CN101631850B

CN101631850B - 增加和转移造血干细胞的方法

Info

Publication number: CN101631850B
Application number: CN2008800077612A
Authority: CN
Inventors: 亚历山大·沙科夫; 埃夫格尼亚·斯特罗姆
Original assignee: Cleveland Biolabs Inc
Current assignee: Statera Biopharma Inc
Priority date: 2007-01-09
Filing date: 2008-01-09
Publication date: 2013-12-04
Anticipated expiration: 2028-01-09
Also published as: AU2008204836A1; KR20090108703A; JP2010515748A; EA018983B1; EP2115124A4; MX2009007391A; NZ603805A; ZA200905378B; KR101493474B1; WO2008086426A2; SG177959A1; EP2115124B1; US20140045747A1; EA200900806A1; CN101631850A; JP5389666B2; IL199766A; WO2008086426A8; US20150174195A1; BRPI0806557A2

Abstract

本发明提供了用于增加骨髓中造血干细胞数目，提高将这些细胞从骨髓迁移至血流和其他部位的转移，以及增加血流中分化造血干细胞的数目的方法。

Description

增加和转移造血干细胞的方法

技术领域

本发明涉及试剂增加造血干细胞数并将这些细胞转移至血流中的用途。

背景技术

血细胞负责身体每种细胞类型的长期维护和免疫保护。血细胞，与皮肤细胞一起，具有任何成年组织中的最强的自体再生能力。已知可形成血细胞和免疫细胞的干细胞为造血干细胞(HSC)。它们通过每天产生几十亿的新血细胞而最终负责血液的持续再生。HSC有两个特点：它能自体再生，并且能产生可发展成为所有不同类型血细胞的细胞。深入研究表明，重建后，HSC不仅能够分化成血细胞，还能分化成为肌细胞(骨骼肌细胞与心肌细胞)、脑细胞、肝细胞、皮肤细胞、肺细胞、肾细胞、肠细胞，和胰腺细胞。

骨髓是HSC的传统来源，但由于侵入性富集过程需要对干细胞捐赠者全身麻醉，因此不常用作HSC的来源。在骨髓移植的临床过程中，通常在髋骨进行骨穿刺，用注射器吸出骨髓细胞。骨髓中每100,000个细胞中约1个为长期血液形成干细胞。

对于人HSC的临床移植，医生现在倾向于从外周循环血中富集捐赠者的细胞。几十年来已知少量干细胞和祖细胞可以在血流中循环，但是在过去的10年中，研究者已经发现，能够通过为捐赠者注射细胞因子如粒细胞-集落刺激因子(G-CSF)，诱使更多的细胞从骨髓迁移至血液。在细胞富集几天前为捐赠者注射G-CSF。为了收集细胞，将静脉内试管***捐赠者的静脉，使其血液通过过滤***，所述过滤***抽出CD34⁺白细胞，将红细胞返回至捐赠者。这个过程通常称为“干细胞血浆分离置换法”。如同骨髓一样，CD34⁺细胞是干细胞、祖细胞和各种成熟度白细胞的混合物。在收集的细胞中，5％至20％为真正的HSC。因此，本领域需要增加血流中的HSC数目。本发明通过公开增加骨髓中HSC数目和提高将这些HSC从骨髓迁移至外周血流中的转移的方法而满足这一需要。

发明内容

本文提供了提高HSC群体特性的方法。所述特性可以是细胞数。所述特性也可以是转移。所述方法可以包括施用组合物，其可以对有需要的哺乳动物进行施用。所述方法可以增加骨髓中HSC的数目。所述方法还可以提高HSC从骨髓至血流的转移。干细胞群体可以包含长期HSC或定型祖细胞。

所述组合物可以包含试剂，其可以是脂肽。所述脂肽可以是下式的化合物：

其中，

R₁代表H或-CO-R₄，

R₂、R₃和R₄独立地是H或任选取代的C₈-C₁₆脂肪族化合物；

X是肽；和

Z是S或CH₂。

所述肽可以包含序列SEQ ID NO：1-52的任一个序列。所述肽的前五个氨基酸可以选择自位于表2中标明位置的氨基酸。所述肽还可以包含选自下组的序列：SEQ ID NO：8、16-18、21、21和其替代序列。R₁可以是H，并且R₂和R₃可以是C₁₆脂肪族化合物或其替代化合物。所述化合物可以是RR或RS立体异构体，或其混合物。化合物还可以具有下式：

试剂还可以是脂糖，其具有下式：

其中，

R₁代表H或-CO-R₄，

X是糖；和

Z是S或CH₂。

所述方法可以包括对有需要的哺乳动物组合施用所述试剂和G-CSF受体激动剂。所述方法可以包括组合施用所述试剂和G-CSF。方法可以包括组合施用所述试剂和CXCR4拮抗剂。方法可以包括一起施用所述试剂和AMD3100。方法可以包括组合施用所述试剂、G-CSF和CXCR4拮抗剂。方法可以包括组合施用所述试剂、G-CSF和AMD3100。方法可以包括组合施用所述试剂、G-CSF、AMD3100和CXCR4拮抗剂。所述试剂可以在施用G-CSF之前，与施用G-CSF同时，或在施用G-CSF之后施用。所述试剂可以在施用G-CSF之前或之后每小时施用一次。所述试剂可以在G-CSF施用之前或之后96小时内的任何时间开始施用。所述方法可以进一步包括从哺乳动物富集外周血单核细胞。

所述方法可以进一步包括使用放射防护剂，其可以是抗氧化剂、鞭毛蛋白、TGFβ、TLR的激活剂，或细胞因子。细胞因子可以是干细胞因子。

所述方法还可以处理异常病况的影响，包括根据本文所述方法提高HSC群体细胞数和至血流的转移。异常状况可以选自：辐射、创伤、中毒、感染、自体骨髓移植，和骨髓衰竭。

本文还提供治疗疾病的方法。疾病可以与造血和/或淋巴损伤有关。疾病可以是恶性或非恶性血液疾病，重症联合免疫缺陷(SCID)、维-奥综合征，或谢-希综合征。所述方法可以包括根据本文所述方法提高HSC群体细胞数和至血流的转移。疾病可以选自：癌症、自身免疫性疾病、免疫抑制疾病、贫血、地中海贫血和镰状细胞血症。癌症可以选自：乳癌、睾丸癌、成神经细胞瘤、卵巢癌、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤，和瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。自身免疫性疾病可以是HIV感染。

本文还提供在哺乳动物中产生自体干细胞群体的方法，其可以包括提高HSC群体的特性和分离外周血白细胞。外周血白细胞可以包含自体免疫干细胞群体。

本文还提供处理癌症治疗的影响的方法，其可以包括对已接受癌症治疗的哺乳动物施用自体干细胞群体。癌症治疗可以是化学疗法或放射疗法。自体干细胞群体可以通过注射或输液而施用。

本文还提供从血液样本分离HSC的方法。方法可以包括对有需要的人施用包含试剂的组合物。方法还可以包含从样本分离HSC。试剂可以是如本文所述的脂肽。

附图说明

图1表示脂多糖的结构。

图2表示脂肽CBLB601对全身辐射(TBI)6Gy的小鼠脾脏重量和体重的影响。

图3表示骨髓中的HSC状态。在用CLBLB601处理的ICR小鼠骨髓细胞中HSC的百分比与对照相比较。

图4表示血液中干细胞的造血状态，其中用CBLB601处理的ICR小鼠中每1mL中HSC的数目与对照相比较。

图5总结了与用0.25mg/kg CBLB612处理的猴子相比的分离自用G-CSF处理的对照猕猴的骨髓和血液样本的FACS数据。

图6表示分离自用G-CSF处理的对照猕猴或用0.25mg/kg CBLB612(脂肽)处理的猴子的骨髓和血液样本的FACS数据。

图7表示单次注射CBLB612及随后注射AMD3100之后，与小鼠血液中具有干细胞表型的细胞数动力学变化相关的数据。

图8表示单次注射CBLB612及随后注射AMD3100之后，与小鼠血液中具有祖细胞表型的细胞数动力学变化相关的数据。

图9表示单次注射CBLB612及随后注射AMD3100之后，与小鼠骨髓中具有干细胞表型的细胞数动力学变化相关的数据。

图10表示单次注射CBLB612及随后注射AMD3100之后，与小鼠骨髓中具有祖细胞表型的细胞数动力学变化相关的数据。

图11表示单次注射CBLB612及随后注射AMD3100之后，与小鼠血液中具有干细胞表型的细胞数动力学变化相关的数据。

图12表示单次注射CBLB612及随后注射AMD3100之后，与小鼠血液中具有祖细胞表型的细胞数动力学变化相关的数据。

图13表示单次注射CBLB612及随后注射AMD3100之后，与小鼠骨髓中具有干细胞表型的细胞数动力学变化相关的数据。

图14表示单次注射CBLB612及随后注射AMD3100之后，与小鼠骨髓中具有干细胞表型的细胞数动力学变化相关的数据。

图15表示单次注射CBLB612及随后注射AMD3100之后，与小鼠骨髓中具有祖细胞表型的细胞数动力学变化相关的数据。

具体实施方式

本文提供提高HSC数目和这些细胞至血流中的转移的方法。方法可以包括使用包含试剂的组合物，其可以导致骨髓、外周血和脐带血中HSC数目增加。所述试剂还可以增加HSC从骨髓迁移至血流的转移。所述试剂可以是脂肽、脂多糖或脂糖。可以与试剂一起施用放射防护剂或HSC共刺激剂。可以使用方法处理异常状况的影响，所述异常状况如辐射、创伤、中毒、感染、自体骨髓移植和骨髓衰竭。还可以使用所述方法治疗疾病如癌症、自身免疫性疾病和镰状细胞血症。

本文还提供用于从血液样本分离HSC的方法。所述方法可以包括使用包含试剂的组合物，所述试剂可以提高或增强HSC数目并将细胞转移至血液。本发明的其他方面将通过下述发明详述而对于技术人员显而易见。

1.定义

应该理解的是，本文使用的术语仅为描述特定的实施方案，不意欲进行限定。必须注意的是，如本说明和提出的权利要求所使用的，单数形式包括复数形式，除非上下文明确说明为其他情况。

术语“施用”，如本文所使用的以描述试剂的剂量，其可以为单次剂量或多次剂量。

如本文所使用的术语“脂肪族化合物”，可以指无支链、有支链或环状烃基，其可以取代或非取代的，并且其可以是饱和或不饱和的，但是不是芳香族化合物。术语脂肪族化合物可以包括其中含有替代烃骨架的一个或多个碳的氧、氮、硫或磷原子的脂肪族基团。

如本文所单独或组合使用的，术语“烷基”可以指有支链或无支链的饱和脂肪族基团。烷基基团的代表性实例可以包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、辛基、癸基、十四烷基、十六烷基、二十烷基、二十四烷基等。

如本文所单独或组合使用的，术语“烯基”可以指有支链或无支链的不饱和脂肪族基团，其可以在链上任何稳定点包含至少一个碳-碳双键。烯基基团的代表性实例可以包括乙烯基、E-和Z-戊烯基、癸烯基等。

如本文所单独或组合使用的，术语“炔基”可以指有支链或无支链的不饱和脂肪族基团，其可以在链上任何稳定点包含至少一个碳-碳三键。炔基基团的代表性实例可以包括乙炔基、丙炔基、炔丙基、丁炔基、己炔基、癸炔基等。

在肽或多肽的上下文中使用时，术语“类似物”可以指包含一个或多个非标准氨基酸或基于常规氨基酸集合的其他结构变化的肽或多肽。

如本文所使用的，术语“抗体”可以指IgG、IgM、IgA、IgD或IgE类抗体或其片段或衍生物，包括Fab、F(ab′)₂、Fd，和单链抗体、双抗体、双特异抗体、双功能抗体及其衍生物。抗体可以是单克隆抗体、多克隆抗体、亲和纯化抗体，或它们的混合物，其表现出对期望的抗原决定基或其衍生序列具有足够的结合特异性。抗体还可以是嵌合抗体。抗体可以通过附加本领域已知的一种或多种化学、肽或多肽部份而产生。抗体可以与化学部份结合。

如本文所使用的，术语“凋亡”可以指细胞死亡形式，包括在保持细胞器完整情况下的细胞体积进行性收缩；染色质浓缩(即，核浓缩)，可通过光学或电子显微镜看到；和/或DNA裂解成核小体大小的片段，可由离心沉降试验确定。当细胞的膜完整性受到破坏(例如，细胞膜发泡)和完整细胞片段(“凋亡体”)由噬菌细胞吞没时发生细胞死亡。

如本文所使用的，术语“癌症”可以指特征在于抵抗凋亡刺激的任何状况。

如本文所使用的，术语“癌症治疗”可以指本领域已知的针对癌症的任何治疗，包括但不限于，化学治疗和放射治疗。

如本文所使用的，术语“组合”可以指所述试剂可以在其他治疗之前、与其他治疗一起，或者在其他治疗之后施用，或前述方式的组合。

当在肽或多肽的上下文中使用时，术语“衍生物”可以指一级结构(氨基酸和氨基酸类似物)不同的肽或多肽。作为实例，衍生物可以进行糖基化而不同，这是一种翻译后修饰的形式。例如，肽或多肽可以由于在异源***中表达而表现出糖基化模式。如果保持至少一种生物活性，那么这些肽或多肽是根据本发明的衍生物。其他衍生物可以包括具有共价修饰的N-或C-末端的融合肽或融合多肽，PEG化肽或多肽，与脂部份相连的肽或多肽，烷基化肽或多肽，通过氨基酸侧链功能基团与其他肽连接的肽或多肽，多肽或化学物，和本领域可以理解的其他修饰。

当在肽或多肽的上下文中使用时，术语“片段”可以指长度从约6至约10个氨基酸的肽。肽可以长6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24和25个氨基酸。

在本文中使用的术语“造血干细胞”或“HSC”可以指可以分离自骨髓、外周血、脐带血或胚胎干细胞的干细胞。HSC能形成淋巴、骨髓和红系细胞的血细胞。HSC能形成细胞如红血球(红血细胞)、血小板、粒细胞(比如嗜中性粒细胞、嗜碱细胞和嗜酸红细胞)、巨噬细胞、B-淋巴细胞、T-淋巴细胞和自然杀伤细胞。HSC能分化或开启通往成熟造血细胞的途径。HSC的转移或迁移性还受到调节，或者可以通过凋亡或程序化细胞死亡而调节。HSC还能分化成细胞如肌细胞(骨骼肌细胞和心肌细胞)、脑细胞、肝细胞、皮肤细胞、肺细胞、肾细胞、肠细胞和胰腺细胞。HSC还可以如Stem Cell Information[WorldWide Web site].Bethesda，MD：NationalInstitutes of Health，U.S.Department ofHealth and Human Services，2006[cited Monday，January 08，2007]所述。取自http://stemcells.nih.gov/info/scireport/2006report，其内容通过引用并入本文。

当在肽或多肽的上下文中使用时，术语“相似物”可以指共同拥有相同进化祖先的肽或多肽。

如本文所使用的，术语“饱和”可以指其中骨架原子的所有可提供价键都连接于其他原子基团。

本文使用的术语“干细胞”可以指能在无限时间段里进行***产生特定细胞的任何细胞。干细胞可以源自所有胚层(即，外胚层、中胚叶和内胚叶)。干细胞的典型来源可以包括胚胎、骨髓、外周血、脐带血、胎盘血和脂肪组织。干细胞可以是多能的，表示它们能产生生物体的大多数组织。例如，多能干细胞能产生皮肤、肝脏、血液、肌肉、骨骼等细胞。相反，专能或成年干细胞通常产生有限类型的细胞。活细胞是具有活性并且经常能生长和分化的细胞。本领域的那些技术人员了解用来确定细胞活性的方法，例如，通过排除台盼蓝染色的方法。如本文所使用的，除非另外说明，术语干细胞包括祖细胞。

如本文所使用的，术语“取代”可以指包含一个或多个氢或其他原子的基团从碳去除并用其他基团替换。本文的取代基团可以由一至五个，或一至三个取代基取代。这些取代基的代表性实例包括但不限于，脂肪族基团、芳香族基团、烷基、烯基、炔基、芳基、烷氧基、卤素、芳氧基、羰基、丙烯醛基、氰基、氨基、硝基、含磷酸盐的基团、含硫基团、羟基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧羰氧基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基硫羰基、酰氨基、脒基、亚氨基、烷基硫、芳基硫、硫碳酸酯、烷基亚硫酰基、三氟甲基、叠氮基、杂环基、烷基芳基、杂芳基、脲氨基、硫脲氨基、酰亚胺基、肟基、亚胺酯、环烷基、环烷基羰基、二烷基氨基、芳基环烷基、芳基羰基、芳基烷基羰基、芳基环烷基羰基、芳基氧膦基、芳基烷基氧膦基、芳基环烷基氧膦基、芳基磷酰基、芳基烷基磷酰基、芳基环烷基磷酰基、芳基磺酰基、芳基烷基磺酰基、芳基环烷基磺酰基，它们的组合，和另外的替代物。

当指保护哺乳动物免于某种状况时，术语“治疗”可以指防止、抑制、压制或消除所述状况。防止状况涉及在状况开始之前对哺乳动物施用本文所述的组合物。抑制状况可以涉及在诱导条件之后但出现临床表现之前，对哺乳动物施用本文所述的组合物。压制状况可以涉及在状况的临床表现之后对哺乳动物施用本文所述的组合物，使状况减轻或维持。消除状况可以涉及在状况的临床表现之后对哺乳动物施用本文所述的组合物，使哺乳动物不再出现所述状况。

如本文所使用的，术语“不饱和”可以指其中两个相邻骨架原子的至少一个可提供的价键未连接于其他原子基团。

如本文所使用的，术语“未取代”可以指不具有任何连接基团或由基团取代的基团。

当在肽或多肽的上下文中使用时，术语“变体”可以指通过氨基酸的***、缺失或保守取代而在氨基酸序列中产生差异，但保持至少一种生物活性的肽或多肽。就本发明而言，“生物活性”可以包括由特定抗体结合的能力。氨基酸的保守取代，即，用性质相似(例如，亲水性、电荷区域的程度和分布)的不同氨基酸替换氨基酸，所述替换因为通常涉及微小变化而可在本领域中识别。能够鉴定这些微小的变化，部分通过考虑氨基酸的亲水指数，如本领域中所理解的(Kyte等，J.Mol.Biol.157：105-132，1982)。氨基酸的亲水指数基于其憎水性和电荷的考虑。本领域中已知亲水指数相似的氨基酸能被取代并仍然保持蛋白质功能。在一个方面，取代亲水指数为±2的氨基酸。还可以使用氨基酸的亲水性揭示能获得的保持生物功能的蛋白质取代。在肽的上下文中，氨基酸的亲水性考量允许计算所述肽的最大局部平均亲水性，这是有用的度量，已经在美国专利4,554,101中报道能与抗原性和免疫原性很好的关联，所述专利通过引用并入本文。亲水值相似的氨基酸取代能产生保持生物活性如免疫原性的肽，如本领域中所理解的。在一个方面，用彼此的亲水值为±2的氨基酸进行取代。所述氨基酸的特定侧链会影响亲水指数和氨基酸的亲水值。与该观察结果一致，理解与生物功能相容的氨基酸取代依赖于与氨基酸的相对相似性，并且特别地，那些氨基酸的侧链，如通过憎水性、亲水性、电荷、大小和其他性质所揭示的。

2.用于增强或提高HSC群体特性的方法

本文提供用于提高或增强HSC群体特性的方法。HSC群体的特性可以是细胞数，也可以是细胞转移。

a.细胞数

细胞数可以是HSC群体的总体尺度。细胞数还可以是个体HSC的总数。可以通过增加HSC分化成其他HSC的速率而增强或增加细胞数，这样可以增强和增加骨髓、血流、脐带血或胚胎中HSC的总数。还可以通过提高HSC群体的总体数量，或者通过增强或增加HSC群体的量、数目或水平，增强或增加细胞数。

b.细胞转移

可以通过提高个体HSC从骨髓迁移至外周血的数目而增强或提高细胞转移。还可以通过提高个体HSC从骨髓迁移至外周血，然后从外周血至特定的组织或器官如***、心脏、肺、肝脏、皮肤、脾脏、小肠和大肠、胃或胰腺的数目增强或提高细胞转移。HSC可以从骨髓迁移至血流。

提高HSC群体的细胞数或转移还可以提高HSC群体分化成多种细胞系的速度。HSC还能够分化或开启成为成熟造血细胞的途径。例如，HSC群体的细胞分化可以导致骨髓或外周血中普通骨髓祖细胞数目的增加。HSC群体的细胞分化还可以导致骨髓或外周血中粒细胞/巨噬细胞祖细胞或巨核细胞/红细胞祖细胞数目的增加。HSC可以分化成为普通淋巴前体。普通骨髓祖细胞数目的增加可以导致分化成为粒细胞/巨噬细胞祖细胞或巨核细胞/红细胞祖细胞。粒细胞/巨噬细胞祖细胞可以进一步分化成为粒细胞如嗜中性粒细胞、嗜酸红细胞、嗜碱细胞、组织前体细胞、单核细胞和不成熟的树突细胞。巨核细胞/红细胞祖细胞可以分化成为巨核细胞、成红细胞。一般的淋巴前体细胞可以分化成为B淋巴细胞和T淋巴细胞。B淋巴细胞可以分化成为抗体分泌细胞，其中T淋巴细胞可以分化成为效应T细胞。粒细胞可以进一步分化成为组织柱状细胞、巨噬细胞和不成熟的树突细胞。巨核细胞可以分化成为血小板。成红细胞可以分化成为红细胞。HSC还能分化成为细胞如肌细胞(骨骼肌细胞和心肌细胞)、脑细胞、肝细胞、皮肤细胞、肺细胞、肾细胞、肠细胞和胰腺细胞。代表特定分子或细胞表面标记物的细胞数或比例可以表征HSC或HSC群体。

HSC能自体更新或者在细胞***后保持为干细胞。还能在迁移过程中或者通过凋亡或者通过程序化细胞死亡调节HSC。HSC还能分化成为细胞如肌细胞(骨骼肌细胞和心肌细胞)、脑细胞、肝细胞、皮肤细胞、肺细胞、肾细胞、肠细胞和胰腺细胞。

尽管不受理论束缚，但是通常每10,000至15,000个骨髓细胞中有1个可能是干细胞。在血流中，比例可以降低至1比100,000个血细胞。体内施用试剂可以在注射后1小时、2小时、3小时、4小时、6小时、8小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、24小时、26小时、28小时或30小时增加血流中的全部细胞群体数，并且血液中包括HSC的干细胞的累积可以在施用后约65小时、66小时、67小时、68小时、69小时、70小时、71小时、72小时、73小时、74小时、75小时、76小时、77小时、78小时、79小时、80小时、81小时、82小时、83小时、84小时、85小时、86小时、87小时、88小时、89小时、90小时、91小时、92小时、93小时、94小时、95小时、96小时、97小时、98小时、99小时、100小时、101小时、102小时、103小时、104小时、105小时、106小时、107小时、108小时、109小时和110小时达到峰值。

3.组合物

方法可以包含对有需要的哺乳动物施用组合物，增强或提高HSC群体的特性。所述组合物可以用于治疗与接触辐射、癌症治疗的副反应、压力、细胞老化和疾病有关的异常状况的治疗。所述组合物可以是药物组合物，可以使用本领域公知的方法产生。所述组合物可以包含试剂，其能提高哺乳动物中HSC群体的特性。所述组合物还可以包含放射防护剂、HSC的共刺激剂、外源生长因子、细胞因子或它们的组合。

a.试剂

试剂可以包含脂肽、脂多糖、脂糖或它们的组合。

(1)脂肽

脂肽可以分离自革兰氏阴性细菌、***或支原体的外膜的一部分。细菌脂肽没有共享的序列相似性，但是可以通过N-端氨基酸S-(2，3-二羟丙基)-L-半胱氨酸表征，其可以由两个或三个脂肪酸酰化。细菌脂肽可以是强的免疫调节剂，通过TLR2-TLR1或TLR2-TLR6杂二聚体的信号传导，在注射后激活早期宿主响应，引起NF-κB的活化和细胞因子产生。天然脂肽的N-端脂肽合成类似物可以是TLR和NF-κB的潜在激活剂，以及体内和体外的免疫调节剂。

脂肽可以是下式的化合物：

其中，

R₁代表H或-CO-R₄，

R₂、R₃和R₄独立地是H或任选取代的脂肪族化合物；

X是H或肽；和

Z是S或CH₂。

脂肽可以包含两个或三个脂肪酸。R₂、R₃和R₄的脂肪族取代基可以包含从6至20个碳原子。R₂、R₃和R₄可以是C₆-C₂₀烷基、C₆-C₂₀烯基或C₆-C₂₀炔基。R₂、R₃和R₄的烷基取代基的代表性实例包括C₆、C₈、C₉、C₁₀、C₁₂、C₁₄和C₁₆。R₂、R₃和R₄的烯基取代基的代表性实例包括C_10:1 ^D1反式、C_18:1 ^D9和C_18:2 ^D9，12。

肽可以包含至少4或5个氨基酸和不超过20、30或40个氨基酸之间的氨基酸。肽成分是活性必需的，并且脂肽的活性可以受到氨基酸序列的调节，但是生物活性对大多数肽序列不敏感(Spohn等，Vaccine，22(19)：2494-9，2004)，文献内容通过引用并入本文。肽可以包含表2提出的序列，其至少80％、85％、90％或95％相同的任何序列，或其任何类似物、衍生物、片段、相似物、变体或取代。肽可以携带负的净电荷。

表1

序列	长度	SEQ ID NO
			SNNA	4	1
GSSHH	5	2
			KQNVS	5	3
NNSGK	5	4
			QPDRY	5	5
RPDRY	5	6
			SEEEE	5	7
SKKKK	5	8
			SNNNA	5	9
SPPPP	5	10
			GQHHM	5	11
GQHHH	5	12
			SSHHM	5	13
GSHHM	5	14
			SQMHH	5	15
GETDK	5	16
			GEESN	5	17
GEEDD	5	18
			TENVKE	6	19
QGEESNDK	8	20
			VQGEESNDK	9	21
FEPPPATTT	9	22
			GDKYFKETE	9	23
GDPKHPKSF	9	24
			GGQEKSAAG	9	25
GPCPGCPPC	9	26
			PPCPGCPPC	9	27
DNEEKPTPEQD	11	28
			GNGGAPAQPKG	11	29
FEPPPATTTKSK	12	30
			GNNDESNISFKEK	13	31

GDPKHPKSFTGWVA	14	32
			AQNPNKTNSNLDSSK	15	33
NKDNEAEPVTEGNAT	15	34
			SKEGNGPDPDNAAKS	15	35
GDKTPSTKSAGKVENK	16	36
			GETDKEGKIIRIFDNSF	17	37
SSTSENNGNGNGNGGTD	17	38
			GNNDESNISFKEKSEEEE	18	39
GNNDESNISFKEKSKKKK	18	40
			GNNDESNISFKEKSPPPP	18	41
SSNKSTTGSGETTTAAGT	18	42
			CGNNDESNISFKEKSKKKK	19	43
GSPLSFESSVQLIVSDNSS	19	44
			SNYAKKVVKQKNHVYTPVY	19	45
ADVIAKIVEIVKGLIDQFTQK	21	46
			GAASSLTYESSVQLVVSDNSS	21	47
GGEPAAQAPAETPAAAAEAAS	21	48
			GQTDNNSSQSQQPGSGTTNT	21	49
SGALAATSDDDVKKAATVAIVA	22	50
			SIVSTIIEVVKTIVDIVKKFKK	22	51
SSGGGGVAADIGAGLADALTAP	22	52

可以从表2为每个位点列出的那些氨基酸中选择脂肽的肽部份的前四至五个氨基酸。这张表基于Spohn等，Vaccine，22(19)：2494-9，2004；和Reutter等，J.Peptide Res.，65，375-383，2005，其内容通过引用并入本文。

表2

1	2	3	4	5
					D	D	A	D	D
E	E	D	E	E
					F	G	E	H	H
G	K	G	N	K
					K	P	H	R	M
Q	Q	M	S	N
					R	R	R	T	R
S	S	S		S
						T	T

就N-端脂氨基酸的立体化学而言，脂肽可以是RR-或RS-立体异构体，或它们的混合物。脂肽可以是水溶性的。

脂肽可以是化合物CBLB601或CBLB612，两者都具有通式：

其中X分别是SKKKK和VQGEESNDK。

(2)脂多糖和脂糖

脂多糖或脂糖可以如本文所述用作试剂。脂多糖可以是下式的化合物：

其中，

R₁代表H或-CO-R₄，

R₂、R₃和R₄独立地是H或任选取代的脂肪族化合物；

X是H或多糖；和

Z是S或CH₂。

脂多糖或脂糖可以包含两个或三个脂肪酸。R₂、R₃和R₄的脂肪族取代基可以包含从6至20个碳原子。R₂、R₃和R₄可以是C₆-C₂₀烷基、C₆-C₂₀烯基，或C₆-C₂₀炔基。R₂、R₃和R₄的烷基取代的代表性实例包括C₆、C₈、C₉、C₁₀、C₁₂、C₁₄和C₁₆。R₂、R₃和R₄的烯基取代的代表性实例包括C_10:1 ^D1 反式，C_18:1 ^D9和C_18:2 ^D9，12。

脂多糖可以分离自革兰氏阴性细菌的细胞壁。脂多糖(LPS)(也称作内毒素)可以是复合糖脂，重约10Kd。LPS的基本结构可以包含三个定义相对清晰的区域，并且在所有革兰氏阴性细菌中相似。三个区域可以是O-抗原部分、多糖核心和脂A(参见图1)。O-抗原部分可以包含重复多糖单元，每个单元包含2-6个糖。O-抗原部分在革兰氏阴性种之间变化相当大，并且因此根据与特定单克隆抗体的结合，可以用作个体细菌菌种的标记。多糖核心可能位于O-抗原和脂A之间，可以是包含代表性糖如葡萄糖、N-酰基葡萄糖胺和半乳糖的有支链多糖。不同于O-抗原部分，在核心区域可以仅有不明显的变化，在接近脂A的内核区域结构高度保守。LPS分子的最高度保守部分可以是脂A、二糖二磷酸盐，其上附着有长链脂肪酸。在人类中，这可以包括细胞因子的诱导、发烧、白细胞增多、白细胞的动员与活化、血管损伤、血管舒张、血管内血凝固和器官损伤。

b.放射防护剂

本文所述组合物还可以包含放射防护剂。可以使用放射防护剂增加对离子放射的保护范围。

可以使用放射防护剂处理接触放射的影响。放射防护剂可以是抗氧化剂、自由基清除剂、细胞因子、鞭毛蛋白和潜在的TGF。放射防护剂还可以是能诱导细胞抗氧化剂蛋白质表达的细胞因子，所述蛋白质如过氧化锰歧化酶(MnSOD)和金属硫因。

放射防护剂还可以是抗氧化剂和自由基清除剂，其可以包括硫醇，比如半胱氨酸、巯基乙胺、谷胱甘肽和胆红素；氨磷汀(WR-2721)；维生素A；维生素C；维生素E；以及类黄酮如印度圣罗勒(Ocimum sanctum)、荭草苷和胡芦巴苷。

放射防护剂可以是细胞因子和生长因子的组合物，其通过补充和/或保护对放射敏感的干细胞群体而赋予放射防护能力。放射防护剂可以是细胞因子，其可以包括干细胞因子(SCF、c-kit配基))、Flt-3配基、白细胞介素-1片段IL-1b-rd和角化细胞生长因子(KGF)。

放射防护剂还可以刺激免疫细胞的增殖。放射防护剂可以是5-AED(5-熊烯二醇)，其为类固醇，可以刺激细胞因子和合成化合物的表达，如三氯(二氧乙烯-O，O’-)碲酸铵(AS-101)。放射防护剂可以是潜在的TGF 、鞭毛蛋白和鞭毛蛋白衍生物，其如国际专利申请PCT/US1004/040656和PCT/US2004/040753，和美国专利申请60/693,826中所示，是具有NF-B活性的强诱导剂，所述文献内容通过引用并入本文。

c.HSC共刺激剂

本文所述组合物还可以包含HSC的共刺激剂。例如，组合物可以与外源生长因子和细胞因子联合施用，所述生长因子和细胞因子经过专门选择，可以实现特定的效果。共刺激剂可以是生长因子和细胞因子，其刺激可以使用的细胞类型的增殖和分化。共刺激剂可以是白细胞介素-1、2、3、4、5、6、7、9、10、11、12、13和17，其参与淋巴细胞的分化。白细胞介素3和4参与柱状细胞的分化。

共刺激剂可以是粒细胞巨噬细胞菌落刺激因子(GMCSF)、白细胞介素-3和白细胞介素-5，其参与嗜酸红细胞的分化。共刺激剂还可以是GMCSF、巨噬细胞菌落刺激因子(MCSF)和IL-3，其参与巨噬细胞的分化。共刺激剂还可以是GM-CSF、GCSF和IL-3，其参与嗜中性粒细胞的分化。共刺激剂还可以是GMSCF、IL-1、IL-3、IL-6、IL-8、PIXY-321(GM-CSF/IL-3融合蛋白质)、巨噬细胞炎性蛋白质、干细胞因子、血小板生成素、生长相关致癌基因、IL-11和TPO，其参与血小板的分化。共刺激剂还可以是Flt3配基，其参与树突细胞生长。共刺激剂还可以是GMCSF、IL-3和红细胞生成素，其参与红血球的分化。共刺激剂可以是SCF、Flt3配基、G-CSF、IL-3、IL-6和IL-11，其恢复原始的多能祖细胞，所述祖细胞能维持造血作用。共刺激剂可以是抗生素、维生素、草药提取物、抗炎剂、葡萄糖、退热剂、止痛剂。

组合物可以与其他共刺激剂如AMD3100(1，1’-[1，4-亚苯基-双(甲基-烯基)-双]1，4，8，11-四氮杂环十四烷)及其衍生物或美国专利6,987,102中公开的其他共刺激剂一起使用，所述文献的内容通过引用并入本文。AMD3100是CXCR4化学因子受体的拮抗剂。这个化合物可以干扰骨髓基质细胞衍生SDF-1与CXCR4在干细胞上的结合，导致HSC从骨髓释放至循环中。

4.造血干细胞的鉴别

还可以使用方法鉴别和从骨髓、外周血、脐带血或胚胎干细胞分离HSC。所述方法可以包括对有需要的哺乳动物或人施用试剂，增加骨髓中HSC的数目，并将这些细胞从骨髓转移至血流。所述方法可以进一步包括从血液分离HSC。

尽管不受理论的束缚，血流中干细胞群体可以是不同种类的，并且可以包括一些HSC，这些HSC是真正的长期自体再生干细胞，一些较短期的祖细胞和一些非干细胞。干细胞还可以类似很多其他血液或骨髓细胞。HSC的鉴别需要检测是否存在特定的细胞表面标记。HSC可以差异表达分子标记如Sca-1、CD27、CD34、CD38、CD43、CD90.1、CD117(c-Kit)、AA4.1、MHC类I、CD150、Lin、CD45RO、CD45RA、CD59、CD90、CD109、CD133、CD166和HLADR。

鼠科动物和人的HSC的细胞表面标记性质可能不同。表1说明了对于小鼠和人HSC特有的细胞表面标记，其在体内和体外以未分化状态存在。当HSC开始***并发展成为不同的细胞系时，细胞表面标记和它们的表达水平可能改变。

表3未分化HSC的细胞表面标记。

小鼠	人
		CD34^低/-	CD 34⁺
SCA-1⁺	CD59⁺
		CD90.1，Thy1^+/低	Thy1⁺
Flk2/flt3^-	CD38^低/-
		CD117，C-kit⁺	C-kit⁺
lin^-	lin^-

Lin^-细胞缺乏13至14个不同的成熟血液

系标记

例如，已经开发了几种标记组合物，其可以作为鼠科动物HSC的指示剂，包括[CD117^高、CD90.1^低、Lin^负/低、Sca-1^正、Flk2/flt3^-]，[CD90.1^低、Lin^负、Sca-1^正罗丹明123^低]，[CD34^负/低、CD117^正、Sca-1^正、Lin^负]，和使用Hoechst染料的“边缘群体”细胞。这些组合物的特定检测可以将HSC纯化至接近同质程度。

可以通过荧光激活细胞分选(FACS)选择[CD34^负/低、CD117(c-kit)^正、Sca-1^正、Lin^负]，其中同时鉴别和分离单独的几个造血细胞群体：包含普通骨髓祖细胞(CMP)的[CD 117(c-kit)^正、Lin^负](KL)群体；由长期HSC(LT-HSC)组成的[CD117(c-kit)^正、Sca-1^正、Lin^负、CD34^负/低](KSL/CD34^-)群体；和包含短期HSC(ST-HSC)具有持续淋巴骨髓组织生成能力的专能祖细胞(MPP)的[CD117(c-kit)^正、Sca-1^正、Lin^负、CD34^正](KSL/CD34⁺)群体。

还可以使用代谢标记物/染料如罗丹明123、Hoeschst33342、Pyronin-Y和BAAA检测HSC的细胞表面标记物。还可以使用携带荧光标记和分离自包含FACS的骨髓的单克隆抗体检测HSC。

5.受压或死亡细胞的置换

通过应用用于增加HSC特性的方法，还提供用于置换由于异常状况或压力而受损或死亡的细胞的方法。这些受损或死亡细胞可以是淋巴、骨髓或红细胞系的血细胞。这些受损或死亡细胞可以是红血球(血红细胞)、血小板、粒细胞(比如嗜中性粒细胞、嗜碱细胞和嗜酸红细胞)、巨噬细胞、B-淋巴细胞、T-淋巴细胞或自然杀伤细胞。这些受损或死亡细胞可以是已分化细胞如肌细胞(骨骼肌细胞和心肌细胞)、脑细胞、肝细胞、皮肤细胞、肺细胞、肾细胞、肠细胞或胰腺细胞。

能引起细胞受损或死亡的状况、压力或治疗的代表性实例可以包括癌症治疗，例如放射疗法或化学疗法；温度休克；接触有害剂量的放射线，例如在核能站、国防工业或放射性药物生产中的工人，或士兵的职责；细胞老化；创伤；中毒；化学或热烧伤，病毒感染，和细菌感染。

可以通过对有需要的患者施用自体或异体治疗方法而完成受损或死亡细胞的置换。将患者自身的干细胞或供体的干细胞返回至患者可以补充或重新注入患者的HSC池。可以在患者细胞受损或死亡之前或之后施用组合物。例如，患者可以用组合物治疗，并且之后可以从患者分离HSC。然后患者可以接触伤害、压力或条件。患者之后可以施用他/她自身分离的HSC。相似地，可以通过捐赠者完成方法。可以对捐赠者施用组合物。之后，可以从捐赠者分离HSC并施用给患者。

a.在癌症治疗中处理受损或死亡细胞

由于癌症或癌症治疗，异常状况可能损害正常的组织和细胞。例如，可以使用方法对接受化学疗法的患者提供干细胞。清除患者癌细胞群体的癌症治疗可以消除患者的骨髓干细胞。将患者自身或捐献者储存的干细胞返回至患者，可以补充或重新注入患者的体内HSC池。方法可以增加HSC的数目，并将这些细胞从骨髓动员至血流，并且可以允许使用更大剂量的癌症治疗如化学或放射疗法，但是风险比骨髓移植小。

(1)自体或异体干细胞群体移植

可以在进行癌症治疗前对患者施用组合物，或者对捐赠者施用组合物。血或外周血白细胞(PWBC)，其可以包含含HSC的干细胞群体，可以分离自患者或捐赠者。可以在施用组合物之后和癌症治疗之前从患者分离细胞。自体或异体干细胞群体可以储存备用。干细胞群体稍后可以对于曾经接受过癌症治疗的患者施用。此外，储存的自体干细胞可以用于移植中。可以在造血骨髓干细胞移植中使用组合物。组合物可以在免疫抑制治疗之前、过程中和之后提高移植的成功率。自体干细胞移植具有移植排斥和感染的风险更低的优势，因为免疫功能的恢复充分。患者出现移植物抗宿主病的几率非常低，如同捐赠者与受体患者是同一个体。

(2)化学疗法

癌症治疗可以包含使用细胞毒素试剂或抑制细胞试剂，或其组合物。细胞毒素试剂可以防止癌细胞通过以下方式繁殖：(1)干扰细胞复制DNA的能力和(2)诱导癌细胞中的细胞死亡和/或凋亡。抑制细胞试剂通过调节、干扰或抑制细胞信号传导过程而起作用，所述过程调节细胞的繁殖。

可以用作细胞毒素试剂的化合物类别包括下述：烷化剂(包括，无限制地，氮芥、次乙亚胺衍生物、烷基磺酸盐、亚硝基脲和三氮烯)：尿嘧啶氮芥、氮芥、环磷酰胺(

)、异环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、派泊溴烷、三乙烯-三聚氰酰胺、三乙烯三胺硫磷、白消安、卡氯芥、洛莫司汀、链脲佐菌素、达卡巴嗪和替莫唑胺；抗代谢物(包括，无限制地，叶酸拮抗剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物和腺苷脱氨酶抑制剂)：甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、氟脲苷、阿糖胞苷、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、磷酸氟达拉滨、喷司他丁和吉斯他滨；天然产物及其衍生物(例如，长春碱、抗肿瘤抗生素、酶、淋巴因子和鬼臼素)：长春碱、长春新碱、长春地辛、博莱霉素、更生霉素、道诺霉素、阿霉素、表柔比星、依达比星、ara-c、紫杉醇(紫杉醇以

商业提供)、光神霉素、脱氧助间型霉素、丝裂霉素c、1-左旋天冬酰胺、干扰素(优选IFN-)、依托泊苷和替尼泊苷。

其他增殖细胞毒素剂为诺维本、CPT-11、阿那曲唑、来曲唑、卡培他滨、reloxafine、环磷酰胺、异环磷酰胺和droloxafine。

微管影响剂可以干扰细胞有丝***，并且由于细胞毒性而在本领域公知。可以使用的微管影响剂包括但不限于，allocolchicine（NSC 406042)、halichondrin B(NSC 609395)、秋水仙碱(NSC 757)、秋水仙碱衍生物(例如，NSC 33410)、海兔毒素10(NSC 376128)、美登素(NSC 153858)、根瘤菌素(NSC332598)、紫杉醇(

NSC 125973)、

衍生物(例如，衍生物(例如，NSC 608832)、硫代秋水仙碱NSC 361792)、三苯甲游基半胱氨酸(NSC83265)、硫酸长春碱(NSC 49842)、硫酸长春新碱(NSC 67574)、天然和合成埃博霉素，包括但不限于埃博霉素A、埃博霉素B和discodermolide(参见Service，(1996)Science，274：2009)、雌莫斯汀、诺考达唑、MAP4等。这些试剂的实例也在Bulinski(1997)J.Cell Sci.110：30553064；Panda(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94：10560-10564；Muhlradt(1997)Cancer Res.57：3344-3346；Nicolaou(1997)Nature 387：268-272；Vasquez(1997)Mol.Biol.Cell.8：973-985；和Panda(1996)J.Biol.Chem 271：29807-29812中描述。

细胞毒素剂也适合，如epidophyllotoxin；抗肿瘤酶；拓扑异构酶抑制剂；甲基苄肼；米托蒽醌；铂配合物如顺铂和卡铂；生物响应修正剂；生长抑制剂；抗激素治疗剂；甲酰四氢叶酸；替加氟；和造血生长因子。

还可以使用激素和类固醇(包括合成类似物)作为细胞抑制剂：17α-炔雌醇、己烯雌酚、***、强的松、氟羚甲基***、屈他维酮丙酸酯、睾内酯、甲地孕酮乙酸酯、甲强龙、甲基***、氢化波尼松、去炎松、三对甲氧苯氯乙烯、羟孕酮、氨苯哌啶酮、雌莫司汀、甲孕酮、亮丙瑞林、氟他胺、托瑞米芬和诺雷德。

其他细胞抑制剂为抗血管新生剂，比如基质金属蛋白酶抑制剂，也包括其他VEGF抑制剂，比如抗VEGF抗体和小分子如ZD6474和SU6668。还可以利用来自Genentech的抗Her2抗体。合适的EGFR抑制剂为EKB-569(不可逆抑制剂)。还包括对于EGFR具有免疫特异性的Imclone抗体C225，和src抑制剂。

还适用的细胞抑制剂为

(比卡鲁胺，Astra Zeneca)，其赋予男性荷尔蒙依赖型癌症不可增殖性。细胞抑制剂的另一个实例是抗***

其抑制***依赖型乳癌的增殖或生长。细胞增殖信号传导的抑制剂是细胞抑制剂。代表性的实例包括表皮生长因子抑制剂、Her-2抑制剂、MEK-1激酶抑制剂、MAPK激酶抑制剂、PI3抑制剂、Src激酶抑制剂和PDGF抑制剂。

(3)癌症的放射治疗

癌症治疗可以包含放射治疗。放射治疗可以是外部光波辐射、内部放射治疗或适形放射治疗，其中使用计算机将放射光波定型，以符合肿瘤的形状。放射治疗中使用的放射线可以来自多种来源，包括x-射线、电子束或伽马射线。在放射治疗中，放射线施用的剂量和时间的掌握能够并且将依赖癌症的位置和程度而变化。在放射治疗中，组合物可以与放射防护剂一起施用，如上所述。

b.化学治疗/放射和/或抗病毒治疗，用于治疗HIV感染

方法可以包含施用组合物，其可以增加骨髓中HSC的数目，并将这些细胞转移至血流，以减轻或治疗与免疫缺陷治疗有关的化学疗法或放射疗法的症状。可以对已接受针对AIDS的清髓化学疗法或放射疗法的患者施用组合物。例如，可以对患者施用组合物，从患者的骨髓转移HSC，或增加HSC的数目。然后可以通过白细胞分离术从外周血收集动员的HSC。然后可以使用抗CD34抗体，通过免疫吸收从收集的外周血富集HSC。可选地，可以通过在可以刺激干细胞增殖的试剂存在的情况下，通过培养富集的HSC而实现体外扩增。在施用清髓化学疗法或放射疗法后，富集的且任选地扩增的HSC可以返回至患者的循环血，并注入骨髓。

此外，这个方法进一步任选地包含对患者施用抗HIV化合物，比如抗病毒试剂如AZT、可溶CD4和AIDS病毒的CD4定向阻断剂或反义或抗原寡核苷酸，在将富集的和任选地扩增的HSC返回至患者的循环血之前和之后均可。这个步骤起“清扫”作用，防止残余的病毒感染新近返回的干细胞的后代。

c.细胞老化的调节

本文所述方法可以增加HSC的数目，并将这些细胞转移至血流。自体干细胞可以分离自血液或外周白细胞，并施用以替换由于细胞老化而受压或死亡的细胞。

d.放射线

本文所述方法可以置换由于接触放射线而受压或死亡的细胞。方法还可以置换由于放射疗法而受压或受损的细胞。

接触离子辐射(IR)可以是短期或长期的，可以作为单剂量或多剂量应用于全身或局部。因此，核事故或军事袭击可能涉及接触单独高剂量的全身辐射(有时随之而来的是长期的放射性同位素中毒)。相似地，在需要通过从宿主血液前体“清除”骨髓而为捐赠者的骨髓制备宿主的造血器官时，单独高剂量的放射线通常用于骨髓移植或者的预处理。

在分子和细胞水平，放射线粒子可以导致DNA的断裂和DNA、蛋白质、细胞膜和其他大分子结构之间的交联。致电离辐射还可以通过产生自由基和活性氧分子(ROS)而诱导对细胞组分的二级损伤。多个修复***可以抵消这种损伤，比如几种恢复DNA完整性和保真度的DNA修复途径，和清除自由基和ROS并降低氧化蛋白质和脂肪的抗氧化剂化合物和酶。存在细胞检查点***，检测细胞缺陷并延迟细胞循环进程，直至损伤修复或确定细胞生长停滞或者到达程序化的细胞死亡(凋亡)。

在生物体水平，低水平和中等水平放射线的即时效应主要由于细胞死亡而引起，细胞死亡可以导致辐射诱导的炎症。在更高的放射线水平，所谓的造血和胃肠综合征导致短期的辐射诱导死亡。由造血细胞及其祖细胞的损失表征造血综合征，从而不可能再生血液和淋巴***。死亡通常作为感染(由于免疫抑制)、出血和/或贫血的结果而发生。如下表征胃肠综合征：肠上皮细胞中的大量细胞死亡，主要在小肠中，然后肠壁瓦解，由于菌血病和脓血症而死亡。造血综合征出现在较低辐射剂量时，并且导致相比胃肠综合征更延迟的死亡。非常高剂量的辐射能通过引起神经元细胞恶化而引起几乎瞬时的死亡。

本文所述方法还可以增加对于致电离辐射的保护范围。

e.烧伤治疗

方法可以包含施用组合物，所述组合物可以增加骨髓中HSC的数目，并将这些细胞动员至血流，减轻或治疗烧伤。方法可以包含增加HSC群体的特性和分离外周血白细胞。外周血白细胞可以包含自体干细胞，其可以对烧伤的哺乳动物施用。自体干细胞可以是营养因子的来源，所述营养因子可以促进烧伤处组织的再生。烧伤可以与接触放射线有关。

6.疾病的治疗

还提供了用HSC治疗疾病的方法。方法可以包含施用组合物，其可以增加骨髓中HSC的数目，并将这些细胞转移至血流置换患病细胞。

a.重新注入造血细胞池

可以在治疗疾病的方法或需要重新注入红细胞、骨髓细胞或淋巴造血细胞池的状况中使用组合物。例如，可以在治疗疾病的方法或当需要HSC移植如骨髓移植进入动物或人体时的状况中使用组合物。可以使用组合物恢复或防止客体中造血细胞数目的不足。不足可以产生自，例如，良性疾病或状况，基因异常，疾病，压力，化学疗法，或者来自放射治疗。

方法涉及与将动员的HSC移植进入患者中所述相同的步骤，其中患者已经接受了如上所述针对AIDS的化学疗法或放射疗法。

b.癌症治疗

方法可以包含施用组合物减轻或治疗癌症，所述组合物可以增加骨髓中HSC的数目，并将这些细胞转移至血流。癌症可以是恶性血液病，无限制地包括，淋巴系的血液肿瘤，包括白血病、急性淋巴白血病、急性成淋巴细胞白血病、B-细胞淋巴瘤、T-细胞淋巴瘤、Hodgkins淋巴瘤、非Hodgkins淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤、组织细胞淋巴瘤和Burketts淋巴瘤；骨髓系的血液肿瘤，包括急性和慢性骨髓性白细胞、骨髓增生异常综合征、骨髓淋巴瘤和前髓细胞淋巴瘤。可以治疗的其他癌症包括下述：癌，包括膀胱癌(包括加速和转移性膀胱癌)、乳癌、结肠癌(包括结肠直肠癌)、肾癌、肝癌、肺癌(包括小细胞和非小细胞肺癌和肺腺癌)、卵巢癌、***癌、睾丸癌、泌尿生殖道癌、淋巴***癌、喉癌、胰腺癌(包括外分泌胰腺癌)、口腔癌、咽癌、食道癌、胃癌、小肠癌、结肠癌、直肠癌、胆囊癌、子***、甲状腺癌和皮肤癌(包括扁平细胞癌)；中枢和外周神经***的肿瘤，包括星细胞瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；***来源的肿瘤、包括纤维肉瘤、囊性腺瘤、和骨肉瘤；和其他肿瘤、包括黑素瘤、着色性干皮病、鳞状细胞癌、甲状腺滤泡癌和畸胎癌。

c.血症/自身免疫疾病

方法可以包含施用组合物减轻或治疗恶性疾病或状况的症状，所述组合物可以增加骨髓中HSC的数目，并将这些细胞转移至血流。恶性疾病或障碍可以与造血***有关，无限制地包括，血红蛋白病、骨髓衰竭综合征、免疫缺陷、代谢/贮积症、嗜中性粒细胞疾病、血细胞疾病，病毒感染如HIV感染和自身免疫疾病。血红蛋白病可以是地中海贫血(例如，输血依赖型地中海贫血、重型地中海贫血等)或镰状细胞血症血症地中海贫血或镰状细胞疾病。

7.组合物的施用

使用本文所述的方法施用组合物可以是经口服、经肠胃外、经舌下、经透皮、经直肠、经粘膜、局部、吸入、经口腔施用，或它们的组合。肠胃外施用包括但不限于、静脉内、动脉内、腹膜腔内、皮下、肌肉内、椎管内和关节内投药。对于兽医用途，可以根据正常的兽医应用，以适当的可接受的制剂施用组合物。兽医能容易地确定对于特定的动物最合适的剂量形式和施用途径。可以对人类患者、猫、狗、大型动物或鸟施用组合物。

可以与其他治疗同时或有节奏地使用组合物。术语“同时”或“同时地”，如本文所使用的，表示组合物和其他治疗彼此施用的时间可以在48小时内，优选24小时，更优选12小时，更优选6小时，和最优选3小时或者更少。术语“有节奏地”，如本文所使用的，表示组合物在不同于其他治疗的时间施用，并且以相对于重复施用的一定频率施用。

可以在接触异常状况、压力或治疗之前的任何点施用组合物，包括之前120小时、118小时、116小时、114小时、112小时、110小时、108小时、106小时、104小时、102小时、100小时、98小时、96小时、94小时、92小时、90小时、88小时、86小时、84小时、82小时、80小时、78小时、76小时、74小时、72小时、70小时、68小时、66小时、64小时、62小时、60小时、58小时、56小时、54小时、52小时、50小时、48小时、46小时、44小时、42小时、40小时、38小时、36小时、34小时、32小时、30小时、28小时、26小时、24小时、22小时、20小时、18小时、16小时、14小时、12小时、10小时、8小时、6小时、4小时、3小时、2小时或1小时。还可以在接触后的任何时间点施用组合物，包括接触后约1小时、2小时、3小时、4小时、6小时、8小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、24小时、26小时、28小时、30小时、32小时、34小时、36小时、38小时、40小时、42小时、44小时、46小时、48小时、50小时、52小时、54小时、56小时、58小时、60小时、62小时、64小时、66小时、68小时、70小时、72小时、74小时、76小时、78小时、80小时、82小时、84小时、86小时、88小时、90小时、92小时、94小时、96小时、98小时、100小时、102小时、104小时、106小时、108小时、110小时、112小时、114小时、116小时、118小时和120小时。

可以在HSC处理前对捐赠者施用组合物，包括处理前约120小时、118小时、116小时、114小时、112小时、110小时、108小时、106小时、104小时、102小时、100小时、98小时、96小时、94小时、92小时、90小时、88小时、86小时、84小时、82小时、80小时、78小时、76小时、74小时、72小时、70小时、68小时、66小时、64小时、62小时、60小时、58小时、56小时、54小时、52小时、50小时、48小时、46小时、44小时、42小时、40小时、38小时、36小时、34小时、32小时、30小时、28小时、26小时、24小时、22小时、20小时、18小时、16小时、14小时、12小时、10小时、8小时、6小时、4小时、3小时、2小时或1小时。

8.组合物的配制

方法可以包含施用组合物减轻或治疗疾病或状况的症状，所述组合物可以增加骨髓中HSC的数目，并将这些细胞转移至血流。本文提供的组合物可以是常规方式配制的片剂或含片形式。例如，用于口服的片剂和胶囊可以包含常规赋形剂，包括但不限于，结合剂、填充剂、润滑剂、崩解剂和润湿剂。结合剂包括但不限于，糖浆、***胶、白明胶、山梨醇、黄芪胶、淀粉粘液和聚乙烯吡咯烷酮。填充剂包括但不限于，乳糖、糖、微晶纤维素、玉米淀粉、磷酸钙和山梨醇。润滑剂包括但不限于，硬脂酸镁、硬脂酸、云母、聚乙二醇和硅。崩解剂包括但不限于，马铃薯淀粉和羧甲淀粉钠。润湿剂包括但不限于，十二烷基硫酸钠。可以根据本领域公知的方法将片剂包被。

本文提供的组合物还可以是液体制剂，包括但不限于，水或油悬浮液、溶液、乳化液、糖浆和酏剂。组合物还可以是与水或其他合适的载体在使用前形成的干燥产品。这样的液体制备物可以包含添加剂，包括但不限于，悬浮剂、乳化剂、无水载体和防腐剂。悬浮剂包括但不限于，山梨醇糖浆、甲基纤维素、葡萄糖/糖浆、白明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶和氢化食用脂肪。乳化剂包括但不限于，卵磷脂、单油酸山梨糖醇酯和***胶。无水载体包括但不限于，食用油、杏仁油、分馏椰油、油脂、丙二醇和乙醇。防腐剂包括但不限于，对羟基苯甲酸甲酯或丙酯和山梨酸。

本文所提供的组合物还可以配制成栓剂，其可以包含栓剂基底，包括但不限于，可可油或甘油酯。本文所提供的组合物还可以配制成吸入剂，其可以为下述形式，包括但不限于，溶液、悬浮液或乳液，其可以作为干粉或以气雾剂形式使用挥发剂施用，比如二氯二氟甲烷或三氯氟甲烷。本文所提供的组合物还可以配制成透皮制剂，包含含水或不含水载体，包括但不限于，霜、软膏、洗剂、糊剂、加有药品的膏药、碎片或膜。

本文所提供的组合物还可以配制用于肠胃外施用，包括但不限于，通过注射或连续输液施用。用于注射的制剂可以是下述形式：含油或含水载体中的悬浮液、溶液或乳液，并且可以包含制剂，所述制剂包括但不限于，悬浮剂、稳定剂和分散剂。还可以以干粉形式提供组合物，用于与合适的载体重组，所述载体包括但不限于，无菌、无热源水。

本文所通过的组合物还可以配制成保存制备物，其可以通过植入或通过肌肉内注射而给药。组合物可以与合适的聚合或憎水材料(例如可接受的油中的乳液)、离子交换树脂，或难溶衍生物(例如难溶盐)一起配制。

9.组合物的剂量

方法可以包含对需要的患者施用治疗有效量的组合物。在治疗中使用所需的治疗有效量随着待处理状况的本质、期望向血流中增加HSC的时长，和患者的年龄/状况而变化。然而，通常地，成人治疗所使用的剂量通常在0.001mg/kg至约200mg/kg每天的范围中。剂量可以为约1μg/kg至约100μg/kg每天。期望的剂量可以方便地以单剂量施用，或者以合适的间隔多次施用，例如每天两次、三次、四次或更多的亚剂量。可以期望或要求多个剂量。

剂量可以是任何剂量，包括但不限于，约1μg/kg、25μg/kg、50μg/kg、75μg/kg、100μg/kg、125μg/kg、150μg/kg、175μg/kg、200μg/kg、225μg/kg、250μg/kg、275μg/kg、300μg/kg、325μg/kg、350μg/kg、375μg/kg、400μg/kg、425μg/kg、450μg/kg、475μg/kg、500μg/kg、525μg/kg、550μg/kg、575μg/kg、600μg/kg、625μg/kg、650μg/kg、675μg/kg、700μg/kg、725μg/kg、750μg/kg、775μg/kg、800μg/kg、825μg/kg、850μg/kg、875μg/kg、900μg/kg、925μg/kg、950μg/kg、975μg/kg或1mg/kg。

10.基因疗法

本文提供了用于在具有多种遗传和获得疾病的患者中进行基因治疗的方法，所述方法使用组合物，其可以增加骨髓中HSC的数目，并将这些细胞动员至血流。在这个方法中，可以通过施用组合物，将HSC从患者的血流转移。然后通过白细胞除去法收集外周血。可以通过使用抗-CD34抗体的免疫吸附，进一步从收集的外周血富集HSC。任选地，然后在刺激干细胞增殖的试剂存在的情况下，通过培育而将富集的HSC回体扩增。用amphotrophic逆转录病毒载体，或其他合适的载体，其表达可以改善遗传或获得性疾病的基因，转换富集的和可选地扩增的干细胞。任选地，载体还可以携带表达的选择性标记，其中可以在选择性标记存在的情况下筛选转换成功的细胞。然后将转换和可选地筛选的HSC返回至患者的循环血，并将其注入骨髓。

本发明有多个方面，可通过下述非限定性实例阐述。

实施例

实施例1

放射防护剂中的脂肽

脂肽能保护动物免受辐射的影响。如下所述，在辐射后通过脾脏重量检测免疫***，证明了这种作用。为ICR小鼠注射PBS或3μg CBLB601，然后接触0或6Gy全身辐射(TBI)。每3天杀死来自每种处理中的一组五只小鼠，去除它们的脾脏和胸腺并称重。将脾脏重量根据每只相应动物的体重归一化。图2表示来自辐射对照和CBLB601-处理小鼠的脾脏重量的平均值。对于接触0或6Gy TBI的小鼠，在辐射前24小时经肌肉施用PBS或每只小鼠3μg CBLB601，绘制脾脏重量比体重的图。在13-14天后，接触6Gy辐射的PBS处理小鼠的脾脏恢复至正常重量。相比之下，接触同样量辐射的CBLB601处理小鼠的脾脏到8天恢复至正常重量。

实施例2

从脂肽处理小鼠输入的血液能保护对抗辐射

从脂肽处理小鼠输入的血液能保护受体小鼠免受辐射的影响。通过每天为小鼠注射50μg脂肽CBLB612，连续注射三天，证明了这一作用。为了控制CBLB612的作用，每天为一组小鼠注射100μg/kg G-CSF或PBS，连续注射四天。

在最后一次注射后，通过心脏穿刺从处理小鼠采血，并将每组采集的血液混合(即，PBS阴性对照、G-CSF阳性对照和CBLB612实验)。接着，将外周血白细胞(PWBC)分级，向辐射受体小鼠的尾静脉注入200μL分级的PWBC。输血的PWBC的量与来自一只小鼠的量相等。作为另外的对照，一组小鼠不接受输血，而另一组注射来自未试验小鼠的3×10⁶个骨髓细胞。

观察来自五个测试组(即，PBS-、G-CSF-和CBLB612-处理小鼠输血、不输血和骨髓注射)的小鼠，其先前在输血前2小时用9Gy(C57/B6小鼠的致命剂量)辐射，并且在输血后评价它们的存活率。表4描述了实验结果。

表4

存活小鼠的数目

21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

化合物 0天

天天天天天天天天天天

3/23 4/13 4/14 4/15 4/16 4/17 4/18 4/19 4/20 4/21 4/22

来自PBS处理小鼠的血 3 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

来自G-CSF处理小鼠的血 5 5 5 5 5

来自CBLB612处理小鼠的血 5 5 5 5 5

未注射的对照 3 1 1 1 1

注射骨髓 5 5 5 5 5

未接受输血或用来自PBS处理小鼠的PWBC输血的小鼠在照射后21天表现出较差的存活率。相反，用分离自CBLB612处理小鼠的PWBC输血的所有小鼠到照射后的24天仍然存活。这个存活率与用分离自G-CSF处理小鼠的PWBC处理的小鼠和在照射前用来自未试验小鼠的骨髓细胞注射的小鼠的存活率相等。这说明来自脂肽处理小鼠的血液能在输入照射受体小鼠时保护其免受致命水平照射的影响。

实施例3

脂肽能增加HSC数目和转移

下述结果证明，脂肽事实上能增加HSC数目，并将它们从骨髓(BM)转移至血流。通过如下监控BM细胞和外周血细胞中HSC的已知标记而观察到这种作用。从用CBLB601处理的小鼠或对照小鼠分离细胞，然后通过荧光激活细胞分选(FACS)分析细胞。使用FACS筛选呈现CD117(c-kit)^阳性和Lin^阴性的KL细胞群体，其标记普通骨髓祖细胞；呈现CD117(c-kit)^阳性、Sca-1^阳性、Lin^阴性和CD34^阴性/低的KSL/CD34^-细胞群体，其标记长期HSC；和呈现CD117(c-kit)^阳性、Sca-1^阳性、Lin^阴性、CD34^阳性的KSL/CD34⁺细胞群体，其标记短期HSC和持续产生淋巴骨髓组织的专能祖细胞，但是优选重构淋巴细胞增殖而不是骨髓组织生成。图3表示相对于对照，CBLB601处理小鼠在BM中c-kit^阳性、KSL细胞、KSL/CD34^-和KSL/CD34⁺细胞的百分比增加，并且在施用CBLB601后72小时达到峰值。因此，通过CBLB601处理可以增加长期和短期HSC细胞群体，以及普通和专能骨髓祖细胞群体。

此外，通过CBLB601处理，将HSC从BM转移至血液。使用FACS分析CBLB601处理与对照小鼠的血液中的细胞群体。图4表示，与对照相比，CBLB601处理小鼠中LSK、LSK/CD34^-和LSK/CD34⁺细胞/mL血液的数目增加。外周血HSC细胞中的增加在用CBLB601处理后72小时达到峰值。因此，这些实验表明，脂肽的放射防护作用受到提高的造血作用的介导。

实施例4

脂肽能转移多种干细胞群体

下述结果证明，脂肽能转移血液中的多种干细胞群体。C57/B6小鼠接受一次皮下(SC)注射或四次每日SC注射50μg CBLB612。从每只小鼠收集血液样品，并使用干细胞群体中常见的下述分子标记，通过FACS分析：Lin、sca-1、c-Kit和CD34。下面的表5显示由FAC分析所得，样本中不同细胞群体细胞数/mL随时间的变化。Lin^-、sca-1⁺和c-Kit⁺(LSK)是针对所有干细胞的普通标记。呈现LSK/CD34^-的细胞是真正的多能长期造血干细胞，而呈现LSK/CD34⁺的细胞是短期HSC和专能祖细胞。

表5注射CBLB612后造血干细胞到血液中的转移动力学(三只动物平均值)

C57/B

L6对 612 612 612 612 612 612

照 24h 48h 72h 96h 120h 4SC

MNC x 10⁶/ml 4 2 3 7 9 8 9

LSK 5 9 2 136 111 97 338

LSK/CD34- 3 7 1 54 22 62 52

LSK/CD34+ 2 3 1 81 89 35 286

多能长期造血干细胞、定型祖细胞干细胞和普通干细胞的水平增加至用脂肽CBLB612处理后72小时。这些数据证明，脂肽能提高代表几乎所有类型的各种干细胞的水平，并将细胞动员至血液。

实施例5

脂肽能提高猕猴中骨髓中的HSC数目以及至外周血的转移

下述结果证明，脂肽能增加HSC数目并将它们从骨髓(BM)转移至血流。通过监控细胞和猕猴外周血细胞中BM中HSC的已知标记，观察到这种作用。

研究了六只猕猴，测定CBLB612的作用。阳性对照猕猴每天接受皮下剂量为100μg/kg的G-CSF，在0天之前连续四天(即，-4-1天)。在第1天，在接受它们分配的处理之前，从实验猕猴(猴子1-6)抽血。猕猴2-5在第1天肌肉内接受0.25mg/kg CBLB612。猴子6，阴性对照(未实验小鼠)，既不接受G-CSF，也不接受CBLB612。

在试验的2-5天，再从猴子2-6采血。在第1天从猴子6(未试验)，第2天从猴子2，第3天从猴子3，第4天从猴子4，和第5天从猴子6采集骨髓(参见表6)。

表6

BM＝骨髓，PC＝阳性对照

^*在施用CBLB612前，从所有(2-5)猴子采集血样

通过FACS分析来自BM和PB的总白细胞(WBC)的亚群体，筛选呈现CD34⁺(Lin^-CD34⁺CD38^-)标记的造血多能干细胞，所述标记为临床常用的纯化自PB或BM的HSC的标记(参见图6)。表7中阴影单元格说明BM中表达的CD34⁺细胞的水平。表7中未突出显示的单元格表示PB中呈现的CD34⁺细胞的数目。表7表明脂肽能刺激CD34⁺增殖和从BM动员至PB。表7还说明，即使一次BM吸取也能刺激CD34⁺细胞增殖和在PB中的转移。这些数据进一步总结于图5中。图5表明，在用CBLB612处理后，转移至PB的CD34⁺细胞的水平达到峰值。

表7

实施例6

HSC转移是CBLB612剂量依赖型

通过施用与指定分配组中小鼠的平均体重成比例的调整剂量药物证明这一结果。按照预期剂量/kg平均体重计算剂量。通过调整注射物的浓度同时保持注射体积不变而完成剂量的调整。参见表8。

表8化合物的制备

根据表9，所有组在安乐死前一小时接受一次皮下(SC)注射5mg/kgAMD3100。对照组1仅注射5mg/kg AMD3100。对照组2用G-CSF处理，每天SC注射0.1mg/kg，注射四天，在第五天，为小鼠注射AMD3100。对照组8由ICR小鼠组成，接受与对照组2相同的处理。研究组3、4、5和6在采血前72小时，分别以1.2；0.4；0.13和0.04mg/kg的剂量接受一次SC注射。组7在采血前24小时接受一次1.2mg/kg CBLB612的SC注射。研究组9用每天SC注射0.1mg/kg G-CSF处理，注射四天，在采血前72小时一次SC注射1.2mg/kg CBLB612，并在第一次G-CSF注射后第五天，安乐死前一小时一次SC注射5mg/kgAMD3100。

在用单次注射不同剂量CBLB612然后在采血前一小时注射一次AMD3100共处理的C57B1小鼠的外周血中，造血干细胞和祖细胞数目的增加表明，获得最大HSC和祖细胞转移的CBLB612的最小剂量是1.2mg/kg。参见表10和图7-8。这一剂量还获得骨髓中HSC的最大增加。参见表11和图9-10。对于HSC转移，用CBLB612加AMD3100处理C57B1/6NHsd的效率大约比用G-CSF加AMD3100处理高三倍，而小鼠用所有三种化合物进行处理所转移的HSC比用CBLB612加AMD3100的组合，以及G-CSF加AMD3100一起所转移的HSC高两倍。参见表10。用G-CSF加AMD3100，ICR小鼠表现出比C57B1/6NHsd更高效的转移。参见表10。

表10在C57B1小鼠外周血中不同造血干细胞和祖细胞群体的平均数和标准偏差

平均数来自Harlan的9-11周龄C57B1/6NHsd小鼠

WBC总数，7AAD-/ LIN-/sca1- LIN-/kit-/ KSL/ KSL/C

KSL

10^4/ml LIN- /kit+ sca1+ CD34- D34+

PBS对照 440.06 215328 545 5843 51 24 20

AMD3100对照 629.95 254725 1104 40971 238 72 174

G-CSF+AMD3100 790.37 354183 3215 33927 967 186 800

612，1.2mg/kg，72h 1552.69 883328 9919 82532 3262 447 2898

612，0.4mg/1kg，72h 805.90 412675 1808 64526 913 356 606

612，0.13mg/kg，72h 908.56 530552 4262 64057 849 177 711

612，0.04mg/kg，72h 860.27 439053 3508 53310 1079 228 869

612，1.2mg/kg，24h 670.01 302148 1991 47141 670 226 467

ICR，G-CSF+AMD 1713.21 364145 14937 39941 10193 434 9824

G-CSF+612 1048.60 628653 15394 61946 10072 1459 8689

STDEV

PBS对照 89.18 83287 528 1263 39 20 15

AMD3100对照 119.85 42288 481 8492 81 51 62

G-CSF+AMD3100 146.76 126834 1318 4318 538 133 436

612，1.2mg/kg，72h 284.07 212955 5213 45391 1278 225 1119

612，0.4mg/kg，72h 91.29 152849 1491 20025 365 168 257

612，0.13mg/kg，72h 336.08 211661 3077 28548 315 92 382

612，0.04mg/kg，72h 112.75 70877 1428 17371 367 62 354

612，1.2mg/kg，24h 146.07 92627 1828 15919 206 65 156

ICR.G-CSF+AMD 580.45 100699 6563 20748 7393 292 7250

G-CSF+612 119.39 73673 2812 17783 3660 112 3585

表11小鼠骨髓中不同造血干细胞和祖细胞群体的平均数和标准偏差

平均数

7AAD-/ LIN-/sca LIN-/kit- KSL/CD KSL/CD

细胞总数， KSL，

LIN-， 1-/kit+，/sca1+， 34-， 34+，

10^7 X10^4

X10^6 X10^4 X10^4 X10^3 X10^4

PBS对照 4.96 2.55 38.35 12.14 3.53 3.28 3.16

AMD3100对照 4.47 2.39 13.26 15.74 1.37 1.24 1.25

G-CSF+AMD3100 4.32 2.08 26.75 14.60 4.56 3.70 4.21

612，1.2mg/kg，72h 4.65 2.27 51.15 20.39 10.93 6.77 10.35

612，0.4mg/kg，72h 4.77 2.20 31.84 19.32 7.23 7.89 6.54

612，0.13mg/kg，72h 4.72 1.95 24.33 11.85 3.80 1.28 3.71

612，0.04mg/kg，72h 4.32 1.97 23.63 16.19 5.78 3.42 5.48

G-CSF+612 6.19 1.62 30.14 21.46 9.32 3.37 9.09

STDEV

PBS对照 0.92 0.46 5.69 1.82 0.88 0.50 0.81

AMD3100对照 1.86 0.78 10.16 5.91 1.01 0.80 0.94

G-CSF+AMD3100 0.58 0.43 4.65 4.72 0.32 1.30 0.36

612，1.2mg/kg，72h 0.19 0.14 7.23 5.33 2.86 1.54 2.75

612，0.4mg/kg，72h 0.98 0.35 8.34 4.53 2.29 3.08 2.11

612，0.13mg/kg，72h 0.64 0.23 2.83 2.86 1.25 0.13 1.26

612，0.04mg/kg，72h 0.61 0.44 3.24 7.89 0.97 0.79 0.90

G-CSF+612 1.06 0.39 8.40 4.29 3.15 0.99 3.11

用下述方法处理小鼠：采血前72小时一次1.2mg/kg CBLB612的剂量，加每天注射0.1mg/kg G-CSF共四天和在安乐死前一小时一次注射5mg/kgAMD3100，然后发现与用下述两种药物处理比较()：CBLB612和AMD3100或包含AMD1300的G-CSF，HSC的转移具有协同作用(约高6-8倍)。发现导致骨髓中HSC最大增加的最小剂量为1.2mg/kg CBLB612。

实施例7

HSC转移的动力学

在注射CBLB612后，将HSC和祖细胞从骨髓转移至外周血。通过施用与指定分配组中小鼠平均体重成比例的调整剂量药物证明了这一点。按照预期剂量/kg平均体重计算剂量。通过调整注射物的浓度同时保持注射体积恒定从而完成剂量的调整。参见表12。

根据表13，除PBS对照组8外，所有组都在安乐死前一小时接受5mg/kg剂量的AMD3100。对照组7接受6.5mg/kg剂量的AMD3100。阴性对照组8在采血前一小时接受一次200μl PBS的SC注射。研究组1-6在采血前的不同时间点接受一次2mg/kg CBLB12的SC注射。阳性对照组9接受每天SC注射0.1mg/kg G-CSF共四天。

表12化合物的制备

组#

注射日期

化合物

剂量ug/g小鼠

平均小鼠体重(g)

保存溶液浓度

剂量/小鼠

用药次数

额外增加的用药

保存溶液体积

PBS体积

总体积

注射体积

注射途径

5&6

10/18/07 10:00

CBLB612

2

17.53

2.50mg/ml

35.06ug

10

2

168.29ul

2231.71ul

2.40ml

200ul

SC

2

10/29/07 10:00

CBLB612

2

179

2.50mg/ml

35.80ug

5

1

85.92ul

1114.08ul

1.20ml

200ul

SC

3

10/30/07 9:00

CBLB612

2

17.6

2.50mg/ml

35.20ug

5

1

84.48ul

1115.52ul

1.20ml

200ul

SC

1

10/30/07 21:00

CBLB612

2

15.9

2.50mg/ml

31.80ug

5

1

76.32ul

1123.68ul

1.20ml

200ul

SC

4

11/2/07 10:00

CBLB612

2

19

2.50mg/ml

38.00ug

5

1

91.20ul

1108.80ul

1.20ml

200ul

SC

5

10/22/07 9:00

AMD3100

5

17.53

5.00mg/ml

87.65ug

5

1

105.18ul

1094.82ul

1.20ml

200ul

SC

6

10/23/07 9:00

AMD3100

5

17.53

5.00mg/ml

87.65ug

5

1

105.18ul

1094.82ul

1.20ml

200ul

SC

7^*

10/24/07 9:00

AMD3100

5

25

5.00mg/ml

125.00ug

5

1

150.00ul

1050.00ul

1.20ml

200ul

SC

2

10/30/07 9:00

AMD3100

5

17.9

5.00mg/ml

89.50ug

5

1

107.40ul

1092.60ul

1.20ml

200ul

SC

1

10/31/07 8:00

AMD3100

5

15.9

5.00mg/ml

79.50ug

5

1

95.40ul

1104.60ul

1.20ml

200ul

SC

1

11/19/07 15:00

AMD3100

5

21.38

5.00mg/ml

106.90ug

6

1

149.66ul

1250.34ul

1.40ml

200ul

SC

3

11/1/07 8:00

AMD3100

5

16.5

5.00mg/ml

82.50ug

5

1

99.00ul

1101.00ul

1.20ml

200ul

SC

9

11/2/07 9:00

AMD3100

5

19.6

5.00mg/ml

98.00ug

5

1

117.60ul

1082.40ul

1.20ml

200ul

SC

4

11/5/07 9:00

AMD3100

5

18.77

5.00mg/ml

93.85ug

5

1

112.62ul

1087.38ul

1.20ml

200ul

SC

10

11/8/07 9:00

AMD3100

5

20.22

5.00mg/ml

101.10ug

5

1

121.32ul

1078.68ul

1.20ml

200ul

SC

9

10/29-11/01 10:00

4XG-CSF

0.1

18.4

0.30mg/ml

1.84ug

5

1

36.80ul

1163.20ul

1.20ml

200ul

SC

^*施用AMD之前未称重小鼠

表13实验概要

采血前一小时注射一次AMD3100，然后在不同时间点注射一次CBLB612，对C57B1小鼠进行共处理，小鼠外周血中测得的造血干细胞和祖细胞数目表明，在注射CBLB612后约72-96小时出现这些细胞的最大转移。真正的多能HSC(KSL/CD34^-)、ST-HSC(KSL/CD34^-)和定型祖细胞(主要定型为骨髓细胞系；LIN^-/sca1^-/kit⁺)都增加了。参见表14和图11-12。单次注射CBLB612增加了骨髓中HSC的数目，并且在注射后约12-24小时出现峰值。参见表15和图13-15。

表14 C57B1小鼠外周血中不同造血干细胞和祖细胞群体的平均数和标准偏差

平均数

WBC

总数，7AAD-几IN-LIN-/sca1-/kit+LIN-/kit-/sca1+KSLKSL/CD34-KSL/CD34+

10^4/ml

PBS对照 440.06 215328 545 5843 51 24 20

AMD3100对照 962.40 421616 1932 23142 360 56 308

AMD3100+30％ 1111.05 302644 1816 30938 907 63 856

G-CSF+AMD3100 763.05 192186 3493 25679 2615 625 2015

12h 612+AMD3100 558.81 192528 647 17295 649 175 512 一只小鼠为KSL

24h 612+AMD3100 908.56 216045 1392 41923 693 100 587

48h 612+AMD3100 963.11 228528 2173 48581 2250 313 1941

72h 612+AMD3100 954.86 325024 5748 48271 4006 328 3710

96h 612+AMD3100 1741.67 269560 6212 22392 3733 574 3151

120h 612+AMD3100 1442.19 121125 4683 17996 3930 364 3592

STDEV

PBS对照 89.18 83287 527.5 1263 38.9 19.536 14.766

AMD3100对照 219.04 118188 965.1 11701 184 32.622 159.16

AMD3100+30％ 322.48 142796 1039 9048 452 19.682 452.32

G-CSF+AMD3100 109.98 75046 2089 4813 533 263.54 517.66

12h 612+AMD3100 108.12

24h 612+AMD3100 336.08 50984 655.1 10826 355 56.838 336.83

48h 612+AMD3100 190.76 76429 462.3 31068 1333 145.5 1325.4

72h 612+AMD3100 129.58 37064 1178 13005 664 84.876 622.28

96h 612+AMD3100 655.51 123978 2533 21114 2554 244.52 2368.1

120h 612+AMD3100 195.08 31048 1273 6481 1591 45.778 1594.6

表15 C57B1小鼠骨髓中不同造血干细胞和祖细胞群体的平均数和标准偏差平均数

细胞总

7AAD-/LIN-，

数， LIN-/sca1-/kit+LIN-/kit-/sca1+ KSL KSL/CD34-KSL/CD34+

X10^6

10^7

PBS对照 4.96 2.55 383498 121377 35315 3278 31613

AMD3100对照 4.88 2.44 163895 206061 17184 2689 14743

AMD3100+30％ 3.65 2.26 281722 148328 41791 1084 40873

G-CSF+AMD3100 4.81 2.73 298469 232597 85717 2256 84436

12h 612+AMD3100 3.54 3.82 97504 281015 82228 11752 71428

24h 612+AMD3100 3.69 3.35 143400 237956 103700 9930 92231

48h 612+AMD3100 3.33 2.39 364059 259442 87164 3519 84644

72h 612+AMD3100 4.67 2.24 438649 271954 129830 2417 128131

96h 612+AMD3100 5.27 2.38 428666 258125 134957 3623 132801

120h 612+AMD3100 5.37 2.29 394716 217962 103493 4720 98345

STDEV

PBS对照 0.92 0.46 56888 18160 8765 497 8109

AMD3100对照 0.42 0.43 32571 28608 3029 896 3193

AMD3100+30％ 0.30 0.39 28015 35207 10763 272 10537

G-CSF+AMD3100 0.99 0.32 37404 48926 15449 552 15572

12h 612+AMD3100 0.58 0.85 22158 69727 24942 4260 21930

24h 612+AMD3100 0.76 0.59 20687 22863 21014 2119 20246

48h 612+AMD3100 0.32 0.20 38395 27906 15188 912 14523

72h 612+AMD3100 0.97 0.36 76670 42390 15423 540 14793

96h 612+AMD3100 1.88 0.93 138460 83849 43578 1039 43032

120h 612+AMD3100 0.50 0.63 74236 62739 24257 1621 23833

单次注射CBLB612增加了骨髓中HSC的数目，并且在注射后约12-24小时出现峰值。

Claims

1.一种包含脂肽的组合物在制备通过对有需要的哺乳动物施用而提高造血干细胞的转移的药物中的应用，其中所述脂肽是下式的化合物：

其中，

R₁代表H或-CO-R₄，

X是选自下组的肽：SEQ ID NO：8、16-18、20和21；和

Z是S或CH₂。

2.如权利要求1所述的应用，其中R₁是H，并且R₂和R₃是C₁₆脂肪族化合物。

3.如权利要求1所述的应用，其中所述药物与放射防护剂相组合。

4.如权利要求3所述的应用，其中所述放射防护剂是抗氧化剂。

5.如权利要求3所述的应用，其中所述放射防护剂是细胞因子。

6.如权利要求5所述的应用，其中所述细胞因子是干细胞因子。

7.如权利要求3所述的应用，其中所述放射防护剂是鞭毛蛋白。

8.如权利要求3所述的应用，其中所述放射防护剂是TGFβ。

9.如权利要求1所述的应用，其中造血干细胞从骨髓到血流中的转移增加。

10.如权利要求1所述的应用，所述应用提高造血干细胞的转移以治疗疾病。

11.如权利要求10所述的应用，其中所述疾病选自癌症、自身免疫性疾病、贫血、非恶性血液病、维-奥综合征、谢-希综合征、重症联合免疫缺陷SCID、地中海贫血和镰状细胞血症。

12.如权利要求11所述的应用，其中所述癌症选自白血病、淋巴瘤、恶性血液病、乳癌、睾丸癌、成神经细胞瘤、卵巢癌、骨髓瘤和瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。

13.一种从哺乳动物产生自体干细胞群体的方法，所述方法包括：

(a)根据权利要求1的应用提高造血干细胞的转移；和

(b)从哺乳动物分离外周血白细胞，

其中所述外周血白细胞包含自体干细胞群体。