CN101536647A - 采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培种 - Google Patents

Abstract

本发明的目的是提供一种采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培种技术：采用呼吸塑料袋作为正式培养的容器，经过母种的活化培养步骤、制备原种的预培养步骤以及将原种接种于大袋栽培种的正式培养步骤培养出大袋蘑菇栽培种；制作过程中使用改进的高压灭菌锅进行灭菌冷却处理。本发明采用呼吸塑料袋并结合本发明特殊的制作步骤和设备，可大量迅速生产蘑菇大包装栽培种，同时可降低制造成本，使操作达到自动化并节省人力的可靠的蘑菇菌种制作方法；在制作过程中实现高压灭菌、无菌冷却一体化，保证了菌种制作的质量，又节约了时间成本，操作简便，易于机械化生产，节省劳动力；成品率高；具有显著的经济效率。

Description

采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培种

技术领域

本发明属于微生物技术及其设备领域，更具体涉及一种采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培种。

背景技术

进行蘑菇(这里通常指双孢蘑菇的白色种、奶色种以及棕色种，拉丁学名Agaricusbisporus Langer)的人工栽培时，首先要制作好栽培种，才能保证将来栽培有好的收获。我国是双孢蘑菇生产大国，仅福建省双孢蘑菇年产量就占世界的10％，全国原种需要量为200～260万瓶，栽培种为1.0～1.5亿瓶，产值在2～3亿元。福建省的双孢蘑菇选育种技术已达国际先进水平，育成杂交新菌株AS2796(闽4号)及其选育方法已获专利公开(CN1125034)，在全国广泛使用。目前蘑菇菌种制作工艺和设备却大都停留在手工作坊状态，生产工艺较落后，生产效率偏低，不少工序仍依赖手工(菌种菌龄上下不一，生长缓慢)，远不能满足栽培种的生产需求，而传统的菌种采用玻璃瓶，其缺陷显著：易碎、自身重量大、运输不便、使用也不方便等制约其发展前景。国内在使用塑料袋方面，仍未摆脱瓶颈的约束，而且没有解决好塑料强度与呼吸性两大难题，虽然降低了单位包装成本，但成品率却下降，同样无法大规模应用。以上这些因素使选育出的优质菌株无法更好的推广，而各地分散生产的栽培种质量无保证，每年都有大量不合格菌种投入生产，减产幅度为10～15％，而且造成我国成为蘑菇出口大国的同时，而蘑菇菌种的出口几乎为零。

此外，常规的高压灭菌锅不能实现在培养基高压灭菌后保证无菌条件下快速冷却，从而不能保证菌种制作的质量。

发明内容

本发明的目的是提供一种采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培种技术，包括制作方法，制作过程中用到的设备和该设备的使用方法，采用呼吸塑料袋并结合本发明特殊的制作步骤和设备，可大量迅速生产蘑菇大包装栽培种，同时可降低制造成本，使操作达到自动化并节省人力的可靠的蘑菇菌种制作方法；在制作过程中实现高压灭菌、无菌冷却一体化，保证了菌种制作的质量，又节约了时间成本，操作简便，易于机械化生产，节省劳动力；成品率高；具有显著的经济效率。

本发明的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培种的方法：采用呼吸塑料袋作为正式培养的容器，经过母种的活化培养步骤、制备原种的预培养步骤以及将原种接种于大袋栽培种的正式培养步骤制作出大袋蘑菇栽培种。

所述制作步骤为：

(1)母种的活化培养步骤：由保存菌株进行活化培养获得母种；

(2)制备原种的预培养步骤：将母种进行预培养获得原种；

(3)正式培养步骤：将呼吸塑料袋装车推入高压灭菌锅中，对小麦培养基进行高压灭菌，高压灭菌后，小麦培养基冷却至常温，然后将步骤(2)预培养获得的原种接种于所述呼吸塑料袋中小麦培养基进行正式培养，培养过程培养室温度保持20～25℃；培养13～16天待呼吸塑料袋长满菌丝，正式培养完毕将装有菌种的呼吸塑料袋移入3±1℃冷库保藏，大袋蘑菇栽培种制作完成。

本发明的显著优点为：

(1)使用呼吸塑料袋生产大袋蘑菇栽培种，并在接种过程中将原种和小麦培养基充分混合均匀，缩短了每个菌丝体之间的生长距离，并缩短了培养完成的时间，只需要13～16天时间，一般只有传统瓶装菌种培养时间的三分之一到一半。蘑菇栽培种的生产多在夏秋温度较高的期间进行，需要空调进行制冷调节，缩短培养时间意味着可以节约大量能源。

(2)使用呼吸塑料袋生产大袋蘑菇栽培种，由于原种和小麦培养基混合均匀，袋内各处菌丝体的菌龄基本一致，都不超过16天，而传统瓶装菌种上下菌龄相差30～35天，造成菌种刚走到底，瓶口附近菌丝体已经接近老化。

(3)由于大袋蘑菇栽培种的制作要比传统瓶装栽培种要求更高的洁净度环境下，按本发明要求进行制作，大袋蘑菇栽培种比传统瓶装栽培种染菌率较低，提高成品率4～6％。

(4)由于大袋蘑菇栽培种菌龄短，质地疏松，又是塑料袋包装，使用方便，开袋即用，使菌丝体受到最小的损伤，而传统的瓶装菌种菌龄长，质地较硬，又是开口相对较小的瓶口，使用过程需要用器械抠扒，不仅费力费时，不利于蘑菇规模化栽培，而且菌丝体受到较大损伤，在播种到栽培料理需要更长的恢复时间，一定程度上影响产量。

(5)由于大袋蘑菇栽培种使用呼吸塑料包装，无论在生产、储存和运输过程，破损度很低，不足0.5％，而传统的瓶装栽培种使用易碎的玻璃瓶，每个过程度都存在破碎的隐患，玻璃瓶年损耗率在5～10％，也严重制约我国蘑菇栽培种的出口。

(6)由于大袋蘑菇栽培种的包装材料——塑料为一次性容器使用(当然可作为塑料米原料重新回收利用)，菌种采购后仅需支付运费作为菌种款的额外费用，而传统的瓶装栽培种的玻璃须反复使用，体积大，使用过程不仅要支付运费(由于重量几乎是呼吸塑料袋菌种的2倍，需要多支付1倍的运费)，还要支付抠种、清洗和仓储等费用。

(7)大袋蘑菇栽培种由于生产周期短，节约了大量电能；由于操作简便，易于机械化生产，节省了劳动力；成品率的提高等等因素使得每袋成本控制在15～17元左右(而生产同样重量的传统瓶装栽培种成本要超过25元)，而且运输成本降低一半，采用该技术后可使我国蘑菇栽培种参与国际竞争(售价只有国际的1/4)

(8)本发明采用的高压灭菌锅，在普通的卧式高压灭菌锅的锅体上设置抽真空***和空气净化***，实现了在小麦培养基高压灭菌处理后，在无菌的环境下进行快速冷却，而且将灭菌与冷却步骤整体化，操作方便快捷，节约时间，有效的保证了菌种的质量。

附图说明

图1是母种的活化培养步骤流程图，其中10表示从液氮保藏罐取出的安瓿管，装有保存菌株；11表示液氮保藏罐；12表示装有PDA培养基的培养皿；S1表示母种在PDA培养基中的活化培养；14表示在培养皿中继续进行母种的活化培养状态；16表示母种在培养皿中培养完毕；18表示活化培养的母种切片。

图2是原种的预培养步骤流程图，其中18表示活化培养的母种切片，20为装有原种培养基的容器，21为高压灭菌锅，S2是对装入容器20的原种培养基进行灭菌的步骤，S3是对原种培养基进行灭菌后，使其冷却至常温的步骤，S4是在原种培养基中接种预先制得的母种的步骤，步骤S5是使接种了母种的原种培养基进行预培养的步骤。

图3表示正式培养步骤流程图，其中30为装有小麦培养基的呼吸塑料袋，32为呼吸塑料袋上的呼吸膜，22为装有预培养完成的原种的容器，步骤S6是对装入呼吸塑料袋30的小麦培养基进行装入杀菌车灭菌的步骤，步骤S7是使灭菌后的呼吸塑料袋30冷却至室温的步骤，步骤S8为冷却后，将预培养步骤制得的原种接种到呼吸塑料袋30的小麦培养基中的步骤，步骤S9为接种原种的小麦培养基进行正式培养的步骤，S10为正式培养结束的大袋栽培种装箱后移入冷库保藏步骤，S11为制作结束。

图4为旋转蒸煮锅构造示意图，其中，34为旋转蒸煮锅锅体，36为进料口，38为温度计，40为压力表，42为进汽阀门，44为出汽喷头，46为出料口。

图5为本发明的高压灭菌锅构造示意图，其中，48为高压灭菌锅体，49为产蒸汽锅炉，50为空气过滤器，51为空压机处阀门，52为空压机，54为蒸汽进气阀门，56为空气过滤器处阀门，60为排气孔处阀门，62为排气孔，64为锅体的压力表，66为锅体上的温度计，68为真空泵，69为安全阀，70为真空泵处阀门，72为装入呼吸袋的杀菌车。

图6是本发明的制作过程流程图。

具体实施方式

所述制作步骤为：

(1)母种的活化培养步骤：菌株保存于液氮保藏罐中的安瓿管中，将安瓿管中的菌株接种于PDA培养基上进行培养；PDA培养基为常用的真菌培养基(200g马铃薯切片加入1000mL水煮沸20分钟，过滤后加入20g葡萄糖和15～18g琼脂加热溶解，再次过滤最终体积为1000mL，后经121℃/0.1MPa进行20分钟高压灭菌而成)；培养温度为22～24℃；当菌丝长满培养基时，培养完毕，将活化培养完的母种切成12～15mm的小块切片，备制备原种的预培养步骤使用。

(2)制备原种的预培养步骤：所述制备原种的预培养步骤中：采用的原种培养基为，均按照质量份数：21份的新鲜棉籽壳、8份牛粪、0.03份石膏、0.07份石灰加70份水发酵14～16天后，晒干后，34～36份发酵棉籽壳加入1～2份蛭石、1～2份膨胀珍珠岩、1份CACO3和1份石灰加60份水混合均匀即成为原种培养基；将装有原种培养基的容器在高压灭菌锅内进行高压灭菌，在126℃/0.15MPa进行80～120分钟的灭菌处理，灭菌后，使其冷却至常温，将母种切片投入预培养容器进行接种；预培养温度为22～24℃，预培养18～22天；所述预培养容器采用1000mL的带过滤呼吸盖的塑料广口瓶，并按照1000mL的预培养容器中装入900mL的原种培养基，每个预培养容器中接种1～3个切片。

(3)正式培养步骤培养：

a)所述小麦培养基调质的整个过程在旋转蒸煮锅中进行，往旋转蒸煮锅加入占旋转蒸煮锅容积40％的小麦培养基，其中按照质量份小麦82～91份，膨胀珍珠岩5～10份，轻质碳酸钙2～4份和石膏2～4份；关闭进料口，让旋转蒸煮锅旋转五分钟，让各种材料混合均匀后，再通过进料口注入占旋转蒸煮锅容积20％的水；最后再关闭进料口，打开进汽阀门，通入高压蒸汽，对旋转蒸煮锅内小麦培养基进行蒸煮，蒸煮温度110℃，压力0.08MPa，维持15～20分钟，蒸煮结束的小麦培养基倒出进行摊晾冷却，冷却至室温；

b)小麦培养基的装袋、灭菌：将小麦培养基装入呼吸塑料袋，所述呼吸塑料袋长宽厚规格为：630mm×360mm×80um，带有2个35mm×35mm呼吸膜，装入6Kg的小麦培养基或495×320mm×60um，带有1个35mm×35mm呼吸膜，装入3Kg的小麦培养基；并将呼吸塑料袋装入杀菌车采用高压灭菌锅在126℃/0.15MPa下进行灭菌处理，高压灭菌时将为120～150分钟；并在高压灭菌锅中冷却至室温；

c)小麦培养基接种：在洁净度为10000级的缓冲间、洁净度为1000级的接种室里，放入洁净度为100级超净工作台进行接种操作；接种量为每个呼吸塑料袋(6Kg)接入180～230mL的原种或者每个呼吸塑料袋(3Kg)接入90～120mL的原种，接种后，用封口机将呼吸塑料袋封口，并进行翻袋混合，翻袋次数10～15次；在培养温度为20～23℃下培养13～16天后，待呼吸塑料袋长满菌丝正式培养完毕，将装有菌种的呼吸塑料袋移入3±1℃冷库保藏，大袋蘑菇栽培种制作完成。

以上小麦培养基的灭菌采用的高压灭菌锅，是在常规的卧式高压灭菌锅上进行改进，即在卧式高压灭菌锅的锅体设置抽真空***和空气净化***：所述锅体上设置的抽真空***包括真空泵，所述真空泵通过阀门由三通管道一端连接锅体，该三通管道的另一端设置一阀门作为排气孔；所述空气净化***包括空压机，所述空压机通过一阀门由管道连接一空气过滤器；所述空气过滤器通过一阀门由管道连接锅体，该阀门与锅体间的管道上设置有一安全阀。

结合附图5说明高压灭菌锅的使用方法为：将小麦培养基在所述高压灭菌锅体48中按照常规高压灭菌操作进行灭菌处理，灭菌结束后，关闭蒸汽进气阀门54，停止通入蒸汽，立即启动真空泵68，同时打开真空泵处阀门70，通过真空泵68直接排出湿热空气，当锅体的压力表64上的示数降到0.05MPa，立即关闭真空泵68和真空泵处阀门70，同时启动空压机52，打开空压机处阀门51和空气过滤器处阀门56，通过空气过滤器50向高压锅锅体48内吹入洁净空气，防止杂菌进入锅体，进而进入呼吸塑料袋中，再缓缓打开排气孔处阀门60，通过排气孔62直接排出湿热空气，保持锅体48的压力表64为正压；冷却至室温，通过锅体48上的温度计66观察温度。

优异效果对比数据

表1中，对传统使用的瓶装栽培种和用上述方法制作的大袋蘑菇栽培种进行比较

*注：每个呼吸塑料袋可装麦粒菌种6Kg或3Kg，相当于750mL玻璃瓶麦粒菌种15瓶或8瓶

表1中以容量为6Kg呼吸塑料袋为例，对瓶装生产蘑菇栽培种和使用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培种，具备较大差异的部分进行了总结。

以下结合实施例并参考附图，充分说明本发明，但是本发明不仅仅限制于此。

实施例

在蘑菇的大袋栽培种制作中，分为三步进行，首先是由保存菌株进行活化培养获得母种，称为活化培养步骤S1，其次将母种进行扩繁培养获得原种，称之为预培养步骤S5，最后将预培养获得的原种接入装有小麦培养基(湿重6Kg)的呼吸塑料袋30中，在所述小麦培养基中进行培养栽培种，称为正式培养步骤S9，上述呼吸塑料袋30装入小麦培养基后，均要在高压灭菌锅中作高压灭菌，然后使小麦培养基和呼吸塑料袋30冷却至室温，再把预培养后获得原种接入至上述塑料参考附图对本实施例进行详细说明。

本发明的蘑菇大袋栽培种制作方法的特征是，包括母种的活化培养步骤，制备原种的预培养步骤，以及将原种接入大袋栽培种的正式培养步骤。以下，依次对母种的活化培养步骤、制备原种的预培养步骤和接种大袋栽培种的正式培养步骤进行说明。

母种的活化培养步骤

原种的预培养步骤

大袋栽培种的正式培养步骤

图1-3是用于蘑菇菌种的母种活化培养步骤、原种的预培养步骤和大袋栽培种的正式培养步骤的说明图。

图1表示母种的活化培养步骤。该图中，10表示从液氮保藏罐取出的安瓿管，装有保存菌株。首先将安瓿10中的菌株接种于PDA培养基12。PDA培养基12的为常用的真菌培养基(200g马铃薯切片加入1000mL水煮沸20分钟，过滤后加入20g葡萄糖和15～18g琼脂加热溶解，再次过滤最终体积为1000mL，后经121℃/0.1MPa进行20分钟高压灭菌而成)。步骤S1为PDA培养基12中的母种的活化培养步骤。本实施状态中制作的是双孢蘑菇菌种。步骤S1的活化培养步骤中的培养温度为22～24℃。

14表示在PDA培养基12种继续进行母种的活化培养状态。继续进行培养后，蘑菇菌丝长满PDA培养基。16表示在PDA培养基12上培养完毕。切片18表示活化培养的母种切片状态。预培养时使用切成12～15mm的小块的多个切片18。

图2表示原种的预培养步骤。预培养是指在较大的容器内制备原种的预培养步骤。

20为培养原种的容器。本实施状态中，装有原种培养基的容器20是1000mL的带过滤呼吸盖的塑料广口瓶。采用的原种培养基为，均按照质量份数：21份的新鲜棉籽壳、8份牛粪、0.03份石膏、0.07份石灰加70份水发酵14～16天后，晒干后，34～36份发酵棉籽壳加入1～2份蛭石、1～2份膨胀珍珠岩、1份CACO3和1份石灰加60份水混合均匀即成为原种培养基。

步骤S2是对装入容器20的原种培养基进行灭菌的步骤。本实施状态中，高压灭菌锅用作高压灭菌，在126℃/0.15MPa进行80～120分钟的灭菌处理。

步骤S3是对原种培养基进行灭菌后，使其冷却至常温的步骤。

步骤S4是在原种培养基中接种预先用PDA培养基12制得的母种的步骤。将前述培养后的PDA培养基12的1～3个母种切片18投入容器20种进行接种。

步骤S5是使接种了母种的原种培养基进行培养的步骤。本实施状态中培养温度为22～24℃，培养18～22天，该步骤称为预培养步骤。

通过预培养完成原种的预培养后，进入正式培养。

图3表示正式培养步骤。正式培养中，使用装有小麦培养基的呼吸塑料袋30，将预培养中获得的原种接种于小麦培养基进行培养。呼吸塑料袋30在本实施状态采用600mm×300mm×80um(长∶宽∶厚)，可装入6Kg的小麦培养基，带有2个35mm×35mm呼吸膜32或495×320mm×60um(长∶宽∶厚)，可装入3Kg的小麦培养基，带有1个35mm×35mm呼吸膜32。

正式培养过程中，首先，要对装入呼吸塑料袋30的小麦培养基进行调制，图4表示旋转蒸煮锅构造，这个过程要在旋转蒸煮锅34内完成，通过进料口36往旋转蒸煮锅34加入旋转蒸煮锅34容积40％的小麦培养基(其中按照质量份小麦82～91份，膨胀珍珠岩5～10份，轻质碳酸钙2～4份和石膏2～4份)。然后关闭进料口36，让旋转蒸煮锅34旋转五分钟，让各种材料混合均匀后，再通过进料口36注入水(旋转蒸煮锅34体积的20％)。最后再关闭进料口36，打开进汽阀门42，通入高压蒸汽，由出汽喷头44对旋转蒸煮锅34内小麦培养基进行蒸煮，通过观察温度计38和压力表40，来对进汽阀42进行高压蒸汽调节，本实施状态中蒸煮温度110℃，压力0.08MPa，维持15～20分钟，整个蒸煮过程的时间大概在40分钟，蒸煮结束后小麦由出料口46倒出进行摊晾冷却，冷却时室温后装入呼吸塑料袋30。

步骤S6是对装入呼吸塑料袋30的小麦培养基进行灭菌的步骤。该灭菌步骤采用的是高压灭菌。本实施状态中，使用如具体实施方式中描述的改进的高压灭菌锅，在高压灭菌锅中推入装着呼吸塑料袋30的杀菌车72，对呼吸塑料袋30进行高压灭菌。本实施状态中，在126℃/0.15MPa进行120～150分钟的灭菌处理。

步骤S7是使灭菌后的呼吸塑料袋30冷却至室温的步骤。该冷却步骤中，如图5所示，最好在灭菌结束后，将小麦培养基在所述高压灭菌锅体48中按照常规高压灭菌操作进行灭菌处理，灭菌结束后，关闭蒸汽进气阀门54，停止通入蒸汽，立即启动真空泵68，同时打开真空泵处阀门70，通过真空泵68直接排出湿热空气，当锅体的压力表64上的示数降到0.05MPa，立即关闭真空泵68和真空泵处阀门70，同时启动空压机52，打开空压机处阀门51和空气过滤器处阀门56，通过空气过滤器50向高压锅锅体48内吹入洁净空气，防止杂菌进入锅体，进而进入呼吸塑料袋中，再缓缓打开排气孔处阀门60，通过排气孔62直接排出湿热空气，保持锅体48的压力表64为正压；冷却至室温，通过锅体48上的温度计66观察温度，进入随后的栽培种接种阶段。

步骤S8为冷却后，将预培养步骤制得的原种接种到呼吸塑料袋30的小麦培养基中的步骤。接种栽培种时，为了不混入杂菌，必须十分小心。本实施状态中，在洁净度为10000级的缓冲间、洁净度为1000级的接种室里，放入洁净度为100级超净工作台进行接种操作。本实施状态中，接种量为每个呼吸塑料袋(6Kg)接入180～230mL的原种或者每个呼吸塑料袋(3Kg)接入90～120mL的原种，接种后，呼吸塑料袋30马上用封口机进行热熔封口，并将原种和小麦培养基在呼吸塑料袋30里进行翻袋混合，本实施状态中，翻袋次数10～15次。

步骤S9为接种原种的小麦培养基进行培养的步骤。46为装着接种过原种的培养基的呼吸塑料袋，且原种和小麦培养基完全混合。本实施状态中培养温度为20～25℃，培养13～16天，待呼吸塑料袋长满菌丝正式培养结束，该步骤称为正式培养步骤。

步骤S10为正式培养后的大袋栽培种装箱后移入冷库保藏，大袋蘑菇栽培种制作完成。

Claims (9)

1.一种采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培种的方法，其特征在于：采用呼吸塑料袋作为正式培养的容器，经过母种的活化培养步骤、制备原种的预培养步骤以及将原种接种于大袋栽培种的正式培养步骤制作出大袋蘑菇栽培种。

2.根据权利要求1所述的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培种的方法，其特征在于：所述制作步骤为：

(1)母种的活化培养步骤：由保存菌株进行活化培养获得母种；

(2)原种的预培养步骤：将母种进行预培养获得原种；

(3)正式培养步骤：将呼吸塑料袋装入高压灭菌锅中，对袋内小麦培养基进行高压灭菌，高压灭菌后，待塑料袋和小麦培养基冷却至常温，然后将步骤(2)预培养获得的原种接种于所述呼吸塑料袋中小麦培养基进行正式培养，培养过程培养室温度保持20～25℃，培养13～16天待呼吸塑料袋长满菌丝，正式培养完毕，将装有菌种的呼吸塑料袋移入3±1℃冷库保藏，大袋蘑菇栽培种制作完成。

3.根据权利要求2所述的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培种的方法，其特征在于：所述母种的活化培养步骤为：菌株保存于液氮保藏罐中的安瓿管中，将安瓿管中的菌株接种于PDA培养基上进行培养，PDA培养基为常用的真菌培养基：200g马铃薯切片加入1000mL水煮沸20分钟，过滤后加入20g葡萄糖和15～18g琼脂加热溶解，再次过滤最终体积为1000mL，后经121℃/0.1MPa进行20分钟高压灭菌而成；培养温度为22～24℃；当菌丝长满PDA培养基时，培养完毕，将活化培养完的母种切成12～15mm的小块切片，备制备原种的预培养步骤使用。

4.根据权利要求2所述的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培种的方法，其特征在于：所述原种的预培养步骤中：采用的原种培养基为，均按照质量份数；21份的新鲜棉籽壳、8份牛粪、0.03份石膏、0.07份石灰加70份水发酵14～16天后，晒干后，34～36份发酵棉籽壳加入1～2份蛭石、1～2份膨胀珍珠岩、1份CACO₃和1份石灰加60份水混合均匀即成为原种培养基；将装有原种培养基的容器在高压灭菌锅内进行高压灭菌，在126℃/0.15MPa进行80～120分钟的灭菌处理，灭菌后，使其冷却至常温，将母种的活化培养后的切片投入预培养容器进行接种；预培养温度为22～24℃，预培养18～22天。

5.根据权利要求4所述的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培种的方法，其特征在于：所述预培养容器采用1000mL的带过滤呼吸盖的塑料广口瓶，并按照1000mL的原种培养容器中装入900mL的原种培养基，每个预培养容器中接种1～3个母种切片。

6.根据权利要求2所述的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培种的方法，其特征在于：所述正式培养步骤培养过程为：

a)小麦培养基的调质：所述小麦培养基调质的整个过程在旋转蒸煮锅中进行，往旋转蒸煮锅加入占旋转蒸煮锅容积40％的小麦培养基：按重量份，其中小麦82～91份，膨胀珍珠岩5～10份，轻质碳酸钙2～4份和石膏2～4份；关闭进料口，让旋转蒸煮锅旋转五分钟，让各种材料混合均匀后，再通过进料口注入占旋转蒸煮锅容积20％的水；最后再关闭进料口，打开进汽阀门，通入高压蒸汽，对旋转蒸煮锅内小麦培养基进行蒸煮，蒸煮温度110℃，压力0.08MPa，维持15～20分钟，蒸煮结束的小麦培养基倒出进行摊晾冷却，冷却至室温；

b)小麦培养基的装袋、灭菌：将小麦培养基装入呼吸塑料袋，所述呼吸塑料袋长宽厚规格为：630mm×360mm×80um，带有2个35mm×35mm呼吸膜，装入6Kg的小麦培养基或495×320mm×60um，带有1个35mm×35mm呼吸膜，装入3Kg的小麦培养基；并采用高压灭菌锅在126℃/0.15MPa下进行灭菌处理，高压灭菌时间为120～150分钟；并在高压灭菌锅中冷却至室温；

c)小麦培养基接种：在洁净度为10000级的缓冲间、洁净度为1000级的接种室里，放入洁净度为100级超净工作台进行接种操作；接种量为每个呼吸塑料袋，6Kg接入180～230mL的原种或者每个呼吸塑料袋，3Kg接入90～120mL的原种，接种后，用封口机将呼吸塑料袋封口，并进行翻袋混合，翻袋次数10～15次；在培养温度为20～25℃下培养13～16天，待呼吸塑料袋长满菌丝，正式培养完毕移入3±1℃冷库保藏，大袋蘑菇栽培种制作完成。

7.一种如权利要求2、3、4、5或6所述的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培种中用到的高压灭菌锅，包括整个常规的卧式高压灭菌锅，其特征在于：所述卧式高压灭菌锅的锅体上还设置有抽真空***和空气净化***。

8.根据权利要求7所述的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培种中用到的高压灭菌锅，其特征在于：所述锅体上设置的抽真空***包括真空泵，所述真空泵通过阀门由三通管道一端连接锅体，该三通管道的另一端设置一阀门作为排气孔；所述空气净化***包括空压机，所述空压机通过一阀门由管道连接一空气过滤器；所述空气过滤器通过一阀门由管道连接锅体，该阀门与锅体间的管道上设置有一安全阀。

9.一种如权利要求8所述的高压灭菌锅在采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培种中的使用方法，其特征在于：将小麦培养基在所述高压灭菌锅中按照常规高压灭菌操作进行灭菌处理，灭菌结束后，关闭蒸汽进气阀门，停止通入蒸汽，立即启动真空泵，同时打开真空泵处阀门，通过真空泵直接排出湿热空气，当锅体的压力表降到0.05MPa，立即关闭真空泵和真空泵处阀门，同时启动空压机，打开空压机处阀门和空气过滤器处阀门，通过空气过滤器向高压锅锅体吹入洁净空气，防止杂菌进入锅体，进而进入呼吸塑料袋中，再缓缓打开排气孔处阀门，通过排气孔直接排出湿热空气，保持锅体的压力表为正压；冷却至室温，通过锅体上的温度计观察温度。

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