CN101574424B - 一种药物组合物在制备保护胰岛功能药物中的应用 - Google Patents

一种药物组合物在制备保护胰岛功能药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种药物组合物在制备保护胰岛功能药物中的应用，该药物组合物含有以下重量份的生药材：柴胡3-30份、白芍3-15份、枳实3-15份、大黄1-6份、黄芩3-15份、黄连1-12份。

Description

一种药物组合物在制备保护胰岛功能药物中的应用
技术领域
本发明涉及中药领域，具体涉及一种药物组合物在制备治疗糖尿病的药物中的应用。
背景技术
糖尿病是由体内糖、蛋白质和脂肪代谢紊乱而造成的一种慢性进行性终身疾病，其特征性表现为高血糖和糖尿。这种病将导致心脏和肾脏并发症、眼盲和截肢。近年来从临床上观察，糖尿病的发病率正在呈逐年上升趋势。目前，全世界约有1.5亿糖尿病患者，我国目前糖尿病人数已超过4000万。在糖尿病病例中，少数为胰岛素依赖型糖尿病(I型)，大多数为非胰岛素依赖型糖尿病(II型)。大多数的糖尿病患者需要终身服药。
II型糖尿病一旦发生，胰岛功能呈持续退化趋势，最终导致胰岛细胞衰竭。传统的II型糖尿病治疗方案随着胰岛β细胞功能的逐渐衰竭而被动选择药物来尽量控制血糖的方法，不仅不能很好控制患者的血糖而且不可避免胰岛β细胞功能的衰竭和早期出现并发症。因此，在II型糖尿病早期寻找保护胰岛，恢复胰岛自身的调节功能的药物或防治措施成为目前糖尿病研究中的热点。
Fas抗原与Fas配体(Fas-L)组成的Fas***，是将凋亡信号转到入细胞内的主要***之，在自身免疫性疾病中占重要的地位。Fas-L结合Fas抗原后，Fas抗原向细胞内传导凋亡信号，在数小时内通过细胞凋亡途径使靶细胞死亡。目前认为Fas抗原的表达与糖尿病的发生有关；Wilma等将糖尿病鼠和正常血糖鼠的胰岛细胞移植给NOD鼠，应用双色免疫组化法分析小鼠胰岛中FasL与Fas的表达，发现FasL在CD4+，CD8+T淋巴细胞及从正常血糖鼠和糖尿病鼠移植的β细胞表达，而Fas则在CD4+，CD8+T淋巴细胞和从糖尿病鼠移植的β细胞表达，正常血糖鼠β细胞不表达Fas或表达量很低，二者有显著差异，PCR分析也证明FasmRNA在正常血糖鼠中表达极低。因此Fas-L的表达可对胰岛素组织起保护作用。
目前糖尿病治疗仍以化学合成药物为主，如磺胺类、双胍类、葡萄糖苷酶抑制剂、列奈和胰岛素增敏剂等。但这些药物长期服用副作用均比较大。
中医药在防治糖尿病方面有着悠久的历史，经过几千年的实践，积累了大量的宝贵经验，形成了独特的学术体系。治疗以开郁清胃，滋阴降火，通腑泻浊。中医药典籍记载了很多具有降糖疗效的中药，如泽泻、知母、西洋参、葛根、地黄、花粉等。
发明内容
本发明提供-种药物组合物在制备保护胰岛功能药物中的应用。
本发明药物组合物保护胰岛功能的作用在于保护了胰岛β细胞功能。
本发明药物组合物保护胰岛β细胞功能的机制是减弱Fas抗原的表达，增强Fas配体的表达。
本发明药物组合物含有以下重量份的生药材：柴胡3-30份、白芍3-15份、枳实3-15份、大黄1-6份、黄芩3-15份、黄连1-12份。优选为柴胡9份、白芍15份、枳实9份、大黄3份、黄芩9份、黄连5份。
为了获得更好的效果还可以加入天花粉、半夏、乌梅。各生药材重量份分别为：天花粉5-40份、柴胡10-30份、枳实3-15份、大黄1-6份、半夏1-12份、黄芩3-15份、黄连1-12份、白芍3-15份、乌梅5-20份。优选为：天花粉9份、柴胡12份、枳实9份、大黄3份、半夏6份、黄芩9份、黄连6份、白芍9份、乌梅9份。
更好的，本发明在所述药物的基础上还可以加入山楂，这是因为山楂酸甘化阴，既可以防辛散太过伤阴，又可苦酸制甜。配伍开郁清热具有很好的疗效。各生药材的重量份为：天花粉5-40份、柴胡10-30份、枳实3-15份、大黄1-6份、半夏1-12份、黄芩3-15份、黄连1-12份、白芍3-15份、乌梅5-20份、山楂3-15份。优选为：天花粉10-30份、柴胡10-30份、枳实3-15份、大黄1-6份、半夏1-12份、黄芩3-15份、黄连1-12份、白芍3-15份、乌梅5-20份、山楂3-15份。进一步优选为：天花粉30份、柴胡12份、枳实9份、大黄3份、半夏6份、黄芩9份、黄连6份、白芍9份、乌梅15份、山楂9份；或者天花粉15份、柴胡12份、枳实9份、大黄3份、半夏6份、黄芩9份、黄连6份、白芍9份、乌梅15份、山楂9份。
本发明所述的药物组合物通过以下步骤制得：
(1)所述药材加水回流提取；提取液过滤、减压浓缩；
(2)浓缩液加入乙醇至含醇量为65-75％，过滤；
(3)滤液减压浓缩成浸膏，真空干燥，制成干膏粉；
(4)干膏粉中加入辅料制成药剂上可接受的剂型。
所述步骤(1)中，优选加水回流提取两次，每次10倍其重量的水，每次1.5小时。
所述步骤(1)中，优选提取液浓缩至1∶1(最初的药材重量和浓缩液的体积之比)。所述步骤(2)中，加入的乙醇浓度优选为90-100％，进一步优选为95％。含醇量优选为70％。
本发明的药物组合物可以加入药学上可接受的辅料，也可以加入其他药物一起制成复合制剂。
本发明的药物组合物，是单位剂量的药物制剂形式，所述单位剂量形式是指制剂的单位，如片剂的每片，胶囊的每粒胶囊，口服液的每瓶，颗粒剂每袋等。
本发明的组合物其中的有效组分，其在制剂中所占重量百分比可以是0.1-99.9％，其余为药物可接受的载体。
本发明的组合物，通过将上述有效组分和药物可接受的载体混合制备得到。
本发明的组合物，其药物制剂形式可以是任何可药用的剂型，这些剂型包括：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、***剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂。本发明的制剂，优选的是口服剂型，如：胶囊剂、片剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、丹剂、膏剂等；和注射剂，如：粉针剂、注射液、输液等。
本发明的组合物，其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂，必要时可对片剂进行包衣。
适用的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂。适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙酸淀粉钠。适宜的润滑剂包括，例如硬脂酸镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。
可通过混合，填充，压片等常用的方法制备固体口服组合物。进行反复混合可使活性物质分布在整个使用大量填充剂的那些组合物中。
口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂，或者可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体复配的干燥产品。这种液体制剂可含有常规的添加剂，诸如悬浮剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪，乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇一油酸酯或***胶；非水性载体(它们可以包括食用油)，例如杏仁油、分馏椰子油、诸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对羟基苯甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常规的香味剂或着色剂。
对于注射剂，制备的液体单位剂型含有本发明的活性物质和无菌载体。根据载体和浓度，可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的制备通常是通过将活性物质溶解在一种载体中，在将其装入一种适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒，然后密封。辅料例如一种局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂也可以溶解在这种载体中。为了提高其稳定性，可在装入小瓶以后将这种组合物冰冻，并在真空下将水除去。
本发明的组合物，在制备成药剂时可选择性的加入适合的药物可接受的载体，所述药物可接受的载体选自：甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素C、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。
本发明的组合物在使用时根据病人的情况确定用法用量，可每日服三次，每次1-20剂，如：1-20袋或粒或片。
本发明通过以下实验数据说明本发明的应用。
试验例本发明组合物对链脲佐菌素糖尿病大鼠胰腺组织Fas***表达的影响
1.材料和方法
1.1动物
选用雄性Wistar大鼠，体重180-220g，周龄6-8周，由中国医学科学院实验动物中心提供。随机分为4组：一组为正常对照组，另三组先制备成糖尿病模型，然后分为糖尿病模型组、中药组和西药组。糖尿病模型制备方法：禁食12小时后，左下腹腹腔内注射STZ(用0.1mol/l柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液冰浴中配制成1％的溶液，pH值4.4)65mg/kg体重。三天后测血糖在16.7mmol/l以上者确定为糖尿病；正常对照组大鼠腹腔内注射等体积柠檬酸缓冲液。
1.2药物与仪器
药物：本发明实施例1颗粒剂，配制成含生药4g/ml的溶液；盐酸二甲双胍片：北京双鹤药业股份有限公司产，批号：990825；链脲佐菌素(Streptozotocin STZ)：购自Sigma公司，批号202-263-7；胰岛素、胰高血糖素放射免疫试剂盒：北京海科锐生物技术中心产品，批号分别为卫药准字R-11、R-64。
仪器：one-touch II血糖仪：美国强生公司产品。
1.3实验方法
给药方法：各组均为灌胃给药四周①中药组：本发明实施例1颗粒剂36g/kg②西药组：二甲双胍0.5g/kg③模型组：生理盐水3ml/只④正常对照组：生理盐水3ml/只。
血糖：尾静脉取血，给药前及给药第二、四周时各测一次。
1.4血清胰岛素、胰高血糖素测定：动物35mg/kg的戊巴比妥钠麻醉后，颈动脉插管取血；静置1h后，离心血清(3500rpm)10min；用放免分析法(按药盒说明书步骤操作)。
1.5胰腺组织Fas受体和Fas-L配体的免疫组化观察：
各组动物放血处死，取胰腺常规固定，石蜡包埋，5μm厚切片。用免疫组化ABC法显示胰岛Fas和Fas-L的表达情况，所用试剂I抗(兔抗Fas和Fas-L多克隆抗体)II抗(生物素化山羊抗兔IgG)，III抗(辣根酶标记链酶卵白素)及显色剂系列均为北京中山公司产品。免疫组化染色过程如下：石蜡切片脱蜡至水→3％H202室温孵育10分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性→蒸馏水冲洗，PBS液浸泡5分钟→10％正常山羊血清封闭(PBS稀释)，室温孵育10分钟→倾去血清，分别滴加Fas和Fas-L抗体工作液，置湿盒中4℃冰箱过夜→PBS冲洗，5分钟×3次→滴加II抗，37℃温孵30分钟，PBS冲洗，5分钟×3次，滴加1∶200的辣根酶标记链酶卵白素，37℃温箱孵育30分钟→PBS冲洗，5分钟×3次→DAB显色→自来水充分冲洗→苏木精复染，自来水冲洗15分钟以上→逐级酒精脱水→二甲苯透明→树胶封片。光镜下观察。1.6统计学处理实验数据用均数±标准差表示，组间显著性差异采用t检验。
2.结果
2.1对STZ大鼠非空腹血糖的影响
模型组血糖较正常组明显升高(P＜0.001)，治疗4周后，中药和二甲双胍均可使血糖下降(P＜0.01>。见表1。
表1  各组非空腹血糖比较
注：与正常组比△△△P＜0.001，与模型组比*P＜0.05；**P＜0.01
2.2对STZ大鼠胰岛素、胰高血糖素的影响
模型组胰高血糖素含量升高(P＜0.001)；胰岛素含量降低(P＜0.001)。治疗后与模型组比：中药组和二甲双胍组对胰岛素和胰高血糖素含量均无明显影响。见表2。
表2  各组胰岛素、胰高血糖素变化的比较
Figure S2008100529927D00061
Figure S2008100529927D00062
注：与正常组比△△△P＜0.001，△△P＜0.01，△P＜0.05，与模型组比*P＜0.05
2.3大鼠胰腺细胞Fas抗原和Fas配体的免疫组化观察
2.3.1Fas抗原
正常组：胰岛内极少量细胞可见淡棕色颗粒，成微弱表达，绝大多数细胞为阴性。(附图1)
模型组：胰岛内细胞可见广泛的棕红色阳性反应产物，成片状分布的强阳性表达。(附图2)
西药组：胰岛内细胞可见广泛的棕色阳性反应产物，成片状分布的中等阳性表达。(附图3)
中药组：胰岛内呈阳性表达的细胞散在分布，反应产物呈淡棕色。(附图4)2.3.2Fas配体
正常组：胰岛内Fas配体呈阴性表达。(附图5)
模型组：胰岛内极少量细胞可见淡棕色颗粒，成微弱表达。(附图6)
西药组：胰岛内细胞可见广泛的棕色阳性反应产物，成片状分布的中等-强阳性表达。(附图7)
中药组：胰岛内细胞可见广泛的棕色阳性反应产物，成片状分布的中等-强阳性表达。(附图8)
3.结论
本实验中发现鼠类空腹12小时后，各组血糖与正常组无明显的差别，所以本研究通过非空腹血糖观察本药对血糖的影响。中药在给药2周开始就具有明显的降非空腹血糖作用；各组对胰岛素浓度和胰高血糖素无提高的作用，说明其降糖作用不通过胰岛素介导，不同于磺脲类。这说明其降糖作用机理是增加胰岛素敏感性。
在STZ糖尿病大鼠模型中，由于链脲佐菌素对胰腺组织的毒性作用，使胰岛功能严重受损。本研究结果表明：正常组Fas抗原在绝大多数细胞中为阴性表达；少量细胞呈微弱表达，模型组呈强阳性表达。说明发生糖尿病后Fas抗原的表达增强，表明胰岛细胞凋亡加强。中药和西药组均可使Fas抗原的表达减弱，说明口服本中药后抑制了胰岛中免疫反应的过程。正常组胰岛内Fas配体呈阴性表达，模型组成微弱表达，西药组和中药组均成中等-强阳性表达。进一步证实本中药可对胰腺组织起到保护作用，从而延缓胰岛细胞的衰竭。
附图说明
图1为正常组大鼠胰腺细胞Fas抗原免疫组化观察图，HE*400
图2为模型组大鼠胰腺细胞Fas抗原免疫组化观察图，HE*400
图3为西药组大鼠胰腺细胞Fas抗原免疫组化观察图，HE*400
图4为中药组大鼠胰腺细胞Fas抗原免疫组化观察图，HE*400
图5为正常组大鼠胰腺细胞Fas配体免疫组化观察图，HE*400
图6为模型组大鼠胰腺细胞Fas配体免疫组化观察图，HE*400
图7为西药组大鼠胰腺细胞Fas配体免疫组化观察图，HE*400
图8为中药组大鼠胰腺细胞Fas配体免疫组化观察图，HE*400
具体实施方式
下面通过具体的实施方式对本发明的应用作进一步说明，但不作为对本发明的限制。
实施例1
柴胡600g、白芍600g、枳实600g、大黄200g、黄芩600g、黄连200g
6味药材用10倍其重量水，回流提取2次，每次1.5小时。提取液滤过，减压浓缩至1∶1，加入90％乙醇至含醇量65％，滤过，减压浓缩成稠膏。75℃真空干燥，制成干膏粉。
实施例2
柴胡600g、白芍600g、枳实600g、大黄240g、黄芩600g、黄连480g
6味药材用10倍其重量水，回流提取2次，每次1.5小时。提取液滤过，减压浓缩至1∶1，加入无水乙醇至含醇量75％，滤过，减压浓缩成稠膏。85℃真空干燥，制成干膏粉。
实施例3
柴胡540g、白芍900g、枳实540g、大黄180g、黄芩540g、黄连300g
6味药材用10倍其重量水，回流提取2次，每次1.5小时。提取液滤过，减压浓缩至1∶1，加入95％乙醇至含醇量70％，滤过，减压浓缩成稠膏。80℃真空干燥，制成干膏粉。
实施例4
天花粉750g、柴胡1500g、枳实450g、大黄150g、半夏150g、黄芩450g、黄连150g、白芍450g、乌梅750g
9位药材用10倍其重量水，回流提取2次，每次1.5小时。提取液滤过，减压浓缩至1∶1，加入90％乙醇至含醇量65％，滤过，减压浓缩成稠膏。80℃真空干燥，制成干膏粉。
实施例5
天花粉1200g、柴胡900g、枳实450g、大黄180g、半夏360g、黄芩450g、黄连360g、白芍450g、乌梅600g
9位药材用10倍其重量水，回流提取2次，每次1.5小时。提取液滤过，减压浓缩至1∶1，加入无水乙醇至含醇量75％，滤过，减压浓缩成稠膏。85℃真空干燥，制成干膏粉。
实施例6
天花粉630g、柴胡840g、枳实630g、大黄210g、半夏420g、黄芩630g、黄连420g、白芍630g、乌梅630g
9位药材用10倍其重量水，回流提取2次，每次1.5小时。提取液滤过，减压浓缩至1∶1，加入95％乙醇至含醇量70％，滤过，减压浓缩成稠膏。75℃真空干燥，制成干膏粉。
实施例7
天花粉750g、柴胡1500g、枳实450g、大黄150g、半夏150g、黄芩450g、黄连150g、白芍450g、乌梅750g、山楂450g
10位药材用10倍其重量水，回流提取2次，每次1.5小时。提取液滤过，减压浓缩至1∶1，加入95％乙醇至含醇量70％，滤过，减压浓缩成稠膏。85℃真空干燥，制成干膏粉。
实施例8
天花粉1200g、柴胡800g、枳实600g、大黄200g、半夏400g、黄芩400g、黄连200g、白芍400g、乌梅400g、山楂400g
10位药材用10倍其重量水，回流提取2次，每次1.5小时。提取液滤过，减压浓缩至1∶1，加入90％乙醇至含醇量68％，滤过，减压浓缩成稠膏。80℃真空干燥，制成干膏粉。
实施例9
天花粉1000g、柴胡600g、枳实600g、大黄250g、半夏300g、黄芩500g、黄连300g、白芍500g、乌梅500g、山楂300g
10位药材用10倍其重量水回流提取2次每次1.5小时，提取液滤过，减压浓缩至1∶1，加入99％乙醇至含醇量70％，滤过，减压浓缩成稠膏。75℃真空干燥，制成干膏粉。
实施例10片剂的制备
处方：
本发明药物组合物          100g
微晶纤维素                50g
淀粉                      100g
羧甲基淀粉钠              12g
5％PVP无水乙醇            适量
硬脂酸镁                  3g
                       制成1000片
工艺：
本发明药物组合物及处方中其它辅料分别过100目筛，称取处方量本发明药物组合物与微晶纤维素、淀粉及羧甲基淀粉钠采用等量递加法混合均匀，用适量PVP无水乙醇溶液制软材，14目筛制粒，50～60℃干燥1小时，加入处方量的硬脂酸镁用14目筛整粒。
取上述颗粒用特制菱形异型冲模压片。
实施例11  胶囊剂的制备
处方：
本发明药物组合物           100g
淀粉                       200g
羧甲基淀粉钠               12g
5％PVP无水乙醇             适量
硬脂酸镁                   3g
                    制成1000粒
工艺：
本发明药物组合物及处方中其它辅料分别过100目筛，称取处方量本发明药物组合物与淀粉及羧甲基淀粉钠采用等量递加法混合均匀，用适量PVP无水乙醇溶液制软材，14目筛制粒，50～60℃干燥1小时，加入处方量的硬脂酸镁用14目筛整粒。
取上述颗粒装入胶囊。
实施例12  颗粒剂的制备
处方：
本发明药物组合物          100g
微品纤维素                20g
滑石粉6g
3％聚维酮乙醇溶液         适量
                     制成200袋
取本发明药物组合物与微晶纤维素混合均匀，加入3％聚维酮乙醇溶液制成软材，过18目筛制颗粒，50～60℃干燥30～45分钟，整粒，装袋。

Claims (2)

1.一种药物组合物在制备保护胰岛功能药物中的应用，
该药物组合物由以下重量份的生药材组成：柴胡3-30份、白芍3-15份、枳实3-15份、大黄1-6份、黄芩3-15份、黄连1-12份，其特征在于：
所述药物组合物通过减弱Fas抗原的表达，增强Fas配体的表达来保护胰岛β细胞功能。
2.权利要求1所述的应用，其特征在于所述的药物组合物由以下重量份的生药材组成：柴胡9份、白芍15份、枳实9份、大黄3份、黄芩9份、黄连5份。
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