CN101297863A - 一种具有糖苷酶抑制作用的桑白皮提取物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有糖苷酶抑制作用的桑白皮提取物及其制备方法和质量控制方法，该提取物在制备时采用提取、浓缩、离心并通过三种不同种类的阴阳离子交换树脂柱、干燥等方法，使有效药物充分提取并高度富集；同时本发明还提供了对该提取物进行含量测定的质量控制方法。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药提取物及其制备方法和质量控制方法，特别涉及一种具有糖苷酶抑制作用的中药提取物及其制备方法和质量控制方法。
背景技术
桑白皮为桑科植物桑除去栓皮的干燥根皮，通常在秋末落叶至春发芽前采挖根部，刮去黄色栓皮，纵向剖开，剥取根皮，晒干入药。桑白皮中含有的1-脱氧野尻霉素(DNJ)及衍生物等多种生物碱类物质，是作用明确的α-葡萄糖苷酶抑制剂。
在申请号为01113191.8，专利名称为“具有α-葡萄糖苷酶的抑制活性的中药提取物、其制备方法及用途”的专利文献中公开了一种制备桑白皮总生物碱的方法，其工艺为药材经过提取后，通过浓缩、醇沉、絮凝等步骤，除去部分杂质，上清液再通过离子交换树脂纯化，收集得到总生物碱；在申请号为03116817.5，专利名称为“一种具有降糖作用的含桑白皮、苦荞麦的中药复方制剂及其制备方法”的专利文献中公开了一种具有降糖作用的中药复方制剂，其中所涉及的桑白皮提取物的制备工艺为药材经过乙醇提取后，直接喷雾干燥；在申请号为200410018677.4，专利名称为“具有α-葡萄糖苷酶的抑制活性的药物组合物及其用途”的专利文献中公开了一种从桑叶、桑白皮制备的由总生物碱和总黄酮组成的药物组合物。上述几份专利所涉及的桑白皮提取物的制备工艺中均未涉及到使用弱酸型阳树脂来纯化桑白皮中DNJ的方法，其质量控制指标均为总生物碱，没有涉及以1-脱氧野尻霉素(DNJ)为质量控制指标，且未见1-脱氧野尻霉素(DNJ)含量大于50％的报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的桑白皮提取物；本发明的另一目的是提供一种具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的桑白皮提取物的制备方法；本发明的另一目的是提供一种具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的桑白皮提取物的质量控制方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现：
本发明提取物中1-脱氧野尻霉素的含量为500mg/g～900mg/g。
本发明提取物的制备方法为：
原料药材桑白皮经过切制后，以水或10％～30％的乙醇溶液作为溶剂提取2～4次，每次1～3小时，提取温度为室温～90℃，总溶剂量为桑白皮原料药材重量的15～30倍；提取液在50℃～80℃下减压浓缩后离心，取上清液，通过活性碳柱除去色素或直接上强酸型阳离子交换树脂柱，用去离子水洗脱至PH值为5～6，再用2～10倍柱体积的浓度为0.2～1.0M的氨水洗脱，将氨水洗脱液减压浓缩挥尽氨水，PH值为8～10，浓缩液上强碱型阴离子交换树脂柱，并水洗至中性，PH值为11～14的上柱流出液和水洗液串联上弱酸型阳离子交换树脂柱，收集从弱酸型阳离子交换树脂柱流下来的PH值为8～9的流出液，水洗并收集至2-3个柱体积水洗液，合并上柱流出液和水洗液，常压、减压干燥、冷冻干燥或喷雾干燥得桑白皮提取物。
其中，上述本发明提取物的制备方法中的强酸型阳离子交换树脂可选用001*1、001*2、001*3、001*4、001*7等凝胶型阳离子交换树脂或D072、D061、D001CC等大孔型阳离子交换树脂；强碱型阴离子交换树脂可选用201*2、201*4、202*7等凝胶型阴离子交换树脂或D090、D096、D201、D261等大孔型阴离子交换树脂；弱酸型阳离子交换树脂可选用110、D151、D152、D113、WK40、WK20等凝胶型或大孔型阳离子交换树脂。
本发明提取物的优选制备方法为：
原料药材桑白皮经过切制后，以水作为溶剂提取3次，提取时间分别为2小时、1小时、1小时，提取温度为50℃，溶剂量分别为桑白皮原料药材重量的7倍、5倍、5倍，提取液合并，在60℃下减压浓缩后离心，取上清液，上001*7凝胶型阳离子交换树脂柱，(上柱液的PH值为4～5，流出液PH值下降为1～2，说明有效成分已交换到树脂上)，用去离子水洗脱至PH值为5～6，再用4～6倍柱体积的0.5M氨水洗脱，将氨水洗脱液减压浓缩挥尽氨水，PH值为8～10，浓缩液上201*4凝胶强碱型阴离子交换树脂柱，并水洗至中性，PH值为13～14的上柱流出液和水洗液串联上D151大孔弱酸型阳离子交换树脂柱，水洗并收集至2个柱体积水洗液，收集从弱酸型阳离子交换柱下来的PH值为8～9的流出液和水洗液，减压干燥得到桑白皮提取物。
本发明提取物的优选制备方法为：
原料药材桑白皮经过切制后，以15％的乙醇溶液作为溶剂提取4次，提取时间分别为3小时、2小时、1小时、1小时，提取温度为80℃，溶剂量分别为桑白皮原料药材重量的8倍、6倍、5倍、5倍；提取液合并，在55℃下减压浓缩后离心，取上清液，上001*7凝胶型阳离子交换树脂柱，上柱液的PH值为4～5，流出液PH值下降为1～2，用去离子水洗脱至PH值为5～6，再用2～4倍柱体积的1.0M氨水洗脱，将氨水洗脱液减压浓缩挥尽氨水，PH值为9，浓缩液上D201大孔强碱型阴离子交换树脂柱，并水洗至中性，PH值为13～14的上柱流出液和水洗液串联上110凝胶弱酸型阳离子交换树脂柱，水洗并收集至2个柱体积水洗液，收集从弱酸型阳离子交换树脂柱下来的PH值为8～9的流出液和水洗液，喷雾干燥得到桑白皮提取物。
本发明提取物的优选制备方法为：
原料药材桑白皮经过切制后，以水作为溶剂提取2次，提取时间分别为3小时、2小时，提取温度为30℃，溶剂量分别为桑白皮原料药材重量的10倍、8倍；提取液合并，在70℃下减压浓缩后离心，取上清液，通过活性碳柱，除去色素，用15％的乙醇洗脱，15％的乙醇洗脱液上001*4型阳离子交换树脂柱，上柱液的PH值为6，流出液PH值下降为1～2，用去离子水洗脱至PH值为5～6，再用6～8倍柱体积的0.2M的氨水洗脱，将氨水洗脱液减压浓缩挥尽氨水，PH值为9，浓缩液上201*4凝胶强碱型阴离子交换树脂柱，并水洗至中性，PH值为13～14的上柱流出液和水洗液串联上WK40大孔弱酸型阳离子交换树脂柱，水洗并收集至2个柱体积水洗液，收集从弱酸型阳离子交换柱下来的PH值为8～9的流出液和水洗液，冷冻干燥得到桑白皮提取物。
本发明提取物的质量控制方法如下：
照高效液相色谱法测定：
a色谱条件：用十八烷基硅烷鍵合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％乙酸溶液＝40-60∶60-40为流动相，流速1.0ml/min，柱温25℃；荧光检测器激发波长254nm，发射波长322nm，进样量10μl；
b对照品溶液的制备：精密称取1-脱氧野尻霉素2-4mg，置10ml容量瓶中，加重蒸水至溶解并稀释到刻度，摇匀；精密量取0.30-0.50ml，置5ml容量瓶中加重蒸水到刻度，摇匀；用重蒸水将母液稀释成上述不同浓度的标准溶液系列，精密量取10ul标准溶液，按下面步骤进行衍生化和液相色谱分析，以标准溶液浓度对色谱峰面积进行线性回归，绘制标准曲线。
c样品溶液的制备：精密称取提取物0.03-0.06g，置10ml容量瓶中，加入0.05-0.15mol/L的盐酸溶液，超声使其溶解并稀释到刻度，摇匀，精密量取0.30-0.60ml，置100ml容量瓶中加去离子水到刻度，摇匀，备用；
d衍生化过程：精密量取上述提取液或不同浓度的标准溶液10μl置1.5ml具塞离心管中，精密加入10μl PH值为8-9的硼酸钠缓冲液，摇匀；精密加入20μl氯甲酸-9-芴甲酯(9-fluorenylmethyl chloroformate即FMOC-Cl)，摇匀；放入20-30℃循环水浴中恒温10-20分钟，取出；加入10ul 0.1M甘氨酸，摇匀；加入0.95ml的0.1％乙酸，摇匀，用一次性针头过滤器过滤，取10μl进样分析；按外标法计算样品浓度，提取物中1-脱氧野尻霉素的含量在500mg/g～900mg/g之间。
本发明提取物的质量控制方法优选如下：
照高效液相色谱法测定：
a色谱条件：用十八烷基硅烷鍵合硅胶为填充剂(C18柱250mm*4.6mm，5um)；以乙腈-0.1％乙酸溶液＝55∶45为流动相，流速1.0ml/min，柱温25℃；荧光检测器激发波长254nm，发射波长322nm，进样量10μl；
b对照品溶液的制备：精密称取1-脱氧野尻霉素2.29mg，置10ml容量瓶中，加重蒸水至溶解并稀释到刻度，摇匀；精密量取0.40ml，置5ml容量瓶中加重蒸水到刻度，摇匀；用重蒸水将母液稀释成不同浓度的标准溶液系列，精密量取10ul标准溶液，按下面步骤进行衍生化和液相色谱分析；
c样品溶液的制备：精密称取提取物0.05g，置10ml容量瓶中，加入0.05mol/L的盐酸溶液，超声使其溶解并稀释到刻度，摇匀，精密量取0.50ml，置100ml容量瓶中加去离子水到刻度，摇匀，备用；
d衍生化过程：精密量取上述提取液或不同同浓度的标准溶液10μl置1.5ml具塞离心管中，精密加入10μl PH值为8.5的硼酸钠缓冲液，摇匀；精密加入20μl氯甲酸-9-芴甲酯(9-fluorenylmethyl chloroformate)，摇匀；放入30℃循环水浴中恒温10分钟，取出；加入10ul 0.1M甘氨酸，摇匀；加入0.95ml 0.1％乙酸，摇匀，用一次性针头过滤器过滤，取10μl进样分析，记录色谱图，按外标法以峰面积计算样品浓度，本发明提取物中1-脱氧野尻霉素的含量在500mg/g～900mg/g之间。
附图说明
图1：桑白皮提取物对ICR小鼠口服淀粉耐量实验的影响。
本发明提取物的制备方法选用三种离子交换树脂对本发明提取物进行纯化，主要活性成分1-脱氧野尻霉素DNJ的含量大幅度提高；本发明提取物具有抑制α-葡萄糖苷酶活性作用。
下面实验例及实施例用于进一步说明但不限于本发明。
实验例1 不同制备方法所得桑白皮提取物的出膏率和1-脱氧野尻霉素(DNJ)含量比较实验
本实验例比较采用以下几种方法制备桑白皮提取物中1-脱氧野尻霉素(DNJ)含量的高低，结果见表1：
A、水提取法：100克桑白皮加药材重量7倍的水在70℃下提取两次，提取时间分别为2小时、1小时，提取液浓缩干燥；
B、醇提取法：100克桑白皮加药材重量7倍的30％的乙醇在70℃下加热回流提取两次，提取时间分别为2小时、1小时，提取液浓缩干燥；
C、水提醇沉法：100克桑白皮加药材重量7倍的水在70℃下提取两次，提取时间分别为2小时、1小时，提取液浓缩至300ml，加900ml的95％的乙醇醇沉，放置过夜，离心，上清夜浓缩干燥；
D、醇提水沉法：100克桑白皮加药材重量7倍的30％的乙醇回流提取两次，提取时间分别为2小时、1小时，提取液浓缩至150ml，加1200ml的水沉淀，放置过夜，离心，上清夜浓缩干燥；
E、提取液过阳离子交换树脂法：100克桑白皮加药材重量7倍的水在70℃下提取两次，提取时间分别为2小时、1小时，提取液浓缩，离心，取上清液200ml上强酸型阳离子交换树脂柱，如001*7型，以300ml 0.5M浓度氨水洗脱，洗脱液浓缩干燥；
F、提取液过阳阴离子交换树脂法：100克桑白皮加药材重量7倍的水在70℃下提取两次，提取时间分别为2小时、1小时，提取液浓缩，离心，取上清液200ml上强酸型阳离子交换树脂柱，如001*7型，以300ml 0.5M浓度氨水洗脱，氨水洗脱液浓缩挥尽氨水后上201*4凝胶强碱型阴离子交换树脂柱，收集上柱流出液和水洗液(水洗至中性)，干燥得到桑白皮提取物；
G、水醇提取液过活性碳柱法：100克桑白皮加药材重量7倍的水在70℃下提取两次，提取时间分别为2小时、1小时，提取液浓缩，离心，取上清液300ml过活性碳柱，用1000ml 15％的乙醇洗脱，收集洗脱液浓缩干燥；
H、本发明制备方法：100克桑白皮加药材重量7倍的水在70℃下提取两次，提取时间分别为2小时、1小时，提取液浓缩，离心，取上清液200ml上阳离子交换树脂，如001*7型，以300ml 0.5M浓度氨水洗脱，将氨水洗脱液减压浓缩挥去氨水后，PH至8，浓缩液上201*4凝胶强碱型阴离子交换树脂柱，上柱流出液和水洗液串联上D151或D113大孔弱酸型阳离子交换柱，收集从弱酸型阳离子交换柱下来的PH为8～9的流出液和水洗液，通过减压干燥得到本发明提取物；
表1 不同制备方法所得本发明提取物的出膏率和DNJ含量比较
从上述实验结果分析，不同制备方法所得桑白皮提取物出膏率和DNJ含量均有较大的差别，本发明所采用的方法与其它制备方法相比较，出膏率大大减少，提取物中的1-脱氧野尻霉素DNJ含量高于其它制备方法。
实验例2 用实施例1制备的本发明提取物对ICR小鼠口服淀粉耐量实验
1、实验试剂的配制
0.15g/ml可溶性淀粉的配制：称取可溶性淀粉22.5g，加饮用水120ml，充分混匀后置于100℃的沸水浴中加热，边加热边搅拌，趁热定容至150ml，待温度下降至室温时用水补足150ml；
拜糖苹的配制：取拜糖苹一片，溶于100ml的0.15g/ml可溶性淀粉中，充分混匀；
用实施例1制备的本发明提取物配制试剂方法如下：
提取物大剂量组(给药剂量15mg/kg)的配制方法：取提取物27mg，溶于20ml的0.15g/ml可溶性淀粉中，充分混匀；
提取物小剂量组(给药剂量10mg/kg)配制方法：取大剂量溶液5ml，加5ml的0.15g/ml可溶性淀粉中，充分混匀；
2、实验方法
正常ICR小鼠，体重30±2g，禁食不禁水12小时，分为4组，每组10只：对照组、拜糖苹组和本发明提取物的两个剂量组，将阳性药和受试药分别以一定的比例与糊化后的淀粉溶液充分混合(淀粉溶液的给药剂量为3g/kg)后灌胃给药，并立即记时，分别在0分钟、30分钟、60分钟、90分钟尾静脉取血测定血糖水平，实验结果见表2和图1：
表2 本发明提取物对ICR小鼠口服淀粉耐量实验的影响
从上述实验结果分析，本发明提取物对正常ICR小鼠的餐后血糖有较好的抑制作用，从0～120min本发明的两个剂量组与对照组相比均未出现明显的血糖峰值，说明本发明提取物有较为明显的糖苷酶抑制作用，大剂量组抑制血糖的效果明显优于小剂量组与拜糖苹组。
下述实施例均能实现上述实验例的效果。
具体实施方式
实施例1：本发明提取物的制备方法
原料药材10kg桑白皮经过切制后，以水作为溶剂提取3次，提取时间分别为2小时、1小时、1小时，提取温度为50℃，加水量分别为桑白皮原料药材重量的70L、50L、50L倍；提取液合并，在60℃下减压浓缩后离心，得上清液约40L，上001*7凝胶型阳离子交换树脂柱，柱体积为5L，上柱液的PH值为4～5，流出液PH下降为1～2，用去离子水洗脱至PH值为5～6，再用25L浓度为0.5M的氨水洗脱，将氨水洗脱液减压浓缩挥尽氨水，PH为8～9，浓缩液上201*4凝胶强碱型阴离子交换树脂柱，柱体积为4L，水洗至中性，PH至13～14的上柱流出液和水洗液串联上D151大孔弱酸型阳离子交换树脂柱，柱体积为5L，水洗至约2个柱体积，收集从弱酸型阳离子交换柱下来的PH为8～9的流出液和水洗液，喷雾干燥，得到桑白皮提取物35g，经过HPLC检测，提取物中1-脱氧野尻霉素含量为750mg/g。
实施例2：本发明提取物的制备方法
原料药材桑白皮1kg经过切制后，以15％的乙醇溶液作为溶剂提取4次，提取时间分别为3小时、2小时、1小时、1小时，提取温度为80℃，溶剂量分别为桑白皮原料药材重量的8L、6L、5L、5L；提取液合并，在55℃下减压浓缩后离心，得3L上清液，上001*7凝胶型阳离子交换树脂柱，柱体积为0.4L，上柱液的PH值为4～5，流出液PH下降为1～2，用去离子水洗脱至PH为5～6，再用1.2L浓度为1.0M的氨水洗脱，将氨水洗脱液减压浓缩挥尽氨水，PH值为9，浓缩液上D201大孔型强碱型阴离子交换树脂柱，柱体积为0.3L，水洗至中性，PH至13～14的上柱流出液和水洗液串联上110凝胶型弱酸型阳离子交换树脂柱，柱体积为0.4L，水洗至约3个柱体积，收集从弱酸型阳离子交换树脂柱下来的PH为8～9的流出液和水洗液，减压干燥，得到桑白皮提取物4g，经过HPLC检测，提取物中1-脱氧野尻霉素含量为720mg/g。
实施例3：本发明提取物的制备方法
原料药材桑白皮1kg经过切制后，以水作为溶剂提取2次，提取时间分别为3小时、2小时，提取温度为30℃，溶剂量分别为桑白皮原料药材重量的10倍、8倍；提取液合并，在70℃下减压浓缩后离心，得上清液3L，通过活性碳柱，除去大部分色素，用8L的15％乙醇洗脱，15％的乙醇洗脱液上001*4型强酸阳离子交换树脂柱，柱体积为0.5L，上柱液的PH值为6，流出液PH下降为1～2，用去离子水洗脱至PH为5～6，再用4.0L浓度为0.2M的氨水洗脱，将氨水洗脱液减压浓缩挥尽氨水，PH为9，浓缩液上201*4凝胶型强碱型阴离子交换树脂柱，水洗至中性，PH值为13～14的上柱流出液和水洗液串联上WK40大孔型弱酸型阳离子交换柱，水洗至约3个柱体积，收集从弱酸型阳离子交换柱下来的PH为8～9的流出液和水洗液，冷冻干燥得到桑白皮提取物2.8g，经过HPLC检测，提取物中1-脱氧野尻霉素含量为900mg/g。
实施例4：实施例1制备的本发明提取物的质量控制方法
照高效液相色谱法测定：
a色谱条件：用十八烷基硅烷鍵合硅胶为填充剂(C18柱250mm*4.6mm，5um)；以乙腈-0.1％乙酸溶液＝55∶45为流动相，流速1.0ml/min，柱温25℃；荧光检测器激发波长254nm，发射波长322nm，进样量10μl；
b对照品溶液的制备：精密称取1-脱氧野尻霉素2.29mg，置10ml容量瓶中，加重蒸水至溶解并稀释到刻度，摇匀；精密量取0.40ml，置5ml容量瓶中加重蒸水到刻度，摇匀；用重蒸水将母液稀释成不同浓度的标准溶液系列，精密量取10ul标准溶液，按下面步骤进行衍生化和液相色谱分析；
c样品溶液的制备：精密称取提取物0.05g，置10ml容量瓶中，加入0.05mol/L的盐酸溶液，超声使其溶解并稀释到刻度，摇匀，精密量取0.50ml，置100ml容量瓶中加去离子水到刻度，摇匀，备用；
d衍生化过程：精密量取上述提取液或不同同浓度的标准溶液10μl置1.5ml具塞离心管中，精密加入10μl PH值为8.5的硼酸钠缓冲液，摇匀；精密加入20μl氯甲酸-9-芴甲酯(9-fluorenylmethyl chloroformate)，摇匀；放入30℃循环水浴中恒温10分钟，取出；加入10μl 0.1M甘氨酸，摇匀；加入0.95ml 0.1％乙酸，摇匀，用一次性针头过滤器过滤，取10μl进样分析，记录色谱图，按外标法以峰面积计算样品浓度，按外标法以峰面积计算样品浓度，按本方法进行检测实施例1所得桑白皮提取物中1-脱氧野尻霉素的含量在750mg/g。
Claims (8)
1、一种具有糖苷酶抑制作用的桑白皮提取物的制备方法，其特征在于该提取物的制备方法如下：
原料药材桑白皮经过切制后，以水或10％～30％的乙醇溶液作为溶剂提取2～4次，每次1～3小时，提取温度为室温～90℃，总溶剂量为桑白皮原料药材重量的15～30倍；提取液在50℃～80℃下减压浓缩后离心，取上清液，通过活性碳柱除去色素或直接上强酸型阳离子交换树脂柱，用去离子水洗脱至PH值为5～6，再用2～10倍柱体积的浓度为0.2～1.0M的氨水洗脱，将氨水洗脱液减压浓缩挥尽氨水，PH值为8～10，浓缩液上强碱型阴离子交换树脂柱，并水洗至中性，PH值为11～14的上柱流出液和水洗液串联上弱酸型阳离子交换树脂柱，收集从弱酸型阳离子交换树脂柱流下来的PH值为8～9的流出液，水洗并收集至2-3个柱体积水洗液，合并上柱流出液和水洗液，常压、减压干燥、冷冻干燥或喷雾干燥得桑白皮提取物。
2、如权利要求1所述的桑白皮提取物的制备方法，其特征在于：其中的强酸型阳离子交换树脂选用001*1、001*2、001*3、001*4或001*7凝胶型阳离子交换树脂或D072、D061或D001CC大孔型阳离子交换树脂；强碱型阴离子交换树脂选用201*2、201*4或202*7凝胶型阴离子交换树脂或D090、D096、D201或D261大孔型阴离子交换树脂；弱酸型阳离子交换树脂选用110、D151、D152、D113、WK40或WK20凝胶型或大孔型阳离子交换树脂。
3、如权利要求1所述的桑白皮提取物的制备方法，其特征在于该提取物的制备方法如下：
原料药材桑白皮经过切制后，以水作为溶剂提取3次，提取时间分别为2小时、1小时、1小时，提取温度为50℃，溶剂量分别为桑白皮原料药材重量的7倍、5倍、5倍，提取液合并，在60℃下减压浓缩后离心，取上清液，上001*7凝胶型阳离子交换树脂柱，上柱液的PH值为4～5，流出液PH值下降为1～2，说明有效成分已交换到树脂上，用去离子水洗脱至PH值为5～6，再用4～6倍柱体积的0.5M氨水洗脱，将氨水洗脱液减压浓缩挥尽氨水，PH值为8～10，浓缩液上201*4凝胶强碱型阴离子交换树脂柱，并水洗至中性，PH值为13～14的上柱流出液和水洗液串联上D151大孔弱酸型阳离子交换树脂柱，水洗并收集至2个柱体积水洗液，收集从弱酸型阳离子交换柱下来的PH值为8～9的流出液和水洗液，减压干燥得到桑白皮提取物。
4、如权利要求1所述的桑白皮提取物的制备方法，其特征在于该提取物的制备方法如下：
原料药材桑白皮经过切制后，以15％的乙醇溶液作为溶剂提取4次，提取时间分别为3小时、2小时、1小时、1小时，提取温度为80℃，溶剂量分别为桑白皮原料药材重量的8倍、6倍、5倍、5倍；提取液合并，在55℃下减压浓缩后离心，取上清液，上001*7凝胶型阳离子交换树脂柱，上柱液的PH值为4～5，流出液PH值下降为1～2，用去离子水洗脱至PH值为5～6，再用2～4倍柱体积的1.0M氨水洗脱，将氨水洗脱液减压浓缩挥尽氨水，PH值为9，浓缩液上D201大孔强碱型阴离子交换树脂柱，并水洗至中性，PH值为13～14的上柱流出液和水洗液串联上110凝胶弱酸型阳离子交换树脂柱，水洗并收集至2个柱体积水洗液，收集从弱酸型阳离子交换树脂柱下来的PH值为8～9的流出液和水洗液，喷雾干燥得到桑白皮提取物。
5、如权利要求1所述的桑白皮提取物的制备方法，其特征在于该提取物的制备方法如下：
原料药材桑白皮经过切制后，以水作为溶剂提取2次，提取时间分别为3小时、2小时，提取温度为30℃，溶剂量分别为桑白皮原料药材重量的10倍、8倍；提取液合并，在70℃下减压浓缩后离心，取上清液，通过活性碳柱，除去色素，用15％的乙醇洗脱，15％的乙醇洗脱液上001*4型阳离子交换树脂柱，上柱液的PH值为6，流出液PH值下降为1～2，用去离子水洗脱至PH值为5～6，再用6～8倍柱体积的0.2M的氨水洗脱，将氨水洗脱液减压浓缩挥尽氨水，PH值为9，浓缩液上201*4凝胶强碱型阴离子交换树脂柱，并水洗至中性，PH值为13～14的上柱流出液和水洗液串联上WK40大孔弱酸型阳离子交换树脂柱，水洗并收集至2个柱体积水洗液，收集从弱酸型阳离子交换柱下来的PH值为8～9的流出液和水洗液，冷冻干燥得到桑白皮提取物。
6、由权利要求1-2所述的制备方法制成的桑白皮提取物的质量控制方法，其特征在于该方法如下：
照高效液相色谱法测定：
a色谱条件：用十八烷基硅烷鍵合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％乙酸溶液＝40-60∶60-40为流动相，流速1.0ml/min，柱温25℃；荧光检测器激发波长254nm，发射波长322nm，进样量10μl；
b对照品溶液的制备：精密称取1-脱氧野尻霉素2-4mg，置10ml容量瓶中，加重蒸水至溶解并稀释到刻度，摇匀；精密量取0.30-0.50ml，置5ml容量瓶中加重蒸水到刻度，摇匀；用重蒸水将母液稀释成不同浓度的标准溶液系列，精密量取10ul标准溶液，按下面步骤进行衍生化和液相色谱分析，以标准溶液浓度对色谱峰面积进行线性回归，绘制标准曲线；
c样品溶液的制备：精密称取提取物0.03-0.06g，置10ml容量瓶中，加入0.05-0.15mol/L的盐酸溶液，超声使其溶解并稀释到刻度，摇匀，精密量取0.30-0.60ml，置100ml容量瓶中加去离子水到刻度，摇匀，备用；
d衍生化过程：精密量取上述提取液或不同浓度的标准溶液10μl置1.5ml具塞离心管中，精密加入10μl PH值为8-9的硼酸钠缓冲液，摇匀；精密加入20μl氯甲酸-9-芴甲酯，摇匀；放入20-30℃循环水浴中恒温10-20分钟，取出；加入10ul0.1M甘氨酸，摇匀；加入0.95ml 0.1％乙酸，摇匀，用一次性针头过滤器过滤，取10μl进样分析；按外标法计算样品浓度，提取物中1-脱氧野尻霉素的含量在500mg/g～900mg/g之间。
7、如权利要求6所述的桑白皮提取物的质量控制方法，其特征在于该方法如下：
照高效液相色谱法测定：
a色谱条件：用十八烷基硅烷鍵合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％乙酸溶液＝55∶45为流动相，流速1.0ml/min，柱温25℃；荧光检测器激发波长254nm，发射波长322nm，进样量10μl；
b对照品溶液的制备：精密称取1-脱氧野尻霉素2.29mg，置10ml容量瓶中，加重蒸水至溶解并稀释到刻度，摇匀；精密量取0.40ml，置5ml容量瓶中加重蒸水到刻度，摇匀；用重蒸水将母液稀释成不同浓度的标准溶液系列，精密量取10ul标准溶液，按下面步骤进行衍生化和液相色谱分析；
c样品溶液的制备：精密称取提取物0.05g，置10ml容量瓶中，加入0.05mol/L的盐酸溶液，超声使其溶解并稀释到刻度，摇匀，精密量取0.50ml，置100ml容量瓶中加去离子水到刻度，摇匀，备用；
d衍生化过程：精密量取上述提取液或不同同浓度的标准溶液10μl置1.5ml具塞离心管中，精密加入10μl PH值为8.5的硼酸钠缓冲液，摇匀；精密加入20μl氯甲酸-9-芴甲酯，摇匀；放入30℃循环水浴中恒温10分钟，取出；加入10ul的0.1M甘氨酸，摇匀；加入0.95ml 0.1％乙酸，摇匀，用一次性针头过滤器过滤，取10μl进样分析，记录色谱图，按外标法以峰面积计算样品浓度，提取物中1-脱氧野尻霉素的含量在500mg/g～900mg/g之间。
8、一种1-脱氧野尻霉素的含量为500mg/g～900mg/g的桑白皮提取物。
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