CN101537011B - 预防或治疗帕金森病的药物组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种预防或治疗帕金森病的药物组合物及其制备方法。该药物组合物由刺五加苷B，刺五加苷D，丁香树脂酚双葡萄糖苷和胡萝卜苷组成。本发明确定了上述4种组分的最佳剂量水平范围，在此基础上采用了正交试验筛选出了上述4种活性成分之间的最佳配伍比例。实验结果表明，将刺五加苷B，刺五加苷D，丁香树脂酚双葡萄糖苷和胡萝卜苷按照1∶2∶8∶8的重量配伍而成的药物组合物能显著提高PC12细胞存活率，对多巴胺能神经细胞损伤具有显著的保护作用。本发明所提供的刺五加有效成分化学成分简单明确，在生产中易进行于质量控制。本发明药物组合物可以用来制备疗效好，安全可靠的预防和治疗帕金森病的药物。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物组合物，尤其涉及一种由刺五加有效成分按照特定配比组成的药物组合物，本发明还涉及该药物组合物在预防或治疗帕金森病中的用途，属于帕金森病的治疗领域。
背景技术
帕金森病(Parkinson’s disease，PD)是一种常见的中枢神经***退行性疾病，其发病率随年龄增长而增加。我国现有PD患者170万，并以每年新增10万人速度增长。由于该病严重影响患者的活动能力和生活质量，致残率高，病程长，往往需要终生治疗，因而给人类带来了严重的社会和经济负担。所以迫切需求寻找预防和治疗帕金森病的有效中药，以延缓帕金森病的进程和防止病情的加重。近年来，随着现代生物技术手段在天然药的应用，中药中的活性单体开始成为人们关注的焦点，而且在神经退行性疾病方面的研究已经取得了一定进展。
刺五加为五加科植物刺五加(Acanthopanax senticosus(Rupr.et MaXim.)Harms.)的干燥根和根茎。主产于黑龙江省山区。味辛、微苦、性温、无毒，具有益肾健脾，补肾安神作用。目前刺五加复方和刺五加注射液已用于帕金森病的临床治疗，并取得了一定疗效，但是迄今为止，尚未见有将刺五加有效成分配比用于帕金森病的治疗，所以刺五加有效成分配比治疗帕金森病具有广阔的市场开发前景。
发明内容
本发明的目的是提供一种对于帕金森病具有显著疗效的药物组合物。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
一种预防或治疗帕金森病的药物组合物，由刺五加苷B，刺五加苷D，丁香树脂酚双葡萄糖苷和胡萝卜苷组成；
为了达到更好的治疗效果，优选的，各组分的用量配比范围是：刺五加苷B10～20μg/ml，刺五加苷D 20～40μg/ml，丁香树脂酚双葡萄糖苷40～80μg/ml，胡萝卜苷20～80μg/ml。
更优选的，由刺五加苷B，刺五加苷D，丁香树脂酚双葡萄糖苷和胡萝卜苷按照1∶2∶8∶8的重量配伍而组成。
上述各化合物均可以通过商业途径购买得到，也可按照现有的文献所公开的方法制备得到。
将药学上可接受用量的本发明药物组合物与药学上可接受的载体或稀释剂配合后，按本领域常规的制剂方法将其制备成任意一种适宜的临床制剂。通常本发明组合物适合于口服给药和注射给药，也适合其他的给药方法。该组合物可以是片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、锭剂、栓剂或口服液等液体制剂形式。
基于前期工作确定刺五加治疗帕金森病的有效组分，并分离鉴定出有效组分中的四个化合物的基础上，为了***深入地研究刺五加有效成分配比治疗帕金森病的作用，本发明采用细胞培养的方法，以1-甲基-4苯基吡啶离子(MPP+)作为体外毒素的代表，造成PC12细胞的损伤，建立PD的细胞模型。采用MTT法检测PC12细胞存活率，确定刺五加有效组分中各成分的剂量水平范围。最终确定各成分的用量配比范围是：刺五加苷B 10～20μg/ml，刺五加苷D 20～40μg/ml，丁香树脂酚双葡萄糖苷40～80μg/ml，胡萝卜苷20～80μg/ml。
依据刺五加苷B、刺五加苷D、丁香树脂酚双葡萄糖苷和胡萝卜苷的剂量水平范围，分别针对其各成分设计3个剂量水平，本发明以刺五加苷B、刺五加苷D、丁香树脂酚双葡萄糖苷和胡萝卜苷作为考察的4个因素，按L9(34)正交设计表进行实验，采用MTT比色法，以细胞存活率为考察指标，采用方差分析法确定刺五加苷B、刺五加苷D、丁香树脂酚双葡萄糖苷和胡萝卜苷的最佳配伍比例。
实验结果表明，刺五加的4个有效成分即刺五加苷B，刺五加苷D，丁香树脂酚双葡萄糖苷和胡萝卜苷按照1∶2∶8∶8的重量配比组成为最佳配比，由此配比所组成的药物组合物能显著提高PC12细胞存活率，对MPP+引起的PC12多巴胺能神经细胞损伤具有保护作用。
本发明所提供的刺五加有效成分化学成分简单明确，在生产中更易于药物的质量控制。利用本发明得到的刺五加有效成分质量稳定，具有保护神经元的药理作用，因此可以用来制备疗效好，安全可靠的预防和治疗帕金森病的药物。
本发明药物组合物中的各化学成分制备工艺简单，成本低，其毒副作用小。各化学成分简单明确，在生产中更易于药物的质量控制。利用本发明得到的刺五加有效成分配比质量稳定，具有保护神经元的药理作用，因此可以用来制备疗效好，安全可靠的预防和治疗帕金森病的药物。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
实验例1
1、实验细胞株：中科院上海细胞所
2、实验药物：MPP+SIGMA-RBI公司
刺五加苷B标准品
3、实验方法：将PC12细胞配成单细胞悬液，以5×104/ml接种于96孔培养板。连续培养24小时后换液，在每孔中分别加入不同浓度的刺五加苷B稀释液，使它的终浓度分别为2.5，5，10，20，40，80μg/ml，同时加入终浓度300μmol/L MPP+溶液。再继续培养48小时后，每孔加入MTT溶液(5mg/ml)20μl，37℃孵育4小时。终止培养后小心吸空培养基，每孔加入150μl DMSO，振荡10分钟，使结晶充分溶解。酶标仪检测每个孔在490nm处吸收值，计算细胞存活率。实验结果见表1，表2。(细胞存活率％＝实验组光吸收值/空白组光吸收值×100％)，数据以均数±标准差(x±s)表示，用t检验进行统计学处理。
表1不同浓度的刺五加苷B对MPP+诱导的PC12细胞损伤的影响(x±s)
注：与模型组比较，*p＜0.05
表2不同浓度的刺五加苷B对MPP+诱导的PC12细胞损伤的影响(x±s)
注：与模型组比较，*p＜0.05
从实验结果可以看出，不同浓度的刺五加苷B对MPP+诱导的细胞损伤的影响存在明显的差异。与模型组相比，10，20μg/ml刺五加苷B组细胞存活率明显高于模型组(P＜0.05，有统计学意义)，说明10，20μg/ml刺五加苷B能显著减少MPP+的损伤效应，从而使细胞存活率有较大幅度的提高。
实验例2
1、实验细胞株：中科院上海细胞所
2、实验药物：MPP+SIGMA-RBI公司
刺五加苷D标准品
3、实验方法：将PC12细胞配成单细胞悬液，以5×104/ml接种于96孔培养板。连续培养24小时后换液，在每孔中分别加入不同浓度的刺五加苷D稀释液，使它的终浓度分别为2.5，5，10，20，40，80μg/ml，同时加入终浓度300μmol/L MPP+溶液。再继续培养48小时后，每孔加入MTT溶液(5mg/ml)20μl，37℃孵育4小时。终止培养后小心吸空培养基，每孔加入150μl DMSO，振荡10分钟，使结晶充分溶解。酶标仪检测每个孔在490nm处吸收值，计算细胞存活率。实验结果见表3，表4。
统计学处理数据以均数±标准差(x±s)表示，用t检验进行统计学处理。
表3不同浓度的刺五加苷D对MPP+诱导的PC12细胞损伤的影响(x±s)
注：与模型组比较，*p＜0.05
表4不同浓度的刺五加苷D对MPP+诱导的PC12细胞损伤的影响(x±s)
注：与模型组比较，*p＜0.05
从实验结果可以看出，不同浓度的刺五加苷D对MPP+诱导的细胞损伤的影响存在明显的差异。与模型组相比，20，40μg/ml刺五加苷D组细胞存活率明显高于模型组(P＜0.05，有统计学意义)，说明20，40μg/ml刺五加苷D能显著减少MPP+的损伤效应，从而使细胞存活率有较大幅度的提高。
实验例3
1、实验细胞株：中科院上海细胞所
2、实验药物：MPP+SIGMA-RBI公司
丁香树脂酚双葡萄糖苷
3、实验方法：将PC12细胞配成单细胞悬液，以5×104/ml接种于96孔培养板。连续培养24小时后换液，在每孔中分别加入不同浓度的丁香树脂酚双葡萄糖苷稀释液，使它的终浓度分别为2.5，5，10，20，40，80μg/ml，同时加入终浓度300μmol/L MPP+溶液。再继续培养48小时后，每孔加入MTT溶液(5mg/ml)20μl，37℃孵育4小时。终止培养后小心吸空培养基，每孔加入150μl DMSO，振荡10分钟，使结晶充分溶解。酶标仪检测每个孔在490nm处吸收值，计算细胞存活率。实验结果见表5、表6。数据以均数±标准差(x±s)表示，用t检验进行统计学处理。
表5不同浓度丁香树脂酚双葡萄糖苷对MPP+诱导的PC12细胞损伤的影响(x±s)
注：与模型组比较，*p＜0.05
表6不同浓度丁香树脂酚双葡萄糖苷对MPP+诱导的PC12细胞损伤的影响(x±s)
注：与模型组比较，*p＜0.05
从实验结果可以看出，不同浓度的丁香树脂酚双葡萄糖苷对MPP+诱导的细胞损伤的影响存在明显的差异。与模型组相比，40，80μg/ml丁香树脂酚双葡萄糖苷组细胞存活率明显高于模型组(P＜0.05，有统计学意义)，说明40，80μg/ml丁香树脂酚双葡萄糖苷能显著减少MPP+的损伤效应，从而使细胞存活率有较大幅度的提高。
实验例4
1、实验细胞株：中科院上海细胞所
2、实验药物：MPP+SIGMA-RBI公司
胡萝卜苷
3、实验方法：将PC12细胞配成单细胞悬液，以5×104/ml接种于96孔培养板。连续培养24小时后换液，在每孔中分别加入不同浓度的胡萝卜苷稀释液，使它的终浓度分别为2.5，5，10，20，40，80μg/ml，同时加入终浓度300μmol/L MPP+溶液。再继续培养48小时后，每孔加入MTT溶液(5mg/ml)20μl，37℃孵育4小时。终止培养后小心吸空培养基，每孔加入150μl DMSO，振荡10分钟，使结晶充分溶解。酶标仪检测每个孔在490nm处吸收值，计算细胞存活率。实验结果见表7、表8。数据以均数±标准差(x±s)表示，用t检验进行统计学处理。
表7不同浓度的胡萝卜苷对MPP+诱导的PC12细胞损伤的影响(x±s)
注：与模型组比较，*p＜0.05
表8不同浓度的胡萝卜苷对MPP+诱导的PC 12细胞损伤的影响(x±s)
注：与模型组比较，*p＜0.05
从实验结果可以看出，不同浓度的胡萝卜苷对MPP+诱导的细胞损伤的影响存在明显的差异。与模型组相比，20，40，80μg/ml胡萝卜苷组细胞存活率明显高于模型组(P＜0.05，有统计学意义)，说明20，40，80μg/ml胡萝卜苷能显著减少MPP+的损伤效应，从而使细胞存活率有较大幅度的提高。
实验例5
1、实验细胞株：中科院上海细胞所
2、实验药物：MPP+SIGMA-RBI公司
刺五加苷B、刺五加苷D、胡萝卜苷
丁香树脂酚双葡萄糖苷
3、实验方法：依据上述实验结果，得到各成分的剂量水平范围(见表9)，分别针对各有效成分设计3个水平，按L9(34)正交设计表(见表10)进行实验：将PC12细胞配成单细胞悬液，以5×104/ml接种于96孔培养板。连续培养24小时后换液，在每孔中分别加入不同样品稀释液，使它的终浓度为250μg/ml，同时加入终浓度300μmol/L MPP+溶液。再继续培养48小时后，每孔加入MTT溶液(5mg/ml)20μl，37℃孵育4小时。终止培养后小心吸空培养基，每孔加入150μl DMSO，振荡10分钟，使结晶充分溶解。酶标仪检测每个孔在490nm处吸收值，计算细胞存活率。(细胞存活率％＝实验组光吸收值/对照组光吸收值×100％)，实验结果见表11，方差分析结果见表12.
表9各有效成分的剂量水平范围
表10 L9(34)正交设计表
表11各成分的配伍比例正交试验结果
表12方差分析表
由上表可知，D因素影响显著。A、B、C无显著差别，所以选定最佳配伍比例为A1B1C3D3，即四种有效成分配比为刺五加苷B∶刺五加苷D∶丁香树脂酚双葡萄糖苷∶胡萝卜苷为1∶2∶8∶8。
Claims (6)
1.一种预防或治疗帕金森病的药物组合物，其特征在于：由刺五加苷B，刺五加苷D，丁香树脂酚双葡萄糖苷和胡萝卜苷组成。
2.按照权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：各组分的用量配比范围是：刺五加苷B10～20μg/ml，刺五加苷D20～40μg/ml，丁香树脂酚双葡萄糖苷40～80μg/ml，胡萝卜苷20～80μg/ml。
3.按照权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：该药物组合物由刺五加苷B，刺五加苷D，丁香树脂酚双葡萄糖苷和胡萝卜苷按照1∶2∶8∶8的重量配伍而组成。
4.按照权利要求1-3任何一项所述的药物组合物，其特征在于：将所述药物组合物与药学上可接受的载体或稀释剂配合后，按本领域常规的制剂方法将其制备成任意一种适宜的临床制剂。
5.按照权利要求4所述的药物组合物，其特征在于：所述的制剂是口服制剂或注射制剂。
6.权利要求1-3任何一项所述的药物组合物在制备治疗帕金森病的药物中的用途。
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