CN101928330B - 一种新的化合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种新的化合物及其应用。本发明提供的化合物，具有如式(I)所示的结构，该化合物的肽骨架六位氨基酸的苄羟基上糖基的四位羟基为直立键，该化合物通过CGMCC No.3053发酵获得。本发明提供的化合物具有良好的抗菌活性，因此对于新的抗菌药物的开发具有非常重要的意义。

Description

一种新的化合物及其应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体地说，涉及一种新的化合物及其应用。
背景技术
万古霉素是由1956年印度尼西亚土壤中分离的东方拟无枝酸菌(Amycolatopsisorientalis)发酵得到的，是临床治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistantStaphylococcus aureus，MRSA)感染的首选药物。但随着万古霉素的不断使用，金黄色葡萄球菌对万古霉素的敏感性有所下降，这将对临床抗感染治疗产生严重威胁，因此，寻找能够对耐药菌株改善活力的第二代糖肽类抗生素迫在眉睫，同时，制备可发酵生产对耐药菌株改善活力的第二代糖肽类抗生素的重组菌株也成为一个重要的研究课题，也具有同样的紧迫性。
发明内容
本申请的发明人通过对万古霉素产生菌A.orientalis HCCB10007中糖基转移酶基因进行的异源置换操作，获得了一株新的东方拟无枝酸菌菌株，并在该株东方拟无枝酸菌的发酵液中，发现了一种新的化合物。
因此，本发明的首要目的在于，提供一种新的化合物。
本发明的第二个目的在于，提供上述结构式(I)所示的化合物的制备方法。
本发明的第三个目的，提供该化合物的应用。
本发明所提供的新的化合物，具有以下式(I)所示的结构：
Figure G2009100539054D00021
其中：肽骨架六位氨基酸的苄羟基上糖基的四位羟基(-OH，如结构式中1所标示)为直立键。
根据本发明的一个实施例，所述式(I)所示的化合物通过发酵菌株CGMCCNo.3053获得。
根据本发明的一个优选实施例，所述化合物的制备方法还包括对发酵液进行分离纯化的步骤；具体地，所述分离纯化步骤如下：
以大孔弱极性树脂对滤液进行动态吸附，以含0.005％盐酸的乙醇-水溶液进行梯度洗脱，并收集乙醇∶水为6∶4的洗脱液，然后以活性炭脱色、浓缩后进行中压液相色谱层析，再以含有0.3％NaH2PO4缓冲盐的甲醇-水溶液梯度洗脱，收集主要洗脱液浓缩，最后将中压液相色谱制备得到的洗脱浓缩液用大孔弱极性树脂吸附，用含0.001％盐酸的甲醇-水溶液梯度洗脱，收集甲醇∶水为6∶4的洗脱液，脱盐。
根据本发明，对发酵液进行分离纯化前还包括对发酵液进行预处理的步骤，具体地，所述预处理步骤如下：
发酵液用HCl调pH3～4，过滤除去菌丝体。
本发明提供的式(I)所示的化合物具有良好的抗菌活性，因而可用于制备抗菌药物。
本发明提供的化合物对于多种临床致病菌都具有良好的抗菌活性，因此对于新的抗菌药物的开发具有非常重要的意义。
附图说明
图1是LYV07ww03的MS图谱。
图2是LYV07ww03的1H核磁共振波谱图。
图3是LYV07ww03的13C核磁共振波谱图。
图4是LYV07ww03的Cosy核磁共振波谱图。
图5是LYV07ww03的Noesy核磁共振波谱图。
图6是LYV07ww03的Tocsy核磁共振波谱图。
图7是LYV07ww03的Hsqc核磁共振波谱图。
图8是LYV07ww03的Hmbc核磁共振波谱图。
图9是LYV07ww03的化学结构式。
本发明所获得的工程菌已于2009年5月6日提交位于北京的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏，保藏号为CGMCC No.3053。
具体实施方式
以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。
实施例1、菌株制备
发明人通过对万古霉素产生菌A.orientalis HCCB10007中糖基转移酶基因进行的异源置换操作，即从Amycolatopsis balhimyceticus NRRL B-24207中钓取其糖基转移酶基因并通过接合转移的方法置换了万古霉素的糖基转移酶基因，从而获得了一株新菌株。
该菌株已于2009年5月6日提交位于北京的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏，保藏号为CGMCC No.3053。
实施例2、发酵培养
将CGMCC NO.3053接入种子培养基中，于28℃，220rpm培养40-48h。然后，在无菌条件下，将培养好的种子液以8％的接种量转入发酵摇瓶中，于28℃，220rpm培养115-120h，收获发酵液。
实施例3、发酵产物的分离纯化
3.1、发酵液预处理
发酵液用HCl调pH3～4，过滤除去菌丝体，收集滤液。
3.2、分离纯化
参考专利US5843437中提供的分离纯化方法，分离纯化发酵液，具体分离纯化条件如下：
以大孔弱极性树脂HP-20对滤液进行动态吸附，以含0.005％盐酸的乙醇-水溶液进行梯度洗脱，收集乙醇-水溶液(6∶4)洗脱液，然后以活性炭脱色、浓缩后进行中压液相色谱层析，再以含有0.3％NaH2PO4缓冲盐的甲醇-水溶液梯度洗脱，收集主要洗脱液浓缩，最后将中压液相色谱制备得到的洗脱浓缩液用HP-20吸附，用含0.001％盐酸的甲醇-水溶液梯度洗脱，收集甲醇∶水为6∶4的洗脱液，脱盐，干燥。
将获得的产物命名为LYV07ww03。
实施例4、LYV07ww03结构确定
将LYV07ww03进行质谱检测，结果如图1所示，根据图1所示的MS图谱，LYV07ww03的分子量为1285。
通过对LYV07ww03一维核磁共振波谱(图2～3)和二维核磁共振波谱(图4～8)进行解析，确定各碳原子和氢原子信号的化学归属，证实其结构与ChloroorienticinC(Chloroeremomycin四位氨基酸的酚羟基上的两个糖基水解脱去的产物)相似，仅在六位糖基构型上略有差异。其中，六位糖基上四位氢原子的化学位移为3.43ppm，表现为单峰，偶合常数小于4Hz，因相邻五位氢原子为直立键，则四位氢原子只能是平伏键，四位羟基是直立键，即LYV07ww03的六位糖基为万古糖胺基。
根据解析结果，获得LYV07ww03的化学结构式，具体如图9所示，其中，LYV07ww03的肽骨架六位氨基酸的苄羟基上糖基的四位羟基(-OH，如结构式中1所示)为直立键。
经检索，在现有技术中未见有该化合物的报道，即LYV07ww03为一种新的化合物。
实施例5、LYV07ww03抗菌活性测定
参考《中华人民共和国药典》(2005年版)中提供的方法，检测LYV07ww03的抗菌活性，其中，使用的菌株及LYV07ww03对所述菌株的抗菌剂量如表1所示。
表1、检测用菌株及LYV07ww03的抗菌活性
  #   测试用菌株性质   LYV07ww03(MIC值)
  1   耐万古霉素肠球菌   128μg/ml
  2   耐万古霉素肠球菌   64μg/ml
  3   肠球菌   0.5μg/ml
  4   MRSA   0.5μg/ml
  5   MRSA   0.25μg/ml
  6   MRSA   0.5μg/ml
  7   MRSA   1μg/ml
  8   MRSA   0.5μg/ml
  9   MRSA   0.5μg/ml
  10   MRSA   0.5μg/ml
  11   MRSA   0.5μg/ml
  12   MRSA   0.5μg/ml
  13   MRSA   0.5μg/ml
  14   MRSA   0.5μg/ml
根据表1的结果，本发明提供的式(I)所示的化合物(LYV07ww03)对于多种临床致病菌都具有良好的抗菌活性。
综上所述，本发明提供的式(I)所示的化合物对于多种临床致病菌都具有良好的抗菌活性，因此可用于制备抗菌药物，具有广阔的开发应用前景。

Claims (7)

1.一种化合物，其特征在于，所述化合物具有式(I)所示的结构：
Figure FSB00001090581400011
其中：所述化合物的肽骨架六位氨基酸的苄羟基上糖基的四位羟基为直立键。
2.如权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征在于，所述化合物通过CGMCC No.3053发酵获得，所述方法还包括对发酵液进行分离纯化的步骤，所述分离纯化步骤如下：
以大孔弱极性树脂对滤液进行动态吸附，以含0.005％盐酸的乙醇-水溶液进行梯度洗脱，并收集乙醇∶水为6∶4的洗脱液，然后以活性炭脱色、浓缩后进行中压液相色谱层析，再以含有0.3％NaH2PO4缓冲盐的甲醇-水溶液梯度洗脱，收集主要洗脱液浓缩，最后将中压液相色谱制备得到的洗脱浓缩液用大孔弱极性树脂吸附，用含0.001％盐酸的甲醇-水溶液梯度洗脱，收集甲醇∶水为6∶4的洗脱液，脱盐。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述大孔弱极性树脂为HP-20。
4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述脱盐步骤后还包括干燥步骤。
5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在对发酵液进行分离纯化前还包括对发酵液进行预处理的步骤。
6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述预处理步骤如下：
发酵液用HCl调pH3～4，过滤除去菌丝体。
7.如权利要求1所述的化合物用于制备抗菌药物的应用。
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