ala Arg Val Met Gly Asp Met Val Leu Leu Pro Asn
                325                 330                 335
Gly Lys Val Leu Val Ile Asn Gly Ala Arg Ser Gly Ser Ala Gly Trp
            340                 345                 350
Asp Leu Gly Arg Asp Pro Val Leu Asn Pro Val Leu Tyr Met Pro Asp
        355                 360                 365
Asn Glu Ile Glu Ser Arg Phe Lys Ile Leu Asn Pro Thr Lys Ile Pro
    370                 375                 380
Arg Met Tyr His Ser Thr Ala Val Leu Leu Arg Asp Gly Arg Val Leu
385                 390                 395                 400
Val Gly Gly Ser Asn Pro His Ala Tyr Tyr Asn Phe Thr Gly Val Leu
                405                 410                 415
Tyr Pro Thr Glu Leu Ser Leu Glu Ala Phe Tyr Pro Gly Tyr Leu Asp
            420                 425                 430
Ala Lys Phe Asn Asn Leu Arg Pro Thr Ile Val Ala Pro Lys Ser Met
        435                 440                 445
Ser Gly Ile Arg Tyr Asn Lys Lys Leu Lys Ile Lys Val Val Ile Thr
    450                 455                 460
Gly Glu Val Thr Leu Asn Leu Leu Ser Val Thr Met Val Ser Pro Ala
465                 470                 475                 480
Phe Asn Thr His Ser Phe Ser Met Asn Gln Arg Leu Leu Val Leu Gly
                485                 490                 495
Asn Asp Lys Val Met Ala Ser Gly Lys Ser Thr Tyr Glu lle Glu Val
            500                 505                 510
Met Thr Pro Gly Ser Gly Asn Leu Ala Pro Ala Gly Phe Tyr Leu Leu
        515                 520                 525
Phe Val Val His Gln Asp Ile Pro Ser Gln Gly Ile Trp Val His Leu
    530                 535                 540
Lys
545
<210>126
<211>508
<212>PRT
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>126
Met Gln Ile Leu Pro Phe Arg Gly Gly Ala Leu Val Cys Phe Ile Ala
1               5                   10                  15
Ser Leu Leu Phe Val Ala Ser Phe Cys Asn Ala Asp Ala Lys Thr Val
            20                  25                  30
Glu Val Val Gly Ala Gly Glu Cys Ala Asp Cys Ala Glu Asn Asn Leu
        35                  40                  45
Glu Ile Ser Gln Ala Phe Ser Gly Leu Arg Val Ser Ile Asp Cys Lys
    50                  55                  60
Pro Glu Asn Gly Lys Asn Phe Lys Thr Arg Gly Ser Gly Glu Leu Asp
65                  70                  75                  80
Lys Gln Gly Asn Phe Lys Val Phe Val Pro Glu Asp Leu Val Glu Asn
                85                  90                  95
Gly Glu Leu Lys Glu Glu Cys Tyr Ala Gln Leu His Ser Val Ser Ala
            100                 105                 110
Ala Pro Cys Pro Ala His Asp Gly Leu Glu Ser Ala Lys Leu Val Leu
        115                 120                 125
Lys Ser Arg Ser Asp Gly Lys Hi s Gly Phe Gly Leu Lys Gly Lys Leu
    130                 135                 140
Arg Phe Ser Pro Leu Thr Cys Ala Ser Ala Phe Phe Trp Pro His Phe
145                 150                 155                 160
Lys Phe Pro Pro Leu Pro Lys Trp Asn His Pro Pro Leu Pro Lys Phe
                165                 170                 175
Pro Leu Pro Pro Phe Lys Gly Phe His His His Tyr Pro Ile Ile Pro
            180                 185                 190
Pro Ile Tyr Lys Lys Pro Leu Pro Pro Pro Ser Pro Val Tyr Lys Pro
        195                 200                 205
Pro Pro Val Pro Val Asn Pro Pro Val Pro Ile Tyr Lys Pro Pro Pro
    210                 215                 220
Val Pro Val Tyr Lys Pro Pro Pro Val Pro Val Lys Pro Leu Pro Pro
225                 230                 235                 240
Pro Val Pro Ile Tyr Lys Pro Pro Pro Val Glu Lys Pro His Pro Pro
                245                 250                 255
Pro Val Pro Val Tyr Lys Pro Pro Pro Val Pro Val Tyr Lys Lys Pro
            260                 265                 270
Cys Pro Pro Pro Val Pro Val Tyr Lys Ser Pro Pro Val Pro Val Tyr
        275                 280                 285
Lys Lys Pro His Pro Pro Pro Val Pro Val Tyr Lys Lys Pro His Pro
    290                 295                 300
Pro Pro Val Pro Val Tyr Lys Lys Pro Cys Pro Pro Pro Val Pro Val
305                 310                 315                 320
Tyr Lys Ser Pro Pro Val Pro Glu Pro His Pro Pro Pro Val Pro Val
                325                 330                 335
Tyr Lys Lys Pro His Pro Pro Pro Val Pro Val Tyr Lys Lys Pro Cys
            340                 345                 350
Pro Pro Pro Val Pro Val Tyr Lys Ser Pro Pro Val Pro Glu Pro His
        355                 360                 365
Pro Pro Pro Val Pro Val His Lys Pro Pro Pro Val Pro Val Tyr Lys
    370                 375                 380
Lys Arg Val Pro Pro Pro Val Pro Ile Tyr Lys Pro Pro Pro Val Pro
385                 390                 395                 400
Val Tyr Asn Lys Pro Leu Pro Pro Pro Val Pro Val Tyr Thr Lys Pro
                405                 410                 415
Leu Pro Pro Pro Val Pro Thr Tyr Lys Pro Lys Pro Leu Pro Pro Ile
           420                 425                 430
Pro Tyr Lys Pro Leu Pro Pro Leu Pro Lys Ile Pro Pro Phe Pro Lys
       435                 440                 445
Lys Pro Cys Pro Pro Leu Pro Lys Leu Pro Pro Leu Pro Lys Ile Pro
    450                 455                 460
Pro Lys Tyr Phe His His His Pro Pro Leu Pro Lys Leu Pro Pro Leu
465                 470                 475                 480
Pro Lys Ile Pro Pro Lys Tyr Phe His His His Pro Lys Phe Gly Lys
                485                 490                 495
Trp Pro Ser Leu Pro Pro Phe Ala Pro His His Pro
            500                 505

Claims (32)

1.分离的多核苷酸，其包含编码具有与SEQ ID NO：26、106、107、109、110、112、114、115、118、119、122、123、124、126、95或96至少80％同源的氨基酸序列的多肽的核酸序列，其中所述的多肽能调节棉花纤维发育。
2.权利要求1的分离的多核苷酸，其中所述的核酸序列选自SEQID NO.1、2、4、5、7、9、10、16、17、20、21、22、24、25、27和13。
3.权利要求1的分离的多核苷酸，其中所述的多肽如SEQ ID NO.26、106、107、109、110、112、114、115、118、119、122、123、124、126、95或96所述。
4.权利要求1的分离的多核苷酸，其中所述的氨基酸序列如SEQID NO.26、106、107、109、110、112、114、115、118、119、122、123、124、126、95或96所述。
5.权利要求1的分离的多核苷酸，其中所述的棉花纤维发育包含纤维形成。
6.权利要求1的分离的多核苷酸，其中所述的棉花纤维发育包含纤维延长。
7.分离的多核苷酸，其包含与SEQ ID NO：85或91具有至少80％同一性的核酸序列，其中所述的核酸序列能调节至少一个可操作地与其连接的多核苷酸序列在胚珠内皮细胞中的表达。
8.权利要求7的分离的多核苷酸，其中所述的胚珠内皮细胞是植物纤维或毛状体的。
9.寡核苷酸，其能与权利要求1或7的分离的多核苷酸特异性地杂交。
10.包含权利要求1的分离的多核苷酸的核酸构建体。
11.包含权利要求7的分离的多核苷酸的核酸构建体。
12.权利要求10的核酸构建体，其中该核酸构建体还包含至少一个可操作地连接到分离的多核苷酸上的顺式-作用调节元件。
13.权利要求7的核酸构建体，其中所述的多核苷酸序列选自SEQ ID NO：1、2、4、5、7、9、10、16、17、20、21、22、24、25、27和13。
14.权利要求12的核酸构建体，其中所述的顺式-作用调节元件是如SEQ ID NO：74、75、85或91所述的或其功能等同物。
15.包含权利要求10和/或11的核酸构建体的转基因细胞。
16.包含权利要求10和/或11的核酸构建体的转基因植物。
17.提高纤维生产性植物的纤维质量和/或产量的方法，该方法包含，调节至少一种编码多肽的多核苷酸在纤维生产性植物中的表达水平或活性，所述多肽具有与SEQ ID NO：26、106、107、109、110、112、114、115、118、119、122、123、124、126、95或96至少80％同源的氨基酸序列，从而提高纤维生产性植物的质量和/或产量。
18.权利要求17的方法，其中所述纤维生产性植物的质量包含至少一个选自下述的参数：纤维长度、纤维强度、每单位长度的纤维重量、成熟度比率、均匀性和马克隆尼气流式纤维细度测试仪。
19.权利要求17的方法，其中所述的调节所述至少一种多核苷酸的表达或活性是上调。
20.权利要求19的方法，其中通过向棉花中导入权利要求10和/或11的核酸构建体，实现所述的上调。
21.权利要求17的方法，其中所述的调节所述至少一种多核苷酸的表达或活性是下调。
22.权利要求21的方法，其中通过基因沉默实现所述的下调。
23.权利要求22的方法，其中通过向棉花中导入权利要求9的寡核苷酸，实现所述的基因沉默。
24.权利要求17的方法，其中所述的纤维生产性植物选自棉花、丝绵树(木棉花，吉贝)、沙漠柳树、石炭酸灌木、winterfat、轻木、苎麻、洋麻、***、洛神葵、黄麻、sisal abaca和亚麻。
25.增加植物的生物量的方法，该方法包含，调节至少一种编码多肽的多核苷酸在植物中的表达水平或活性，所述多肽具有与SEQID NO：26、106、107、109、110、112、114、115、118、119、122、123、124、126、95或96至少80％同源的氨基酸序列，从而增加该植物的生物量。
26.权利要求25的方法，其中该植物是单子叶植物。
27.权利要求25的方法，其中该植物是双子叶植物。
28.鉴别参与棉花纤维发育的基因的方法，该方法包含：
(a)提供源自棉花纤维的表达的核酸序列；
(b)提供源自胚珠组织的表达的核酸序列；
(c)计算地装配(a)和(b)所述的表达的核酸序列，以产生簇；和
(d)鉴别所述簇中包含(a)和(b)的表达的核酸序列的簇，从而鉴别参与棉花纤维发育的基因。
29.权利要求28的方法，还包含，在(d)之后，鉴别在所述棉花纤维中有差异地表达的基因。
30.权利要求29的方法，其中所述的有差异地表达包含：
(a)特异性的表达；和/或
(b)表达随纤维发育的变化。
31.生产昆虫抗性植物的方法，其包含调节至少一种编码多肽的多核苷酸在植物的毛状体中的表达水平或活性，所述多肽具有与SEQID NO：26、106、107、109、110、112、114、115、118、119、122、123、124、126、95或96至少80％同源的氨基酸序列，从而生产昆虫抗性植物。
32.生产棉花纤维的方法，该方法包含：
(a)产生表达至少一种多肽的转基因棉花植物，所述多肽具有与SEQ ID NO：26、106、107、109、110、112、114、115、118、119、122、123、124、126、95或96至少80％同源的氨基酸序列；和
(b)收获所述转基因棉花植物的纤维，从而生产棉花纤维。
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