CN101347179A - 灌木生物饲料专用复合菌剂的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种灌木生物饲料专用复合菌剂的制备方法，技术特征是分二步进行发酵转化，第一步是好氧菌发酵阶段，第二步是厌氧菌发酵阶段，组分一用于好氧菌发酵阶段，组分二用于厌氧菌发酵阶段。将组分1、组分2、聚木糖和无水氯化钙按比例混合即制成多种有益微生物复合而成的菌剂。本制备方法工艺简单、好操作，它制备的菌剂，通过微生物繁殖、代谢过程中所产生的多种生物酶及代谢产物，把不能用于饲喂反刍家畜的柠条等灌木转化成为绿色优质粗饲料，为奶牛、肉牛、羊及各种反刍动物开辟了新的粗饲料资源。

Description

灌木生物饲料专用复合菌剂的制备方法

技术领域

本发明涉及一种复合益生菌剂的制备方法，特别指灌木生物饲料专用复合菌剂的制备方法。

背景技术

世界上许多荒漠地区都生长着大量的灌木植物，如柠条就是其中一种重要的灌木植物。但是，到目前为止柠条在畜牧业的产业化生产几乎为空白。合理开发利用这些灌木资源，成为一项开辟沙产业的新途径，同时也是有利于保护生态环境、有益于当地百姓、利国利民的新兴产业。比如，柠条生物饲料就是一种无污染、节粮型的绿色优质粗饲料。它不仅能将目前不能利用的野生柠条变成绿色优质粗饲料，解决畜牧养殖业饲草料不足的问题，更重要的是通过对柠条的定期平茬复壮及合理利用，可使柠条生长更加旺盛，更有效的治理沙源、保护生态环境。所以，研制由多种有益微生物复合而成的菌剂用来分解、发酵柠条等灌木，生产灌木生物饲料，不仅具有广阔的市场前景，还具有显著的社会效益和生态效益。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种灌木生物饲料专用复合菌剂的制备方法，这种方法不同于其它生物饲料发酵剂的制备方法，一般生物发酵剂都是由厌氧菌组成，而本制备方法则分二步进行发酵转化，第一步是好氧菌发酵阶段，第二步是厌氧菌发酵阶段。

本发明的技术问题由如下方案来解决：灌木生物饲料专用复合菌剂的制备方法，其特征是：本制备方法分二步进行发酵转化，第一步是好氧菌发酵阶段，组分一用于好氧菌发酵阶段，第二步是厌氧菌发酵阶段，组分二用于厌氧菌发酵阶段，

组分一制作方法：

1、木霉孢子型培养干燥物的制作方法：一、二级菌种的扩培为试管培养及三角瓶培养，一、二级菌种的制作方法按常规法制作，曲盘培养基制作方法是将小麦麸粉50％、玉米芯粉49.6％先混合均匀，用0.4％无水氯化钙加水的溶液均匀喷洒成培养基，再用pH4.5的硫酸水溶液拌湿，使含水量达到55％～60％，搅拌均匀后后装入曲盘灭菌，待温度降到35℃时，将三角瓶中的菌种装入灭菌曲盘，在无菌条件下35℃培养，培养过程中观察孢子数量，当孢子数量达到5亿个/克以上时，用低温干燥至水分小于10％后贮存备用；

2、枯草芽孢杆菌培养干燥物的制作方法：一、二级菌种的扩培为试管培养及三角瓶培养，一、二级菌种的制作方法按常规法制作，三级菌种的制备方法是将玉米粉3％、豆粕粉3％、庶糖2％、氯化钠0.5％、硫酸锰0.1％加水至100％装入发酵罐内灭菌成培养基，待温度降到37℃时，接入二级枯草芽孢杆菌菌种，并在通气和搅拌的条件下培养至活菌数达到10亿个/ml以上停止培养，枯草芽孢杆菌培养干燥物的制作方法是将玉米粉3％、豆粕粉3％、庶糖2％、氯化钠0.5％、硫酸锰0.1％加水至100％，装入容积为三级种子罐10倍量大的发酵罐内灭菌，待温度降到36～38℃时，按10％的比例接入枯草芽孢杆菌三级菌种，并在通气和搅拌的条件下培养至活菌数达到10亿个/ml以上并有70％以上的活菌形成芽孢时停止培养，然后将培养液与灭菌玉米芯按1∶1的比例混合均匀，低温干燥至水分小于10％后贮存备用；3、酿酒酵母培养干燥物的制作方法：一级菌种的扩培为普通试管培养基培养，二级种子的扩培为转瓶液体培养法，培养基成分控制在还原糖浓度为45％±10％，含0.2～0.45％硫酸铵和0.1％磷酸，pH为5.0～7.0，培养方法按常规法进行，酿酒酵母细胞培养干燥物的制备方法是将庶糖3％、玉米粉1％、尿素0.3％混合后加水至100％成培养基装入培养罐中灭菌，待温度降至27～29℃时，取二级种子培养液0.2％接种于本培养液中，在搅拌条件下培养14～15小时，加入尿素0.2％，培养19～20小时，再加入尿素0.2％，到24小时检查活细胞总量，待活细胞总量大于5亿个/ml时停止培养，用沉降式高速离心机离心后，取沉淀物低温通风干燥至水分小于10％后贮存备用；

将以上各菌培养干燥物按木霉孢子型培养干燥物48～52％、枯草芽孢杆菌培养干燥物24～26％、酿酒酵母细胞培养干燥物24～26％的比例混合，制成组分一；

组分二制作方法：

1、粪肠球菌的制备方法：粪肠球菌原种为中科院微生物研究所提供的1.3.1号菌种，一、二级菌种的扩培为试管培养及三角瓶培养，一、二级菌种的制作方法按常规法制作，粪肠球菌培养干燥物制备方法是将脱脂牛奶2％、葡萄糖1.1％、蛋白胨0.3％、吐温-80 0.05％、磷酸氢二钾0.2％、硫酸镁0.02％、硫酸锰0.005％、碳酸钙2％加水至总量100％成培养基，调节pH值到6.8，在发酵罐中灭菌，在搅拌条件下将温度降至29～31℃，接入二级菌种，培养18～20小时，当培养液中的活菌数达到10亿个/ml以上时，再加入1％灭菌脱脂牛奶和0.005％的Vc，待充分搅拌均匀后，按1∶1的比例与经过灭菌消毒的玉米芯粉混合均匀，然后干燥至水分小于10％后贮存备用；

2、植物乳杆菌的制备方法：菌种由轻工业部食品发酵研究院提供，菌号：6026，生产培养基配方及培养方法与粪肠球菌相同，载体及干燥方法与粪肠球菌相同；

3、戊糖片球菌的制备方法，菌种由轻工业部食品发酵研究院提供，菌号：10196，生产培养基配方及培养方法与粪肠球菌相同，培养温度为26℃，载体及干燥方法与粪肠球菌相同；

将以上各菌培养干燥物按粪肠球菌培养干燥物19～21％、植物乳杆菌培养干燥物38～42％、戊糖片球菌培养干燥物38～42％的比例混合，制成组分二；

最后，将组分一、组分二再加栽体低聚木糖、无水氯化钙混合制成菌体混合物，经检验、包装即为灌木生物饲料专用复合菌剂成品。成品中组分一、组分二、低聚木糖、无水氯化钙各占百分比为26～28％、38～42％、28～32％、3％。

无水氯化钙须袋时，在封口前加入小袋内用于吸收产品中的水分，提高菌的存活率，延长保质期。

本发明的优点是：1、本制备方法工艺简单、好操作，它采用好氧、厌氧菌相结合的培养方法，制备出由多种有益微生物复合而成，专门用于分解、发酵柠条等灌木的菌剂。通过微生物繁殖、代谢过程中所产生的多种生物酶及代谢产物，将柠条等灌木中不可利用的或利用率低的营养物质转化为可利用或利用率高的物质，同时可将柠条中的有害物质(如单宁等)破坏使其含量大大降低，可显著地提高柠条生物饲料的消化率和适口性，把不能直接用于饲喂反刍家畜的柠条等灌木转化成为绿色优质粗饲料，为奶牛、肉牛、羊及各种反刍动物开辟出新的粗饲草料资源。2、用灌木生物饲料专用复合菌剂对柠条等灌木进行发酵所用的时间短，只需要一般青贮或微贮1/5的时间即可发酵成功。3、用灌木生物饲料专用复合菌剂经发酵制成的柠条生物饲料适口性好、消化率高，家畜采食利用率达到100％。

附图说明

附图是本发明的制备工艺流程图

具体实施方式

下面详述一实施例：本制备方法分二步进行发酵转化，第一步是好氧菌发酵阶段，组分一用于好氧菌发酵阶段，第二步是厌氧菌发酵阶段，组分二用于厌氧菌发酵阶段。

组分一制备方法：

木霉孢子型培养干燥物的制作方法：一、二级菌种的扩培为试管培养及三角瓶培养，一、  二级菌种的制作方法按常规法制作。曲盘培养基制作方法：

将小麦麸500千克，玉米芯粉496千克(要求90％通过80目标准筛，10％通过60目标准筛)先混合均匀，再将无水氯化钙4千克溶于水后均匀喷洒在上面，用pH4.5的硫酸水溶液拌湿，使含水量达到58％，充分搅拌均匀后后装入曲盘，用微波灭菌器灭菌，待温度降到35℃时，接入三角瓶中的菌种，装入灭菌曲盘，在无菌条件下35℃培养。培养过程中注意观察孢子数量，当孢子数量达到5亿个/克以上时，用低温干燥至水分小于10％后贮存备用。

枯草芽孢杆菌培养干燥物的制作方法：一级、二级菌种的扩培为试管培养及三角瓶培养。一、二级菌种的制作方法按常规法制作。三级菌种的制备方法是将玉米粉3千克、豆粕粉3千克、庶糖2千克、氯化钠0.5千克、硫酸锰0.1千克加水至100千克，装入发酵罐内灭菌，待温度降到37℃时，用二级种子进行接种，并在通气和搅拌的条件下培养至活菌数达到10亿个/ml以上时停止培养。

枯草芽孢杆菌发酵培养基配方：玉米粉30千克、豆粕粉30千克、庶糖20千克、氯化钠5千克、硫酸锰1千克加水至1000千克，装入发酵罐内灭菌。

接种、培养及干燥：待温度降到37℃时，按10％的比例接入枯草芽孢杆菌菌种，并在通气和搅拌的条件下培养至活菌数达到10亿个/ml以上并有70％以上的活菌形成芽孢时停止培养，将培养液与灭菌玉米芯按1∶1的比例混合均匀，低温干燥至水分小于10％后备用。

酿酒酵母培养干燥物的制作方法：一级菌种的扩培为普通试管培养基培养，二级种子的扩培为转瓶液体培养法，培养基成分控制在还原糖浓度为45％±10％，含0.2～0.45％硫酸铵和0.1％磷酸，pH为5.0～7.0，培养方法按常规法进行。

将庶糖30千克、玉米粉10千克、尿素3千克混合后加水至1000千克成培养基后入罐灭菌，待温度降至28℃时，取二级种子培养液2千克接种于本培养液中，在搅拌条件下培养15小时加入尿素2千克，培养到20小时再加入尿素2千克，到24小时左右检查活细胞总量，待活细胞总量大于5亿/ml停止培养。用沉降式高速离心机离心后，取沉淀物低温通风干燥至水分小于10％后备用。

将以上各菌培养干燥物按木霉孢子型培养干燥物50千克、枯草芽孢杆菌培养干燥物25千克、酿酒酵母细胞培养干燥物25千克的比例混合，制成组分一。

组分二制备方法：

粪肠(链)球菌的制备方法：粪肠(链)球菌(原种为中科院微生物研究所提供的1.3.1号菌种)一、二级菌种的扩培为试管培养及三角瓶培养，一、二级菌种的制作方法按常规法制作。

将脱脂牛奶20千克；葡萄糖(50％)11千克、蛋白胨3千克、吐温-80 500克、磷酸氢二钾2千克、硫酸镁200克、硫酸锰50克、碳酸钙20千克加水至总量1000千克成培养基，调节pH值到6.8，先入发酵罐灭菌，在搅拌条件下升温至30℃，接入二级菌种，培养20小时，当每ml培养液中的活菌数达到10亿个以上时，再加入10千克灭菌脱脂牛奶和50克Vc，待充分搅拌均匀后按1∶1的比例与经过灭菌消毒的玉米芯粉混合均匀，然后用流化床干燥至水分小于10％备用。干燥时热风的最高温度不应超过50℃。

植物乳杆菌的制备方法：菌种由轻工业部食品发酵研究院提供，菌号：6026，生产培养基配方及培养方法与粪肠球菌相同，载体及干燥方法与粪肠球菌相同。

戊糖片球菌的制备方法：菌种由轻工业部食品发酵研究院提供，菌号：10196，生产培养基配方及培养方法与粪肠球菌相同，培养温度为26℃，载体及干燥方法与粪肠球菌相同。

将以上各菌培养干燥物按粪肠球菌培养干燥物20％、植物乳杆菌培养干燥物40％、戊糖片球菌培养干燥物40％的比例混合，制成组分二。

最后，将组分一27千克、组分二40千克再加栽体低聚木糖30千克、无水氯化钙3千克混合制成菌体混合物100千克，经检验、包装即为灌木生物饲料专用复合菌剂成品。

无水氯化钙须在分装成小袋时，在封口前加入小袋内用于吸收产品中的水分，提高菌的存活率，延长保质期。

Claims (1)

1、灌木生物饲料专用复合菌剂的制备方法，其特征是：本制备方法分二步进行发酵转化，第一步是好氧菌发酵阶段，组分一用于好氧菌发酵阶段，第二步是厌氧菌发酵阶段，组分二用于厌氧菌发酵阶段，组分一制作方法：

1、木霉孢子型培养干燥物的制作方法：一、二级菌种的扩培为试管培养及三角瓶培养，一、二级菌种的制作方法按常规法制作，曲盘培养基制作方法是将小麦麸粉50％、玉米芯粉49.6％先混合均匀，用0.4％无水氯化钙加水的溶液均匀喷洒，再用pH4.5的硫酸水溶液拌湿，使含水量达到55％～60％，搅拌均匀后后装入曲盘灭菌，待温度降到35℃时，将三角瓶中的菌种装入灭菌曲盘，在无菌条件下35℃培养，培养过程中观察孢子数量，当孢子数量达到5亿个/克以上时，用低温干燥至水分小于10％后贮存备用；

2、枯草芽孢杆菌培养干燥物的制作方法：一、二级菌种的扩培为试管培养及三角瓶培养，一、二级菌种的制作方法按常规法制作，三级菌种的制备方法是将玉米粉3％、豆粕粉3％、庶糖2％、氯化钠0.5％、硫酸锰0.1％加水至100％装入发酵罐内灭菌成培养基，待温度降到37℃时，接入二级枯草芽孢杆菌菌种，并在通气和搅拌的条件下培养至活菌数达到10亿个/ml以上停止培养，枯草芽孢杆菌培养干燥物的制作方法是将玉米粉3％、豆粕粉3％、庶糖2％、氯化钠0.5％、硫酸锰0.1％加水至100％，装入容积为三级种子罐10倍量大的发酵罐内灭菌，待温度降到36～38℃时，按10％的比例接入枯草芽孢杆菌三级菌种，并在通气和搅拌的条件下培养至活菌数达到10亿个/ml以上并有70％以上的活菌形成芽孢时停止培养，然后将培养液与灭菌玉米芯按1∶1的比例混合均匀，低温干燥至水分小于10％后贮存备用；

将培养液与灭菌玉米芯按1∶1的比例混合均匀，低温干燥至水分小于10％后备用；

枯草芽孢杆菌培养干燥物的制作方法是将玉米粉3％，豆粕粉3％，庶糖2％，氯化钠0.5％，硫酸锰0.1％，加水至100％，装入容积为三级种子罐10倍量大的发酵罐内灭菌，待温度降到36～38℃时，按10％的比例接入枯草芽孢杆菌三级菌种，并在通气和搅拌的条件下培养至活菌数达到10亿个/ml以上并有70％以上的活菌形成芽孢时停止培养。然后将培养液与灭菌玉米芯按1∶1的比例混合均匀，低温干燥至水分小于10％后贮存备用；

3、酿酒酵母培养干燥物的制作方法：一级菌种的扩培为普通试管培养基培养，二级种子的扩培为转瓶液体培养法，培养基成分控制在还原糖浓度为45％±10％，含0.2～0.45％硫酸铵和0.1％磷酸，pH为5.0～7.0，培养方法按常规法进行，酿酒酵母细胞培养干燥物的制备方法是将庶糖3％、玉米粉1％、尿素0.3％混合后加水至100％成培养基装入培养罐中灭菌，待温度降至27～29℃时，取二级种子培养液0.2％接种于本培养液中，在搅拌条件下培养14～15小时，加入尿素0.2％，培养19～20小时，再加入尿素0.2％，到24小时检查活细胞总量，待活细胞总量大于5亿个/ml时停止培养，用沉降式高速离心机离心后，取沉淀物低温通风干燥至水分小于10％后贮存备用；

将以上各菌培养干燥物按木霉孢子型培养干燥物48～52％、枯草芽孢杆菌培养干燥物24～26％、酿酒酵母细胞培养干燥物24～26％的比例混合，制成组分一；

组分二制作方法：

1、粪肠球菌的制备方法：粪肠球菌原种为中科院微生物研究所提供的1.3.1号菌种，一、二级菌种的扩培为试管培养及三角瓶培养，一、二级菌种的制作方法按常规法制作，粪肠球菌培养干燥物制备方法是将脱脂牛奶2％、葡萄糖1.1％、蛋白胨0.3％、吐温-80 0.05％、磷酸氢二钾0.2％、硫酸镁0.02％、硫酸锰0.005％、碳酸钙2％加水至总量100％成培养基，调节pH值到6.8，在发酵罐中灭菌，在搅拌条件下将温度降至29～31℃，接入二级菌种，培养18～20小时，当培养液中的活菌数达到10亿个/ml以上时，再加入1％灭菌脱脂牛奶和0.005％的Vc，待充分搅拌均匀后，按1∶1的比例与经过灭菌消毒的玉米芯粉混合均匀，然后干燥至水分小于10％后贮存备用；

2、植物乳杆菌的制备方法：菌种由轻工业部食品发酵研究院提供，菌号：6026，生产培养基配方及培养方法与粪肠球菌相同，载体及干燥方法与粪肠球菌相同；

3、戊糖片球菌的制备方法，菌种由轻工业部食品发酵研究院提供，菌号：10196，生产培养基配方及培养方法与粪肠球菌相同，培养温度为26℃，载体及干燥方法与粪肠球菌相同；

将以上各菌培养干燥物按粪肠球菌培养干燥物19～21％、植物乳杆菌培养干燥物38～42％、戊糖片球菌培养干燥物38～42％的比例混合，制成组分二；

最后，将组分一、组分二再加栽体低聚木糖、无水氯化钙混合制成菌体混合物，经检验、包装即为灌木生物饲料专用复合菌剂成品。成品中组分一、组分二、低聚木糖、无水氯化钙各占百分比为26～28％、38～42％、28～32％、3％。

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