CN101407538B - 一种zp120的固相合成方法 - Google Patents
一种zp120的固相合成方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101407538B CN101407538B CN2007101645850A CN200710164585A CN101407538B CN 101407538 B CN101407538 B CN 101407538B CN 2007101645850 A CN2007101645850 A CN 2007101645850A CN 200710164585 A CN200710164585 A CN 200710164585A CN 101407538 B CN101407538 B CN 101407538B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lys
- boc
- fmoc
- resin
- tyr
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 title claims description 6
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims abstract description 94
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims abstract description 94
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 39
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 16
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims abstract description 10
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 132
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 84
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 39
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 32
- UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-6-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N 0.000 claims description 21
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 150000003053 piperidines Chemical class 0.000 claims description 19
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000012043 crude product Substances 0.000 claims description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 7
- JAUKCFULLJFBFN-VWLOTQADSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]phenyl]propanoic acid Chemical compound C1=CC(OC(C)(C)C)=CC=C1C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 JAUKCFULLJFBFN-VWLOTQADSA-N 0.000 claims description 6
- DVBUCBXGDWWXNY-SFHVURJKSA-N (2s)-5-(diaminomethylideneamino)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)pentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 DVBUCBXGDWWXNY-SFHVURJKSA-N 0.000 claims description 6
- HNICLNKVURBTKV-NDEPHWFRSA-N (2s)-5-[[amino-[(2,2,4,6,7-pentamethyl-3h-1-benzofuran-5-yl)sulfonylamino]methylidene]amino]-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)pentanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1COC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)NS(=O)(=O)C1=C(C)C(C)=C2OC(C)(C)CC2=C1C HNICLNKVURBTKV-NDEPHWFRSA-N 0.000 claims description 6
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 6
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 5
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 4
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 4
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 4
- ADOHASQZJSJZBT-SANMLTNESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]indol-3-yl]propanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2N(C(=O)OC(C)(C)C)C=C1C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 ADOHASQZJSJZBT-SANMLTNESA-N 0.000 claims description 3
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 3
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 1,2-ethanedithiol Chemical compound SCCS VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 claims description 2
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 claims description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 2
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 abstract description 25
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 24
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 abstract description 8
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 abstract description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 5
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 abstract description 4
- JDDWRLPTKIOUOF-UHFFFAOYSA-N 9h-fluoren-9-ylmethyl n-[[4-[2-[bis(4-methylphenyl)methylamino]-2-oxoethoxy]phenyl]-(2,4-dimethoxyphenyl)methyl]carbamate Chemical compound COC1=CC(OC)=CC=C1C(C=1C=CC(OCC(=O)NC(C=2C=CC(C)=CC=2)C=2C=CC(C)=CC=2)=CC=1)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 JDDWRLPTKIOUOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 230000006340 racemization Effects 0.000 abstract description 3
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 abstract description 3
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 abstract description 2
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 abstract 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 37
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 18
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 14
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- SWZCTMTWRHEBIN-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C1=CC=C(O)C=C1 SWZCTMTWRHEBIN-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical class CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- PULGYDLMFSFVBL-SMFNREODSA-N nociceptin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 PULGYDLMFSFVBL-SMFNREODSA-N 0.000 description 3
- 125000000467 secondary amino group Chemical group [H]N([*:1])[*:2] 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102400001111 Nociceptin Human genes 0.000 description 2
- 108090000622 Nociceptin Proteins 0.000 description 2
- 229920000361 Poly(styrene)-block-poly(ethylene glycol) Polymers 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- GJLXVWOMRRWCIB-MERZOTPQSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-acetamido-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanamide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)C1=CC=C(O)C=C1 GJLXVWOMRRWCIB-MERZOTPQSA-N 0.000 description 1
- YROQVQIJRORFAZ-SKGSPYGFSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-acetamido-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-3-(1h-indol-3-yl)propanoyl]amino] Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)C1=CC=C(O)C=C1 YROQVQIJRORFAZ-SKGSPYGFSA-N 0.000 description 1
- 108010022602 CAM 6369 Proteins 0.000 description 1
- 101001122499 Homo sapiens Nociceptin receptor Proteins 0.000 description 1
- 108090000862 Ion Channels Proteins 0.000 description 1
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 1
- 102100028646 Nociceptin receptor Human genes 0.000 description 1
- RSWGJHLUYNHPMX-ONCXSQPRSA-N abietic acid Chemical compound C([C@@H]12)CC(C(C)C)=CC1=CC[C@@H]1[C@]2(C)CCC[C@@]1(C)C(O)=O RSWGJHLUYNHPMX-ONCXSQPRSA-N 0.000 description 1
- -1 acetyl-arginyl-tyrosyl-tyrosyl-arginyl-tryptophyl-lysyl-lysyl-lysyl-lysyl-lysyl-lysyl-lysyl amine Chemical class 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000005321 cobalt glass Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethanethiol Chemical compound CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000008058 pain sensation Effects 0.000 description 1
- 102000014187 peptide receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010011903 peptide receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical group 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 238000010025 steaming Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000006257 total synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明提供了一种ZP120：Ac-Arg-Tyr-Tyr-Arg-Trp-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-NH2的固相合成方法，所述方法是以Fmoc-Rink Amide-MBHA树脂为原料，进行程序反应，依次连接氨基保护基，再经脱保护基、酸化、脱切侧链保护基和树脂，得到ZP120的盐，进一步可得到ZP120。本发明有益效果主要体现在(1)采用Fmoc Rink Amide-MBHA树脂作为固相合成载体，成本低；(2)以N，N-二异丙基碳二亚胺作为肽合成缩合剂，产品过程消旋化低，产品质量好、收率高；(3)采用三氟乙酸切割ZP120肽树脂，切割完毕后直接得到肽酰胺的形式，后续处理简单；(4)工艺简单，程序化，利于工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种多肽类药物——ZP120的制备方法。属生物技术领域。
背景技术
ZP120化学名：乙酰-精氨酰-酪氨酰-酪氨酰-精氨酰-色氨酰-赖氨酰-赖氨酰-赖氨酰-赖氨酰-赖氨酰-赖氨酰-赖氨酰胺(Ac-Arg-Tyr-Tyr-Arg-Trp-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-NH2)
化学结构式为：
分子式：C85H141N27O15
分子量：1781.24
孤啡肽(nocieeptin或orphanin FQ)发现于1995年底，它是阿片受体样受体(ORL1或LC 132)的内源性配体，在痛觉调节、心血管***、离子通道、依赖和耐受、学习和记忆等方面具有广泛的生物学活性。ZP120是一种利用SIP(Structure inducing probes)技术设计的NOP(Nociceptin/orphanin FQ peptidereceptor)受体的新型配体多肽。改构前的Ac-RYYRWK-NH2是从合成组合化学肽库中被NOP选择性筛选出来的六肽，ZP120增加了它的代谢稳定性。
美国专利US 7,244,701中有合成本品的报道：包括化学合成法和生物重组合成法，生物合成法是近年发展起来的新合成方法，但生物表达技术目前尚不成熟。同时，产品的纯化和产率方面离产业化生产尚有较大距离。报道的化学合成法包括：1，液相合成法(solution phase peptide synthese)，2，基于Merrifield-类型树脂的固相合成，包括Boc/Bzl和Fmoc/tBu策略。3，基于TentaGelResin(PEG-PS)类型树脂的固相合成，Fmoc/tBu策略。
液相合成法存在(1)反应步骤多，路线冗长。(2)中间体不易纯化分离，实际操作中溶剂蒸除难度较大。(3)目前试剂和所用氨基酸侧链保护基的来源和制备难度较大。
Merrifield类型树脂为载体，合成保护ZP 120树脂后，将肽从树脂上切下来所要求的条件比较苛刻，该方法采用HF裂解方式，必须拥有一台HF气体发生装置才能实现裂解，对于大量的肽树脂只能分两次裂解，生产规模受到限制。另外，HF是一种强腐蚀性的气体，一旦泄漏会对人造成极大的伤害。再者，此合成方法将肽从树脂上裂解下来后，抽去HF用稀乙酸抽提，抽提物经冷冻干燥后，生产周期长，成本高。
TentaGel Resin(PEG-PS)类型树脂目前成本较高，不适合于大批量的制备和工业化生产。
发明内容
本发明目的是提供一种操作简便，反应过程消旋化低、产品质量好、收率高的ZP120的合成方法。
本发明采用的技术方案是：
一种ZP120：Ac-Arg-Tyr-Tyr-Arg-Trp-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-NH2的固相合成方法，所述方法包括如下顺序步骤：
(1)以Fmoc-Rink Amide-MBHA树脂为原料，进行程序反应，依次连接以下保护基：Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Trp(Boc)-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Tyr(tBu)-OH，Fmoc-Tyr(tBu)-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，得到Fmoc-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-NH-Rink Amide MBHA树脂；
所述程序反应步骤为：先用20％的哌啶/DMF溶液室温处理脱去Fmoc-保护基；再加入1～5当量的Fmoc-保护氨基酸、1～5当量的HOBt和1～5当量的N，N-二异丙基碳二亚胺，搅拌，室温反应2～5小时，连接Fmoc-保护氨基酸；所述HOBt用二氯甲烷或二氯甲烷与N，N-二甲基甲酰胺的混合溶液溶解后加入；
(2)用20％的哌啶/DMF溶液室温处理，脱Fmoc-保护后得到H2N-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-NH-Rink Amide MBHA树脂；
(3)加入乙酸酐/DMF溶液酸化，得到Ac-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-NH-Rink Amide MBHA树脂；
(4)用试剂K脱切侧链保护基和树脂，得到ZP120的TFA盐粗品；所述试剂K体积配比如下：TFA∶thioanisole∶H2O∶phenol∶1，2-ethanethiol＝82.5∶5∶5∶5∶2.5；
(5)ZP120的TFA盐粗品用5％醋酸溶液溶解，过滤，滤液经C18键合硅胶装填的反相高效液相色谱柱纯化，水/乙腈梯度洗脱后冷冻干燥，得到ZP120的TFA盐；
(6)将ZP120的TFA盐用强碱型阴离子交换树脂除去三氟醋酸根离子，冷冻干燥得到ZP120；
所述的Fmoc-Rink Amide-MBHA树脂的化学结构为：
可采用市售产品，如可采用天津南开和成科技公司生产的规格为：subst.0.6mmol/g，DVB：1％，Mesh 100～200的Fmoc-Rink Amide-MBHA树脂。
具体的，所述步骤(1)中，程序反应步骤如下：
①洗涤：用二氯甲烷和乙醇交替洗涤2～3次，二氯甲烷用量为5～7mL/g树脂，乙醇用量为5～7mL/g树脂；
②脱保护基：用20％的哌啶/DMF溶液室温下处理2～3次，每次20min，脱去Fmoc-保护基；
③洗涤：用二氯甲烷和乙醇交替洗涤2～3次，二氯甲烷用量为5～7mL/g树脂，乙醇用量为5～7mL/g树脂；
④连接保护基：加入1～5当量的Fmoc-保护氨基酸，1～5当量的HOBt，所述HOBt用二氯甲烷或二氯甲烷与N，N-二甲基甲酰胺的混合溶液溶解，然后加入1～5当量的N，N-二异丙基碳二亚胺，搅拌，室温反应2～5小时；N，N-二异丙基碳二亚胺具有较好的促进肽合成的作用，可以在室温下很容易使具有游离羧基和具有游离氨基的化合物合成肽，
⑤洗涤：用二氯甲烷和乙醇交替洗涤2～3次，二氯甲烷用量为5～7mL/g树脂，乙醇用量用量为5～7mL/g树脂。
参见表1：
表1：程序反应步骤
| 步骤 | 溶剂(或试剂) | 用量(ml/g) | 次数 | 时间(分钟/次) | 备注 |
| 1 | 二氯甲烷 | 5～7 | 2 | 2 | 1，2交替洗 |
| 2 | 乙醇 | 5～7 | 2 | 2 | |
| 3 | 20％哌啶/DMF | 10 | 2 | 20 | |
| 4 | 二氯甲烷 | 5～7 | 3 | 2 | 4，5交替洗 |
| 5 | 乙醇 | 5～7 | 3 | 2 | |
| 6 | 加入1～5当量Fmoc-保护氨基酸，1～5当量的HOBt，所述HOBt用二氯甲烷或二氯甲烷与N，N-二甲基甲酰胺溶解，而后加入1～5当量的N，N-二异丙基碳二亚胺，搅拌，室温 | 1 | 2～5小时 | ||
| 7 | 二氯甲烷 | 5～7 | 3 | 2 | 7，8交替洗 |
| 8 | 乙醇 | 5～7 | 3 | 2 | |
所述步骤(3)中，乙酸酐加入量为50当量，室温反应2～5小时。
所述步骤(4)具体方法如下：将试剂K加入到树脂中(20ml/g树脂)，树脂立即变为棕黑色，冰水浴下搅拌反应3小时后，过滤，滤除树脂，用少量二氯甲烷洗涤树脂，滤液浓缩后，加入大量冷***，即析出大量的白色固体，过滤，收集白色固体，用5％醋酸水溶液溶解。
所述步骤(5)具体方法如下：粗制品肽(TFA盐)的醋酸水溶液用微孔滤膜过滤后，直接上样到装载量为5～200mg/克C18反相键合硅胶装填色谱柱，采用梯度10～13％乙腈-水流动相将肽从色谱柱上洗脱下来，浓缩后，冷冻干燥。
所述步骤(6)方法如下：将ZP120的TFA盐溶于水中，上样，用水溶液洗脱，收集洗脱液，合并洗脱液浓缩，冷冻干燥得ZP120。
由于多肽药物结合一种酸根离子会比较稳定，因此通常实际应用中所述步骤(6)中可用10％的醋酸代替水进行洗脱，得到ZP120的醋酸盐，以便于保藏。
本发明全合成方法的产品质量控制如下：
1、中间体质量控制
(1)产物的检测及反应终点的跟踪用茚三酮定性显色测试法
(2)显色反应为阳性结果的洗脱液为样品溶液
2、中间体控制方法
取少量树脂(3～6mg)，放置于试管中，依次加入Kaiser试剂，混合后，将试管置于沸水浴中3～10分钟，观察颜色。
结果判断：
当树脂中有游离的伯胺基(-NH2-)存在时，该氨基可与茚三酮试剂形成蓝色化合物，使反应混合物呈蓝色，溶液中蓝色的深浅与树脂上的游离氨基的浓度成正比，若反应混合物呈蓝色，表示连接不完全，如混合物呈无色或淡黄色，则表明游离氨基几乎或已不存在，连接反应到达终点。
当树脂仅载有仲氨基(NH-)时，该游离仲氨基仅与茚三酮试剂显紫色，如游离仲氨基几乎或全部被酰化，试验结果应为无色或淡黄色。
上述茚三酮定性实验需重复一次，并用反应前的树脂和空白试剂做对照。
本发明具有以下特点：(1)采用Fmoc-保护氨基酸，配比为1～5摩尔；采用Fmoc Rink Amide-MBHA树脂作为固相合成载体，采用取代值为0.6mmol/克树脂；(2)采用三氟乙酸切割ZP120肽树脂，同时完成对侧链保护基的去除，切割试剂由三氟醋酸、苯酚、乙二硫醇、苯甲硫醚、水组成，切割完毕后直接得到肽酰胺的形式；(3)采用高效液相色谱方法进行纯化分离，采用反相C18键合硅胶装填，装载量为5～200mg/克C18键合硅胶，采用乙腈-水作为洗脱流动相，梯度洗脱方法；(4)采用醋酸离子交换树脂去除三氟醋酸，操作简单。
本发明的有益效果主要体现在：(1)采用Fmoc Rink Amide-MBHA树脂作为固相合成载体，成本低；(2)以N，N-二异丙基碳二亚胺作为肽合成缩合剂，产品过程消旋化低，产品质量好、收率高；(3)采用三氟乙酸切割ZP120肽树脂，切割完毕后直接得到肽酰胺的形式，后续处理简单；(4)工艺简单，程序化，利于工业化生产。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本实用新型进行进一步描述，但本实用新型的保护范围并不仅限于此：
实施例1：Fmoc-Lys(Boc)-Rink Amide MBHA的制备
操作：
(1)将Fmoc-Rink Amide-MBHA树脂50g(30mmol)放于多肽合成反应器中，用二氯甲烷、乙醇各300ml交替洗2次，2分钟/次，抽干。加入20％(v/v)哌啶/DMF溶液500ml，室温搅拌反应20分钟，抽干。树脂用二氯甲烷、乙醇300ml交替洗3次，2分钟/次，抽干。Kaiser试剂检测，结果呈阳性，Fmoc-已脱除。
(2)将Fmoc-Lys(Boc)-OH 70.28g及HOBt 20.25g用500ml二氯甲烷/DMF溶液(二氯甲烷、DMF体积比为1∶1，下同)溶解后，加入树脂中，再滴加N，N-二异丙基碳二亚胺23ml，滴毕后室温搅拌5小时。
(3)抽干。树脂用二氯甲烷、乙醇各300ml交替洗3次，每次2分钟，抽干。
(4)用Kaiser试剂进行显色，检测呈阴性。反应结束。
得：Fmoc-Lys(Boc)-Rink Amide MBHA
实施例2：Fmoc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Rink Amide MBHA的制备
操作：
(1)向树脂中加入20％哌啶/DMF溶液500ml，室温搅拌反应20分钟，抽干。树脂用二氯甲烷、乙醇300ml交替洗3次，2分钟/次，抽干。Kaiser试剂检测，结果呈阳性，Fmoc-已脱除。
(2)将Fmoc-Lys(Boc)-OH 70.28g及HOBt 20.25g用500ml二氯甲烷/DMF溶液溶解后，加入树脂中，再滴加N，N-二异丙基碳二亚胺23ml，滴毕后室温搅拌5小时。
(3)抽干。树脂用二氯甲烷、乙醇各300ml交替洗3次，每次2分钟，抽干。
(4)用Kaiser试剂进行显色，检测呈阴性。反应结束。
得：Fmoc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Rink Amide MBHA
实施例3：Fmoc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Rink Amide MBHA的制备
操作：
(1)向树脂中加入20％哌啶/DMF溶液550ml，室温搅拌反应20分钟，抽干。树脂用二氯甲烷、乙醇350ml交替洗3次，2分钟/次，抽干。Kaiser试剂检测，结果呈阳性，Fmoc-已脱除。
(2)将Fmoc-Lys(Boc)-OH 70.28g及HOBt 20.25g用500ml二氯甲烷/DMF溶液溶解后，加入树脂中，再滴加N，N-二异丙基碳二亚胺23ml，滴毕后室温搅拌5小时。
(3)抽干。树脂用二氯甲烷、乙醇各350ml交替洗3次，每次2分钟，抽干。
(4)用Kaiser试剂进行显色，检测呈阴性。反应结束。
得：Fmoc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Rink Amide MBHA
实施例4：Fmoc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Rink Amide MBHA的制备
操作：
(1)向树脂中加入20％哌啶/DMF溶液550ml，室温搅拌反应20分钟，抽干。树脂用二氯甲烷、乙醇350ml交替洗3次，2分钟/次，抽干。Kaiser试剂检测，结果呈阳性，Fmoc-已脱除。
(2)将Fmoc-Lys(Boc)-OH 70.28g及HOBt 20.25g用500ml二氯甲烷/DMF溶液溶解后，加入树脂中，再滴加N，N-二异丙基碳二亚胺23ml，滴毕后室温搅拌5小时。
(3)抽干。树脂用二氯甲烷、乙醇各350ml交替洗3次，每次2分钟，抽干。
(4)用Kaiser试剂进行显色，检测呈阴性。反应结束。
得：Fmoc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Rink Amide MBHA
实施例5：Fmoc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Rink AmideMBHA的制备
操作：
(1)向树脂中加入20％哌啶/DMF溶液600ml，室温搅拌反应20分钟，抽干。树脂用二氯甲烷、乙醇400ml交替洗3次，2分钟/次，抽干。Kaiser试剂检测，结果呈阳性，Fmoc-已脱除。
(2)将Fmoc-Lys(Boc)-OH 70.28g及HOBt 20.25g用500ml二氯甲烷/DMF溶液溶解后，加入树脂中，再滴加N，N-二异丙基碳二亚胺23ml，滴毕后室温搅拌5小时。
(3)抽干。树脂用二氯甲烷、乙醇各400ml交替洗3次，每次2分钟，抽干。
(4)用Kaiser试剂进行显色，检测呈阴性。反应结束。
得：Fmoc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Rink AmideMBHA
实施例6：Fmoc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-RinkAmide MBHA的制备
操作：
(1)向树脂中加入20％哌啶/DMF溶液600ml，室温搅拌反应20分钟，抽干。树脂用二氯甲烷、乙醇400ml交替洗3次，2分钟/次，抽干。Kaiser试剂检测，结果呈阳性，Fmoc-已脱除。
(2)将Fmoc-Lys(Boc)-OH 70.28g及HOBt 20.25g用500ml二氯甲烷/DMF溶液溶解后，加入树脂中，再滴加N，N-二异丙基碳二亚胺23ml，滴毕后室温搅拌5小时。
(3)抽干。树脂用二氯甲烷、乙醇各400ml交替洗3次，每次2分钟，抽干。
(4)用Kaiser试剂进行显色，检测呈阴性。反应结束。
得：Fmoc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-RinkAmide MRHA
实施例7：Fmoc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Rink Amide MBHA的制备
操作：
(1)向树脂中加入20％哌啶/DMF溶液650ml，室温搅拌反应20分钟，抽干。树脂用二氯甲烷、乙醇450ml交替洗3次，2分钟/次，抽干。Kaiser试剂检测，结果呈阳性，Fmoc-已脱除。
(2)将Fmoc-Lys(Boc)-OH 70.28g及HOBt 20.25g用600ml二氯甲烷/DMF溶液溶解后，加入树脂中，再滴加N，N-二异丙基碳二亚胺23ml，滴毕后室温搅拌5小时。
(3)抽干。树脂用二氯甲烷、乙醇各450ml交替洗3次，每次2分钟，抽干。
(4)用Kaiser试剂进行显色，检测呈阴性。反应结束。
得：Fmoc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Rink Amide MBHA
实施例8：Fmoc-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Rink Amide MBHA的制备
操作：
(1)向树脂中加入20％哌啶/DMF溶液650ml，室温搅拌反应20分钟，抽干。树脂用二氯甲烷、乙醇450ml交替洗3次，2分钟/次，抽干。Kaiser试剂检测，结果呈阳性，Fmoc-已脱除。
(2)将Fmoc-Trp(Boc)-OH 78.90g及HOBt 20.25g用600ml二氯甲烷/DMF溶液溶解后，加入树脂中，再滴加N，N-二异丙基碳二亚胺23ml，滴毕后室温搅拌5小时。
(3)抽干。树脂用二氯甲烷、乙醇各450ml交替洗3次，每次2分钟，抽干。
(4)用Kaiser试剂进行显色，检测呈阴性。反应结束。
得：Fmoc-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Rink Amide MBHA
实施例9：Fmoc-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Rink Amide MBHA的制备
操作：
(1)向树脂中加入20％哌啶/DMF溶液700ml，室温搅拌反应20分钟，抽干。树脂用二氯甲烷、乙醇500ml交替洗3次，2分钟/次，抽干。Kaiser试剂检测，结果呈阳性，Fmoc-已脱除。
(2)将Fmoc-Arg(Pbf)-OH 97.32g及HOBt 20.25g用600ml二氯甲烷/DMF溶液溶解后，加入树脂中，再滴加N，N-二异丙基碳二亚胺23ml，滴毕后室温搅拌5小时。
(3)抽干。树脂用二氯甲烷、乙醇各500ml交替洗3次，每次2分钟，抽干。
(4)用Kaiser试剂进行显色，检测呈阴性。反应结束。
得：Fmoc-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Rink Amide MBHA
实施例10：Fmoc-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Rink Amide MBHA的制备
操作：
(1)向树脂中加入20％哌啶/DMF溶液700ml，室温搅拌反应20分钟，抽干。树脂用二氯甲烷、乙醇500ml交替洗3次，2分钟/次，抽干。Kaiser试剂检测，结果呈阳性，Fmoc-已脱除。
(2)将Fmoc-Tyr(tBu)-OH 68.93g及HOBt 20.25g用600ml二氯甲烷/DMF溶液溶解后，加入树脂中，再滴加N，N-二异丙基碳二亚胺23ml，滴毕后室温搅拌5小时。
(3)抽干。树脂用二氯甲烷、乙醇各500ml交替洗3次，每次2分钟，抽干。
(4)用Kaiser试剂进行显色，检测呈阴性。反应结束。
得：Fmoc-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Rink Amide MBHA
实施例11：Fmoc-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Rink Amide MBHA的制备
操作：
(1)向树脂中加入20％哌啶/DMF溶液800ml，室温搅拌反应20分钟，抽干。树脂用二氯甲烷、乙醇600ml交替洗3次，2分钟/次，抽干。Kaiser试剂检测，结果呈阳性，Fmoc-已脱除。
(2)将Fmoc-Tyr(tBu)-OH 68.93g及HOBt 20.25g用700ml二氯甲烷/DMF溶液溶解后，加入树脂中，再滴加N，N-二异丙基碳二亚胺23ml，滴毕后室温搅拌5小时。
(3)抽干。树脂用二氯甲烷、乙醇各600ml交替洗3次，每次2分钟，抽干。
(4)用Kaiser试剂进行显色，检测呈阴性。反应结束。
得：Fmoc-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Rink Amide MBHA
实施例12：Fmoc-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Rink Amide MBHA的制备
操作：
(1)向树脂中加入20％哌啶/DMF溶液800ml，室温搅拌反应20分钟，抽干。树脂用二氯甲烷、乙醇600ml交替洗3次，2分钟/次，抽干。Kaiser试剂检测，结果呈阳性，Fmoc-已脱除。
(2)将Fmoc-Arg(Pbf)-OH 97.32g及HOBt 20.25g用700ml二氯甲烷/DMF溶液溶解后，加入树脂中，再滴加N，N-二异丙基碳二亚胺23ml，滴毕后室温搅拌5小时。
(3)抽干。树脂用二氯甲烷、乙醇各600ml交替洗3次，每次2分钟，抽干。
(4)用Kaiser试剂进行显色，检测呈阴性。反应结束。
得：Fmoc-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Rink Amide MBHA
实施例13：Ac-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Rink Amide MBHA的制备
操作：
(1)向树脂中加入20％哌啶/DMF溶液800ml，室温搅拌反应20分钟，抽干。树脂用二氯甲烷、乙醇600ml交替洗3次，2分钟/次，抽干。Kaiser试剂检测，结果呈阳性，Fmoc-已脱除。
(2)将乙酸酐142ml和400ml DMF加入树脂中，室温搅拌5小时。
(3)抽干。树脂用二氯甲烷、乙醇各600ml交替洗3次，每次2分钟，抽干。
(4)用Kaiser试剂进行显色，检测呈阴性。反应结束。
得：Ac-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Rink Amide MBHA
实施例14：Ac-Arg-Tyr-Tyr-Arg-Trp-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-NH2的制备
操作：
(1)将树脂真空干燥称重得：139.67g淡黄色树脂，肽树脂收率99％。
(2)将K试剂2800ml加入树脂中，冰水浴下搅拌反应3小时后，过滤，滤除树脂，用150ml二氯甲烷洗涤树脂，滤液浓缩后，加入10L冷***，即析出大量的白色固体，过滤，收集白色固体，干燥，得肽粗品(TFA盐)39.03g。粗品收率73％。粗品纯度经HPLC检测85％。
实施例15：分离纯化
装置：C18制备柱(100×800mm)
洗脱液A：0.1％TFA/H2O
洗脱液B：乙腈
流速：200ml/min
紫外检测波长：230nm
操作：(1)肽粗品(TFA盐)10g用500ml 5％醋酸水溶液溶解。
(2)0.45μm微孔滤膜过滤，
(3)滤液直接上样
(4)10～13％乙腈-水流动相梯度洗脱
(5)浓缩，冷冻干燥。
(6)其他低于98％洗脱液合并，浓缩后，重新纯化。
(7)得ZP120(TFA盐)白色固体6.2g。
依次按上述方法处理完毕所有肽粗品后，合并得ZP120(TFA盐)共计24.2g，收率62％。
实施例16：离子交换(ZP120制备)
装置：离子交换柱(100×800mm)
操作：(1)将肽三氟醋酸盐6.2g用100ml水溶液溶解。
(2)将此溶液上样到盛有强碱型阴离子交换柱中
(3)用水溶液洗脱样品
(4)收集洗脱液
(5)合并样品洗脱液
(6)浓缩，冷冻干燥得ZP120白色固体4.98g。
依次按上述方法处理完毕所有肽三氟醋酸盐后，合并得ZP120共计19.4g，收率80.3％。
产品经质谱MS确证为ZP120，其液相数据见表2：
表2：ZP120液相保留时间表
| 峰 | 保留时间(min) | 峰高(mAU) | 峰面积(mAU*min) | 峰面积百分比(％) |
| 1 | 5.152 | 2.1765 | 0.2329 | 0.04 |
| 2 | 10.667 | 0.7092 | 0.2324 | 0.04 |
| 3 | 11.267 | 156.3432 | 29.3202 | 4.88 |
| 4 | 11.894 | 42.5172 | 14.6909 | 2.45 |
| 5 | 12.393 | 17.2760 | 5.3031 | 0.88 |
| 6 | 14.261 | 1352.8342 | 509.5120 | 84.88 |
| 7 | 15.418 | 75.2133 | 34.3250 | 5.72 |
| 8 | 16.129 | 1.2559 | 0.3822 | 0.06 |
| 9 | 16.826 | 12.2855 | 4.2735 | 0.71 |
| 10 | 17.720 | 0.7645 | 0.2333 | 0.04 |
| 11 | 18.406 | 13762 | 0.4506 | 0.08 |
| 12 | 28.580 | 1.4037 | 0.1972 | 0.03 |
| 13 | 29.414 | 3.5739 | 0.6193 | 0.10 |
| 14 | 29.917 | 3.9723 | 0.5339 | 0.09 |
| Total： | 1671.702 | 600.307 | 100 |
Claims (1)
1.一种ZP120：Ac-Arg-Tyr-Tyr-Arg-Trp-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-NH2的固相合成方法，其特征在于所述方法包括如下顺序步骤：
(1)以Fmoc-Rink Amide-MBHA树脂为原料，进行程序反应，依次连接以下保护基：Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Trp(Boc)-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Tyr(tBu)-OH，Fmoc-Tyr(tBu)-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，得到Fmoc-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-NH-Rink Amide MBHA树脂；
所述程序反应步骤如下：
①洗涤：用二氯甲烷和乙醇交替洗涤2～3次，二氯甲烷用量为5～7mL/g树脂，乙醇用量为5～7mL/g树脂；
②脱保护基：用20％的哌啶/DMF溶液室温下处理2～3次，每次20min，脱去Fmoc-保护基；
③洗涤：用二氯甲烷和乙醇交替洗涤2～3次，二氯甲烷用量为5～7mL/g树脂，乙醇用量为5～7mL/g树脂；
④连接保护基：加入1～5当量的Fmoc-保护氨基酸，1～5当量的HOBt，所述HOBt用二氯甲烷或二氯甲烷与N，N-二甲基甲酰胺的混合溶液溶解，然后加入1～5当量的N，N-二异丙基碳二亚胺，搅拌，室温反应2～5小时；
⑤洗涤：用二氯甲烷和乙醇交替洗涤2～3次，二氯甲烷用量为5～7mL/g树脂，乙醇用量为5～7mL/g树脂；
(2)用20％的哌啶/DMF溶液室温处理，脱Fmoc-保护后得到H2N-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-NH-Rink Amide MBHA树脂；
(3)加入乙酸酐/DMF溶液酸化，乙酸酐加入量为50当量，室温反应2～5小时，得到Ac-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-NH-Rink Amide MBHA树脂；
(4)用试剂K脱切侧链保护基和树脂，得到ZP120的TFA盐粗品；所述试剂K体积配比如下：TFA∶thioanisole∶H2O∶phenol∶1，2-ethanethiol＝82.5∶5∶5∶5∶2.5；
(5)ZP120的TFA盐粗品用5％醋酸溶液溶解，过滤，滤液经C18键合硅胶装填的反相高效液相色谱柱纯化，水/乙腈梯度洗脱后冷冻干燥，得到ZP120的TFA盐；
(6)将ZP120的TFA盐用强碱型阴离子交换树脂脱去三氟醋酸根离子，冷冻干燥得到ZP120，方法如下：将ZP120的TFA盐溶于水中，上样，用水洗脱，收集洗脱液，合并洗脱液浓缩，冷冻干燥得ZP120。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2007101645850A CN101407538B (zh) | 2007-12-11 | 2007-12-11 | 一种zp120的固相合成方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2007101645850A CN101407538B (zh) | 2007-12-11 | 2007-12-11 | 一种zp120的固相合成方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101407538A CN101407538A (zh) | 2009-04-15 |
| CN101407538B true CN101407538B (zh) | 2011-09-14 |
Family
ID=40570764
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2007101645850A Expired - Fee Related CN101407538B (zh) | 2007-12-11 | 2007-12-11 | 一种zp120的固相合成方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101407538B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103102387A (zh) * | 2013-01-25 | 2013-05-15 | 苏州昊帆生物科技有限公司 | 载有多肽缩合剂的多孔材料，及其制备方法和用途 |
| CN105461800A (zh) * | 2015-12-22 | 2016-04-06 | 何润泽 | 一种kpv肽及其类似物的多肽的制备方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001098214A1 (en) * | 2000-06-19 | 2001-12-27 | Novozymes Biotech, Inc. | Methods for eliminating the formation of biofilm |
| US7244701B2 (en) * | 2000-06-16 | 2007-07-17 | Zealand Phama A/S | Diuretic peptide conjugate |
-
2007
- 2007-12-11 CN CN2007101645850A patent/CN101407538B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7244701B2 (en) * | 2000-06-16 | 2007-07-17 | Zealand Phama A/S | Diuretic peptide conjugate |
| WO2001098214A1 (en) * | 2000-06-19 | 2001-12-27 | Novozymes Biotech, Inc. | Methods for eliminating the formation of biofilm |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101407538A (zh) | 2009-04-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101412752B (zh) | 齐考诺肽的固相合成方法 | |
| CN103145828B (zh) | 一种利拉鲁肽的全固相合成方法 | |
| RU2461564C2 (ru) | Способ очистки циклического или нециклического пептида | |
| CN105017387B (zh) | 一种制备利那洛肽的方法 | |
| Small et al. | Design and application of a new rigid support for high efficiency continuous-flow peptide synthesis | |
| WO1989010931A1 (en) | A general method for producing and selecting peptides with specific properties | |
| MELDAL et al. | Multiple column peptide synthesis, Part 2 (1, 2) | |
| CN103992391B (zh) | 一种纯化特利加压素的方法 | |
| CN103087150B (zh) | 一种小分子亲和肽及其应用 | |
| CN103880945B (zh) | 制备高纯度胸腺法新的方法 | |
| CN104861042A (zh) | 特异性微波合成制备醋酸西曲瑞克的方法 | |
| CN101407538B (zh) | 一种zp120的固相合成方法 | |
| CN106478805A (zh) | 一种glp-1衍生物的制备方法 | |
| Gorman | An apparatus for simultaneous manual solid-phase synthesis of multiple peptide analogs | |
| CN103936828A (zh) | 卡非佐米中间体及卡非佐米的制备方法 | |
| CN109053863A (zh) | 一种低成本制备高纯度利那洛肽的方法 | |
| CN103351426B (zh) | 一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法 | |
| CN104277093A (zh) | 以Rink Amide-AM Resin为载体制备醋酸西曲瑞克的方法 | |
| CN105764915B (zh) | 纯化达依泊汀α的方法 | |
| CN101538317B (zh) | 凝血酶直接抑制剂多肽水合盐及合成方法 | |
| CN102241746B (zh) | 恩夫韦肽的制备方法 | |
| CN112778402B (zh) | 一种利用微通道模块化反应装置合成缩宫素的方法 | |
| CN101255187B (zh) | Atl肽的固相合成方法 | |
| CN102875639A (zh) | 一种肽的固相合成方法及其合成的肽 | |
| CN103467593A (zh) | 一种胸腺法新的纯化方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C56 | Change in the name or address of the patentee | ||
| CP02 | Change in the address of a patent holder |
Address after: Hangzhou City, Zhejiang province 310018 Hangzhou economic and Technological Development Zone No. 6 Street No. 452 Hangzhou City high-tech incubator incubator building No. 1 room 3B01-3B04 Patentee after: Hangzhou Sinopep Pharmaceutical Inc. Address before: Hangzhou City, Zhejiang province Binjiang District 310052 shore road 1180 High-tech Zone Patentee before: Hangzhou Sinopep Pharmaceutical Inc. |
|
| C56 | Change in the name or address of the patentee |
Owner name: HANGZHOU ADELAI NUOTAI PHARMACEUTICAL TECHNOLOGY C Free format text: FORMER NAME: HANGZHOU SINOPEP PHARMACEUTICAL INC. |
|
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: Hangzhou City, Zhejiang province 310018 Hangzhou economic and Technological Development Zone No. 6 Street No. 452 Hangzhou City high-tech incubator incubator building No. 1 room 3B01-3B04 Patentee after: HANGZHOU ADLAI NORTYE PHARMACEUTICAL TECHNOLOGY CO., LTD. Address before: Hangzhou City, Zhejiang province 310018 Hangzhou economic and Technological Development Zone No. 6 Street No. 452 Hangzhou City high-tech incubator incubator building No. 1 room 3B01-3B04 Patentee before: Hangzhou Sinopep Pharmaceutical Inc. |
|
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: Solid phase synthesis method of ZP120 Effective date of registration: 20150116 Granted publication date: 20110914 Pledgee: Bank of Hangzhou Limited by Share Ltd Binjiang branch Pledgor: HANGZHOU ADLAI NORTYE PHARMACEUTICAL TECHNOLOGY CO., LTD. Registration number: 2015990000044 |
|
| PLDC | Enforcement, change and cancellation of contracts on pledge of patent right or utility model | ||
| C56 | Change in the name or address of the patentee | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: Hangzhou City, Zhejiang province 310018 Hangzhou economic and Technological Development Zone No. 6 Street No. 452 Hangzhou City high-tech incubator incubator building No. 1 room 3B01-3B04 Patentee after: HANGZHOU ANUO BIOLOGICAL MEDICINE TECHNOLOGY CO., LTD. Address before: Hangzhou City, Zhejiang province 310018 Hangzhou economic and Technological Development Zone No. 6 Street No. 452 Hangzhou City high-tech incubator incubator building No. 1 room 3B01-3B04 Patentee before: HANGZHOU ADLAI NORTYE PHARMACEUTICAL TECHNOLOGY CO., LTD. |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20110914 Termination date: 20191211 |