CN101352558A - 一种治疗不畏寒型胃炎颗粒剂的质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种治疗不畏寒型胃炎颗粒剂的质量控制方法。其特征在于：采用薄层色谱法对制剂中的川芎、茜草、旋复花、桃仁和柏子仁进行鉴别，五味药材的薄层鉴别采用同一供试品溶液，在3块硅胶薄层板上完成，简便、快捷、无污染。用HPLC法，以乙腈-甲醇-0.1％磷酸为流动相，316nm为检测波长，对制剂中的有效成分阿魏酸进行了定量，通过萃取除杂，排除了干扰峰，使方法准确、重现。本发明的效果是：处方中七味药材，增订了五味药材的薄层鉴别和君药有效成分的定量测定，构成了一部高水准的药品质量标准，不但可全方位控制药品质量，而且与常规方法相比，检测效率高，花费时间短，成本低，无污染。

Description

一种治疗不畏寒型胃炎颗粒剂的质量控制方法

技术领域

本发明涉及一种治疗不畏寒型胃炎颗粒剂的质量控制方法。

背景技术

在防病治病方面，传统的中药及其提取制剂占据着重要的位置，其质量控制方法都是薄层鉴别与含量测定。但在各类国家质量标准中，薄层鉴别多是单一药材的鉴别。为排除干扰，样品的前处理程序多复杂、烦琐，需用大量的毒性有机试剂反复纯化处理，费力、费时、费试剂、污染环境，危害健康，检测周期长。目前一个含5～6项薄层鉴别和二项含量测定的质量标准检测完成，至少要花费4～5天的时间，如遇复试花费时间更长，检测速度严重制约着中药现代化生产速度。所以寻找简便、快捷的检测方法、提高检测效率、降低检测成本，减少毒性试剂对环境的污染，成为中药质量控制必须突破的难关。

一种治疗不畏寒型胃炎颗粒剂，由旋复花、当归、泽兰、茜草、郁金、桃仁、柏子仁七味中药组成，其处方组成中各中药材的重量份数比为：旋覆花、当归、茜草、郁金、泽兰、桃仁、柏子仁各3～5份。按传统的检测方法完成5项鉴别和1项含量测定，至少要3～4天时间。

本发明就是针对上述难点，发明了采用同一甲醇超声的供试品溶液，在3块薄层板上，简便、快捷地鉴别当归、茜草、桃仁、柏子仁和旋复花五味药材，而且展开剂也均为无毒的有机试剂。并将含水醇液，直接采用酸水溶液稀释法，进行萃取除杂，避开蒸干对待测成分阿魏酸的破坏，确保了测定方法的准确性与重现性。

该发明有效提高检测速度，降低检测成本，减少环境污染，并为全方位控制药品质量提供了高水准药品质量标准。

发明内容

采用薄层色谱法对处方中的5味中药，当归、茜草、桃仁、柏子仁和旋复花进行鉴别，五味药材的薄层鉴别采用同一供试品溶液，在3块薄层板上完成，而且对照药材也均是甲醇超声的上清溶液，五项鉴别只需甲醇26ml，无毒展开剂30ml，时间1.0小时。简便、快捷、成本低、无污染。

用高效液相法，以乙腈-甲醇-0.1％磷酸为流动相；316nm为检测波长，对制剂中的有效成分阿魏酸进行定量。采用酸水溶液直接稀释含水甲醇溶液的方法，避开蒸干操作，再通过低沸点的***萃取，限温蒸发，一则排除干扰，二则减少阿魏酸因高温，使含量降低的弊端，有效提高了方法的准确性，重现性和精密度。方法学研究表明：阿魏酸进样量在0.00584～1.46μg，进样量与峰面积呈良好的线性关系，其回归方程为：Y＝6801136X-15199.5，Y＝0.99998。采用加样回收实验，阿魏酸的回收率为98.97％(n＝9)，RSD为0.77％(见表1)。

本发明解决其技术问题所采用的方案为：

[鉴别](1)取本品2～3g，加甲醇3～5ml，超声处理5～10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取当归、茜草对照药材粉末各0.2～1g，分别加甲醇4～8ml，超声处理5～10分钟，上清液作为各自对照药材溶液，吸取对照药材溶液3～5μl，供试品溶液6-8μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶GF₂₅₄薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(4～8∶1～2∶0.1～0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，尽快置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与茜草对照药材色谱相应的位置上，至少显二个相同颜色的荧光斑点；在与当归对照药材色谱相应的位置上，显一个相同的荧光主斑点(见图1)。

(2)取旋覆花对照药材粉末0.2～0.4g，分别加甲醇4～6ml，超声处理5～10分钟，上清液作为对照药材溶液，吸取对照药材溶液和鉴别(1)项下的供试品溶液各5-8μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶GF₂₅₄薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(12～18∶1～1.2∶0.5～0.6∶0.5～0.6)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，至少显一个相同颜色的荧光斑点；再置紫外光灯(254nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，至少显一个相同颜色的荧光熄灭斑点(见图2、3)。

(3)取桃仁对照药材粉末0.2～0.5g、柏子仁对照药材粉末0.05～0.2g，加甲醇3～6ml，超声处理5～10分钟，上清液作为各自对照药材，吸取对照药材溶液3～5μl和鉴别(1)项下的供试品溶液各7～8μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(4～8∶1～2∶0.1～0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％的磷钼酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与桃仁和柏子仁对照药材色谱相应位置上，分别显1～2个相同颜色的主斑点(见图4)。

[含量测定]照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。

色谱条件与***适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-甲醇-0.1％磷酸溶液(10～16∶2～5∶70～79)为流动相；检测波长为316nm，流速08～1.0ml/min。理论板数，按阿魏酸峰计算不低于4000。

对照品溶液制备精密称取阿魏酸适量，加70％甲醇制成每1ml含0.003～0.01mg的溶液，即得。

供试品溶液制备取本品适量，研细，称取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60％甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理10～60分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。取续滤液10～15ml，加0.5％盐酸(ml/ml)10～15ml，摇匀，用***萃取4次，每次10～15ml，合并***液，在40℃水浴上挥至无***味，用30～70％甲醇，将残留溶液定量转移到5～10ml量瓶中，并至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10～20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

发明原理：

1.根据中药各有效成分的化学结构和极性不同，随着展开剂的移动，在薄层板上的吸附、解吸附能力而不一样，使各有效成分的斑点得以分离。又借助各有效成分在不同的检视条件下，呈现不同的斑点颜色，使同一块薄层板上可同时互不干扰地检测数种成分斑点。

2.通过简便的酸水稀释、萃取除杂、限温蒸发，以及调整流动相的组分、比例、检测波长，解决了因杂质峰干扰，无法定量测定的难题，并提高了方法的准确性，重现性和精密度。使待测成分在所选择的检测波长下，所呈现的峰面积与含量呈良好线性关系，而得以定量测定。

本发明的创新点及有益效果如下：

(1)突破了一个样品溶液，一块薄层板，检测一种中药的传统鉴别方式，创新了同一供试品溶液，在3块薄层板上，完成5味中药的快速薄层鉴别新方法，当归、茜草在一块薄层板上，旋覆花在一块薄层板上，桃仁和柏子仁在一块薄层板上。

(2)在制备薄层供试品溶液和对照药材溶液时，避开了提取、蒸干、萃取等严重污染环境和实验人员健康的操作步骤，各样品仅是简单的甲醇超声，即可得到实验溶液。五项鉴别只需样品2～3g，甲醇26ml，展开剂30ml，时间1.0小时；简便、快捷、成本低、无污染。

(3)本发明的展开剂***，避开了苯、甲苯、三氯甲烷等毒性试剂、只采用无毒性的环己烷、乙酸乙酯、丁酮、甲酸和水就完成检测，且斑点清晰易判。

(4)采用酸水溶液直接稀释含水甲醇提取溶液的方法，避开蒸干操作，再通过低沸点的***萃取，限温蒸发，解决了因杂质峰干扰，无法定量测定的难题以及阿魏酸因高温，使含量降低的弊端，有效提高了方法的准确性，重现性和精密度。使待测成分在所选择的检测波长下，波峰分离良好(见图5、6、7)。

(5)本发明与传统的质量控制方法相比，提高检测效率，节省检测时间，降低检测成本，减少环境污染，并为全方位控制药品质量提供了高水准药品质量标准。

附图说明

图1为茜草和当归的薄层鉴别图

图2为旋覆花薄层鉴别(365nm下检视)图

图3为旋覆花薄层鉴别(254nm下检视)图

图4为桃仁和柏子仁薄层鉴别图

图5阿魏酸对照品HPLC色谱图

图6治疗不畏寒型胃炎颗粒剂的HPLC色谱图

图7不含当归的空白样品色谱图

图1中，1为茜草空白样品，2为茜草对照药材，3为当归空白样品，4为当归对照药材，5.6.7为样品。

图2和图3为同一块薄层板，图2是在紫外灯365nm下检视，图3是在紫外灯254nm下检视，图2和图3的样品标号一样，1.2.3为样品，4为旋复花对照药材，5为旋复花空白样品。

图4中，1为柏子仁对照药材，2为桃仁对照药材，3为桃仁、柏子仁空白样品，4.5.6为样品。

图5中，1为阿魏酸对照品色谱峰。

图6中，1为样品中阿魏酸色谱峰。

图7中，为空白样品的色谱峰。

本发明具体实施方式如下：

[鉴别](1)取本品2～3g，加甲醇3～5ml，超声处理5～10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取茜草、当归对照药材粉末各0.2～1g，分别加甲醇4～8ml，超声处理5～10分钟，上清液作为各自对照药材溶液，吸取对照药材溶液3～5μl，供试品溶液6-8μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶GF₂₅₄薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(4～8∶1～2∶0.1～0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，尽快置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与茜草对照药材色谱相应的位置上，至少显二个相同颜色的荧光斑点；在与当归对照药材色谱相应的位置上，显一个相同的荧光主斑点(见图1)。

(2)取旋覆花对照药材粉末0.2～0.4g，分别加甲醇4～6ml，超声处理5～10分钟，上清液作为对照药材溶液，吸取对照药材溶液和鉴别(1)项下的供试品溶液各5-8μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶GF₂₅₄薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(12～18∶1～1.2∶0.5～0.6∶0.5～0.6)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，至少显一个相同颜色的荧光斑点；再置紫外光灯(254nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，至少显一个相同颜色的荧光熄灭斑点(见图2、3)。

(3)取桃仁对照药材粉末0.2～0.5g、柏子仁对照药材粉末0.05～0.2g，加甲醇3～6ml，超声处理5～10分钟，上清液作为各自对照药材，吸取对照药材溶液3～5μl和鉴别(1)项下的供试品溶液各7～8μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(4～8∶1～2∶0.1～0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％的磷钼酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与桃仁和柏子仁对照药材色谱相应位置上，分别显1～2个相同颜色的主斑点(见图4)。

[含量测定]照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。

色谱条件与***适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-甲醇-0.1％磷酸溶液(10～16∶2～5∶70～79)为流动相；检测波长为316nm，流速08～1.0ml/min。理论板数，按阿魏酸峰计算不低于4000。

对照品溶液制备精密称取阿魏酸适量，加70％甲醇制成每1ml含0.003～0.01mg的溶液，即得。

供试品溶液制备取本品适量，研细，称取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60％甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理10～60分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。取续滤液10～15ml，加0.5％盐酸(ml/ml)10～15ml，摇匀，用***萃取4次，每次10～15ml，合并***液，在40℃水浴上挥至无***味，用30～70％甲醇，将残留溶液定量转移到5～10ml量瓶中，并至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10～20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。测定了4批样品含量，结果见附表2。

附表1阿魏酸回收率试验结果

附表2治疗不畏寒型胃炎样品中阿魏酸含量测定结果

Claims (2)

1.薄层鉴别

A.以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(4～8∶1～2∶0.1～0.2)为展开剂，以硅胶为载体，紫外光灯365nm为检视波长，在同一块薄层板上同时鉴别了当归、茜草。

B.以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(12～18∶1～1.2∶0.5～0.6∶0.5～0.6)为展开剂，以硅胶为载体，紫外光灯365nm和254nm为检视波长，鉴别了旋复花。

C.以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(4～8∶1～2∶0.1～0.2)为展开剂，以硅胶为载体，1％磷钼酸乙醇溶液为显色剂，在同一块薄层板上同时鉴别了桃仁和柏子仁。

上述所有鉴别采用同一份供试品溶液，所有对照药材均是甲醇超声的上清液，方法简便、快捷、斑点清晰。

2.含量测定

A.色谱条件与***适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-甲醇-0.1％磷酸溶液(10～16∶2～5∶70～79)为流动相；检测波长为316nm，流速0.8～1.0ml/min。理论板数，按阿魏酸峰计算不低于4000。

B.对照品溶液制备精密称取阿魏酸适量，加70％甲醇制成每1ml含0.003～0.01mg的溶液，即得。

C.供试品溶液制备取本品适量，研细，称取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60％甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理10～60分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。取续滤液10～15ml，加0.5％盐酸(ml/ml)10～15ml，摇匀，用***萃取4次，每次10～15ml，合并***液，在40℃水浴上挥至无***味，用30～70％甲醇，将残留溶液定量转移到5～10ml量瓶中，并至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液。

D.测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10～20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

Images