CN101921250A - 一种没药烷型倍半萜衍生物及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种bisabolane倍半萜衍生物及其制备方法和作为抗菌药物的应用。制备时先在菌种培养基中对中国南海柳珊瑚Dichotella gemmacea内生真菌Aspergillus sp.进行菌种培养,再在发酵培养基中进行发酵培养,将发酵产生的液体过滤,除掉菌体,所得发酵液用有机溶剂萃取;萃取液浓缩后进行柱层析或薄层层析色谱分离,将所得洗脱液浓缩,得无色晶体,即为bisabolane倍半萜衍生物。本发明的bisabolane倍半萜衍生物具有抑制病原菌活性,可用作抗菌药物,并且原料可以进行大规模生产,应用前景广阔。
Description
技术领域
本发明涉及一种从中国南海柳珊瑚Dichotella gemmacea内生真菌Aspergillussp.的培养液中提取分离的bisabolane倍半萜衍生物asperginoid A及其制备方法和作为抗菌药物的应用。
背景技术
自从1929年从陆地微生物中制备出青霉素以来,微生物次级代谢产物已成为药物的丰富来源,绝大多数临床应用的抗生素都来源于真菌和细菌。微生物中的活性次级代谢产物还有其他的药用价值,如抗肿瘤,治疗心脑血管疾病,酶抑制剂等。海洋微生物的生活环境与陆生微生物相比迥然不同,特别是高压、高盐度、贫营养、低温、低光照、缺氧等特殊环境因素决定了海洋微生物发展出独特的代谢方式,也提供了陆生微生物无法提供的活性次级代谢产物,海洋微生物被认为是高新颖性化学结构和药物先导化合物重要的潜在资源,人们对从海洋微生物中寻找新的特效药物寄于极大希望。
发明内容
本发明的目的在于提供一种来源于中国南海柳珊瑚D.gemmacea内生真菌Aspergillus sp.的培养液中提取分离的bisabolane倍半萜衍生物及其制备方法和作为抗菌药物的应用,它能满足现有技术的上述需求。
一种bisabolane倍半萜衍生物,其特征在于分子式为C16H22O4,结构式为
上述bisabolane倍半萜衍生物的制备方法,其特征在于先在菌种培养基中对中国南海柳珊瑚D.gemmacea内生真菌Aspergillus sp.进行菌种培养,再在发酵培养基中发酵培养,将发酵产生的液体过滤,除掉菌体,所得发酵液用有机溶剂萃取;萃取液浓缩后进行柱层析或薄层层析色谱分离,将所得洗脱液浓缩, 得无色晶体,即为bisabolane倍半萜衍生物。
上述的bisabolane倍半萜衍生物在制备抗菌药物中的应用。
本发明的bisabolane倍半萜衍生物具有抑制病原菌活性,可用作抗菌药物,并且原料可以进行大规模生产,应用前景广阔。
具体实施方式
制备本发明的化合物时,采取下述各步骤:
(1)先在菌种培养基中对中国南海柳珊瑚D.gemmacea内生真菌Aspergillus sp.进行菌种培养,所用的培养基含有葡萄糖1.0%(重量百分数,下同)、酵母膏0.1%、蛋白胨0.2%、琼脂1.0%、氯化钠0.3%,其余为水。使用时将其制成试管斜面,上述真菌菌株在30℃下培养5天。
所述的菌种培养基含有葡萄糖0.1%-5.0%、酵母膏0.01%-1%、蛋白胨0.01%-1%、琼脂0.1%-3.0%、氯化钠0.05%-5%,其余为水。培养温度为15-35℃,培养时间为3-10天。
(2)上述培养所得的真菌菌种进行发酵培养,所用的发酵培养基含有葡萄糖1.0%、酵母膏0.1%、蛋白胨0.2%、氯化钠0.3%,其余为水。真菌菌株于28℃培养30天。
所述的发酵培养基含有葡萄糖0.1%-5.0%、酵母膏0.01%-1%、蛋白胨0.01%-1%、氯化钠0.05%-5%,其余为水。培养温度为15-35℃,培养时间为7-40天。
(3)化合物asperginoid A的提取分离
将前一步骤发酵产生的液体过滤,除去菌体;所得发酵液用有机溶剂乙酸乙酯萃取5次,将所得萃取液合并浓缩后,进行柱层析或薄层层析色谱分离,将洗脱液浓缩得无色晶体,即为asperginoid A。
所述的有机溶剂乙酸乙酯可改用正丁醇或氯仿或二氯甲烷。
化合物asperginoid A的质谱数据
EI MS:278[M]+(59),263(37),260(46),245(42),231(29),217(100),203(52),195(62),192(51),189(32),179(37),173(29),161(23),145(17),131(14),69(32)。HREIMS m/z[M]+ 278.1500(C16H22O4,理论值278.1513)。
化合物asperginoid A的核磁共振数据
化合物asperginoid A的晶体数据
晶体为三斜晶系,空间群为P-1, α=87.266(2)°,β=77.823(2)°,γ=76.502(2)°,C16H22O4,Mr=278.34, Z=2,Dc=1.226g/cm3,F(000)=300,μ=0.087mm-1,the final R=0.0461 and wR=0.1095 for 5811 observed reflections(I>2σ(I)).
本实施例制得的化合物asperginoid A的结构式为:
本发明的化合物在制备抗菌药物中的应用
本发明的化合物的抗菌活性试验
抑菌圈的测定:
测试菌用灭菌双蒸水配成约105个/mL的菌悬液,用细菌涂布棒在LB平板
(细菌测试菌,真菌测试菌则用SBD平板,每板15ml培养基)上涂布均匀。用无菌打孔器(直径6mm)在上述4种测试菌的平板上打孔,用无菌移液管在每孔中加入40μl待测溶液或40μl空白对照溶液,细菌于37℃(真菌28℃)恒温箱中倒置培养,2d后观察培养结果,测量抑菌圈直径。样品均用二甲基亚砜(DMSO)溶解,纯DMSO作空白对照。
最小抑菌浓度(MIC)的测定:
最小抑菌浓度(MIC)的测定采样液体二倍稀释法。挑取一满环新鲜斜面菌体(细菌)于Luria-Bertani(LB)培养液中,30℃下采用130rpm/min振荡培养过夜,再用新鲜的LB培养液适当稀释,使菌悬液为105个/mL左右;真菌采用SBD培养液,孢子悬液浓度为104个/mL左右。
将带盖试管(100×15mm)于121℃灭菌30min后,在每支试管中先加入0.9mL上述制备好的菌悬液,再加0.1mL不同浓度的测试样品溶液,每组另取一支加入0.1mL灭菌双蒸水作为对照,充分混匀。金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌于37℃恒温箱中静置培养,尖孢镰刀菌则在28℃恒温箱中静置培养,2天 后记录生长情况。
样品最小抑菌浓度(MIC)终点的判定:金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌以对照管在管底出现明显沉淀,而含测试样品试管中无明显生长的最低样品浓度为对该菌的最小抑菌浓度。尖孢镰刀菌则以在对照管中出现明显的菌丝球,而含测试样品试管培养液中无明显生长的菌丝体的最低样品浓度为对该菌的最小抑菌浓度。
实验表明,本发明的asperginoid A对所测试的金黄色葡萄球菌Staphyococcus aureus ATCC27154、大肠埃希氏菌Escherichia coli ATCC 25922和尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum f.sp.cubense具有明显的抑制活性,因此可作为抗菌药物,并且原料可以进行大规模生产,应用前景广阔。
Claims (6)
2.权利要求1所述的bisabolane倍半萜衍生物的制备方法,其特征在于先在菌种培养基中对中国南海柳珊瑚Dichotella gemmacea内生真菌Aspergillus sp.进行菌种培养,再在发酵培养基中发酵培养,将发酵产生的液体过滤,除掉菌体,所得发酵液用有机溶剂萃取;萃取液浓缩后进行柱层析或薄层层析色谱分离,将所得洗脱液浓缩,得无色晶体,即为bisabolane倍半萜衍生物。
3.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于所述的菌种培养基含有葡萄糖0.1%-5.0%、酵母膏0.01%-1%、蛋白胨0.01%-1%、琼脂0.1%-3.0%、氯化钠0.05%-5%,其余为水。
4.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于所述的发酵培养基含有葡萄糖0.1%-5.0%、酵母膏0.01%-1%、蛋白胨0.01%-1%、氯化钠0.05%-5%,其余为水。
5.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于所述的有机溶剂为乙酸乙酯、正丁醇、氯仿或二氯甲烷。
6.权利要求1所述的bisabolane倍半萜衍生物在制备抗菌药物中的应用。
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