CN101417038A - 治疗***的中药组合物及其制备方法和质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种治疗男性不育的中药组合物及其制备方法和质量控制方法，该中药组合物由枸杞子、菟丝子(炒)、覆盆子、五味子(蒸)、车前子(盐炒)等原料药组成，其制备方法包括超微粉碎技术等，本发明药物组合物质量控制方法包括枸杞子、菟丝子、覆盆子、五味子、车前子的薄层鉴别和五味子中五味子乙素的含量测定方法。本发明药物组合物用于肾虚腰痛，尿后余沥，遗精早泄，阳痿不育有显著疗效。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药组合物及其制备方法和质量控制方法，尤其涉及一种治疗***的中药组合物及其制备方法和质量控制方法，属于中药技术领域。
背景技术
男性不育不是单一的特异性疾病，而是由多种病因导致的***，包括内外生殖器和性腺轴不同水平的异常，最终表现为生育力下降或丧失的综合病症。正因为如此，对于***不可能用一种特效的药物或方法治愈各种不同病因所致的***。目前在临床有一定疗效的治疗方法有内分泌治疗、生殖道炎症的治疗、免疫治疗、外科治疗、人工授精，尚有许多原因不明，诊断不明确的***，此种情况的治疗方法归纳有：激素、抗生素、甲状腺素、维生素、微量元素、氨基酸等药物，同时辅以劝告病人避免烟酒，防止精神紧张、过度疲劳以及保持正常营养和规律的生活习惯等，但多疗效不肯定。
中医对男性不育早有认识，中医药疗效较西医显著，且副作用很少。中医认为肾主藏精，为生殖之本，故治疗以补肾为主，积累了不少经验。清代叶天士对男性不育的认识十分深刻，“疾病之关于胎孕者，男子则在精，女子则在血，无非不足而然。凡男子之不足，则有精滑、精清、精冷，或临事不坚，或流而不射，或梦遗频数，或便浊淋沥。或好女色，以致阴虚，阴虚则腰肾痛惫。或好男风，以致阳极，阳极则亢而亡阴。或过于强固，强固则胜败不洽。或素患阴疝，阴疝则肝肾乖离。此外或以阳衰，阳衰则多寒。或以阴虚，阴虚则多热，是皆男子之病，不得尽诿之妇人也。倘得其源而医治之，则事无不济矣。”他从性功能障碍到***过稀，从***无力到生殖***炎症，从性生活过度导致肾虚到疝气。对于***来说，如无特殊病症，中医强调补肾。因肾主藏精，肾亏则精关不固，常表现为遗精、滑精或早泄。肾亏必致气血两亏，故男子不育的中医治法不外乎补肾、两益气血。发挥中医药之特长，提供一种有效治疗***的中药组合物在目前是非常必要的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于治疗***的中药组合物；
本发明的目的还在于提供一种该中药组合物的制备方法；
本发明的目的还在于提供该中药组合物的质量控制方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现的：
本发明所述的治疗***的中药组合物是由如下重量比的原料药制成：
枸杞子 15～75重量份 沙苑子 20～60重量份 覆盆子 10～40重量份
五味子 1～8重量份 车前子(盐炒) 4～15重量份
本发明所述中药组合物原料药优选配比可以为：
枸杞子 56重量份 沙苑子 25重量份 覆盆子 20重量份
五味子5 重量份 车前子(盐炒) 7重量份
本发明所述的治疗***的中药组合物可由如下重量比的原料药制成：
枸杞子 15～75重量份 菟丝子 20～60重量份 覆盆子 10～40重量份
五味子 1～8重量份 车前子(盐炒) 4～15重量份
本发明所述中药组合物原料优选配比为：
枸杞子 40～65重量份 菟丝子(炒) 20～30重量份 覆盆子 15～30重量份
五味子(蒸) 4～7重量份 车前子(盐炒) 5～9重量份
本发明所述中药组合物原料药优选配比还可以为：
枸杞子 56重量份 菟丝子(炒) 25重量份 覆盆子 20重量份
五味子(蒸) 5重量份 车前子(盐炒) 7重量份
***多由肾气不足，***亏损所致。本发明药物组合物处方中枸杞子、沙苑子补肾精，壮阳道，助精神；覆盆子养真阴，固精关，起阳痿；五味子补肾水，益肺气，止遗泄；车前子利小便，《名医别录》称其能“养肝强阴益精”，与上述药物相配，补中寓泻，补而不腻。全方共奏补肾益精之功，适用于肾虚腰痛，尿后余沥，遗精早泄，阳痿不育。
本发明所述的组合物可按常规工艺加入辅料制成片剂、胶囊剂、滴丸剂等临床可接受的剂型；所述辅料包括溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂、润滑剂、基质等。
本发明所述的中药组合物丸剂的制备方法为：
以上五味，采用超微粉碎技术，粉碎成微粉，混匀；90-110重量份蜂蜜在116-118℃时，炼制密度为1.37，即得炼蜜；每100重量份粉末加炼蜜35-50重量份及100-160重量份的水，泛丸，60-80℃干燥8～12小时，即得。
本发明药物组合物质量控制方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种：
鉴别：
(1)取本发明药物制剂相当于原药材3～4g，研细，加***40～60ml，超声处理15～30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取枸杞子对照药材1～2g，研碎，加***20～30ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取上述二种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15～25:15～25:0.1～0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(2)取本发明药物制剂相当于原药材7～8g，研细，加石油醚(30～60℃)25～35ml，超声处理20～40分钟，滤过，弃去石油醚液，药渣挥尽石油醚，加甲醇30～40ml超声处理15～30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇5～6ml使之分散，取上清液作为供试品溶液。另取菟丝子对照药材2g，研细，同法制备成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取上述二种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(8～12：4～6：3～5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷1％三氯化铝乙醇溶液，凉干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(3)取本发明药物制剂相当于原药材3～4g，研细，加***40～60ml，超声处理15～30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加三氯甲烷30～50ml，超声处理15～25分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取五味子甲素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(10～20：3～7：1～2)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取本发明药物制剂相当于原药材3～4g，研细，加40～60mL石油醚，索氏提取2～3h脱脂，残渣挥干石油醚，加40～60mL甲醇回流提取2～4h，滤过，滤液浓缩至1～2mL，作为供试品溶液；另取覆盆子对照药材，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G板上以醋酸乙酯-甲醇-水(4～7∶1～2∶1～2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷0.5％AlCl3甲醇溶液，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(5)取本发明药物制剂相当于原药材1～2g，研细，加甲醇15～30ml，浸泡2～4h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1～2ml使溶解，作为供试品溶液。取车前子对照药材1～2g，甲醇10～30ml，加热回流提取0.5～1.5h，滤过，滤液挥干，残渣加1～2ml甲醇溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-氨水(10～20∶1～2∶0.5～1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，100℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
含量测定：
照高效液相色谱法(中国药典2005年版附录VID)测定
色谱条件与***适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水-醋酸(65：40：0.1)为流动相；检测波长为254nm。
对照品溶液的制备 取五味子乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本发明药物制剂相当于原药材3～4g，研细，精密称取约4～6g，置索氏提取器中，加正己烷适量，浸泡过夜，于80～85℃回流提取5～8小时，提取液低温蒸干，残渣加甲醇微热使溶解，移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～15μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本发明药物制剂相当于原药材0.5～1g含五味子以五味子乙素(C23H28O6)计，不得少于0.05～0.08mg。
本发明药物组合物质量控制方法优选如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种：
鉴别：
(1)取本发明药物制剂相当于原药材3.6g，研细，加***50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取枸杞子对照药材1g，研碎，加***20ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取上述二种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(20:20:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(2)取本品10g，研细，加石油醚(30～60℃)30ml，超声处理30分钟，滤过，弃去石油醚液，药渣挥尽石油醚，加甲醇30ml超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇5ml使之分散，取上清液作为供试品溶液。另取菟丝子对照药材2g，研细，同法制备成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取上述二种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10：5：4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷1％三氯化铝乙醇溶液，凉干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(3)取本发明药物制剂相当于原药材3.6g，研细，加***50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加三氯甲烷40ml，超声处理20分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取五味子甲素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15：5：1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取本发明药物制剂相当于原药材3.6g，研细，加50mL石油醚，索氏提取2.5h脱脂，残渣挥干石油醚，加50mL甲醇回流提取3h，滤过，滤液浓缩至2mL，作为供试品溶液；另取覆盆子对照药材，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G板上以醋酸乙酯-甲醇-水(5∶1∶1)，展开，取出，晾干，喷0.5％AlCl3甲醇溶液，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(5)取本发明药物制剂相当于原药材1.8g，研细，加甲醇20ml，浸泡3h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。取车前子对照药材1g，甲醇20ml，加热回流提取1h，滤过，滤液挥干，残渣加1ml甲醇溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-氨水(15∶1.5∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，100℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
含量测定：
照高效液相色谱法(中国药典2005年版附录VID)测定
色谱条件与***适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水-醋酸(65：40：0.1)为流动相；检测波长为254nm。
对照品溶液的制备 取五味子乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本发明药物制剂相当于原药材4g，研细，精密称取约5g，置索氏提取器中，加正己烷适量，浸泡过夜，于80～85℃回流提取6小时，提取液低温蒸干，残渣加甲醇微热使溶解，移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～15μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本发明药物制剂相当于原药材0.719g含五味子以五味子乙素(C23H28O6)计，不得少于0.07mg。
本发明所提供的中药组合物的质量控制方法，是通过大量具体创造性试验筛选后得到，鉴别方法中通过对样品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得鉴别专属性很好，而且方法经济适用、结果快速，并且对不同的薄层板都能应用。含量测定中进行了含量测定的方法学考察，表明该方法稳定、准确，可以很有效的对产品进行质量控制，并且用该方法测定的产品要相比其他方法测定的产品在药理效果上表现的更为稳定。
下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
试验例1 制备方法的研究
1、粉碎细度试验
本发明药物组合物在研究设计制备工艺时，对各味药材的有效成分进行了分析，为了较好地保留药物中的有效成分，将药材直接粉碎入药，制得丸剂。取枸杞子56g、沙苑子25g、覆盆子20g、五味子5g、车前子(盐炒)7g共6份，分成两组，分别采用不同制备方法制成丸剂，测定制剂中的五味子乙素的含量，结果见下表1：
表1 粉碎方法的选择
| 制备方法 | 五味子乙素平均含量(mg/g) |
| 以上五味，采用超微粉碎技术，粉碎成微粉，混匀。每100重量份粉末用炼蜜35～50重量份加适量的水泛丸，干燥，制成水蜜丸，即得。 | 0.18 |
| 以上五味，粉碎成细粉，过筛，混匀。每100g粉末用炼蜜35～50g加适量的水泛丸，干燥，制成水蜜丸，即得。 | 0.12 |
从上表可以看出，药物超微粉碎后其有效成份测得量显著高于一般粉碎，说明超微粉碎能够显著提高药物中有效成份的溶出度，这也是药物疗效得到显著提高的主要原因。
2.加水量试验
按处方量配置五份药材，按工艺要求进行超微粉碎，分别分四组做实验：水蜜比例分别为：2：1，2.5：1，3：1，3.5：1，分别以制丸粘度、丸剂外观、烘干时间为指标确定加水量。结果见表2，
表2：加水量试验结果
以上结果表明：水蜜比例为3：1，烘干时间为11h时，各项指标较好，故生产中选用水蜜比例为3：1。
试验例2 质量标准研究
1、枸杞子薄层鉴别
(1)供试品溶液超声提取时间的考察
取本发明药物制剂相当于原药材3.6g，研细，加***50ml，超声处理，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取枸杞子对照药材1g，研碎，加***20ml，同法制成对照药材溶液。吸取上述二种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(20:20:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。比较供试品和对照药材在薄层板上的显色效果，结果见下表：
表3 供试品溶液超声提取时间的考察
| 提取时间 | 5min | 10min | 20min | 40min |
| 显色效果 | 供试品与对照药材在薄层板上均未出现显色斑点。 | 供试品斑点很浅，对照药材斑点不清楚。 | 供试品与对照药材在相应位置斑点显色清晰。 | 供试品与对照药材在相应位置斑点显色清晰。 |
从上表可以看出，超声提取20min以上，所得供试品溶液与对照药材溶液，展开后，在薄层板上相应位置斑点显色清晰，已经符合试验要求，故超声提取20min。
(2)展开剂的配比
照薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。比较不同配比展开剂下，供试品和对照药材色谱中各斑点展开的效果，结果见下表：
表4 展开剂的配比试验结果
| 展开剂配比 | 10:30:0.1 | 20:30:0.1 | 30:10:0.1 | 20:20:0.1 |
| 展开效果 | 供试品与对照药材各斑点分离不清楚，展开效果很差。 | 供试品与对照药材各斑点分离不清楚，展开效果差。 | 供试品与对照药材各斑点有脱尾现象，展开效果差。 | 供试品与对照药材各斑点分离清楚，展开效果好。 |
从上表可以看出，展开剂配比为20:20:0.1时，供试品与对照药材色谱中各显色斑点分离清楚，展开效果好，符合试验要求。
2、菟丝子的薄层鉴别
供试品溶液的制备：取本发明药物制剂相当于原药材7.2g，研细，加石油醚(30～60℃)30ml，超声处理30分钟，滤过，弃去石油醚液，药渣挥尽石油醚，加甲醇30ml超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇5ml使之分散，取上清液作为供试品溶液。
对照药材溶液的制备：取菟丝子对照药材2g，研细，同法制备成对照药材溶液。
展开剂的选择试验：
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10：5：4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷1％三氯化铝乙醇溶液，凉干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。比较不同展开剂，供试品与对照药材色谱中各斑点的展开效果，结果见下表：
表5 展开剂的选择试验结果
| 展开剂 | 甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5：5：3) | 甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10：5：4) | 氯仿-乙酸乙酯-甲酸(10：5：4) | 甲苯-正丁醇-甲酸(10：5：4) |
| 展开效果 | 供试品与对照品 | 供试品与对照品 | 供试品与对照品 | 供试品与对照品 |
| 色谱相应位置显相同颜色的斑点，但各斑点分离不清楚，阴性无干扰。 | 色谱相应的位置显相同颜色的斑点，展开效果好，阴性无干扰。 | 色谱相应的位置显相同颜色的斑点，但分离效果很差，阴性有干扰。 | 色谱相应的位置显相同颜色的斑点，有脱尾现象，阴性有干扰。 |
从上表可以看出，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10：5：4)为展开剂，展开效果好，且斑点显色清晰，阴性无干扰，重现性好。
3、五味子的薄层鉴别
供试品溶液的制备：
方法一：取本发明药物制剂相当于原药材3.6g，研细，加氯仿50ml，加热回流0.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液。
方法二：取本发明药物制剂相当于原药材3.6g，研细，置烧瓶中，加正己烷50ml，冷浸过夜，于80～85℃回流提取2小时，滤过，滤液低温蒸干，残渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液。
方法三：取本发明药物制剂相当于原药材3.6g，研细，加硅藻土5g，研匀，加***50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加三氯甲烷40ml，超声处理20分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。
对照品溶液的制备：取五味子甲素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，即得。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15：5：1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。比较供试品色谱与相应对照品色谱位置，斑点展开的效果
表6 供试品溶液的制备方法试验结果
| 供试品溶液制备方法 | 方法一 | 方法二 | 方法三 |
| 展开效果 | 供试品溶液在与对照品溶液相应位置上有相同显色斑点，但阴性有干扰。 | 供试品溶液在与对照品溶液相应位置上有相同显色斑点，但阴性有干扰。 | 供试品溶液在与对照品溶液相应位置上有相同显色斑点，阴性无干扰。 |
从上表可以看出，应用方法三制备的供试品溶液展开效果好，阴性无干扰。故选择方法三制备供试品溶液。
4、覆盆子的薄层鉴别
供试品溶液的制备：取本发明药物制剂相当于原药材3.6g，加50mL石油醚，索氏提取2.5h脱脂，残渣挥干石油醚，加50mL甲醇回流提取3h，滤过，滤液浓缩至2mL，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取覆盆子对照药材，同法制成对照药材溶液；
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G板上以醋酸乙酯-甲醇-水，展开，取出，晾干，喷0.5％AlCl3甲醇溶液，置紫外灯(365nm)下检视。比较不同点样量、不同展开剂配比下，供试品溶液与对照品溶液的展开效果，结果见下表：
表7 展开剂配比及供试品点样量的比较试验
从上表可以看出，展开剂醋酸乙酯-甲醇-水的配比为5∶1∶1，点样量为5μl时，供试品和对照药材色谱相应位置显相同颜色荧光斑点，且各斑点分离效果好，显色清晰，阴性无干扰，符合试验要求。
5、车前子的薄层鉴别
供试品溶液的制备：取本发明药物制剂相当于原药材1.8g加甲醇20ml，浸泡3h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
对照药材溶液的制备：取车前子对照药材1g，甲醇20ml，加热回流提取1h，滤过，滤液挥干，残渣加1ml甲醇溶解，作为对照药材溶液。
吸取供试品溶液、对照药材溶液各20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-氨水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，100℃加热至斑点显色清晰。比较不同配比展开剂，供试品与对照药材在薄层色谱上的展开效果，结果见下表：
表8 展开剂配比的选择试验
| 展开剂配比 | 15∶4∶0.5 | 15∶3∶0.5 | 15∶2∶0.5 | 15∶1.5∶0.5 |
| 展开效果 | 供试品与对照药材色谱中，各斑点分离很不清楚，干扰大。 | 供试品与对照药材色谱中，各斑点分离很不清楚，干扰大。 | 供试品与对照药材色谱中，各斑点分离不清楚，有干扰。 | 供试品与对照药材色谱中，各斑点分离效果好，显色清晰。 |
从上表可以看出，以氯仿-甲醇-氨水15∶1.5∶0.5的比例为展开剂，展开效果最好，符合试验要求，且重现性好，阴性无干扰。
6、五味子乙素的含量测定
检测仪器：岛津公司SPD-10ATvp型高效液相色谱仪
色谱柱：迪玛公司(Zorbax C18 4.6×150mm，5μm)
流动相：乙腈-水-醋酸(65：40：0.1)
检测波长：254nm 流速：1.000ml/min 柱温：室温
对照品：五味子乙素购于中国药品生物制品检定所 批号：110765-200205
测定方法：
对照品溶液的制备 取五味子乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取按实施例2方法制备的丸剂相当于原药材4.5g粉碎，精密称取约5g，精密加入50ml甲醇，称取重量，超声处理30分钟，放冷，补足重量，摇匀，过滤，即得。
阴性对照液的制备 按实施例2方法制备缺五味子的空白样品，制备阴性对照液。
用微孔滤膜(0.45μm)过滤。分别精密吸取阴性对照液，对照品溶液与供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
1.含量测定方法考察：
(1)稳定性试验取对照品溶液(34μg/ml)，分别于配制后0、2、4、6、12、24小时，依法测定，结果表明，其在24小时内基本稳定，结果见下表：
表9 稳定性试验结果
(2)线性关系考察取对照品溶液(35.52μg/ml)摇匀，分别精密吸取1、5、10、15、19μl注入高效液相色谱仪，结果见下表，并绘制标准曲线，表明五味子乙素在0.03552μg-0.67488μg间呈线性关系，其回归方程为：y＝2E+06x+4938.3(r＝0.9998)
表10 线性关系考察结果
(3)精密度试验精密对照品溶液，重复进样5次，求得相对标准偏差<2.5％，结果见下表：
表11 精密度试验结果
(4)重现性试验 按正文方法，取同一批本发明药物制剂5份，对每份进行测定，求得相对标准偏差<2％，结果见下表：
表12 重现性试验结果
(5)回收率试验 精密称取已知含量的同一批本发明药物制剂2.5g再精密加入五味子乙素对照品(35.52μg/ml)8ml，按正文供试品溶液的制备方法操作，测定其含量，并计算其回收率，测定结果见下表：
表13 回收率试验结果
2.测定结果：
表14 三批含量测定结果
| 批号 | 含量(mg/克) |
| 11201 | 0.115 |
| 11302 | 0.116 |
| 11403 | 0.115 |
根据以上实验结果，本发明药物含量测定方法稳定，符合要求。
试验例3 药效学研究
1 材料
药物与试剂：
本发明药物I：按照实施例8制备的药物制剂
本发明药物II：按照实施例2制备的药物制剂
本发明药物III：按照实施例1制备的药物制剂
阳性对照药物：生精胶囊 市售品
戊巴比妥钠：以生理盐水配制，供腹腔注射用，上海化学试剂采购供应站分装。
青霉素G钾：以注射用水配制，供腹腔注射用，华北制药厂生产。
氢化可的松琥珀酸钠注射液：天津市生药制药厂生产。
丙酸***试剂盒，天津得普DDC公司出口。
动物：SD大鼠(80～100g)，昆明小鼠(20～22g)，豚鼠(750～850g)，均为雄性，由河南省实验动物中心提供，。
仪器：痛阈测定仪(用于电刺激)，北京海淀电子医疗厂出品。γ放射免疫计数器，西安自动化研究所出品。
2 方法与结果
2.1 对去势大鼠肾阳虚证的影响
方法：取48只雄性大鼠，以戊巴比妥钠40mg/kg经腹腔麻醉，消毒局部皮肤后，随机选8只动物作空白对照(假手术)组，余动物均切除双侧睾丸并肌注青霉素G钾2万U·kg-1。第11天将去势动物随机分为5组，每组8只，并开始用药，连续12天。即空白对照组(假手术组)、模型对照组：给予015％CMC2Na10ml·kg-1ig；阳性对照组(生精胶囊组)：4.0g生药·kg-1；本发明药物I、II、III组：分别为2.8g生药·kg-1。末次用药后1小时以Wa29E测定仪刺激动物***局部，电流强度为4mA，观察******潜伏期及持续时间。次日处死动物，取***腺、***囊—***及提肛肌称重，并计算器官系数(mg/100g)。结果：见表15。
表15 五子衍宗浓缩丸对去势大鼠肾阳虚证的影响(x±s，n＝8)
注：与空白对照组相比△△P<0.01；与模型对照组相比*P<0.05，**P<0.01；与阳性对照组相比★P<0.05，★★P<0.01。
阳性对照组及本发明药物组的******潜伏期明显短于模型组，***持续时间高于模型组(P<0.05或0.01)，阳性对照组及本发明药物组的附性器官系数(***腺、***囊—***及提肛肌)均明显高于模型组(P<0.05或0.01)，呈现一定的量效关系，本发明药物组提肛肌的重量明显高于阳性对照药物组。其中本发明药物III对去势大鼠肾阳虚证的影响最显著，效果最好。
2.2 对肾阳虚小鼠生育能力的影响
方法：取60只雄性小鼠，随机分为6组，每组10只(分组及剂量见表2)。除空白对照组外，其余动物用氢化可的松0.5ml·kg-1ip连续9日；在造模同时开始灌胃，连续12天。末次给药后1h经眼眶采血，按放免测定试剂盒说明，测血浆睾酮含量；并对各鼠睾丸、附睾称重后，将附睾放入盛有任氏液的平皿内，研磨制成***悬液，37℃水浴15min，按红细胞计数法观察记录每g附睾所含***数，并将上述悬液滴于玻璃片上，光学显微镜下记录200个***中活动***的百分率。结果：见表16。
表16 五子衍宗浓缩丸对阳虚小鼠生育能力的影响(x±s)
注：与空白组相比△P<0.05，△△P<0.01；与模型对照组相比*P<0.05，**P<0.01；与阳性对照组相比★P<0.05，★★P<0.01。
阳性药物对照组及本发明药物组的血浆睾酮含量明显高于模型组(P<0.01)；各用药组的睾丸、附睾重量与模型组无明显区别(P>0.05)；阳性药物对照组及本发明药物组的***数目高于模型组(P<0.01或0.05)；本发明药物组的***活动能力明显高于模型组(P<0.01)。本发明药物对阳虚小鼠血浆睾酮含量、***数、***活动能力等各项指标的提高均显著高于阳性对照药物，尤其本发明药物III的效果最好。
3 对雄性小鼠交配能力的影响
取雄性昆明种小白鼠60只，随机分为6组，每组10只。正常对照组蒸馏水灌胃(20ml/kg)，丙酸皋丸素组皮下注射给药(<0.025mg/只).生精胶囊组灌胃给药4.0g/kg。本发明药物I、II、III灌胃给药2.8g/kg。以上各组，每日灌胃1次(丙酸肇丸素组为皮下注射给药)，连续10d，第5d开始每只雄鼠与5只雌鼠同笼喂养，第6d给每只雌鼠皮下注射苯甲酸***(200μg/kg)。同笼后次日开始每天上午检查各组雌鼠***口或***内有无白色物出现，有白色物者为出现阴栓，将其从笼中取出；计算阴栓出现率。结见下表17：
表17 振雄展势丹对雄性小鼠交配能力的影晌
| 组别 | 剂量(g/kg) | 动物数(n) | 出现阴栓的鼠数(n) | 阴栓出现率(％) |
| 正常对照组 | 蒸馏水20ml | 50 | 10 | 20 |
| 丙酸皋丸素组 | -- | 50 | 31 | 62** |
| 生精胶囊组 | 4.0 | 50 | 25 | 50** |
| 本发明药物I组 | 2.8 | 50 | 32 | 64** |
| 本发明药物II组 | 2.8 | 50 | 35 | 70**★ |
| 本发明药物III组 | 2.8 | 50 | 39 | 78**★★ |
注：与正常对照组相比*P<0.05，**P<0.01；与生精胶囊组相比★P<0.05，★★P<0.01。
由上表可见，本发明药物组和阳性药物对照组(丙酸皋丸素组和生精胶囊组)与正常对照组比较均明显地增强小鼠交配能力(P<0.01)，本发明药物的作用显著高于生精胶囊，其中本发明药物III的效果最好。
下述实施例均能够实现上述实验例所述的效果
实施例1
枸杞子 56g 沙苑子 25g 覆盆子 20g
五味子 5g 车前子(盐炒) 7g
称取以上原料药材，以上五味，采用超微粉碎技术，粉碎成微粉，混匀；90-110g蜂蜜在116-118℃时，炼制密度为1.37，即得炼蜜；每100g粉末加炼蜜40g及110g的水，泛丸，60℃干燥11小时，制成100g，即得。
(1)取本品5g，研细，加***50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取枸杞子对照药材1g，研碎，加***20ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取上述二种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(20：20：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(2)取本品5g，研细，加硅藻土5g，研匀，加***50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加三氯甲烷40ml，超声处理20分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取五味子甲素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15：5：1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
含量测定：
照高效液相色谱法(中国药典2005年版附录VID)测定
色谱条件与***适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水-醋酸(65：40：0.1)为流动相；检测波长为254nm。
对照品溶液的制备 取五味子乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品粉碎，精密称取约5g，置索氏提取器中，加正己烷适量，浸泡过夜，于80～85℃回流提取6小时，提取液低温蒸干，残渣加甲醇微热使溶解，移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～15μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每克含五味子以五味子乙素(C23H28O6)计，不得少于0.07mg。
实施例2
枸杞子 56g 菟丝子(炒) 25g 覆盆子 20g
五味子(蒸) 5g 车前子(盐炒) 7g
称取以上原料药材，以上五味，采用超微粉碎技术，粉碎成微粉，混匀；90-110g蜂蜜在116-118℃时，炼制密度为1.37，即得炼蜜；每100g粉末加炼蜜40g及110g的水，泛丸，60℃干燥11小时，制成100g，即得。
(1)取本品5g，研细，加***50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取枸杞子对照药材1g，研碎，加***20ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取上述二种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(20：20：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(2)取本品10g，研细，加石油醚(30～60℃)30ml，超声处理30分钟，滤过，弃去石油醚液，药渣挥尽石油醚，加甲醇30ml超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇5ml使之分散，取上清液作为供试品溶液。另取菟丝子对照药材2g，研细，同法制备成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取上述二种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10：5：4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷1％三氯化铝乙醇溶液，凉干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(3)取本品5g，研细，加硅藻土5g，研匀，加***50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加三氯甲烷40ml，超声处理20分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取五味子甲素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15：5：1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
含量测定：
照高效液相色谱法(中国药典2005年版附录VID)测定
色谱条件与***适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水-醋酸(65：40：0.1)为流动相；检测波长为254nm。
对照品溶液的制备 取五味子乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品粉碎，精密称取约5g，置索氏提取器中，加正己烷适量，浸泡过夜，于80～85℃回流提取6小时，提取液低温蒸干，残渣加甲醇微热使溶解，移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～15μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每克含五味子以五味子乙素(C23H28O6)计，不得少于0.07mg。
实施例3
枸杞子 15g 菟丝子(炒) 20g 覆盆子 10g
五味子 1g 车前子(盐炒) 4g
称取以上原料药材，以上五味，采用超微粉碎技术，粉碎成微粉，混匀；90-110g蜂蜜在116-118℃时，炼制密度为1.37，即得炼蜜；每100g粉末加炼蜜40g及110g的水，泛丸，60℃干燥11小时，即得。
(1)取本品5g，研细，加***50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取枸杞子对照药材1g，研碎，加***20ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取上述二种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(20：20：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(2)取本品10g，研细，加石油醚(30～60℃)30ml，超声处理30分钟，滤过，弃去石油醚液，药渣挥尽石油醚，加甲醇30ml超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇5ml使之分散，取上清液作为供试品溶液。另取菟丝子对照药材2g，研细，同法制备成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取上述二种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10：5：4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷1％三氯化铝乙醇溶液，凉干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(3)取本品5g，研细，加硅藻土5g，研匀，加***50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加三氯甲烷40ml，超声处理20分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取五味子甲素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15：5：1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取本品粉末5g，加50mL石油醚，索氏提取2.5h脱脂，残渣挥干石油醚，加50mL甲醇回流提取3h，滤过，滤液浓缩至2mL，作为供试品溶液；另取覆盆子对照药材，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G板上以醋酸乙酯-甲醇-水(5∶1∶1)，展开，取出，晾干，喷0.5％AlCl3，甲醇溶液，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(5)取本品内容物1.5g加甲醇20ml，浸泡3h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。取车前子对照药材1g，甲醇20ml，加热回流提取1h，滤过，滤液挥干，残渣加1ml甲醇溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-氨水(15∶1.5∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，100℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
实施例4
枸杞子 25g 沙苑子 25g 覆盆子 20g
五味子 5g 车前子(盐炒) 7g
称取以上原料药材，以上五味，采用超微粉碎技术，粉碎成微粉，混匀；90-110g蜂蜜在116-118℃时，炼制密度为1.37，即得炼蜜；每100g粉末加炼蜜40g及110g的水，泛丸，60℃干燥11小时，即得。
实施例5
枸杞子 75g 菟丝子 60g 覆盆子 40g
五味子8g 车前子(盐炒) 15g
称取以上原料药材，采用超微粉碎技术，分别粉碎成微粉，混匀，与聚乙二醇4000按照重量比3：7的比例混合均匀，滴入冷却的液体石蜡中，制得滴丸，即得。
实施例6
枸杞子 56g 菟丝子(炒) 25g 覆盆子 20g
五味子(蒸) 5g 车前子(盐炒) 7g
称取以上原料药材，粉碎至80目，混匀，装入胶囊，即得。
实施例7
枸杞子 56g 菟丝子(炒) 25g 覆盆子 20g
五味子(蒸) 5g 车前子(盐炒) 7g
称取以上原料药材，粉碎至80目，混匀，用浓度为8％的淀粉浆制粒，干燥，整粒，压片，包衣，制成350片，即得。
实施例8
枸杞子 25g 菟丝子(炒) 25g 覆盆子 12.5g
五味子(蒸) 3.125g 车前子(盐炒) 6.25g
【制法】以上五味，粉碎成细粉，过筛，混匀；90-110g蜂蜜在116-118℃时，炼制密度为1.37，即得炼蜜；每100g粉末用炼蜜35～50g加适量的水泛丸，干燥，制成100g，即得。
【性状】本品为棕褐色的水蜜丸；味甜、酸、微苦。
【鉴别】(1)取本品，置显微镜下观察：种皮石细胞表面观不规则多角形，壁厚，波状弯曲，层纹清晰。种皮表皮石细胞淡黄棕色，表面观类多角形，壁较厚，孔沟细密，胞腔含暗棕色物。种皮栅状细胞2列，内列较外列长，有光辉带。种皮内表皮细胞表面观类长方形，壁稍波状，以数个细胞为一组，略作镶嵌状排列。非腺毛单细胞，壁厚，木化，脱落后残迹似石细胞状。
(2)取本品5g，研细，加***50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取枸杞子对照药材1g，研碎，加***20ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取上述二种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(20：20：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(3)取本品10g，研细，加石油醚(30～60℃)30ml，超声处理30分钟，滤过，弃去石油醚液，药渣挥尽石油醚，加甲醇30ml超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇5ml使之分散，取上清液作为供试品溶液。另取菟丝子对照药材2g，研细，同法制备成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取上述二种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10：5：4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷1％三氯化铝乙醇溶液，凉干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(4)取本品5g，研细，加硅藻土5g，研匀，加***50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加三氯甲烷40ml，超声处理20分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取五味子甲素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15：5：1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
【检查】应符合丸剂项下有关的各项规定(附录I A)。
【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2005年版附录VI D)测定
色谱条件与***适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水-醋酸(65：40：0.1)为流动相；检测波长为254nm。
对照品溶液的制备 取五味子乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品粉碎，精密称取约5g，精密加入50ml甲醇，称取重量，超声处理30分钟，放冷，补足重量，摇匀，过滤，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～15μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每克含五味子以五味子乙素(C23H28O6)计，不得少于0.07mg。
【功能与主治】补肾益精。用于肾虚腰痛，尿后余沥，遗精早泄，阳痿不育。
【用法与用量】口服。一次6g，一日2次。
【规格】每100丸重10g
【贮藏】密封。
Claims (9)
1、一种治疗***的中药组合物，其特征在于是由如下重量比的原料药制成：
枸杞子 15～75重量份 沙苑子 20～60重量份 覆盆子 10～40重量份
五味子 1～8重量份 车前子(盐炒) 4～15重量份
2、如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于该中药组合物可由如下重量比的原料药制成：
枸杞子 56重量份 沙苑子 25重量份 覆盆子 20重量份
五味子 5重量份 车前子(盐炒) 7重量份
3、如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于该中药组合物可由如下重量比的原料药制成：
枸杞子 15～75重量份 菟丝子 20～60重量份 覆盆子 10～40重量份
五味子 1～8重量份 车前子(盐炒) 4～15重量份
4、如权利要求3所述的中药组合物，其特征在于该中药组合物可由如下重量比的原料药制成：
枸杞子 40～65重量份 菟丝子(炒) 20～30重量份 覆盆子 15～30重量份
五味子(蒸) 4～7重量份 车前子(盐炒) 5～9重量份
5、如权利要求4所述的中药组合物，其特征在于该中药组合物可由如下重量比的原料药制成：
枸杞子 56重量份 菟丝子(炒) 25重量份 覆盆子 20重量份
五味子(蒸) 5重量份 车前子(盐炒) 7重量份
6、如权利要求1-5任意一项所述的中药组合物，其特征在于可按常规工艺加入辅料制成片剂、胶囊剂、丸剂、滴丸剂等临床可接受的剂型；所述辅料包括溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂、润滑剂、基质等。
7、如权利要求6所述的中药组合物，其特征在于该中药组合物丸剂的制备方法为：
以上五味，采用超微粉碎技术，粉碎成微粉，混匀；90-110重量份蜂蜜在116-118℃时，炼制密度为1.37，即得炼蜜；每100重量份粉末加炼蜜35-50重量份及100-160重量份的水，泛丸，60-80℃干燥8～12小时，即得。
8、如权利要求1-5任意一项或7所述的质量控制方法，其特征在于该质量控制方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种：
鉴别：
(1)取本发明药物制剂相当于原药材3～4g，研细，加***40～60ml，超声处理15～30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取枸杞子对照药材1～2g，研碎，加***20～30ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取上述二种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15～25:15～25:0.1～0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(2)取本发明药物制剂相当于原药材7～8g，研细，加石油醚(30～60℃)25～35ml，超声处理20～40分钟，滤过，弃去石油醚液，药渣挥尽石油醚，加甲醇30～40ml超声处理15～30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇5～6ml使之分散，取上清液作为供试品溶液。另取菟丝子对照药材2g，研细，同法制备成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取上述二种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(8～12：4～6：3～5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷1％三氯化铝乙醇溶液，凉干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(3)取本发明药物制剂相当于原药材3～4g，研细，加***40～60ml，超声处理15～30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加三氯甲烷30～50ml，超声处理15～25分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取五味子甲素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(10～20：3～7：1～2)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(4)取本发明药物制剂相当于原药材3～4g，研细，加40～60mL石油醚，索氏提取2～3h脱脂，残渣挥干石油醚，加40～60mL甲醇回流提取2～4h，滤过，滤液浓缩至1～2mL，作为供试品溶液；另取覆盆子对照药材，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G板上以醋酸乙酯-甲醇-水(4～7：1～2：1～2)，展开，取出，晾干，喷0.5％AlCl3，甲醇溶液，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(5)取本发明药物制剂相当于原药材1～2g，研细，加甲醇15～30ml，浸泡2～4h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1～2ml使溶解，作为供试品溶液。取车前子对照药材1～2g，甲醇10～30ml，加热回流提取0.5～1.5h，滤过，滤液挥干，残渣加1～2ml甲醇溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-氨水(10～20:1～2:0.5～1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，100℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；
含量测定：
照高效液相色谱法(中国药典2005年版附录VID)测定
色谱条件与***适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水-醋酸(65：40：0.1)为流动相；检测波长为254nm；
对照品溶液的制备 取五味子乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本发明药物制剂相当于原药材3～4g，研细，精密称取约4～6g，置索氏提取器中，加正己烷适量，浸泡过夜，于80～85℃回流提取5～8小时，提取液低温蒸干，残渣加甲醇微热使溶解，移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～15μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本发明药物制剂相当于原药材0.5～1g含五味子以五味子乙素(C23H28O6)计，不得少于0.05～0.08mg。
9、如权利要求8所述中药组合物的质量控制方法，其特征在于该质量控制方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种：
鉴别：
(1)取本发明药物制剂相当于原药材3.6g，研细，加***50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取枸杞子对照药材1g，研碎，加***20ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取上述二种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(20：20：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(2)取本品10g，研细，加石油醚(30～60℃)30ml，超声处理30分钟，滤过，弃去石油醚液，药渣挥尽石油醚，加甲醇30ml超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇5ml使之分散，取上清液作为供试品溶液。另取菟丝子对照药材2g，研细，同法制备成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取上述二种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10：5：4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷1％三氯化铝乙醇溶液，凉干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(3)取本发明药物制剂相当于原药材3.6g，研细，加***50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加三氯甲烷40ml，超声处理20分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取五味子甲素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15：5：1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(4)取本发明药物制剂相当于原药材3.6g，研细，加50mL石油醚，索氏提取2.5h脱脂，残渣挥干石油醚，加50mL甲醇回流提取3h，滤过，滤液浓缩至2mL，作为供试品溶液；另取覆盆子对照药材，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G板上以醋酸乙酯-甲醇-水(5∶1∶1)，展开，取出，晾干，喷0.5％AlCl3，甲醇溶液，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(5)取本发明药物制剂相当于原药材1.8g，研细，加甲醇20ml，浸泡3h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。取车前子对照药材1g，甲醇20ml，加热回流提取1h，滤过，滤液挥干，残渣加1ml甲醇溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-氨水(15∶1.5∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，100℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；
含量测定：
照高效液相色谱法(中国药典2005年版附录VID)测定
色谱条件与***适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水-醋酸(65：40：0.1)为流动相；检测波长为254nm；
对照品溶液的制备 取五味子乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本发明药物制剂相当于原药材4g，研细，精密称取约5g，置索氏提取器中，加正己烷适量，浸泡过夜，于80～85℃回流提取6小时，提取液低温蒸干，残渣加甲醇微热使溶解，移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～15μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本发明药物制剂相当于原药材0.719g含五味子以五味子乙素(C23H28O6)计，不得少于0.07mg。
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