CN101505795A - 用于调节细胞粘附分子表达的组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种用于调节或弱化细胞粘附分子的细胞因子诱导性细胞表面表达的组合物，包括一种结合地高辛的抗体。本发明还提供了一种调节或弱化患者体内细胞粘附分子的细胞因子诱导性细胞表面表达的方法，所述方法通过将地高辛抗体组合物给予需要这类治疗的患者进行。

Description

用于调节细胞粘附分子表达的组合物
相关专利申请的交叉引用
本申请根据35 U.S.C.§119(e)要求美国专利申请No.60/818313的优先权权益，所述专利申请通过引用的方式纳入本文。
联邦政府资助的研究或开发的相关声明
不适用
附件
不适用
技术领域
本发明总体而言涉及免疫学和医学，更具体而言，涉及用于调节先天性免疫应答和获得性免疫应答所涉及的内皮细胞活化和细胞粘附分子的药物组合物和方法，所述药物组合物和方法可用于治疗感染和非感染性病症、障碍和疾病。
背景技术
许多感染状态、非感染性障碍和病理的潜在特征为具有局部或全身炎症。炎症是一种针对感染、组织损害和损伤的先天性免疫应答和必要的防御反应。炎症的首要目标是预防感染原浸润或者将感染限于局部并加以根除，以及修复周围组织。炎性应答由渗出过程和细胞过程组成。所述渗出过程包括含有蛋白质(例如纤维蛋白和免疫球蛋白)的液体的运动，感染或损伤的上游血管的扩张和下游血管的收缩，以及受感染组织的毛细血管通透性增强(导致血浆向该组织中的净流失(水肿))。所述细胞过程包括个体白细胞、内皮细胞和其他细胞类型的一系列粘附和活化事件。白细胞和内皮细胞活化导致白细胞从脉管***渗出进入所述受到感染或损害的组织中，在所述组织中它们充当吞噬细胞用以移除细菌和细胞碎片以及诱发进一步的炎性或免疫应答。如果所述损伤原持续存在或者如果存在妨碍生物体内免疫稳态的炎性或免疫应答调节缺陷，则可能会出现慢性或全身性炎症。慢性或全身性炎症会导致白细胞继续渗出进入组织，以及巨噬细胞释放会损害该生物体组织的毒素(包括活性氧簇)。
当炎症对血管内皮和主要器官***产生有害作用时，会出现全身炎症反应综合征(“SIRS”)。当全身性炎症是由细菌、病毒、真菌或寄生虫引起时，其被称为“脓毒症(sepsis)”。如果脓毒症或SIRS导致了在给予充分液体复苏后仍无法纠正的持续性低血压，则会发生感染性休克。出血可能也会导致类似感染性休克的症状，例如组织缺血、器官功能障碍和血管衰竭。脓毒症是创伤(包括严重的出血和烧伤)后发病和死亡的一个主要原因。每年，在美国有超过750000人罹患严重脓毒症，并且有超过215000人死于该病症。
如果患者非常年幼(早产新生儿)或非常年长，或者具有一种或多种下述状况，则所述患者可能有患有脓毒症或SIRS的风险，所述状况为：创伤或损伤或烧伤；病危；重症社区获得性肺炎；腹内手术；脑[脊]膜炎；慢性疾病(包括糖尿病、心力衰竭、慢性肾衰竭和慢性阻塞性肺病)；免疫低下状态(HIV/AIDS、使用细胞毒性和免疫抑制试剂(例如化学疗法、放射疗法和类固醇))；蜂窝织炎；***；或者酒精成瘾或药物成瘾(alcohol or drug addition)。
SIRS和脓毒症均为针对感染和损伤的过度应答。这些过度应答通过炎症、血凝和受损纤溶的一种不受控级联反应破坏了稳态，导致全身性血管舒张，所述全身性血管舒张又会导致器官和组织灌注降低以及弥散性血管内凝血(“DIC”)。严重出血、脓毒症和SIRS可能会导致全身组织缺氧和组织损害，从而导致休克(给予充分液体复苏后仍无法纠正的低血压)和多器官功能障碍综合征(“MODS”)，通常会导致死亡。抗感染剂、复苏和支持性医护也不一定能预防微血管功能障碍或进行性器官功能障碍，所述病症在充分给予氧气后仍可能会持续下去。
SIRS和脓毒症是常见的微脉管***疾病。微血管功能障碍的特征在于灌注和氧利用率下降(导致微血管血栓形成)，以及功能性毛细血管密度降低。微血管功能障碍的特征还在于内皮功能障碍，包括血管紧张度下降、毛细血管通透性增加、内皮细胞凋亡和粘附分子表达增加(导致白细胞-内皮相互作用增强)。白细胞和内皮细胞的活化，以及这些细胞之间的相互作用均为炎症的先决条件。
内皮细胞参与白细胞外渗、细胞因子和趋化因子产生、抗原呈递、蛋白酶和细胞外基质合成、血管舒张、血管渗透性和血管生成的调节。由于处于炎症级联反应的起点，内皮细胞在许多病症、障碍和疾病(包括炎症与先天性和获得性免疫应答)的病理生理学中起到了关键性作用。因此，内皮细胞在具有炎性和/或免疫应答的障碍和疾病中是重要的治疗干预靶标。
白细胞粘附和活化通过一个事件级联发生，包括被内皮细胞捕获、沿内皮细胞层(lining)滚动、缓慢滚动、牢固粘附到所述内皮细胞的表面上，以及经由邻近内皮细胞的胞间空间迁移至受感染的组织中。滚动是通过与一大类被称为选择素的细胞粘附分子的低亲和力的可逆结合来发生的，所述选择素包括内皮选择素(“E-选择素”)、血小板选择素(“P-选择素”)和白细胞选择素(“L-选择素”)。内皮细胞表达P-选择素和E-选择素。L-选择素是在白细胞表面上表达的，它除了促进白细胞-内皮细胞相互作用外，还会促进白细胞之间的粘附，从而增强单独的白细胞-内皮细胞相互作用的效果。
白细胞与内皮细胞之间的牢固粘附——一种高亲和力且基本稳定的连接——是通过几类被称为整联蛋白的白细胞粘附分子和来源自免疫球蛋白超家族的粘附分子来加以促进的。所述免疫球蛋白超家族包括尤其是细胞间粘附分子(“ICAM”，例如ICAM-1和ICAM-2)、血管细胞粘附分子-1(“VCAM”)、神经细胞粘附分子(“NCAM”)和各种连接粘附分子(“JAM”，例如JAM-A、JAM-B、JAM-C)。尽管粘附分子通常是在细胞表面表达的，但它们也可能会以可溶分子的形式存在于循环中以及细胞外液中；可溶性粘附分子浓度的增加和某些粘附分子的细胞表面表达与某些病理相关。
细胞因子在限制和控制致病性感染方面以及在调控炎症和免疫应答方面起到了关键性作用。促炎性细胞因子与抗炎性细胞因子之间的稳态是维持适当的炎性和免疫应答所必需的。促炎性细胞因子包括某些干扰素(“IFN”)、肿瘤坏死因子(“TNF”)和某些白细胞介素(“IL”)。当存在感染、损伤和/或细胞损害时，由白细胞(主要是活化的巨噬细胞、活化的T-淋巴细胞、天然杀伤细胞、肥大细胞和嗜碱性粒细胞)、成纤维细胞、内皮细胞、脑星形胶质细胞和其他细胞分泌TNF。TNF促进其他促炎性细胞因子的产生，所述其他促炎性细胞因子包括但不限于干扰素(例如干扰素γ或“IFN-γ”)和各种白细胞介素(例如IL-1β、IL-1αβ、IL-6和IL-8)。类似地，其他促炎性细胞因子也可以促进TNF的产生。
TNF和其他促炎性细胞因子还会活化细胞，以便特别是增加细胞粘附分子(细胞表面上的受体和配体)的细胞表面表达以及刺激血小板活化因子的释放，从而诱导对血管内皮细胞的促凝血活性和增加白细胞的粘附。细胞粘附分子的增加会导致增加白细胞-内皮细胞相互作用；滚动；嗜中性粒细胞、单核细胞、活化的T辅助细胞和T-细胞毒性细胞以及记忆T和B细胞的粘附和渗入至所述受感染或损害的组织。在该组织中，T和B细胞活化导致抗体和补体释放。TNF和其他促炎性细胞因子所诱导的细胞粘附分子包括特别是VCAM-1、ICAM-1和E-选择素。
TNF和其他促炎性细胞因子及它们各自的受体是目前对感染与炎性和免疫障碍进行治疗干预的靶标。目前，许多抗细胞因子疗法均处于临床试验阶段或者已经被指出可用在脓毒症、银屑病、类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、克罗恩病(Crohn′s disease)、炎性肠病和溃疡性结肠炎的临床治疗中。单克隆TNF-α抗体、全长人类TNF-α抗体和多克隆TNF抗体已被提出可作为一种或多种炎症相关病症的可能疗法。参见美国专利No.7,012,135、6,090,382、6,509,015和6,193,969。
此外，还预期对TNF或其他促炎性细胞因子的产生或活动起抑制或拮抗作用的其他物质，以及抗炎性细胞因子及其受体的激动剂均为细胞因子介导的病状的有效治疗剂。参见例如美国专利No.7,034,031和7,018,626。据认为，细胞粘附分子的抑制剂或拮抗剂是适合的干预靶标，因为这些细胞粘附分子在炎性和免疫应答的发展过程中起到了基础性作用。然而，最近的证据表明抗促炎性细胞因子或其受体的抗体的使用可能会导致患严重感染和癌症的风险增加，这可能是因为所述抗体导致的抑制或阻断会限制患者在需要的时候产生适当的炎性和免疫应答的能力。
因此，需要一种治疗性组合物来治疗由促炎性细胞因子介导的病症，所述治疗性组合物可以调节或弱化但不会完全阻断或抑制促炎性细胞因子的作用。特别有用的是，所述治疗性组合物可调节白细胞和/或内皮细胞粘附分子(例如ICAM-1、VCAM-1和E-选择素)，对这些细胞粘附分子的调控可能由促炎性细胞因子或其他可促进炎性类型应答的内源物质诱发。
本发明目的在于克服一个或多个上文所述的问题，包括克服可有效调节响应于炎性应答诱导剂的细胞粘附分子表达的药物组合物的缺乏问题，因而所述药物组合物可用于预防或治疗一种或多种炎性病症、障碍或疾病。本文中涉及炎性病症的讨论包括：与促炎性细胞因子或其他炎症诱导剂、它们各自的受体相关的病症，以及那些与抗炎性细胞因子或它们的受体或者其他参与调节促炎性或抗炎性应答的物质的表达或调控受损相关的病症。本文中涉及炎性类型病症、障碍和疾病的讨论包括：与TNF(包括但不限于其他由TNF调节或调节TNF的促炎性细胞因子(例如IL-1或IL-6))产生和/或释放增加相关的病症、障碍和疾病。例如，IL-1相关疾病状态——其中IL-1的产生或作用响应于TNF而增强——应被认为是与TNF相关的疾病状态。类似地，IL-1相关病症——其中IL-1表达或释放得以增加并且从而导致TNF增加——还被认为是可由TNF介导或调节的疾病状态。
对于本文所公开的本发明而言，特征为局部或全身炎性应答并且因而被认为与TNF相关或者由TNF介导或调节的慢性和急性障碍、疾病、感染和损伤，包括但不限于：(1)涉及胃肠道和相关组织的疾病和障碍(例如阑尾炎、消化性溃疡、胃溃疡、十二指肠溃疡、腹膜炎、胰腺炎、溃疡性结肠炎、假膜性结肠炎、急性和缺血性结肠炎、憩室炎、牙周病、会厌炎、失弛缓症、胆管炎、胆囊炎、乳糜泻、肝炎、肝硬化、炎性肠病、克罗恩病、小肠炎和惠普尔氏病(Whipple′s disease))；(2)严重出血和全身或局部炎性疾病和病症(例如枯草热、哮喘、***反应、过敏性休克、免疫复合物病、器官缺血、再灌注损伤、器官坏死、失血性休克、脓毒症、感染性休克、败血症、全身炎症反应综合征(SIRS)、代偿性抗炎反应综合征(CARS)、多器官功能障碍综合征(MODS)、多器官功能衰竭(MOF)、内毒素休克、恶病质、高烧、嗜酸性肉芽肿、肉芽肿病和结节病)；(3)涉及泌尿生殖***和相关组织的疾病和病症(例如自发早产、胎盘早剥、复发性妊娠丢失(recurrent fetalloss)、流产感染、***、***炎、***炎、肾小球肾炎和尿道炎)；(4)涉及呼吸***和相关组织的疾病和障碍(例如支气管炎、肺气肿、鼻炎、囊性纤维化、肺炎(pneumonia)、肺炎(pneumonitis)、慢性阻塞性肺部疾病(COPD)、成人型(急性)呼吸窘迫综合征(ARDS)、超微粒硅酸盐尘埃沉着病(pneumoultramicroscopicsilico-volcanoconiosis)、肺泡炎、细支气管炎、咽炎、胸膜炎和鼻窦炎)；(5)由各种病毒、细菌、真菌、原生动物寄生虫和多细胞寄生虫导致的感染和由感染造成的疾病(例如流感病毒、呼吸道合胞病毒、人免疫缺陷病毒(HIV)、肝炎病毒、疱疹病毒、巨细胞病毒、脑脊膜炎和腺病毒、革兰氏阳性和革兰氏阴性菌、结核病、麻风)；(6)皮肤的皮肤病学疾病和病症(例如银屑病、过敏性和急性皮炎、光化性角化病、皮肌炎、化学烧伤和其他烧伤、晒伤、荨麻疹、疣和风疹块)；(7)涉及血液、淋巴和心血管***以及相关组织的疾病和病症(例如组织或器官缺血、再灌注损伤、血管炎、淋巴水肿、脉管炎、心内膜炎、动脉炎、动脉粥样硬化、血栓形成和血栓形成倾向、血栓性静脉炎、心包炎、充血性心力衰竭、心肌炎、心肌缺血、缺血性发作、结节性动脉周围炎、再狭窄、化疗相关贫血和风湿热)；(8)涉及中枢或周围神经***以及相关组织的疾病和病症(例如阿尔茨海默氏病、脑脊膜炎、脑炎、脱髓鞘疾病、多发性硬化、重症肌无力、脑梗死、脑栓塞、格林-巴利综合征(Guillane-Barre syndrome)、神经炎、神经痛、脊髓损伤、脑损伤、麻痹和葡萄膜炎)；(9)骨骼、关节、肌肉和***的神经性疼痛以及疾病和病症(例如各种关节炎和关节痛、骨吸收疾病、肌肉变性、食欲缺乏、恶病质、骨质疏松症、骨髓炎、筋膜炎、派杰病(Paget’sdisease)、痛风、牙周病、类风湿性关节炎、骨关节炎、幼年型慢性关节炎(JCA)、硬皮病、强直性脊柱炎和滑膜炎)；(10)自身免疫的和炎性的病症和障碍(例如抗磷脂综合征、重症肌无力、甲状腺炎、全身性红斑狼疮、肺出血肾炎综合征(Goodpasture′s syndrome)、白塞综合征(Behcet′s syndrome)、同种异体移植物排斥、移植物抗宿主疾病、高免疫球蛋白血症-D综合征(HIDS)、TNF-受体相关的周期性综合征(TRAPS)、胰腺β细胞损坏、胰岛素抵抗、I型和II型糖尿病、妊娠性糖尿病、妊娠胰岛素抵抗、贝格尔氏病(Berger′s disease)和莱特尔氏综合征(Reiter′s syndrome))；和(11)各种癌症、肿瘤和增生性障碍(例如霍奇金氏病(Hodgkin′s disease)、多发性骨髓瘤、急性和慢性髓细胞性白血病)、癌症和肿瘤的复发及转移，以及对这类癌症、肿瘤和增生性障碍所进行的外科手术、化学疗法和放射治疗导致的损伤或创伤。
发明内容
发现在患有脓毒症和SIRS的患者体内，血浆K+浓度升高而细胞内K+浓度相应降低，且细胞内Na+浓度和水含量升高。脓毒症和SIRS的这些症状表明钠-钾ATP酶(“Na+/K+ATP酶”或“钠泵”)可能会在炎性障碍中起作用。天然钠泵抑制剂存在于某些植物中和蟾蜍体内，包括被称为强心甾和蟾蜍二烯羟酸内酯(通常被称为强心类固醇，例如乌巴因(ouabain)、海蟾蜍毒素(marinofugenin)和洋地黄)的各类物质。发现在哺乳动物体内天然存在某些与外源强心甾和蟾蜍二烯羟酸内酯类似的物质(即内源的)，但是这些内源物质的功能尚未被完全阐明。强心苷被用于治疗人心脏疾患并且具有较窄的治疗范围。因此，已经开发出了针对各种强心甾和蟾蜍二烯羟酸内酯的抗体以解除危及生命的毒性。抗强心甾和蟾蜍二烯羟酸内酯的抗体通过防止这些物质与所述钠泵结合来发挥作用。
令人意外的是，已经发现针对强心甾和蟾蜍二烯羟酸内酯的抗体可用于调节促炎性细胞因子(例如肿瘤坏死因子)的作用。本发明的抗体可调节ICAM、VCAM和E-选择素的细胞因子诱导性细胞表面表达，所述表达对于炎症过程特别是对于到血管内皮上的白细胞粘附以及由脉管***到组织内的白细胞迁移至关重要。所述抗体还可以有效减少已被TNF活化的细胞内的细胞粘附分子表达。因此，这类抗体可用于预防和治疗细胞因子介导的炎性病症，特别是那些由TNF介导的病症。
由于已知内源钠泵抑制剂会与针对外源强心甾和蟾蜍二烯羟酸内酯的抗体交叉反应，因此也预期特异性针对内源钠泵抑制剂(“内源因子”或“EF”)的抗体适合用于调节细胞因子诱导的细胞粘附分子表达，并且因而可用于预防和治疗细胞因子介导的病症，本发明还包括抗EF的抗体。
因此，本发明涉及用于调节或弱化细胞粘附分子的细胞因子诱导性表达的地高辛抗体组合物(如本文所限定的)。本发明还提供了一种调节或弱化患者体内细胞粘附分子的细胞因子诱导性表达的方法，包括将地高辛抗体组合物给予需要它的患者。本发明的另一方面提供了一种通过给予地高辛抗体组合物来调节或弱化内皮细胞粘附分子ICAM、VCAM、P-选择素或E-选择素的细胞因子诱导性表达的方法。本发明的又一方面还提供了一种通过将地高辛抗体组合物给予需要它的患者来预防或治疗病症或疾病的方法，在所述疾病或病症中内皮细胞被促炎性细胞因子所活化。本发明的其他方面提供了通过给予有需要的受试者地高辛抗体组合物来预防和治疗各种细胞因子介导的病症(如本文所限定的)的方法。
细胞因子(包括TNF)——当在生物体内以适当的水平产生并且被适当地调节时——在细胞生命周期、针对外来攻击的细胞应答和稳态的维持中起到重要作用。一些针对抗TNF抗体和抗TNF受体的治疗用途进行的研究已经证明，这类治疗用途会导致有害副作用以及增加患有某些感染和病状的风险。因此，应理解的是，本发明的目标不是完全抑制促炎性细胞因子(例如TNF、IL-6、IL-8等)对细胞粘附分子的作用，而是在先天性免疫应答和获得性免疫应答过程中减弱针对促炎性细胞因子的细胞应答、恢复促炎性细胞因子与抗炎性(免疫抑制性)细胞因子的细胞应答之间的平衡，由此预防或治疗细胞因子介导的感染、障碍、病症、疾病和病状。
本发明的上述方面仅仅是对本发明相关无数方面的举例说明，并不应被认为是任何方式的限制。当结合附图阅读下述具体实施方式部分以后，本发明的上述和其他方面、特征和优点将变得显而易见。尽管与本文所述的方法和材料类似或等同的方法和材料也可以用于实施本发明，但是适合的方法和材料为下文所描述的。此外，所述材料、方法和实例仅是举例说明性的，并非意在以任何方式加以限制。本说明书所引用的所有的出版物、专利和专利申请均通过援引的方式纳入本说明书。
附图说明
图1为流程图，图示说明了用于治疗患有细胞因子介导病症的患者的方法的步骤。
图2A图示说明了已被TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞(“HUVEC”)的细胞间粘附分子-1(“ICAM”)的表达。
图2B图示说明了对HUEVC的ICAM的TNF-α诱导性表达的调节，其中所述HUEVC在与TNF-α接触前已经用地高辛抗体处理过。
图3A图示说明了TNF-α所诱导的HUEVC的血管细胞粘附分子-1(“VCAM”)的表达。
图3B图示说明了对HUEVC的VCAM的TNF-α诱导性表达的调节，其中所述HUEVC在与TNF-α接触前已经用地高辛抗体处理过。
图4A图示说明了TNF-α所诱导的HUEVC的血管细胞粘附分子E-选择素的表达。
图4B图示说明了对HUEVC的E-选择素的TNF-α诱导性表达的调节，其中所述HUEVC在与TNF-α接触前已经用地高辛抗体处理过。
图5A图示说明了TNF-α所诱导的ICAM表达以及随后用地高辛抗体处理HUVEC对该表达的弱化。
图5B图示说明了TNF-α所诱导的VCAM表达以及随后用地高辛抗体处理HUVEC对该表达的弱化。
图6图示说明了TNF-α所诱导的E-选择素表达以及随后用地高辛抗体处理HUVEC对该表达的弱化。
图7A为一种蟾蜍二烯羟酸内酯的苷元(aglycone)结构的实例。
图7B为一种强心甾的苷元结构的实例。
具体实施方式
应该注意的是，除非上下文中另外明确指出，本说明书和所附权利要求中使用的单数形式“一”、“一个”和“该”包括复数指代对象。除非另有限定，本文所用的所有技术术语和科学术语所具有的含义与本发明所属技术领域普通技术人员通常理解的相同。尽管与本文所述的那些方法、设备和材料类似或等同的任何方法、设备和材料均可以用在本发明的实践或测试中，但是优选的方法、设备和材料是现在所描述的。
I.定义和缩写本文所用的下述术语应具有下文所列出的定义。当这些术语以下文所定义的含义用于上下文中时，则可能会以该术语后面所列出的缩写形式来应用这类术语。
“患者”是指人和其他动物，并且意在包括任何动物或人受试者，所述受试者可受益于使用本发明的组合物和方法的治疗。
“钠泵”或“钠/钾ATP酶”或“Na+/K+ATP酶”是指钠-钾腺苷三磷酸酶，它是一种利用腺苷三磷酸(“ATP”)水解(ATP→ADP+PO4)产生的能量来将钠和钾离子逆其化学和电梯度转运过细胞膜的跨膜蛋白。钠泵是负责维持Na+的跨细胞膜电化学梯度的主要转运蛋白，并且对于调控细胞体积、胞质pH、Na+依赖性葡萄糖和氨基酸转运以及调控通过Na+/H+和Na+/Ca2+离子交换泵的Ca2+水平很重要。
“内源因子”或“EF”是指那些动物体内产生的与特异性地针对强心甾或蟾蜍二烯羟酸内酯的至少一种表位的抗体发生免疫交叉反应或者与所述抗体结合的因子，或者是那些能够与Na+/K+ATP酶结合、抑制或弱化Na+/K+ATP酶功能的因子。在本文中，EF有时还可能会被称为类地高辛物质(“DLS”)、类地高辛免疫活性物质或因子(“DLIS”或“DLIF”)或者内源性类地高辛因子(“EDLF”)。
“强心甾(和/或)蟾蜍二烯羟酸内酯”或“强心苷”是指对于患者而言外源的钠泵抑制剂。强心甾和蟾蜍二烯羟酸内酯通常被称为强心类固醇。强心甾和/或蟾蜍二烯羟酸内酯包括其苷元部分，包括但不限于洋地黄、羟基洋地黄毒苷配基、异羟基洋地黄毒苷配基、地高辛、洋地黄毒苷配基、洋地黄毒苷、二氢地高辛、毒毛旋花子苷、铃兰毒苷、加拿***苷(cymarine)、乙酰毒毛旋花子苷元、毒毛旋花子苷元、乌本苷元、乌巴因、二氢乌本苷、黄夹次苷乙、海葱次苷、海葱次苷A、华蟾蜍毒精(cinobufagen)、华蟾蜍素(cinobufatolin)、海蟾蜍毒素(marinobufagenin)、norbufalin、蟾蜍甾、蟾蜍灵和类似的化合物，以及它们各自的同分异构体、inotrope、同源物、变体、衍生物、等价物、前体和代谢产物，以及上述任何物质的合成或改造的形式或结构。
“内皮细胞活化”是指内皮细胞响应于环境刺激而发生的表型或功能变化，包括但不限于介导白细胞粘附和/或信号传导的分子的表达。已知会诱发人内皮细胞发生活化依赖性功能变化的刺激包括会与细胞表面受体相互作用的体液激动剂，包括但不限于细胞因子和多效性信号传导因子，例如凝血酶、细菌内毒素或脂多糖(“LPS”)及其他微生物产物、血液动力学扰动、氧化剂和辐射。内皮细胞活化可以为稳态的生理性血管应答(homeostatic physiologic vascular response)中的一种受调控事件，或者它可以为病理情况下的一种失调的或未调节的应答。
“全身炎症反应综合征”或“SIRS”是指由于任何原因导致全身炎症的症候群。SIRS的临床指标包括存在超过一种的下述状况：体温>100.4℉或<96.8℉(>38℃或<36℃)；心率>90搏/分；呼吸急促(呼吸率>20次呼吸/分)或通气过度(PaCO2<32mm Hg)；以及白细胞计数>12,000个细胞/mm3或<4,000个细胞/mm3或者存在超过10％的未成熟的嗜中性粒细胞。导致诊断为SIRS的全身炎性应答可能会与感染和许多非感染性病因(包括但不限于出血、烧伤、胰腺炎、创伤、中暑和瘤形成)两者均有关。
“脓毒症”是指由(细菌的、病毒的、真菌的或寄生物的)感染导致的SIRS，或者如美国胸科医生协会/危重病医学会现时定义的病症。
“严重脓毒症”是指进一步伴有器官灌注不足的脓毒症，所述器官灌注不足表现为至少一种器官功能障碍征候，例如低氧血、少尿、代谢性酸中毒或改变的大脑(神经)功能。
“感染性休克”是指进一步伴有低血压的严重脓毒症，所述低血压表现为收缩压<90mm Hg或者需要进行药物干预以维持血压。
“多器官功能障碍综合征”(“MODS”)是指在急性病患者体内两种或多种器官功能发生改变，使得在不进行干预的情况下无法维持稳态。
“细胞因子”是指影响细胞功能和/或调节免疫、炎性或造血应答中所涉及的细胞之间的相互作用的任何分泌的激素、肽、多肽、蛋白或其他物质。细胞因子包括但不限于任何细胞来源的单核因子、淋巴因子和趋化因子。例如，单核因子通常是指由单核细胞(例如巨噬细胞和/或单核细胞)产生和分泌的。然而，许多其他细胞也产生单核因子，例如天然杀伤细胞、成纤维细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、内皮细胞、脑星形胶质细胞、骨髓基质细胞、表皮角质形成细胞和B-淋巴细胞。细胞因子的实例包括但不限于干扰素(包括IFN-α、IFN-β、IFN-γ等)、白细胞介素(包括IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、IL-17、IL-18、IL-19等)、肿瘤坏死因子(“TNF”，包括TNF-α和TNF-β等)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(“GM-CSF”)、嗜中性粒细胞活化蛋白-1(“NAP-1”)、嗜中性粒细胞活化蛋白-2(“NAP-2”)、GRO-α、GRO-β、GRO-γ、ENA-78、GCP-2、IP-10、MIG、PF4、RANTES、MIP-1α、MIP-2β、单核细胞趋化蛋白(MCP-1、MCP-2、MCP-3等)、嗜酸细胞活化趋化因子，并且包括非免疫的细胞因子例如C反应蛋白、活化的蛋白C、红细胞生成素和血小板生成素。免疫细胞因子可以被分为那些促进T辅助细胞类型1(“TH1-型”)的增殖和功能发挥的细胞因子和促进T辅助细胞类型2(“TH2-型”)的增殖和功能发挥的细胞因子，所述促进T辅助细胞类型1的增殖和功能发挥的细胞因子通常为促炎性的(例如IL-1、IFN-γ等)，所述促进T辅助细胞类型2的增殖和功能发挥的细胞因子通常为抗炎性的(例如IL-4、IL-10、IL-13、TGF-β等)。通常，属于上述一个亚类的细胞因子倾向于抑制属于另一亚类的细胞因子的作用，它们彼此调节并且产生趋向于平衡的炎性和/或免疫应答的趋势。无法维持平衡或调节炎性和免疫应答的能力可能会在炎性和免疫病症和疾病的发病过程中发挥重要作用。对于本发明来说，据认为，促炎性细胞因子为直接或间接影响白细胞或内皮细胞活化的任何分子、激素、肽、多肽、蛋白或其他物质或者一种或多种物质的组合物。
“调节”、“在调节”或“调整”是指但不限于——对于基因、核糖核酸、肽、多肽、蛋白、激素或其它物质——影响、调控、调整、缓和、减轻或抑制所述表达、转录、翻译、修饰、切割、降解、贮藏、易位、再循环、释放、亲合力、亲和力或活性，或其可溶或结合形式，或者其在所述细胞、细胞膜、细胞表面、细胞外液、基质、血清或血浆中的存在。
“升高的水平”是指具有异常的病症、生理状态、障碍、疾病或病状的患者的组织或体液内所述物质的水平与不具有这类病症、生理状态、障碍、疾病或病状的人的类似或相应组织或体液(例如含有基础水平的所述物质或者含有稳态水平的这类物质)相比较高。
除非另外特别描述，“TNF”是指肿瘤坏死因子α(TNF-α，也被称为恶液质因子)和/或肿瘤坏死因子β(TNF-β，也被称为淋巴毒素)。
“IFN”是指干扰素。人I型干扰素由13种不同的α同种型(特异性稍微不同的亚型)——IFN-α(1、2、4、5、6、7、8、10、13、14、16、17、21)和单一的β(“IFN-β1”)、ω、ε和K同种型构成。II型干扰素由IFNγ构成(“IFN-γ”)。III型干扰素由IFN-λ构成。
“细胞因子介导的病症”是指任何的和所有的TNF作为促炎性剂的感染、生理状态、病症、综合征、障碍、疾病和病状，其中所述的TNF作为促炎性剂可以是直接也可以是间接的，并且可以是由于TNF的表达(转录和/或翻译)增加、TNF的修饰、贮藏、易位、释放、降解或再循环改变导致的，也可以是利用任何其他方法导致的，所述其他方法包括但不限于：通过调节任何抗炎性细胞因子或者其受体或代谢产物或者通过任何可调节TNF的细胞因子(或其受体或代谢产物)的作用；或者无论是通过TNF导致另一细胞因子被易位或被释放还是通过TNF影响这种其他细胞因子(或者其各自受体或代谢产物)的表达(转录和/或翻译)、所述其他细胞因子的修饰、易位、释放、降解或再循环的改变；或者无论是通过调控、调节或抑制(完全地或部分地)TNF作用的细胞因子或细胞因子受体的表达(转录和/或翻译)减少，还是所述细胞因子或细胞因子受体的修饰、易位、释放、降解或再循环变化。因而，例如但不限于下述的病症将会被被认为是细胞因子介导的病症，即其中IL-1为组成成分并且其产生或作用响应于TNF而被加剧或减弱。类似地，一种与导致TNF分泌的IL-1相关的病症也将会被认为是细胞因子介导的病症。“细胞因子介导的病症”包括但不限于下述疾病：(1)涉及肠胃道和相关组织的疾病和障碍(例如阑尾炎、消化性溃疡、胃溃疡、十二指肠溃疡、腹膜炎、胰腺炎、溃疡性结肠炎、假膜性结肠炎、急性和缺血性结肠炎、憩室炎、牙周病、会厌炎、失弛缓症、胆管炎、胆囊炎、乳糜泻、肝炎、肝硬化、炎性肠病、克罗恩病、小肠炎和惠普尔氏病)；(2)严重出血和全身或局部炎性疾病和病症(例如哮喘、***反应、过敏性休克、免疫复合物病、器官缺血、再灌注损伤、器官坏死、枯草热、失血性休克、脓毒症、感染性休克、败血症、新生儿脓毒症、全身炎症反应综合征(SIRS)、代偿性抗炎反应综合征(CARS)、多器官功能障碍综合征(MODS)、多器官功能衰竭(MOF)、内毒素休克、恶病质、高烧、嗜酸性肉芽肿、肉芽肿病和结节病)；(3)涉及泌尿生殖***和相关组织的疾病和病症(例如自发早产、胎盘早剥、复发性妊娠丢失(recurrent fetalloss)、流产感染、***、***炎、***炎、肾小球肾炎和尿道炎)；(4)涉及呼吸***和相关组织的疾病和障碍(例如支气管炎、肺气肿、鼻炎、囊性纤维化、肺炎(pneumonia)、肺炎(pneumonitis)、慢性阻塞性肺部疾病(COPD)、成人型(急性)呼吸窘迫综合征(ARDS)、超微粒硅酸盐尘埃沉着病、肺泡炎、细支气管炎、咽炎、胸膜炎和鼻窦炎)；(5)由各种病毒、细菌、真菌、原生动物的和多细胞的寄生虫导致的感染和由感染造成的疾病(例如流感病毒、呼吸道合胞病毒、人免疫缺陷病毒(HIV)、肝炎病毒、疱疹病毒、巨细胞病毒、脑脊膜炎和腺病毒、革兰氏阳性和革兰氏阴性菌、结核病、麻风)；(6)皮肤的皮肤病学疾病和病症(例如银屑病、过敏性和急性皮炎、光化性角化病、皮肌炎、化学烧伤和其他烧伤、晒伤、荨麻疹、疣和风疹块)；(7)涉及血液、淋巴和心血管***以及相关组织的疾病和病症(例如组织或器官缺血、再灌注损伤、淋巴水肿、血管炎、脉管炎、心内膜炎、动脉炎、外周血管疾病、动脉粥样硬化、血栓形成和血栓形成倾向、血栓性静脉炎、心包炎、充血性心力衰竭、心肌炎、心肌缺血或梗死形成、缺血性发作、结节性动脉周围炎、再狭窄、化疗相关贫血和风湿热)；(8)涉及中枢或周围神经***以及相关组织的疾病和病症(例如阿尔茨海默氏病、脑脊膜炎、脑炎、脱髓鞘疾病、多发性硬化、重症肌无力、脑梗死、脑栓塞、格林-巴利综合征(Guillane-Barre syndrome)、神经炎、神经痛、脊髓损伤、脑损伤、麻痹和葡萄膜炎)；(9)骨骼、关节、肌肉和***的神经性疼痛以及疾病和病症(例如各种关节炎和关节痛、骨吸收疾病、肌肉变性、食欲缺乏、恶病质、骨质疏松症、骨髓炎、筋膜炎、派杰病(Paget’sdisease)、痛风、牙周病、类风湿性关节炎、骨关节炎、幼年型慢性关节炎(JCA)、硬皮病、强直性脊柱炎和滑膜炎)；(10)其他自身免疫的和炎性的病症和障碍(例如抗磷脂综合征、重症肌无力、甲状腺炎、全身性红斑狼疮、肺出血-肾炎综合征(Goodpasture′s syndrome)、白塞综合征(Behcet′s syndrome)、同种异体移植物排斥、移植物抗宿主疾病、高免疫球蛋白血症D综合征(HIDS)、TNF-受体相关的周期性综合征(TRAPS)、胰腺β细胞损坏、胰岛素抵抗、I型和II型糖尿病、妊娠期糖尿病、妊娠胰岛素抵抗、贝格尔氏病(Berger′s disease)和莱特尔氏综合征)；和(11)各种癌症、肿瘤和增生性障碍(例如霍奇金氏病(Hodgkin′sdisease)、多发性骨髓瘤、急性和慢性髓细胞性白血病)、癌症和肿瘤的复发及转移，以及对这类癌症、肿瘤和增生性障碍所进行的外科手术、化学疗法和放射治疗导致的损伤或创伤。
“治疗有效”是指有效治疗生理状态、病症、障碍、综合征、感染、疾病或病状或者它们的任何症状。本文所用的“治疗”包括但不限于，针对生理状态、病症、障碍、综合征、感染、疾病或病状的一种或多种病因、影响或者生理或临床适应症进行预防(预防性的)、降低其严重程度、控制、限制其影响、延迟其发作、防止其发展、使其消退、减轻或改善。优选地，治疗有效的组合物在患者体内不会导致任何不能接受的或明显的有害作用，包括任何病症或症状的恶化或者导致任何并发症以使得所述有害作用的风险超出从所述治疗所获得的效益。治疗有效的组合物可能会改善或稳定一种或多种医疗参数，所述医疗参数在不存在所述组合物的情况下可能会恶化或发展成为感染、病症、障碍、综合征、疾病或病状的症状或并发症。在合理的医疗判断的范围内，药物活性试剂(成分)或含有该活性成分的药物组合物的所需剂量将会根据下述因素而有所变化：所要治疗的病症的严重程度、治疗的持续时间、辅助治疗的性质、患者的性别、体重、年龄和身体状况(健康或生病)、所采用的具体活性成分，以及本文所更加充分讨论的考虑因素。在确定特定药物组合物或试剂的治疗有效量时，必须考虑这些风险，以及本文所述组合物在较低剂量水平时即可产生药物活性这一事实。当与本发明的组合物连用时，“治疗有效”包括地高辛抗体的量，所述量可在一种或多种细胞类型或组织内有效调节或弱化TNF的一种或多种影响，并且因此对细胞因子介导的病症产生所需的治疗作用。具体而言，治疗有效量的地高辛抗体将具有调节或弱化TNF所导致的内皮细胞活化的作用，并且最优选将会调节或弱化TNF对ICAM、VCAM、P-选择素或E-选择素的内皮细胞表面表达的作用。
“另一种治疗试剂”或“其他治疗试剂”是指已经使用、正在使用或已知可以使用或者在未来可能会被开发用于细胞因子介导的病症的任何物质或治疗试剂(而非本发明的组合物、试剂和活性成分)。例如，用于治疗细胞因子介导的病症的试剂包括但不限于：特异性抗细胞因子或细胞因子受体的抗体(例如英夫利昔单抗、益赛普(enteracept)、阿达木单抗)；非类固醇类的抗炎性试剂；皮质激素；抗细胞粘附分子的抗体(例如特异性抗ICAM、VCAM、E-选择素、P-选择素、整联蛋白、钙粘蛋白等的一个表位的抗体)；活化的蛋白C；TH-2型细胞因子激动剂；TH-1型细胞因子拮抗剂；和适用于一种或多种已知或据认为存在于所述患者体内的细菌感染的抗生素。这类其他的治疗试剂可能会以下述方式与本发明的化合物同时或连续给药，即通过通常用于这类药剂的方式或方法、用量和给药时间进行给药。
“皮质激素”是指可以来源自胆固醇并且特征为(无论是天然存在还是合成的)氢化的环戊烷多氢菲环***的任何天然存在或合成的(完全地或部分地)类固醇激素。皮质激素可能会具有糖皮质激素和/或盐皮质激素的活性。皮质激素包括但不限于：***、倍他米松、曲安西龙、曲安奈德、双醋曲安西龙、己曲安奈德、丙酸倍氯米松、丙酸倍氯美松一水合物、特戊酸双氟美松、双醋二氟拉松、氟轻松、氟米龙、醋酸氟米龙、丙酸氯倍他索、去羟米松(desoximethasone)、氟***、氟泼尼龙、氢化可的松、醋酸氢化可的松、氢化可的松丁酸酯、氢化可的松磷酸钠、氢化可的松琥珀酸钠、环戊丙酸氢化可的松、氢化可的松丁酸丙酸酯(hydrocortisone probutate)、戊酸氢化可的松、醋酸可的松、醋酸帕拉米松、甲泼尼龙、醋酸甲泼尼龙、琥钠甲泼尼龙、***龙、醋酸***龙、***龙磷酸钠、***龙叔丁乙酯、氯可托龙特戊酸酯、***21-乙酸酯、倍他米松17-戊酸酯、异氟泼尼龙、9-氟可的松、6-羟基***、二氯松、甲氯松、氟泼尼定、多倍他索、卤***、卤米松、氯倍他松、二氟可龙、异氟泼尼龙乙酸酯、氟羟基雄烯二酮(fluorohydroxyandrostenedione)、二氟美松、二氟拉松、氟轻松、氯倍他索、可的松、帕拉米松、氯可托龙、***龙21-半琥珀酸酯游离酸(prednisolone 21-hemisuccinate free acid)、***龙间磺苯甲酸酯和曲安奈德21-棕榈酸酯。
“组合物”——例如在药物组合物或治疗有效性组合物中——是指含有一种或多种所述活性成分以及一种或多种所述惰性和无活性成分(包括可药用载体和赋形剂)的产物，以及可直接或间接地由任何两种或多种所述成分的结合、复合或聚集而得，或者由一种或多种所述成分解离而得，或者由一种或多种所述成分的其他类型反应或相互作用而得的任何产物。因此，本发明的药物组合物包括通过将本发明的地高辛抗体、一种或多种其他的活性成分和/可药用载体或赋形剂混合而制备的任何组合物。
“可药用”是指用在本文所述的本发明的药物组合物中的药物活性成分和其他成分适用于与人和其他动物的细胞或组织接触而不会产生过度的毒性、刺激、过敏反应等，与合理的效益/风险比相称(即从已知的药物风险来看，所述效益超过这些风险)。
“载体”或“赋形剂”是指固体、半固体、液体、气溶胶或气体填充剂、稀释剂或包封物质。这些材料为药物学领域技术人员所公知。所述可以作为药物载体的物质的一些实例为：糖类(固体或液体形式)，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，例如羟甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；西黄蓍胶粉；麦芽；明胶；滑石；硬脂酸；硬脂酸镁；硫酸钙；植物油，例如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和梧桐科植物的油；多元醇，例如丙二醇、甘油、山梨糖醇、甘露醇和聚乙二醇；琼脂；海藻酸；无热原水和注射用无菌水；等渗盐水；和磷酸盐缓冲溶液，以及用于药物制剂的其他无毒的相容性物质。它们可能会含有脂质体或者用脂质或聚合物颗粒(包括可生物降解的聚合物)制成的药物载体，或者具有靶向给药应用，例如与抗体偶联。还可以存在湿润剂和润滑剂(例如月桂基硫酸钠)，以及着色剂、芳香剂、压片剂和防腐剂。适合的载体和赋形剂在药物学领域中的标准参考书——最新版的A.Gennaro，Remington The ScienceandPractice of Pharmacy(ed.20th，Lippincot & Williams 2000)中有所描述。下文中进一步讨论了特别适合于本发明的载体和赋形剂。将所述活性成分与载体和赋形剂配制成药物组合物的过程可以使用任何一种或多种本领域中已知的方法来完成。
“抗原”是指能够被抗体结合的物质或物质的一部分，所述物质或物质的一部分还可能会诱发动物产生选择性结合该抗原的一个表位的抗体。抗原可能会具有一个或多个表位。“表位”是指可被结合结构域识别的特定抗原性结构。表位通常由分子的化学活性表面基团(例如氨基酸或糖侧链)构成，并且具有特定的三维结构特征及特定的带电特征。本文所用的“抗原”还可能是指能够被抗体结合(无论是特异性还是非特异性地)的任何配体，无论这类配体是否会在患者体内引发免疫应答。
“抗体”是指具有CDR或者结合结构域或者与CDR或结合结构域基本上同源的结构的免疫球蛋白、肽、多肽、蛋白或其它分子，无论是天然的还是部分或完全通过合成方法改造或构建的。抗体的实例为免疫球蛋白同种型及它们同型的亚类；CDR、结合片段和双抗体(如下文所定义的)。所述术语还包括抗体的衍生物、功能性等价物和同源物，包括任何含有CDR或结合结构域的肽，无论是天然的还是完全或部分合成的或改造的，并且无论是多克隆的、单克隆的、人源化的、嵌合的或完全人源性的。各种产生这类抗体的方法在美国专利No.5,225,539、美国专利No.5,693,761、美国专利No.5,869,619、美国专利No.5821，337、美国专利No.5859，204、美国专利No.6,946,546、美国专利No.6,939,543、美国专利No.6,926,896、美国专利No.6,924,125、美国专利No.6,893,624和美国专利No.6,881,557中有所描述，上述每篇专利均通过引用的方式纳入本说明书。术语Fv、Fc、Fd、Fab、Fab’或F(ab’)2采用它们的标准含义。参见，例如Harlow et al.，Antibodies a LaboratoryManual，Cold Spring Harbor Laboratory(1988)。
“改造的抗体”是指一类改变过的抗体，其中所选受体抗体的轻链和/或重链可变结构域的一部分可被来源自一种或多种供体抗体的类似部分所置换，所述一种或多种供体抗体具有针对所选表位的特异性(例如但不限于，嵌合的、完全人源性的或人源化的抗体，而不是抗体片段)。例如，这类分子可能会包括特征为与未修饰轻链(或嵌合轻链)连接的人源化重链的抗体，或反之亦然。改造的抗体的特征还可能为改变编码所述受体抗体轻和/或重链可变结构域框架区的核酸序列以保持供体抗体结合特异性。这些抗体可以包括用来源自供体抗体的CDR置换所述受体抗体的一个或多个(优选全部)CDR。
“嵌合抗体”是指这样一类改造的抗体，即所述抗体含有与来源自受体抗体的恒定区连接的、来源自供体抗体的天然存在的可变区(或其一部分)。
“人源化抗体”是指这样一类改造的抗体，即所述抗体的CDR来源自非人供体免疫球蛋白，该分子的其余免疫球蛋白来源部分来源自一种或多种人免疫球蛋白。此外，可以改变框架支持残基以保持结合亲和力。参见，例如Queen et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，86：10029-10032(1989)。
“双抗体”是指多肽的多聚体，每个多肽均包含一个含有免疫球蛋白轻链的结合区的第一结构域和一个含有免疫球蛋白重链的结合区的第二结构域，这两个结构域被连接起来(例如通过肽接头)但不能彼此缔合以形成结合结构域。结合结构域是通过将所述多聚体内一个多肽的第一结构域与所述多聚体内另一个多肽的第二结构域缔合起来形成的(例如美国专利申请公布文本20050214860)。
“互补决定区”或“CDR”是指抗体的互补决定区氨基酸序列，所述互补决定区氨基酸序列为免疫球蛋白重链和/或轻链的超变区。参见，例如Kabat et al.，Sequences of Proteins of Immunological Interest(4th Ed.，U.S.Department of Health and Human Services，National Institutes ofHealth，1987)。在天然存在的免疫球蛋白的可变部分中存在三个重链CDR或CDR区和三个轻链CDR或CDR区。因此，如果适合的话，本文中所用的天然存在(未改造的抗体)的CDR是指全部三种重链CDR或全部三种轻链CDR，或全部重链CDR和全部轻链CDR。CDR为所述抗体与所述抗原或表位的结合提供大多数接触残基。
“结合片段”是指整个抗体(含有Fc和Fv区)和天然存在或用合成方法构建的分子的一个或多个具有整个结合结构域或其一部分的片段，所述结合结构域或其一部分可——特异性的或非特异性的——与配体或抗原或抗原的表位结合。
“结合结构域”是指抗体或任何其他天然存在的、合成、改造的抗体或构建的分子(包括但不限于萼状蛋白(calycin protein))的一部分，所述部分可与整个配体或抗原或抗原的表位或它们的一部分结合和/或互补。
“地高辛抗体”是指天然存在或者完全或部分地合成或改造的抗体或结合片段，所述抗体或结合片段可与洋地黄、地高辛、洋地黄毒苷、洋地黄毒苷配基、异羟基洋地黄毒苷配基、羟基洋地黄毒苷配基、任何内源的类地高辛因子(例如美国专利申请公布文本20050123999中所述的)或任何一种或多种前述分子的任何表位发生免疫反应或结合(特异性地或非特异性地)，或者所述抗体或结合片段含有针对上述物质的结合结构域或CDR。地高辛抗体包括特异性抗任何强心甾或蟾蜍二烯羟酸内酯的抗体，所述抗体具有与洋地黄、地高辛、洋地黄毒苷、洋地黄毒苷配基、异羟基洋地黄毒苷配基、羟基洋地黄毒苷配基或任何内源性类地高辛因子的至少一种表位结合的能力。例如但不限于，地高辛抗体包括特异性抗地高辛、乌巴因、蟾蜍灵和海蟾蜍毒素的抗体，或特异性抗前述任一物质的缀合物的抗体。地高辛抗体还包括能够与洋地黄、地高辛、洋地黄毒苷、洋地黄毒苷配基、异羟基洋地黄毒苷配基或羟基洋地黄毒苷配基或者它们的表位结合的萼状蛋白，无论是天然存在的或者完全或部分地合成的或改造的。萼状蛋白超家族的特征在于由反平行的β折叠以与免疫球蛋白的CDR区类似的方式形成的结构基序。脂质运载蛋白、脂肪酸结合蛋白(“FABP”)和抗生物素蛋白均是萼状蛋白超家族的成员。萼状蛋白为相对较小的分泌蛋白，该蛋白被认为会参与疏水分子的结合和转运。所述结合的特异性通过蛋白的构象以及由该蛋白折叠所产生的口袋的组成侧链来确定。在体外，许多脂质运载蛋白均可以高亲和力与许多在自然界中不常见的疏水分子结合。这可能代表了所述蛋白与具有特别生化和结构性质的分子结合的固有能力。根据功能可将萼状蛋白划分为“结合结构域”和“靶向结构域”。所述“结合结构域”的功能是与配体相互作用，而所述“靶向结构域”的功能是在将所述结合配体转运到确定位点时为其提供特异性。已知的脂质运载蛋白包括：视黄醇结合蛋白；红紫素；视黄酸结合蛋白；α2μ-珠蛋白；主要尿蛋白；后胆色素结合蛋白；α-甲壳蓝蛋白；妊娠蛋白14；β-乳球蛋白；嗜中性粒细胞脂质运载蛋白和脉络丛蛋白；气味结合蛋白；冯埃布纳氏腺蛋白；probasin；和阿弗洛底辛(aphrodisin)。脂质运载蛋白似乎对炎性级联事件有调控作用并且防止过度的组织损伤。参见，Fowler D，FEBS Letters 354：7-11(1994)；Fowler D，J.Molec.Recognition 8：185-195(1995)；Fowler D，Biochem.J.318：1-14(1996)。如Schlehuber S and Skerra A，BiophysicalChemistry 96：213-228(2002)；美国专利申请20050106660；PCT申请WO 99/16873和WO 00/75308中所述(每篇申请均纳入本说明书)，萼状蛋白可被改造为具有指定的配体特异性。如前述PCT申请所述，后胆色素结合蛋白脂质运载蛋白已经被具体地改造为可结合异羟基洋地黄毒苷配基，并且因此被包括在“地高辛抗体”的定义内。
“地高辛结合能力”是指能够被给定量的地高辛抗体组合物所结合的地高辛的量。例如，一瓶
Figure A200780031562D0023083533QIETU
含有38mg的总地高辛抗体并且能够结合约0.5mg的地高辛，即一瓶具有0.5mg地高辛结合能力或0.013mg结合的地高辛/mg抗体(0.5mg地高辛÷38mg总抗体)。类似地，一瓶DIGIFABTM的现有制剂含有40mg总地高辛抗体且一瓶具有0.5mg地高辛能力或0.0125mg结合的地高辛/mg抗体(0.5mg÷40mg总抗体)。非特异性抗地高辛(但仍然与地高辛反应或结合)的抗体的地高辛结合能力可以按照下文所述的方式来确定。
“中和剂量”当与“地高辛抗体”连用用于治疗细胞因子介导的病症时，是指这样一种地高辛抗体组合物，即所给予的该组合物的地高辛结合能力量可中和患者体内特定量的TNF，就好像TNF等价于地高辛并且认为同等量的地高辛浓度是有毒的或毒性的以便用地高辛抗体来保证治疗。例如，对于患有严重脓毒症并且循环***中TNF浓度为400pg/ml(0.4ng/ml)的体重100kg的患者来说，根据产品说明书
Figure A200780031562D0023112100QIETU
(38mg的抗体；0.5mg地高辛结合能力/瓶)的中和剂量将按照下述方式确定：(0.4ng/ml x 100kg)/100＝.4瓶 x 38mg抗体/瓶＝15.2mg抗体。本领域普通技术人员使用
Figure A200780031562D0023083632QIETU
和DIGIFABTM的产品说明书中所提供的信息和指导可以容易地确定这些组合物的中和剂量。
“低剂量”当与“地高辛抗体”连用用于治疗细胞因子介导的病症时，是指这样一种地高辛抗体组合物，即其地高辛结合能力高于中和剂量且低于0.005mg地高辛结合能力/kg患者体重。低剂量组合物的非限制性实例在下述表I和表II中有所描述。
“高剂量”当与“地高辛抗体”或“地高辛抗体群”连用用于治疗细胞因子介导的病症时，是指这样一种地高辛抗体组合物，即它具有0.005mg/kg患者体重或更高的地高辛结合能力。优选地，“高剂量”组合物具有表III、IV或V中任一个所提供的地高辛结合能力。
“mg”是指毫克。
“μg”或“mcg”是指微克。
“pg”是指皮克。
“ng”是指纳克。
“kg”是指千克。
“ml”是指毫升。
“临床总体印象量表”或“CGI”是指对下述情况的临床评估：(1)评价时患者病情的严重程度(“CGI-S”)，和/或(2)从先前的评价或最初的严重程度筛选时起患者病情的改善(“CGI-I”)。设计用CGI来记录所述患者整体病情的总临床印象。参见Guy W.，ECDEU Assessment Manual forPsychopharmacology-Revised，Rockville，Maryland，U.S.Dept.Healthand Human Services[Publ No ADM 76-338](1976，第218-222页)。尽管优选下文所述的CGI-S和CGI分级，但是对于本发明来说，可以使用原始的Guy分级或者任何变更形式的CGI-S和/或CGI-I分级。
严重程度分级(CGI-S)        改善(或变化)分级(CGI-I)
1.正常，根本没有生病       1.改善得非常多
2.介于生病和未生病之间     2.改善得多
3.轻微患病的               3.有最低程度的改善
4.适度患病的               4.无变化
5.明显患病的               5.有最低程度的恶化
6.严重患病的               6.恶化得多
7.患病非常严重的患者       7.恶化得非常多
II.钠泵的可能作用
Na+/K+ATP酶是一种普遍存在的膜结合蛋白，其作用为通过利用ATP至ADP的水解来将Na+移出并且将K+移入细胞，从而保持跨细胞膜的化学和电梯度。Na+/K+ATP酶产生的能量会驱动其他细胞膜转运、共转运和交换***，允许阳离子、阴离子、氨基酸和葡萄糖跨细胞膜移动，并且维持重要的细胞功能，包括可兴奋细胞内的膜电势、渗透平衡和细胞体积的调控以及细胞内Na+和Ca2+的浓度。Na+/K+ATP酶活性会响应于细胞环境的变化而变化，以便维持细胞内Na+的低浓度和正常的电化学梯度。
任何可改变Na+/K+ATP酶的正常活性的物质或生理状况将会具有改变胞内Na+和Ca2+浓度以及电化学梯度的作用，导致各种细胞功能障碍。Na+/K+ATP酶是唯一已知的强心苷(例如洋地黄、乌巴因和海蟾蜍毒素)受体。外源强心苷结合位点的存在表明存在内源钠泵抑制剂，且它们具有调控Na+/K+ATP酶活性、胞内钠和钙离子稳态的作用，因而内源钠泵抑制剂可能会调控各种细胞功能。已经推测异常的钠泵活性与各种疾病的病理生理学(包括心血管病症、神经障碍、肾病症和代谢失调)相关。
已经证明了乌巴因可刺激鼠巨噬细胞和人胚胎成纤维细胞内的促炎性细胞因子基因表达(例如TNF和GM-CSF)。参见Ohmori Y.，et al.，J.CellPhysiol.148：96-105；Tamura M.，et al.，(1985)J.Biol.Chem.260：9672-9677。乌巴因对Na+/K+ATP酶的抑制还会刺激VCAM-1基因表达和iNos表达。Bereta J.，et al.，FEBS Leters 377：21-25(1995)。
此外，已知对Na+/K+ATP酶的抑制会导致细胞单层脱附以及细胞间连接分离。Contreras RG，et al.，J.CellSci.112：4223-4231(1999)。Na+/K+ATP酶活性是肾上皮细胞的E-钙粘蛋白介导的细胞间粘附所必需的，并且是这些细胞的极化、细胞活动和抑制侵入所必需的。Rajaskekaran SA.，et al.，Mol.Biol.Cell 12：270-295(2001)。已经证明Na+/K+ATP酶活性水平通过作用于胞内Ca2+来对细胞粘附产生明显影响。Belusa R，et al.，Am J.Physiol Cell Physiol 282：302-309(2002)。
因此，本文建立了下述理论：所述炎性应答的一种或多种特征(包括内皮细胞活化和血管渗透性)可由Na+/K+ATP酶介导。
III.钠泵抑制剂
已知强心苷(强心甾和蟾蜍二烯羟酸内酯)会特异性抑制Na+/K+ATP酶。它们具有两个结构特征：糖部分(糖苷)和非糖甾类部分(苷元)。糖苷部分不会明显影响钠泵结合亲和力，但是可能会改变所述强心苷的生物药剂学和药物代谢动力学性质。已知强心甾和蟾蜍二烯羟酸内酯的苷元部分是钠泵抑制剂。PullenMA，et al.，J.Pharm.and Exp.Therapeutics 310(10)：319-325(2004)。图7A和7B中分别示出了强心甾和蟾蜍二烯羟酸内酯大类的苷元。
在患有盐皮质激素高血压(原发性醛固酮增多和异位促皮质素综合征)、原发性高血压、脑损伤和血浆容量扩张态的高血压(包括正常血压的妊娠和并发妊娠性高血压的妊娠(先兆子痫/子痫))的患者体内存在内源钠泵抑制剂。这些内源因子可在体外抑制钠/钾ATP酶的活性并且与抗外源钠泵抑制剂(例如地高辛和乌巴因)的抗体发生交叉反应。所述内源因子已经被不同的名称描述为“内洋地黄素(endoxin)”、“endobain”、“类地高辛”、“类洋地黄”、二氢地高辛、“内源乌巴因”、“类乌巴因”、二氢乌巴因、“类二氢乌巴因”、“类海葱次苷A”、“内源海蟾蜍毒素”、“类海蟾蜍毒素”、“类蟾蜍灵”和19-norbufalin。已知在体外，内源因子导致的钠泵抑制可以通过加入抗强心甾和蟾蜍二烯羟酸内酯的抗体(特别是地高辛免疫Fab)而被阻止和逆转。Pullen MA，et al.，J.of Pharm.and Exp.Therapeutics 310(10)：319-325(2004)。
洋地黄或其成分——地高辛和洋地黄毒苷——均是用于治疗心律失常、心功能不全和充血性心力衰竭的主要强心类固醇。地高辛和洋地黄毒苷均具有较窄的治疗范围(1.0-1.9nmol/L或约0.8-1.5ng/ml血清地高辛浓度)，并且这些药物的用药过量很常见。通过给予多克隆地高辛免疫Fab(羊的)来治疗地高辛用药过量和危及生命的地高辛毒性。人们相信抗体可抵消地高辛或洋地黄的作用，因为所述抗体的结合结构域会与强心苷结合，从而防止其抑制或调控Na+/K+ATP酶的表达或功能。如果所述抗体是特异性针对所述强心苷，则所述抗体将会以高亲和力与强心苷结合，有利于将强心苷移出组织并且使所得的抗原/抗体复合物从体内被清除。
IV.治疗性抗体概述
如本文所进一步描述的，已经意外地发现地高辛抗体可有效调节TNF诱导的细胞粘附分子的表达，特别是在血管内皮细胞内的表达，并且因而可能会被用于治疗一种或多种细胞因子诱导的病症。可以按照下文所述制备本发明的地高辛抗体。
所有天然存在的完整抗体均具有一种共同的核心结构：两条相同的轻链(每条均为约24kD)和两条相同的重链(每条均为约55-70kD)。一条轻链与每条重链相连，且所述两条重链彼此相连。所述轻链和重链均含有一系列重复的同源单位，每个单位长约110个氨基酸残基且独立地折叠成被称为免疫球蛋白(Ig)结构域的共同基序。所有的Ig结构域均含有互补决定区(“CDR”)，所述互补决定区特异地针对所述抗原或表位并且与其结合。每个个体体内均存在108-1010种结构不同的抗体分子。抗体序列多样性主要存在于重链和轻链的氨基末端可变结构域内的三个短氨基酸序列内，所述重链和轻链的氨基末端可变结构域被称为高变区，以将它们与位于所述轻链和重链可变区内每个CDR侧翼的更加保守的“框架区”区别开。
虽然抗体分子整体上相似，但是根据它们的生理化学特征(例如大小、电性和溶解度)和它们与抗原结合的行为可以将抗体分子划分为不同的类别和亚类。在人体内，所述抗体分子的类别包括IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。每个类的成员被认为具有相同的同种型。IgA和IgG同种型可进一步被细分为被称为IgA1、IgA2和IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的亚型。属于同一同种型的所有抗体分子的重链均共享具有氨基酸序列同源性的延伸区，但不同于属于其他同种型的抗体。用重链来标记抗体分子的总同种型，例如IgA含有“α”、IgD含有“δ”、IgE含有“ε”、IgG含有“γ”、IgM含有“μ”。IgG、IgE和IgD以单体形式循环。IgA以单体形式循环，并且通过上皮分泌到体腔的粘膜层上的分子为同源二聚体。IgM分子形成五聚体。
可以用抗原对动物进行接种以便产生特异性针对所述抗原的抗体。通常使抗原与另一分子结合或缀合以增强免疫应答。本文所使用的缀合物为任何与用于引发动物体内免疫应答的抗原结合的肽、多肽、蛋白或非蛋白物质。动物体内响应于抗原接种而产生的抗体包括用各种单独的产生抗体的B淋巴细胞制备的各种非单一分子(多克隆抗体)。多克隆抗体为多种抗体的混合群，每种抗体均可能会识别相同抗原上的不同表位。在动物体内产生多克隆抗体的正确条件下，动物血清中的大多数抗体将会识别对该动物免疫所用的抗原化合物上的共同表位。通过进行亲和纯化选择那些可识别目的抗原或表位的抗体来进一步增强该特异性。
单克隆抗体是这样一种抗体，即其中每种抗体分子均会识别相同的表位，因为所有产生抗体的细胞均来源自单独一种B-淋巴细胞系。杂交瘤技术包括使单独一种B淋巴细胞与永生骨髓瘤细胞(通常是小鼠骨髓瘤)融合。该技术提供了这样一种方法，即增殖单独一种产抗体的细胞数代，使得可以产生无限量的具有相同抗原或表位特异性的结构相同的抗体(单克隆抗体)。然而，在治疗用途方面，杂交瘤技术的一个目标是减少人体内免疫反应，所述免疫反应可能是由于给予由非人(例如小鼠)杂交瘤细胞系产生的单克隆抗体导致的。
已经开发了使用人类来源的类似结构域来置换所述单克隆抗体的轻链和重链恒定结构域，但使所述外源抗体的可变区保持完整的方法。或者，“完全人源性”单克隆抗体是在含有人免疫球蛋白基因的转基因小鼠体内产生的。还已经开发了通过用重组方法构建具有啮齿动物和人两者氨基酸序列的抗体可变结构域来将单克隆抗体的可变结构域转化为更加人源性的形式的方法。在“人源化”单克隆抗体中，仅所述超变CDR来源自小鼠单克隆抗体，所述框架区来源自人氨基酸序列。据认为，用人抗体的对应位置存在的氨基酸序列来置换所述抗体内啮齿动物特有的氨基酸序列将会降低在治疗应用过程中产生有害免疫反应的可能性。还可以对产生抗体的杂交瘤或其他细胞进行遗传突变或其他变化，所述遗传突变或其他变化可能会或可能不会改变由所述杂交瘤产生的抗体的结合特异性。
可以使用单克隆和其他抗体以及重组DNA技术来制备工程改造的抗体，以产生保留有所述原始抗体的抗原特异性或表位特异性的其他抗体或嵌合分子，即所述分子具有结合结构域。这类技术可能会包括将编码抗体的免疫球蛋白可变区或CDR的DNA导入不同抗体的框架区、恒定区或恒定区加框架区的遗传材料中。参见，例如美国专利5,091,513和6,881,557，所述专利通过引用的方式纳入本说明书。
这些结合片段具有针对所述抗原或表位的结合特异性(CDR)，但是缺少位于所述保守框架区中的氨基酸序列，因此它们不太可能会在患者体内引发免疫应答。本发明的抗原结合片段优选地具有由一个或多个地高辛抗体可变结构域提供的结合结构域，并且更优选地，地高辛抗体的结合结构域包括地高辛抗体轻链可变区(VL)和地高辛抗体重链可变区(VH)。
适用于本发明的结合片段的实例包括但不限于：(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域构成；(ii)“Fd”片段，由VH和CH1结构域构成；(iii)“Fv”片段，由单独一种抗体的VL和VH结构域构成；(iv)“dAb”片段，由VH结构域构成；(v)分离的CDR区；(vi)F(ab′)2片段，含有两个相连的Fab片段的二价片段；(vii)单链Fv分子(“scFv”)，其中VH结构域和VL结构域通过一个使得所述两个结构域缔合形成结合结构域的肽连接头连接；(viii)双-特异性单链Fv二聚体(参见美国专利5,091,513)；和(ix)双抗体，通过基因融合构建的多价或多特异性片段(美国专利申请公布文本20050214860)。Fv、scFV或双抗体分子可以通过引入二硫桥连接所述VH和VL结构域来加以稳定。还可以制备包括与CH3结构域连接的scFV的微抗体(Hu S.，et al，Cancer Res.，56：3055-3061(1996))。
通过本文所述的方法，可以制备多克隆或单克隆抗体、结合片段和结合结构域以及CDR(包括任何上述分子的改造形式)，上述分子特异性针对EF、强心甾和蟾蜍二烯羟酸内酯及它们的苷元部分、一种或多种它们各自的表位或者任何上述分子的缀合物，无论这类抗原或表位是分离自天然来源或者为所述天然化合物的合成衍生物或变体。
用任何动物来源(包括鸟类和哺乳动物)来生产抗体。优选地，所述抗体为羊、鼠类(例如小鼠和大鼠)、兔、山羊、豚鼠、骆驼、马或鸡。此外，较新的技术允许从人组合抗体库开发和筛选人抗体。例如如美国专利6,946,546中所述，噬菌体抗体表达技术使得可以在不进行动物免疫接种的情况下生产特异性抗体，所述专利通过引用的方式纳入本说明书。这些技术在下述出版物中有进一步描述：Marks，Bio/Technology10：779-783(1992)；Stemmer，Nature 370：389-391(1994)；Gram et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，89：3576-3580(1992)；Barbas et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，91：3809-3813(1994)；和Schier et al.，J.Mol.Biol.263：551-567(1996)。
用于在各种动物物种中生产多克隆抗体以及用于生产各种类型(包括人源化的、嵌合的和完全人源性的)的单克隆抗体的方法在本领域中是公知的并且是高度可预测的。此外，针对各种强心苷(包括地高辛、乌巴因、蟾蜍灵和海蟾蜍毒素)的抗体是可商购的，且用于生产这些抗体的方法也是公知的和可预测的。例如，下述美国专利和专利申请提供了关于这些方法的能够实现的说明并且通过引用的方式纳入本说明书。美国专利申请2004/0126828和2002/0172677；以及美国专利3,817,837、3,850,752、3,939,350、3,996,345、4,196,265、4,275,149、4,277,437、4,366,241、4,469,797、4,472,509、4,606,855、4,703,003、4,742,159、4,767,720、4,816,567、4,867,973、4,938,948、4,946,778、5,021,236、5,164,296、5,196,066、5,223,409、5,403,484、5,420,253、5,565,332、5,571,698、5,627,052、5,656,434、5,770,376、5,789,208、5,821,337、5,844,091、5,858,657、5,861,155、5,871,907、5,969,108、6,054,297、6,165,464、6,365,157、6,406,867、6,709,659、6,709,873、6,753,407、6,814,965、6,849,259、6,861,572、6,875,434和6,891,024。所有专利、专利申请公布文本及本文所引用的其他出版物均通过引用的方式纳入本申请。
完全可以预期的是，抗特定EF、强心甾或蟾蜍二烯羟酸内酯的抗体将会具有中和或抵消强心苷作用的能力，这种能力与所述动物物种、单克隆细胞系或抗体的其他来源无关。例如，尽管本申请的生物学实施例中使用的抗体是用绵羊产生的，但是可以预期的是，用相同或类似强心甾或蟾蜍二烯羟酸内酯免疫的其他动物也可产生可有效用于本发明目的的多克隆抗体。某些动物物种可能不太适合用于产生治疗性抗体，因为所述抗体的“Fc”部分会激活补体***使得它们更有可能会导致过敏反应。然而，完整抗体可以被酶消化成“Fc”(补体结合)片段和具有结合结构域或CDR的结合片段。移除Fc部分会降低抗原结合片段诱发不合需要的免疫应答的可能性，因此，优选无Fc的抗体用于预防性或治疗性疗法。如上文所述，还可以将抗体构建成为嵌合的、部分或完全人源性的抗体，以减少或消除由于给予一种动物在另一物种中产生的或具有来源自另一物种的序列的抗体而导致的有害免疫结果。
已知EF会与抗外源强心甾和蟾蜍二烯羟酸内酯的抗体交叉反应或与其结合，尽管是以一种特异性不强的方式。此外，已知抗特定强心甾或蟾蜍二烯羟酸内酯的抗体将会与其他强心甾和蟾蜍二烯羟酸内酯交叉反应，尽管是以一种特异性不强的方式。因此，人们相信任何这类具有交叉反应活性的抗体均具有中和或抵消非特异性强心苷或EF作用的能力。例如，已知抗海蟾蜍毒素抗体具有针对下述各种强心类固醇的交叉反应活性(以百分数形式表示)：海蟾蜍毒素(100％)；乌巴因(0.1％)；地高辛(1.0％)；洋地黄毒苷(3.0％)；蟾蜍灵(1.0％)；海葱次苷(1.0％)。已知抗乌巴因抗体具有针对下述各种强心类固醇的交叉反应活性：乌巴因(100％)；洋地黄毒苷(7.4％)；海葱次苷(0.2％)；海蟾蜍毒素(0.5％)；蟾蜍灵(0.03％)。已知抗地高辛抗体具有针对下述各种强心类固醇的交叉反应活性：地高辛(100％)；乌巴因(0.4％)；乌本苷元(0.1％)；海蟾蜍毒素(0.2％)；蟾蜍灵(2.7％)；华蟾蜍毒素(4.3％)；华蟾蜍毒精(0.02％)。这些免疫学交叉反应活性的实例并非意在以任何方式限制本说明书所公开的本发明的范围。
如果非特异性抗体结合或交叉反应活性导致抗原-抗体亲和力降低，或者如果EF、强心甾或蟾蜍二烯羟酸内酯具有不同于所述特异性针对所述抗体的强心苷或EF的生物药剂或药代动力学特征，那么需要更大量的抗体来中和或抵消所述非特异性EF、强心甾或蟾蜍二烯羟酸内酯的作用。尽管如此，完全可以预期的并且已知的是，在体外，针对特定强心甾或蟾蜍二烯羟酸内酯的抗体将会具有抵消由不同强心甾或蟾蜍二烯羟酸内酯或者由一种或多种EF导致的钠泵抑制的能力。本领域普通技术人员在考虑与非特异性EF、强心甾或蟾蜍二烯羟酸内酯相比特异性EF、强心甾或蟾蜍二烯羟酸内酯的钠泵抑制水平、交叉反应活性、结合亲和力或亲合力、生物药剂学和/或药代动力学性质之后，可以通过已知的方法设计出适合的抗体组合物和给药方案。
对可有效中和由外源强心甾或蟾蜍二烯羟酸内酯导致的中毒的抗体组合物的确定通常需要——尤其是——对必须被所述抗体结合或中和的强心甾或蟾蜍二烯羟酸内酯的体荷载的确定。影响治疗有效的抗体组合物的因素包括——尤其是——抗原的已知或怀疑的总的体荷载(无论其是否达到稳态平衡)、生物利用度(游离的和结合的蛋白)、所述抗原的生物药剂学和药代动力学性质(例如抗原对其受体的亲合力及其生物活性)、患者体重或体型、肝脏和肾功能病史。
通常，当抗原在体内达到平衡时，组织和细胞外液中的抗原浓度(结合和未结合的)是通过血浆或血清浓度来反映的。外源抗原的总的体荷载通常等于抗原的稳态血清浓度乘以表观分布容积(体内所含抗原浓度与血浆中的浓度相同时所需体液容积)。因此，通常所需的中和所述总的体荷载的所述抗原组合物可以通过所述单元的结合能力及所述抗原的总的体荷载来确定。
V.地高辛抗体组合物
由于并未已知促炎性细胞因子(例如TNF)能否与钠泵结合，也未已知促炎性细胞因子是否具有与钠泵或任何强心甾或蟾蜍二烯羟酸内酯同源的表位。因此，无法预期地高辛抗体是否能够调节或弱化任何促炎性细胞因子的作用。
令人意外的是，已经发现地高辛抗体可有效调节或弱化各种细胞粘附分子的细胞表面表达，所述表达是炎症——特别是白细胞-内皮细胞粘附及白细胞迁移进入组织中——所必需的。可以预期的是，在体内，调节或弱化TNF对细胞粘附分子表达的作用将会具有相应的减少白细胞-内皮细胞相互作用(捕获、滚动和/或粘附)的作用，从而减少白细胞迁移进入组织并且减少炎症。因此，地高辛抗体被认为可以用于有效治疗一种或多种细胞因子介导的病症。
应当指出，可以按照图1的流程图所示，将治疗有效量的地高辛抗体给予患者以弱化由TNF诱导的细胞粘附分子表达。类似地，如果在感染或病状的临床或生理症状发病前，确定患者具有发展出细胞因子介导的病症的倾向或风险或者具有发展出促炎性细胞因子水平升高的风险，则为进行预防，可以给予治疗有效量的地高辛抗体以调节TNF对细胞粘分子表达的预期作用。尽管本文已经提供了非限制性实例，但是应该强调的是本发明不限于地高辛抗体的任何特定的组合物、剂量或剂量范围，或者任何特定类型(例如多克隆、单克隆、嵌合的、改造的)的地高辛抗体或来源自任何特定来源(例如人、羊、鼠类等)的地高辛抗体。
治疗有效性地高辛抗体组合物可调节或弱化TNF诱导的一种或多种细胞粘附分子的细胞表面表达，所述细胞粘附分子包括作为白细胞粘附配体的受体的内皮细胞粘附分子和作为白细胞粘附分子受体的配体的内皮细胞粘附分子。优选地，治疗有效性地高辛抗体组合物可调节或弱化一种或多种细胞类型、组织和/或器官——优选内皮细胞并且最优选血管内皮细胞——的ICAM-1、VCAM-1、P选择素或E选择素的TNF诱导性细胞表面表达。
治疗有效性地高辛抗体组合物还可以增强一种或多种细胞类型或组织中——最优选在受到细胞因子介导的病症有害侵袭的细胞、组织或器官中，例如血管内皮细胞和白细胞中——的Na+/K+ATP酶活性和/或Na+/K+推动的离子或养分转运。治疗有效量还可以是这样一种量，即所述量可增加Na+/K+ATP酶基因表达(例如增加对应于钠泵基因的信使核糖核酸(mRNA)，所述mRNA被转录成形成所述钠泵的多肽或蛋白)或者增加跨细胞膜易位或者降低受到所述细胞因子介导的病症侵袭的特定细胞、组织或器官的Na+/K+ATP酶降解或循环。
当将治疗有效性地高辛抗体组合物给予表现出细胞因子介导的病症的患者时，它将会优选地产生临床有益效果，即减轻、缓解、降低或抑制或改善所述具体细胞因子介导的病症一种或多种症状，或者改善所述患者的总体状况。临床有益效果可能会导致特定医疗参数相对于基线(即在地高辛抗体给药前)发生有益改变，并且最优选地导致患者的CGI-S降低或CGI-I发生正改变。或者，治疗有效量是这样一种量，即所述量足以稳定所述细胞因子介导的病症的症状，使得所述症状不会实质上恶化。
可以用于评估或指示地高辛抗体组合物(或其他治疗试剂)的治疗效果的参数可包括但不限于：GCI-S或GCI-I；心率、呼吸(例如速率或PaCO2)、收缩压或舒张压或者平均动脉压；组织或器官灌注；尿排出量、尿蛋白水平(蛋白尿)或肌酸酐清除率；血清肌酸酐、乳酸脱氢酶(LDH)、肝脏酶(例如丙氨酸转氨酶或天冬氨酸转氨酶)、胆红素或血液尿素氮(BUN)水平；白细胞计数；血小板计数；红细胞计数或溶血；外周性水肿、肺水肿、脑水肿或脑出血；疼痛、神经功能和/或神经应答性、意识、精神状态或者神经功能障碍、畸变或缺损；或者与特定细胞因子介导的病症相关的任何其他可评估的医学参数。
可以将本发明的药物组合物给予可体验本发明组合物的有益作用的任何动物。这类动物中最重要的是哺乳动物，例如人，但是并非意在如此限制本发明。其他哺乳动物包括：动物学上的动物，例如黑猩猩、猴子、狒狒、猿、虎、狮子、熊等；农业牲畜，例如牛、绵羊、猪、山羊等；和家畜，例如马、狗、猫等。
对于治疗用途来说，可以任何常规方式和任何常规剂型给予地高辛抗体组合物，所有这些均是本领域中公知的。可以任一方式或数种方式的组合来将本发明的组合物给予患者，所述方式包括但不限于口服、局部、吸入、静脉内、滑膜内、经粘膜(例如鼻、***等)、肺、皮下或皮内或经皮肤(注射或输注或贴)、经眼部、含服、舌下、腹膜内、鞘内、肌内或长期贮藏制剂，或者本领域中已知的用于给予抗体、结合片段、结合结构域、CDR、肽、萼状蛋白或使用任何上述分子构建的物质的任何其他方式。
对于任何给药方式或方法，特别是对于经粘膜、皮下、皮内、经皮、肌内或静脉内给药(包括静脉推注(bolus injection)或快速推注(bolusinfusion))，所述组合物可包括可药用载体或赋形剂，包括但不限于葡萄糖、右旋糖、盐水、林格氏溶液或乳酸盐的林格氏溶液、注射用无菌水、水或者其他可药用载体或赋形剂。优选地，pH是经过适当调节的，所述组合物经过审慎地缓冲且等渗，并且是通过适当方法(通过加热、辐射或微孔过滤)消毒过的，所述方法对所述组合物的任何组分均无害并且不会使得所述组合物或其任何组分无效或效果减弱。
对于静脉给药来说，可以通过静脉推注或快速推注来给予负荷剂量，然后持续静脉输注一种组合物。或者，可以给予负荷剂量，然后给予推注剂量或者采用推注和持续输注的组合。类似地，连续输注可以时时变化，以便在一段时间内给予更多或更少量的地高辛抗体。
本发明的组合物可以单独给药或者与佐剂(包括其他活性成分或其他治疗试剂)组合给药，所述佐剂可增强所述组合物稳定性、在某些实施方案中有助于含有它们的组合物的给药、提供增强的溶出度或分散度、增加活性、提供辅助疗法等。有利地，这类组合疗法采用较低剂量的所述其他治疗试剂，因此避免当使用所述其他治疗试剂作为单一疗法时所招致的可能的毒性和有害副作用。上文所述的地高辛抗体组合物可以与所述其他治疗试剂或其他佐剂物理地结合形成单一的药物组合物。
所给予的地高辛抗体组合物的治疗有效性可能取决于许多因素，例如：具体治疗药剂的药代动力学特征及其给药方式和给药途径；患者的类型(例如人、马、狗等)；患者的身体状况、健康(包括任何疾病、症状或综合征的存在)、性别、年龄和体重；治疗的预计持续时间；任何疾病、症状或综合征的患病因素的存在；症状的性质和程度以及所治疗的病症的严重程度；针对所述地高辛抗体和/或其他治疗试剂或者同时给予的其他化合物或组合物的一种或多种在先给药剂量的患者反应；地高辛抗体和这类其他治疗试剂或者化合物或组合物的治疗频率，以及所需的效果。
所述治疗性组合物包括任何量的地高辛抗体，优选至少中和剂量的地高辛抗体，更优选低剂量的地高辛抗体组合物，并且最优选高剂量的地高辛抗体组合物。在一个实施方案中，所述治疗有效性组合物包括足以提供0.001mg-约500mg地高辛结合能力/kg患者体重的地高辛抗体。在另一个实施方案中，所述组合物包括约0.005-约500mg地高辛结合能力/kg患者体重。在其他实施方案中，所述组合物提供约0.005-50mg或0.01-1.0mg地高辛结合能力/kg患者体重，或者约0.01-0.5mg地高辛结合能力/kg患者体重。
本领域普通技术人员通过下述方式即可很容易地确定治疗有效性地高辛抗体组合物，所述方式为根据所述细胞因子介导的病症的适应症、症状或并发症的缺失、稳定、缓解、减少、抑制或改善的迹象(例如上文所述参数)对患者进行监测，并且相应地维持、增加或减少地高辛抗体的量和/或给药频率或给药方式(按临床判断而确定)。
本发明的抗体可以上述各种方法的任何一种来产生(例如多克隆、单克隆、嵌合的、人源化的和其他改造的抗体形式)。特异性针对各种外源的强心甾和蟾蜍二烯羟酸内酯的地高辛抗体是本领域中公知的并且是商购可得的，包括但不限于针对地高辛、乌巴因和海蟾蜍毒素的抗体。
因为地高辛和洋地黄毒苷是可用作治疗试剂的主要强心类固醇，因此用于治疗地高辛或洋地黄毒苷用药过量的抗体产品是本领域中公知的，并且已经被特别地批准了在对潜在的危及生命的地高辛和洋地黄毒苷中毒方面的治疗应用。在极少的情况下，针对地高辛或洋地黄毒苷的抗体(或其缀合物)还会被用于“未被批准的用途(off label)”以治疗由其他外源性强心甾或蟾蜍二烯羟酸内酯导致的危及生命的中毒。Morbidityand Mortality Weekly Report 44(46)：853-855，861(Nov.24，1995)；Eddleston，M.and Warrell，D.A.，Q JMed.92：483-485(1999)；还参见Brubacher JR，Ravikumar PR et al.，Chest 110：1282-1288(1996)；Brubacher JR，Lachmanen D，et al.，Toxicon 37：931-942(1999)。
可有效治疗危及生命的地高辛/洋地黄毒苷中毒的地高辛免疫Fab(羊)组合物目前由美国的GlaxoSmithKline和Protherics，Inc.销售，商标名分别为
Figure A200780031562D00351
和DIGIFABTM。可有效治疗危及生命的地高辛/洋地黄毒苷中毒的地高辛免疫Fab产品可能在美国之外以其他商标名生产和销售。比较了和DIGIFABTM的临床研究表明这些产品均具有同等的药代动力学，且患者响应于DIGIFABTM的比例与所获得的
Figure A200780031562D00353
的历史数据类似并且一致。
Figure A200780031562D00354
是来源自绵羊产生的特异性抗地高辛抗体的抗原结合片段(Fab)的无菌冻干粉末。
Figure A200780031562D00361
的产生包括以地高辛作为半抗原与人血白蛋白缀合。用该材料免疫绵羊以产生特异性针对所述地高辛分子的抗原决定簇的抗体。然后将所述抗体用木瓜蛋白酶消化，并且利用亲和色谱分离并纯化所述抗体的地高辛特异性Fab片段。这些抗体片段具有约46,200Da的分子量。对于
Figure A200780031562D00362
的现有制剂来说，一瓶可结合约0.5mg地高辛(或洋地黄毒苷)，并且含有38mg地高辛特异性Fab片段、75mg作为稳定剂的山梨糖醇和28mg氯化钠。该瓶不含防腐剂。通过轻轻混合用无菌注射用水(4ml/瓶)将
Figure A200780031562D00363
重溶为澄清、无色的近等渗溶液，然后通过静脉注射给药。重溶产物应该立即使用或者可以在2°-8℃(36°-46℉)下冷藏最多4小时。所述重溶产物可以用无菌等渗盐水稀释为适合的体积。
DIGIFABTM是经地高辛免疫的羊Fab(单价)免疫球蛋白片段的无菌的、纯化的、冻干制品。这些片段获取自用地高辛衍生物地高辛-二羧基甲氧基胺(DDMA)免疫的健康绵羊的血液，所述地高辛-二羧基甲氧基胺(DDMA)是与钥孔虫戚血兰素偶联并含有发挥功能所必需的环戊烷多氢菲内酯(cyclopentaperhydrophenanthrene lactone)环部分的地高辛类似物。所述绵羊不含病原体并且来自澳大利亚的不含朊病毒的群。所述终产物可以按照下述方式来制备：分离羊血清的免疫球蛋白级分、将其用木瓜蛋白酶消化并且通过亲和色谱分离所述地高辛特异性Fab片段。这些抗体片段具有约46,000Da的分子量。对于DIGIFABTM的现有制剂来说，一瓶可结合约0.5mg地高辛，并且含有40mg地高辛免疫Fab、约75mg甘露醇USP和约2mg乙酸钠(缓冲剂)。所述产品不含防腐剂并且计划在用4mL无菌注射用水USP重溶后进行静脉给药。可以将所述重溶产物加入到适当体积的注射用0.9％的氯化钠中。
Figure A200780031562D00364
和DIGIFABTM均未指明可用于轻度的洋地黄(地高辛或洋地黄毒苷)毒性，仅指明了可用于危及生命或可能危及生命的地高辛或洋地黄毒苷中毒。尽管被特别地设计用于治疗危及生命的地高辛用药过量，但是
Figure A200780031562D00365
和DIGIFABTM也已经被成功地用于治疗危及生命的洋地黄毒苷用药过量。然而，由于用于人类的经验有限且反复接触的结果仍未知，所以
Figure A200780031562D00366
和DIGIFABTM未被指明可用于轻度的洋地黄毒性。FDA批准的和DIGIFABTM给药的临床适应症不包括除已知的或疑似的危及生命的地高辛或洋地黄毒苷中毒之外的任何病症。对于本发明来说，外源强心甾和蟾蜍二烯羟酸内酯的危及生命的中毒(在本中有时简称为“中毒”或“中毒的”)是指：(a)前述健康成人体内10mg或更高的致死剂量或在前述健康儿童体内4mg的致死剂量；(b)导致稳态血清浓度超过10ng/mL的摄入；或(c)导致稳态血清浓度在成人体内超过6ng/mL或在儿童体内超过4ng/mL的长期摄入。
Figure A200780031562D00371
和DIGIFABTM将会干扰洋地黄免疫测定的测量值。因此，在所述抗体被从体内清除前，血清地高辛(或“地高辛”)浓度的标准测量在临床上会一直具有误导性直至。对于中毒的治疗来说，
Figure A200780031562D00372
或DIGIFABTM的组成取决于所要中和的地高辛或洋地黄毒苷的量。
然而，细胞因子介导的病症并不是由外源强心甾或蟾蜍二烯羟酸内酯的中毒导致的。细胞因子介导的病症与TNF水平升高有关，因此本发明的组合物和方法允许可以根据所述患者体内的细胞因子浓度来确定用于治疗细胞因子介导的病症的治疗有效性地高辛抗体组合物。可以通过用于检测促炎性细胞因子(包括TNF)的测定法来进行对组织或体液内细胞因子的直接测定，所述测定法在本领域中是公知的并且是可商购的(例如由Bioveris，Alpco Diagnostics，Neogen提供的免疫测定法)。优选地，根据患者血清、血浆或组织中的TNF-α的水平来确定治疗有效性地高辛抗体组合物。
应当注意到，据估计，正常的健康人或健康的实验用动物体内的TNF循环(血浆或血清)水平不超过约10pg/ml，该数值可能是最灵敏的TNF测定法的检测下限。Michie et al.，New Eng.J.Med.318：1481-1486(1988)；Mathison et al.，J.Clin.Invest.81：1925(1988)和Waage et al.，Lancet，1：355-357(1987)。已经证明在与脂多糖(“LPS”)(一种与脓毒症有关的细菌成分)接触后，TNF水平增加了10-20倍至约400pg/ml。在革兰氏阴性(含LPS)脑膜炎球菌导致的感染中，TNF的血清水平与死亡结果有关联。Waage et al.，Lancet，1：355-357(1987)。此外，发现在脓毒症的类人灵长类模型中具有类似的TNF增加，并且这些变化与致死率直接相关。Tracey et al.，Nature，330：662-664，(1987)。因此，可以预期的是，患者组织或体液内的TNF浓度(优选TNF-α浓度)将适合作为筛选用于治疗目的的有效地高辛抗体组合物的基础。
属于本发明范围内的组合物包括所有这样的组合物，即其中所提供的本发明的地高辛抗体组合物的量可有效地实现本文所述的其预期目的。虽然个体患者需求会变化，但是地高辛抗体组合物的治疗有效量的最佳范围的确定在本领域普通技术人员能力范围之内。
本文提供了治疗有效的中和剂量、低剂量和高剂量的地高辛抗体组合物的实例。优选地，组合物包括足以提供0.005mg或更高的地高辛结合能力/kg患者体重的地高辛抗体量(例如高剂量地高辛抗体组合物)。预防用的治疗有效性组合物还可能会具有0.0005-0.005mg地高辛结合能力/kg患者体重(例如低剂量地高辛抗体组合物)。
适用于典型人体重的低剂量和高剂量地高辛抗体的药物组合物的实例在表I、II、III、IV和V中有所描述。对于少于40kg的人或其他哺乳动物体重，可以通过下述方式确定适合的组合物：通过将所述患者的体重除以40，然后将结果乘以根据表I-V的适合于40kg患者的地高辛结合能力。对于体重超过140kg的动物来说，可以通过下述方式确定适合的组合物：通过将所述动物的体重除以100，然后将结果乘以处于表I-V中所提供的适合于重100kg的患者的地高辛结合能力范围内的地高辛结合能力。例如，如果患者重500kg且具有10pg/mL的血清TNF浓度，则根据表IV适合的地高辛抗体组合物为：500/100 x 4.0mg地高辛结合能力＝20mg地高辛结合能力(或按照表V注释中所述的公式，40瓶或DIGIFABTM)
表I鉴别了用于治疗属于已经在人体内观察到的循环TNF的范围内的细胞因子介导的病症的低剂量地高辛抗体组合物：
表I.用于细胞因子介导的病症的样本低剂量＊地高辛抗体组合物(mg地高辛结合能力)
 
患者体重(kg)                  TNF浓度(pg/ml)10     25     50     100    200    300    400
40607080100120 0.02   0.04   0.08   0.16   0.24   0.32   0.40.03   0.06   0.12   0.24   0.36   0.48   0.60.035  0.07   0.14   0.28   0.42   0.56   0.70.04   0.08   0.16   0.32   0.48   0.64   0.80.05   0.10   0.20   0.40   0.60   0.80   1.00.06   0.12   0.24   0.48   0.72   0.96   1.2
 
140 0.07   0.14   0.28   0.56   0.84   1.12   1.4
＊组合物可能会适合于预防性给药、非全身、慢性或间断性细胞因子介导的病症。
表II鉴别了用于治疗属于已经在人体内观察到的循环TNF的范围内的细胞因子介导的病症的低剂量
Figure A200780031562D0039084708QIETU
或DIGIFABTM组合物：
表II.用于细胞因子介导的病症的优选的低剂量＊
Figure A200780031562D0039084726QIETU
或DIGIFABTM(mg总抗体)
 
患者体重(kg)                   TNF浓度(pg/ml)10        25        50        100        200        300        400
40607080100120140 1.56      3.12      6.25      12.5       18.75      25.0       31.25mg        mg        mg        mg         mg         mg         mg2.34      4.69      9.371     8.75       28.12      37.5       46.88mg        mg        mg        mg         mg         mg         mg2.73      5.47      10.94     21.88      32.81      43.75      54.69mg        mg        mg        mg         mg         mg         mg3.12      6.25      12.5      25.0       37.5       50.0       62.5mg        mg        mg        mg         mg         mg         mg3.91      7.81      16.0      31.25      46.88      62.5       78.12mg        mg        mg        mg         mg         mg         mg4.69      9.37      18.75     37.5       56.25      75.0       93.75mg        mg        mg        mg         mg         mg         mg5.47      10.94     21.88     43.75      65.63      87.5       109.4mg        mg        mg        mg         mg         mg         mg
＊组合物平均39mg抗体/瓶、0.0128mg地高辛结合能力/mg总抗体。
表III鉴别了介于表II和IV之间的中间剂量。
表III.用于细胞因子介导的病症的高剂量地高辛抗体组合物(mg地高辛结合能力)
 
患者体重(kg)         TNF浓度(pg/ml)10＊      25      50      100      200     300     400
40 0.25      0.40    0.50    0.60     0.70    0.80    1.0
 
607080100120140 0.40   0.45   0.50   0.55  0.75   1.0   1.20.45   0.50   0.55   0.65  0.85   1.2   1.40.55   0.55   0.60   0.75  1.0    1.3   1.60.65   0.75   0.80   0.80  1.2    1.6   2.00.80   0.85   .90.   1.0   1.5    2.0   2.40.90   1.2    1.3    1.5   1.8    2.4   2.8
＊组合物为约0.0065mg地高辛结合能力/kg。
表IV.用于细胞因子介导的病症的优选的高剂量地高辛抗体组合物(mg地高辛结合能力)
 
患者体重(kg)          TNF浓度(pg/ml)10＊    25     50     100     200    300     400
40607080100120140 0.5     0.5    1.0    1.5     2.5    3.5     4.00.5     0.5    1.5    2.5     3.5    5.0     6.00.5     1.0    1.5    3.0     4.5    5.5     7.00.75    1.0    1.5    3.5     5.0    6.5     8.00.75    1.0    2.0    4.0     6.0    8.0     10.01.0     1.0    2.5    5.0     7.0    9.5     12.01.0     1.5    3.0    5.5     8.5    11.0    14.0
表V鉴别了对应于所述表IV的组合物的和DIGIFABTM的高剂量组合物。
表V.用于细胞因子介导的病症的优选的高剂量
Figure A200780031562D00402
/DIGIFABTM(单位为#瓶(“V”))
 
患者体重(kg)                TNF浓度(pg/ml)10＊    25    50    100    200    300   400
40 1V     1V    2V    3V     5V     7V    8V
 
607080100120140 1V    1V    3V    5V    7V    10V    12V1V    2V    3V    6V    9V    11V    14V1.5V  2V    3V    7V    10V   13V    16V1.5V  2V    4V    8V    12V   16V    20V2V    3V    5V    10V   15V   20V    24V2V    3V    6V    12V   17V   23V    28V
＊组合物平均39mg抗体/瓶，平均提供了0.0128mg地高辛结合能力/mg总抗体。
表I、II、III、IV和V的组合物仅是优选的组合物，对于任何特定患者体重或循环细胞因子浓度或局部细胞因子(例如TNF)浓度而言，治疗有效性的组合物具有的地高辛结合能力可能高于或低于所述优选的量。对于介于表I、II、III、IV或V中所述具体浓度之间的TNF浓度，在大多数情况下，所给予的组合物的量为介于针对所述患者体重的相邻较低浓度和相邻较高浓度之间的中间值。类似地，对于介于表I、II、III、IV和V中所列出的那些体重之间的患者体重，在大多数情况下，所给予的剂量为适用于针对所述具体TNF浓度的相邻最高体重。然而，如果可能获得中间量，则所述中间量为优选的。例如，如果对于一名体重115kg的患者来说血清TNF浓度(无论是基于其他具有类似症状或病症的患者体内的已知浓度和一种或多种症状的严重程度测得的或疑似存在)为100pg/ml，则可以以单一应用剂量给予包括9瓶或DIGIFABTM(表V)的治疗性组合物。
对于具有比表II或V的
Figure A200780031562D00412
和DIGIFABTM制剂(现有制剂0.5mg地高辛结合能力/瓶)更高或更低的地高辛结合能力的地高辛抗体制剂(即剂量单位)，包括但不限于
Figure A200780031562D00413
和DIGIFABTM，应当调整抗体组合物以提供与表II或V中所述的组合物的地高辛结合能力(#瓶)同等的地高辛结合能力。
优选地，在初次给予地高辛抗体之前应当从组织或体液(优选血浆或血清)中获得所述TNF浓度。尽管优选在给予地高辛抗体之前测量TNF浓度，但是并不必一定要这样做来确定治疗有效的组合物。如果TNF浓度不能很容易地量化，则可以在初始时给予所述患者与症状严重程度或特定细胞因子介导的病症相适应的组合物。通常，轻度症状最初使用治疗性中和剂量或低剂量组合物(例如按照表I或表II)来治疗或者使用对应于表III、IV或V的较低细胞因子浓度(例如10pg/ml或25pg/ml的TNF浓度)的剂量来治疗。通常，用于轻度症状或预防性治疗的组合物最初选自表I或II的低剂量组合物的中和剂量或较低范围。在所有情况中，应在整个治疗过程中就症状或并发症的改善、减轻、缓和、稳定或恶化对患者进行监测。如果患者对地高辛抗体组合物的应答充分符合所述治疗医师的临床判断，则可根据维持所需应答的需要反复给予所述组合物。如果使用组合物没有获得足够的应答或者需要更强的应答，则应一次或多次随后给予具有较大量活性成分(地高辛结合能力)的组合物。
更严重的症状最初可使用针对表I-V所述患者体重的中间范围组合物来治疗。应再次就症状或并发症的缓和、减轻、改善、稳定或恶化对患者进行常规监测，以便按照临床判断所作出的决定来调整所述组合物(减少或增加活性成分)。以下实例仅出于举例说明目的而并非限制，具有严重脓毒症症状的70kg患者最初可被给予3瓶
Figure A200780031562D00421
或DIGIFABTM或者具有接近1.5mg地高辛结合能力的另一种制剂的地高辛抗体。在另一个实例中，如果发生感染性休克，则所述患者最初可被给予4-6瓶
Figure A200780031562D00422
或DIGIFABTM的组合物或者具有接近2.0-3.0mg地高辛结合能力的另一种制剂的地高辛抗体组合物或另一类抗体的地高辛抗体组合物。
例如，已知患有严重脓毒症的患者的血清TNF浓度范围为50pg/mL-400pg/ml，且剂量可选自表I-V中所述的用于治疗患者的严重脓毒症的适当剂量范围。对于本发明来说，还可以根据通常已知存在于患有所要治疗的细胞因子介导病症的患者体内的浓度来选择TNF浓度。最优选地，可根据通常已知的存在于特定细胞因子介导病症中的范围来选择TNF浓度，可根据患者状态、患细胞因子介导病症的风险因素，和/或所要治疗的患者的症状严重程度和/或并发症来选择TNF浓度。尽管本说明书提供的某些实例是特异性针对
Figure A200780031562D00423
或DIGIFABTM的现有制剂，应该强调的是，本发明不限于地高辛免疫Fab(羊)、
Figure A200780031562D00424
或DIGIFABTM或者地高辛抗体的任何特定的品牌或制剂，而是包括所有的地高辛抗体，包括抗原结合片段以及含有CDR或结合结构域的改造的抗体或构建的分子。本发明还不限于任何特定的地高辛抗体组合物(剂量)、给药方法或者给药方案或方式。
本发明的组合物包括单次施用剂量。单次施用剂量包括(a)当完全单次给药时或(b)当在一段时间内以等份多次给药时或(c)当在一段时间内连续给药时(例如连续输注、缓释或延时释放经皮肤给药、缓释或延时释放片剂或胶囊或锭剂)的组合物。
优选地，根据本文所述的给药参数或者按照临床判断和本领域普通技术人员所确定的，最初给予所述患者适合其的具有最低量活性成分(地高辛结合能力)的治疗性组合物。此后，可以给予一种或多种具有较多或较少活性成分量的后续组合物以实现或维持对所要治疗的病症的症状或并发症的所需改善。然而，在所述患者的症状或并发症有可能危及生命的情况下，优选地，最初给予具有较多活性成分量的治疗组合物，优选高剂量地高辛抗体组合物。
所述组合物的地高辛抗体可以是可与强心甾、蟾蜍二烯羟酸内酯或EF发生免疫反应或结合的任何抗体、结合片段或任何具有结合结构域的分子，优选特异性针对强心甾或蟾蜍二烯羟酸内酯的抗体、结合片段或结合结构域，包括但不限于抗乌巴因抗体、抗海蟾蜍毒素抗体、抗蟾蜍灵抗体和抗地高辛抗体(例如
Figure A200780031562D00431
或DIGIFABTM)。
用于量化抗体对不同抗原或表位的相对交叉反应活性的方法是本领域普通技术人员所公知的。参见，例如Fedorova et al.，Journal ofHypertension 23(4)：835-842(2005)，以及其文中的参考文献。通常，如果已知抗体与地高辛发生交叉反应，则所述交叉反应性为配制这种抗体的组合物提供了基础，所述组合物以上文所述的治疗有效量提供所述地高辛结合能力。例如，如果一种海蟾蜍毒素抗体的制剂具有0.5mg海蟾蜍毒素结合能力以及10％的与地高辛的交叉反应活性，则相同的组合物将会具有接近0.05mg地高辛结合能力。
所述组合物可由整个地高辛抗体、结合片段、结合结构域、CDR或它们的组合构成。所述地高辛抗体可以是多克隆、单克隆、嵌合、人源化或完全人源性或者其他形式的改造的抗体。本发明的地高辛抗体可由任何已知的抗体源产生，包括但不限于绵羊、山羊、马、鸡、兔、小鼠、哺乳动物细胞系、细菌或酵母。所述地高辛抗体源优选羊(在绵羊体内产生，或者由整个或部分的羊源多肽、蛋白或核酸生成或构建)。优选地，所述地高辛抗体为地高辛免疫Fab，且最优选地高辛免疫Fab(羊)。
尽管已经提供了上述治疗性组合物，但是可以进行偏移或修正。此外，所述组合物简单地将中和剂量定义为初始治疗剂量；具有比本文所提供的组合物(包括表I、II、III、IV和V中所提供的那些)更低、中间或更高地高辛结合能力量的组合物也被预期是有效的并且也被包括在本发明中。
本发明的某些实施方案使得可以给予有需要的患者地高辛抗体组合物用以治疗细胞因子介导的病症。优选地，所述组合物按照所需药量被不断的反复给药。在某些实施方案中，所述组合物按固定时间表给药，例如按小时间隔(例如，每2、4、6、12小时)、每日间隔、每星期间隔、每双星期间隔、每月间隔或它们的中间间隔。
本发明的其他实施方案提供了用于治疗患者的方法，所述患者经受或患有的细胞因子介导的病症导致白细胞增多或细胞粘附分子内皮表达增加，所述病症可通过给予地高辛抗体组合物来加以调节。
在一个实施方案中，给予本发明的组合物以治疗严重出血以及全身或局部炎性疾病和病症，例如失血性休克、脓毒症、感染性休克、败血症、全身炎症反应综合征(SIRS)、代偿性抗炎反应综合征(CARS)、多器官功能障碍综合征(MODS)、多器官功能衰竭(MOF)、哮喘、***反应、过敏性休克、免疫复合物病、器官缺血、再灌注损伤、器官坏死、枯草热、内毒素休克、恶病质、高烧、嗜酸性肉芽肿、肉芽肿病和结节病。
在另一个实施方案中，可给予本发明的组合物以治疗自身免疫的和炎性的病症和障碍，例如抗磷脂综合征、重症肌无力、甲状腺炎、全身性红斑狼疮、肺出血-肾炎综合征(Goodpasture′s syndrome)、白塞综合征(Behcet′s syndrome)、同种异体移植物排斥、移植物抗宿主疾病、高免疫球蛋白血症D综合征(HIDS)、TNF-受体相关的周期性综合征(TRAPS)、胰腺β细胞损坏、胰岛素抵抗、I型和II型糖尿病、妊娠期糖尿病、妊娠胰岛素抵抗、贝格尔氏病(Berger′s disease)和莱特尔氏综合征。
在其他实施方案中，可给予本发明的组合物以治疗涉及血液、淋巴和心血管***以及相关组织的疾病和病症，例如组织或器官缺血、再灌注损伤、血管炎、淋巴水肿、脉管炎、心内膜炎、动脉炎、动脉粥样硬化、血栓形成和血栓形成倾向、血栓性静脉炎、心包炎、充血性心力衰竭、心肌炎、心肌缺血、缺血性发作、结节性动脉周围炎、再狭窄、化疗相关贫血和风湿热。
在其他实施方案中，可给予本发明的组合物以治疗涉及肠胃道和相关组织的疾病和障碍，例如阑尾炎、消化性溃疡、胃溃疡、十二指肠溃疡、腹膜炎、胰腺炎、溃疡性结肠炎、假膜性结肠炎、急性和缺血性结肠炎、憩室炎、牙周病、会厌炎、失弛缓症、胆管炎、胆囊炎、乳糜泻、肝炎、肝硬化、炎性肠病、克罗恩病、小肠炎和惠普尔氏病。
在其他实施方案中，可给予本发明的组合物以治疗涉及泌尿生殖***和相关组织的疾病和病症，例如自发早产、胎盘早剥、复发性妊娠丢失(recurrent fetal loss)、流产感染、***、***炎、***炎、肾小球肾炎和尿道炎。
在其他实施方案中，可给予本发明的组合物以治疗涉及呼吸***和相关组织的疾病和障碍，例如支气管炎、肺气肿、鼻炎、囊性纤维化、肺炎(pneumonia)、肺炎(pneumonitis)、慢性阻塞性肺部疾病(COPD)、成人型(急性)呼吸窘迫综合征(ARDS)、超微粒硅酸盐尘埃沉着病、肺泡炎、细支气管炎、咽炎、胸膜炎和鼻窦炎。
在其他实施方案中，可给予本发明的组合物以治疗由各种病毒、细菌、真菌、原生动物的和多细胞的寄生虫导致的感染和由感染造成的疾病，例如疟疾(例如脑型疟)、流感病毒、呼吸道合胞病毒、人免疫缺陷病毒(HIV)、肝炎病毒、疱疹病毒、巨细胞病毒、脑脊膜炎和腺病毒、革兰氏阳性和革兰氏阴性菌导致的感染、结核病和麻风。
在其他实施方案中，还可给予本发明的组合物以治疗皮肤的皮肤病学疾病和病症，例如银屑病、过敏性和急性皮炎、光化性角化病、皮肌炎、化学烧伤和其他烧伤、晒伤、荨麻疹、疣和风疹块。
在其他实施方案中，可给予本发明的组合物以治疗涉及神经性疼痛和中枢或周围神经***以及相关组织的疾病和病症，例如阿尔茨海默氏病、脑脊膜炎、脑炎、脱髓鞘疾病、多发性硬化、重症肌无力、脑梗死、脑栓塞、格林-巴利综合征(Guillane-Barre syndrome)、神经炎、神经痛、脊髓损伤、脑损伤、麻痹和葡萄膜炎。
在其他实施方案中，可给予本发明的组合物以治疗骨骼、关节、肌肉和***的疾病和病症，例如各种关节炎和关节痛、骨吸收疾病、肌肉变性、食欲缺乏、恶病质、骨质疏松症、骨髓炎、筋膜炎、派杰病(Paget’s disease)、痛风、牙周病、类风湿性关节炎、骨关节炎、幼年型慢性关节炎(JCA)、硬皮病、强直性脊柱炎和滑膜炎。
在其他实施方案中，还可给予本发明的组合物以治疗涉及各种癌症、肿瘤和增生性障碍的疾病和障碍，例如霍奇金氏病(Hodgkin′sdisease)、多发性骨髓瘤、急性和慢性髓细胞性白血病、癌症和肿瘤的复发及转移，以及对这类癌症、肿瘤和增生性障碍所进行的外科手术、化学疗法和放射治疗导致的损伤或创伤。
由于先天和获得性免疫应答均具有冗余调控机制，弱化或抑制一种机制被认为可能不一定会产生足够的治疗作用。因此，本发明的某些实施方案提供了用于给予治疗有效量的地高辛抗体组合物和至少一种其他治疗试剂的方法。所述其他治疗试剂可以是任何已经使用的、正在使用的或者已知的或可能会成为已知的用于治疗、缓解或预防本发明所包括的病症、感染、障碍、疾病或病状的任何治疗试剂。关于治疗试剂的更详细说明，本领域技术人员可参考指导手册，包括但不限于，医师药用指南(Physician′s Desk Reference)和Goodman and Gilman′s＂Pharmaceutical Basis of Therapeutics＂(第9版，McGraw Hill，1996)。
所述地高辛抗体组合物可与另一种治疗试剂以不同频率、不同持续时间、不同浓度、不同给药途径等给药，或者用于治疗不同的细胞因子介导的病症。例如，所述地高辛抗体组合物可以在另一种治疗试剂之前给药，例如但不限于在给予所述其他治疗试剂前0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12、14、16或18小时，1、2、3、4、5或6天，1、2、3或4周给药。所述地高辛抗体组合物还可以在另一种治疗试剂之后给药，例如在给予所述其他治疗试剂后0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12、14、16或18小时，1、2、3、4、5或6天，1、2、3或4周给药。
或者，所述地高辛抗体组合物和所述其他治疗试剂可以同时给药但是按不同的时间表，例如所述地高辛抗体组合物是在一天内定时给药，而所述其他治疗试剂是每天给药。所述地高辛抗体组合物也可以是每天给药，而所述其他治疗试剂是以低于每日的频率给药，例如一周一次、每两周一次、每三周一次或每四周一次。所述地高辛抗体组合物可以是以低于每日的频率给药(例如一周一次)，而所述其他治疗试剂是按下述频率给药，一天内定时、每天、一周一次、每两周一次、每三周一次或每四周一次。所述地高辛抗体和所述其他治疗试剂的任何其他周期性给药也是适合的。
本发明的化合物与一种或多种其他治疗试剂的组合可具有累加的效能或累加的治疗效果。本发明还包括协同作用的组合，其中所述治疗效力高于效力的加和。优选地，这类组合还会减少或避免不想要的或有害的作用。在某些实施方案中，相对于单独给予地高辛抗体组合物或任何其他治疗试剂，本发明所包括的组合疗法提供了一种全面改善的疗法。在某些实施方案中，当将现有的或实验性的其他治疗试剂与本发明的地高辛抗体组合物组合给药时，所述治疗试剂的剂量可以减少或者以较低频率给药，这可能会增加患者依从性，从而改善治疗并且减少不想要的或有害的作用。
对于本发明的一个或多个实施方案来说，其他治疗试剂还可以与下述物质共同给药或组合使用：一种或多种非类固醇类抗炎性药物(NSAID)，例如吡罗昔康、萘普生、吲哚美辛、布洛芬等；COX-2选择性抑制剂，例如商标名为
Figure A200780031562D00471
(Merck & Company)的罗非考昔和商标名为
Figure A200780031562D00472
(Pfizer Inc.)的塞来考昔；COX-1抑制剂，例如商标名为
Figure A200780031562D00473
(Pfizer Inc.)的吡罗昔康；免疫抑制剂，例如美国专利7,012,060中所述的，皮质激素、环孢霉素、他克莫司、雷帕霉素、甲氨蝶呤等；生物应答调节剂，例如TNF-拮抗剂或TNF-受体拮抗剂，如商标名为(Abbott Laboratories)的阿达木单抗、商标名为
Figure A200780031562D00475
(Wyeth-Ayerst)的依那西普、商标名为
Figure A200780031562D00476
(Centocor，Inc.)的英夫利昔单抗、CytofabTM(购自Protherics的多克隆抗-TNF Fab(羊))、IL-1拮抗剂、抗-CD40、抗-CD28、IL-10、抗粘附分子等，例如
Figure A200780031562D00477
(购自Biogen Idec and Elan Pharmaceuticals)、商标名为
Figure A200780031562D00478
(Eli Lillyand Company)的drotrecogin-α(重组人活化蛋白C)、β.2-受体激动剂(例如沙丁胺醇)、白细胞三烯受体拮抗剂(例如孟鲁司特)，以及其他抗血栓形成或抗炎性剂例如美国专利7,057,022和7,005,413中所描述的、p38激酶抑制剂、PDE4抑制剂、TACE抑制剂、趋化因子受体拮抗剂、商标名为
Figure A200780031562D00479
(Celgene Corporation)的沙利度胺及抑制促炎性细胞因子产生的其他小分子抑制剂、用于治疗自身免疫疾病的试剂(例如环孢霉素、他克莫司、霉酚酸酯)；用于治疗神经***障碍的试剂(例如抗胆碱酯酶、多巴胺、左旋多巴、5-羟色胺受体激动剂(例如舒马普坦、金刚烷胺、多奈哌齐、利鲁唑))、用于治疗缺血/再灌注损伤的试剂(例如***、硝苯地平)、用于治疗胃肠道障碍的试剂(例如新施得明、甲氧氯普胺、柳氮磺吡啶)和用于治疗ARDS、脓毒症、SIRS、感染性休克或失血性休克的试剂(例如美国专利6,193,969和美国专利申请公布文本2005/0187181中所述的)。
可以与本发明的地高辛抗体组合物共同给药或者与本发明的组合物组合使用的其他治疗试剂包括但不限于，
Figure A200780031562D00481
(即甲氧萘丙酸钠)、
Figure A200780031562D00482
(即来氟米特)、
Figure A200780031562D00483
(即双氯芬酸和米索前列醇的结合物)、
Figure A200780031562D00484
(即柳氮磺吡啶)、阿司匹林(即乙酰水杨酸)、(即双氯芬酸)、
Figure A200780031562D00486
(即醋酸倍他米松和倍他米松磷酸钠)、
Figure A200780031562D00487
(即舒林酸)、
Figure A200780031562D00488
(即醋酸可的松)、(即青霉胺)、
Figure A200780031562D004810
(即奥沙普秦)、
Figure A200780031562D004811
(即***)、
Figure A200780031562D004812
(即青霉胺)、
Figure A200780031562D004813
(即醋酸甲泼尼龙)、
Figure A200780031562D004814
(即双水杨酯)、(即二氟尼柳)、
Figure A200780031562D004816
(即萘普生)、
Figure A200780031562D004817
(即环孢霉素)、
Figure A200780031562D004818
(即氢化可的松)、
Figure A200780031562D004819
(即硫唑嘌呤)、
Figure A200780031562D004820
(即吲哚美辛)、
Figure A200780031562D004821
(即依托度酸)、
Figure A200780031562D004822
(即布洛芬(ibuprofin))、(即硫代苹果酸金钠)、(即苯氧布洛芬钙)、
Figure A200780031562D004825
(即甲氧萘丙酸钠)、
Figure A200780031562D004826
(即环孢霉素)、
Figure A200780031562D004827
(即酮洛芬)、
Figure A200780031562D004828
(即酮洛芬)、
Figure A200780031562D004829
(即***龙)、
Figure A200780031562D004830
(即羟氯喹)、
Figure A200780031562D004831
(即***龙)、
Figure A200780031562D004832
(即萘丁美酮)、
Figure A200780031562D004833
(即甲泼尼龙琥珀酸钠)、
Figure A200780031562D004834
(即托美丁钠)、(即三水杨酸胆碱镁)和
Figure A200780031562D004836
(即双氯芬酸)。这些包括上述名称的治疗试剂的任何制剂。给予这些试剂的给药剂量和方案在本领域中是公知的。
对于本领域普通技术人员来说显而易见的是，与本发明的组合物组合使用的其他治疗试剂和/或其他活性试剂的给药可以根据所要治疗的细胞因子介导的病症和所述试剂对该病症的已知作用而变化。根据所述临床技术人员的认识，可以根据所观察到的所给予试剂对患者的作用以及所观察到的所述细胞因子介导的病症对所述给予试剂的反应，对所述治疗方案(例如给药剂量、给药方式和给药时间)加以改变。
尽管已经提供了上述组合物和结合物，但是还可以进行调整和修正，并且本发明意在包括用于治疗细胞因子介导的病症的地高辛抗体组合物，所述地高辛抗体组合物的地高辛结合能力低于或高于本说明书所提供的实例或者在所述实例中间。
VIII.生物学的和预测的实施例。下述非限制性实例对本发明的方法进行了进一步阐述。
人脐静脉是很容易获得的内皮组织和内皮细胞(本文中称为“HUVEC”)的来源，且人脐静脉和HUVEC均为用于研究与本文所公开的本发明相关的内皮细胞活化和功能障碍的适合模型。人们相信，下文的数据和预测性实施例证实了地高辛抗体具有调节或弱化多种生物学活性的作用。因此，地高辛抗体组合物可用于预防或治疗多种TNF-介导的病症。由于许多细胞因子的细胞信号传导途径相似，因此还可以预期的是，地高辛抗体组合物可用于治疗由其他促炎性细胞因子(例如IL-1、IL-6、IL-8、IFN-γ等)和其他内源促炎性物质诱导的炎性病症。
生物学实施例#1
内皮细胞(EC)分离自正常妊娠分娩的脐带静脉，并且按照Wang Y，Yang G and Lucas MJ，Expression of Thrombin Receptors in EndothelialCells and Neutrophils from Normal and Preeclamptic Pregnancies，J.Clin.Endocrin.& Met.87(8)：3728-3724(2002)中所述进行培养。将汇合的EC在48孔/簇细胞培养板中培养，并且用浓度为1、10和100pg/ml的TNF-α处理2小时(在脓毒症中TNF-α的浓度范围为50-100pg/ml)。EC活化是利用直接检测粘附分子ICAM、VCAM和E-选择素的EC表面表达的免疫测定法测定的。数据表示为平均值±S.D.，并且用ANOVA对其加以分析。使用Student-Newman-Keuls检验作为事后比较检验(post-hoc test)。认为小于0.05的“P”水平为具有统计学显著性。图2A、3A和4A分别图示说明了逐渐增加的、剂量依赖性TNF-α诱导的ICAM、VCAM和E-选择素的细胞表面表达。如果在用TNF-α诱导前将EC用地高辛抗体预处理一(1)小时，则ICAM、VCAM和E-选择素表达会受到调节，如图2B、3B和4B中所示，表明地高辛抗体对EC施加了保护作用。此外，当在用TNF-α诱导后将EC用地高辛抗体处理一(1)小时时，所述抗体会减少TNF-α诱导的ICAM、VCAM和E-选择素表达，分别如图5A、5B和6中所示。
预测性生物学实施例#2：
已知地高辛抗体可恢复红细胞膜中的Na+/K+ATP酶活性。如生物学实例#1中所证实的，地高辛抗体可减弱TNF诱导的粘附分子表达，表明改变的Na+/K+ATP酶可能会有助于炎性和/或免疫应答中的内皮细胞活化。为测试这种可能性，Na+/K+ATP酶活性是用正常对照(即健康)患者和表现出细胞因子介导的病症(例如脓毒症、严重烧伤或创伤、HIV、脑型疟)的患者的各种细胞(优选内皮细胞和白细胞)测定的。将会确定地高辛抗体对Na+/K+ATP酶活性的作用，且地高辛抗体将会减弱表现出炎性相关或细胞因子介导病症的患者的细胞的Na+/K+ATP酶抑制。
脓毒症的动物模型(例如大鼠、小鼠等)是本领域技术人员所公知的，并且任何这类模型均可用在本发明中。通过股静脉分别给予大鼠(Wistar，雄性)脂多糖(“LPS”)(20ng/kg)和盐水(对照)，并且在LPS给药后2、12和24小时将它们处死。白细胞、红细胞和内皮细胞均分离自处死的LPS处理的大鼠和对照大鼠，将这些细胞置于含有86铷(Rb+)(一种钾类似物)的HEPES缓冲液中三小时。Na+/K+ATP酶活性是利用Rb的吸收来测定的。与对照相比，在LPS处理的大鼠体内Na+/K+ATP酶活性明显降低。
还可以评估地高辛抗体对Na+/K+ATP酶活性的作用。在给予LPS后约24小时，将地高辛抗体(或DIGIFABTM，0.1mg地高辛结合能力/kg)或生理盐水安慰剂给予LPS处理的大鼠。将大鼠组用地高辛抗体或盐水安慰剂处理，并且在进行治疗干预后第2、6和12小时的时候将其处死。内皮细胞、白细胞和红细胞均分离自地高辛抗体处理的大鼠和对照大鼠，并且将其置于HEPES缓冲液和Rb+的溶液中。Na+/K+ATP酶活性是在基线(地高辛抗体或安慰剂给药前)和在给药后第2、6和12小时的时候利用Rb+的吸收测定的(表示为nmol/hr/106细胞)。在地高辛抗体和安慰剂处理的样品中平均Na+/K+ATP酶活性均向正常对照的Na+/K+ATP酶活性水平方向增加(反映了LPS对钠泵活性的作用随时间丧失)；然而，对于安慰剂处理的样品来说，活性的增加更加平缓和适度(参见下表VI)。
表VI：在患脓毒症大鼠的内皮中地高辛抗体对钠/钾ATP酶活性＊的作用
 
组 基线 2小时 6小时 12小时
 
正常对照(无脓毒症)N＝12 82 79.0 82 84
DIGIFABTM处理过的脓毒症样品(N＝6) 48 63 62 73
安慰剂处理过的脓毒症样品(N＝6) 44 52 54 60
＊活性表示为86Rb+吸收nmol/hr/106RBC
预测性生物学实施例#3：
通过给每只动物静脉注射20ng LPS和20mg D-半乳糖胺来在C57/BL小鼠中诱发脓毒症。通过测定三天时间内对死亡率的抑制来测量对脓毒症的抑制。在进行LPS诱导前一(1)小时，经腹腔内给予地高辛抗体(0.01mg地高辛结合能力/kg)及生理盐水。对于接受安慰剂的小鼠，在三天时间内死亡率为100％。接受地高辛抗体的小鼠在所监测的三天时间内存活率为100％。
预测性生物学实施例#4：
进行了随机的、双盲的、安慰剂对照的、多中心试验。招收患有由于急性感到导致的全身性炎症(SIRS)和器官功能衰竭的患者，并且指定其接受静脉推注的安慰剂或地高辛免疫Fab(羊)(.04mg地高辛结合能力/kg体重，基于假设血清TNF-α为100pg/ml)，每六小时一次，总计持续96小时。预定的主要终点是任何原因导致的死亡，并且在开始输注后第28天进行评估。就下述情况对患者进行监测：有害事件、生命体征的变化、实验室变量和微生物培养的结果，以及针对地高辛免疫Fab(羊)的中和抗体的产生。
总计治疗了100名随机患者(安慰剂组48名，地高辛免疫Fab(羊)组52名)。安慰剂组死亡率为30.8％，地高辛免疫Fab(羊)组死亡率为24.7％。根据预定的主要分析，地高辛免疫Fab(羊)的处理与6.1％的死亡风险下降有关(P＝0.005)。
尽管已经阐明和描述了本发明的优选实施例和步骤，但是这是举例说明，并且除所附权利要求及它们的等同物的范围所要求的之外，本发明不应被限制。本申请所公开的所有参考文献(包括专利、专利申请公布文本和公开的文献引文)均通过引用的方式全文纳入本说明书。

Claims (20)

1.一种用于调节或弱化细胞粘附分子的细胞因子诱导性细胞表面表达的药物组合物，包括一种地高辛抗体组合物。
2.权利要求1的药物组合物，其中所述细胞粘附分子为内皮细胞粘附分子。
3.权利要求2的药物组合物，其中所述细胞粘附分子选自ICAM、VCAM或E-选择素。
4.权利要求1的药物组合物，其中所述地高辛抗体包括地高辛免疫Fab。
5.权利要求1的组合物，其中所述细胞因子为肿瘤坏死因子。
6.一种用于调节或弱化细胞粘附分子的细胞因子诱导性细胞表面表达的方法，包括使细胞与地高辛抗体组合物接触的步骤。
7.权利要求6的方法，其中所述细胞为内皮细胞。
8.权利要求6的方法，其中所述细胞粘附分子选自ICAM、VCAM或E-选择素。
9.一种用于弱化患者体内细胞粘附分子的细胞因子诱导性细胞表面表达的方法，包括使细胞与地高辛抗体组合物接触的步骤，其中所述细胞在患有细胞因子介导的病症的患者体内。
10.一种用于调节或弱化患者体内细胞粘附分子的细胞因子诱导性细胞表面表达的方法，包括给予有需要的患者治疗有效量的地高辛抗体组合物。
11.一种用于治疗细胞因子介导的病症的方法，包括给予有需要的患者治疗有效量的地高辛抗体组合物的步骤。
12.权利要求9、10或11任一项的方法，其中所述地高辛抗体组合物选自0.001mg-500mg地高辛结合能力/kg患者体重的范围。
13.权利要求9、10或11任一项的方法，其中所述地高辛抗体组合物选自表I、II、III、IV或IV。
14.权利要求9、10或11任一项的方法，其中所述细胞粘附分子选自ICAM、VCAM和E-选择素。
15.权利要求11的方法，其中所述细胞因子介导的病症选自脓毒症、SIRS或失血性休克。
16.一种制备用于治疗细胞因子介导的病症的药剂的方法，包括将地高辛抗体与可药用载体或赋形剂组合。
17.一种用于调节或弱化肿瘤坏死因子对细胞粘附分子的作用的组合物，包括一种地高辛抗体。
18.一种用于调节或弱化通过细胞粘附分子进行的细胞-细胞相互作用的组合物，包括一种地高辛抗体。
19.权利要求18的方法，其中所述细胞-细胞相互作用为内皮细胞和白细胞之间的相互作用。
20.一种用于调节或弱化内皮细胞活化的组合物，包括一种地高辛抗体。
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