CN101287503A

CN101287503A - 用于诊断IgA和IgM介导的肾脏疾病的方法和组合物

Info

Publication number: CN101287503A
Application number: CNA2006800283574A
Authority: CN
Inventors: 罗伯特·思东·仇; 仇家舟; 安德鲁·G.·普劳特
Original assignee: New England Medical Center Hospitals Inc; RQ Bioscience Inc
Current assignee: New England Medical Center Hospitals Inc; RQ Bioscience Inc
Priority date: 2005-08-03
Filing date: 2006-08-03
Publication date: 2008-10-15
Also published as: WO2007019376A2; US20130095036A1; EP1933883A2; US20100015044A1; JP2009503115A; CN102989018A; WO2007019376A3; EP1933883B1; EP1933883A4

Abstract

本发明的特征在于用非侵入性方法诊断哺乳动物中的IgA或IgM肾脏病症，例如IgA肾病、过敏性紫癜和IgM肾病。本发明的特征还在于在这些病症诊断中有用的组合物和试剂盒。

Description

用于诊断IgA和IgM介导的肾脏疾病的方法和组合物

技术领域

本发明涉及关于肾脏疾病的诊断方法以及在此类疾病诊断中有用的组合物和试剂盒的领域。

背景技术

IgA肾病(IgAN、贝格尔氏(Berger′s)病)的特征在于IgA1沉积在肾脏皮质的肾小球系膜中，且是全世界最普遍的肾小球肾炎。IgA沉积通常在人生的第二个或第三个10年时自发地出现，且被认为是免疫复合物。抗原未知；IgA自身可能是抗原。该病的流行率在美国和欧洲很高，但在亚洲最高。在日本的发病率可能是所有肾活检的40-50％。多年持续或间歇性检测到的显微镜性血尿和蛋白尿是这种疾病的临床特征，且超过50％的患者还发展为高血压。这不是曾经认为的良性病，约15-40％的患者最终发展成肾衰竭。事实上，IgA肾病是原发性肾小球疾病最终达到肾脏移植的患者中肾终末期疾病的主因。

过敏性紫癜(Henoch-purpura，HSP)是另一种IgA1介导的感染后血管炎，在年龄2-11岁的儿童中最常见，而肾损害非常类似于IgAN。流行率在14岁以下是22/100,000，且在年龄4-6岁的群体中是70/100,000。HSP是如此类似于IgAN，以致于认为IgAN是病变局限于肾脏形式的HSP的观念近来已获得接受(Smith和Feehally，Springer Semin.Immunopathol.24：477-49 3，2003)。

IgM肾病(IgMN)引起肾病综合征且特征在于IgM的肾小球系膜沉积。推测这些沉积来源于循环IgM聚集物或免疫复合物，类似于IgAN。IgMN通常见于儿童中，且IgMN的临床特征非常类似于微小病变疾病(MCD)，其中肾病综合征是主要临床表型，但IgMN导致明显高于MCD的高血压发病率。

在本发明之前，这些疾病的诊断通过取出肾组织样品用于病理学检查的肾活检来进行。肾脏病理学家进行肾组织的免疫荧光染色。这需要连续应用抗人IgA抗体，随后用荧光染料缀合的第二抗体显色，以定位基于IgA的抗体-抗原复合物用于诊断IgAN和HSP。在IgMN的诊断中，可以应用相同操作，但使用的抗体特异性是结合人的IgM。如果测试检测到比共存的IgG更高的高水平的肾小球IgA，以及不同程度存在的补体组分，则可进行IgA肾病的诊断。对于IgMN也是如此，其中肾小球中的IgM沉积定义该疾病。

活检时，患者通常取俯卧位躺着时进行，其肾脏已经过超声或CAT扫描定位。在局部麻醉下，在皮肤上制造小切口。使用合适的憋气规程，使用活检针获取大小1-1.5cm×2mm的样品，随后再取出活检针。患者留在医院里，仰卧12-24小时，伴随监测以检测并发症，所述并发症可以包括出血、疼痛、动静脉瘘、泌尿道感染、以及罕见情况下的死亡。

出血是肾活检最常见的并发症。尽管在活检前，患者被测试凝血能力，但大多数患者经历短时间的显微镜性血尿。罕见地，出血严重得足以需要输血或手术。估计在经皮肾活检中，有0.1-0.4％的病人需要经过手术才能控制出血，且在所有采用针吸活检的病人中，大约有0.06％(6/10,000)需要切除肾以控制出血。

疼痛是常见问题且是短暂的。持续超过12小时的疼痛在大约4％的活检中发生。在血块阻塞输尿管之一或在大包膜下血肿的情况下，可能发生严重或延长的疼痛。

2根血管之间的动静脉瘘可能起因于由活检针引起的邻近动脉和静脉壁的损害。此类瘘是罕见的且通常在1到2年内自发地关闭。

死亡在大约0.1％的肾活检情况下发生。

肾活检并非对于所有患者都是合适的。禁忌症包括无法补救的出血病症、小肾、无法在医学上控制的严重高血压、多重双侧肾囊肿或肾肿瘤、肾积水(尿流被阻塞导致肾损害的病症)、肾脏或周围组织的活动性感染、患者不能配合、和先天性单肾。经皮活检的可替代方法是开放性手术活检和经颈静脉肾活检。

正因为以上各种原因，临床上需求更安全、更可靠和侵袭性更少的方法用于诊断IgA肾病、HSP和IgM肾病。

发明内容

本发明的特征是用于诊断哺乳动物(例如，人)中的IgA或IgM肾脏疾病的方法，所述方法包括给哺乳动物施用(例如，静脉内)特异性结合IgA或IgM的化合物，和检测哺乳动物肾中的该化合物，其中，所述哺乳动物肾中的该化合物的量相对于没有肾脏疾病的哺乳动物肾脏中的该量的增加有助于诊断哺乳动物中的IgA或IgM肾脏疾病。

化合物可以包括肽(例如，人FcαR1(SEQ ID NO：2)、人Fcα/μ受体(SEQ ID NO：6)、多聚Ig受体(SEQ ID NO：7)、Sir 22(SEQ ID NO：3)、链球菌IgA结合肽(Sap；SEQ ID NO：4)、修饰的Z-结构域蛋白质(SEQ ID NO：12)和YDWIPSSAW(SEQ ID NO：9)、或这些肽的IgA或IgM结合片段)。肽可以包括N末端帽、C末端帽、D氨基酸、氨基酸替代物、拟肽序列或间隔物的修饰。化合物可以包括抗体、或抗体的IgA或IgM结合片段(例如，抗人IgA或抗人IgM)。化合物可以含有量子点。化合物也可以与放射性标记(例如，^99mTc、¹¹¹In、⁶⁶Ga、⁶⁷Ga、⁶⁸Ga、⁸⁶Y、⁹⁰Y、²⁰¹Tl、⁵⁵Co、⁶⁰Cu、⁶¹Cu、⁶²Cu、⁶⁴Cu、⁶⁷Cu、⁸²Rb、^185/187Re和^186/188Re)连接。连接可以通过双功能螯合剂，这可以包括N₃S、N₂S₂、PnAO、HYNIC、[M(CO)₃(H₂O)₃]⁺、PADA、DTPA、DOTA、组氨酸、三肽(例如，Lys-Gly-Cys、Cys-Gly-Cys和Gly-Gly-Cys)和四肽(例如，Gly-Ala-Gly-Gly或Cys-Gly-Cys-Gly)。化合物可以与顺磁物质(例如，钆)连接。检测可以通过成像技术(SPECT、PET、平面扫描和MRI)来进行。

在一个进一步的实施方案中，化合物包括半乳糖和结合对的第一个成员(例如，链霉亲和素)。化合物的施用可以进一步包括半乳糖-菲柯尔(Ficoll)的施用。检测随后可以通过下列来进行：给哺乳动物施用与结合对的第二个成员(例如，生物素)以及半乳糖缀合的放射性标记(例如，^99mTc、¹¹¹In、⁶⁶Ga、⁶⁷Ga、⁶⁸Ga、⁸⁶Y、⁹⁰Y、²⁰¹Tl、⁵⁵Co、⁶⁰Cu、⁶¹Cu、⁶²Cu、⁶⁴Cu、⁶⁷Cu、⁸²Rb、^185/187Re或^186/188Re标记)化合物(例如，人血清白蛋白)，随后检测哺乳动物肾中的该放射性标记化合物。

本发明的第二个方面是包括IgA或IgM结合化合物、双功能螯合剂和在药学可接受载体中的可检测标记的组合物，其中IgA或IgM结合化合物通过双功能螯合剂与可检测标记连接。化合物可以包括肽(例如，人FcαR1(SEQID NO：2)、人Fcα/μ受体(SEQ ID NO：6)、多聚Ig受体(SEQ ID NO：7)、Sir22(SEQ ID NO：3)、链球菌IgA结合肽(Sap；SEQ ID NO：4)、修饰的Z-结构域蛋白质(SEQ ID NO：12)和YDWIPSSAW(SEQ ID NO：9)、或这些肽之一的IgA或IgM结合片段)。肽可以包括N末端帽、C末端帽、D氨基酸、氨基酸替代物、拟肽序列或间隔物的修饰。该化合物还可以包括抗体(例如，抗人IgA或抗人IgM)、或抗体的IgA或IgM结合片段。双功能螯合剂可以是N₃S、N₂S₂、PnAO、HYNIC、[M(CO)₃(H₂O)₃]⁺、PADA、DTPA、DOTA、组氨酸、三肽(例如，Lys-Gly-Cys、Cys-Gly-Cys或Gly-Gly-Cys)或四肽(例如，Gly-Ala-Gly-Gly或Cys-Gly-Cys-Gly)。

在第三个方面，本发明提供了包括IgA或IgM结合化合物、双功能螯合剂、在药学可接受载体中的可检测标记和用于检测哺乳动物中的IgA或IgM肾脏疾病的使用说明的试剂盒。该化合物可以包括半乳糖和结合对的第一个成员(例如，链霉亲和素)；并且该可检测标记可以包括放射性标记肽(例如，人血清白蛋白)，该放射性标记(例如，^99mTc、¹¹¹In、⁶⁶Ga、⁶⁷Ga、⁶⁸Ga、⁸⁶Y、⁹⁰Y、²⁰¹Tl、⁵⁵Co、⁶⁰Cu、⁶¹Cu、⁶²Cu、⁶⁴Cu、⁶⁷Cu、⁸²Rb、^185/187Re或^186/188Re标记)肽包括半乳糖和结合对的第二个成员(例如，生物素)。

“IgA或IgM肾脏疾病”意指由IgA或IgM在肾中沉积介导的肾脏病症。这些病症包括例如IgA肾病、过敏性紫癜和IgM肾病。

“特异性结合”意指识别且结合例如IgA或IgM等化合物，但基本上不识别且不结合样品例如生物样品中天然地包括的其他化合物。在一个例子中，与IgA1(SEQ ID NO：1)特异性结合的抗体识别IgA1中存在但IgA2中不存在的13个氨基酸的区域。希望地，化合物与目的化合物例如IgA的结合比它与样品中其他组分的结合强至少5倍、10倍、25倍、50倍、100倍或1000倍。

“N末端帽”意指对于肽或蛋白质氨基末端的任何化学修饰。在本发明中，给肽或蛋白质添加N末端帽希望与未加帽的蛋白质比较减少肽或蛋白质的体内降解率。N末端帽的例子包括乙酰化和肽环化。

“C末端帽”意指对于肽或蛋白质羧基末端的任何化学修饰。在本发明中，给肽或蛋白质添加C末端帽希望与未加帽的蛋白质比较减少肽或蛋白质的体内降解率。C末端帽的例子包括使C末端酰胺化或还原，和肽环化。

“拟肽”意指模拟肽特征包括识别生物分子的能力的分子。在本发明中，将拟肽***肽或蛋白质内以防止经由肽链内切酶和肽链端解酶的体内降解。

“间隔物”意指在内部或N或C末端处***的代替肽序列中的氨基酸的小分子。间隔物的例子包括氨基己酸。与拟肽类似，间隔物在本发明中用于防止肽降解。

“氨基酸替代物”意指可以置于肽或蛋白质内代替氨基酸的任何化学化合物。氨基酸替代物的例子包括间隔物、拟肽、亚氨基酸、以及具有甲基化酰胺和/或甲基化侧链氮的氨基酸。

“片段”意指包含较大肽或多核苷酸的任何部分的至少4、5、6、8、10、15、20或25个氨基酸或核苷酸的链。

“肽”意指氨基酸或其类似物的任何链，任何长度或翻译后修饰(例如，糖基化或磷酸化)均可。

“量子点”意指荧光半导体纳米晶体。制备量子点的材料的例子包括CdS、CdSe、CdTe、CdHgTe/ZnS、InP、InAs和PbSe。

本发明的其他特征和优点通过下列详细描述、附图和权利要求将显而易见。

附图说明

图1是二聚IgA1(SEQ ID NO：1)、其铰链区(SEQ ID NO：14)和O-聚糖位点(Thr225、Thr 228、Ser230、Ser 232、Thr 236)的图示。

图2是IgA的Fc受体(FcαR1/CD89；SEQ ID NO：2)的结构和特征图示。描述了细胞外结构域1和3(EC-1和EC-2)以及γ链关联对与其信号转导(ITAM)基序。此外概括了CD 89的特征、其细胞分布及其已知功能。(来自：Westerhuis，Pathogenetic Aspects of IgA-Nephropathy 2001PrintPartners Ipskamp，Enschede)

图3是链球菌Sir22(M22；SEQ ID NO：3)蛋白质和来源于这种蛋白质的Sap肽(SEQ ID NO：4)序列的图示。Sap肽包括29个残基的IgA结合区域(水平箭头标记“IgA”)和这个区域两侧的各10个残基。另外，Sap包括促进其二聚作用但Sir22中不存在的C末端半胱氨酸残基。指出了Sir22中已知包括对于C4BP(人补体调节剂)、IgA和IgG的结合位点的区域。C4BP结合区域是高变结构域。(名称“C4BP”和“IgG”下的水平箭头指出了用于结合C4BP和IgG的相应区域。对于这3个结合区域中的每一个均存在某些序列重叠)。还指出了保守的C重复区域的位置。Sir22的C末端与细菌细胞壁中的肽聚糖共价结合。

图4是完整Ig连同Fab和Fv片段以及单个V(有色的椭圆形；点表示抗原结合位点)和C结构域(未着色的)的图示。工程化的重组抗体显示为scFv单体、二聚体(双价抗体)、三聚体(三价抗体)和四聚体(四价抗体)，而连接物由黑线表示。微型抗体显示为由2个C结构域连接的2个scFv模块。还显示了Fab二聚体(由粘性多肽或蛋白质结构域缀合)和Fab三聚体(化学缀合)。颜色表示双特异性scFv二聚体(双价抗体)以及Fab二聚体和三聚体的不同特异性。

图5是关于^99mTc的双功能螯合剂(BFCA)的结构图示。显示了三酰胺硫醇(Triamidethiols)(N₃S)、二酰胺二硫醇(diamidedithiols)(N₂S₂)、丙胺肟(PnAO)和肼基烟酸(HYNIC)。

图6是甲氨基吡啶-N，N-二乙酸(PADA)及其与Tc的复合物的结构图示。显示了PADA及其与水合离子[Tc(CO)₃(H₂O)₃]⁺反应后的复合物。

图7是关于¹¹¹In的BFCA的结构图示。显示了二乙烯三胺五乙酸(DTPA)和四氮杂环十二烷四乙酸(DOTA)。

图8是氨基酸和核酸序列表，包括IgA1 C区(SEQ ID NO：1)、CD89(SEQ ID NO：2)、Sir22(SEQ ID NO：3)、Sap(SEQ ID NO：4)、可溶性CD89(SEQ ID NO：5)、人Fcα/μR(SEQ ID NO：6)、pIgR(SEQ ID NO：7)、CD71(SEQ ID NO：8)、IgM结合肽(SEQ ID NO：9)、葡萄球菌A蛋白(SEQ ID NO：10)、Z-结构域(SEQ ID NO：11)、修饰的Z-结构域(SEQ ID NO：12)、B-结构域(SEQ ID NO：13)、IgA1铰链区(SEQ ID NO：14)、IgMμ链氨基酸序列(SEQ ID NO：15)、IgMμ链核酸序列(SEQ IDNO：16)和IgM铰链序列(SEQ ID NO：17)。

具体实施方式

本发明使用放射学扫描鉴定具有基于肾小球的肾脏病的患者，所述肾脏病例如是IgA肾病(IgAN)、过敏性紫癜(HSP)和IgM肾病(IgMN)。IgAN的特征在于和时间(年)有关的IgA1免疫球蛋白(SEQ ID NO：1)沉积在肾皮质的肾小球内。HSP与IgAN紧密相关，具有相同模式的IgA1沉积和肾损伤。IgMN的特征在于IgM沉积在肾小球的肾小球系膜中。为了鉴定具有IgA1或IgM沉积的肾脏病的那些患者，需要进行肾的闭合性针吸活检，获取用于病理学检查的组织核块、这是具有中等危险的、并且会带给病人痛苦的操作。使用本发明，IgA1或IgM沉积可以使用放射学成像法进行诊断，其中肾皮质中的IgA1或IgM沉积使用注入的、标记的IgA结合或IgM结合分子进行检测。

当肾活检以便进行肾脏疾病诊断时，用于诊断IgAN、HSP和IgMN的关键标准是在作为IgA或IgM沉积的唯一位点的肾小球中存在显著的IgA1或IgM沉积。因为正常人和具有非IgAN、非IgMN肾脏疾病的那些人在其肾小球中没有显著量的IgA1或IgM，所以本发明提出了用于肾皮质中的IgA或IgM的宏观、非侵入性检测方法。本发明的另一个优点是扫描提供了关于2个肾中的完整肾皮质的信息，因此减少了针吸活检方法中固有的取样误差(Sund等人，Nephrol.Dial.Transplant.14：2445-2454，1999)。

本发明的特征在于靶向IgA1的几种IgA特异性结合肽、可以标记肽的可用放射性同位素、和用于这种标记的连接物。在一个实施方案中，放射性核素标记的IgA结合肽或蛋白质用作诊断放射性药物以检测肾中的IgA沉积物。注入的放射标记的IgA结合肽与遍及全身的IgA结合。因为健康肾的肾小球中沉积的IgA很少，所以具有IgAN的患者肾小球中的IgA沉着物导致从肾小球所在的肾皮质发出高浓度的辐射。这种辐射可以通过各种核成像技术进行检测，因此可以用于诊断IgAN。对于肾脏疾病的诊断，人来源的抗体、或人源化的抗体、或具有对人IgA1的特异性的动物单克隆抗体非常适合作为IgA结合化合物，且还可以用于检测肾小球中的IgA1沉着物。

另外类型的肾病包括IgM肾病可以类似地进行诊断。例如用抗人IgM抗体或其片段替换IgA结合蛋白质或抗体，IgM可以在IgM肾病中被检测。

IgA结构

人免疫球蛋白A(IgA)合成超过所有其他免疫球蛋白种类的总和(Rifai等人，J.Exp.Med.191：2171-2181，2000)。与34mg IgG和7.9mg IgM比较，估计每天产生66mg IgA/kg体重。存在2种IgA同种型-IgA1(SEQID NO：1)和IgA2。在粘膜表面(例如肠、呼吸道、生殖道)上存在由局部B细胞合成的IgA1和IgA2。然而，在血液中由骨髓、***和脾中的B细胞产生的IgA1占优势(Donadio和Grande，N.Engl.J.Med.347：738-748，2002)。

IgA1(SEQ ID NO：1)和IgA2亚类之间的主要差异是IgA2铰链区中的13个氨基酸缺失。IgA1中的这个区段包含几个O-糖基化的丝氨酸和苏氨酸残基。IgA2中这个区域的缺失解释了IgA2上O-联寡糖的缺乏(图1)。

IgM结构

IgM(SEQ ID NO：15)可以在B淋巴细胞表面上作为单体找到，但在循环中在由浆细胞分泌后它主要作为五聚体存在。IgM五聚体具有～850-1,000kDa的分子量，而每个单体为～180kDa。IgM代表～10％的总血清Ig，且是初次体液应答时合成的第一种抗体同种型。

成人中的正常血浆IgM水平是约1mg/ml，而半袁期为约5天。这与12mg/ml的IgG水平、25天的半衰期和1.8mg/ml的IgA、6天的半衰期形成对比。

碳水化合物构成了IgM蛋白质的约12重量％。IgM的μ重链由4个CH结构域组成(只有μ和ε(IgE)重链各自具有4个恒定重区结构域-CH1、CH2、CH3和CH4，而γ(IgG)、α(IgA)和δ(IgD)各自具有3个恒定重区结构域。)

由于在五聚体上存在10个相同的抗原结合位点，所以IgM是极佳的凝集抗体。另外，IgM在补体激活方面也是有效的。IgM单体通过链间二硫键以及通过J链连接在一起形成五聚体，所述J链是附加至IgM的2个单体且使五聚体处于闭合的、外观环状的构象的15kDa肽。(J链还用于将IgA单体连接在一起，形成二聚体。)

诊断组合物

用于在本文使用的诊断放射性药物的组分包括(1)特异性结合人IgA或IgM的化合物、肽、或蛋白质，和(2)在药学可接受载体中、能够通过放射学成像技术(例如，SPECT)检测的、与化合物、肽、或蛋白质螯合的化合物(例如，放射性同位素)。优选试剂包括双功能螯合剂(BFCA)，它用于螯合(1)和(2)。

尽管任何IgA结合或IgM结合化合物、蛋白质、或肽都可以作为生物分子而用于诊断，但优选候选物符合下述标准中的几个或全部：对人IgA或IgM的高特异性和亲和力；对于IgA介导的肾病，要有区分IgA1与IgA2的能力；小分子，因为这样免疫原性更小；人源的蛋白质；容易表达或化学合成；易于产生和修饰；和适当糖基化，包含用于无唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)清除的半乳糖，由此使肾小管滞留减到最小。

IgA和IgM结合化合物/肽

IgA和IgM结合蛋白质或肽可以包括细胞上的天然人IgA结合受体；识别IgA和IgM的受体；细菌IgA结合蛋白质及其衍生的肽；抗人IgA或IgM抗体及其较小的衍生物(例如，Fab)；和使用例如噬菌体展示法发现的结合IgA和IgM的特异性肽。

IgA特异性受体

IgA特异性受体的天然功能包括募集炎症细胞和调节物至炎症位点(CD89；SEQ ID NO：2)，以及使IgA在身体的分布，例如让IgA进入分泌液的受体(pIgR；SEQ ID NO：7)。

人FcαR1(CD89；SEQ ID NO：2；参见图2)是包含2个细胞外Ig样结构域(206个氨基酸)、跨膜区(19个氨基酸)和胞质尾区(31个氨基酸)的膜糖蛋白。在跨膜区，带正电荷的精氨酸残基是CD 89与FcRγ链结合所必须的。如同缺乏细胞内信号转导基序的其他Fc受体，FcαR的信号转导到细胞内经由其与FcRγ链的关联开始。FcRγ链是大小为10kDa的同型二聚体信号转导单位。与CD89结合导致γ链上的细胞内、基于免疫受体酪氨酸的活化基序(ITAM)的磷酸化，激活信号转导途径下游至细胞内。FcαR1结合单体和二聚形式的IgA1和IgA2。白细胞中的转染研究显示FcαR1不结合IgG。FcαR1只由髓样细胞包括嗜中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞和嗜酸性细胞表达。有学者提出FcαR1在循环中有去除IgA抗原复合物的作用(Mattu等人，J.Bio.Chem.273：2260-2272，1998；Leung等人，J.Am.Soc.Nephrol.11：241-249，2000；Westerhuis，PathogeneticAspects of IgA-Nephropathy 2001，第1章，第IV节：IgA receptors andIgAN，2001，PrintParters，Ipskamp，Enschede)。

重组CD89(SEQ ID NO：5)的206个氨基酸的可溶部分已在几个研究实验室中成功表达，并且此类可溶受体具有用作IgA检测肽用于诊断IgAN的潜力。尽管存在可溶性CD89可能加重IgAN的一些有争议的报道(PierreLaunay等人，J.Exp.Med.191：1999-2009)，但由于其高特异性和亲和力，这种片段对于与IgA的结合是优选的。这种蛋白质是糖基化的，这可能加速其经由无唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)的清除。这使循环中的未结合配体的本底噪声减到最小，且可能使经由肾降解***清除放射性核素的量减到最小，这也就减少了本底噪声。更优选地，使用保留IgA结合活性的这种肽的较小片段。

特异性结合IgA和IgM的受体

人Fcα/μ受体(Fcα/μR；SEQ ID NO：6)以中到高亲和力结合IgA和IgM。Fcα/μR在大多数B淋巴细胞和巨噬细胞上组成型表达(Sakamoto等人，Eur.J.Immunol.31：1310-1316，2001；Shibuya等人，Nat.Immunol.1：441-446，2000)。

多聚Ig受体(pIgR；SEQ ID NO：7)是位于分泌性上皮细胞基底外侧表面上的完整膜组分。它介导多聚Ig，主要是二聚IgA和五聚IgM的跨上皮运输。pIgR位于大多数的人体分泌性上皮细胞上，包括肠、支气管、唾液腺、肾小管和子宫，并且它与多聚免疫球蛋白上的J链结合。IgA的结合导致蛋白质通过上皮细胞从粘膜固有层转移到肠腔(或其他IgA分泌位点)以达到沐浴粘膜的无细胞流体。分泌型IgA(sIgA)负责中和微生物和毒素且阻止不需要的抗原通过粘膜屏障(Mattu等人，J.Bio.Chem.273：2260-2272，1998；Leung等人，J.Am.Soc.Nephrol.11：241-249，2000)。

近来，其他IgA受体已被提议，包括在肾小球系膜细胞上表达的转铁蛋白受体(CD71；SEQ ID NO：8)(Haddad等人，J.Am.Soc.Nephrol.14：327-337，2003)。尽管这种蛋白质在IgA1沉积疾病中的作用未知，但它也可以在本发明中使用。

细菌IgA结合肽

结合人IgA-Fc的细菌表面蛋白质已在A组链球菌(化脓性链球菌(Streptococcus pyogenes))和B组链球菌(无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)；Sandin等人，J.Immunol.169：1357-1364，2002；Pleass等人，J.Biol.Chem.276：8197-8204，2001；Johnsson等人，J.Biol.Chem.274：14521-14524，1999；Stenbere等人，J.Biol.Chem.269：13458-13464，1994)中得到描述。化脓性链球菌的IgA结合蛋白质是M蛋白家族成员，所述M蛋白家族是重要的毒力因子的二聚蛋白质的异质家族。所有M蛋白结合一种或多种人血浆蛋白，且所有化脓性链球菌株中约50％表达结合IgA-Fc的M蛋白。M蛋白具有促进IgA结合的结构特征，例如，在几种情况下，七个重复模式形成卷曲螺旋二聚体，所述卷曲螺旋二聚体与IgA上的特异性位点结合。已由Sandin等人(J.Immunol.2002，169：1357-1364)详细研究的蛋白质Sir22(也称为蛋白质M22，因为它在M蛋白家族中；SEQ ID NO：3)，在其结构中含有一个由29个氨基酸组成的片断，足以用于IgA的结合。已设计了50个残基的合成肽(SEQ ID NO：4)，它包括29个残基的IgA结合区域且与人IgA特异性结合。这种命名为链球菌IgA结合肽或Sap(SEQ ID NO：4)的50聚体，具有分离IgA结合结构域的特性，并且它在IgA上的结合位点已知在Fc区中，与结合人CD89的位点相同。Sap是Sir22的氨基酸35-83的同系物，且被设计为包括Sir22中不存在的C末端半胱氨酸残基。引入半胱氨酸以引起Sap肽二聚化，这个过程可以通过与CuCl₂一起培养得到加强。由Lindahl等人进行的IgA结合测试指出Sap二聚化对于IgA结合是必需的。固定在固体载体上的Sap肽已显示能够完全吸收来自人血清的所有IgA同种型、单体和聚合体，且来自Sap色谱柱的洗脱物只包含IgA。因此，二聚化Sap代表用于IgAN诊断的优选IgA结合肽，具有IgA结合特异性和显然的高亲和力。另外，Sap可以通过固相肽合成(SPPS)方法进行合成，且使用本领域标准方法在残基仍在树脂上的固相中时，可以向N或C末端添加双功能螯合剂(BFCA；关于细节参见下文)。Sap类似物很小(对于单体为约5.5kDa且在二聚化时为11kDa)，因此使抗原性减到最小。

在金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)A蛋白(SPA；SEQ ID NO：10)中，可以发现5个Ig结合结构域。SPA与免疫球蛋白的Fc区强烈结合。Z结构域(SEQ ID NO：11)是来源于SPA中这5个同源结构域之一(B结构域；SEQ ID NO：13)的58个氨基酸残基的重组蛋白质。Z结构域最初通过改变B结构域的少数氨基酸而形成，以增强后者作为基因融合配偶体的稳定性，用于通过使用包含IgG的树脂的重组蛋白质的亲和提纯。使用噬菌体展示技术，瑞典卡罗林斯卡研究所(Karolinska Institute)的研究者将IgG结合Z结构域修改成命名为亲和体_IgA1或修饰Z结构域(SEQ ID NO：12)的IgA结合肽。(Graille等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.97：5399-5404，2000；Wahlberg等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.100：3185-3190，2003；

等人，Eur.J.Biochem.269：2647-2655，2002；Braisted和Wells，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.93：5688-5692，1996)。这种修饰后的肽具有结合人IgA1和IgA2的高特异性和亲和力。由于这些修饰，最初的IgG结合亲和力完全丧失。IgA上的结合位点被认为在Fc区中。考虑到其结合人的IgA的能力，这种肽对于IgAN诊断也是优选的。

抗人IgA或IgM抗体或其抗原结合片段

多克隆或单克隆抗人IgA或IgM抗体也可用于诊断IgA或IgM肾脏疾病。这些抗体可以来源于许多来源包括免疫动物，或者它们可以被制备为动物/人嵌合蛋白质或人源化嵌合蛋白质，或人来源蛋白质；所有这些都是本领域已知的用于进行蛋白质输注疗法和/或制备诊断剂的策略。这些抗体的完整分子和Ag结合片段都可以在本发明的诊断方法和组合物中使用。然而，优选试剂是人来源的单克隆抗体，且在IgAN或HSP的情况下，优选的抗体能够区分IgA1与IgA2。而且，优选保留IgA或IgM识别特异性的抗体蛋白质亚单位，所述亚单位优先于全长抗体(Reff等人，Canc.Control 9：152-166，2002；Gorman和Clark，Semin.Immunol.2：457-66，1990；Antibodies asMedicines 2000 by Biotech Analytics)。

在一个优选实施方案中，使用抗人IgA1或抗人IgM的小抗体片段(例如，人来源片段、人源化嵌合片段、嵌合片段、和动物来源片段)。保留抗原结合活性的抗体片段可以是单价Fab、Fv或scFv；或二价F(ab)′2或双价抗体。(参见下图4中的示意图(Hudson和Souriau，Nat.Med.9：129-134，2003)。优选地，Fc区从分子中删除。

在一个具体例子中，抗人IgA1抗体指向铰链区中的表位，因为如上所述，这个区域是IgA1独有的。此类人来源的抗人IgA1铰链区Fab可以通过噬菌体展示技术，经由商业供应者例如Cambridge Antibody Technology(Cambridge，UK)开发的大噬菌体抗体文库容易地制备。这种技术能够快速做出抗体，并能方便进入基因进行修饰，所以具有远超过常规产生单克隆抗体方法的许多优点。

在另一例子中，使用本领域标准方法(例如，本文描述的那些)产生的抗IgM单克隆抗体用于诊断IgMN。这些抗体可以使用独特的μ链铰链序列作为靶抗原(PLPVIAELPPKVSVFVPPRDGFFGNP；SEQ ID NO：17)而产生，所述铰链序列桥接恒定区的CH1和CH2结构域。另外，IgM特异性抗体可以针对IgM蛋白质的分离的完整Fc区产生，此类Fc通过高温下胰蛋白酶切割产生(Plaut和Tomasi，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，65：318-322，1970)。

IgM结合化合物

借助于噬菌体展示技术，已鉴定了以高亲和力与鼠类IgM结合的肽YDWIPSSAW(SEQ ID NO：9)。这种肽还抑制人类风湿因子(RF，主要是抗IgG自身免疫抗体的IgM类)诱导的IgG包被乳胶珠凝集，且显示缺乏与其他免疫球蛋白结合的能力(Pati M.Glee等人J Immunol，1999，163：826-833)。

新型IgA或IgM结合化合物的鉴定

本发明的方法和组合物还可以采用新型IgA结合或IgM结合化合物，所述化合物可以经过使用例如噬菌体展示技术得以鉴定。噬菌体展示是组合性的筛选技术，允许通过使用来自基因库的多重基因开发和表征与所需靶相互作用的蛋白质(George P.Smith，Science 228：1335，1985)。这些基因代表通过DNA重组技术产生的所需多样性；因此，每个噬菌体展示独特的随机肽。这些基因通过替代先前存在的基因***噬菌体内，从而制备噬菌体文库。预先制备的文库用伴随试剂盒是容易获得的(例如，Novagen T7Select)。Novagen的T7***是cDNA文库优选的裂解性噬菌体展示(J.Imm.Meth.231：39；Nature Biotech.19：1193)，但也可以使用其他噬菌体，例如基于与表面外壳蛋白pIII和pVIII的N末端融合的非裂解性M13细菌丝状噬菌体。修饰的噬菌体随后将表达由其表面外壳上的***DNA编码的蛋白质。在M13的情况下，pIII展示具有较低的效价(1-5/病毒体)且因此可以用于发现高亲和力化合物，而pVIII具有高效价(～200/病毒体)因此可以用于发现亲和力非常低的结合化合物。噬菌体展示服务是通过公司包括Dyax Corp.of Cambridge，Mas s.商购可得的，所述公司提供4种噬菌体文库：人抗体、蛋白质、结构肽、和线性肽。来自整个噬菌体文库的噬菌体与靶蛋白(例如，IgA的α链或IgM的μ链)一起培养。随后可以挑选出对IgA或IgM具有高亲和力和特异性的肽的噬菌体。继而鉴定和检测出编码这些肽的多核苷酸序，从而产出更多这些肽用于进一步分析。随后选择最高亲和力和特异性连同其他性质例如免疫原性的蛋白质，作为在本发明的方法或组合物中使用的最终候选物。噬菌体展示基因库或文库可以包括数百万的相关基因，且因此可以用于鉴定对本发明的诊断方法和组合物有用的IgA或IgM结合化合物。

多肽表达

一般而言，在本发明中使用的多肽可以通过任何标准技术产生；例如，通过用在合适的表达媒介物中的全部或部分多肽编码多核苷酸分子或其片段转化合适的宿主细胞来产生。

分子生物学领域中的技术人员应当理解广泛多样的表达***中的任何一种都可以用于提供重组多肽。使用的确切宿主细胞对本发明不是关键的。在本发明中使用的多肽可以在原核宿主(例如大肠杆菌)或真核宿主(例如酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，昆虫细胞例如Sf21细胞，或哺乳动物细胞例如NIH 3T3、海拉、或优选COS细胞)中产生。此类细胞来源广泛(例如American Type Culture Collection(美国典型培养物保藏中心)，Rockland，Md.；还参见例如Current Protocols in Molecular Biology，Eds.Ausubel等人，John Wiley and Sons)。转化或转染方法以及表达媒介物的选择将取决于所选宿主***。转化和转染方法在例如Ausubel等人(同上)中描述；表达媒介物可以选自例如在Cloning Vectors：A LaboratoryManual(Pouwels，P.H.等人，1985，Supp.1987)中提供的那些。

用于多肽生产的一种具体细菌表达***是大肠杆菌pET表达***(Novagen，Inc.，Madison，Wis.)。根据这种表达***，将编码多肽的DNA以设计为允许表达的方向***pET载体内。因为编码此类多肽的基因在T7调节信号的控制下，所以多肽的表达通过诱导宿主细胞中的T7RNA聚合酶表达来完成。这一般通过使用响应IPTG诱导表达T7RNA聚合酶的宿主菌株来完成。一旦产生，重组多肽随后根据本领域已知的标准方法，例如本文描述的那些来分离。

用于多肽生产的另一种细菌表达***是pGEX表达***(Pharmacia)。这个***使用GST基因融合***，所述***设计用于高水平表达作为融合蛋白的基因或基因片段，并能快速纯化和回收功能基因产物。目的多肽与来自日本血吸虫(Schistosoma japonicum)的谷胱甘肽S转移酶蛋白质的羧基末端融合，且通过亲和色谱法使用Glutathione Sepharose 4B从细菌溶解产物很容易地纯化。融合蛋白可以在温和条件下通过用谷胱甘肽洗脱进行回收。谷胱甘肽S转移酶结构域从融合蛋白的切割通过这个结构域上游的位点特异性蛋白酶的识别位点的存在得到促进。例如，在pGEX-2T质粒中表达的多肽可以用凝血酶切割；在pGEX-3X中表达的那些可以用因子Xa切割。

一旦重组多肽被表达，就使用例如亲和色谱法将其进行分离。在一个例子中，针对用于本发明的多肽产生的抗体(例如，如本文所述产生的)抗体可以与柱附着，且用于分离重组多肽。在亲和色谱法之前多肽锚着细胞的裂解和分馏可以通过标准方法进行(参见，例如，Ausubel等人，同上)。

一旦被分离，必要时，重组多肽就可以通过例如高效液相色谱进一步纯化(参见例如，Fisher，Laboratory Techniques In Biochemistry AndMolecular Biology，eds.，Work and Burdon，Elsevier，1980)。

用于本发明的多肽，特别是短肽片段还可以通过化学合成来产生(例如，通过Solid Phase Peptide Synthesis，第2版，1984 The Pierce ChemicalCo.，Rockford，I11.中描述的方法)。

多肽表达和纯化的这些一般技术还可以用于生产和分离有用的肽片段或类似物(本文描述的)。

短肽例如50聚体链球菌IgA结合肽(Sap)和58聚体修饰的Z结构域还可以被化学合成。

抗体产生

为了产生抗体，也可以使用任何标准技术。例如，IgA1、IgM、或其片段的编码序列(例如，IgA1铰链区，氨基酸217-241)可以作为与谷胱甘肽S转移酶(GST)的C末端融合进行化学合成或表达(Smith和Johnson，Gene67：31-40，1988)。融合蛋白在谷胱甘肽-Sepharose珠上进行纯化、用谷胱甘肽洗脱、用凝血酶切割(在工程化的切割位点处)、且纯化至用于免疫接种小鼠或兔所需的程度。初次免疫接种使用弗氏完全佐剂或类似佐剂来进行，且后续免疫接种使用弗氏不完全佐剂。抗体滴度使用凝血酶切割的GST融合蛋白多肽片段，通过ELISA或蛋白质印迹和免疫沉淀分析来监控。免疫血清使用CNBr-Sepharose-偶联多肽进行亲和提纯。抗血清特异性使用一组无关GST蛋白质来测定。

作为GST融合蛋白的可替代物或附加免疫原，可以产生对应IgA或IgM的相对独特免疫原性区域的肽，且通过引入的C末端赖氨酸与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联。针对这些肽中每一种的抗血清在与BSA缀合的肽上类似地亲和提纯，且通过使用肽缀合物的ELISA和蛋白质印迹，以及通过使用作为GST融合蛋白表达的多肽的蛋白质印迹和免疫沉淀进行特异性测试。

可替代地，特异性结合IgA或IgM的单克隆抗体根据标准杂交瘤技术进行制备(参见，例如，Kohler等人，Nature 256：495，1975；Kohler等人，Eur.J.Immunol.6：511，1976；Kohler等人，Eur.J.Immunol.6：292，1976；Hammerling等人，在Monoclonal Antibodies and T Cell Hybridomas中，Elsevier，N.Y.，1981；Ausubel等人，同上)。一旦被产生，单克隆抗体就同样通过蛋白质印迹或免疫沉淀分析(通过Ausubel等人，同上中描述的方法)测试特异性。特异性识别IgA特别是IgA1同种型、或IgM的抗体被认为在本发明中有用。可替代地，单克隆抗体可以使用IgA或IgM和噬菌体展示文库进行制备(Vaughan等人，Nat.Biotechnol.14：309-314，1996)。

优选地，抗体使用IgA或IgM片段产生，所述片段位于一般保守区域以外(例如，在IgA2中缺乏但IgA1具有的13个氨基酸的区域；参见图1)或是IgM铰链区中的独特序列；参见SEQ ID NO：14，且通过例如高频率的带电残基的标准看来可能是抗原。在一个具体例子中，此类片段通过标准PCR技术产生且克隆到pGEX表达载体内(Ausubel等人，同上)。融合蛋白在大肠杆菌中表达，且如Ausubel等人(同上)中所述使用谷胱甘肽琼脂糖亲和基质进行纯化。为了尝试使抗血清低亲和力或特异性的潜在问题减到最小，对于每种多肽产生2种或3种此类融合物，且将每种融合物注入至少2只兔中。抗血清通过系列注射产生，优选包括至少3次加强注射。

针对IgA1产生的抗体可以用于诊断IgAN和HSP，且抗体抗IgM可以用于诊断IgMN。

肽的修饰

可能希望修饰在本发明方法和组合物中使用的肽，因为进入循环的肽在血浆中被快速降解。因此需要修饰以延长其半衰期而不降低生物活性和结合亲和力。例如，十四肽生长抑素在人血浆中的半衰期只有3分钟，太短而不能在癌症诊断中用作放射性药物。因此，开发了在人循环中具有90分钟半衰期的其类似物善得定(Langer和Beck-Sickinger，Curr.Med.Chem.Anti-Canc.Agents 1：71-93，2001)。为了抵抗经由肽链端解酶的降解，肽可以在N和/或C末端进行加帽。这包括例如N末端乙酰化、C末端酰胺化或还原、以及N至C的环化。这些方法是本领域标准的方法。为了减少对肽链内切酶的敏感性，肽可以通过引入D氨基酸、氨基酸替代物、或拟肽序列和间隔物进行修饰。改善稳定性的其他方法包括肽键的修饰、用亚氨基替换氨基、酰胺氮的甲基化、和缩短天然氨基酸序列。再一次，这些方法是本领域标准的方法。

放射性金属

如上所述，诊断剂进一步包括可检测标记，例如放射性标记如放射性金属。各种放射性金属在闪烁扫描中使用，且其用途随闪烁扫描类型、尝试进行的诊断、以及同位素的成本和可用性而变。同位素选择中的关键决定因素是闪烁扫描类型，和需要的放射性衰变。SPECT和PET使用不同的同位素，因为SPECT使用γ发射体，而PET使用正电子发射体。同位素可以以4种不同方式产生，这与成本有关联。在发生器中产生的那些来自长半衰期放射性同位素转变成较短半衰期的同位素。这使得它们能够实际用于甚至在小医院中的使用，并且它们的成本较低。其他放射性金属更昂贵，因为它们在核反应器、回旋加速器、和线性加速器中产生，并且这可能限制其在较小型医院以及较偏僻地区中的医院的使用。就诊断而言，使用的放射性金属部分也受限于什么时候能送达到使用场地和与靶结合的时间的快慢。在IgA结合肽的情况下，4-80小时的较长半衰期可能是优选的。

亚稳的锝-99m(^99mTc)在85％的扫描中使用，这仅在美国每年就是约7百万例。^99mTc的特性对于诊断成像是非常理想的；140keV的γ辐射在今天的γ射线成像机的理想范围内，且6小时半衰期的长度足以合成标记放射性药物、进行质量控制、将其注入患者内、且进行成像。但半衰期短得足以使得能够施用具有最低限度的患者风险的足够高剂量，且在使用的浓度水平(＜10^-6M)下，所产生的γ辐射和⁹⁹Tc的软β衰变都不危险。^99mTc以低成本在⁹⁹Mo/^99mTc发生器中可由其亲本核素⁹⁹Mo(t_1/266小时)容易地获得。

γ发射的铟-111(¹¹¹In)已广泛用于标记单克隆抗体和肽。由FDA批准用于临床使用的第一种肽放射性药物是¹¹¹In标记的生长抑素类似物OctreoScan

(Mallinckrodt，St.Loius，Mo)。这种同位素的化学和半衰期(67.9小时)使得它对于标记免疫球蛋白是理想的，而成像可以在初次注射后数天进行。¹¹¹In在回旋加速器中由镉-111产生，且因此与^99mTc比较而言它较难获得。离子交换和溶剂萃取是通常用于分离铟-111与亲本镉的方法。然而，为了放射性标记IgA结合肽的目的，与^99mTc比较¹¹¹In更长的半衰期提供了IgA结合肽更多的时间达到IgA在肾中沉积，且提供了更多的时间用于清除循环的标记IgA。

镓-67(⁶⁷Ga)在回旋加速器中由锌-68(⁶⁸Zn)产生，且是于1953年生产的用于人使用的第一种核素。分离技术可以包括溶剂萃取和离子交换、或两者。⁶⁷Ga的半衰期超过78小时，且其能量衰变特征使得其适合于γ闪烁扫描或PET成像。

铜的放射性核素提供了诊断表位的选择，包括⁶⁰Cu、⁶¹Cu、⁶²Cu和⁶⁴Cu。正电子发射的⁶⁴Cu是回旋加速器产生的。⁶⁴Cu优选用于标记蛋白质、肽和具有长血液清除率的试剂，所述较长时间的血液清除率可能是IgA结合蛋白质的有利特性。⁶⁴Cu具有12.7小时的半衰期。

下表1和2显示用于诊断用途的许多γ和发射正电子的放射性金属、其衰变特征、半衰期和生产方法(Anderson和Welch，Chem.Rev.99：2219-2234，1999)。这些放射性金属中的任何一种都可以在本文描述的方法和组合物中使用。

表1.γ和β发射放射性核素

同位素	t_1/2(小时)	产生方法	衰变方式	E_γ(keV)	E_β-(keV)
同位素	t_1/2(小时)	产生方法	衰变方式	E_γ(keV)	E_β-(keV)	⁶⁷Cu	62.01	加速器，⁶⁷Zn(n，p)	β^-(100％)	91，93，185	577，484，395
⁶⁷Ga	78.26	回旋加速器	EC(100％)	91，93，185，296，388		⁶⁷Cu	62.01	加速器，⁶⁷Zn(n，p)	β^-(100％)	91，93，185	577，484，395
⁶⁷Ga	78.26	回旋加速器	EC(100％)	91，93，185，296，388		⁹⁰Y	64.06	⁹⁰Sr/⁹⁰Y 发生器	β^-(72％)		2288

¹¹¹In	67.9	回旋加速器，¹¹¹Cd(p，n)¹¹¹In	EC(100％)	245，172
¹¹¹In	67.9	回旋加速器，¹¹¹Cd(p，n)¹¹¹In	EC(100％)	245，172	^99mTc	6.0	⁹⁹Mo/⁹⁹mTc发生器	IT(100％)	141
²⁰¹Tl	72h	回旋加速器²⁰³Tl(p，3n)²⁰¹Pb(p，n)²⁰¹Tl	EC(100％)Hg X射线	135，167	^99mTc	6.0	⁹⁹Mo/⁹⁹mTc发生器	IT(100％)	141

表2.发射正电子的放射性核素

同位素	T_1/2(小时)	产生方法	衰变方式	E_β+(keV)
同位素	T_1/2(小时)	产生方法	衰变方式	E_β+(keV)	⁶⁵Co	17.5	回旋加速器，⁵⁴Fe(d，n)⁵⁵Co	β⁺(77％)EC(23％)	1513，1037
⁶⁰Cu	0.4	回旋加速器，⁶⁰Ni(p.n)⁶⁰Cu	β⁺(93％)EC(7％)	3920，30002000	⁶⁵Co	17.5	回旋加速器，⁵⁴Fe(d，n)⁵⁵Co	β⁺(77％)EC(23％)	1513，1037
⁶⁰Cu	0.4	回旋加速器，⁶⁰Ni(p.n)⁶⁰Cu	β⁺(93％)EC(7％)	3920，30002000	⁶¹Cu	3.3	回旋加速器，⁶¹Ni(p.n)⁶¹Cu	β⁺(62％)EC(38％)	1220，1150940，560
⁶²Cu	0.16	⁶²Zn/⁶²Cu发生器	β⁺(98％)EC(2％)	2910	⁶¹Cu	3.3	回旋加速器，⁶¹Ni(p.n)⁶¹Cu	β⁺(62％)EC(38％)	1220，1150940，560
⁶²Cu	0.16	⁶²Zn/⁶²Cu发生器	β⁺(98％)EC(2％)	2910	⁶⁴Cu	12.7	回旋加速器，⁶⁴Ni(p.n)⁶⁴Cu	β⁺(19％)EC(41％)β⁺(40％)	656
⁶⁶Ca	9.5	回旋加速器，⁶³Cu(αny)⁶⁶Ca	β⁺(56％)EC(44％)	4150，935	⁶⁴Cu	12.7	回旋加速器，⁶⁴Ni(p.n)⁶⁴Cu	β⁺(19％)EC(41％)β⁺(40％)	656
⁶⁶Ca	9.5	回旋加速器，⁶³Cu(αny)⁶⁶Ca	β⁺(56％)EC(44％)	4150，935	⁶⁵Ca	1.1	⁶⁸Ge/⁶⁸Ga发生器	β⁺(90％)EC(10％)	1880，770
⁸²Rb	0.022	⁸²Sr/⁸²Rb发生器	β⁺(96％)EC(4％)	3150	⁶⁵Ca	1.1	⁶⁸Ge/⁶⁸Ga发生器	β⁺(90％)EC(10％)	1880，770
⁸²Rb	0.022	⁸²Sr/⁸²Rb发生器	β⁺(96％)EC(4％)	3150	⁸⁵Y	14.7	回旋加速器，⁸⁶Sr(p，n)⁸⁶Y	β⁺(33％)EC(66％)	2335，20191603，12481043

BFCA

在放射性药物中，双功能螯合剂可以用于桥接生物分子和放射性金属。存在许多可用的BFCA，其中任何一种都可以在本发明中使用。在一个具体例子中，结合^99mTc的BFCA已最广泛地使用，因为^99mTc是目前临床用途中85％的诊断扫描中使用的金属(Langer和Beck-Sickinger，Curr.Med.Chem.Anti-Canc.Agents 1：71-93，2001)。这些BFCA形成具有热力学稳定性、就解离而言的动力学惰性、以及稳定Tc氧化状态的能力的复合物。已开发了用于^99mTc的各种BFCA，包括三酰胺硫醇N₃S、二酰胺二硫醇N₂S₂、丙胺肟(PnAO)和肼基烟酸(HYNIC)。某些结构显示于图5中。较新的方法使用有机金属种类[M(CO)₃(H₂O)₃]⁺(M＝⁹⁹Tc、^99mTc、^185/187Re、^186/188Re)，这是用于标记药效团的Tc/Re(I)前体。短反应时间后经由高纯度放射化学获得的阳离子种类提供了几个优点，包括氧化状态的维持、血清中的稳定性、以及与生物学配体形成稳定复合物。组氨酸和PADA(甲氨基吡啶-N，N-二乙酸；图6)已鉴定为合适的BFCA。组氨酸已用于放射标记神经降压素衍生物，且PADA用于标记含^99mTc的蛙皮素和神经肽Y衍生物。

选择用于铟-111的BFCA是二乙烯三胺五乙酸(DTPA)，且多种肽已用DTPA进行标记(图7)。对于¹¹¹In第二种最广泛使用的螯合剂是四氮杂环十二烷四乙酸(DOTA)(图7)，这也可以用于复合治疗放射性核素钇-90(⁹⁰Y)。

三肽和四肽例如Lys-Gly-Cys、Cys-Gly-Cys、Gly-Gly-Cys和Gly-Ala-Gly-Gly，也可以用作BFCA(Langer和Beck-Sickinger，Curr.Med.Chem.Anti-Canc.Agents 1：71-93，2001)。例如，^99mTc已用于标记血管活性肠肽(VIP)及其类似物TP3654，所述类似物TP3654在VIP的C末端上携带螯合氨基酸序列GAGG(Thakur等人，J.Nucl.Med.，41：107，2000)。在另一报道中，经由N末端Ac-Cys-Gly-Cys-Gly(CGCG)螯合作用于α-促黑素细胞激素(MSH)的^99mTc标记产生用于基于肽的放射诊断的有希望的候选物(Chen等人，Nucl.Med.Biol.26：687-693，1999)。

非放射性标记

除了放射性标记化合物之外，顺磁物质和量子点(qdot)技术也可以在本发明的方法和组合物中使用。将顺磁物质与IgA结合或IgM结合化合物偶联允许经由MRI成像，且量子点允许荧光成像。

顺磁物质

如果在本发明中使用不需要放射性的成像技术(例如，MRI)，那么非放射性标记可以取代上文描述的放射性金属。例如，顺磁物质(例如，钆)可以使用本领域标准方法与IgA结合蛋白质缀合。当化合物注入哺乳动物内且通过MRI成像时，在其中顺磁物质沉下的地方磁性特性存在差异。这些差异可以用于鉴定肾的肾小球中的IgA或IgM沉积，因此用于诊断IgA或IgM肾脏疾病。

量子点

量子点(qdot)是由各种材料制成的荧光半导体纳米晶体，所述材料例如是CdS、CdSe、CdTe、CdHgTe/ZnS、InP、InAs和PbSe。对于比所谓的玻尔激子半径(数纳米)更小的纳米晶体，能级是量子化的，值直接与晶体大小相关(称为量子局限的效应)。因此，它们具有与常用荧光团不同的某些区别特征。量子点的一个优点在于其大小和形状可以通过合成中使用的持续时间、温度和配体分子得到精确控制。量子点的吸收和发射特性也可以被控制，因为它们是组成和大小依赖性的。

量子点核可以通过聚合物涂层材料进行包裹，以使得它们可溶于水溶液且防止细胞毒性Cd²⁺或Se^2-离子从量子点核中释放。为了给量子点增加功能，最外层可以包括给予特异功能性(例如IgA或IgM结合)的缀合化合物(例如，抗体和生物活性肽)。如果希望减少在肝和骨髓中的积聚，那么可以向涂层中添加高分子量聚乙二醇(PEG)分子。

在一个实施方案中，量子点可以单独用于成像目的。用抗体(例如抗IgA或抗IgM抗体)或结合化合物(例如IgA或IgM结合化合物)标记的量子点，可以用于将量子点靶向特异性分子。此类量子点可以注入哺乳动物中，且使用如Gao等人(Nat.Biotech.22：969-976，2004)描述的荧光技术进行成像。

在另一实施方案中，量子点可以与放射性标记化合物(例如，本文描述的放射性金属)或顺磁物质(例如，钆)偶联。这些量子点可以注入哺乳动物中，且使用合适的成像技术(例如，MRI、SPECT、PET或平面扫描)进行显现。

诊断组合物的配制

在本发明的组合物和方法中使用的化合物可以以任何合适的量包含在任何合适的载体物质中，且一般以组合物总重量1-95重量％的量存在。组合物优选以适合于肠胃外(例如，静脉内)施用途径的剂型提供。诊断组合物可以根据常规药学实践(参见，例如，Remington，The Science andPractice of Pharmacy(第20版)，ed.A.R.Gennaro，Lippincott Williams& Wilkins，2000以及Encyclopedia of Pharmaceutical Technology，cds.J.Swarbrick和J.C.Boylan，1988-1999，Marcel Dekker，New York)进行配制。

肠胃外组合物

诊断组合物可以以剂型、制剂、或经由合适的递送装置或包含常规无毒的药学可接受载体和佐剂的埋植剂，通过注射、输注或植入(静脉内等)进行肠胃外施用。此类组合物的配制和制备是药学制备领域技术人员众所周知的。

组合物可以是溶液、悬浮液、乳状液、输注装置、或用于植入的递送装置的形式，或者它可以呈现为在使用前用水或另一种合适媒介物重构的干燥粉末。除了诊断化合物之外，组合物还可以包括合适的肠胃外可接受载体和/或赋形剂。此外，组合物可以包括悬浮剂、增溶剂、稳定剂、pH调节剂、张力调节剂、和/或分散剂。

如上所述，根据本发明的诊断组合物可以是适合于无菌注射的形式。为了制备此类组合物，将诊断化合物溶解或悬浮于肠胃外可接受的液体媒介物中。可以使用的可接受的媒介物和溶剂包括水、通过添加合适量的盐酸、氢氧化钠或合适的缓冲液调整至合适pH的水、1，3-丁二醇、林格氏(Ringer′s)溶液、葡萄糖溶液、和等渗氯化钠溶液。水制剂还可以包含一种或多种防腐剂(例如，甲基、乙基或正丙基对羟苯酸酯)。在化合物之一仅少量或微溶于水的情况下，可以添加溶解增强或增溶剂，或溶剂可以包括10-60％w/w的丙二醇等。

化合物剂量

尽管主治医师将最终决定用于诊断IgA或IgM肾脏疾病的一种或多种化合物的合适量，但一般地1、2、3、4、5、6、7、8、9或10mCi的放射性标记化合物将在药学可接受载体中静脉内施用。剂量基于几个考虑来确定，包括使用的成像技术(例如，SPECT)所需剂量以及化合物的清除和吸收特征。放射性剂量测定可以用于确保辐射量不超过所公布的每个器官的最大辐射。

成像技术

任何标准成像技术可以在本发明中使用，而闪烁扫描是最优选的方法。本领域技术人员将知道对于特定放射照相试剂使用何种类型的扫描仪。

闪烁扫描

闪烁扫描涉及使用放射性同位素诊断和治疗各种疾病。它在神经学、心脏病学、肿瘤学、内分泌学、淋巴***、泌尿功能、肠胃病学、肺病学及其他领域具有应用。一般地，放射性同位素与特异性化合物化学结合，且随后进行静脉内注射。不同的放射性同位素用于不同的闪烁扫描方法，且3种常用方法是SPECT、PET和平面扫描(Anderson和Welch，Chem.Rev.99：2219-2234，1999；Langer和Beck-Sickinger，Curr.Med.Chem.Anti-Canc.Agents 1：71-93，2001)。

SPECT(单光子发射计算机断层摄影)是使用γ射线的核成像技术。同位素注射后，旋转γ射线照相成像机收集患者周围360度的图像，只选择某一能量的光子。来自身体各种水平的图像被加工且重组以形成3D图像。

PET(正电子发射断层摄影)是使用放射性同位素的核成像技术，所述放射性同位素通过正电子发射而衰变，导致释放相反方向的2种光子。360度扫描仪检测这些光子，但只处理成对的光子。PET扫描的安全性高于身体CT，因为由PET扫描吸收的辐射平均为5mSv，而由身体CT扫描吸收的辐射为6-16mSv。

平面扫描仪是第一代闪烁检测装置且目前在许多诊断程序中使用。它们很常用且产生二维图像。

MRI

除了闪烁扫描法之外，磁共振成像(MRI)也可以在本发明的方法中使用。MRI使用强磁场以产生患者身体的三维断层摄影图像，且不需要放射性。

放射学优化

为了进一步优化本发明的诊断方法，可以减少肾小管滞留且使用预靶向策略。

放射性螯合物的肾小管滞留

小于约60kDa的放射标记肽、蛋白质或其片段在肾小球被过滤且进入肾小管(Langer和Beck-Sickinger，Curr.Med.Chem.Anti-Canc.Agents1：71-93，2001；Thakur等人，J.Nucl.Med.，41：107，2000)。在生理条件下，近端小管细胞大量重吸收这些肽，随后对所述肽实施溶酶体降解。这种重吸收捕获的放射性金属螯合物，导致放射标记物在肾髓质细胞中大量滞留，降低对于检测来自肾髓质区的特定的较高发射的闪烁法敏感性。然而，在IgAN中，IgA沉积在位于肾皮质的肾小球中，使肾脏的放射性金属滞留和相关干扰的问题得以减小。在IgA或IgM肾脏疾病诊断中仍希望尽可能减少肾小管滞留，且可以通过使用更亲脂的分子来完成。这些分子在肽中具有高含量的亲脂性氨基酸，或在分子上具有添加的脂肪酰基部分。在一个例子中，此类亲脂性修饰可以在RC-160中看到，所述RC-160是亲脂性增加而肾脏***倾向减小的生长抑素类似物(P.Dasgupta和R.Mukherjee，Br JPharmacol(2000)129，101-109)。第二个例子是硬脂酰-Nle¹⁷-VIP，28聚体血管活性肠肽VIP的亲脂性类似物。(Gozes等人，J.Pharmacol.Exper.Therap.273(1995)161-167)。亲脂性修饰可以促进通过肝而不是肾的代谢性降解。减少放射性金属的肾小管积聚的另一途径是，使放射标记试剂的大小增加至足够大以避免通过肾小球的过滤(Langer和Beck-Sickinger，Curr.Med.Chem.Anti-Canc.Agents 1：71-93，2001)。第三种方法是在诊断剂施用后施用口服或注射碱性氨基酸(例如，赖氨酸)或其衍生物，从而抑制蛋白质和肽的肾小管细胞摄取且诱导瞬间蛋白尿(Behr等人，Eur.J.Nucl.Med.25：201-212，1998)。

预靶向策略

预靶向递送通常在肿瘤放射免疫闪烁扫描法(RIS)和放射免疫疗法(RIT)中使用(Anderson和Welch，Chem.Rev.99：2219-2234，1999；Langer和Beck-Sickinger，Curr.Med.Chem.Anti-Cane.Agents 1：71-93，2001；Chang等人，MoI.Canc.Ther.1：553-563，2002；Rossi等人，Clin.Canc.Res.9：3886s-3896s，2003)。在结合浓度最高时，预靶向减少或清除循环中的未结合放射标记分子。最广泛使用的***是生物素-链霉亲和素(SA)对。一般地，首先注入未放射标记的mAb-SA。因为循环中的抗体清除缓慢，因此未结合抗体必须在递送放射标记生物素之前被清除。因此，在第一次注射后1-2天，注入与mAb-SA相互作用的半乳糖基化清除剂。这种试剂快速清除任何循环中的mAb-SA，但它不能清除已经与沉积在肾脏的IgA，IgM结合的mAb-SA。另外1-10小时后，注入放射标记的生物素-BFCA。因此，只将放射性螯合物递送至结合部位而不是循环抗体。其他可能策略包括使用除生物素-链霉亲和素以外的结合对的类似方法，或只需要2个步骤例如，如下文描述的***。

两步法

为了减少血管内的IgA或IgM放射性本底，还可以使用两步法。在这种方法中，首先制备抗IgA1抗体或抗IgM抗体，通过选择性蛋白水解由所述抗体获得Fab结构域。这种Fab随后进行修饰以包括链霉亲和素(SA)和半乳糖(Gal)。加入链霉亲和素作为生物素配体，且加入Gal以促进循环Fab-IgA1或Fab-IgM复合物的去除。因为SA-Gal-Fab通过肝ASGPR(去唾液酸糖蛋白受体)的清除比与IgA或IgM的结合更快，所以注入合适的竞争性抑制剂例如半乳糖-菲柯尔，这是有效抑制ASGPR功能的半乳糖合成聚合物(Rifai等人，J.Exp.Med.191：2171-2181，2000)。与半乳糖-菲柯尔注入同时或紧在其后，将SA-Gal-Fab抗IgA1或SA-Gal-Fab抗IgM注入患者内用于预靶向，与循环IgA1和肾皮质中沉积的IgA1、或循环IgM和肾皮质中沉积的IgM结合。在24-48小时，当半乳糖-菲柯尔的作用结束时，循环SA-Gal-Fab-IgA1或SA-Gal-Fab-IgM复合物经由肝ASGPR从循环中被清除。然而，肾小球中固定的SA-Gal-Fab-IgA1或SA-Gal-Fab-IgM复合物仍然存在，且可用于成像。

第一次注射后大约1或2天，血管内循环的本底SA-Gal-Fab-IgA1或SA-Gal-Fab-IgM复合物基本上被清除，然后，注入放射标记的(^99mTc或¹¹¹In)生物素-HSA-Gal(与半乳糖缀合的生物素化的人血清白蛋白)且与肾中的SA-Gal-Fab-IgA1或SA-Gal-Fab-IgM复合物结合。另一4-24小时后，未结合的(游离)放射标记的生物素-HSA-Gal通过肝ASGPR从循环中去除，导致肾皮质中靶与噪声的比率增加。另外，白蛋白的大小(66kDa)排除了放射性复合物从肾小球中被过滤的可能性，从而减少了由于放射性螯合物沉降在肾近端小管细胞中的相关本底辐射。这种设计的另一个优点是链霉亲和素是四聚体(MW：4×13kDa＝52kDa)，结合4个生物素化配体分子。肾皮质中暴露的每摩尔链霉亲和素结合4摩尔放射性生物素-HSA-Gal，这增加了影像信号。

为了执行这种方法，产生抗人IgA1抗体或抗人IgM抗体及其Fab片段，以诊断IgA或IgM肾脏疾病。小鼠或嵌合单克隆抗人IgA1铰链区或抗人IgM抗体通过例如本文描述的常规方法产生。Fab片段随后通过任何标准技术，例如木瓜蛋白酶消化来获得，且随后通过例如凝胶过滤色谱法和抗原亲和色谱法来纯化。

为了将半乳糖分子缀合在Fab上，将氰甲基-2，3，4，6-四-I-乙酰基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(C-4141；Sigma)以0.1M溶解于甲醇中，且与0.1体积甲氧基钠(甲醇钠衍生物；J.T.Baker Chemical Co.，Phillipsburg，NJ)混合。于室温48小时后，将这种混合物于4℃贮存数周。将缀合物放回包含1.0mg/ml Fab的0.25M硼酸钠缓冲液，pH8.5中。于室温2小时后，将样品透析到磷酸盐缓冲盐水中。抗体的抗原结合功能没有被缀合改变(Ong等人，Canc.Res.51：1619-1626，1991)。

链霉亲和素(SA；MW：～52kDa)与生物素(244Da)特异性结合。它由细菌链霉亲生物素蛋白获得，且在三维结构和以极高亲和力(Kd＝10^-15M)结合生物素的能力方面具有与鸡蛋白抗生物素蛋白的相似性。它是能够结合高达4个生物素分子的四聚体蛋白质(4×13kDa)。与抗生物素蛋白不同，链霉亲和素是非糖基化的且在电荷方面基本上是中性的，而抗生物素蛋白(pI～10.5)在中性pH下是碱性的。由于这点，链霉亲和素具有明显更少的非特异性结合，导致更少的本底，且已替代抗生物素蛋白作为优选试剂用于其中蛋白质相互作用可能引起不希望的本底的应用。

为了使SA与Gal-Fab缀合，Gal-Fab使用琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺-甲基)环己胺-1-羧酸酯(SMCC)与SA(Genzyme，Cambridge，Mass)化学缀合。过量SMCC以3∶1的摩尔比在pH8包含5％DMSO的硼酸钠中提供给SA。30分钟后，SMCC-SA通过Sephadex G-25(Amersham Pharmacia)凝胶过滤除去盐分。Gal-Fab用DTT还原，通过凝胶过滤除去盐分，且在PBS中5mg/ml总蛋白浓度下以1∶1摩尔比与SMCC-SA混合。反应通过大小排阻HPLC进行监控，且在足够的缀合物已形成后，大约50分钟，反应通过添加连四硫酸钠至5mM来结束，以再氧化未反应的硫醇。缀合物通过QSepharose色谱法与游离SA分开。缀合物也通过使用在0.05M碳酸钠、0.5M氯化钠、pH 11中平衡的固定亚氨基生物素(Pierce)的亲和色谱法与未缀合的Gal-Fab分开，且用0.05M乙酸钠/0.5M氯化钠，pH 4洗脱。约80％的缀合物由1∶1比率的SA/抗体组成，而剩余物主要为2∶1或更高的比率(Axworthy等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.97：1802-1807，2000)。

HSA(人血清白蛋白)是包含584个氨基酸的单多肽链蛋白质(66kDa)，且是血液中最丰富的蛋白质，占血浆中蛋白质的约60％。HSA专一地在肝中产生，且与大多数其他血浆蛋白不同，它不包含碳水化合物。HSA具有约19天的半衰期。HSA的主要功能包括维持血管中的胶体渗透压、促成酸/碱代谢的维持和运输内在物质和药物。药学赋形剂质量的高度纯化、无病毒的重组人白蛋白可以商购获得(例如，GTC Biotherapeutics)。

为了制备生物素-HSA-Gal，HSA在0.5M硼酸钠(pH 8.5)，5％DMSO中与3倍过量的N-羟基琥珀酰亚胺-LC-生物素(Pierce)组合。大约4小时后，将该溶液加入200倍过量的新鲜配制的纯2-亚氨基-2-甲氧乙基1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷。混合物于室温搅动8小时且通过在PBS中透析过滤进行纯化。最终材料包含如通过从SA的2-(4’-羟基苯偶氮)-苯甲酸(HABA)置换所测定的1.6摩尔生物素/摩尔HSA和通过比色蒽酮测定法(Axworthy等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.97：1802-1807，2000)测定的30-40摩尔硫代半乳糖/摩尔HSA。

为在生物素-HSA-半乳糖上缀合双功能螯合剂(BFCA)DOTA(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸)，DOTA的COOH基团通过碳化二亚胺试剂激活。简言之，将DOTA于80℃溶解于无水DMSO中，且使溶液在氩下冷却。向搅动的DOTA溶液中逐滴加入溶于DMSO的N-羟基-2，5-吡咯烷二酮溶液，随后逐滴加入溶于DMSO的N，N-二环己基碳二亚胺。DOTA：N-羟基-2，5-吡咯烷二酮：N，N’-二环己基碳二亚胺之间的摩尔比为1∶1.4∶0.8。将反应混合物搅动过夜且随后进行过滤以分离副产品二环己基脲。通过向溶解于0.1M磷酸盐缓冲液(pH 8.0)的生物素-HSA-Gal中加入足够体积的DOTA活化酯溶液，DOTA与生物素-HSA-Gal之间的缀合以50∶1的摩尔比进行。过夜反应后，缀合通过反相柱在与UV探测器和检波器连接的FPLC***中进行纯化。使用0.1％三氟乙酸水溶液(溶剂A)和甲醇(溶剂B)应用线性梯度方法。洗脱剂以4ml/分钟的流速递送，由37ml中的0％溶剂A开始到100％溶剂B。在UV曲线中观察到对应含DOTA的生物素-HSA-Gal缀合物的2个峰。含DOTA的生物素-HSA-Gal缀合物的保留体积不同于未缀合的生物素-HSA-Gal的保留体积。使用整合的分段收集器回收每种化合物，且在必要时可以进行通过MALDI-TOF(基质辅助激光解吸/电离飞行时间)质谱法的进一步分析(Bussolati等人，Canc.Res.61：4393-4397，2001)。

为了与放射标记缀合，从例如Mallinckrodt，Inc.(St.Louis，MO)获得不添加载体的铟-111-氯化物(¹¹¹InCl₃)。将DOTA-生物素-HSA-半乳糖缀合物溶解于0.2M乙酸铵缓冲液(不含金属；pH 7)中，且随后于100℃与¹¹¹InCl₃以约20MBq ¹¹¹In/1nmol缀合物的比率孵育30分钟。放射标记缀合物的纯度通过快速薄层色谱法(ITLC)进行评估。ITLC***使用ITLC-SG(硅胶)载体(Gelman Sciences，Ann Arbor，MI)和4mM EDTA(pH 4.0)作为移动相。肽结合活性保留在起点，且先前未复合的放射性金属在溶剂前沿作为EDTA复合物移动。放射性标记效率一般大于97％，且决定性地依赖于¹¹¹InCl₃的化学纯度(金属阳离子)(Smith-Jones等人，Endocrinology140：5136-5148，1999)。

半乳糖-菲柯尔可以如下容易地合成。将氰甲基1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷以大约1.0毫摩尔/10ml的比率溶解于甲醇中，在甲醇中添加0.5ml的0.5M甲氧基钠。在盖紧的玻璃管形瓶中于室温搅动48小时后，甲醇将用氮流蒸发干燥。向干燥残基中加入溶于100ml BBS(0.16M氯化钠-0.2M硼酸钠，pH 8.0)、来自Pharmacia或其他制造商的1克菲柯尔70或菲柯尔400，然后在室温下搅动24小时，随后反应通过加入10ml的1.0N乙酸来终止。反应混合物将针对蒸馏水彻底透析(Plotz和Rifai，Biochemistry 1982，21，301-308；Lee等人，Biochemistry 1976，15，3956-3963)。

本发明的化合物的施用可以是静脉内的。在一个例子中，经过30-60秒的时间段将2.0mCi ¹¹¹In由静脉内注入患者中。如下所述在注入后24-48小时获取图像；然而，必要时或基于诊断方法中使用的具体化合物的清除和保留特征，可以改变施用和成像之间的时间。

几种商购可得的SPECT扫描仪中的任何一种都可以在这种方法中使用(例如，GE MyoSIGHT，General Electric Company)。本领域技术人员将知道对于特定放射性金属或同位素可以使用什么设定(例如，准直器、窗口大小和能量)。在一个例子中，对于¹¹¹In使用中等能量准直器，而15-20％的对称窗设定为173和247keV(¹¹¹In的光峰)。在另一例子中，对于^99mTc使用低能准直器，而20％的对称窗设定为140keV。拍摄图像的数目取决于扫描***的能力和所需图像质量。通常使用360度移动、具有64光圈的照相机，可以拍摄64×64矩阵设定的图像。如果需要更高的图像质量，那么可以拍摄128×128或256×256矩阵设定的图像。扫描可以进行30-60分钟，在这段时间患者必须保持绝对静止。必要时，可以进行另外的患者准备(例如，口服水合、泻药和灌肠)以获得最佳图像。

图像可以用于测定患者肾中放射性的量。通过比较这种放射性的量与已知没有IgA肾病或HSP的患者肾中的放射性，肾中检测到的放射性增加有助于诊断IgA肾病或HSP。

类似地，在使用抗人IgM代替抗人IgA的情况下，由图像测定的放射性相对于已知没有IgM肾病的患者肾中的放射性的量的增加有助于诊断IgM肾病。

其他实施方案

本说明书中提及的所有出版物、专利申请包括2005年8月3日提交的美国临时申请60/705,282号被通过引用包含于本文中。

不背离本发明的范围和精神的本发明的方法和***的各种修改和变化对于本领域技术人员将是显而易见的。尽管本发明已结合具体所需实施方案进行了描述，但应当理解，请求保护的本发明不应该不适当地受此类具体实施方案的限制。

序列表

<110>RQ生物科技有限公司

新英格兰医学中心医院有限公司

<120>用于诊断IgA和IgM介导的肾脏疾病的方法和组合物

<130>50400/002WO2

<150>US 60/705,282

<151>2005-08-03

<160>17

<170>PatentIn version 3.3

<210>1

<211>353

<212>PRT

<213>智人

<400>1

Ala Ser Pro Thr Ser Pro Lys Val Phe Pro Leu Ser Leu Cys Ser Thr

1 5 10 15

Gln Pro Asp Gly Asn Val Val Ile Ala Cys Leu Val Gln Gly Phe Phe

20 25 30

Pro Gln Glu Pro Leu Ser Val Thr Trp Ser Glu Ser Gly Gln Gly Val

35 40 45

Thr Ala Arg Asn Phe Pro Pro Ser Gln Asp Ala Ser Gly Asp Leu Tyr

50 55 60

Thr Thr Ser Ser Gln Leu Thr Leu Pro Ala Thr Gln Cys Leu Ala Gly

65 70 75 80

Lys Ser Val Thr Cys His Val Lys His Tyr Thr Asn Pro Ser Gln Asp

85 90 95

Val Thr Val Pro Cys Pro Val Pro Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ser Pro

100 105 110

Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ser Pro Ser Cys Cys His Pro Arg Leu Ser

115 120 125

Leu His Arg Pro Ala Leu Glu Asp Leu Leu Leu Gly Ser Glu Ala Asn

130 135 140

Leu Thr Cys Thr Leu Thr Gly Leu Arg Asp Ala Ser Gly Val Thr Phe

145 150 155 160

Thr Trp Thr Pro Ser Ser Gly Lys Ser Ala Val Gln Gly Pro Pro Glu

165 170 175

Arg Asp Leu Cys Gly Cys Tyr Ser Val Ser Ser Val Leu Pro Gly Cys

180 185 190

Ala Glu Pro Trp Asn His Gly Lys Thr Phe Thr Cys Thr Ala Ala Tyr

195 200 205

Pro Glu Ser Lys Thr Pro Leu Thr Ala Thr Leu Ser Lys Ser Gly Asn

210 215 220

Thr Phe Arg Pro Glu Val His Leu Leu Pro Pro Pro Ser Glu Glu Leu

225 230 235 240

Ala Leu Asn Glu Leu Val Thr Leu Thr Cys Leu Ala Arg Gly Phe Ser

245 250 255

Pro Lys Asp Val Leu Val Arg Trp Leu Gln Gly Ser Gln Glu Leu Pro

260 265 270

Arg Glu Lys Tyr Leu Thr Trp Ala Ser Arg Gln Glu Pro Ser Gln Gly

275 280 285

Thr Thr Thr Phe Ala Val Thr Ser Ile Leu Arg Val Ala Ala Glu Asp

290 295 300

Trp Lys Lys Gly Asp Thr Phe Ser Cys Met Val Gly His Glu Ala Leu

305 310 315 320

Pro Leu Ala Phe Thr Gln Lys Thr Ile Asp Arg Leu Ala Gly Lys Pro

325 330 335

Thr His Val Asn Val Ser Val Val Met Ala Glu Val Asp Gly Thr Cys

340 345 350

Tyr

<210>2

<211>192

<212>PRT

<213>智人

<220>

<221>各种特征

<222>(140)..(140)

<223>Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400>2

Asp Phe Pro Met Pro Phe Ile Ser Ala Lys Ser Ser Pro Val Ile Pro

1 5 10 15

Leu Asp Gly Ser Val Lys Ile Gln Cys Gln Ala Ile Arg Glu Ala Tyr

20 25 30

Leu Thr Gln Leu Met Ile Ile Lys Asn Ser Thr Tyr Arg Glu Ile Gly

35 40 45

Arg Arg Leu Lys Phe Trp Asn Glu Thr Asp Pro Glu Phe Val Ile Asp

50 55 60

His Met Asp Ala Asn Lys Ala Gly Arg Tyr Gln Cys Gln Tyr Arg Ile

65 70 75 80

Gly His Tyr Arg Phe Arg Tyr Ser Asp Thr Leu Glu Leu Val Val Thr

85 90 95

Gly Leu Tyr Gly Lys Pro Phe Leu Ser Ala Asp Arg Gly Leu Val Leu

100 105 110

Met Pro Gly Glu Asn Ile Ser Leu Thr Cys Ser Ser Ala His Ile Pro

115 120 125

Phe Asp Arg Phe Ser Leu Ala Lys Glu Gly Glu Xaa Ser Leu Pro Gln

130 135 140

His Gln Ser Gly Glu His Pro Ala Asn Phe Ser Leu Gly Pro Val Asp

145 150 155 160

Leu Asn Val Ser Gly Ile Tyr Arg Cys Tyr Gly Trp Tyr Asn Arg Ser

165 170 175

Pro Tyr Leu Trp Ser Phe Pro Ser Asn Ala Leu Glu Leu Val Val Thr

180 185 190

<210>3

<211>365

<212>PRT

<213>化脓性链球菌

<400>3

Met Ala Arg Lys Asp Thr Asn Lys Gln Tyr Ser Leu Arg Lys Leu Lys

1 5 10 15

Thr Gly Thr Ala Ser Val Ala Val Ala Val Ala Val Leu Gly Ala Gly

20 25 30

Phe Ala Asn Gln Thr Thr Val Lys Ala Glu Ser Ser Asn Asn Ala Glu

35 40 45

Ser Ser Asn Ile Ser Gln Glu Ser Lys Leu Ile Asn Thr Leu Thr Asp

50 55 60

Glu Asn Glu Lys Leu Arg Glu Glu Leu Gln Gln Tyr Tyr Ala Leu Ser

65 70 75 80

Asp Ala Lys Glu Glu Glu Pro Arg Tyr Lys Ala Leu Arg Gly Glu Asn

85 90 95

Gln Asp Leu Arg Glu Lys Glu Arg Lys Tyr Gln Asp Lys Ile Lys Lys

100 105 110

Leu Glu Glu Lys Glu Lys Asn Leu Glu Lys Lys Ser Glu Asp Val Glu

115 120 125

Arg His Tyr Leu Lys Lys Leu Asp Gln Glu His Lys Glu Gln Gln Glu

130 135 140

Arg Gln Lys Asn Leu Glu Glu Leu Glu Arg Gln Ser Gln Arg Glu Ile

145 150 155 160

Asp Lys Arg Tyr Gln Glu Gln Leu Gln Lys Gln Gln Gln Leu Glu Thr

165 170 175

Glu Lys Gln Ile Ser Glu Ala Ser Arg Lys Ser Leu Ser Arg Asp Leu

180 185 190

Glu Ala Ser Arg Ala Ala Lys Lys Lys Val Glu Ala Asp Leu Ala Ala

195 200 205

Leu Asn Ala Glu His Gln Lys Leu Lys Glu Glu Lys Gln Ile Ser Asp

210 215 220

Ala Ser Arg Gln Gly Leu Ser Arg Asp Leu Glu Ala Ser Arg Glu Ala

225 230 235 240

Lys Lys Lys Val Glu Ala Asp Leu Ala Glu Ala Asn Ser Lys Leu Gln

245 250 255

Ala Leu Glu Lys Leu Asn Lys Glu Leu Glu Glu Gly Lys Lys Leu Ser

260 265 270

Glu Lys Glu Lys Ala Glu Leu Gln Ala Arg Leu Glu Ala Glu Ala Lys

275 280 285

Ala Leu Lys Glu Gln Leu Ala Lys Gln Ala Glu Glu Leu Ala Lys Leu

290 295 300

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305 310 315 320

Ser Arg Ser Ala Met Thr Gln Gln Lys Arg Thr Leu Pro Ser Thr Gly

325 330 335

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340 345 350

Ser Ala Gly Met Leu Ala Leu Lys Arg Lys Glu Glu Asn

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<212>PRT

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<220>

<223>Sap

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Leu Arg Gly Glu Asn Gln Asp Leu Arg Glu Lys Glu Arg Lys Tyr Gln

20 25 30

Asp Lys Ile Lys Lys Leu Glu Glu Lys Glu Lys Asn Leu Glu Lys Lys

35 40 45

Ser Cys

50

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<212>PRT

<213>智人

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20 25 30

Ala Lys Ser Ser Pro Val Ile Pro Leu Asp Gly Ser Val Lys Ile Gln

35 40 45

Cys Gln Ala Ile Arg Glu Ala Tyr Leu Thr Gln Leu Met Ile Ile Lys

50 55 60

Asn Ser Thr Tyr Arg Glu Ile Gly Arg Arg Leu Lys Phe Trp Asn Glu

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Thr Asp Pro Glu Phe Val Ile Asp His Met Asp Ala Asn Lys Ala Gly

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Ser Ala Asp Arg Gly Leu Val Leu Met Pro Gly Glu Asn Ile Ser Leu

130 135 140

Thr Cys Ser Ser Ala His Ile Pro Phe Asp Arg Phe Ser Leu Ala Lys

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Glu Gly Glu Leu Ser Leu Pro Gln His Gln Ser Gly Glu His Pro Ala

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Asn Phe Ser Leu Gly Pro Val Asp Leu Asn Val Ser Gly Ile Tyr Arg

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210 215 220

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Leu Leu Ala Ile Leu Val Glu Asn Trp His Ser His Thr Ala Leu Asn

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<212>PRT

<213>智人

<400>6

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1 5 10 15

Thr His Gly Trp Pro Pro Asp Asp Pro Ser Pro Ser Phe Ala Ala Gly

20 25 30

Ser Ser Phe Ala Leu Pro Gln Lys Arg Pro His Pro Arg Trp Leu Trp

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Arg Pro Ser Ser Pro Leu Cys Trp Arg Glu Glu Ser Ser Phe Ala Ala

65 70 75 80

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100 105 110

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115 120 125

Thr Ile Val Ser Thr Asn Gln Tyr Thr His His Arg Tyr Arg Asp Arg

130 135 140

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145 150 155 160

Ser Gln Leu Ser Pro Asp Asp Ile Gly Cys Tyr Leu Cys Gly Ile Gly

165 170 175

Ser Glu Asn Asn Met Leu Phe Leu Ser Met Asn Leu Thr Ile Ser Ala

180 185 190

Gly Pro Ala Ser Thr Leu Pro Thr Ala Thr Pro Ala Ala Gly Glu Leu

195 200 205

Thr Met Arg Ser Tyr Gly Thr Ala Ser Pro Val Ala Asn Arg Trp Thr

210 215 220

Pro Gly Thr Thr Gln Thr Leu Gly Gln Gly Thr Ala Trp Asp Thr Val

225 230 235 240

Ala Ser Thr Pro Gly Thr Ser Lys Thr Thr Ala Ser Ala Glu Gly Arg

245 250 255

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340 345 350

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355 360 365

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405 410 415

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435 440 445

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530

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<212>PRT

<213>智人

<400>7

Met Leu Leu Phe Val Leu Thr Cys Leu Leu Ala Val Phe Pro Ala Ile

1 5 10 15

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20 25 30

Gly Asn Ser Val Ser Ile Thr Cys Tyr Tyr Pro Pro Thr Ser Val Asn

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Arg His Thr Arg Lys Tyr Trp Cys Arg Gln Gly Ala Arg Gly Gly Cys

50 55 60

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65 70 75 80

Arg Ala Asn Leu Thr Asn Phe Pro Glu Asn Gly Thr Phe Val Val Asn

85 90 95

Ile Ala Gln Leu Ser Gln Asp Asp Ser Gly Arg Tyr Lys Cys Gly Leu

100 105 110

Gly Ile Asn Ser Arg Gly Leu Ser Phe Asp Val Ser Leu Glu Val Ser

115 120 125

Gln Gly Pro Gly Leu Leu Asn Asp Thr Lys Val Tyr Thr Val Asp Leu

130 135 140

Gly Arg Thr Val Thr Ile Asn Cys Pro Phe Lys Thr Glu Asn Ala Gln

145 150 155 160

Lys Arg Lys Ser Leu Tyr Lys Gln Ile Gly Leu Tyr Pro Val Leu Val

165 170 175

Ile Asp Ser Ser Gly Tyr Val Asn Pro Asn Tyr Thr Gly Arg Ile Arg

180 185 190

Leu Asp Ile Gln Gly Thr Gly Gln Leu Leu Phe Ser Val Val Ile Asn

195 200 205

Gln Leu Arg Leu Ser Asp Ala Gly Gln Tyr Leu Cys Gln Ala Gly Asp

210 215 220

Asp Ser Asn Ser Asn Lys Lys Asn Ala Asp Leu Gln Val Leu Lys Pro

225 230 235 240

Glu Pro Glu Leu Val Tyr Glu Asp Leu Arg Gly Ser Val Thr Phe His

245 250 255

Cys Ala Leu Gly Pro Glu Val Ala Asn Val Ala Lys Phe Leu Cys Arg

260 265 270

Gln Ser Ser Gly Glu Asn Cys Asp VAl Val Val Asn Thr Leu Gly Lys

275 280 285

Arg Ala Pro Ala Phe Glu Gly Arg Ile Leu Leu Asn Pro Gln Asp Lys

290 295 300

Asp Gly Ser Phe Ser Val Val Ile Thr Gly Leu Arg Lys Glu Asp Ala

305 310 315 320

Gly Arg Tyr Leu Cys Gly Ala His Ser Asp Gly Gln Leu Gln Glu Gly

325 330 335

Ser Pro Ile Gln Ala Trp Gln Leu Phe Val Asn Glu Glu Ser Thr Ile

340 345 350

Pro Arg Ser Pro Thr Val Val Lys Gly Val Ala Gly Gly Ser Val Ala

355 360 365

Val Leu Cys Pro Tyr Asn Arg Lys Glu Ser Lys Ser Ile Lys Tyr Trp

370 375 380

Cys Leu Trp Glu Gly Ala Gln Asn Gly Arg Cys Pro Leu Leu Val Asp

385 390 395 400

Ser Glu Gly Trp Val Lys Ala Gln Tyr Glu Gly Arg Leu Ser Leu Leu

405 410 415

Glu Glu Pro Gly Asn Gly Thr Phe Thr Val Ile Leu Asn Gln Leu Thr

420 425 430

Ser Arg Asp Ala Gly Phe Tyr Trp Cys Leu Thr Asn Gly Asp Thr Leu

435 440 445

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450 455 460

Lys Val Pro Gly Asn Val Thr Ala Val Leu Gly Glu Thr Leu Lys Val

465 470 475 480

Pro Cys His Phe Pro Cys Lys Phe Ser Ser Tyr Glu Lys Tyr Trp Cys

485 490 495

Lys Trp Asn Asn Thr Gly Cys Gln Ala Leu Pro Ser Gln Asp Glu Gly

500 505 510

Pro Ser Lys Ala Phe Val Asn Cys Asp Glu Asn Ser Arg Leu Val Ser

515 520 525

Leu Thr Leu Asn Leu Val Thr Arg Ala Asp Glu Gly Trp Tyr Trp Cys

530 535 540

Gly Val Lys Gln Gly His Phe Tyr Gly Glu Thr Ala Ala Val Tyr Val

545 550 555 560

Ala Val Glu Glu Arg Lys Ala Ala Gly Ser Arg Asp Val Ser Leu Ala

565 570 575

Lys Ala Asp Ala Ala Pro Asp Glu Lys Val Leu Asp Ser Gly Phe Arg

580 585 590

Glu Ile Glu Asn Lys Ala Ile Gln Asp Pro Arg Leu Phe Ala Glu Glu

595 600 605

Lys Ala Val Ala Asp Thr Arg Asp Gln Ala Asp Gly Ser Arg Ala Ser

610 615 620

Val Asp Ser Gly Ser Ser Glu Glu Gln Gly Gly Ser Ser Arg Ala Leu

625 630 635 640

Val Ser Thr Leu Val Pro Leu Gly Leu Val Leu Ala Val Gly Ala Val

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705 710 715 720

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<210>8

<211>760

<212>PRT

<213>智人

<400>8

Met Met Asp Gln Ala Arg Ser Ala Phe Ser Asn Leu Phe Gly Gly Glu

1 5 10 15

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50 55 60

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65 70 75 80

Phe Met Ile Gly Tyr Leu Gly Tyr Cys Lys Gly Val Glu Pro Lys Thr

85 90 95

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100 105 110

Gly Glu Asp Phe Pro Ala Ala Arg Arg Leu Tyr Trp Asp Asp Leu Lys

115 120 125

Arg Lys Leu Ser Glu Lys Leu Asp Ser Thr Asp Phe Thr Ser Thr Ile

130 135 140

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145 150 155 160

Lys Asp Glu Asn Leu Ala Leu Tyr Val Glu Asn Gln Phe Arg Glu Phe

165 170 175

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180 185 190

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195 200 205

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210 215 220

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225 230 235 240

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245 250 255

Val Arg Ala Gly Lys Ile Thr Phe Ala Glu Lys Val Ala Asn Ala Glu

260 265 270

Ser Leu Asn Ala Ile Gly Val Leu Ile Tyr Met Asp Gln Thr Lys Phe

275 280 285

Pro Ile Val Asn Ala Glu Leu Ser Phe Phe Gly His Ala His Leu Gly

290 295 300

Thr Gly Asp Pro Tyr Thr Pro Gly Phe Pro Ser Phe Asn His Thr Gln

305 310 315 320

Phe Pro Pro Ser Arg Ser Ser Gly Leu Pro Asn Ile Pro Val Gln Thr

325 330 335

Ile Ser Arg Ala Ala Ala Glu Lys Leu Phe Gly Asn Met Glu Gly Asp

340 345 350

Cys Pro Ser Asp Trp Lys Thr Asp Ser Thr Cys Arg Met Val Thr Ser

355 360 365

Glu Ser Lys Asn Val Lys Leu Thr Val Ser Asn Val Leu Lys Glu Ile

370 375 380

Lys Ile Leu Asn Ile Phe Gly Val Ile Lys Gly Phe Val Glu Pro Asp

385 390 395 400

His Tyr Val Val Val Gly Ala Gln Arg Asp Ala Trp Gly Pro Gly Ala

405 410 415

Ala Lys Ser Gly Val Gly Thr Ala Leu Leu Leu Lys Leu Ala Gln Met

420 425 430

Phe Ser Asp Met Val Leu Lys Asp Gly Phe Gln Pro Ser Arg Ser Ile

435 440 445

Ile Phe Ala Ser Trp Ser Ala Gly Asp Phe Gly Ser Val Gly Ala Thr

450 455 460

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465 470 475 480

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485 490 495

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530 535 540

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660 665 670

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675 680 685

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705 710 715 720

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725 730 735

Leu Ala Thr Trp Thr Ile Gln Gly Ala Ala Asn Ala Leu Ser Gly Asp

740 745 750

Val Trp Asp Ile Asp Asn Glu Phe

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<210>9

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

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1 5

<210>10

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<212>PRT

<213>金黄色葡萄球菌

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50 55 60

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65 70 75 80

Ser Leu Lys Asp Asp Pro Ser Gln Ser Thr Asn Val Leu Gly Glu Ala

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100 105 110

Lys Glu Gln Gln Asn Ala Phe Tyr Glu Ile Leu Asn Met Pro Asn Leu

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Gln Ala Pro Lys Ala Asp Asn Lys Phe Asn Lys Glu Gln Gln Asn Ala

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180 185 190

Gly Phe Ile Gln Ser Leu Lys Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ala Asn Leu

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Leu Ala Glu Ala Lys Lys Leu Asn Asp Ala Gln Ala Pro Lys Ala Asp

210 215 220

Asn Lys Phe Asn Lys Glu Gln Gln Asn Ala Phe Tyr Glu Ile Leu His

225 230 235 240

Leu Pro Asn Leu Thr Glu Glu Gln Arg Asn Gly Phe Ile Gln Ser Leu

245 250 255

Lys Asp Asp Pro Gly Asn Ser Arg Gly Ser Val Asp Leu Gln Ile Thr

260 265 270

Asn

<210>11

<211>58

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>Z结构域

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Val Asp Asn Lys Phe Asn Lys Glu Gln Gln Asn Ala Phe Tyr Glu Ile

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Lys Lys Leu Asn Asp Ala Gln Ala Pro Lys

50 55

<210>12

<211>58

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>修饰的Z结构域

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Val Asp Asn Lys Phe Asn Lys Glu Thr Ile Gln Ala Ser Gln Glu Ile

1 5 10 15

Arg Leu Leu Pro Asn Leu Asn Gly Arg Gln Lys Leu Ala Phe Ile His

20 25 30

Ser Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ala Asn Leu Leu Ala Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ala Gln Ala Pro Lys

50 55

<210>13

<211>58

<212>PRT

<213>金黄色葡萄球菌

<400>13

Ala Asp Asn Lys Phe Asn Lys Glu Gln Gln Asn Ala Phe Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu His Leu Pro Asn Leu Asn Glu Glu Gln Arg Asn Gly Phe Ile Gln

20 25 30

Ser Leu Lys Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ala Asn Leu Leu Ala Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ala Gln Ala Pro Lys

50 55

<210>14

<211>25

<212>PRT

<213>智人

<400>14

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1 5 10 15

Thr Pro Pro Thr Pro Ser Pro Ser Cys

20 25

<210>15

<211>627

<212>PRT

<213>智人

<400>15

Met Asp Trp Thr Trp Arg Phe Leu Phe Val Val Ala Ala Ala Thr Gly

1 5 10 15

Val Gln Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe

35 40 45

Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Met Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala

65 70 75 80

Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Lys Thr Gly Ile Leu Gly Pro Tyr Ser Ser Gly Trp

115 120 125

Tyr Pro Asn Ser Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln

130 135 140

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu

145 150 155 160

Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val

165 170 175

Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe

180 185 190

Ser Trp Lys Tyr Lys Asn Asn Ser Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe

195 200 205

Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu

210 215 220

Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys

225 230 235 240

Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro

245 250 255

Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg

260 265 270

Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg Ser Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln

275 280 285

Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu

290 295 300

Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val Thr Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu

305 310 315 320

Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr

325 330 335

Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Ser Gln Ser Met Phe Thr Cys Arg Val

340 345 350

Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln Asn Ala Ser Ser Met Cys Val

355 360 365

Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe

370 375 380

Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr

385 390 395 400

Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn

405 410 415

Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr Asn Ile Ser Glu Ser His Pro Asn

420 425 430

Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp

435 440 445

Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr Val Thr His Thr Asp Leu Pro

450 455 460

Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg Pro Lys Gly Val Ala Leu His

465 470 475 480

Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu

485 490 495

Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala

500 505 510

Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu

515 520 525

Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg

530 535 540

Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr

545 550 555 560

Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala His Glu Ala Leu Pro Asn Arg

565 570 575

Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser Thr Glu Gly Glu Val Ser Ala

580 585 590

Asp Glu Glu Gly Phe Glu Asn Leu Trp Ala Thr Ala Ser Thr Phe Ile

595 600 605

Val Leu Phe Leu Leu Ser Leu Phe Tyr Ser Thr Thr Val Thr Leu Phe

610 615 620

Lys Val Lys

625

<210>16

<211>2213

<212>DNA

<213>智人

<400>16

gctctagaac tagtggatcc cccgggctgc aggaattctc taaagaagcc cctgggagca 60

cagctcatca ccatggactg gacctggagg ttcctctttg tggtggcagc agctacaggt 120

gtccagtccc aggtgcagct ggtgcagtct ggggctgagg tgaagaagcc tgggtcctcg 180

gtgaaggtct cctgcaaggc ttctggaggc accttcagca gctatgctat cagctgggtg 240

cgacaggccc ctggacaagg gcttgagtgg atgggaggga tcatccctat ctttggtaca 300

gcaaactacg cacagaagtt ccagggcaga gtcacgatta ccgcggacga atccacgagc 360

acagcctaca tggagctgag cagcctgaga tctgaggaca cggccgtgta ttactgtgcg 420

aaaaccggga tcctggggcc gtatagcagt ggctggtacc cgaactcgga ctactactac 480

tacggtatgg acgtctgggg ccaagggacc acggtcaccg tctcctcagg gagtgcatcc 540

gccccaaccc ttttccccct cgtctcctgt gagaattccc cgtcggatac gagcagcgtg 600

gccgttggct gcctcgcaca ggacttcctt cccgactcca tcactttctc ctggaaatac 660

aagaacaact ctgacatcag cagcacccgg ggcttcccat cagtcctgag agggggcaag 720

tacgcagcca cctcacaggt gctgctgcct tccaaggacg tcatgcaggg cacagacgaa 780

cacgtggtgt gcaaagtcca gcaccccaac ggcaacaaag aaaagaacgt gcctcttcca 840

gtgattgctg agctgcctcc caaagtgagc gtcttcgtcc caccccgcga cggcttcttc 900

ggcaaccccc gcagcaagtc casgctcatc tgccaggcca cgggtttcag tccccggcag 960

attcaggtgt cctggctgcg cgaggggaag caggtggggt ctggcgtcac cacggaccag 1020

gtgcaggctg aggccaaaga gtctgggccc acgacctaca aggtgaccag cacactgacc 1080

atcaaagaga gcgactggct cagccagagc atgttcacct gccgcgtgga tcacaggggc 1140

ctgaccttcc agcagaatgc gtcctccatg tgtgtccccg atcaagacac agccatccgg 1200

gtcttcgcca tccccccatc ctttgccagc atcttcctca ccaagtccac caagttgacc 1260

tgcctggtca cagacctgac cacctatgac agcgtgacca tctcctggac ccgccagaat 1320

ggcgaagctg tgaaaaccca caccaacatc tccgagagcc accccaatgc cactttcagc 1380

gccgtgggtg aggccagcat ctgcgaggat gactggaatt ccggggagag gttcacgtgc 1440

accgtgaccc acacagacct gccctcgcca ctgaagcaga ccatctcccg gcccaagggg 1500

gtggccctgc acaggcccga tgtctacttg ctgccaccag cccgggagca gctgaacctg 1560

cgggagtcgg ccaccatcac gtgcctggtg acgggcttct ctcccgcgga cgtcttcgtg 1620

cagtggatgc agagggggca gcccttgtcc ccggagaagt atgtgaccag cgccccaatg 1680

cctgagcccc aggccccagg ccggtacttc gcccacagca tcctgaccgt gtccgaagag 1740

gaatggaaca cgggggagac ctacacctgc gtggtggccc atgaggccct gcccaacagg 1800

gtcaccgaga ggaccgtgga caagtccacc gagggggagg tgagcgccga cgaggagggc 1860

tttgagaacc tgtgggccac cgcctccacc ttcatcgtcc tcttcctcct gagcctcttc 1920

tacagtacca ccgtcacctt gttcaaggtg aaatgatccc aacagaagaa catcggagac 1980

cagagagagg aactcaaagg ggcgctgcct ccgggtctgg ggtcctggcc tgcgtggcct 2040

gttggcacgt gtttctcttc ccgcccggcc tccagttgtg tgctctcaca caggcttcct 2100

tctcgaccgg caggggctgg ctggcttgca ggccacgagg tgggctctac cccacactgc 2160

tttgctgtgt atacgcttgt tgccctgaaa taaatatgca cattttatcc atg 2213

<210>17

<211>26

<212>PRT

<213>智人

<400>17

Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys Val Ser Val Phe Val

1 5 10 15

Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro

20 25

Claims

1.一种用于诊断哺乳动物中的IgA或IgM肾脏疾病的方法，所述方法包括：

(a)给所述哺乳动物施用特异性结合IgA或IgM的化合物；和

(b)检测所述哺乳动物肾脏中的所述化合物，

其中，所述哺乳动物的所述肾脏中的所述化合物的量相对于没有所述肾脏疾病的哺乳动物肾脏中的所述量的增加有助于诊断所述哺乳动物中的所述IgA或IgM肾脏疾病。

2.权利要求1的方法，其中所述哺乳动物是人。

3.权利要求1的方法，其中所述施用是静脉内的。

4.权利要求1的方法，其中所述化合物包含肽。

5.权利要求4的方法，其中所述肽选自人FcαR1(SEQ ID NO：2)、人Fcα/μ受体(SEQ ID NO：6)、多聚Ig受体(SEQ ID NO：7)、Sir22(SEQ ID NO：3)、链球菌IgA结合肽(Sap；SEQ ID NO：4)、修饰的Z-结构域蛋白质(SEQ ID NO：12)和YDWIPSSAW(SEQ ID NO：9)、或其IgA或IgM结合片段。

6.权利要求4的方法，其中所述肽包含选自N末端帽、C末端帽、D氨基酸、氨基酸替代物、拟肽序列和间隔物的修饰。

7.权利要求1的方法，其中所述化合物包含抗体、或其IgA或IgM结合片段。

8.权利要求7的方法，其中所述抗体是抗人IgA、或其IgA结合片段。

9.权利要求7的方法，其中所述抗体是抗人IgM、或其IgM结合片段。

10.权利要求1的方法，其中所述化合物包含量子点。

11.权利要求1的方法，其中所述化合物与放射性标记连接。

12.权利要求11的方法，其中所述标记选自^99mTc、¹¹¹In、⁶⁶Ga、⁶⁷Ga、⁶⁸Ga、⁸⁶Y、⁹⁰Y、²⁰¹T1、⁵⁵Co、⁶⁰Cu、⁶¹Cu、⁶²Cu、⁶⁴Cu、⁶⁷Cu、⁸²Rb、^185/187Re和^186/188Re。

13.权利要求11的方法，其中所述化合物通过双功能螯合剂与所述放射性标记连接。

14.权利要求13的方法，其中所述双功能螯合剂选自N₃S、N₂S₂、PnAO、HYNIC、[M(CO)₃(H₂O)₃]⁺、PADA、DTPA、DOTA、组氨酸、三肽和四肽。

15.权利要求14的方法，其中所述三肽是Lys-Gly-Cys、Cys-Gly-Cys或Gly-Gly-Cys。

16.权利要求14的方法，其中所述四肽是Gly-Ala-Gly-Gly或Cys-Gly-Cys-Gly。

17.权利要求1的方法，其中所述化合物与顺磁物质连接。

18.权利要求17的方法，其中所述顺磁物质是钆。

19.权利要求1的方法，其中所述检测通过成像技术来进行。

20.权利要求19的方法，其中所述成像技术选自SPECT、PET、平面扫描和MRI。

21.权利要求1的方法，其中所述化合物进一步包含半乳糖和结合对的第一个成员。

22.权利要求21的方法，其中所述结合对的第一个成员是链霉亲和素。

23.权利要求21的方法，其中所述施用进一步包含半乳糖-菲柯尔的施用。

24.权利要求21的方法，其中所述检测通过下述进行：给所述哺乳动物施用与(a)结合对的第二个成员和(b)半乳糖缀合的放射性标记化合物，随后检测所述哺乳动物的所述肾脏中的所述放射性标记化合物。

25.权利要求24的方法，其中所述放射性标记化合物用选自下列的同位素进行标记：^99mTc、¹¹¹In、⁶⁶Ga、⁶⁷Ga、⁶⁸Ga、⁸⁶Y、⁹⁰Y、²⁰¹Tl、⁵⁵Co、⁶⁰Cu、⁶¹Cu、⁶²Cu、⁶⁴Cu、⁶⁷Cu、⁸²Rb、^185/187Re和^186/188Re。

26.权利要求24的方法，其中所述放射性标记化合物是人血清白蛋白。

27.权利要求24的方法，其中所述结合对的第二个成员是生物素。

28.一种组合物，其包含；

(a)IgA或IgM结合化合物；

(b)双功能螯合剂；和

(c)在药学可接受载体中的可检测标记，

其中所述IgA或IgM结合化合物通过所述双功能螯合剂与所述可检测标记连接。

29.权利要求28的组合物，其中所述化合物包含肽。

30.权利要求29的组合物，其中所述肽选自人FcαR1(SEQ ID NO：2)、人Fcα/μ受体(SEQ ID NO：6)、多聚Ig受体(SEQ ID NO：7)、Sir22(SEQ ID NO：3)、链球菌IgA结合肽(Sap；SEQ ID NO：4)、修饰的Z-结构域蛋白质(SEQ ID NO：12)和YDWIPSSAW(SEQ ID NO：9)、或其IgA或IgM结合片段。

31.权利要求29的组合物，其中所述肽包含选自N末端帽、C末端帽、D氨基酸、氨基酸替代物、拟肽序列和间隔物的修饰。

32.权利要求28的组合物，其中所述化合物包含抗体、或其IgA或IgM结合片段。

33.权利要求32的组合物，其中所述抗体是抗人IgA、或其IgA结合片段。

34.权利要求32的组合物，其中所述抗体是抗人IgM、或其IgM结合片段。

35.权利要求28的组合物，其中所述双功能螯合剂选自N₃S、N₂S₂、PnAO、HYNIC、[M(CO)₃(H₂O)₃]⁺、PADA、DTPA、DOTA、组氨酸、三肽和四肽。

36.权利要求35的组合物，其中所述三肽是Lys-Gly-Cys、Cys-Gly-Cys或Gly-Gly-Cys。

37.权利要求35的组合物，其中所述四肽是Gly-Ala-Gly-Gly或Cys-Gly-Cys-Gly。

38.权利要求28的组合物，其中所述可检测标记是放射性标记。

39.权利要求38的组合物，其中所述放射性标记选自：^99mTc、¹¹¹In、⁶⁶Ga、⁶⁷Ga、⁶⁸Ga、⁸⁶Y、⁹⁰Y、²⁰¹Tl、⁵⁵Co、⁶⁰Cu、⁶¹Cu、⁶²Cu、⁶⁴Cu、⁶⁷Cu、⁸²Rb、^185/187Re和^186/188Re。

40.一种试剂盒，其包含：

(a)IgA或IgM结合化合物；

(b)双功能螯合剂；和

(c)在药学可接受载体中的可检测标记，

(d)用于检测哺乳动物中的IgA或IgM肾脏疾病的使用说明。

41.权利要求40的试剂盒，其中所述化合物进一步包含半乳糖和结合对的第一个成员；并且所述可检测标记包含放射性标记肽，所述放射性标记肽包含半乳糖和结合对的第二个成员。

42.权利要求41的试剂盒，其中所述放射性标记选自：^99mTc、¹¹¹In、⁶⁶Ga、⁶⁷Ga、⁶⁸Ga、⁸⁶Y、⁹⁰Y、²⁰¹Tl、⁵⁵Co、⁶⁰Cu、⁶¹Cu、⁶²Cu、⁶⁴Cu、⁶⁷Cu、⁸²Rb、^185/187Re和^186/188Re。

43.权利要求41的试剂盒，其中所述结合对的第一个成员是链霉亲和素，所述结合对的第二个成员是生物素。

44.权利要求41的试剂盒，其中所述放射性标记肽是人血清白蛋白。