CN1876000B - 治疗乳腺增生的岩鹿乳康药物制剂的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种治疗乳腺增生的岩鹿乳康药物制剂及制法和质量控制方法，它主要由岩陀445g、鹿衔草62.5g、鹿角霜7.5g或用相应重量份它们的提取物制作而成。与现有技术相比，本发明制剂具有软坚散结的功效，用于治疗肾阳不足、气滞血瘀所致的乳腺增生、疗效显著；产品中包括具有携带方便、口感良好等特点的薄膜衣片和颗粒剂，以及具有吸收均匀而有规则，吸收完全，生物利用度高，同时外形美观、流动性好、释药稳定、局部刺激性小等特点的包衣微丸制剂；提供的制备方法和质量控制方法能够比较好的指导企业工业化生产；能保证产品质量；克服了现有技术、产品存在的问题。
Description
技术领域：本发明是一种治疗乳腺增生的岩鹿乳康药物制剂及制法和质量控制方法，属于中药的技术领域。
技术背景：乳腺增生是妇女常见、多发病之一，多见于25～45岁女性，其本质上是一种生理增生与复旧不全造成的乳腺正常结构的紊乱。在我国，囊性改变少见，多以腺体增生为主，故多称“乳腺增生症”。世界卫生组织(WHO)统称“良性乳腺结构不良”。本病恶变的危险性较正常妇女增加2--4倍，临床症状和体征有时与乳癌相混。其主要临床特征为***肿块和***疼痛，一般常于月经前期加重，行经后减轻。由于乳腺增生病重的一小部分以后有发展成为乳腺癌的可能性，所以有人认为乳腺增生病为乳腺癌的“癌前病变”。乳腺增生病属于中医的“乳癖”范畴。有关本病的描述最早见于《中藏经》，以后历代医家多有论述，对其病因病机、临床表现及治疗均有详尽的阐述。“乳癖”是形容气机不畅，在***部出现胀满疼痛，症请时缓时剧，疼痛时轻时重等特点。《疡科心德集》中是这样描述的：“有乳中结核，形如丸卵，不疼痛，不发寒热，皮色不变，其核随喜怒而消长，此名乳癖……。”中医药治疗该症有独到之处，其中市售的岩鹿乳康胶囊由岩陀、鹿角霜、鹿衔草构成，能软坚散结，用于肾阳不足、气滞血瘀所致的乳腺增生疗效较好。但是鹿角霜为鹿角去胶质的角块，有吸湿性，嚼之有粘牙感，导致胶囊剂的内容物易粘结，产品稳定性较差，导致疗效也受到影响；鉴于这些情况，为了提高药物的稳定性，需要寻找一种治疗效果理想、质量可靠、剂型合理的有效治疗药物制剂来丰富剂型品种、满足市场需要；另外现有技术中对于此类药品的质量控制方法不严格且标准比较低，所以往往造成生产者对药物的质量难于定量控制，同时患者也无从了解药品的具体指标。
发明内容：本发明的目的在于：针对现有技术，提供治疗乳腺增生的岩鹿乳康药物制剂及制法和质量控制方法；这种产品具有软坚散结的功效，用于治疗肾阳不足、气滞血瘀所致的乳腺增生、疗效较好。产品包括具有剂量准确、质量稳定、便于运输贮存、成本低廉、能简化生产工艺、降低成本、携带服用方便等特点的片剂；以及具有受食物输送节律的影响很小，药物吸收均匀而有规则，表面积增大可以提高药物与胃肠道的接触面积，使药物吸收完全，提高生物利用度，同时外形美观、流动性好、释药稳定、局部刺激性小，不易吸湿、口感良好等特点的包衣微丸制剂；本发明还提供了对该药品的质量控制方法，能够解决现有技术所存在的问题。
本发明是这样构成的：
所述的治疗乳腺增生的岩鹿乳康药物制剂，主要由岩陀445g、鹿衔草62.5g、鹿角霜7.5g或用相应重量份它们的提取物制作而成的泡腾片、注射液、粉针、冻干粉针、凝胶剂、分散片、胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、颗粒剂、丸剂、微丸、散剂、滴丸剂、缓释制剂、控释制剂、凝胶剂、口服液体制剂、煎膏剂、浸膏剂或膜剂。优选为片剂、颗粒剂或微丸剂。
所述的治疗乳腺增生的岩鹿乳康药物制剂的制备方法，取岩陀，加8倍乙醇回流3次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至50℃时相对密度为1.20的清膏，备用；另取鹿衔草、鹿角霜分别粉碎成细粉，与上述岩陀清膏混匀，然后分别制成不同的制剂。
所述的治疗乳腺增生的岩鹿乳康片剂是这样制备的：取岩陀，加8倍乙醇回流3次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至50℃时相对密度为1.20的清膏，备用；另取鹿衔草、鹿角霜分别粉碎成细粉，与上述岩陀清膏混匀，加入适量淀粉、4％滑石粉和5％微晶纤维素，干燥，粉碎，过筛，压片，包衣，包衣材料为欧巴代2，用量为6％，即得。
所述的治疗乳腺增生的岩鹿乳康微丸是这样制备的：取岩陀，加8倍乙醇回流3次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至50℃时相对密度为1.20的清膏，备用；另取鹿衔草、鹿角霜分别粉碎成细粉，与上述岩陀清膏混匀，加入适量的淀粉，用70％乙醇和1.2％大豆油制软材，制好的软材用微丸机制丸，湿料挤压过0.8mm筛孔，条状湿粒切断滚圆，50～60℃干燥成型，过16～20目筛选丸或者合并上述四种清膏，喷雾干燥，湿粉制粒起模，将模子置于包衣锅内加大成丸，药粉∶水为1∶1.5，包衣锅转速为40r/min，盖面，选丸，包衣，4％80W型欧巴代为包衣材料，包衣液喷入速度为150～180g/min，进风温度为控制在85～88℃之间，锅体转速控制在4～6/min，即得。
所述的治疗乳腺增生的岩鹿乳康药物制剂的质量控制方法，包括以下全部或部分内容：
(1)岩陀、岩白菜素中全部或部分的鉴别测试方法；
(2)岩白菜素的含量测试方法。
其中，鉴别方法包括对岩陀、岩白菜素中一种或两种的鉴别：
取待测岩鹿乳康制剂内容物适量，加甲醇或乙醇提取，滤过，滤液作为供试品溶液；取岩陀对照药材，同法制成对照药材溶液；取岩白菜素对照品，加甲醇或乙醇溶解，制成对照品溶液，吸取供试品溶液与对照品溶液1～30μl，分别点于同一硅胶GF25薄层板或硅胶G薄层板或硅胶H薄层板上，以氯仿或二氯甲烷-醋酸乙酯或甲酸乙酯或醋酸丁酯-甲酸或乙酸(1～5∶1～4∶0～2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材或对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
具体地说：所述制剂的鉴别方法包括对岩陀、岩白菜素中一种或两种的鉴别：
取待测岩鹿乳康制剂内容物适量，从中称取0.4g，加甲醇3ml，振摇30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；岩陀药材，同法制成对照药材溶液；另取岩白菜素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液照；吸取供试品溶液3μl，对照品溶液10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲酸(5∶4∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(254nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
所述制剂的含量测定方法为岩白菜素的含量测定：
取待测岩鹿乳康制剂内容物适量，混匀，从中取适量精密称定，加甲醇或乙醇提取，放至室温，补足损失的甲醇或乙醇，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；精密称取岩白菜素对照品适量，置棕色量瓶中，加甲醇或乙醇制成对照品溶液；用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水(5～30∶60～95)为流动相，检测波长为190～410nm中的一个或几个；以标准曲线法或外标一点法进行计算，待测岩鹿乳康制剂含量限度应为：一日用岩鹿乳康制剂中含岩陀以岩白菜素(C14H16O9)计，不得少于27mg。
优选的含量测定方法为：
取待测岩鹿乳康制剂内容物适量，混匀，从中取约0.4g，精密称定，置50ml棕色量瓶中，加甲醇适量，超声处理(功率250W，频率33KHz)40分钟，取出，放至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，作为供试品溶液；精密称取岩白菜素对照品适量，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，作为对照品溶液；用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-水(18∶82)为流动相，检测波长为275nm；以外标一点法进行计算，待测岩鹿乳康制剂含量限度应为：一日用岩鹿乳康制剂中含岩陀以岩白菜素(C14H16O9)计，不得少于54mg。
与现有技术相比，本发明针对现有技术，提供岩鹿乳康新制剂，产品具有软坚散结的功效，用于治疗肾阳不足、气滞血瘀所致的乳腺增生、疗效显著；产品中包括具有携带方便、口感良好等特点的薄膜衣片和颗粒剂，以及具有受食物输送节律的影响很小，药物吸收均匀而有规则，表面积增大可以提高药物与胃肠道的接触面积，使药物吸收完全，提高生物利用度，同时外形美观、流动性好、释药稳定、局部刺激性小，不易吸湿、口感良好等特点的包衣微丸制剂；提供的制备方法和质量控制方法能够比较好的指导企业工业化生产；能保证产品质量；克服了现有技术、产品存在的问题；达到了发明的目的。
本申请人在研究中发现，由于本方使用的鹿角霜吸湿性很强，常规方法制成片剂、微丸在放置过程中会出现吸潮现象，影响了产品的稳定性和质量。于是对产品进行了包衣工艺研究，起到了改善口感和抗湿的目的。在研究过程中发现，包衣材料、工艺选择不当会延缓本发明产品的崩解和溶散，所以申请人进行了一系列实验，选择出最适合本发明药物制剂的制备工艺、使用的辅料种类及用量、比例等；保证其科学、合理、可行；得到的制剂具有良好的崩解性能和治疗效果。而现有岩鹿乳康制剂的质量控制方法较为粗略，难以达到现代药物质量稳定可控的要求。因此，需要研究岩鹿乳康制剂质量控制的新方法。
实验例1：药材前处理
鹿衔草、鹿角霜粉碎工艺研究：鹿衔草和鹿角霜分别粉碎成细粉，过80目，备用。粉碎工艺见下表。
鹿衔草粉碎工艺考察结果
| 药材 | 投料量(kg) | 收得量(kg) | 出粉率(％) |
| 2 | 1.81 | 90.5 | |
| 鹿衔草 | 2 | 1.80 | 90.0 |
| 2 | 1.78 | 89.0 |
从上面的数据可以看出，三次粉碎的出粉率比较接近，说明该条件是稳定的，故鹿衔草粉碎收得率不得低于89.0％。
鹿角霜粉碎工艺考察结果
| 药材 | 投料量(g) | 收得量(g) | 出粉率(％) |
| 100 | 92.4 | 92.4 | |
| 鹿角霜 | 100 | 91.0 | 91.0 |
| 100 | 92.2 | 92.2 |
经过上述试验的研究可以看出，鹿角霜粉碎后过80目筛的出粉率平均在91.8％，因此确定鹿角霜出粉率不低于91％。
实验例2：提取工艺研究
(1)因素选择：中药提取效果受到溶剂种类、溶剂用量、提取时间、提取次数等因素的影响。现有技术虽对提取时间、提取次数进行了考察，但是在岩陀药材提取考察时，选取提取溶剂种类和溶剂用量未做研究。结合生产成本、能源等方面进行综合考虑，选择因素水平。
(2)指标确定：选择浸膏收得率及岩白菜素含量作为评价指标，其原由及测定方法如下：
①浸膏收得率：浸膏是固体制剂发挥疗效的物质基础，其收率高低直接影响制剂工艺，故选择为提取指标是合理、有效的控制手段。
②含量测定：浸膏收得率高低并不能完全反映有效成份提取情况，故同时测定浸膏所含的岩白菜素含量作为岩陀提取筛选指标。
(3)试验：
①乙醇用量考察：称取岩陀500g，共3份，分别加入不同量的乙醇，回流提取3次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩，减压干燥，称定干膏重量，同时测定干膏中岩白菜素含量，试验结果见下表。
溶剂用量考察结果表
| 试验号 | 溶剂用量(倍) | 浸膏收得率(％) | 岩白菜素含量(％) |
| 1 | 6 | 31.68 | 4.70 |
| 2 | 8 | 34.17 | 4.66 |
| 3 | 10 | 34.65 | 4.54 |
由上表可知，采用8倍量与采用10倍量所得浸膏量及含量差别不大，说明加8倍量乙醇已经可以将药材充分提取，因此确定加水量的最佳工艺为8倍量。
(4)验证试验：通过前面一系列的筛选，优选出岩陀提取的工艺条件，我们对优选后的条件组合后进行验证试验，结果如下表。
岩陀提取条件验证试验
| 药材量(g) | 膏重(g) | 浸膏收得率(％) | 岩白菜素含量(％) |
| 500.01 | 178.64 | 35.73 | 4.61 |
| 500.04 | 180.02 | 36.00 | 4.58 |
| 500.03 | 178.55 | 35.71 | 4.63 |
从上表可见，岩陀提取条件比较稳定(平均出膏率为35.81％)，所得样品的含量也比较稳定，说明经过筛选的试验条件是可行的。
实验例3：成型工艺研究
3.1片剂
(1)吸湿性考察
原工艺中黄柏粉碎成细粉，我们对提取药膏、药膏加入鹿衔草和鹿角霜药粉后的混合物料进行吸湿性考察试验，结果见下表。
吸湿性试验结果
通过吸湿性试验考察，认为混合药膏具有一定的吸湿性。
(2)流动性考察：为保证分剂量准确，要求填充物料具良好的流动性，故以测定休止角方法考查混合物料的流动性。
固定漏斗法：取3只漏斗串联，最底端距水平放置坐标纸1.5cm处，小心地将填充物料沿漏斗壁倒入最上的漏斗中直到最下面漏斗形成的颗粒圆锥体尖端接触到漏斗下口为止，由坐标纸测出圆锥底部的直径，计算出休止角(tgα＝H/R/2)，计算结果见下表。
填充物料的休止角α
| 测定样品 | 休止角 |
| 1 | 55.3° |
| 测定样品 | 休止角 |
| 2 | 54.4° |
| 3 | 55.8° |
由上表可知，混合物料休止角＞40°，即表明混合物料流动性不好，不能满足分装要求
(3)稀释剂选择：原剂型中选用淀粉作为稀释剂，考虑到提取的物料性质基本相同，因此我们也选用淀粉作为稀释剂，同时淀粉具有吸水而不潮解的性质，可以防止物料吸潮。
(4)助流剂考察：从上面的休止角测定结果可以看出，混合物料的流动性较差，为了保证胶囊填装时分剂量准确，需要增加填充物料的流动性，为此我们对助流剂筛选。目前常用的助流剂有淀粉、滑石粉和微粉硅胶等，由于混合物料中已经使用淀粉作为稀释剂，故我们不再考虑再添加其用量；滑石粉可以增加润滑性和流动性，而且具有亲水性，不会影响片剂的崩解，因此我们采用滑石粉为助流剂，并对其用量进行考察，试验结果见下表。
滑石粉用量考察表
| 序号 | 滑石粉用量(％) | 休止角(°) |
| 1 | 1 | 46.5 |
| 2 | 4 | 33.1 |
| 3 | 7 | 32.3 |
从上面的结果可以看出，用量在1％时，对混合物料的休止角有所改进，但是还不能满足要求，用量为4％和7％时可以达到要求，但是滑石粉用量为7％时，休止角下降的幅度不是很明显，因此我们决定滑石粉用量为4％。
(5)崩解剂选择：经过上述试验的筛选，采用淀粉和滑石粉解决物料吸潮和流动性差的问题，使物料可以具有一定的防潮性和良好的流动性，但是经过预试验我们发现，压片后片剂的崩解时间过长，因此我们对崩解剂进行考察，目前常用的崩解剂有淀粉、微晶纤维素等，由于本制剂已经采用淀粉作为稀释剂，同时微晶纤维素和淀粉混合应用能加快崩解，因此确定崩解剂用微晶纤维素，并对其用量进行考察，试验结果见下表。
崩解剂考察表
| 批次 | 总物料重量(g) | 崩解剂用量(g) | 崩解时间(分) |
| 1 | 100 | 2 | 48 |
| 2 | 100 | 5 | 32 |
| 批次 | 总物料重量(g) | 崩解剂用量(g) | 崩解时间(分) |
| 3 | 100 | 8 | 31 |
从上述试验可以看出，加入5％或8％的崩解剂可以有效改善片剂的崩解时间，但是8％的崩解剂相对5％的崩解剂来说，崩解时间下降幅度不明显，为了尽可能少服用辅料，我们选用5％的崩解剂。
(6)包衣条件考察：由于中药提取物具有一定的不良气味，为了掩盖不良的气味，使患者易于吞服，同时使样品的外观得到改善，我们决定对素片进行包薄膜衣，经过调研，我们选用欧巴代2进行包衣。
①包衣液选择：为了保证片剂包衣后的质量，特对包衣用辅料欧巴代2的用量进行了考察。按照上海卡乐康包衣技术有限公司提供的欧巴代2的配制方法，称取所需要量的欧巴代2固体粉末，在配制容器中加入所需量的水，将搅拌浆放置在容器的中央，并尽量靠近容器的底部。搅拌溶液使其形成一个漩涡，同时避免卷入过多空气。将欧巴代粉末均匀地加入，同时尽量避免粉末漂浮在液体表面。必要时，可以提高转速以保持适当的漩涡，待所有欧巴代全部加入后，降低搅拌速度，使漩涡消失，继续搅拌45分钟即可。
②包薄膜衣：素片要求片芯光滑，无卷边，无细粉，无碎片，硬度在3.5kg～4.5kg，将符合要求的素片放置于包衣锅内，开启包衣锅，点动预热，选择进风温度为60℃左右，使片芯温度预热到45℃左右。开启包衣锅，以3转/分钟的速度转动，启动空气压缩机，用喷枪喷洒包衣液，1小时后，提高转速至8～10转/分钟，直到包衣液完全喷完，降低转速，干燥，冷却即可。
包衣材料用量考察
| 试验号 | 欧巴代2用量(％) | 片剂薄膜衣性状 |
| 1 | 3 | 薄膜衣太薄，有麻点 |
| 2 | 6 | 薄膜衣均匀 |
| 3 | 9 | 薄膜衣局部脱落，表面不平滑 |
由上表可见：包衣材料用量为6％时，所得薄膜衣均匀、光滑。因此薄膜衣包材用量确定为6％。
3.2微丸剂
(1)包衣材料的用量
试验号 包衣粉用量 包衣片外观
1 3％ 包衣片的衣层欠均匀
2 4％ 包衣片的衣层颜色均匀完整
3 5％ 包衣片的衣层均欠均匀
(2)包衣工艺的筛选
参数 工艺I 工艺II 工艺III 工艺Ⅳ
流速(g/min) 110-140 150-180 230-250 270-300
进风温度(℃) 95-98 85-88 88-85 85-80
锅体转速(r/min) 2-4 4-6 7-9 10-12
不同工艺微丸质量变化
工艺 平均溶出度(％) 平均水分 总重(kg) 包材利用率(％)
工艺I 包衣前 95.7 3.40 100
包衣后 81.4 2.76 102.4 55.80
工艺II 包衣前 94.3 3.33 100
包衣后 90.8 2.26 103.2 59.56
工艺III 包衣前 94.0 3.15 100
包衣后 82.6 2.48 102.3 70.11
工艺IV 包衣前 93.9 3.03 100
包衣后 67.3 2.79 105.7 75.15
实验结果可知，最佳包衣工艺：4％80W型欧巴代为包衣材料，包衣液喷入速度为150～180g/min，进风温度为控制在85～88℃之间，锅体转速控制在4～6/min，对药物溶出的影响最小。
(3)加速试验和常温留样检验结果
本发明微剂 胶囊剂
崩解时限(min) 外观鉴别 崩解时限(min) 外观鉴别
加速试验1个月 26 良好 24 良好
加速试验2个月 29 良好 25 良好
加速试验3个月 30 良好 29 内容物少量吸潮、粘结
常温贮存2年 30 良好 28 吸潮、粘结
实验例4：药效学实验
取雌性成年未孕大鼠，体重250±20g，经连续***脱落细胞涂片3周期检查，选择动情周期规律者进行实验。
取实验动物己烯雌酚注射液后肢外侧肌肉注射，每次0.2mg，每天1次，共30天，总剂量为每只6mg。检查***外观及乳腺病理改变。见造模大鼠***直径、长度显著增加。取腹部近尾端3对乳腺进行病理切片检查，见乳腺导管腔扩大，管腔中充满分泌物。乳腺腺泡数目明显增多。上皮细胞增生，呈复层或假复层状排列。证明造模成功。
取大鼠70只，随机分为7组，每组10只，处理如下：正常组，蒸馏水灌胃，每只2ml/d；模型组，造模同时每天蒸馏水灌胃1次，每次2ml；岩鹿乳康胶囊组、本发明产品组，乳腺增生造模同时分别加用相关药物灌胃，剂量为成人常规剂量的10倍，每天1次，每次2ml。各组大鼠连续灌药30天，停药l周后，于动情期间每组随机抽取7只大鼠乳腺，-70℃液氮冻存，待测***受体(ER)、孕酮受体(PR)；每组剩余3个乳腺标本，10％中性***固定，常规石蜡切片，HE染色，行病理检查(采用光学显微镜)。采用放射配基结合分析法测定雌孕激素受体，用Lowry法测定样本蛋白浓度，受体含量以fmol/mg表示。
(1)对乳腺增生模型大鼠乳腺重量指数的影响
给成年大鼠较长期大剂量肌肉注射己烯雌酚造成大鼠乳腺组织增生的模型，对每组随机抽取的7对乳腺进行重量指数(mg/100g体重)比较，结果见下表。
对大鼠乳腺重量指数的影响
组别 动物只数 乳腺重量指数(mg/100g体重)
正常组 7 18.51±2.06
模型组 7 23.84±3.42
岩鹿乳康胶囊组 7 18.83±1.81
本发明微丸组 7 18.56±4.84
本发明片组 7 18.71±2.53
本发明颗粒剂组 7 18.79±5.13
本发明分散片组 7 18.50±5.17
(2)对乳腺增生模型大鼠乳腺组织结构的影响
与正常大鼠乳腺组织比较，模型组全部3只大鼠乳腺标本都有腺泡数量明显增加，上皮增生呈假复层现象，严重者甚至堵塞导管；导管扩张，内含大量分泌物；周围反应性间质明显减少，染色变深，胶原增生，失去疏松状态。而加药各组腺泡有增生，但程度明显轻于模型组，各加药组间无明显差别。
(3)对乳腺增生模型大鼠乳腺雌、孕激素受体的影响
具体结果见下表。表中EcR Bmax表示大鼠乳腺胞浆***受体数量，EnR Bmax表示胞核***受体数量，EnR/EcR表示胞核/胞浆***受体比值；PcR Bmax表示大鼠乳腺胞浆孕二醇受体数量，PnR Bmax表示胞核孕二醇受体数量，PnR/PcR表示胞核/胞浆孕二醇受体比值；Kd表示受体亲和力，Kd值越小，亲和力越高。
对乳腺增生模型大鼠乳腺***受体的影响
对乳腺增生模型大鼠乳腺孕激素受体的影响
以上实验结果显示，造模动物在使用岩鹿乳康胶囊、本发明产品后乳腺重量指数明显下降，乳腺组织结构明显改善；同时，能使雌、孕激素核/浆受体比值均接近正常，从而增强机体平衡自稳调节***功能，减弱了大量***造成的不良刺激，维护了机体的平衡稳定；且本发明产品的作用优于岩鹿乳康胶囊。
实验例5片剂中岩白菜素的薄层鉴别
本实验的目的是为了突出岩陀的特征，为排除制剂中与岩陀所含成分类似的其它成分的干扰，试验者对样品提取、展开***、显色方法等分别进行了比较试验。经过筛选，确定了最佳方法与条件：以甲醇为样品提取溶剂；以硅胶GF254薄层板为固定相，氯仿-醋酸乙酯-甲酸(5∶4∶2)为展开剂；置紫外灯(254nm)下检视；在此条件下，样品与对照品均分离清晰，阴性无干扰。实验中几种展开***的展开效果比较见下表：
片剂中岩陀、岩白菜素的薄层鉴别
| 展开剂 | 薄层板 | 效果 |
| 环己烷-乙醇-甲酸(7∶5∶1) | 硅胶G | 差：样品分离不清晰，阴性有干扰 |
| 氯仿-醋酸乙酯-甲醇(7∶4∶2) | 硅胶GF<sub>254</sub> | 差：阴性有干扰 |
| 氯仿-醋酸丁酯-乙酸(10∶7∶4) | 硅胶H | 一般：样品与对照品均分离清晰，斑点不圆整，阴性无干扰 |
| 氯仿-醋酸乙酯-甲酸(5∶4∶2) | 硅胶GF<sub>254</sub> | 最佳：样品与对照品均分离清晰，阴性无干扰 |
实验例6片剂中岩白菜素的含量测定
试验以岩白菜素为对照品，用Alltech P426高效液相色谱仪，确立了岩鹿乳康片中岩白菜素的含量测定的最佳方法：
色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(18∶82)为流动相；检测波长为275nm。理论板数按岩白菜素峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备精密称取岩白菜素对照品适量，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品10片，除去包衣，研细混匀，从中取约0.4g，精密称定，置50ml棕色量瓶中，加甲醇适量，超声处理(功率250W，频率33KHz)40分钟，取出，放至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每片含岩陀以岩白菜素(C14H16O9)计，不得少于6.0mg。
该方法分别通过了以下1～10项方法学考察试验：
1检测波长的选择岩白菜素对照品溶液，在200～400nm波长范围内扫描。结果表明，岩白菜素在275nm处有较大吸收，因此选择275nm作为测定岩鹿乳康片剂中岩白菜素含量的检测波长。
2***适应性试验根据以上仪器条件，得到岩白菜素对照品、样品色谱图，其理论塔板数以岩白菜素计不低于2000。
3阴性干扰排除试验为考察其它药材和辅料是否干扰岩白菜素的测定，除岩白菜素外，按处方比例称取其它药材和辅料同法制成阴性对照品溶液并测定。结果表明，阴性样品对岩白菜素的含量测定无干扰。
4线性关系的考察精密量取岩白菜素对照品不同浓度的溶液，注入液相色谱仪，提取液照中国药典公开的高效液相色谱法测定。以岩白菜素的进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标做图，绘制标准曲线。见下表。
岩白菜素线性关系
| 编号 | 岩白菜素量(μg) | 峰面积 |
| 1 | 0.3074 | 281432 |
| 2 | 0.6148 | 550427 |
| 3 | 0.9222 | 828135 |
| 4 | 1.2296 | 1108174 |
| 5 | 1.5370 | 1390266 |
回归方程：Y＝902868X-937.7
相关系数：γ＝0.9999
结果表明，岩白菜素在0.3074μg～1.5370μg范围之内线性关系良好。
5样品提取时间的选择
取本品10片，除去包衣，研细混匀，从中取约0.4g(共4份)，精密称定，分置50ml棕色量瓶中，加甲醇适量，分别超声处理(功率250W，频率33KHz)20、30、40、50分钟，取出，放至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。见下表。
样品提取时间的选择
| 提取时间(min) | 岩白菜素(mg/片) |
| 20 | 7.64 |
| 30 | 7.82 |
| 40 | 7.94 |
| 50 | 7.96 |
结果表明，超声处理40min即可提取完全，因此提取时间定为40分钟。
6精密度试验精密吸取岩白菜素对照品溶液5μl，注入液相色谱仪，重复测定5次，考察对照品溶液精密度，测定结果见下表。
精密度试验
| 试验次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 平均值 | RSD(％) |
| 峰面积 | 682554 | 689713 | 687258 | 688315 | 692354 | 688039 | 0.53 |
结果表明，对照品溶液精密度良好。
7稳定性试验
7.1对照品稳定性试验分别在0、2、6、10、24小时精密吸取同一份岩白菜素对照品溶液5μl，注入液相色谱仪，测定结果见下表。
对照品溶液稳定性试验结果
| 时间(h) | 0 | 2 | 6 | 10 | 24 | 平均值 | RSD(％) |
| 峰面积 | 201307 | 203271 | 203941 | 200859 | 204306 | 202737 | 0.77 |
结果表明，对照品溶液在24小时内稳定性良好。
7.2供试品溶液稳定性试验分别在0、2、6、10、24小时精密吸取同一份供试品溶液5μl，注入液相色谱仪，测定结果见下表。
供试品溶液稳定性试验结果
| 时间(h) | 0 | 2 | 6 | 10 | 24 | 平均值 | RSD(％) |
| 含量(mg/片) | 7.84 | 7.73 | 8.02 | 7.89 | 7.92 | 7.88 | 1.35 |
结果表明，供试品溶液在24小时内稳定性良好。
8重复性试验取本品10片，除去包衣，研细混匀，从中取约0.4g(共5份)，精密称定，按正文供试品溶液制备和测定项下进行操作。结果见下表。
重复性试验
| 时间(h) | 0 | 2 | 6 | 10 | 24 | 平均值 | RSD(％) |
| 含量(mg/片) | 7.87 | 8.12 | 7.85 | 8.06 | 7.91 | 7.96 | 1.52 |
结果表明，重复性良好。
9加样回收率试验
取重量差异项下本品，研细，从中取约0.2g(共6份)，精密称定，分置50ml棕色量瓶中；取岩白菜素对照品约3.2mg、4.0mg、4.8mg(各2份)，精密称定，分置上述50ml棕色量瓶中，加甲醇适量，超声处理(功率250W，频率33KHz)40分钟，取出，放至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，精密吸取续滤液5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。测定结果见下表。岩鹿乳康片中岩白菜素量：19.762mg/g
岩白菜素加样回收率试验
| 编号 | 供试品称量(g) | 供试品中纯品量(mg) | 岩白菜素加入量(mg) | 测得量(mg) | 回收率(％) |
| 1 | 0.20213 | 3.995 | 3.38 | 7.288 | 97.43 |
| 2 | 0.20175 | 3.987 | 3.26 | 7.134 | 96.53 |
| 3 | 0.20094 | 3.971 | 3.94 | 7.853 | 98.53 |
| 4 | 0.20468 | 4.045 | 4.17 | 8.126 | 97.87 |
| 5 | 0.20365 | 4.025 | 4.92 | 8.857 | 98.21 |
| 6 | 0.20093 | 3.971 | 5.03 | 8.963 | 99.24 |
岩白菜素平均回收率＝97.97％，RSD＝0.95％；
10样品含量测定按正文供试品溶液的制备和测定法项下操作，测定十批样品，结果见下表。
十批样品含量测定结果
结论：根据10批样品含量测定结果暂定，本品每片含岩陀以岩白菜素(C14H16O9)计，不得少于6.0mg。本品一日用剂量片剂中含岩陀以岩白菜素(C14H16O9)计，不得少于54mg。
具体的实施方式：
本发明的实施例1：岩陀445g、鹿衔草62.5g、鹿角霜7.5g
取岩陀，加8倍80％乙醇回流3次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至50℃时相对密度为1.20的清膏，备用；另取鹿衔草、鹿角霜分别粉碎成细粉，与上述岩陀清膏混匀，加入适量淀粉、4％滑石粉和5％微晶纤维素，干燥，粉碎，过筛，压片，包衣，包衣材料为欧巴代2，用量为6％，即得片剂，本产品口服，一次3～5片，一日3次；饭后服用。
本发明的实施例2：岩陀445g、鹿衔草62.5g、鹿角霜7.5g
取岩陀，加8倍80％乙醇回流3次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至50℃时相对密度为1.20的清膏，备用；另取鹿衔草、鹿角霜分别粉碎成细粉，与上述岩陀清膏混匀，加入适量的淀粉，用70％乙醇和1.2％大豆油制软材，制好的软材用微丸机制丸，湿料挤压过0.8mm筛孔，条状湿粒切断滚圆，50～60℃干燥成型，过16～20目筛选丸或者合并上述四种清膏，喷雾干燥，湿粉制粒起模，将模子置于包衣锅内加大成丸，药粉∶水为1∶1.5，包衣锅转速为40r/min，盖面，选丸，包衣，4％80W型欧巴代为包衣材料，包衣液喷入速度为150～180g/min，进风温度为控制在85～88℃之间，锅体转速控制在4～6/min，即得微丸剂。
本发明的实施例3：岩陀445g、鹿衔草62.5g、鹿角霜7.5g
取岩陀，加8倍80％乙醇回流3次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至50℃时相对密度为1.20的清膏，备用；另取鹿衔草、鹿角霜分别粉碎成细粉，与上述岩陀清膏混匀，加入10％碳酸氢钠、12％枸橼酸、1％阿司帕坦分别粉碎，与药粉混合均匀，制粒，干燥，压片，包衣，包衣材料：内层使用PVP加钛白粉、外层使用丙烯酸树脂II，片床温度40℃时，喷射速度6.0ml/kg·min，即得泡腾片剂。
本发明的实施例4：岩陀445g、鹿衔草62.5g、鹿角霜7.5g
取岩陀，加8倍80％乙醇回流3次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至50℃时相对密度为1.20的清膏，备用；另取鹿衔草、鹿角霜分别粉碎成细粉，与上述岩陀清膏混匀，加入蒸馏水，即得口服液。
本发明的实施例5：岩陀445g、鹿衔草62.5g、鹿角霜7.5g
取岩陀，加8倍80％乙醇回流3次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至50℃时相对密度为1.20的清膏，备用；另取鹿衔草、鹿角霜分别粉碎成细粉，与上述岩陀清膏混匀，加入卡波姆，制成凝胶剂。
本发明的实施例6：岩陀445g、鹿衔草62.5g、鹿角霜7.5g
取岩陀，加8倍80％乙醇回流3次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至50℃时相对密度为1.20的清膏，备用；另取鹿衔草、鹿角霜分别粉碎成细粉，与上述岩陀清膏混匀，加入羧甲基纤维素钠，压片，制成分散片。
本发明的实施例7：胶囊中岩陀、岩白菜素的鉴别：
取待测岩鹿乳康胶囊内容物适量，从中称取0.5g，加乙醇20ml，超声10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；岩陀药材，同法制成对照药材溶液；另取岩白菜素对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照品溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-醋酸丁酯-甲酸(8∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例8微丸中岩陀的鉴别：
取待测岩鹿乳康微丸适量，从中称取0.6g，加甲醇20ml，温浸10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；岩陀药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿-醋酸丁酯-乙酸(3∶7∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(254nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例9片剂中岩白菜素的鉴别：
取本品，研细，从中称取0.4g，加甲醇3ml，振摇30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取岩白菜素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液3μl，对照品溶液10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例10胶囊剂中岩白菜素的含量测定：
取待测岩鹿乳康胶囊内容物适量，混匀，从中取适量精密称定，加乙醇回流取，放至室温，补足损失的乙醇，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；精密称取岩白菜素对照品适量，置棕色量瓶中，加乙醇制成对照品溶液；用八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水(10∶90)为流动相，检测波长为365nm，以外标一点法进行计算，待测岩鹿乳康制剂含量限度应为：一日用岩鹿乳康胶囊中含岩陀以岩白菜素(C14H16O9)计，不得少于27mg。
实施例11微丸中岩白菜素的含量测定：
取待测岩鹿乳康微丸内容物适量，混匀，从中取适量精密称定，加甲醇超声提取，放至室温，补足损失的甲醇，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；精密称取岩白菜素对照品适量，置棕色量瓶中，加甲醇制成对照品溶液；用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水(15∶85)为流动相，检测波长为276nm，以外标一点法进行计算，待测岩鹿乳康微丸含量限度应为：一日用岩鹿乳康微丸中含岩陀以岩白菜素(C14H16O9)计，不得少于54mg。
实施例12片剂中岩白菜素的含量测定：
取重量差异项下本品，研细，从中取约0.4g，精密称定，置50ml棕色量瓶中，加甲醇适量，超声处理(功率250W，频率33KHz)40分钟，取出，放至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，作为供试品溶液；另取岩白菜素对照品适量，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，作为对照品溶液，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(18∶82)为流动相；检测波长为275nm。理论板数按岩白菜素峰计算应不低于2000。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。以外标一点法进行计算，一日用岩鹿乳康微丸中含岩陀以岩白菜素(C14H16O9)计，不得少于54mg。
Claims (1)
1.一种治疗乳腺增生的岩鹿乳康药物制剂的制备方法，其特征在于：它由岩陀445g、鹿衔草62.5g、鹿角霜7.5g制成，取岩陀，加8倍乙醇回流3次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至50℃时相对密度为1.20的清膏，备用；另取鹿衔草、鹿角霜分别粉碎成细粉，与上述岩陀清膏混匀，加入适量淀粉、4％滑石粉和5％微晶纤维素，干燥，粉碎，过筛，压片，包衣，包衣材料为欧巴代2，用量为6％，即得片剂。
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