CN102311466A - 一种从车前子中提取苯乙醇苷类活性成分的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从车前子中提取苯乙醇苷类活性成分的方法，本发明所述方法采用溶剂提取，经色谱方法精制，得到提取物；所制得的提取物中有效成分苯乙醇苷类总含量在50％以上，方法简单，适合于工业化生产，具有工业应用前景。
Description
技术领域
本发明属于天然药物技术领域，具体涉及一种从车前子中提取苯乙醇苷类活性成分的方法。
背景技术
车前子(Semenplantaginis)是我国传统药材之一，又名当道、牛遗、蛤蟆衣，此外，还有称车前菜、牛舌草、车轮菜、猪耳草等，始见于《诗经》，药用始载于《神农本草经》，并被列为药中上品。
车前子为车前科植物平车前(Plantago depressa Willd.)，又称小粒车前或车前(Plantago asiatica Linn.)，又称大粒车前的干燥种子，在全国各地均有分布，资源广泛。具有利水通淋、渗湿止泻、清肝明目、清热化痰的作用。车前子中含大量粘液质(多糖类化合物)(参见Tomoda Masashi，Yokoi Maemi，Ishikawa Kazuyo.Plant Mucilages.XXIX.[J].asiatica.J.Chen Pharm Bull，1981，29(10)：2884-2887.以及ohn F Kennedy，Jasbir S Sandhu，David A T.Southgate.[J].Carbohydrate Research，1979，75：265-274.)及车前子酸、胆碱、腺嘌呤、琥珀酸、蛋白质、微量元素等。含有黄酮类化合物：主要有木犀草素、高车前苷、车前苷等。三萜类化合物：主要有熊果酸、齐墩果酸等。挥发油：主要有2，6-二叔丁基对甲酚和3-叔丁基-4-羟基茴香醚等；环烯醚苷类化合物如：桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸；苯乙醇苷类化合物：毛蕊花糖苷等(参见王劭华，罗光明等.中药车前子的化学成分及药理学研究进展.亚太传统医药，2008，9(9)，133-135.)。其中最具有开发前景的活性部位之一的就是苯乙醇苷类化合物，包含毛蕊花糖苷等。
现代研究表明，苯乙醇苷类化合物(phenylethanoid glycosides)是一类含有(羟基、甲氧基)取代苯乙基和(羟基、甲氧基)取代肉桂酰基，通常以B一葡萄糖为母核的含有酯键及氧苷键的天然糖苷，广泛存在于双子叶植物中，生物活性很强，受到植物化学及药学工作者的高度重视。近年来许多研究表明，该类化合物具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、免疫调节、增强记忆、保肝、强心等作用(参见靖会，佐建锋等.时珍国医国药.2006，17(3)：440-441)。
车前子在全国各地均有分布，来源广泛，价格低廉，药材中含量较高，从车前子提取苯乙醇苷类活性具有广阔的市场前景。车前子成分复杂，很多化合物结构和性质相近，因此，从车前子中提取苯乙醇苷类活性成分的提取分离较为困难，收率很低。
发明内容
本发明的发明目的是提供一种从车前子中提取苯乙醇苷类活性成分的方法，所得提取物中苯乙醇苷类成分质量百分含量在50％以上。
本发明提供的从车前子中提取苯乙醇苷类活性成分的方法，包括以下步骤：
步骤1：将车前子粉碎，用第一极性溶剂提取1-4次或回流提取或超声提取或冷浸或渗漉提取，抽滤出提取液；提取液离心或抽滤，分离出上清液；所述第一极性溶剂是0-100％C1-C6烷基醇的水溶液、丙酮、丙酮与水的混合溶液或含酸或碱的上述溶剂；
步骤2：将上清液混合于硅胶或硅藻土后或者直接将上清液用色谱进行精制，洗脱溶剂洗脱，收集富含苯乙醇苷类化合物的流份，浓缩干燥，得所述车前子提取物，所述车前子提取物中苯乙醇苷类活性成分的质量百分含量在50％以上，优选为50％-95％；其中所述色谱为大孔吸附树脂色谱、聚酰胺色谱、正相硅胶或反相硅胶色谱或其组合。
作为优选，步骤1所述第一极性溶剂是50-95％C1-C6烷基醇的水溶液、丙酮、丙酮与水的混合溶液或含酸或碱的上述溶剂，所述酸或碱为强酸、强碱或弱酸、弱碱，优选为0.5％HCL、1％醋酸、0.5％NaOH、或1％的Na2CO3，所述含酸或碱的上述溶剂优选为含0.5％HCL、1％醋酸、0.5％NaOH、或1％的Na2CO3的50-95％C1-C6烷基醇的水溶液、丙酮或丙酮与水的混合溶液。
作为优选，所述C1-C6烷基醇为甲醇、乙醇、异丙醇或正丁醇或它们组成的混合溶剂。
作为优选，步骤2所述洗脱溶剂为水，C1-C6烷基醇，卤代烃，醚类溶剂，酮类溶剂，酯类溶剂，以及其两种以上组成的混合溶剂。
作为优选，步骤2所述洗脱溶剂为选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、二氯甲烷、三氯甲烷、***、甲基叔丁醚、丙酮、2-丁酮、乙酸乙酯、甲酸乙酯。更优选所述洗脱溶剂为三氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇、甲醇和水组成的混合溶剂。
用色谱进行精制，当所述色谱为大孔吸附树脂色谱，优选洗脱溶剂为水和10-75％的乙醇或甲醇水溶液，提取物中苯乙醇苷类成分总含量在50％-60％；所述色谱为聚酰胺色谱，优选洗脱溶剂为水和10-75％的乙醇或甲醇水溶液，提取物中苯乙醇苷类成分总含量在50％-60％；所述色谱为反相硅胶色谱，优选洗脱溶剂为水和10-50％的乙醇水溶液或甲醇水溶液，提取物中苯乙醇苷类成分总含量在70％-95％；所述色谱为正相硅胶，优选洗脱溶剂为三氯甲烷、乙酸乙酯、90-100％乙醇水溶液、甲醇或其组成的混合溶剂，提取物中苯乙醇苷类成分总含量在60％-80％。
在本发明的具体实施方式中，大孔树脂选自HP-20型大孔树脂或AB-8型大孔树脂，用乙醇水溶液梯度洗脱，富含苯乙醇苷成分存在于30％乙醇的洗脱液中；用聚酰胺柱进行精制时，富含苯乙醇苷成分存在于50％乙醇的洗脱液中，这与不同层析柱的填充物的理化特性相关。
作为优选，步骤1所述用第一极性溶剂提取为每次加4-20BV的第一极性溶剂在0℃至溶剂回流的温度下提取。
作为优选，步骤1提取液在分离上清前进行浓缩处理，优选浓缩为至提取液与车前子原料的体积质量比以ml/g计为0.1-1∶10-1。
作为优选，步骤1所述提取温度范围为室温至溶剂回流的温度。
本发明提供的从车前子中提取苯乙醇苷类活性成分的方法，所得提取物中苯乙醇苷类成分总含量在50％以上，且检测到含有毛蕊花糖苷及其衍生物成分，毛蕊花糖苷结构如下所示：
所述制备方法中，苯乙醇苷总含量通过紫外(UV)方法检进行测，富含毛蕊花糖苷的流份是通过薄层层析(TLC)、紫外(UV)、高压液相色谱(HPLC)等方法检测的，其中优选HPLC检测方法。
本发明公开了一种从车前子中提取苯乙醇苷类活性成分的方法，本发明所述方法采用溶剂提取，经色谱方法精制，得到提取物；所制得的提取物中有效成分苯乙醇苷类总含量在50％以上，大孔吸附树脂精制法工艺简单，适合于工业化生产，具有工业应用前景。
具体实施方式
本发明公开了一种从车前子中提取苯乙醇苷类活性成分的方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。
实施例1：
(1)提取：车前子粉碎，过20目筛，称取1000g采用超声波提取，以10倍的液固比加入70％乙醇，超声(频率80KHz)提取30min，重复提取3次，抽滤，合并提取液，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。
(2)精制：将上述滤液以0.5BV/h的流速加入到经预处理过的HP-20型大孔树脂柱中，用水、5％、30％和75％浓度的乙醇依次梯度洗，HPLC检测，收集富含苯乙醇苷类化合物的洗脱液(30％乙醇洗脱部分)，浓缩至稠膏，真空干燥，得到车前子总苯乙醇苷类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中苯乙醇苷类化合物含量为54％。
实施例2：
(1)提取：车前子粉碎，过20目筛，称取1000g用70％乙醇加热回流提取，每次以4倍的液固比加入70％乙醇，第一次回流2h，第二次和第三次回流1h。抽滤，合并提取液，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。
(2)精制：将上述滤液以1BV/h的流速加入到经预处理过的AB-8型大孔树脂柱中，用水、5％、30％和75％浓度的乙醇依次梯度洗，HPLC检测，收集富含苯乙醇苷类的30％乙醇部分，浓缩至浸膏，真空干燥，得到车前子总苯乙醇苷类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中苯乙醇苷类化合物含量为51％。
实施例3：
(1)提取：将车前子用水蒸气软化，烘干，粉碎，过筛，称取处理后的车前子粉末1000g，采用水煎提取，以40倍的液固比加入去离子水，每次提取2h，重复处理3次，将提取液过滤，合并，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。
(2)精制：以1BV/h的流速将上述滤液加入到经预处理过的聚酰胺的柱中，用水、10％、50％和75％浓度的乙醇依次梯度洗，HPLC检测，收集富含苯乙醇苷类的50％乙醇洗脱部分，减压浓缩、真空干燥得到车前子总苯乙醇苷类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中苯乙醇苷类化合物含量为52％。
实施例4：
(1)提取：将车前子粉碎，过20目筛，称取1000g加入60％乙醇室温浸提4次，每次24.0h。合并提取液，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。
(2)精制：将上述待上柱滤液以2BV/h的流速加入到预处理过的ADS-8柱上，用以1BV/h流速用水洗脱，再用10％、30％和70％浓度的醇溶液洗脱，HPLC检测，收集富含苯乙醇苷类的30％洗脱部分，减压浓缩，真空干燥即得车前子提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中苯乙醇苷类化合物含量为51％。
实施例5：
(1)提取：车前子粉碎，过20目筛，称取1000g采用60％乙醇(含0.5％NaOH)加热回流提取4次，每次以10倍的液固比加入60％乙醇(含0.5％NaOH)，第一次回流2h，后三次回流1h。抽滤，合并提取液，回收乙醇并浓缩至浸膏。
(2)精制：将浓缩膏与硅胶拌样，通过正相硅胶(100-200目)柱，先用乙酸乙酯-甲醇(10∶1)洗脱，再用乙酸乙酯-甲醇(5∶1)和乙酸乙酯-甲醇(1∶1)洗脱，收集富含富含苯乙醇苷类的(乙酸乙酯∶甲醇为10∶1)流份，减压浓缩，真空干燥即得车前子苯乙醇苷类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中苯乙醇苷类化合物含量为76％。
实施例6：
(1)提取：车前子粉碎，过20目筛，称取1000g采用超声波提取，以10倍的液固比加入60％甲醇，在温度60℃，频率为80KHz时超声提取30min，重复提取4次，抽滤，合并提取液，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。
(2)精制：将上述待上柱滤液以3BV/h的流速加入到预处理过的聚酰胺柱上，用以1BV/h流速用水洗脱，再用5％、30％和70％浓度的醇溶液洗脱，HPLC检测，收集富含苯乙醇苷类的30％洗脱部分，减压浓缩，真空干燥即得车前子苯乙醇苷类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中苯乙醇苷类化合物含量为51％。
实施例7：
(1)提取：将车前子粉碎，过20目筛，称取1000g加入95％乙醇室温浸提2次，每次24.0h。合并提取液，回收乙醇并浓缩至浸膏。
(2)精制：浸膏硅胶拌样，通过正相硅胶(100-200目)色谱柱，氯仿-甲醇(9∶1)洗脱后，再用氯仿-甲醇(3∶1)和氯仿-甲醇(1∶1)洗脱，HPLC检测，收集富含苯乙醇苷类化合物的流份(氯仿-甲醇比为9∶1部分)，减压浓缩，干燥得车前子苯乙醇苷类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中苯乙醇苷类化合物含量为76％。
实施例8：
(1)提取：车前子粉碎，过20目筛，称取1000g采用超声波提取，以10倍的液固比加入丙酮，在温度60℃，频率为80KHz时超声提取30min，重复提取2次，抽滤，合并提取液，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。
(2)精制：将滤液用正丁醇萃取，回收溶剂得正丁醇萃取物；萃取物过反相硅胶(C-18)柱，水和10％乙醇，30乙醇，70％乙醇溶液洗脱，HPLC检测，收集富含苯乙醇苷类化合物的30％流份，减压浓缩，干燥得车前子苯乙醇苷类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中苯乙醇苷类化合物含量为92％。
实施例9：
(1)提取：车前子粉碎，过20目筛，称取1000g采用70％异丙醇加热回流提取，以20倍的液固比加入70％异丙醇，回流提取1次。抽滤，合并提取液，回收乙醇并浓缩至800ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。
(2)精制：将浓缩液通过反相硅胶(C-18)柱，水和10％甲醇溶液洗脱后，再用50％浓度的甲醇溶液洗脱，HPLC检测，收集富含苯乙醇苷类化合物的50％流份，减压浓缩，干燥得车前子苯乙醇苷类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中苯乙醇苷类化合物含量为82％。
实施例10：
(1)提取：将车前子粉碎，过20目筛，称取1000g加入50％丙酮室温浸提3次，每次24.0h。合并提取液，回收乙醇并浓缩至浸膏。
(2)精制：浸膏硅胶拌样，通过正相硅胶(100-200目)色谱柱，氯仿-95％乙醇(20∶1)洗脱后，再用氯仿-95％乙醇(5∶1)和氯仿-95％乙醇(1∶1)洗脱，HPLC检测，收集富含苯乙醇苷类化合物的流份(氯仿-95％乙醇比为20∶1部分)，减压浓缩，干燥得车前子苯乙醇苷类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中苯乙醇苷类化合物含量为73％。
实施例11：
(1)提取：车前子粉碎，过20目筛，称取1000g采用50％乙醇加热回流提取，以10倍的液固比加入50％乙醇，回流提取3次。抽滤，合并提取液，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。
(2)精制：将上述待上柱滤液以0.5BV/h的流速加入到预处理过的D101柱上，用以1BV/h流速用水洗脱，再用5％、30％和70％浓度的醇溶液洗脱，HPLC检测，收集富含苯乙醇苷类化合物的30％洗脱部分，减压浓缩，真空干燥即得车前子苯乙醇苷类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中苯乙醇苷类化合物含量为51％。
实施例12：
(1)提取：车前子粉碎，过20目筛，称取1000g采用超声波提取，以10倍的液固比加入50％乙醇(含1％醋酸)，在温度60℃，频率为80KHz时超声提取30min，重复提取3次，抽滤，合并提取液，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。
(2)精制：浸膏硅胶拌样，通过正相硅胶(100-200目)色谱柱，乙酸乙酯-95％乙醇(15∶1)洗脱后，再用乙酸乙酯-95％乙醇(3∶1)和乙酸乙酯-95％乙醇(1∶1)洗脱，HPLC检测，收集富含苯乙醇苷类化合物的流份(氯仿-95％乙醇比为15∶1部分)，减压浓缩，干燥得车前子苯乙醇苷类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中苯乙醇苷类化合物含量为76％。
实施例13：
(1)提取：将车前子粉碎，过20目筛，称取1000g加入20倍去离子水室温浸提3次，每次24.0h。合并提取液，浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。
(2)精制：将上述滤液以0.5BV/h的流速加入到预处理过的HPD-100柱上，用以1BV/h流速用水洗脱，再用5％、30％和75％浓度的甲醇溶液洗脱，HPLC检测，收集30％甲醇洗脱部分，减压浓缩，真空干燥即得车前子苯乙醇苷类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中苯乙醇苷类化合物含量为52％。
实施例14：
(1)提取：将车前子粉碎，过20目筛，称取1000g采用水煎提取，以40倍的液固比加入去离子水，每次提取1h，重复处理3次，将提取液过滤，合并，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。
(2)精制：以1BV/h的流速将上述滤液加入到经预处理过的AB-8型大孔吸附树脂，用水、10％、30％和70％浓度的甲醇依次梯度洗，HPLC检测，收集富含苯乙醇苷类的30％甲醇洗脱部分，减压浓缩、真空干燥得到车前子总苯乙醇苷类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中苯乙醇苷类化合物含量为50％。
实施例15：
(1)提取：车前子粉碎，过20目筛，称取1000g采用去离子水超声波提取，以20倍的液固比加入去离子水，在温度30℃，频率为80KHz时超声提取30min，重复提取3次，抽滤，合并提取液，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。
(2)精制：上述滤液用甲酸乙酯萃取，回收溶剂得甲酸乙酯提取物。将甲酸乙酯提取物用水溶解，将滤液以0.5BV/h的流速通过反相硅胶柱(C-18)，用水和10％醇溶液洗脱后，再用50％浓度的醇溶液洗脱，HPLC检测，收集富含苯乙醇苷类的50％流份，减压浓缩，真空干燥即得车前子苯乙醇苷类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中苯乙醇苷类化合物含量为85％。
实施例16：
(1)提取：将车前子粉碎，过20目筛，称取1000g加入20倍的30％乙醇(含1％NaCO3)室温浸提2次，每次24.0h。合并提取液，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。
(2)精制：将上述待上柱滤液以0.5BV/h的流速加入到预处理过的D101柱上，用以1BV/h流速用水洗脱，再用5％、30％和70％浓度的甲醇溶液洗脱，HPLC检测，收集30％甲醇洗脱部分，减压浓缩，真空干燥即得车前子苯乙醇苷类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中苯乙醇苷类化合物含量为54％。
实施例17：
(1)提取：车前子粉碎，过20目筛，称取1000g采用30％乙醇加热回流提取，以15倍的液固比加入30％乙醇，回流提取3次。抽滤，合并提取液，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。
(2)精制：将滤液用正丁醇萃取，回收溶媒正丁醇，浓缩膏与硅胶拌样，通过正相硅胶(100-200目)柱，甲酸乙酯-95％乙醇(15∶1)洗脱后，再用甲酸乙酯-95％乙醇(4∶1)和甲酸乙酯-95％乙醇(1∶1)梯度洗脱，收集富含的苯乙醇苷类(甲酸乙酯-95％乙醇为15∶1)流份，减压浓缩，真空干燥即得车前子苯乙醇苷类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中苯乙醇苷类化合物含量为78％。
实施例18：
(1)提取：车前子粉碎，过20目筛，称取1000g采用超声波提取，以15倍的液固比加入30％乙醇，在温度60℃，频率为80KHz时超声提取30min，重复提取3次，抽滤，合并提取液，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。
(2)精制：将上述滤液以0.5BV/h的流速加入到经预处理过的AB-8型大孔树脂柱中，用水、10％、30％和75％浓度的乙醇依次梯度洗，HPLC检测，收集富含苯乙醇苷类的洗脱液(30％乙醇洗脱部分)，浓缩至稠膏，真空干燥，得到车前子总苯乙醇苷类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中苯乙醇苷类化合物含量为51％。
实施例19：
(1)提取：车前子粉碎，过20目筛，称取1000g采用45％乙醇加热回流提取，以15倍的液固比加入45％乙醇，回流提取3次。抽滤，合并提取液，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。
(2)精制：以1BV/h的流速将上述滤液加入到经预处理过的HP-20的柱中，用水、10％、30％和75％浓度的甲醇依次梯度洗，收集富含的苯乙醇苷类(30％甲醇)流份，减压浓缩，真空干燥即得车前子苯乙醇苷类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中苯乙醇苷类化合物含量为55％。
实施例20：
(1)提取：车前子粉碎，过20目筛，称取1000g采用超声波提取，以15倍的液固比加入45％乙醇，在温度30℃，频率为80KHz时超声提取30min，重复提取3次，抽滤，合并提取液，回收乙醇并浓缩至浸膏状，加蒸馏水超声溶解，抽滤，滤液用正丁醇萃取，回收溶媒正丁醇，得正丁醇萃取物。
(2)精制：正丁醇萃取物用蒸馏水溶解，滤过，滤液以0.5BV/h的流速通过反相硅胶柱(C-18)，用水和10％甲醇溶液洗脱后，再用50％浓度的甲醇溶液洗脱，HPLC检测，收集富含苯乙醇苷类的50％甲醇流份，减压浓缩，真空干燥即得车前子苯乙醇苷类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中苯乙醇苷类化合物含量为82％。
实施例21：
(1)提取：车前子粉碎，过20目筛，称取1000g采用超声波提取，以10倍的液固比加入70％乙醇，超声(频率80KHz)提取30min，重复提取3次，抽滤，合并提取液，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。
(2)精制：将上述滤液以0.5BV/h的流速加入到经预处理过的HP-20型大孔树脂柱中，用水、5％、30％和75％浓度的乙醇依次梯度洗，HPLC检测，收集富含苯乙醇苷类化合物的洗脱液(30％乙醇洗脱部分)，浓缩，浓缩液通过反相硅胶(C-18)柱，水和10％甲醇溶液洗脱后，再用50％浓度的甲醇溶液洗脱，HPLC检测，收集富含苯乙醇苷类化合物的50％流份，减压浓缩，干燥得车前子苯乙醇苷类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中苯乙醇苷类化合物含量为92％。
实施例22：
(1)提取：车前子粉碎，过20目筛，称取1000g采用超声波提取，以10倍的液固比加入60％甲醇，在温度60℃，频率为80KHz时超声提取30min，重复提取4次，抽滤，合并提取液，回收乙醇并浓缩至1000ml，冷却至室温，静置24h，离心甩滤，得澄清滤液。
(2)精制：将上述待上柱滤液以3BV/h的流速加入到预处理过的聚酰胺柱上，用以1BV/h流速用水洗脱，再用5％、30％和70％浓度的醇溶液洗脱，HPLC检测，收集富含苯乙醇苷类的30％洗脱部分，减压浓缩，浓缩液通过正相硅胶(100-200目)柱，先用乙酸乙酯-甲醇(10∶1)洗脱，再用乙酸乙酯-甲醇(5∶1)和乙酸乙酯-甲醇(1∶1)洗脱，收集富含富含苯乙醇苷类的(乙酸乙酯∶甲醇为10∶1)流份，减压浓缩，真空干燥即得车前子苯乙醇苷类提取物。经过紫外(UV)方法测定，其中苯乙醇苷类化合物含量为86％。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (13)
1.一种从车前子中提取苯乙醇苷类活性成分的方法，包括以下步骤：
步骤1：将车前子粉碎，用第一极性溶剂提取1-4次或回流提取或超声提取或冷浸或渗漉提取，抽滤出提取液；提取液离心或抽滤，分离出上清液；所述第一极性溶剂是0-100％C 1-C6烷基醇的水溶液、丙酮、丙酮与水的混合溶液或含酸或碱的上述溶剂；
步骤2：将上清液混合于硅胶或硅藻土后或者直接将上清液用色谱进行精制，洗脱溶剂洗脱，收集富含苯乙醇苷类化合物的流份，浓缩干燥，制得车前子提取物，所述车前子提取物中苯乙醇苷类活性成分的质量百分含量在50％以上；其中所述色谱为大孔吸附树脂色谱、聚酰胺色谱、正相硅胶或反相硅胶色谱或其组合。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一极性溶剂为50-95％C 1-C6烷基醇的水溶液、丙酮、丙酮与水的混合溶液或含酸或碱的上述溶剂。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述C1-C6烷基醇为甲醇、乙醇、异丙醇或正丁醇或它们组成的混合溶剂。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述洗脱溶剂为水，C1-C6烷基醇，卤代烃，醚类溶剂，酮类溶剂，酯类溶剂，以及其两种以上组成的混合溶剂。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述洗脱溶剂为选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、二氯甲烷、三氯甲烷、***、甲基叔丁醚、丙酮、2-丁酮、乙酸乙酯、甲酸乙酯。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述洗脱溶剂为三氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇、甲醇和水组成的混合溶剂。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱为大孔吸附树脂色谱，洗脱溶剂为水和10-75％的乙醇或甲醇水溶液。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱为聚酰胺色谱，洗脱溶剂为水和10-75％的乙醇水溶液或甲醇水溶液。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱为反相硅胶色谱，洗脱溶剂为水和10-50％的乙醇水溶液或甲醇水溶液。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱为正相硅胶，洗脱溶剂为三氯甲烷、乙酸乙酯、90-100％乙醇水溶液、甲醇或其组成的混合溶剂。
11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1所述用第一极性溶剂提取为每次加4-20BV的第一极性溶剂在0℃至溶剂回流的温度下提取。
12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1提取液在分离上清前进行浓缩处理，优选浓缩为至提取液与车前子原料的体积质量比以ml/g计为0.1-1∶10-1。
13.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，步骤1所述用第一极性溶剂提取温度范围为室温至溶剂回流的温度。
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