CN101666752B - 一种糖基功能化细菌毒素分子印迹柱的制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种糖基功能化细菌毒素分子印迹柱的制备方法,包括以下步骤:选择能与细菌毒素合成糖基功能化分子印迹聚合物的糖类化合物功能单体;制备糖基功能化分子印迹聚合物溶液;利用表面修饰技术,将糖基功能化分子印迹聚合物修饰到玻璃管柱内表面上。本发明所述的检测细菌毒素的方法,是将按上述方法制得的糖基功能化分子印迹柱连接到化学发光分析仪,将化学发光体系溶液与样品溶液分别泵入化学发光分析仪,对样品中的细菌毒素进行检测。本发明所制备的糖基功能化细菌毒素分子印迹柱特异性强,灵敏度高,检测速度快,可在短时间内实现大量样本的高通量筛选,减少了检测成本。
Description
技术领域
本发明涉及一种糖基功能化细菌毒素分子印迹柱的制备方法,本发明还涉及采用所述的糖基功能化分子印迹柱检测样本中细菌毒素的方法,属于细菌毒素检测技术领域。
背景技术
细菌毒素主要有三种:外毒素、内毒素和非蛋白毒素。外毒素是一种典型的水溶性蛋白,是细菌在指数生长期分泌的已知可感染人类毒性最强的细菌毒素,在很低浓度时就具有很高的毒性。随着检测方法和分析技术的发展,人们发现细菌毒素几乎广泛存在于所有的食品和饲料中。因此,开发一种准确度高、特异性强、快速检测细菌毒素的方法,对食物中毒、水污染等突发事故作出快速诊断,并选择合适的应对措施,对于食品与环境控制以及国防安全都是十分重要的。细菌毒素的存在会威胁人类健康,造成社会经济损失,因此,细菌毒素的预防、去毒、解毒,尤其是快速高灵敏度的检测方法的建立显得十分重要。
细菌毒素的检测分析方法主要有生物学方法,如:动物测毒法和细胞测毒法;免疫学方法,如:有反向被动血凝实验(RPHA)、被动免疫溶血试验(PIH)、毒素与抗毒素琼脂扩散试验、放射免疫测定(RIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA);分子生物学方法,如:PCR法。这些检测方法虽然灵敏度较高,稳定性较好,但大多都有周期长,过程复杂,费时费力结果准确性等缺点。
由于大多数细菌毒素的类似物较多、新发现的细菌毒素不断增加、细菌毒素污染的普遍性和危害性被逐步认识等原因,对细菌毒素的快速高灵敏度分析方法也提出了更迫切和更高的要求。目前,限制细菌毒素检测研究的难点主要是:结构相似物较多,交叉反应普遍;毒素检测时较易受提取液中其它难于去除的干扰物质的影响等。针对当前细菌毒素危害性大、检测困难、不易预防等特点,尤其对商检和卫生防疫部门来说,更需要有一个简便、快速、灵敏的方法对细菌毒素进行检测,对其潜在危害作出判断,以促进经济发展,保障人类健康。
发明内容
针对现有技术中存在的不足,本发明提供了一种糖基功能化细菌毒素分子印迹柱的制备方法。
本发明还提供了采用所述的糖基功能化分子印迹柱检测样本中痕量细菌毒素的方法,可实现对细菌毒素简便、快速、准确的检测。
本发明是通过以下技术方案实现的:
所述的糖基功能化细菌毒素分子印迹柱的制备方法,包括以下步骤:
(1)选择能与细菌毒素合成糖基功能化分子印迹聚合物的糖类化合物功能单体;
(2)将模板分子细菌毒素、功能单体糖类化合物、交联剂、致孔剂、引发剂和有机溶剂按一定摩尔比混合均匀制成糖基功能化分子印迹聚合物溶液;
(3)利用表面修饰技术,将糖基功能化分子印迹聚合物修饰到玻璃管柱内表面上。
所述模板分子细菌毒素、功能单体糖类化合物、交联剂、致孔剂、引发剂和有机溶剂的摩尔比为0.1~2∶2.5∶0.1~5∶40~80∶0.01~0.10∶1.0~15。
所述糖类化合物功能单体为A-D-吡喃糖基甘露糖、N-乙酰糖胺、N-乙酰乳糖胺、唾液酸神经节苷脂或神经酰胺三己糖苷;所述交联剂为三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯、N、N-亚甲基二丙烯酰胺、3,5-二(丙烯酰胺)苯甲酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯、二乙烯基苯或季戊四醇三丙烯酸酯;所述引发剂为偶氮二异丁腈;所述致孔剂为二氯甲烷、氯仿、乙腈、甲醇、异丙醇、四氯化碳、N,N-二甲基酰胺或二甲基亚砜;所述有机溶剂为二氯甲烷或四氯化碳。
所述将糖基功能化分子印迹聚合物修饰到玻璃管柱内表面包括以下步骤:
(1)选用长度为5-10cm,直径为2-10mm的玻璃管柱,依次用1mol/L HNO3和1mol/LNaOH清洗,然后用双蒸水彻底清洗数次,吹干;
(2)向玻璃管柱中注入糖基功能化分子印迹聚合物溶液,填满,将玻璃管柱两端封闭,浸泡5-10min,然后将玻璃管柱中的糖基功能化分子印迹聚合物溶液排出,用洗脱剂洗脱20-30min,室温下干燥5-10min;
(3)重复步骤(2)过程4-7次,制得所述糖基功能化分子印迹柱。
为除去玻璃管柱内表面过量的糖基功能化分子印迹聚合物,本发明所述的制备方法,还包括以下步骤:将糖基功能化分子印迹柱浸入pH6.8-7.2缓冲液中,保存在4℃冰箱,12~24h后使用。
所述洗脱剂为乙腈、水、甲醇-乙酸混合液或乙腈-乙酸混合液。所述缓冲液为柠檬酸-磷酸溶液。
本发明所述的检测细菌毒素的方法,是将按上述的任意一种方法制得的糖基功能化分子印迹柱连接到化学发光分析仪,将化学发光体系溶液与样品溶液分别泵入化学发光分析仪,对样品中的细菌毒素进行检测。
所述化学发光体系溶液为鲁米诺溶液、光泽精溶液、N-溴代丁二酰亚胺溶液、Ce(IV)-SO3 2-溶液、鲁米诺-KMnO4溶液、鲁米诺-H2O2溶液、异烟肼-NaClO溶液或NaIO4-H2O2溶液。
本发明的有益效果:
1、将表面修饰技术应用到分子印迹柱的制备当中,使得的糖基功能化细菌毒素分子印迹柱的制备具有可控性,提高了柱子的检测灵敏度和准确性。
2、本发明所得到的糖基功能化细菌毒素分子印迹柱连接到化学发光分析仪用于检测细菌毒素,可以实现样本中细菌毒素的高特异性、高灵敏度、快速检测。
3、本发明的糖基功能化分子印迹柱的特异性强,样品中其它非特异性分子对检测结果无影响;灵敏度高,可以达到amol级;检测速度快,完成一个基本检测过程仅需1min左右的时间,可在短时间内实现大量样本的高通量筛选;成本低,检测1个样品仅需几分钱。
4、糖基功能化分子印迹柱检测细菌毒素的方法,操作快速简单,反应及结果均由仪器自动完成和记录,避免了主观因素的影响,并保证有很好的重复性,便于现场检测。
5、将化学发光技术与分子印迹技术相结合用于细菌毒素检测,既有生物传感的专一识别性,又有化学传感的机械稳定性、热稳定性。
附图说明
图1为糖基功能化分子印迹聚合物修饰到玻璃管柱内表面的过程示意图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
一种糖基功能化白喉毒素分子印迹柱的制备方法,包括以下步骤:
(1)选择能与白喉毒素合成糖基功能化分子印迹聚合物的功能单体A-D-吡喃糖基甘露糖;
(2)将模板分子白喉毒素,功能单体,交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA),致孔剂氯仿,引发剂偶氮二异丁腈,有机溶剂二氯甲烷按摩尔比为0.1∶2.5∶0.5∶70∶0.05∶2.0混合均匀,得到糖基功能化白喉毒素分子印迹聚合物溶液;
(3)选用长度为5cm,直径为3mm的玻璃管柱,分别用1mol/L HNO3和1mol/L NaOH清洗,然后用双蒸水彻底清洗数次,吹干,保证玻璃管柱内表面光亮无杂质;
(4)如图1所示将糖基功能化白喉毒素分子印迹聚合物溶液注入玻璃管柱中,填满,将玻璃管柱两端封闭,5min后将糖基功能化白喉毒素分子印迹聚合物溶液排出,用甲醇-乙酸混合液洗脱玻璃管柱内表面20min,直至把这一层中的模板分子白喉毒素完全洗掉,在室温下干燥10min,如此循环,重复上述过程5次。
(5)将上述玻璃管柱浸入到pH 6.8的柠檬酸-磷酸缓冲液中,保存在4℃的冰箱中18h,以便除去玻璃管柱内表面过量的糖基功能化白喉毒素分子印迹聚合物,当玻璃管柱内表面用去离子水彻底清洗以后,制备成功糖基功能化白喉毒素分子印迹柱。
将制备成功的糖基功能化白喉毒素分子印迹柱连接到化学发光分析仪,将浓度2.0×10-4mol/L的鲁米诺溶液与样品溶液分别泵入化学发光分析仪,对样品中的白喉毒素进行检测,结果见表1。
实施例2
一种糖基功能化破伤风毒素分子印迹柱的制备方法,包括以下步骤:
(1)选择能与破伤风毒素合成糖基功能化分子印迹聚合物的功能单体唾液酸神经节苷脂;
(2)将模板分子破伤风毒素,功能单体,交联剂三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯,致孔剂二氯甲烷,引发剂偶氮二异丁腈,有机溶剂二氯甲烷按摩尔比0.5∶2.5∶3∶45∶0.1∶5,混合均匀,得到糖基功能化破伤风毒素分子印迹聚合物溶液;
(3)选用长度为8cm,直径为2mm的玻璃管柱,分别用1mol/L HNO3和1mol/LNaOH清洗,然后用双蒸水彻底清洗数次,吹干,保证玻璃管柱内表面光亮无杂质;
(4)如图1所示将糖基功能化破伤风毒素分子印迹聚合物溶液注入玻璃管柱中,填满,将玻璃管柱两端封闭,5min后将糖基功能化破伤风毒素分子印迹聚合物溶液排出,用甲醇和乙酸混合液洗脱玻璃管柱内表面25min,直至把这一层中的模板分子破伤风毒素完全洗掉,在室温下干燥10min,如此循环,重复上述过程6次。
(5)将上述玻璃管柱浸入到pH 6.8的柠檬酸-磷酸缓冲液中,保存在4℃的冰箱中12h,以便除去玻璃管柱内表面过量的糖基功能化破伤风毒素分子印迹聚合物,当玻璃管柱内表面用去离子水彻底清洗以后,制备成功糖基功能化破伤风毒素分子印迹柱。
将制备成功的糖基功能化破伤风毒素分子印迹柱连接到化学发光分析仪,采用光泽精化学发光体系,将光泽精溶液与样品溶液分别泵入化学发光分析仪,对样品中的白喉毒素进行检测,结果见表1。
实施例3
一种糖基功能化肉毒杆菌毒素分子印迹柱的制备方法,包括以下步骤:
(1)选择能与肉毒杆菌毒素合成糖基功能化分子印迹聚合物的功能单体N-乙酰糖胺;
(2)将模板分子肉毒杆菌毒素,功能单体N-乙酰糖胺,交联剂N、N-亚甲基二丙烯酰胺,致孔剂甲醇,引发剂偶氮二异丁腈,有机溶剂二氯甲烷按摩尔比1∶2.5∶5∶65∶0.08∶15,混合均匀,得到糖基功能化肉毒杆菌毒素分子印迹聚合物溶液;
(3)选用长度为10cm,直径为5mm的玻璃管柱,分别用1mol/L HNO3和1mol/LNaOH清洗,然后用双蒸水彻底清洗数次,吹干,保证玻璃管柱内表面光亮无杂质;
(4)将糖基功能化肉毒杆菌毒素分子印迹聚合物溶液注入玻璃管柱中填满,将
玻璃管柱两端封闭,10min后将糖基功能化肉毒杆菌毒素分子印迹聚合物溶液排出,用甲醇和乙酸混合液洗脱玻璃管柱内表面20min,直至把这一层中的模板分子肉毒杆菌毒素完全洗掉,在室温下干燥10min,如此循环,重复上述过程5次。
(5)将上述玻璃管柱浸入到pH7.2的柠檬酸-磷酸缓冲液中,保存在4℃的冰箱中24h,以便除去玻璃管柱内表面过量的糖基功能化肉毒杆菌毒素分子印迹聚合物,当玻璃管柱内表面用去离子水彻底清洗以后,制备成功糖基功能化肉毒杆菌毒素分子印迹柱。
将制备成功的糖基功能化肉毒杆菌毒素分子印迹柱连接到化学发光分析仪,采用亚胺类化学发光体系,将N-溴代丁二酰亚胺(NBS)溶液(5.0×10-2 mol/L)与样品溶液分别泵入化学发光分析仪,对样品中的肉毒杆菌毒素进行检测,结果见表1。
实施例4
一种糖基功能化志贺氏毒素分子印迹柱的制备方法,包括以下步骤:
(1)选择能与志贺氏毒素合成糖基功能化分子印迹聚合物的功能单体神经酰胺三己糖苷;
(2)将模板分子志贺氏毒素,功能单体神经酰胺三己糖苷,交联剂3,5-二(丙烯酰胺)苯甲酸,致孔剂异丙醇,引发剂偶氮二异丁腈,有机溶剂二氯甲烷按摩尔比0.8∶2.5∶1∶80∶0.1∶12,混合均匀,得到糖基功能化志贺氏毒素分子印迹聚合物溶液;
(3)选用长度为10cm,直径为10mm的玻璃管柱,分别用1mol/L HNO3和1mol/LNaOH清洗,然后用双蒸水彻底清洗数次,吹干,保证玻璃管柱内表面光亮无杂质;
(4)将糖基功能化志贺氏毒素分子印迹聚合物溶液注入玻璃管柱中填满,将玻璃管柱两端封闭,10min后将糖基功能化志贺氏毒素分子印迹聚合物溶液排出,用甲醇和乙酸混合液洗脱玻璃管柱内表面25min,直至把这一层中的模板分子志贺氏毒素完全洗掉,在室温下干燥10min,如此循环,重复上述过程4次。
(5)将上述玻璃管柱浸入到pH7.2的柠檬酸-磷酸缓冲液中,保存在4℃的冰箱中22h,以便除去玻璃管柱内表面过量的糖基功能化志贺氏毒素分子印迹聚合物,当玻璃管柱内表面用去离子水彻底清洗以后,制备成功糖基功能化志贺氏毒素分子印迹柱。
将制备成功的糖基功能化志贺氏毒素分子印迹柱连接到化学发光分析仪,采用Ce(IV)作氧化剂的化学发光体系,将Ce(IV)-SO3 2-溶液与样品溶液分别泵入化学发光分析仪,溶液中Ce(IV)浓度为1.0×10-3 mol/L,SO3 2-浓度为3.0×10-4mol/L,对样品中的志贺氏毒素进行检测,结果见表1。
实施例5
一种糖基功能化中毒性休克毒素1分子印迹柱的制备方法,包括以下步骤:
(1)选择能与中毒性休克毒素1合成糖基功能化分子印迹聚合物的功能单体N-乙酰乳糖胺;
(2)按摩尔比0.5∶2.5∶3∶40∶0.08∶2.2称取模板分子中毒性休克毒素1,功能单体N-乙酰乳糖胺,交联剂季戊四醇三丙烯酸酯,致孔剂二甲基亚砜,引发剂偶氮二异丁腈,有机溶剂二氯甲烷,混合均匀,得到糖基功能化中毒性休克毒素1分子印迹聚合物溶液;
(3)选用长度为10cm,直径为8mm的玻璃管柱,分别用1mol/L HNO3和1mol/LNaOH清洗,然后用双蒸水彻底清洗数次,吹干,保证玻璃管柱内表面光亮无杂质;
(4)将糖基功能化中毒性休克毒素1分子印迹聚合物溶液注入玻璃管柱中填满,将玻璃管柱两端封闭,10min后将糖基功能化中毒性休克毒素1分子印迹聚合物溶液排出,用甲醇和乙酸混合液洗脱玻璃管柱内表面25min,直至把这一层中的模板分子中毒性休克毒素1完全洗掉,在室温下干燥10min,如此循环,重复上述过程6次。
(5)将上述玻璃管柱浸入到pH 6.8的柠檬酸-磷酸缓冲液中,保存在4℃的冰箱中24h,以便除去玻璃管柱内表面过量的糖基功能化中毒性休克毒素1分子印迹聚合物,当玻璃管柱内表面用去离子水彻底清洗以后,制备成功糖基功能化中毒性休克毒素1分子印迹柱。
将制备成功的糖基功能化中毒性休克毒素1分子印迹柱连接到化学发光分析仪,采用高锰酸钾(KMnO4)作氧化剂的化学发光体系,将鲁米诺-KMnO4溶液(与样品溶液分别泵入化学发光分析仪,鲁米诺-KMnO4溶液中鲁米诺的浓度为1.0×10-3mol/L,KMnO4的浓度为1.0×10-3mol/L,对样品中的中毒性休克毒素1分子进行检测,结果见表1。
实施例6
一种糖基功能化链球菌致热外毒素分子印迹柱的制备方法,包括以下步骤:
(1)选择能与链球菌致热外毒素分子合成糖基功能化分子印迹聚合物的功能单体N-乙酰糖胺;
(2)按摩尔比为2∶2.5∶4∶60∶0.03∶15称取模板分子链球菌致热外毒素,功能单体N-乙酰糖胺,交联剂二乙烯基苯(DVB),致孔剂二氯甲烷,引发剂偶氮二异丁腈,有机溶剂二氯甲烷,混合均匀,得到糖基功能化链球菌致热外毒素分子印迹聚合物溶液;
(3)选用长度为5cm,直径为3mm的玻璃管柱,分别用1mol/L HNO3和1mol/LNaOH清洗,然后用双蒸水彻底清洗数次,吹干,保证玻璃管柱内表面光亮无杂质;
(4)将糖基功能化链球菌致热外毒素分子印迹聚合物溶液注入玻璃管柱中填满,将玻璃管柱两端封闭,5min后将糖基功能化链球菌致热外毒素分子印迹聚合物溶液排出,用甲醇和乙酸混合液洗脱玻璃管柱内表面20min,直至把这一层中的模板分子链球菌致热外毒素完全洗掉,在室温下干燥10min,如此循环,重复上述过程5次。
(5)将上述玻璃管柱浸入到pH 6.8的柠檬酸-磷酸缓冲液中,保存在4℃的冰箱中24h,以便除去玻璃管柱内表面过量的糖基功能化链球菌致热外毒素分子印迹聚合物,当玻璃管柱内表面用去离子水彻底清洗以后,制备成功糖基功能化链球菌致热外毒素分子印迹柱。
将制备成功的糖基功能化链球菌致热外毒素分子印迹柱连接到化学发光分析仪,采用过氧化氢(H2O2)作氧化剂的化学发光体系,将鲁米诺-H2O2溶液(鲁米诺:2.5×10-2mol/L,H2O2:5.0×10-5 mol/L)与样品溶液分别泵入化学发光分析仪,对样品中的链球菌致热外毒素进行检测,结果见表1。
实施例7
一种糖基功能化霍乱毒素分子印迹柱的制备方法,包括以下步骤:
(1)选择能与霍乱毒素合成糖基功能化分子印迹聚合物的功能单体唾液酸神经节苷脂;
(2)按摩尔比0.2∶2.5∶2∶50∶0.06∶10称取模板分子霍乱毒素,功能单体唾液酸神经节苷脂,交联剂季戊四醇三丙烯酸酯,致孔剂N,N-二甲基酰胺,引发剂偶氮二异丁腈,有机溶剂二氯甲烷,混合均匀,得到糖基功能化霍乱毒素分子印迹聚合物溶液;
(3)选用长度为5cm,直径为3mm的玻璃管柱,分别用1mol/L HNO3和1mol/LNaOH清洗,然后用双蒸水彻底清洗数次,吹干,保证玻璃管柱内表面光亮无杂质;
(4)将糖基功能化霍乱毒素分子印迹聚合物溶液注入玻璃管柱中填满,将玻璃管柱两端封闭,10min后将糖基功能化霍乱毒素分子印迹聚合物溶液排出,用甲醇和乙酸混合液洗脱玻璃管柱内表面25min,直至把这一层中的模板分子霍乱毒素完全洗掉,在室温下干燥10min,如此循环,重复上述过程4次。
(5)将上述玻璃管柱浸入到pH 6.8的柠檬酸-磷酸缓冲液中,保存在4℃的冰箱中12h,以便除去玻璃管柱内表面过量的糖基功能化霍乱毒素分子印迹聚合物,当玻璃管柱内表面用去离子水彻底清洗以后,制备成功糖基功能化霍乱毒素分子印迹柱。
将制备成功的糖基功能化霍乱毒素分子印迹柱连接到化学发光分析仪,采用碘酸钠(NaIO4)作氧化剂的化学发光体系,将NaIO4-H2O2溶液与样品溶液分别泵入化学发光分析仪,对样品中的白喉毒素进行检测,结果见表1。
实施例8
一种糖基功能化绿脓杆菌外毒素a分子印迹柱的制备方法,包括以下步骤:
(1)选择能与绿脓杆菌外毒素a合成糖基功能化分子印迹聚合物的功能单体神经酰胺三己糖苷;
(2)按摩尔比0.5∶2.5∶3∶40∶0.1∶1.5称取模板分子绿脓杆菌外毒素a,功能单体神经酰胺三己糖苷,交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯,致孔剂四氯化碳,引发剂偶氮二异丁腈,有机溶剂二氯甲烷,混合均匀,得到糖基功能化绿脓杆菌外毒素a分子印迹聚合物溶液;
(3)选用长度为5cm,直径为3mm的玻璃管柱,分别用1mol/L HNO3和1mol/LNaOH清洗,然后用双蒸水彻底清洗数次,吹干,保证玻璃管柱内表面光亮无杂质;
(4)将糖基功能化绿脓杆菌外毒素a分子印迹聚合物溶液注入玻璃管柱中填满,将玻璃管柱两端封闭,5min后将糖基功能化绿脓杆菌外毒素a分子印迹聚合物溶液排出,用甲醇和乙酸混合液洗脱玻璃管柱内表面20min,直至把这一层中的模板分子绿脓杆菌外毒素a完全洗掉,在室温下干燥10min,如此循环,重复上述过程5次。
(5)将上述玻璃管柱浸入到pH 6.8的柠檬酸-磷酸缓冲液中,保存在4℃的冰箱中18h,以便除去玻璃管柱内表面过量的糖基功能化绿脓杆菌外毒素a分子印迹聚合物,当玻璃管柱内表面用去离子水彻底清洗以后,制备成功糖基功能化绿脓杆菌外毒素a分子印迹柱。
将制备成功的糖基功能化分子印迹柱连接到化学发光分析仪,采用次氯酸钠(NaClO)化学发光体系,将异烟肼-NaClO溶液与样品溶液分别泵入化学发光分析仪,对样品中的白喉毒素进行检测,结果见表1。
表1本发明糖基功能化分子印迹柱检测效果
Claims (8)
1.一种糖基功能化细菌毒素分子印迹柱的制备方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)选择能与细菌毒素合成糖基功能化分子印迹聚合物的糖类化合物功能单体;
(2)将模板分子细菌毒素、功能单体糖类化合物、交联剂、致孔剂、引发剂和有机溶剂混合均匀制成糖基功能化分子印迹聚合物溶液;
(3)将糖基功能化分子印迹聚合物修饰到玻璃管柱内表面上;
所述糖类化合物功能单体为A-D-吡喃糖基甘露糖、N-乙酰糖胺、N-乙酰乳糖胺、唾液酸神经节苷脂或神经酰胺三己糖苷;
所述细菌毒素模板分子、糖类化合物功能单体、交联剂、致孔剂、引发剂和有机溶剂的摩尔比为0.1~2∶2.5∶0.1~5∶40~80∶0.01~0.10∶1.0~15。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:所述交联剂为三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯、N、N-亚甲基二丙烯酰胺、3,5-二(丙烯酰胺)苯甲酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯、二乙烯基苯或季戊四醇三丙烯酸酯;所述引发剂为偶氮二异丁腈;所述致孔剂为二氯甲烷、氯仿、乙腈、甲醇、异丙醇、四氯化碳、N,N-二甲基酰胺或二甲基亚砜;所述有机溶剂为二氯甲烷或四氯化碳。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法,其特征在于:所述将糖基功能化分子印迹聚合物修饰到玻璃管柱内表面包括以下步骤:
(1)选用长度为5-10cm,直径为2-10mm的玻璃管柱,依次用1mol/L HNO3和1mol/LNaOH清洗,然后用双蒸水彻底清洗数次,吹干;
(2)在上述玻璃管柱中注入糖基功能化分子印迹聚合物溶液,填满,将玻璃管柱两端封闭,浸泡5-10min,然后将玻璃管柱中的分子印迹聚合物溶液排出,用洗脱剂洗脱20-30min,室温下干燥5-10min;
(3)重复步骤(2)过程2-6次,制得所述糖基功能化分子印迹柱。
4.根据权利要求1或2所述的制备方法,其特征在于:还包括以下步骤:将糖基功能化分子印迹柱浸入pH6.8-7.2缓冲液中,保存在4℃冰箱,12~24h后使用。
5.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于:所述洗脱剂为乙腈、水、甲醇-乙酸混合液或乙腈-乙酸混合液。
6.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于:所述缓冲液为柠檬酸-磷酸溶液。
7.一种利用权利要求1或2所述的分子印迹柱检测细菌毒素的方法,其特征在于:将制得的糖基功能化分子印迹柱连接到化学发光分析仪,将化学发光体系溶液与样品溶液分别泵入化学发光分析仪,对样品中的细菌毒素进行检测。
8.根据权利要求7所述的检测细菌毒素的方法,其特征在于:所述化学发光体系溶液为鲁米诺溶液、光泽精溶液、N-溴代丁二酰亚胺溶液、Ce(IV)-SO3 2-溶液、鲁米诺-KMnO4溶液、鲁米诺-H2O2溶液、异烟肼-NaClO溶液或NaIO4-H2O2溶液。
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