CN101309703A - 抗cd3抗体组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及抗CD3抗体的治疗性、诊断性和/或预防性组合物和制剂，以及这类组合物和制剂的使用方法。

Description

抗CD3抗体组合物
技术领域
本发明涉及抗CD3抗体的组合物和制剂，以及这类组合物和制剂的使用方法。
背景技术
已经证实，T细胞受体复合体CD3ε信号分子的抗体是有效的免疫抑制剂，并且能够在自身免疫性疾病的治疗中发挥作用。因此，制备抗CD3抗体的改进的方法、纯化抗CD3抗体的方法以及包含抗CD3抗体的药物组合物将会是有用的。
发明内容
本发明提供了直接特异性针对CD3的单克隆抗体的组合物和制剂。本发明还提供了制备抗CD3单克隆抗体的方法，以及纯化抗CD3抗体的方法。
本发明所述的抗CD3抗体的药物组合物包括在3.0至6.2的范围内有效的pH缓冲剂；盐；表面活性剂；以及药物有效量的抗CD3抗体。
所述的盐是，例如，氯化钠；所述的表面活性剂是，例如，离子型表面活性剂，阴离子型表面活性剂或者两性离子表面活性剂。例如，所述表面活性剂是一种离子型表面活性剂比如是一种聚山梨醇酯，例如，聚山梨醇酯80。所述的pH缓冲剂包括，例如，醋酸钠。在某些实施方式中，所述pH缓冲剂选自柠檬酸钠/柠檬酸，以及醋酸钠/醋酸。
所述的pH缓冲剂以10毫摩至50毫摩的范围的量存在是有效的。用于本发明所述的组合物中的pH缓冲剂提供了5.0至6.0的pH范围。例如，所述pH缓冲剂提供了5.2至5.8的pH范围。在某些实施方式中，所述pH缓冲剂提供了5.4至5.6的pH范围。例如，所述pH缓冲剂提供了大约5.5的pH值。
在本发明所述的组合物中，所述的盐以100毫摩至140毫摩的范围的量存在。所述的表面活性剂的重量/体积比为0.02％。所述的抗CD3抗体的药物有效量被设定为每剂量中提供0.05毫克至10毫克的抗CD3抗体。在某些实施方式中，所述的抗CD3抗体的药物有效量被设定为每剂量中提供0.1毫克至5毫克的抗CD3抗体。例如，所述的抗CD3抗体的药物有效量被设定为每剂量中提供0.5毫克至3.0毫克的抗CD3抗体。
在本发明所述的抗CD3抗体组合物中，所述的抗CD3抗体是，例如，28F11，27H5，23F10，15C3，Orthoclone OKT3，人类OKT3γ1(HOKT3γ1)或者ChAglyCD3。
本发明所述的抗CD3抗体药物组合物包括pH缓冲剂，所述pH缓冲剂包括在3.0至6.2的范围内有效的醋酸钠，氯化钠，该组合物还包括表面活性剂，所述表面活性剂包括聚山梨醇酯，以及药物有效量的抗CD3抗体。所述的聚山梨醇酯是，例如，聚山梨醇酯80。所述的pH缓冲剂以10毫摩至50毫摩的范围的量存在是有效的。用于本发明所述的组合物中的pH缓冲剂提供了5.0至6.0的pH范围。例如，所述pH缓冲剂提供了5.2至5.8的pH范围。在某些实施方式中，所述pH缓冲剂提供了5.4至5.6的pH范围。例如，所述pH缓冲剂提供了大约5.5的pH值。
在本发明所述的组合物中，所述的盐以100毫摩至140毫摩的范围的量存在。所述的表面活性剂的重量/体积比为0.02％。所述的抗CD3抗体的药物有效量被设定为每剂量中提供0.05毫克至10毫克的抗CD3抗体。在某些实施方式中，所述的抗CD3抗体的药物有效量被设定为每剂量中提供0.1毫克至5毫克的抗CD3抗体。例如，所述的抗CD3抗体的药物有效量被设定为每剂量中提供0.5毫克至3.0毫克的抗CD3抗体。所述的抗CD3抗体是，例如，28F11，27H5，23F10，15C3，Orthoclone OKT3，人类OKT3γ1(HOKT3γ1)或者ChAglyCD3。
在本发明所述的抗CD3抗体组合物的一种实施方式中，所述的药物组合物每剂量中含有0.5毫克至3.0毫克的抗CD3抗体，1至3毫克的醋酸钠，5至9毫克的氯化钠，以及0.1至0.3毫克的聚山梨醇酯80，用水将该组合物调整至1.0毫升。例如，所述药物组合物含有2.05毫克的醋酸钠，7.31毫克的氯化钠以及0.216毫克的聚山梨醇酯80。所述药物组合物的pH值是，例如，5.5。
本发明还提供了治疗宿主自身免疫性疾病或者炎性疾病的方法，该方法是给需要治疗的宿主给药有效剂量的抗CD3抗体，所述的有效剂量被设定为在5天时间内每天每剂量中提供0.05毫克至10毫克的抗CD3抗体。例如，有效剂量的抗CD3抗体被设定为在5天时间内每天每剂量中提供0.1毫克至5.0毫克的抗CD3抗体。优选的，有效剂量的抗CD3抗体被设定为在5天时间内每天每剂量中提供0.5毫克至3.0毫克的抗CD3抗体。在本发明所述的方法中，所述的抗CD3抗体组合物通过静脉内给药。例如，所述组合物通过持续静脉输注的方式给药。
本发明还提供了治疗或者预防宿主的移植排斥反应的方法，该方法在移植的同时或者移植之后以有效剂量向宿主给药抗CD3抗体，并且在此之后每天增加剂量，直至达到50％或者更高的TCR-CD3饱和度，之后给药5天的日剂量，全部治疗过程不超过8天。在本发明所述的方法中，所述的抗CD3抗体组合物通过静脉内给药。例如，所述组合物通过持续静脉输注的方式给药。优选的，有效剂量的抗CD3抗体导致的细胞因子的释放水平低于WHO(世界卫生组织)毒性分级标度中的3度。
本发明提供的抗CD3抗体组合物在0.05毫克/天至10毫克/天的剂量范围内给药。优选的，所述的抗CD3抗体组合物在0.1毫克/天至5.0毫克/天的剂量范围内给药，更优选的，所述的抗CD3抗体组合物在0.5毫克/天至3.0毫克/天的剂量范围内给药。例如，所述的抗CD3抗体组合物的给药剂量选自0.5毫克/天，0.6毫克/天，0.7毫克/天，0.8毫克/天，0.9毫克/天，1.0毫克/天，1.1毫克/天，1.2毫克/天，1.3毫克/天，1.4毫克/天，1.5毫克/天，1.6毫克/天，1.7毫克/天，1.8毫克/天，1.9毫克/天，2.0毫克/天，2.1毫克/天，2.2毫克/天，2.3毫克/天，2.4毫克/天，2.5毫克/天，2.6毫克/天，2.7毫克/天，2.8毫克/天，2.9毫克/天，3.0毫克/天。
范例性的单克隆抗体包括本发明提供的28F11，27H5，23F10，和15C3，以及Orthoclone OKT3，人类OKT3γ1(HOKT3γ1)和ChAglyCD3。优选的，所述的单克隆抗体是结合在与28F11，27H5，23F10或者15C3相同的表位的抗体。同样优选的，所述抗体是完全人源化抗体(“huCD3抗体”)。所述的抗CD3抗体具有一种或者多种下述特征：所述的抗体与CD3阳性(CD3+)细胞相结合，而不与CD3阴性(CD3-)细胞相结合；所述的抗CD3抗体包括抗原性修饰，这种修饰包括改变(例如，降低)细胞表面的表达水平或者CD3或T细胞受体(TcR)的活性；所述的抗CD3抗体抑制鼠类抗人类OKT3单克隆抗体与T淋巴细胞的结合；或者所述的抗CD3抗体结合于CD3的表位，所述CD3完全包括或者部分包括氨基酸序列EMGGITQTPYKVSISGT(序列57)。所述的抗CD3抗体与鼠类抗CD3抗体OKT3竞争性的与CD3相结合，暴露的抗CD3抗体去除或者掩蔽CD3和/或T细胞受体(TcR)，而不会影响CD2、CD4或者CD8的细胞表面表达。
对鼠类抗人类OKT3单克隆抗体与T淋巴细胞的结合的抑制表现为鼠类OKT3抗体与CD3在T淋巴细胞的细胞表面形成复合体的能力的降低。
抗CD3抗体含有重链可变区，其具有序列2、序列6、序列10或者序列22所示的氨基酸序列，还含有轻链可变区，其具有序列4、序列8、序列16-20或者序列25-26所示的氨基酸序列。优选的，所述的三个重链互补性决定区(CDR)包括一种氨基酸序列，该氨基酸序列与选自GYGMH(序列27)；VIWYDGSKKYYVDSVKG(序列28)；QMGYWHFDL(序列29)；SYGMH(序列33)；IIWYDGSKKNYADSVKG(序列34)；GTGYNWFDP(序列35)；以及AIWYNGRKQDYADSVKG(序列44)的组中的一个序列具有至少90％、92％、95％、97％、98％、99％或者更高的同源性，并且具有三个互补性决定区(CDR)的轻链包括一种氨基酸序列，该氨基酸序列与选自RASQSVSSYLA(序列30)；DASNRAT(序列31)；QQRSNWPPLT(序列32)；RASQSVSSSYLA(序列36)；GASSRAT(序列37)；QQYGSSPIT(序列38)；RASQGISSALA(序列39)；YASSLQS(序列40)；QQYYSTLT(序列41)；DASSLGS(序列42)；WASQGISSYLA(序列43)；QQRSNWPWT(序列45)；DASSLES(序列46)；以及QQFNSYPIT(序列47)的组中的一个序列具有至少90％、92％、95％、97％、98％、99％或者更高的同源性。所述的抗体结合了CD3。
本发明提供的抗CD3抗体表现出下述特征中的至少两个或者更多(即，两个或者更多，三个或者更多，四个或者更多，五个或者更多，六个或者更多，七个或者更多，八个或者更多，九个或者更多，十个或者更多，十一个或者更多)：所述的抗体含有一个重链可变区(VH)，该可变区由人类DP50VH胚系基因序列所编码，或者由与人类DP50VH胚系基因序列同源的核酸序列所编码；所述的抗体含有一个轻链可变区(VL)，该可变区由人类L6VL胚系基因序列所编码，或者由与人类L6VL胚系基因序列同源的核酸序列所编码；所述的抗体含有一个轻链可变区(VL)，该可变区由人类L4/18a VL胚系基因序列所编码，或者由与人类L4/18a VL胚系基因序列同源的核酸序列所编码；所述的抗体包括一个VH CDR1(互补性决定区1)区域，该区域包括氨基酸序列YGMH(序列58)；所述的抗体包括一个VH CDR2(互补性决定区2)区域，该区域包括氨基酸序列DSVKG(序列59)；所述的抗体包括一个VH CDR2(互补性决定区2)区域，该区域包括氨基酸序列IWYX1GX2X3X4X5YX6DSVKG(序列60)；所述的抗体包括一个VH CDR3(互补性决定区3)区域，该区域包括氨基酸序列XAXBGYXCXDFDXE(序列61)；所述的抗体包括一个VH CDR3区域，该区域包括氨基酸序列GTGYNWFDP(序列62)或者氨基酸序列QMGYWHFDL(序列63)；所述的抗体包括氨基酸序列VTVSS(序列64)，该序列位于CDR3(互补性决定区3)区域的C-末端位置处，所述位置位于CDR3(互补性决定区3)区域的C-末端可变区内；所述的抗体包括氨基酸序列GTLVTVSS(序列65)，该序列位于CDR3(互补性决定区3)区域的C-末端位置处，所述位置位于CDR3(互补性决定区3)区域的C-末端可变区内；所述的抗体包括氨基酸序列WGRGTLVTVSS(序列66)，该序列位于CDR3(互补性决定区3)区域的C-末端位置处，所述位置位于CDR3(互补性决定区3)区域的C-末端可变区内；所述的抗体结合的表位完全包括或者部分包括氨基酸序列EMGGITQTPYKVSISGT(序列57)；以及所述的抗体包括突变，这种突变发生在重链的第234、235、265、或者297中的一个或者多个位置处的氨基酸残基上，并且，与使用重链的第234、235、265、或者297中的一个或者多个位置处的氨基酸残基没有发生突变的抗体相比，当所述抗体存在时，T细胞对细胞因子的释放减少了。本发明提供的对重链残基的计数用EU指数表示(参见Kabat等人所著的“Proteins ofImmunological Interest”(《具有免疫学重要性的蛋白》)，USDept.of Health&Human Services(美国健康与人类服务部)(1983))，正如例如在美国专利No.5624821以及美国专利No.5648260中所述，上述文献的全部内容在此引入作为参考。
所述的抗CD3抗体可以含有氨基酸突变。典型的，所述的突变发生在恒定区。这种突变使得到的抗体具有变化的效应子功能。抗体的效应子功能的变化是通过改变——即，加强或者减弱所述抗体与效应分子的亲和性来改变的，所述效应分子是例如Fc受体或者补体成分。例如，所述的突变使得到的抗体能够减少T细胞对细胞因子的释放。例如，所述的突变发生在重链的第234、235、265、或者297中的一个或者多个位置处的氨基酸残基上。优选的，所述的突变导致在234、235、265或者297中的任意位置处存在丙氨酸残基，或者在235位置处存在谷氨酸盐残基，或者导致上述两种情况同时发生。术语“细胞因子”指的是在本领域已知的、与在细胞表面表达的胞外受体相结合并因此调节细胞功能的所有人类细胞因子，包括但不局限于白细胞介素-2(IL-2)，干扰素-γ(IFN-γ)，肿瘤坏死因子-a(TNF-a)，白细胞介素-4(IL-4)，白细胞介素-5(IL-5)，白细胞介素-6(IL-6)，白细胞介素-9(IL-9)，白细胞介素-10(IL-10)，以及白细胞介素-13(IL-13)。
优选的，本发明提供的抗CD3抗体含有一种或者多种突变，这种突变能够阻止由重链恒定区介导的一种或者多种细胞因子的体内释放。
本发明提供的完全人源化CD3抗体包括，例如，在Fc区域中发生L234L235→A234E235的突变，这样，当暴露于抗CD3抗体时，细胞因子的释放被显著的减少或者消除了。正如下面实施例4中的描述，当将抗CD3抗体暴露于人类白细胞中时，本发明提供的在Fc区域中发生L234L235→A234E235突变的抗CD3抗体减少或者消除了细胞因子的释放，而下面描述的突变则保持了显著的细胞因子释放能力。例如，细胞因子释放的显著减少是通过下述方法来定义的：将暴露于抗CD3抗体的细胞因子的释放水平与暴露于另外一个抗CD3抗体的细胞因子的释放水平进行比较，前者抗体在其Fc区域中具有L234L235→A234E235的突变，后者抗体具有一种或者多种如下描述的突变。在Fc区域发生的其他突变包括，例如，L234L235→A234A235，L235→E235，N297→A297，以及D265→A265。
或者，编码所述的抗CD3抗体的核酸包括一种或者多种突变，这种突变用胚系核酸残基取代了核酸残基。“胚系核酸残基”指的是在编码恒定区或者可变区的胚系基因中天然存在的核酸残基。因此，本发明提供的抗体包括一种或者多种突变，这种突变用胚系核酸残基取代了核酸残基。胚系抗体基因包括，例如DP50(收录号：IMGT/EMBL/Genbank/DDBJ：L06618)，L6(收录号：IMGT/EMBL/Genbank/DDBJ：X06618)以及L14/18a(收录号：EMBL/Genbank/DDBJ：Z00006)。
huCD3抗体(完全人源化抗体)的重链来自于胚系V(可变)基因诸如，例如，DP50胚系基因。所述的DP50胚系基因的核酸序列以及氨基酸序列包括，例如，下面所示的核酸序列以及氨基酸序列：
tgattcatgg agaaatagag agactgagtg tgagtgaaca tgagtgagaa aaactggatt
tgtgtggcat tttctgataa cggtgtcctt ctgtttgcag gtgtccagtg tcaggtgcag
ctggtggagt ctgggggagg cgtggtccag cctgggaggt ccctgagact ctcctgtgca
gcgtctggat tcaccttcag tagctatggc atgcactggg tccgccaggc tccaggcaag
gggctggagt gggtggcagt tatatggtat gatggaagta ataaatacta tgcagactcc
gtgaagggcc gattcaccat ctccagagac aattccaaga acacgctgta tctgcaaatg
aacagcctga gagccgagga cacggctgtgtattactgtg cgagagacac ag  (SEQID
NO：67)
VQCQVQLVES GGGVVQPGRS LRLSCAASGF TFSSYGMHWV RQAPGKGLEW VAVIWYDGSN
KYYADSVKGR FTI SRDNSKN TLYLQMNSLR AEDTAVYYCA R(SEQID NO：68)
所述的huCD3抗体包括一个由人类DP50VH胚系基因序列编码的重链可变区(VH)。DP50VH胚系基因序列在例如附图5中的序列48中所示。本发明提供的huCD3抗体包括一个由核酸序列编码的VH区域，所述的核酸序列与DP50VH胚系基因序列具有至少80％的同源性。优选的，所述的核酸序列与DP50VH胚系基因序列具有至少90％、95％、96％、97％的同源性，并且更优选的，与DP50VH胚系基因序列具有至少98％、99％的同源性。所述的huCD3抗体的VH区与由DP50VH胚系基因序列编码的VH区的氨基酸序列具有至少80％的同源性。优选的，所述的huCD3抗体的VH区的氨基酸序列与由DP50VH胚系基因序列编码的氨基酸序列具有至少90％、95％、96％、97％的同源性，并且更优选的，与由DP50VH胚系基因序列编码的序列具有至少98％、99％的同源性。
所述的huCD3抗体还包括一个由人类L6或者L14/18a VL胚系基因序列编码的轻链可变区(VL)。人类L6VL胚系基因序列在例如附图6中的序列56中所示，人类L14/18a VL胚系基因序列在例如附图7中的序列53中所示。或者，所述的huCD3抗体包括一个由核酸序列编码的VL区域，所述的核酸序列与L6VL胚系基因序列或者L14/18a VL胚系基因序列具有至少80％的同源性。优选的，所述的核酸序列与L6VL胚系基因序列或者L14/18a VL胚系基因序列具有至少90％、95％、96％、97％的同源性，并且更优选的，与L6VL胚系基因序列或者L14/18a VL胚系基因序列具有至少98％、99％的同源性。所述的huCD3抗体的VL区与由L6VL胚系基因序列或者L14/18a VL胚系基因序列编码的VL区的氨基酸序列具有至少80％的同源性。优选的，所述的huCD3抗体的VL区的氨基酸序列与由L6VL胚系基因序列或者L14/18a VL胚系基因序列编码的氨基酸序列具有至少90％、95％、96％、97％的同源性，并且更优选的，与由L6VL胚系基因序列或者L14/18a VL胚系基因序列编码的序列具有至少98％、99％的同源性。
所述的huCD3抗体具有，例如部分保守的氨基酸序列，这些氨基酸序列是来自于DP50胚系的。例如，本发明使用的huCD3抗体的CDR1(互补性决定区1)区域至少具有连续的氨基酸序列YGMH(序列58)。
所述的抗CD3抗体的CDR2(互补性决定区2)至少包括例如连续的氨基酸序列DSVKG(序列59)。例如，所述的CDR2(互补性决定区2)区域包括连续的氨基酸序列IWYX1GX2X3X4X5YX6DSVKG(序列60)，其中X1、X2、X3、X4、X5以及X6代表任何氨基酸。例如，X1、X2、X3以及X4是亲水性氨基酸。在本发明使用的某些抗CD3抗体中，X1是天冬酰胺或者天冬氨酸，X2是精氨酸或者丝氨酸，X3是赖氨酸或者天冬酰胺，X4是赖氨酸或者谷氨酰胺，X5是天冬氨酸、天冬酰胺或者酪氨酸，和/或X6是缬氨酸或者丙氨酸。例如，所述的VHCDR2(互补性决定区2)区域包括选自下述组中的氨基酸序列：AIWYNGRKQDYADSVKG(序列69)，IIWYDGSKKNYADSVKG(序列70)，VIWYDGSKKYYVDSVKG(序列71)以及VIWYDGSNKYYADSVKG(序列72)。
抗CD3抗体的CDR3(互补性决定区3)区域至少包括例如连续的氨基酸序列XAXBGYXCXDFDXE(序列61)，其中XA、XB、XC、XD以及XE代表任何氨基酸。在本发明使用的某些抗CD3抗体中，XA和XB是中性氨基酸，XD是芳族氨基酸，和/或其中XE是疏水性氨基酸。例如，XA是甘氨酸或者谷氨酰胺，XB是苏氨酸或者甲硫氨酸，XC是天冬酰胺或者色氨酸，XD是色氨酸或者组氨酸，和/或XE是脯氨酸或者亮氨酸。例如，所述的CDR3(互补性决定区3)区域包括连续的氨基酸序列GTGYNWFDP(序列62)或者包括连续的氨基酸序列QMGYWHFDL(序列63)。
所述的抗CD3抗体包括一个骨架2区(FRW2)，该骨架2区含有氨基酸序列WVRQAPGKGLEWV(序列73)。本发明使用的抗CD3抗体包括一个骨架3区(FRW3)，该骨架3区含有氨基酸序列RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCA(序列74)。
某些抗CD3抗体包括连续的氨基酸序列VTVSS(序列64)，该序列位于CDR3(互补性决定区3)区域的C-末端位置处。例如，所述的抗体含有连续的氨基酸序列GTLVTVSS(序列65)，该序列位于CDR3(互补性决定区3)区域的C-末端位置处。其他的抗CD3抗体包括连续的氨基酸序列WGRGTLVTVSS(序列66)，该序列位于CDR3(互补性决定区3)区域的C-末端位置处。例如，序列66中的精氨酸残基被表示在28F11huCD3抗体的VH序列(序列2)和23F10huCD3抗体的VH序列(序列6)中。
在另外的方面，本发明提供用于了治疗、预防或者缓解免疫相关性疾病的症状的方法，该方法向宿主给药抗CD3抗体组合物。本发明提供的抗CD3抗体组合物的给药剂量在0.05毫克/天至10毫克/天的范围内。优选的，所述的抗CD3抗体组合物的给药剂量在0.1毫克/天至5.0毫克/天的范围内，并且更优选的，所述的抗CD3抗体组合物的给药剂量在0.5毫克/天至3.0毫克/天的范围内。例如，所述的抗CD3抗体组合物的给药剂量选自0.5毫克/天，0.6毫克/天，0.7毫克/天，0.8毫克/天，0.9毫克/天，1.0毫克/天，1.1毫克/天，1.2毫克/天，1.3毫克/天，1.4毫克/天，1.5毫克/天，1.6毫克/天，1.7毫克/天，1.8毫克/天，1.9毫克/天，2.0毫克/天，2.1毫克/天，2.2毫克/天，2.3毫克/天，2.4毫克/天，2.5毫克/天，2.6毫克/天，2.7毫克/天，2.8毫克/天，2.9毫克/天，以及3.0毫克/天。例如，将所述的抗CD3抗体组合物给药于患有或者倾向于患有炎症性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、多发性硬化症、风湿性关节炎或者I型糖尿病的患者。所述的组合物通过例如静脉内形式给药。可以设定其他形式的给药路径。例如，所述的抗CD3抗体组合物通过皮下、口服、肠道外、鼻内、肌肉内的形式给药，或者通过上述这些路径的任意组合的形式给药。
在另外的方面，本发明提供了治疗或者预防移植排斥反应的方法，该方法在移植之后以0.05毫克/天至10毫克/天的范围的量向宿主给药抗CD3抗体，并且每天加大剂量，直到达到50％或者更高水平的TCR-CD3饱和度，之后给药5天的日剂量，全部治疗过程不超过8天。优选的，所述的抗CD3抗体组合物的给药剂量在0.1毫克/天至5.0毫克/天的范围内，并且更优选的，所述的抗CD3抗体组合物的给药剂量在0.5毫克/天至3.0毫克/天的范围内。例如，所述的抗CD3抗体组合物的给药剂量选自0.5毫克/天，0.6毫克/天，0.7毫克/天，0.8毫克/天，0.9毫克/天，1.0毫克/天，1.1毫克/天，1.2毫克/天，1.3毫克/天，1.4毫克/天，1.5毫克/天，1.6毫克/天，1.7毫克/天，1.8毫克/天，1.9毫克/天，2.0毫克/天，2.1毫克/天，2.2毫克/天，2.3毫克/天，2.4毫克/天，2.5毫克/天，2.6毫克/天，2.7毫克/天，2.8毫克/天，2.9毫克/天，以及3.0毫克/天。
例如，所述的抗CD3抗体组合物在器官移植或者组织移植之后被用来治疗或者预防肾脏的排斥反应。所述的组合物可以被预防性的给药(例如，在急性排斥反应发生之前给药，以预防这种反应)，和/或所述的组合物在移植之后被用来治疗急性排斥反应。所述的组合物通过例如静脉内形式给药。可以设定其他形式的给药路径。例如，所述的抗CD3抗体组合物通过皮下、口服、肠道外、鼻内、肌肉内的形式给药，或者通过上述这些路径的任意组合的形式给药。
本发明提供的抗CD3抗体组合物被储存在适当的容器中，例如小瓶中，使得每个容器中的抗CD3抗体组合物的剂量在1至10毫克/容器的范围内。例如，每个容器中的抗CD3抗体组合物的剂量在2至5毫克/容器的范围内。优选的，每个容器中的剂量在3.5至4.5毫克/容器的范围内，例如，每个容器中的剂量为4毫克/容器。
任选的，向所述的宿主进一步给药第二制剂，例如但不局限于，抗炎症化合物或者免疫抑制剂化合物。适当的化合物包括，但不局限于甲氨蝶呤，环胞霉素A(包括，例如，环胞霉素微乳剂)，他克莫司，类固醇，他汀类，I型干扰素，英利昔单抗(因福利美)，依坦西普(依那西普)以及修美乐(阿达木单抗)。例如，也可以向患有I型糖尿病或者成人隐匿性自身免疫性糖尿病的宿主给药第二制剂，例如，人胰高血糖素样肽-1(GLP-1)或者β细胞休眠化合物(即，减少或者抑制胰岛素释放的化合物，例如钾通道开放剂)。
在另外的方面，本发明提供了通过亲和色谱、离子交换色谱以及羟基磷灰石色谱纯化抗CD3抗体的方法。例如，所述的亲和色谱是蛋白质A色谱。所述的离子交换色谱是，例如，阴离子交换色谱。
附图说明
附图1A-1D是一系列核酸序列和氨基酸序列的代表，这类核酸序列和氨基酸序列来自于huCD3抗体28F11的轻链可变区和重链可变区，其中在CDR(互补性决定区)区域使用方框来强调。
附图2A-2D是一系列核酸序列和氨基酸序列的代表，这类核酸序列和氨基酸序列来自于huCD3抗体23F10的轻链可变区和重链可变区。
附图3A-3D是一系列核酸序列和氨基酸序列的代表，这类核酸序列和氨基酸序列来自于huCD3抗体27H5的轻链可变区和重链可变区。附图3E表示的是来自于克隆27H5的五个轻链的比对，其中星号(*)代表保守氨基酸序列；冒号(：)代表保守性突变；而句号(.)代表半保守性突变。
附图4A-4D是一系列核酸序列和氨基酸序列的代表，这类核酸序列和氨基酸序列来自于huCD3抗体15C3的轻链可变区和重链可变区。
附图5描述的是15C3huCD3抗体、27H5huCD3抗体以及28F11huCD3抗体的重链可变区与DP-50胚系序列、人类重链连接序列5-02、以及人类重链连接序列2之间的比对。标示出了每个序列的CDR(互补性决定区)区域。
附图6描述的是15C3huCD3抗体以及28F11huCD3抗体的VκIII可变区(可变轻链1，即，“VL1”)与L6胚系序列、人类κ连接序列4、以及人类κ连接序列1之间的比对。标示出了每个序列的CDR(互补性决定区)区域。
附图7描述的是15C3VL2(可变轻链2，即，“VL2”)huCD3抗体以及27H5VL2huCD3抗体的VκI可变区与L4/18a胚系序列、人类κ连接序列4、以及人类κ连接序列5之间的比对。标示出了每个序列的CDR(互补性决定区)区域。
附图8描述的是27H5VL1huCD3抗体的VκII可变区与DPK22、以及人类κ连接序列5之间的比对。标示出了每个序列的CDR(互补性决定区)区域。
具体实施方式
本发明提供了单克隆抗体的组合物及药剂，所述的单克隆抗体是例如完全人源化单克隆抗体，其特异性针对CD3ε链(CD3ε)。本发明提供的完全人源化抗体指的是huCD3抗体。
本发明提供的组合物具有3.0至7.0的pH范围。优选的，该组合物具有5.0至6.0的pH范围，并且更优选的，该组合物具有5.2至5.8的pH范围，并且最优选的，该组合物具有5.4至5.6的pH范围。例如，在一种实施方式中，该组合物具有5.5的pH值。
本发明使用的抗CD3抗体与一类CD3相结合，所述的CD3完全包括或者部分包括来自于经过处理后的人类CD3ε亚基的位置27处至位置43处(即，不含有前导序列)的氨基酸残基。所述的人类CD3ε亚基的氨基酸序列被表示在例如Genbank收录号NP_000724；AAA52295；P07766；A32069；CAA27516；以及AAH49847中。例如，所述的抗CD3抗体与CD3表位相结合，该表位完全包括或者部分包括氨基酸序列EMGGITQTPYKVSISGT(序列57)。与这种表位相结合的huCD3单克隆抗体的一个范例性的例子是本发明提供的28F11抗体。所述的28F11抗体包括一个重链可变区(序列2)，该重链可变区由序列1所示的核酸序列所编码，还包括一个轻链可变区(序列4)，该轻链可变区由序列3所示的核酸序列所编码(附图1A-1D)。
所述的氨基酸包含了由Chothia等人于1989年、E.A.Kabat等人于1991年定义的互补性决定区(CDR)，这类决定区在附图1B和附图1D以及附图5和附图6中用方框标示出来(参见Chothia C等人(于1989年)在Nature(《自然》)342：877-883中发表的文章；Kabat EA等人(于1991年)所著的Sequences ofProtein of immunological interest，Fifth Edition，US Department ofHealth and Human Services，US Government Printing Office(《具有免疫学重要性的蛋白序列》，第5版，美国健康与人类服务部，美国政府印务局))。所述的28F11抗体的重链互补性决定区具有下述序列：GYGMH(序列27)；VIWYDGSKKYYVDSVKG(序列28)以及QMGYWHFDL(序列29)。所述的28F11抗体的轻链互补性决定区具有下述序列：RASQSVSSYLA(序列30)；DASNRAT(序列31)以及QQRSNWPPLT(序列32)。
如附图2A-2D中所示，所述的23F10抗体包括一个重链可变区(序列6)，该重链可变区由序列5所示的核酸序列所编码，还包括一个轻链可变区(序列8)，该轻链可变区由序列7所示的核酸序列所编码。所述的氨基酸包含了由Chothia等人于1989年、E.A.Kabat等人于1991年定义的互补性决定区(CDR)，这类决定区在附图2B和附图2D中用方框标示出来。所述的23F10抗体的重链互补性决定区具有下述序列：GYGMH(序列27)；VIWYDGSKKYYVDSVKG(序列28)以及QMGYWHFDL(序列29)。所述的23F10抗体的轻链互补性决定区具有下述序列：RASQSVSSYLA(序列30)；DASNRAT(序列31)以及QQRSNWPPLT(序列32)。
如附图3A-3D中所示，所述的27H5抗体包括一个重链可变区(序列10)，该重链可变区由序列9所示的核酸序列所编码，还包括一个选自氨基酸序列16-20的轻链可变区，该轻链可变区由序列11-15所示的核酸序列所编码。所述的氨基酸包含了由Chothia等人于1989年、E.A.Kabat等人于1991年定义的互补性决定区(CDR)，这类决定区在附图3B、附图3D、附图5以及附图7-8中用方框标示出来。所述的27H5抗体的重链互补性决定区具有下述序列：SYGMH(序列33)；IIWYDGSKKNYADSVKG(序列34)以及GTGYNWFDP(序列35)。所述的27H5抗体的轻链互补性决定区具有下述序列：RASQSVSSSYLA(序列36)；GASSRAT(序列37)；QQYGSSPIT(序列38)；RASQGISSALA(序列39)；YASSLQS(序列40)；QQYYSTLT(序列41)；DASSLGS(序列42)；以及WASQGISSYLA(序列43)。
如附图4A-4D中所示，所述的15C3抗体包括一个重链可变区(序列22)，该重链可变区由序列21所示的核酸序列所编码，还包括一个选自氨基酸序列25-26的轻链可变区，该轻链可变区由序列23-24所示的核酸序列所编码。所述的氨基酸包含了由Chothia等人于1989年、E.A.Kabat等人于1991年定义的互补性决定区(CDR)，这类决定区在附图4B、附图5D、以及附图5-7中用方框标示出来。所述的15C3抗体的重链互补性决定区具有下述序列::SYGMH(序列33)；IIWYDGSKKNYADSVKG(序列34)以及GTGYNWFDP(序列35)。所述的15C3抗体的轻链互补性决定区具有下述序列：RASQSVSSYLA(序列30)；DASNRAT(序列31)；QQRSNWPWT(序列45)；RASQGISSALA(序列39)；DASSLES(序列46)；QQFNSYPIT(序列47)。
那些包括与序列2、序列6、序列10或者序列22所示的氨基酸序列具有至少90％、92％、95％、97％、98％、99％或者更高同源性的重链可变氨基酸序列，和/或与序列4、序列8、序列16-20或者序列25-26所示的氨基酸序列具有至少90％、92％、95％、97％、98％、99％或者更高同源性的轻链可变氨基酸序列的抗体也包括在本发明使用的抗CD3抗体的范围之内。
或者，所述的单克隆抗体是与28F11，27H5，23F10或者15C3结合于相同表位的抗体。
除非特别定义，与本发明相关的科学术语和技术术语应当具备本领域普通技术人员普遍理解的含义。并且，除非上下文的需要，单数形式的术语应当包括复数形式，而复数形式的术语应当包括单数形式。通常，本发明描述的与细胞及组织培养、分子生物学、以及蛋白和寡核苷酸、多核苷酸化学及杂交反应相关的名称和技术都是本领域熟知的并且普遍使用的。重组DNA，寡核苷酸的合成，以及组织的培养和转化(例如，电穿孔，脂质转染法)都采用标准技术。酶反应和纯化技术按照制造商的说明书来完成，或者按照本领域普遍使用的技术或根据本发明的描述来完成。前述的技术和操作大体上按照本领域熟知的常规方法来完成，并且根据本说明书中引用的和讨论的各种综合文献以及更具体的文献中的描述来完成。例如参见Sambrook等人所著的Molecular Cloning：A Laboratory Mannual(《分子克隆：实验室手册》)(2d ed.，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold SpringHarbor，N.Y.(1989)(第2版，冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约))。本发明描述的分析化学、合成有机化学、以及药物化学相关的名称、实验室操作规程和技术都是本领域熟知并且普遍使用的。使用标准技术进行化学合成、化学分析、药物的制备、配置以及运送、和对患者的治疗。
本发明公开内容中使用的下列术语，除非特别指明，应当被理解为具有下述含义：
这里使用的术语“抗体”指的是免疫球蛋白分子以及免疫球蛋白(Ig)分子的免疫学活性部分，即，含有能够特异性结合(发生免疫反应)抗原的抗原结合位点的分子。这类抗体包括，但不局限于，多克隆抗体，单克隆抗体，嵌合抗体，单链抗体，Fab片段，Fab’片段，以及F(ab’)2片段，以及Fab表达文库。“特异性结合”或者“发生免疫反应”指的是所述的抗体与所期望的抗原的一个或者多个抗原决定簇发生反应，而不与其他多肽发生反应(即，结合)，或者以相当低的亲和性(Kd＞10-6)与其他多肽相结合。
已知基础的抗体结构单元包括四聚体。每个四聚体由两对相同的多肽链组成，其中每一对具有一个“轻”链(大约25kDa)和一个“重”链(大约50-70kDa)。每条链的氨基末端部分包括一个大约100至110或者更多个氨基酸的可变区，主要负责对抗原的识别。每条链的羧基末端部分定义了一个恒定去，主要负责效应子功能。人类的轻链分为κ轻链和λ轻链。重链分为μ，δ，γ，α，或者ε，并且将所述抗体的同型物分别定义为IgM，IgD，IgA，以及IgE。在轻链和重链中，所述的可变区与恒定区通过一个具有大约12个或者更多个氨基酸的“J”区相连接，所述的重链还包括一个“D”区，该区具有大约10个或者更多个氨基酸。大体参见Fundamental Immunology Ch.7(《基础免疫学》Ch.7)(Paul，W.，ea.，2nd ed.Raven Press，N.Y.(1989)(Paul W编辑，第二版，Raven出版社，纽约))。每对轻链/重链的可变区构成了所述的抗体结合位点。
这里使用的术语“单克隆抗体”(MAb)或者“单克隆抗体组合物”指的是只含有一种类型的抗体分子的一类抗体分子的群体，所述的抗体分子由一种独特的轻链基因产物和一种独特的重链基因产品组成。特别的，在这类抗体分子群体的所有分子中，所述单克隆抗体的互补性决定区(CDRs)是相同的。单克隆抗体含有一个能够与抗原上的特定表位进行免疫反应的抗原结合位点，其中所述的抗原与该抗原结合位点具有独特的结合亲和性。
一般的，来自于人类的抗体分子关系到IgG，IgM，IgA，IgE以及IgD中的任意一类，它们之间的相互区别在于分子中存在的重链的性质。某些类别还具有子类，例如IgG1，IgG2以及其他。并且，在人类中，所述的轻链可以是κ链或者λ链。
这里使用的术语“表位”包括能够特异性结合于免疫球蛋白、scFv、或者T细胞受体的任何蛋白决定簇。术语“表位”包括能够特异性结合于免疫球蛋白或者T细胞受体的任何蛋白决定簇。表位决定簇通常由分子的化学活性表面基团组成，例如氨基酸或者糖侧链，并且通常具有特定的三维结构特性，以及特定的电荷特性。当解离常数≤1μM时，优选的≤100nM并且更优选的≤10nM时，该抗体被认为可以特异性的结合抗原。
这里使用的术语“免疫性结合”以及“免疫性结合特性”指的是免疫球蛋白分子和其特异性抗原之间发生的非共价的相互作用。免疫性结合相互作用的强度或者亲和性可以通过这种相互作用的解离常数(Kd)来表达，其中Kd越小代表亲和性越高。使用本领域熟知的方法对选定的多肽的免疫性结合特性进行量化。其中一种方法需要测定抗原结合位点/抗原复合体的形成速率以及解离速率，其中这些速率取决于复合体形成物的浓度，两者间相互作用的亲和性，以及能够在两个方向上平等的影响速率的几何学参数。因此，“结合速率常数”(Kon)以及“解离速率常数”(Koff)都可以通过计算结合和解离的浓度以及实际速率来得出(参见，Nature(《自然》)361：186-87(1993)中的文章)。Koff/Kon的比率能够消除与亲和性不相关的所有参数，并且等于解离常数Kd(大体参见Davies等人(于1990年)在Annual RevBiochem(《生物化学年鉴》)59：439-473中发表的文章)。当结合平衡常数(Kd)≤1μM时，优选的≤100nM，更优选的≤10nM，并且最优选的≤100pM至大约1pM时，本发明所述的抗体被认为可以特异性的结合于CD3表位上，通过例如放射配基结合法或者本领域技术人员已知的类似方法测量得出。
本领域技术人员将发现，有可能在不需要过度试验的情况下确定出一种人类单克隆抗体是否与本发明使用的人类单克隆抗体(例如，单克隆抗体28F11，27H5，23F10或者15C3)具有相同的特异性，该方法通过查明前者是否能够阻止后者与CD3抗原多肽发生结合来判断。如果待测的人类单克隆抗体与本发明使用的人类单克隆抗体产生竞争，表现为本发明使用的人类单克隆抗体的结合的减少，之后两种单克隆抗体结合于相同的、或者紧密相关的表位。确定一种人类单克隆抗体是否具有本发明使用的人类单克隆抗体的特异性的另外一种方法是，使用一种CD3抗原多肽对本发明使用的人类单克隆抗体进行预培养，其中所述的CD3抗原多肽对该人类单克隆抗体具有正常的反应性，之后，加入待测的人类单克隆抗体，以确定所述待测的人类单克隆抗体结合上述CD3抗原多肽的能力是否被抑制。如果待测的人类单克隆抗体被抑制，在所有的可能性之下，那么该抗体与本发明使用的单克隆抗体具有相同的、或者功能上等价的表位特异性。
术语“序列同源性”指的是在比较区域(comparison window)范围内的两个多核苷酸序列或者氨基酸序列是相同的(即，基于一种核苷酸或者一种残基的基础上)。术语“序列同源性百分数”是通过下述方法来计算的：在比较视窗范围内对两个最佳比对序列进行比较，确定两个序列中具有相同核酸碱基(即，A，T，C，G，U或者I)或者残基的位置的数量，以得到匹配的位置的数量，用所述匹配的位置的数量除以比较区域内所有位置的总数(即，比较区域的大小)，将得到的结果乘以100，得出序列同源性百分数。本发明使用的“本质上相同”表示的是一种多核苷酸序列或者氨基酸序列的性质，其中所述的多核苷酸或者氨基酸包括一个与参考序列相比具有至少85％的序列同源性、优选至少90至95％的序列同源性、更多时候具有至少99％的序列同源性的序列，其中两种序列的比较区域具有至少18个核苷酸(6个氨基酸)位置，通常两种序列的比较区域具有至少24-48个核苷酸(8-16个氨基酸)位置，其中所述的序列同源性百分数是通过将所述的参考序列与所述的序列进行比较而计算得到的，其中所述的序列可以包括缺失或者添加，这种缺失或者添加占比较区域内的参考序列的总计20％或者更少。所述的参考序列可以是一个更大序列的子集。
本发明使用的二十种常规氨基酸以及它们的缩写符合常规用法。参见Immunology-A Synthesis(2nd Edition，E.S.Golub andD.R.Gren，Eds.，Sinauer Associates，Sunderland7 Mass(1991))。上述二十种氨基酸的立体异构体(例如，D-氨基酸)，非天然氨基酸例如α-，α-二取代氨基酸，N-烷基氨基酸，乳酸，以及其他非常规氨基酸也可以作为本发明所述的多肽的合适的组分。非常规氨基酸的例子包括：4-羟脯氨酸，γ-羧基谷氨酸，ε-N，N，N-三甲基赖氨酸，ε-N-乙酰赖氨酸，O-磷酸丝氨酸，N-乙酰丝氨酸，N-甲酰甲硫氨酸，3-甲基组氨酸，5-羟赖氨酸，σ-N-甲基精氨酸，以及其他类似的氨基酸和亚氨基酸(例如，4-羟脯氨酸)。在本发明使用的多肽符号中，依照标准用法及惯例，左边是氨基末端方向，右边是羧基末端方向。
保守性的氨基酸取代指的是具有相似侧链的残基之间的互换。例如，具有脂肪族侧链的一组氨基酸是甘氨酸，丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸以及异亮氨酸；具有脂肪族羟基侧链的一组氨基酸是丝氨酸和苏氨酸；具有含酰胺侧链的一组氨基酸是天冬酰胺和谷氨酰胺；具有芳香族侧链的一组氨基酸是苯丙氨酸，酪氨酸以及色氨酸；具有碱性侧链的一组氨基酸是赖氨酸，精氨酸以及组氨酸；具有含硫侧链的一组氨基酸是半胱氨酸和甲硫氨酸。优选的保守性氨基酸取代组是：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸，苯丙氨酸-酪氨酸，赖氨酸-精氨酸，丙氨酸-缬氨酸，谷氨酸-天冬氨酸，以及天冬酰胺-谷氨酰胺。
如本发明中所述，抗体或者免疫球蛋白分子的氨基酸序列的轻度变种也被设定为包括在本发明之内，所述的氨基酸序列的变种的至少75％、更优选至少80％、90％、95％、以及最优选99％保持不变。特别的，可以设定为保守性氨基酸取代。保守性取代发生在具有相关侧链的一类氨基酸家族中。遗传编码的氨基酸通常被划分为几个家族：(1)酸性氨基酸：天冬氨酸，谷氨酸；(2)碱性氨基酸：赖氨酸，精氨酸，组氨酸；(3)非极性氨基酸：丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，脯氨酸，苯丙氨酸，甲硫氨酸，色氨酸；以及(4)不带电荷的极性氨基酸：甘氨酸，天冬酰胺，谷氨酰胺，半胱氨酸，丝氨酸，苏氨酸，酪氨酸。亲水性氨基酸包括精氨酸，天冬酰胺，天冬氨酸，谷氨酰胺，谷氨酸，组氨酸，赖氨酸，丝氨酸，以及苏氨酸。疏水性氨基酸包括丙氨酸，半胱氨酸，异亮氨酸，亮氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，脯氨酸，色氨酸，酪氨酸，以及缬氨酸。其他的氨基酸家族包括：(i)丝氨酸和苏氨酸，属于脂肪族羟基家族；(ii)天冬酰胺和谷氨酰胺，属于含酰胺家族；(iii)丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸以及异亮氨酸，属于脂肪族家族；以及(iv)苯丙氨酸，色氨酸以及酪氨酸，属于芳香族家族。
本发明使用的“制剂“表示化学化合物，化学化合物的混合物，生物大分子，或者由生物材料制备的提取物。
术语患者包括人类宿主和动物宿主。
本发明还包括Fv，Fab，Fab’以及F(ab’)2抗CD3片段，单链抗CD3抗体，双特异性抗CD3抗体，抗CD3抗体偶联物，三特异性抗体，以及它们的免疫偶联物和片段。
双特异性抗体是与至少两个不同的抗原具有结合特异性的抗体。在本发明中，一种结合特异性是针对CD3的。另外一个结合目标是任何其他抗原，有利的抗原是细胞表面蛋白或者细胞表面受体或者受体亚基。
治疗性给药以及组合物
可以预计，依照本发明存在的治疗性给药可以通过向组合物中加入适当的载体、赋形剂、以及其他制剂的方式来给药，以提供加强的传递性、运送性、耐受性、以及类似性质。可以在所有药剂化学师已知的药方中找到众多合适的配方组分：Remington’sPharmaceutical Sciences(《雷氏药学大全》)(15th ed，MackPublishing Company，Easton，PA(1975))，特别是其中由Blaug，Seymour编写的第87章(Chapter 87 by Blaug，Seymour)。这些配方组分包括，例如，粉末，糊剂，药膏，凝胶，蜡，油，油脂，含有囊泡的油脂(阳离子或者阴离子)(例如LipofectinTM)，DNA偶联物，无水吸收制剂，水包油乳液以及油包水乳液，碳蜡乳液(各种分子量的聚乙二醇)，半固体凝胶，以及含有碳蜡的半固体混合物。前述任意一种混合物都可以适用于本发明所述的治疗和治疗剂中，只要保证这种配方组分不会使组合物中的活性成分发生灭活，并且该配方组分对于给药路径来说是物理兼容并且耐受的。也可以参见Baldrick P.(于2000年)在Regul.ToxicolPharmacol.32(2)：210-8中发表的文章“Pharmaceutical excipientdevelopment：the need for preclinical guidance”(《药学赋形剂的发展：临床前指导的需求》)，Wang W.(于2000年)在Int.J.Pharm.203(1-2)：1-60中发表的文章“Lyophilization anddevelopment of solid protein pharmaceuticals”(《冷冻干燥法以及固体蛋白质药物的发展》)，Charman WN(于2000年)在J PharmSci.89(8)：967-78中发表的文章“Lipids，lipophilic drugs，andoral drug delivery-some emerging concepts”(《油脂、亲脂性药物，以及口服药物的运送-一些新兴概念》)，Powell等人(于1998年)在PDA J Pharm Sci Technol.52：238-311中发表的文章“Compendium of excipients for parenteral formulations”(《用于肠道外组合物的赋形剂概述》)，以及上述文章所引用的其他关于药剂化学师熟知的组合物、赋形剂和载体的信息。
所述的组合物优选是本质上纯的。这里使用的“本质上纯的”指的是目的物种类是占支配地位的种类(即，以摩尔计，所述的目的物的量比组合物中其他任何个体种类的量多)，并且优选的，本质上纯的片段指的是一种组合物，其中的目的物占存在于该组合物中的所有大分子种类的至少大约50％(以摩尔计)。
一般的，一个本质上纯的组合物将包括占存在于其中的所有大分子种类的至少大约80％的目的物，更优选占至少大约85％、90％、95％，以及99％。最优选的，所述的目的物被纯化为本质上是均一的(使用常规检测方法在所述的组合物中检测不到污染物种)，其中所述的组合物本质上由一种大分子物种构成。
本发明提供的治疗性组合物包括本发明使用的抗CD3抗体，该组合物被用来治疗或者缓解免疫相关性疾病带来的症状，例如，自身免疫性疾病或者炎性疾病。
自身免疫性疾病包括，例如，获得性免疫缺陷综合征(AIDS，一种自身免疫组分的病毒性疾病)，斑秃，强直性脊柱炎，抗磷脂综合症，自身免疫性艾迪森氏病，自身免疫性溶血性贫血，自身免疫性肝炎，自身免疫性内耳病(AIED)，自身免疫性淋巴增生综合症(ALPS)，自身免疫性血小板减少性紫癜(ATP)，白塞病，心肌病，celiac spruedermatitis hepetiformis；慢性疲劳免疫功能紊乱综合症(CFIDS)，慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病(CIPD)，瘢痕性类天疱疮，寒冷凝集素症，肢端硬皮综合症，克罗恩氏病，过敏性紫癜，幼年型皮肌炎，红斑狼疮，特发性混合性冷球蛋白血症，纤维组织炎症，甲状腺机能亢进，格林-巴利综合症，桥本氏甲状腺炎，特发性肺纤维化，特发性血小板减少性紫癜(ITP)，免疫球蛋白A型肾病，胰岛素依赖型糖尿病(I型糖尿病)，幼年型慢性关节炎(斯提耳病)，幼年型风湿性关节炎，美尼尔氏病，混合***病，多发性硬化症，重症肌无力，pernacious anemia，结节性多动脉炎，多软骨炎，多腺体综合症，风湿性多肌痛症，多肌炎和皮肌炎，原发性无丙种球蛋白血症，原发性胆汁性肝硬化，银屑病，关节银屑病，雷诺现象，赖特综合症，风湿热，风湿性关节炎，结节病，硬皮病(进行性***性硬化症(PSS)，也被称为***性硬化症(SS))，口眼干燥综合症，僵硬人综合症，***性红斑狼疮，高安动脉炎，颞动脉炎/巨细胞动脉炎，溃疡性结肠炎，葡萄膜炎，白癜风以及韦格纳肉芽肿。
炎性疾病包括，例如，慢性炎性疾病和急性炎性疾病。炎性疾病的例子包括阿兹海默氏症，哮喘，特异反应性过敏，过敏，动脉粥样硬化，支气管哮喘，湿疹，肾小球肾炎，移植物抗宿主反应，溶血性贫血，手骨性关节炎，败血症，脑中风，组织和器官移植，血管炎，糖尿病视网膜病变以及高机械通气诱导的肺损伤。
向患有免疫相关性疾病的宿主给药所述的抗CD3抗体组合物，所述疾病是例如自身免疫性疾病或者炎性疾病。利用本领域已知的方法来鉴定患有自身免疫性疾病或者炎性疾病的宿主。例如，通过使用各种临床检测和/或实验室检测例如身体检查，放射性检查，以及血样、尿样和便样分析来评价宿主的免疫状况，以鉴定患有自身免疫性疾病例如克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、或者炎症性肠病的宿主。例如，通过例如对及时扩散(即，在至少三个月的时间内发生在中枢神经***的不同区域)的中枢神经***(CNS)病变进行核磁共振造影，以鉴定患有多发性硬化症的患者。通过例如血样检测和/或X-射线或者其他造影学评估来鉴定患有风湿性关节炎的患者。例如通过下列方法来鉴定患有I型糖尿病的患者：当下述检测之中的任意三个呈阳性，之后在另外一天出现另外一个阳性检测时：(1)空腹血浆葡萄糖大于或者等于126mg/dl，且具有糖尿病症状；(2)即时血浆葡萄糖(在一天中的任意时间测量)大于或者等于200mg/dl，且具有糖尿病症状；或者(3)口服葡萄糖耐量检测(OGTT)值大于或者等于200mg/dl，测量间隔为两个小时(在三个小时的时间跨度上进行OGTT)。
如果各种实验室检测或者临床检测中的任意一项取得了成功的结果，则认为对患有免疫相关性疾病例如自身免疫性疾病或者炎性疾病的宿主给药抗CD3抗体组合物是成功的。例如，如果与上述疾病相关的一种或者多种症状被缓解、减轻、抑制或者不再进一步发展，即恶化，则认为对患有免疫相关性疾病例如自身免疫性疾病或者炎性疾病的宿主给药抗CD3抗体组合物是成功的。如果上述疾病例如自身免疫性疾病开始消除或者不再进一步发展，即恶化，则认为对患有免疫相关性疾病例如自身免疫性疾病或者炎性疾病的宿主给药抗CD3抗体组合物是成功的。
本发明提供的抗CD3抗体组合物被用来治疗、诊断和/或预防炎症性肠炎(IBD)。炎症性肠炎是一种消化道(GI)组织的慢性炎症和刺激。与炎症性肠炎相关的症状是例如腹部抽搐和疼痛，泄泻，直肠出血，发热以及升高的白细胞计数。将本发明提供的抗CD3抗体组合物给药于患有、被诊断为、或者倾向于炎症性肠炎的宿主。将本发明提供的抗CD3抗体组合物以足够缓解至少一种炎症性肠炎症状、治疗炎症性肠炎、预防炎症性肠炎、和/或防止炎症性肠炎发展到更严重的疾病状态的剂量向宿主给药。例如，所述的抗CD3抗体组合物在0.05毫克/天至10毫克/天的剂量范围内给药。优选的，所述的抗CD3抗体组合物在0.1毫克/天至5.0毫克/天的剂量范围内给药，更优选的，所述的抗CD3抗体组合物在0.5毫克/天至3.0毫克/天的剂量范围内给药。例如，所述的抗CD3抗体组合物的给药剂量选自0.5毫克/天，0.6毫克/天，0.7毫克/天，0.8毫克/天，0.9毫克/天，1.0毫克/天，1.1毫克/天，1.2毫克/天，1.3毫克/天，1.4毫克/天，1.5毫克/天，1.6毫克/天，1.7毫克/天，1.8毫克/天，1.9毫克/天，2.0毫克/天，2.1毫克/天，2.2毫克/天，2.3毫克/天，2.4毫克/天，2.5毫克/天，2.6毫克/天，2.7毫克/天，2.8毫克/天，2.9毫克/天，以及3.0毫克/天。
在另一种实施方式中，本发明提供的抗CD3抗体组合物被用来治疗、诊断和/或预防溃疡性结肠炎。溃疡性结肠炎是一种结肠的慢性炎症和刺激。与溃疡性结肠炎相关的症状是例如贫血；疲劳；体重减轻；食欲不振；直肠出血；体液和营养流失；皮肤病变；关节疼痛；以及生长障碍(特别是儿童)。将本发明提供的抗CD3抗体组合物给药于患有、被诊断为、或者倾向于溃疡性结肠炎的宿主。将本发明提供的抗CD3抗体组合物以足够缓解至少一种溃疡性结肠炎症状、治疗溃疡性结肠炎、预防溃疡性结肠炎、和/或防止溃疡性结肠炎发展到更严重的疾病状态的剂量向宿主给药。例如，所述的抗CD3抗体组合物在0.05毫克/天至10毫克/天的剂量范围内给药。优选的，所述的抗CD3抗体组合物在0.1毫克/天至5.0毫克/天的剂量范围内给药，更优选的，所述的抗CD3抗体组合物在0.5毫克/天至3.0毫克/天的剂量范围内给药。例如，所述的抗CD3抗体组合物的给药剂量选自0.5毫克/天，0.6毫克/天，0.7毫克/天，0.8毫克/天，0.9毫克/天，1.0毫克/天，1.1毫克/天，1.2毫克/天，1.3毫克/天，1.4毫克/天，1.5毫克/天，1.6毫克/天，1.7毫克/天，1.8毫克/天，1.9毫克/天，2.0毫克/天，2.1毫克/天，2.2毫克/天，2.3毫克/天，2.4毫克/天，2.5毫克/天，2.6毫克/天，2.7毫克/天，2.8毫克/天，2.9毫克/天，以及3.0毫克/天。
在另外一种实施方式中，本发明提供的抗CD3抗体组合物被用来治疗、诊断和/或预防克罗恩氏病。克罗恩氏病是一种肠部的慢性炎症和刺激。与克罗恩氏病相关的症状是例如腹部疼痛，泄泻，体重减轻，食欲不振，发热，夜间盗汗，直肠疼痛，以及直肠出血。将本发明提供的抗CD3抗体组合物给药于患有、被诊断为、或者倾向于克罗恩氏病的宿主。将本发明提供的抗CD3抗体组合物以足够缓解至少一种克罗恩氏病症状、治疗克罗恩氏病、预防克罗恩氏病、和/或防止克罗恩氏病发展到更严重的疾病状态的剂量向宿主给药。例如，所述的抗CD3抗体组合物在0.05毫克/天至10毫克/天的剂量范围内给药。优选的，所述的抗CD3抗体组合物在0.1毫克/天至5.0毫克/天的剂量范围内给药，更优选的，所述的抗CD3抗体组合物在0.5毫克/天至3.0毫克/天的剂量范围内给药。例如，所述的抗CD3抗体组合物的给药剂量选自0.5毫克/天，0.6毫克/天，0.7毫克/天，0.8毫克/天，0.9毫克/天，1.0毫克/天，1.1毫克/天，1.2毫克/天，1.3毫克/天，1.4毫克/天，1.5毫克/天，1.6毫克/天，1.7毫克/天，1.8毫克/天，1.9毫克/天，2.0毫克/天，2.1毫克/天，2.2毫克/天，2.3毫克/天，2.4毫克/天，2.5毫克/天，2.6毫克/天，2.7毫克/天，2.8毫克/天，2.9毫克/天，以及3.0毫克/天。
在另外一种实施方式中，本发明提供的抗CD3抗体组合物被用来治疗、诊断和/或预防多发性硬化症(MS)。多发性硬化症是一种影响中枢神经***(CNS)的慢性、炎性疾病。多发性硬化症的症状包括，例如，知觉变化，视力问题，肌肉软弱，抑郁，协调性和语言困难，以及疼痛。将本发明提供的抗CD3抗体组合物给药于患有、被诊断为、或者倾向于多发性硬化症的宿主。将本发明提供的抗CD3抗体组合物以足够缓解至少一种多发性硬化症症状、治疗多发性硬化症、预防多发性硬化症、和/或防止多发性硬化症发展到更严重的疾病状态的剂量向宿主给药。例如，所述的抗CD3抗体组合物在0.05毫克/天至10毫克/天的剂量范围内给药。优选的，所述的抗CD3抗体组合物在0.1毫克/天至5.0毫克/天的剂量范围内给药，更优选的，所述的抗CD3抗体组合物在0.5毫克/天至3.0毫克/天的剂量范围内给药。例如，所述的抗CD3抗体组合物的给药剂量选自0.5毫克/天，0.6毫克/天，0.7毫克/天，0.8毫克/天，0.9毫克/天，1.0毫克/天，1.1毫克/天，1.2毫克/天，1.3毫克/天，1.4毫克/天，1.5毫克/天，1.6毫克/天，1.7毫克/天，1.8毫克/天，1.9毫克/天，2.0毫克/天，2.1毫克/天，2.2毫克/天，2.3毫克/天，2.4毫克/天，2.5毫克/天，2.6毫克/天，2.7毫克/天，2.8毫克/天，2.9毫克/天，以及3.0毫克/天。
在另外一种实施方式中，本发明提供的抗CD3抗体组合物被用来治疗、诊断和/或预防胰岛素依赖型糖尿病(I型糖尿病)。I型糖尿病疾病的特点是由激素胰岛素的分泌不足而导致持续的高血糖(高血糖水平)。I型糖尿病的特点是胰岛中缺乏产生胰岛素的β细胞。I型糖尿病是一种自身免疫性疾病，机体本身的免疫***攻击胰岛中的β细胞，足以摧毁它们或者损害它们使它们减少或者停止生产胰岛素。I型糖尿病的症状包括，例如，渴感增强，排尿增多，虽然食欲增加却体重减轻，恶心，呕吐，腹部疼痛，以及疲劳。将本发明提供的抗CD3抗体组合物给药于患有、被诊断为、或者倾向于I型糖尿病的宿主。将本发明提供的抗CD3抗体组合物以足够缓解至少一种I型糖尿病症状、治疗I型糖尿病、预防I型糖尿病、和/或防止I型糖尿病发展到更严重的疾病状态的剂量向宿主给药。例如，所述的抗CD3抗体组合物在0.05毫克/天至10毫克/天的剂量范围内给药。优选的，所述的抗CD3抗体组合物在0.1毫克/天至5.0毫克/天的剂量范围内给药，更优选的，所述的抗CD3抗体组合物在0.5毫克/天至3.0毫克/天的剂量范围内给药。例如，所述的抗CD3抗体组合物的给药剂量选自0.5毫克/天，0.6毫克/天，0.7毫克/天，0.8毫克/天，0.9毫克/天，1.0毫克/天，1.1毫克/天，1.2毫克/天，1.3毫克/天，1.4毫克/天，1.5毫克/天，1.6毫克/天，1.7毫克/天，1.8毫克/天，1.9毫克/天，2.0毫克/天，2.1毫克/天，2.2毫克/天，2.3毫克/天，2.4毫克/天，2.5毫克/天，2.6毫克/天，2.7毫克/天，2.8毫克/天，2.9毫克/天，以及3.0毫克/天。
在另外一种实施方式中，本发明提供的抗CD3抗体组合物被用来治疗、诊断和/或预防风湿性关节炎(RA)。风湿性关节炎是一种自身免疫性疾病，能够引起关节的慢性炎症。风湿性关节炎也可以引起关节周围的组织的炎症，以及机体中其他器官的炎症。与风湿性关节炎相关的症状是例如疲劳，食欲不振，低度发热，肌肉和关节疼痛，以及僵硬。将本发明提供的抗CD3抗体组合物给药于患有、被诊断为、或者倾向于风湿性关节炎的宿主。将本发明提供的抗CD3抗体组合物以足够缓解至少一种风湿性关节炎症状、治疗风湿性关节炎、预防风湿性关节炎、和/或防止风湿性关节炎发展到更严重的疾病状态的剂量向宿主给药。例如，所述的抗CD3抗体组合物在0.05毫克/天至10毫克/天的剂量范围内给药。优选的，所述的抗CD3抗体组合物在0.1毫克/天至5.0毫克/天的剂量范围内给药，更优选的，所述的抗CD3抗体组合物在0.5毫克/天至3.0毫克/天的剂量范围内给药。例如，所述的抗CD3抗体组合物的给药剂量选自0.5毫克/天，0.6毫克/天，0.7毫克/天，0.8毫克/天，0.9毫克/天，1.0毫克/天，1.1毫克/天，1.2毫克/天，1.3毫克/天，1.4毫克/天，1.5毫克/天，1.6毫克/天，1.7毫克/天，1.8毫克/天，1.9毫克/天，2.0毫克/天，2.1毫克/天，2.2毫克/天，2.3毫克/天，2.4毫克/天，2.5毫克/天，2.6毫克/天，2.7毫克/天，2.8毫克/天，2.9毫克/天，以及3.0毫克/天。
本发明也提供了用于治疗或者缓解免疫相关性疾病的症状的方法，或用于治疗或者缓解器官移植之后与排斥反应相关的症状的方法。例如，本发明使用的组合物被用来治疗或者缓解本发明提及的自身免疫性疾病以及炎性疾病中的任意一种的症状。
本发明使用的治疗组合物也可以作为免疫抑制剂被用于器官移植或者组织移植中。这里所说的“免疫抑制剂”指的是能够作用于免疫***并导致至少一种免疫应答途径的反应性发生立即减弱或者延迟减弱的制剂，这种应答可以是自然发生的或者是人工触发的，这种应答可以作为先天免疫***的一部分发生，也可以作为适应性免疫***的一部分，或者是两者皆可。在器官移植或者组织移植之前、之中和/或之后，将这些免疫抑制性抗CD3抗体组合物给药于宿主。例如，本发明提供的抗CD3抗体组合物在器官移植或者组织移植之后被用来治疗或者预防排斥反应。例如，所述的抗CD3抗体组合物在0.05毫克/天至10毫克/天的剂量范围内给药。优选的，所述的抗CD3抗体组合物在0.1毫克/天至5.0毫克/天的剂量范围内给药，更优选的，所述的抗CD3抗体组合物在0.5毫克/天至3.0毫克/天的剂量范围内给药。例如，所述的抗CD3抗体组合物的给药剂量选自0.5毫克/天，0.6毫克/天，0.7毫克/天，0.8毫克/天，0.9毫克/天，1.0毫克/天，1.1毫克/天，1.2毫克/天，1.3毫克/天，1.4毫克/天，1.5毫克/天，1.6毫克/天，1.7毫克/天，1.8毫克/天，1.9毫克/天，2.0毫克/天，2.1毫克/天，2.2毫克/天，2.3毫克/天，2.4毫克/天，2.5毫克/天，2.6毫克/天，2.7毫克/天，2.8毫克/天，2.9毫克/天，以及3.0毫克/天。
优选的，本发明提供的治疗性抗CD3抗体组合物通过静脉内或者皮下途径给宿主给药。可以设定其他形式的给药路径。例如，所述的抗CD3抗体组合物通过静脉内、皮下、口服、肠道外、鼻内、肌肉内的形式给药，或者通过上述这些路径的任意组合的形式给药。
在一种实施方式中，将本发明提供的抗CD3抗体组合物与另外一种制剂联合给药，所述的制剂是例如人胰高血糖素样肽-1(GLP-1)或者β细胞休眠化合物(即，减少或者抑制胰岛素释放的化合物，例如钾通道开放剂)。适当的人胰高血糖素样肽-1(GLP-1)化合物的例子在例如美国公开申请U.S.20040037826中有所描述，而适当的β细胞休眠化合物在美国公开申请U.S.200302355 83中有所描述，上述两篇文献的全部内容在此引入作为参考。
在另外一种实施方式中，将用于治疗免疫相关性疾病的抗CD3抗体组合物与各种已知的抗炎症化合物和/或免疫抑制性化合物中的任意一种联合给药。合适的已知化合物包括，但不局限于甲氨蝶呤，环胞霉素A(包括，例如，环胞霉素微乳剂)，他克莫司，类固醇，他汀类，干扰素β，英利昔单抗(因福利美)，依坦西普(依那西普)以及修美乐(阿达木单抗)。
例如，在对风湿性关节炎的治疗当中，本发明使用的抗CD3抗体组合物可以与类固醇、甲氨蝶呤、环胞霉素A、他汀类、英利昔单抗(因福利美)、依坦西普(Etanercept)和/或修美乐(阿达木单抗)共同给药。
在对葡萄膜炎的治疗当中，可以将所述的抗CD3抗体组合物与例如类固醇、甲氨蝶呤、环胞霉素A、环磷酰胺和/或他汀类共同给药。同样的，可以使用本发明所述的抗CD3抗体组合物与英利昔单抗(因福利美)，和/或修美乐(阿达木单抗)的混合物对患有例如克罗恩氏病或者银屑病的患者进行治疗。
患有多发性硬化症的患者可以接受本发明所述的抗CD3抗体组合物与例如醋酸格拉替雷(Copaxone)、干扰素β-1a(Avonex)、干扰素β-1a(Rebif)、干扰素β-1b(Betaseron或者Betaferon)、米妥蒽醌(Novantrone)、***(Decadron)、甲基强的松(Depo-Medrol)、和/或强的松(Deltasone)和/或他汀类的混合而成的混合物。
在一种实施方式中，本发明所述的免疫抑制性抗CD3抗体组合物与另外一种制剂联合使用，所述的另外一种制剂是例如如上所述的人胰高血糖素样肽-1(GLP-1)或者β细胞休眠化合物。
在另外一种实施方式中，将这些免疫抑制性抗CD3抗体组合物与各种已知的抗炎症化合物和/或免疫抑制性化合物中的任意一种联合给药。与本发明所述的抗CD3抗体组合物联用的合适的抗炎症化合物和/或免疫抑制性化合物包括，但不局限于甲氨蝶呤，环胞霉素A(包括，例如，环胞霉素微乳剂)，他克莫司，类固醇以及他汀类。
在本发明的另外一种实施方式中，当在人类个体中检测到自身反应性抗体的存在后，向该个体给药抗CD3抗体组合物。本领域已知，这类自身反应性抗体对人类个体中的一种或者多种内源性表达的蛋白具有结合特异性。在本发明的一个方面，对所述人类个体中是否存在本领域熟知的、特别是存在于一种或者多种自身免疫性疾病中的自身反应性抗体进行检测。在一个特殊的实施方式中，对人类患者是否存在针对胰岛素、谷氨酸脱羧酶和/或IA-2蛋白的抗体进行检测，随后当取得一种或者多种自身反应性抗体的阳性检测结果时，则向该患者给药抗CD3抗体。
在本发明所述的另外一种实施方式中，将抗CD3抗体组合物给药于人类宿主中，用以预防、缓解或者减少免疫细胞在人体组织内的聚集。向需要治疗的宿主给药本发明所述的抗CD3抗体，用以预防以及治疗由于免疫细胞非正常性的或者去调节的聚集于人类组织位点而产生的疾病带来的状况。
在本发明所述的另外一种实施方式中，将抗CD3抗体组合物给药于人类宿主中，用以预防、缓解或者减少免疫细胞对人体组织的渗入。因此，给药本发明所述的抗CD3抗体，用以预防和/或治疗由于免疫细胞非正常性的或者去调节的渗透入人类组织位点而产生的疾病带来的状况。
在本发明所述的另外一种实施方式中，将抗CD3抗体组合物给药于人类宿主中，用以预防、缓解或者减少由人类机体内细胞因子的释放而介导的影响。术语“细胞因子”指的是本领域已知的、能够与细胞表面的胞外受体相结合并因此调节细胞功能的所有人类细胞因子，包括但不局限于白细胞介素-2(IL-2)，干扰素-g(IFN-g)，肿瘤坏死因子-a(TNF-a)，白细胞介素-4(IL-4)，白细胞介素-5(IL-5)，白细胞介素-6(IL-6)，白细胞介素-9(IL-9)，白细胞介素-10(IL-10)，以及白细胞介素-13(IL-13)。
在本发明所述的另外一种实施方式中，将抗CD3抗体组合物给药于人类宿主中，用以预防、缓解或者减少由人类机体内细胞因子受体的释放而介导的影响。术语“细胞因子受体”指的是本领域已知的、与一种或者多种细胞因子相结合的所有人类细胞因子受体，如本发明所定义的细胞因子受体包括但不局限于前述细胞因子的受体。因此，给药本发明所述的抗CD3抗体，用以治疗和/或预防由人类体内一种或者多种细胞因子受体的异常活化、及其结合或者连结而介导的状况。可以进一步的预想到，在体内给药所述的抗CD3抗体能够使该人类宿主体内由细胞因子受体介导的胞内信号产生衰竭。
在本发明所述的一个方面，将抗CD3抗体组合物给药于一种人类个体，所述的人类个体的胰岛β细胞功能减弱。在一种实施方式中，使用本领域已知的技术对所述个体的β细胞功能、胰岛素分泌或者c-肽水平进行检测。随后，当发现任何一种指示剂发生显著的减少时，向所述的人类个体给药足够剂量的抗CD3抗体，用以预防其中β细胞功能的自身免疫性破坏的进一步发展。
诊断性组合物以及预防性组合物
本发明提供的抗CD3抗体组合物(在这里也被称为抗体组合物)可以用于诊断性组合物以及预防性组合物中。在一种实施方式中，向存在患有一种前述提及的自身免疫性疾病的危险的患者给药本发明提供的抗CD3单克隆抗体组合物。可以使用遗传性标记、血清学标记或者生物化学标记来确定倾向于一种或者多种前述提及的自身免疫性疾病的患者。例如，特定的人白细胞抗原(HLA)亚型的存在以及血清学自身抗体(针对胰岛素、谷氨酸脱羧酶65以及IA-2)的存在则意味着患有I型糖尿病。
在本发明提供的另外一种实施方式中，向被诊断为患有一种或者多种前述提及的自身免疫性疾病的人类个体给药抗CD3抗体组合物。在诊断之后，给药抗CD3抗体来减轻或者逆转由自身免疫性产生的影响。在一个实施例中，向被诊断为患有I型糖尿病的人类个体给药足够剂量的抗CD3抗体，用以重建胰岛功能，并且将对胰岛的自身免疫性渗入伤害最小化。在另外一种实施方式中，向被诊断为患有风湿性关节炎的人类个体给药抗CD3抗体，用以减少免疫细胞对肢关节的渗入以及由此带来的破坏。
优选的，本发明提供的治疗性、诊断性和/或预防性抗CD3抗体组合物通过静脉内或者皮下方式向宿主给药。可以设定其他形式的给药路径。例如，所述的抗CD3抗体组合物通过静脉内、皮下、口服、肠道外、鼻内、肌肉内的形式给药，或者通过上述这些路径的任意组合的形式给药。
本发明所引用的全部公开出版物以及专利文献的内容都在此引入作为参考，就如每篇这样的公开出版物或者文献都分别被特意强调要在此引入作为参考。对公开出版物以及专利文献的引用并不意味着认可它们中的任何一篇是相关现有技术，也不意味着构成了对任何一篇文献的内容或者日期的认可。现在通过书面的说明书对本发明进行了描述，本领域技术人员能够理解，本发明可以通过各种实施方式来实现，前述的说明书以及后面的实施例的目的在于说明，并不构成对随后的权利要求的限制。
实施例
下述实施例，包括进行的试验以及得到的结果仅仅起到阐述的目的，并不解释为对本发明的限制。
实施例1：组合物的配置和分析
在本发明提供的配方研究中，在三个月的时间内，在规定温度下对20个配方中的抗CD3抗体的稳定性进行监控。被研究的配方包括醋酸缓冲剂、柠檬酸缓冲剂以及磷酸缓冲剂，它们覆盖的pH范围为pH4.0至8.0，并且包括备选的赋形剂吐温80，甘露醇，乙二胺四乙酸(EDTA)，氯化钠和蔗糖。在该项研究中被测的配方在下面的表格中示出：
表1：被测的配方
  配方编号   组分   pH
  F1   25毫摩醋酸钠/125毫摩氯化钠   4.0
  F2   25毫摩醋酸钠/125毫摩氯化钠   5.5
  F3   25毫摩醋酸钠/125毫摩氯化钠/0.02％吐温80   5.5
  F4   10毫摩醋酸钠/140毫摩氯化钠   5.5
  F5   10毫摩醋酸钠/100毫摩氯化钠/2％甘露醇   5.5
  F6   25毫摩柠檬酸钠/125毫摩氯化钠   5.5
  F7   25毫摩柠檬酸钠/125毫摩氯化钠   6.0
  F8   25毫摩柠檬酸钠/125毫摩氯化钠   6.5
  F9   25毫摩柠檬酸钠/125毫摩氯化钠/0.02％吐温80   6.0
  F10   10毫摩柠檬酸钠/140毫摩氯化钠   6.0
  F11   10毫摩柠檬酸钠/100毫摩氯化钠/2％甘露醇   6.0
  F12   25毫摩柠檬酸钠/200毫摩蔗糖   6.0
  F13   50毫摩磷酸钠/100毫摩氯化钠   6.0
  F14   50毫摩磷酸钠/100毫摩氯化钠   7.0
  F15   50毫摩磷酸钠/100毫摩氯化钠   8.0
  F16   50毫摩磷酸钠/100毫摩氯化钠/0.02％吐温80   7.0
  F17   50毫摩磷酸钠/100毫摩氯化钠/0.01％EDTA   7.0
  F18   10毫摩磷酸钠/100毫摩氯化钠   7.0
  F19   10毫摩磷酸钠/100毫摩氯化钠/2％甘露醇   7.0
  F20   25毫摩磷酸钠/200毫摩蔗糖   7.0
使用不同的稳定性指示方法来监控产品的不同物理特性以及化学特性。这些方法选自在产品完整性分批释放检测中使用的方法，并且包括pH、蛋白浓度、视觉外观、凝胶渗透色谱(GPHPLC)、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(还原型和未还原型)以及等电聚焦。在预定的储存温度5±3℃下以及升高的储存温度25±3℃至40±3℃下，评价每个配方中的产品的稳定性。所述的升高的温度用来提供每组配方中的加速的稳定性数据，这些数据被用来支持对上述配方的选择，这种选择取决于实时数据。除此之外，将样品保存于-20±5℃的温度下，来考察冷冻-融化对所述分子的稳定性所产生的影响。
为了进一步考察配方对产品的聚集趋势所产生的影响，在环境温度下对样品搅拌48小时，使样品受压。
从本项研究的每个测试中得到的结果表明，当处于预定的储存温度时没有发生显著变化的、或者当处于升高的温度时发生的变化与研究初始时相比最小的，是候选配方。总之，本项研究的结果表明，对于抗CD3抗体来说，pH为5.5的醋酸配方F2、F3、F4和F5是最适合的候选配方。之后，25毫摩醋酸钠/125毫摩氯化钠/0.02％吐温80、pH5.5被选为抗CD3抗体的最终配方缓冲液。这样的组合物具有3.0至7.0的pH范围。优选的，这种组合物具有5.0至6.0的pH范围，更优选的，这种组合物具有5.2至5.8的pH范围，最优选的，这种组合物具有5.4至5.6的pH范围。例如，在一种实施方式中，这种组合物具有5.5的pH值。
实施例2：抗CD3抗体组合物的剂量
这里所述的剂量选择过程用来确定包括在更广泛的研究中测试的抗CD3抗体组合物的治疗时间窗在内的剂量。同时，测试使用的初始剂量被选择为不会对患者造成伤害的剂量。
由于本发明描述的某些抗CD3单克隆抗体，例如28F11，15C3，27H5以及23F10，它们不与“标准”试验室类型的CD3发生交叉反应，因而无法在毒性药理学和预临床药理学方面获得毒性数据以及功效数据。特别的，GLP(人胰高血糖素样肽)研究证明，本发明描述的某些抗CD3单克隆抗体不与鼠(mouse)、小鼠(rat)、兔、猕猴、食蟹猴以及狒狒的CD3发生交叉反应。因此，所述的剂量选择过程由来自于体外的人类T细胞数据进行指导，将不与标准试验室CD3发生交叉反应的抗CD3抗体(即，“非交叉反应性CD3抗体”)与其他普遍的市售抗CD3抗体进行比较，利用普遍存在的或者市售的抗CD3抗体中公开的信息(参见，例如，Orthoclone商品单；Woodle翻译1999；Friend翻译1999；Herold NEJM 2002；Keymeulen NEJM 2005)：
·Orthoclone OKT3，hOKT3γ1(Ala-Ala)以及ChAglyCD3的临床剂量在每针剂5毫克至25毫克的范围内是有效的，能够达到对T细胞表面上80％的CD3分子或者更多CD3分子的调节作用，并且产生的平均血清水平＞800纳克/毫升；
·Orthoclone OKT3，hOKT3γ1(Ala-Ala)以及ChAglyCD3的治疗长短分别是连续的10-14天、连续的7-14天以及连续的6天；
·用来评估CD3以及人类T细胞上的TCR受体的调节作用的体外研究一贯表明，与Orthoclone相比，非交叉反应性抗CD3抗体的IC50高出2-3倍；
·用来评估安全问题例如CRS(细胞因子释放综合症)的体外研究一贯表明，与Orthoclone相比，当使用人外周血白细胞进行培养之后，非交叉反应性抗CD3抗体诱导少量的或者不诱导肿瘤坏死因子α(TNFα)，干扰素γ(IFNγ)，白细胞介素-6(IL-6)，或者白细胞介素-2(IL-2)。上述体外测试的参数模拟白细胞暴露于患者外周血白细胞的临床状态。由非交叉反应性抗CD3抗体诱导的细胞因子比Orthoclone诱导的细胞因子低几个级数。
因此，为了评估治疗时间窗内的免疫学功效和初步治疗功效，患者将接受连续5天剂量的非交叉反应性CD3抗体。在连续的5天内向患者给药的剂量在0.5毫克/天至5.0毫克/天的范围内，该剂量显著低于Orthoclone的有效剂量，但可能诱发轻度的细胞因子释放综合症。优选的，在连续的5天内给药的剂量在0.7毫克/天至2毫克/天的范围内。例如，在连续的5天内给药的剂量为0.7毫克/天，0.8毫克/天，0.9毫克/天，1.0毫克/天，1.1毫克/天，1.2毫克/天，1.3毫克/天，1.4毫克/天，1.5毫克/天，1.6毫克/天，1.7毫克/天，1.8毫克/天，1.9毫克/天，或者2.0毫克/天。
根据体外数据，这里提供的剂量范围导致显著轻度的细胞因子释放综合症。
实施例3：抗CD3抗体组合物的制备和纯化
下面提供了抗CD3抗体的全部制备过程的步骤流程图。在该过程的每个阶段，过程步骤的细节以及对过程的控制以列表形式表示在表2-表4中。
抗CD3抗体的制备过程流程图
从主细胞库得到的针剂
  步骤1 接种物的制备
  步骤2 发酵
  步骤3 收集(澄清)
  步骤4 在收集之后，经过0.2微米过滤
  步骤5 MabSelect层析
  步骤6 pH处理
  步骤7 浓缩和渗滤
  步骤8 Q Ceramic Hyper D F层析
  步骤9 羟基磷灰石色谱
  步骤10 病毒还原型过滤(Virus reduction filtration)
  步骤11 浓缩和渗滤
  步骤12 添加赋形剂
  步骤13 0.2微米的最终过滤，分配并储存
  步骤14 检测以及NI-0401药物的释放
表2：细胞生长和收集
  步骤号   处理步骤   条件   过程中的控制
  1   接种物的制备：烧瓶和滚瓶   生长培养基CM41   总细胞计数和可见细胞计数以及％生存能力视觉观察不到微生物污染温度滚动速度/振动滚动速度
  接种物的制备：·抛弃式培养袋(25升)   生长培养基CM41  总细胞计数和可见细胞计数以及％生存能力不存在微生物的生长温度气体流滚动角度滚动速率代号
 2   发酵：·生产发酵罐   生长培养基CM42  每天：总细胞计数和可见细胞计数以及％生存能力不存在微生物的生长温度pH溶解氧氮气流速氮气压力二氧化碳气流速二氧化碳压力空气流速空气流压力补料流速
 2   未经处理的部分·生产发酵罐  收集当天：生物负载支原体：·Hoechst染色·培养病毒：·体外病毒(MRC-5，VERO，CHO-K1)·Q-PCR得到的鼠类细小病毒逆转录病毒数量，类似部分收集(电子显微镜)的例子/毫升
  3   收集/澄清   过滤除去细胞以及细胞碎片
  4   在收集之后，进行0.2微米的过滤   将澄清得到的上清液过滤并置于灭菌容器中。于5±3℃下储存。最大装载天数14天   生物负载(过滤前和过滤后)内毒素(过滤之后)蛋白A滴度(HPLC)最终过滤物的完整性测试
表3：纯化和修饰反应
  步骤号   处理步骤   条件   过程中的控制
  5   使用mabSelect色谱纯化   温度≥12℃使用50毫摩磷酸钠/250毫摩氯化钠，pH7.0的缓冲液以及50毫摩磷酸钠/1.0摩氯化钠，pH7.0的缓冲液进行清洗使用10毫摩甲酸钠，pH3.5的缓冲液进行洗脱最大负载量21克/升   pH传导性温度蛋白浓度(蛋白AHPLC)生物负载蛋白浓度(A280)
  6   pH处理   使用2.0摩醋酸将pH调至3.7±0.10，之后使用Tris碱再调至7.20±0.20   蛋白浓度(A280)pH生物负载SDS PAGE1
  7   浓缩和渗滤   浓缩至大约10.0±1.0克/升，之后在10毫摩磷酸钠，pH7.0的缓冲液中渗滤   蛋白浓度(A280)pH传导性生物负载
  8   使用QCeramicHyper D F色谱纯化   温度≥12℃使用pH7.0的0.1摩磷酸钠进行预平衡使用10毫摩磷酸钠，pH7.0的缓   pH传导性温度蛋白浓度(A280)
  冲液进行清洗/洗脱洗脱之后，使用10毫摩磷酸钠/2.0摩氯化钠，pH7.0的缓冲液进行清洗最大负载量50克/升   生物负载SDS PAGE1
  9   使用羟基磷灰石色谱进行纯化   温度≥12℃使用pH6.5的0.1摩磷酸钠进行预平衡使用15毫摩磷酸钠，pH6.5的缓冲液进行清洗使用15毫摩磷酸钠/375毫摩氯化钠，pH6.5的缓冲液进行洗脱最大负载量20克/升在洗脱之后，使用pH6.5的0.5摩磷酸钠进行清洗   pH传导性温度蛋白浓度(A280)生物负载SDS PAGE1
  10   Planova  20N病毒还原型过滤   20纳米纸质过滤器19±4℃，≤0.98巴使用15毫摩磷酸钠/375毫摩氯化钠，pH6.5的缓冲液进行冲洗   蛋白浓度(A280)温度入口压力过滤之后的完整性测试
  11   浓缩和渗滤   浓缩，之后在25毫摩醋酸钠/125毫摩氯化钠，pH5.5的缓冲液中进行渗滤   蛋白浓度(A280)pH传导性生物负载
  12   添加赋形剂   10％聚山梨醇酯80最终浓度6.0±0.6毫克/毫升   蛋白浓度(A280)pH传导性
1-仅在完成多于1个周期的情况下需要，且洗脱曲线不仅仅通过视觉分析来进行比较
在每个纯化处理步骤的最后，以及在分配到大部分纯化产品的容器中时，使该过程中的产品经过0.2微米的过滤。在每个纯化步骤中，将过程中的产品从5±3℃的储存环境中取出、进行所述的纯化步骤并且将进行0.2微米过滤处理后的产品送回至冷冻室中的时间一定不超过36小时。
所述的最终配方缓冲组分如下：
  缓冲组分   浓度
  醋酸钠   25毫摩
  氯化钠   125毫摩
  聚山梨醇酯80   体积比0.02％
表4：最终过滤和释放
  步骤号   处理步骤   条件   过程中的控制
  13   0.2微米的最终过滤并分配   在环境温度下过滤。隔离储存温度5±3℃   生物负载(过滤前)在过滤之后的完整性测试
  14   测试和释放   不可应用   根据大部分纯化产物的具体情况
在抗CD3抗体的制备过程中使用的原料物质
CM34培养基，其中含有碱性溶液，在细胞库中使用。将初始的主细胞库冷藏在CM34培养基中，并且在其中添加二甲基亚砜。
CM41培养基，其中含有碱性溶液和化学制剂，在接种物的制备步骤中使用。除此之外，在使用之前，将含有盐的补充物E加入到所述的碱性培养基中。
CM42培养基，其中含有碱性溶液、化学制剂以及氨基酸，在发酵步骤中使用。CM41培养基中添加了SF31，SF32以及补充物E补料。这些补料含有碱性粉末、盐、氨基酸、葡萄糖、微生物、化学制剂以及痕量的化学元素。在所述的培养基以及补料配方中使用的所有氨基酸都来自于非动物来源。
实施例4：使用抗CD3抗体组合物在治疗自身免疫性疾病中 的治疗方案
在研究的第1天直至第5天，通过静脉内融合的方式给药抗CD3抗体组合物或者与其匹配的安慰剂，给药的剂量在0.05毫克/天至10毫克/天的范围内。优选的，所述的抗CD3抗体组合物在0.1毫克/天至5.0毫克/天的剂量范围内给药，更优选的，所述的抗CD3抗体组合物在0.5毫克/天至3.0毫克/天的剂量范围内给药。例如，所述的抗CD3抗体组合物的给药剂量选自0.5毫克/天，0.6毫克/天，0.7毫克/天，0.8毫克/天，0.9毫克/天，1.0毫克/天，1.1毫克/天，1.2毫克/天，1.3毫克/天，1.4毫克/天，1.5毫克/天，1.6毫克/天，1.7毫克/天，1.8毫克/天，1.9毫克/天，2.0毫克/天，2.1毫克/天，2.2毫克/天，2.3毫克/天，2.4毫克/天，2.5毫克/天，2.6毫克/天，2.7毫克/天，2.8毫克/天，2.9毫克/天，以及3.0毫克/天。
如果一种剂量水平与T细胞上的CD3复合体的显著的调节水平相关，和/或与显著的细胞因子释放综合症相关，则对一种或者多种较低的剂量水平进行检测，以代替一种或者多种较高的剂量水平。所述的抗CD3抗体组合物的所期望的剂量水平导致的细胞因子释放水平低于细胞因子释放WHO标度“3”。用于评价细胞因子释放症状的WHO标度的评判标准在下述的表5中示出。
表5：WHO毒性分级标度
类感冒症状(细胞因子释放症状)
Figure A20068003341100551
实施例5：使用抗CD3抗体组合物在治疗移植排斥反应中的 治疗方案
每天给药抗CD3抗体抗体组合物，直至观察到高于50％的TCR-CD3覆盖/饱和水平。例如，每天给药所述的抗CD3抗体抗体组合物，直至观察到的TCR-CD3覆盖/饱和水平高于60％，高于70％或者高于80％。所使用的初始剂量在0.05毫克/天至10毫克/天的范围之内。优选的，所述的抗CD3抗体组合物在0.1毫克/天至5.0毫克/天的剂量范围内给药，更优选的，所述的抗CD3抗体组合物在0.5毫克/天至3.0毫克/天的剂量范围内给药。例如，所述的抗CD3抗体组合物的给药剂量选自0.5毫克/天，0.6毫克/天，0.7毫克/天，0.8毫克/天，0.9毫克/天，1.0毫克/天，1.1毫克/天，1.2毫克/天，1.3毫克/天，1.4毫克/天，1.5毫克/天，1.6毫克/天，1.7毫克/天，1.8毫克/天，1.9毫克/天，2.0毫克/天，2.1毫克/天，2.2毫克/天，2.3毫克/天，2.4毫克/天，2.5毫克/天，2.6毫克/天，2.7毫克/天，2.8毫克/天，2.9毫克/天，以及3.0毫克/天。如果TCR-CD3的饱和水平低于50％，则每天增加给药剂量，直至达到所述的覆盖/饱和水平目标值为止。一旦达到该目标值，保持该剂量5天时间，但总的治疗过程最长不超过8天。
所述的抗CD3抗体组合物经由静脉内(iv)融合的方式给药。优选的，所述的静脉内融合是在30分钟至3小时的时间段内发生的连续融合，更优选的是在1小时至2小时的时间段内。例如，通过每天进行2小时的连续静脉内融合来给药所述的抗CD3抗体组合物。本领域普通技术人员能够预期，连续静脉内融合的时间长短直接关系到组合物的给药剂量以及静脉内输液袋(iv bag)的容积。对于一个给定的剂量水平以及输液袋容积来说，计算连续融合的所需时间是在本领域普通技术人员的能力范围之内的。
其他实施方式
尽管本发明通过详细的说明书进行了描述，但前述的说明书意在对本发明进行阐述，并不构成对发明范围的限制，发明的范围由后附的权利要求来定义。其他方面、优点以及改进落入随后的权利要求的范围之内。
序列表
<110>诺维莫尼公司
<120>抗CD3抗体组合物
<130>23135-410-061
<140>PCT/US2006/035615
<141>2006-09-12
<150>60/716,311
<151>2005-09-12
<160>74
<170>Patentln 3.2版
<210>1
<211>354
<212>DNA
<213>现代人
<400>1
caggtgcagc tggtggagtc cgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc     60
tcctgtgcag cgtctggatt caagttcagt ggctatggca tgcactgggt ccgccaggct    120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaagtaa gaaatactat    180
gtagactccg tgaagggccg cttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat    240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagacaaatg    300
ggctactggc acttcgatct ctggggccgt ggcaccctgg tcactgtctc ctca          354
<210>2
<211>118
<212>PRT
<213>现代人
<400>2
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Gly Tyr
            20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Gln Met Gly Tyr Trp His Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr
            100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>3
<211>324
<212>DNA
<213>现代人
<400>3
gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc     60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agctacttag cctggtacca acagaaacct    120
ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc    180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct    240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggcctccgct cactttcggc    300
ggagggacca aggtggagat caaa                                           324
<210>4
<211>108
<212>PRT
<213>现代人
<400>4
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro
                85                  90                  95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105
<210>5
<211>354
<212>DNA
<213>现代人
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tcctgtgcag cgtctggatt caagttcagt ggctatggca tgcactgggt ccgccaggct    120
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ctgcaaatga acagcctgag aggcgaggac acggctgtgt attactgtgc gagacaaatg    300
ggctactggc acttcgatct ctggggccgt ggcaccctgg tcactgtctc ctca          354
<210>6
<211>118
<212>PRT
<213>现代人
<400>6
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Ser Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Gly Tyr
            20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Gly Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Gln Met Gly Tyr Trp His Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr
            100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>7
<211>324
<212>DNA
<213>现代人
<400>7
gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc    60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agctacttag cctggtacca acagaaacct   120
ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc   180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct   240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggcctccgct cactttcggc   300
ggagggacca aggtggagat caaa                                          324
<210>8
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<212>PRT
<213>现代人
<400>8
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro
                85                  90                  95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105
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<212>DNA
<213>现代人
<400>9
caggtgcagc tggtggagtc cgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc     60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcaga agctatggca tgcactgggt ccgccaggct    120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcaatt atatggtatg atggaagtaa aaaaaactat    180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat    240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaggaact    300
gggtacaact ggttcgaccc ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca          354
<210>10
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<212>PRT
<213>现代人
<400>10
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Ile Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Asn Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Gly Thr Gly Tyr Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
        115
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gaaattgtgt tgacacagtc tccacgcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc     60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa    120
cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca    180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggac    240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcaccgat caccttcggc    300
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<212>DNA
<213>现代人
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gacatcctga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc     60
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<212>DNA
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gacatcgtga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc     60
atcacttgcc gggcaagtca gggcattagc agtgctttag cctggtatca gcagaaacca    120
gggaaagctc ctaagctcct gatctatgat gcctccagtt tgggaagtgg ggtcccatca    180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct    240
gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tattatagta ccctcacttt cggcggaggg    300
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<212>DNA
<213>现代人
<400>14
gacatccaga tgacccagtc tccattctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc     60
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gcaaaagccc ctaagctctt catctattat gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca    180
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gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tattatagta ccctcacttt cggcggaggg    300
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<211>318
<212>DNA
<213>现代人
<400>15
gacatcgaga tgacccagtc tccattctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc     60
atcacttgct gggccagtca gggcattagc agttatttag cctggtatca gcaaaaacca    120
gcaaaagccc ctaagctctt catctattat gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca    180
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<210>16
<211>108
<212>PRT
<213>现代人
<400>16
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Arg Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
            20                  25                  30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
        35                  40                  45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
    50                  55                  60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Asp
65                  70                  75                  80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
                85                  90                  95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
            100                 105
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<211>106
<212>PRT
<213>现代人
<400>17
Asp Ile Leu Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Tyr Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Leu Thr
                85                  90                  95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105
<210>18
<211>106
<212>PRT
<213>现代人
<400>18
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Gly Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Leu Thr
                85                  90                  95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105
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<211>106
<212>PRT
<213>现代人
<400>19
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Phe Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Trp Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Ala Lys Ala Pro Lys Leu Phe Ile
        35                  40                  45
Tyr Tyr Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Leu Thr
                85                  90                  95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105
<210>20
<211>106
<212>PRT
<213>现代人
<400>20
Asp Ile Glu Met Thr Gln Ser Pro Phe Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Trp Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Ala Lys Ala Pro Lys Leu Phe Ile
        35                  40                  45
Tyr Tyr Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Leu Thr
                85                  90                  95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105
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<211>354
<212>DNA
<213>现代人
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caggtgcagc tggtgcagtc tgggggaggc gtggtccagc ccgggaggtc cctgagactc     60
tcctgtgtag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct    120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagct atatggtata atggaagaaa acaagactat    180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat    240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtac gaggggaact    300
gggtacaatt ggttcgaccc ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca          354
<210>22
<211>118
<212>PRT
<213>现代人
<400>22
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Ala Ile Trp Tyr Asn Gly Arg Lys Gln Asp Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Thr Arg Gly Thr Gly Tyr Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
        115
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<211>321
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<213>现代人
<400>23
gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc     60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agctacttag cctggtacca acagaaacct    120
ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc    180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct    240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggccgtggac gttcggccaa    300
gggaccaagg tggaaatcaa a                                              321
<210>24
<211>321
<212>DNA
<213>现代人
<400>24
gccatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtatgaga cagagtcacc     60
atcacttgcc gggcaagtca gggcattagc agtgctttag cctggtatca gcagaaacca    120
gggaaagctc ctaagctcct gatctatgat gcctccagtt tggaaagtgg ggtcccatca    180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct    240
gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tttaatagtt accctatcac cttcggccaa    300
gggacacgac tggagattaa a                                              321
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<400>25
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Trp
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105
<210>26
<211>107
<212>PRT
<213>现代人
<400>26
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Ile
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
            100                 105
<210>27
<211>5
<212>PRT
<213>现代人
<400>27
Gly Tyr Gly Met His
1               5
<210>28
<211>17
<212>PRT
<213>现代人
<400>28
Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>29
<211>9
<212>PRT
<213>现代人
<400>29
Gln Met Gly Tyr Trp His Phe Asp Leu
1               5
<210>30
<211>11
<212>PRT
<213>现代人
<400>30
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>31
<211>7
<212>PRT
<213>现代人
<400>31
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1               5
<210>32
<211>10
<212>PRT
<213>现代人
<400>32
Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro Leu Thr
1               5                   10
<210>33
<211>5
<212>PRT
<213>现代人
<400>33
Ser Tyr Gly Met His
1               5
<210>34
<211>17
<212>PRT
<213>现代人
<400>34
Ile Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>35
<211>9
<212>PRT
<213>现代人
<400>35
Gly Thr Gly Tyr Asn Trp Phe Asp Pro
1               5
<210>36
<211>12
<212>PRT
<213>现代人
<400>36
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>37
<211>7
<212>PRT
<213>现代人
<400>37
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1               5
<210>38
<211>9
<212>PRT
<213>现代人
<400>38
Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Ile Thr
1               5
<210>39
<211>11
<212>PRT
<213>现代人
<400>39
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala Leu Ala
1               5                   10
<210>40
<211>7
<212>PRT
<213>现代人
<400>40
Tyr Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1               5
<210>41
<211>8
<212>PRT
<213>现代人
<400>41
Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Leu Thr
1               5
<210>42
<211>7
<212>PRT
<213>现代人
<400>42
Asp Ala Ser Ser Leu Gly Ser
1               5
<210>43
<211>11
<212>PRT
<213>现代人
<400>43
Trp Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>44
<211>17
<212>PRT
<213>现代人
<400>44
Ala Ile Trp Tyr Asn Gly Arg Lys Gln Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>45
<211>9
<212>PRT
<213>现代人
<400>45
Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Trp Thr
1               5
<210>46
<211>7
<212>PRT
<213>现代人
<400>46
Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1               5
<210>47
<211>9
<212>PRT
<213>现代人
<400>47
Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Ile Thr
1               5
<210>48
<211>98
<212>PRT
<213>现代人
<400>48
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg
<210>49
<211>16
<212>PRT
<213>现代人
<400>49
Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1               5                   10                  15
<210>50
<211>17
<212>PRT
<213>现代人
<400>50
Tyr Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
1               5                   10                  15
Ser
<210>51
<211>12
<212>PRT
<213>现代人
<400>51
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1               5                   10
<210>52
<211>12
<212>PRT
<213>现代人
<400>52
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1               5                   10
<210>53
<211>95
<212>PRT
<213>现代人
<400>53
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro
                85                  90                  95
<210>54
<211>12
<212>PRT
<213>现代人
<400>54
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
1               5                   10
<210>55
<211>96
<212>PRT
<213>现代人
<400>55
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
            20                  25                  30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
        35                  40                  45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
    50                  55                  60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65                  70                  75                  80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
                85                  90                  95
<210>56
<211>95
<212>PRT
<213>现代人
<400>56
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro
                85                  90                  95
<210>57
<211>17
<212>PRT
<213>现代人
<400>57
Glu Met Gly Gly Ile Thr Gln Thr Pro Tyr Lys Val Ser Ile Ser Gly
1               5                   10                  15
Thr
<210>58
<211>4
<212>PRT
<213>现代人
<400>58
Tyr Gly Met His
1
<210>59
<211>5
<212>PRT
<213>现代人
<400>59
Asp Ser Val Lys Gly
1               5
<210>60
<211>16
<212>PRT
<213>现代人
<220>
<221>其他特征
<222>(4)..(4)
<223>其中X是任意氨基酸
<220>
<221>其他特征
<222>(6)..(9)
<223>其中X是任意氨基酸
<220>
<221>其他特征
<222>(11)..(11)
<223>其中X是任意氨基酸
<400>60
Ile Trp Tyr Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Asp Ser Val Lys Gly
1               5                   10                  15
<210>61
<211>9
<212>PRT
<213>现代人
<220>
<221>其他特征
<222>(1)..(2)
<223>其中X是任意氨基酸
<220>
<221>其他特征
<222>(5)..(6)
<223>其中X是任意氨基酸
<220>
<221>其他特征
<222>(9)..(9)
<223>其中X是任意氨基酸
<400>61
Xaa Xaa Gly Tyr Xaa Xaa Phe Asp Xaa
1               5
<210>62
<211>9
<212>PRT
<213>现代人
<400>62
Gly Thr Gly Tyr Asn Trp Phe Asp Pro
1               5
<210>63
<211>9
<212>PRT
<213>现代人
<400>63
Gln Met Gly Tyr Trp His Phe Asp Leu
1               5
<210>64
<211>5
<212>PRT
<213>现代人
<400>64
Val Thr Val Ser Ser
1               5
<210>65
<211>8
<212>PRT
<213>现代人
<400>65
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1               5
<210>66
<211>11
<212>PRT
<213>现代人
<400>66
Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1               5                   10
<210>67
<211>412
<212>DNA
<213>现代人
<400>67
tgattcatgg agaaatagag agactgagtg tgagtgaaca tgagtgagaa aaactggatt     60
tgtgtggcat tttctgataa cggtgtcctt ctgtttgcag gtgtccagtg tcaggtgcag    120
ctggtggagt ctgggggagg cgtggtccag cctgggaggt ccctgagact ctcctgtgca    180
gcgtctggat tcaccttcag tagctatggc atgcactggg tccgccaggc tccaggcaag    240
gggctggagt gggtggcagt tatatggtat gatggaagta ataaatacta tgcagactcc    300
gtgaagggcc gattcaccat ctccagagac aattccaaga acacgctgta tctgcaaatg    360
aacagcctga gagccgagga cacggctgtg tattactgtg cgagagacac ag            412
<210>68
<211>50
<212>PRT
<213>现代人
<400>68
Val Gln Cys Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln
1               5                   10                  15
Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
            20                  25                  30
Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
        35                  40                  45
Glu Trp
    50
<210>69
<211>17
<212>PRT
<213>现代人
<400>69
Ala Ile Trp Tyr Asn Gly Arg Lys Gln Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>70
<211>17
<212>PRT
<213>现代人
<400>70
Ile Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>71
<211>17
<212>PRT
<213>现代人
<400>71
Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>72
<211>17
<212>PRT
<213>现代人
<400>72
Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>73
<211>13
<212>PRT
<213>现代人
<400>73
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
1               5                   10
<210>74
<211>31
<212>PRT
<213>现代人
<400>74
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1               5                   10                  15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
            20                  25                  30

Claims (40)

1.抗CD3抗体的药物组合物，基本上由下述组分构成：
a.在3.0至6.2的pH范围内有效的pH缓冲剂；
b.盐
c.表面活性剂；以及
d.药学上有效剂量的抗CD3抗体。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述的盐是氯化钠。
3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述的表面活性剂是离子型表面活性剂，阴离子型表面活性剂或者两性离子表面活性剂。
4.根据权利要求3所述的组合物，其中所述的离子型表面活性剂是聚山梨醇酯。
5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述的聚山梨醇酯是聚山梨醇酯80。
6.根据权利要求1所述的组合物，其中所述的pH缓冲剂的有效用量在10毫摩至50毫摩的范围内。
7.根据权利要求1所述的组合物，其中所述的pH缓冲剂提供了5.0至6.0的pH范围。
8.根据权利要求7所述的组合物，其中所述的pH缓冲剂提供了5.2至5.8的pH范围。
9.根据权利要求7所述的组合物，其中所述的pH缓冲剂提供了5.4至5.6的pH范围。
10.根据权利要求7所述的组合物，其中所述的pH缓冲剂提供了5.5的pH值。
11.根据权利要求1所述的组合物，其中所述的pH缓冲剂包括醋酸钠。
12.根据权利要求1所述的组合物，其中所述的盐的剂量范围在100毫摩至140毫摩的范围内。
13.根据权利要求1所述的组合物，其中所述的表面活性剂的重量/体积含量为0.02％。
14.根据权利要求1所述的组合物，其中所述的抗CD3抗体的药物有效剂量被配置为每剂量中提供0.05毫克至10毫克的抗CD3抗体。
15.根据权利要求1所述的组合物，其中所述的抗CD3抗体的药物有效剂量被配置为每剂量中提供0.1毫克至5.0毫克的抗CD3抗体。
16.根据权利要求1所述的组合物，其中所述的抗CD3抗体的药物有效剂量被配置为每剂量中提供0.5毫克至3.0毫克的抗CD3抗体。
17.根据权利要求1所述的组合物，其中所述的抗CD3抗体是28F11，27H5，23F10，15C3，Orthoclone OKT3，人类OKT3γ1(HOKT3γ1)或者ChAglyCD3。
18.抗CD3抗体的药物组合物，主要由下述组分构成：
a.包括醋酸钠的pH缓冲剂，其在3.0至6.2的pH范围内有效；
b.氯化钠；
c.包括聚山梨醇酯的表面活性剂；以及
d.药物有效剂量的抗CD3抗体。
19.根据权利要求18所述的组合物，其中所述的聚山梨醇酯是聚山梨醇酯80。
20.根据权利要求18所述的组合物，所述的pH缓冲剂的有效用量在10毫摩至50毫摩的范围内。
21.根据权利要求18所述的组合物，其中所述的pH缓冲剂提供了5.0至6.0的pH范围。
22.根据权利要求21所述的组合物，其中所述的pH缓冲剂提供了5.2至5.8的pH范围。
23.根据权利要求21所述的组合物，其中所述的pH缓冲剂提供了5.4至5.6的pH范围。
24.根据权利要求21所述的组合物，其中所述的pH缓冲剂提供了5.5的pH值。
25.根据权利要求18所述的组合物，其中所述的盐的剂量范围在100毫摩至140毫摩的范围内。
26.根据权利要求18所述的组合物，其中所述的表面活性剂的重量/体积含量为0.02％。
27.根据权利要求18所述的组合物，其中所述的抗CD3抗体的药物有效剂量被配置为每剂量中提供0.05毫克至10毫克的抗CD3抗体。
28.根据权利要求18所述的组合物，其中所述的抗CD3抗体的药物有效剂量被配置为每剂量中提供0.1毫克至5.0毫克的抗CD3抗体。
29.根据权利要求18所述的组合物，其中所述的抗CD3抗体的药物有效剂量被配置为每剂量中提供0.5毫克至3.0毫克的抗CD3抗体。
30.根据权利要求18所述的组合物，其中所述的抗CD3抗体是28F11，27H5，23F10，15C3，Orthoclone OKT3，人类OKT3γ1(HOKT3γ1)或者ChAglyCD3。
31.抗CD3抗体的药物组合物，其中包括：
a.每剂量中含有0.5毫克至3.0毫克抗CD3抗体的有效剂量；
b.1毫克至3毫克的醋酸钠；
c.5毫克至9毫克的氯化钠；以及
d.0.1微克至0.3微克的聚山梨醇酯80，
并用水将所述组合物调整至1.0毫升。
32.根据权利要求31所述的组合物，其中所述组合物包括2.05毫克醋酸钠，7.31毫克氯化钠以及0.216微克聚山梨醇酯80。
33.根据权利要求31所述的组合物，其中所述组合物的pH值为5.5。
34.一种治疗宿主的自身免疫性疾病或者炎性疾病的方法，包括向有治疗需要的宿主给药有效剂量的抗CD3抗体组合物，以提供每天每剂量中含有0.05毫克至10毫克的抗CD3抗体，给药5天时间。
35.根据权利要求34所述的方法，其中所述的抗CD3抗体的有效剂量被配置为每天每剂量中提供0.1毫克至5.0毫克的抗CD3抗体，给药5天时间。
36.根据权利要求34所述的方法，其中所述的抗CD3抗体的有效剂量被配置为每天每剂量中提供0.5毫克至3.0毫克的抗CD3抗体，给药5天时间。
37.根据权利要求34所述的方法，其中所述的给药是静脉内的。
38.一种治疗或者预防宿主的移植排斥反应的方法，包括，在移植的同时或者移植之后，向所述的宿主给药有效剂量的抗CD3抗体，并且每天增加给药剂量，直至达到50％或者更高的TCR-CD3饱和水平，之后给药5天的日剂量，全部治疗过程不超过8天。
39.根据权利要求38所述的方法，其中所述的给药是静脉内的。
40.根据权利要求38所述的方法，其中所述的有效剂量的抗CD3抗体产生的细胞因子释放的水平低于WHO毒性分级标度中的3度。
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