CN101235401A - 发酵制备l-氨基酸的方法 - Google Patents

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吴品芳
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Abstract

本发明涉及一种发酵制备L－氨基酸的方法。本发明方法使用了发酵助剂甜菜碱磷酸盐。采用本发明的方法，可以明显提高L－氨基酸的产酸率，降低生产成本，宜于规模型的工业化生产。

Description

发酵制备L-氨基酸的方法
技术领域
本发明涉及生物工程技术领域。具体涉及一种发酵制备L-氨基酸的方法。
背景技术
L-氨基酸广泛应用于饲料工业、保健食品和医药工业。自1956年日本协和发酵公司用发酵法生产谷氨酸以后，氨基酸的发酵生产发展很快，到目前为止，绝大多数氨基酸已能用发酵法和酶法生产。
近年来，随着经济的发展，人民生活水平的逐步提高，人们对健康方面给于越来越多的关注，L-氨基酸的需求量也在逐年上升。但是大多数L-氨基酸的发酵产酸水平较低，生产成本较高，抑制了L-氨基酸的应用。因此，提高L-氨基酸的产酸率具有非常重要的现实意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于克服上述不足之处，研究设计一种生产成本较低的发酵制备L-氨基酸的方法。
本发明提供了一种发酵制备L-氨基酸的方法。
为达到本发明的目的，本发明采用了下列技术方案：
本发明使用了发酵助剂甜菜碱磷酸盐。甜菜碱磷酸盐具有下列结构和性能：
Figure A20071003709000061
分子式：C5H14NO6P
分子量：215.14
物理性能：白色至微黄色结晶性粉末，无气味，味酸涩，具吸潮性，极易溶于水，溶于乙醇。
发酵助剂甜菜碱磷酸盐的使用，可以明显提高L-氨基酸的收率，降低生产成本。
本发明提供的发酵制备L-氨基酸方法具体包括下列步骤：
(1)种子培养：
种子培养基g/dl：葡萄糖3，玉米浆3，豆浓2，K2HPO4 0.15，MgSO4·7H2O 0.04，尿素0.2，pH 7.0-7.2；将一定量的种子培养基放入种子罐中，在115℃下灭菌15分钟。降温后接入黄色短杆菌ATCC14067，于32℃下通气培养9小时；
(2)发酵培养：
发酵培养基g/dl：葡萄糖14，糖蜜0.1，Na2HPO40-0.1，KCl 0.12，MgSO4 7H2O0.08，FeSO4 4H2O 0.0002，MnSO4 0.0002，维生素B1 20mu g/l；
在上述发酵培养基中添加0.05-0.3g/dl的甜菜碱磷酸盐，调节pH为7.0-7.2，该培养基放于发酵罐中，于115℃加热15分钟灭菌后备用；
将步骤(1)得到的种子接于发酵罐中，34℃通气发酵培养；在培养过程中，采用氨水调节pH维持在7.0-7.2，同时，持续补加70％的葡萄糖水溶液，使糖浓度控制在1-2g/dl；在发酵结束前的2小时，停止持续补加葡萄糖。
分别在发酵培养0、3、8、14和18小时时，添加0.15g/dl的甜菜碱磷酸盐，进行发酵培养。培养1-7天后，停止加入葡萄糖，再继续发酵2小时后，发酵完毕。
本发明中L-氨基酸的发酵条件采用特定底物的传统生产方法，根据底物的不同，条件也可改变。发酵温度在20-40℃的范围，尤其是28-40℃的范围。pH值控制在中性7-7.2。发酵助剂甜菜碱磷酸盐在发酵液中的浓度为0.01％-5.0％，优选范围为0.05％-1.0％。发酵在有氧条件下，需要搅拌或振荡。发酵时间范围在1-7天。对于发酵后氨基酸的分离纯化，可采用常规的离子交换及其他方法。
本发明方法适用的L-氨基酸包括：L-谷氨酸，L-赖氨酸，L-精氨酸，L-异亮氨酸，L-缬氨酸，L-苏氨酸，L-组氨酸，L-苯基丙氨酸，L-色氨酸，L-丝氨酸，L-鸟氨酸，L-瓜氨酸，L-酪氨酸和L-亮氨酸。
本发明方法适用的碳源包括：糖类如葡萄糖，蔗糖，果糖，麦芽糖，糖蜜，粗糖，糖化的淀粉液；脂肪酸类如乙酸，丙酸，苯甲酸；有机酸类如丙酮酸，柠檬酸，琥珀酸，富马酸，苹果酸；醇类如乙醇，丁醇。
本发明方法适用的氮源包括：有机氮源如豆浓，玉米浆，尿素，酵母粉，豆饼水解液；无机氮源如硫酸铵，氯化铵，硝酸铵，醋酸铵，液氨，氨水。
本发明方法发酵培养基可以使用以下各种无机盐：磷酸盐、镁盐、钙盐、钾盐、钠盐、铁盐、锰盐以及其他微量金属盐。
本发明方法发酵培养基可以使用以下各种维生素：生物素、硫胺素、烟酰胺等。
本发明方法适用于以下各种相应氨基酸的发酵菌(短杆菌属，棒杆菌属，芽孢杆菌或大肠杆菌属等)：L-谷氨酸发酵菌如双歧杆菌ATCC 14020，黄色短杆菌ATCC14067，乳酸发酵短杆菌ATCC 13869，乳酸发酵短杆菌FERM-P 5012，嗜乙酰乙酸棒杆菌ATCC13870，谷氨酸棒杆菌ATCC13032等；L-赖氨酸发酵菌如黄色短杆菌ATCC14067，黄色短杆菌FERM-P 1708，谷氨酸棒杆菌FERM-P 1709，乳酸发酵短杆菌FERM-P 1712，乳酸发酵短杆菌FERM-P 1711，黄色短杆菌ATCC 21475，谷氨酸棒杆菌ATCC 12416，乳酸发酵短杆菌ATCC 1470，醋麸酸棒状杆菌ATCC 11472等；L-谷氨酸盐发酵菌如黄色短杆菌FERM-P 4272，嗜乙酰乙酸棒杆菌ATCC 13870，黄色短杆菌FERM-BP 662，醋麸酸棒状杆菌ATCC 13870，谷氨酸棒杆菌FERM-BP 663等；L-精氨酸发酵菌如黄色短杆菌FERM-P 4948，谷氨酸棒杆菌FERM-P 7274，黄色短杆菌NRRL 12235，醋麸酸棒状杆菌NRRL 12239等；L-苯基丙氨酸发酵菌如乳酸发酵短杆菌FERM-P 5417，黄色短杆菌FERM-P 1916，谷氨酸棒杆菌ATCC 21670，柠檬酸节杆菌ATCC 21422，乳酸发酵短杆菌ATCC 21420，嗜乙酰乙酸棒杆菌ATCC21421，黄色短杆菌NRRL 12269，谷氨酸棒杆菌ATCC 21670；L-苏氨酸发酵菌如大肠埃希氏菌FERM-P 4900，谷氨酸棒杆菌FERM-P 5835，黄色短杆菌FERM-P4164，乳酸发酵短杆菌FERM-P 4180，黄色短杆菌ATCC 21269，嗜乙酰乙酸棒杆菌ATCC 21270等；L-异亮氨酸发酵菌如黄色短杆菌FERM-P 3672，乳酸发酵短杆菌FERM-P 4192，谷氨酸棒杆菌FERM-P 756，谷氨酸棒杆菌FERM-P 757，谷氨酸棒杆菌FERM-P 758，黄色短杆菌FERM-BP 759，黄色短杆菌FERM-BP 760等；L-组氨酸发酵菌如黄色短杆菌FERM-P 2317，乳酸发酵短杆菌FERM-P 1565，谷氨酸棒杆菌ATCC 14297，乳酸发酵短杆菌ATCC 21086，嗜乙酰乙酸棒杆菌ATCC 21407，黄色短杆菌ATCC 21406，枯草芽孢杆菌FERM-BP 217，柠檬酸节杆菌ATCC 21412等；L-缬氨酸发酵菌如乳酸发酵短杆菌FERM-P 1845，黄色短杆菌FERM-P 512，乳酸发酵短杆菌FERM-P 1968，大肠杆菌NRRL 12285等；L-丝氨酸发酵菌如乳酸发酵短杆菌FERM-P 1371；L-鸟氨酸发酵菌如乳酸发酵短杆菌FERM-P 5936，谷氨酸棒杆菌FERM-P 5644，柠檬酸节杆菌ATCC 21040，谷氨酸棒杆菌ATCC 13232等；L-瓜氨酸发酵菌如谷氨酸棒杆菌FERM-P 5643，黄色短杆菌FERM-P 1645等；L-酪氨酸发酵菌如谷氨酸棒杆菌FERM-P 5836，黄色短杆菌FERM-P 7914，枯草芽孢杆菌FERM-P6758等；L-色氨酸发酵菌如枯草芽孢杆菌FERM-P 5286，乳酸发酵短杆菌FERM-P7127，黄色短杆菌FERM-P 2551，谷氨酸棒杆菌FERM-P 7128，黄色短杆菌ATCC21427，黄色短杆菌FERM-BP 114，枯草芽孢杆菌FERM-BP 208，黄色短杆菌FERM-BP 475，谷氨酸棒杆菌，枯草芽孢杆菌FERM-BP 200等；L-亮氨酸发酵菌如乳酸发酵短杆菌FERM-P 1769，黄色短杆菌FERM-P 420，谷氨酸棒杆菌FERM-P1966，黄色短杆菌FERM-BP 755，谷氨酸棒杆菌FERM-BP 756，谷氨酸棒杆菌FERM-P 757，黄色短杆菌FERM-BP 759等。
本发明方法可以明显提高L-氨基酸的产酸率，降低生产成本，有利于规模型的工业化生产。
具体实施方式
实施例：
实施例1：种子培养基(g/dl)：葡萄糖3，玉米浆3，豆浓2，K2HPO40.15，MgSO4·7H2O 0.04，尿素0.2，pH调至7.0-7.2，在115℃下，加热15分钟进行灭菌。
将黄色短杆菌ATCC 14067接种于5L种子罐中，在32℃下，振荡培养9h。
另外，谷氨酸发酵培养基(g/dl)为：葡萄糖14，糖蜜0.1，Na2HPO40～0.1，KCl 0.12，MgSO4·7H2O 0.08，FeSO4·4H2O 0.0002，MnSO40.0002，维生素B120mu g/l。培养基中分别添加0.05～0.3g/dl的甜菜碱磷酸盐，调整pH至7.0。将3L培养基放入5升的发酵罐，在115℃下，加热15分钟进行灭菌。
在每个发酵罐中接入300ml按上述培养得到的种子，通气培养，温度为34℃。在培养过程中，采用氨水调节培养基的pH，使其维持在7.2，同时，持续补加70％的葡萄糖水溶液，使糖浓度控制在1-2g/dl(按葡萄糖计算)。发酵培养30小时后，停止加入葡萄糖，再过2小时后，发酵完毕。测定培养基中积累的谷氨酸含量，结果见表1。
表1.
  甜菜碱磷酸盐的添加量(g/dl)   L-谷氨酸的量(g/dl)
  0   12.4
  0.05   12.5
  0.1   12.3
  0.15   13.2
  0.2   12.4
  0.25   12.6
  0.3   11.4
实施例2：种子培养基(g/dl)：葡萄糖3，玉米浆3，豆浓2，K2HPO40.15，MgSO4·7H2O 0.04，尿素0.2，pH调至7.0-7.2，在115℃下，加热15分钟进行灭菌。
将黄色短杆菌ATCC 14067接种于5L种子罐中，在32℃下，振荡培养9h。
另外，L-谷氨酸发酵培养基(g/dl)为：葡萄糖14，糖蜜0.1，Na2HPO40～0.1，KCl 0.10，MgSO4·7H2O 0.08，FeSO4·4H2O 0.0002，MnSO40.0002，维生素B120mu g/l，调整pH至7.0。将3L培养基放入5升的发酵罐，在115℃下，加热15分钟进行灭菌。
在每个发酵罐中接入300ml按上述培养得到的种子，通气培养，温度为34℃。在培养过程中，采用氨水调节培养基的pH，使其维持在7.2，同时，持续补加70％的葡萄糖水溶液，使糖浓度控制在1-2g/dl(按葡萄糖计算)。分别在发酵培养0，3，8，14，18小时，添加0.15g/dl的甜菜碱磷酸盐，培养30小时后，停止加入葡萄糖，再过2小时后，发酵完毕。测定培养基中积累的谷氨酸含量，结果见表2。
表2.
  甜菜碱磷酸盐的添加时间(h)   L-谷氨酸的量(g/dl)
  0   13.6
  3   12.5
  8   12.3
  14   12.5
  18   12.2
实施例3：种子培养基(g/dl)：葡萄糖2.5，(NH4)2SO40.5，KH2PO40.1，MgSO4·7H2O 0.05，玉米浆3.5-4.0，CaCO31.0，pH调至7.0-7.2，0.1Mpa压力下灭菌20分钟。
将黄色短杆菌ATCC 14067接种于5L种子罐中，在31℃下，振荡培养12h。
L-赖氨酸的发酵培养基(g/dl)为：葡萄糖18，(NH4)2SO450，KH2PO41，KCl 0.12，MgSO4·7H2O 0.5，玉米浆0.5-1.5，L-苏氨酸0.4，CaCO3 4.0，培养基中分别添加0.05-0.3g/dl的甜菜碱磷酸盐，调整pH至7.0-7.2。将3.6L培养基放入7升的发酵罐，0.07Mpa压力下灭菌8分钟。
在每个发酵罐中接入360ml按上述培养得到的种子，通气培养，温度为30℃。在培养过程中，采用氨水调节培养基的pH，使其维持在6.7，同时，持续补加70％的葡萄糖水溶液，使糖浓度控制在3-4g/dl(按葡萄糖计算)。发酵培养72小时，L-赖氨酸的产量见表3。
表3.
  甜菜碱磷酸盐的添加量(g/dl)   L-赖氨酸的量(g/dl)
  0   11.3
  0.05   11.4
  0.1   11.6
  0.15   12.1
  0.2   12.0
  0.25   11.2
  0.3   10.9
实施例4：种子培养基(g/dl)：葡萄糖2.5，(NH4)2SO40.2，尿素0.2，KH2PO40.15，MgSO4·7H2O 0.04，FeSO4·7H2O 0.001，MnSO4·4H2O 0.001，维生素B1100mu g/l，生物素300mu g/l，调整pH至7.0，灭菌。将黄色短杆菌FERM-P 4164接种于5L种子罐中培养12h。
L-苏氨酸的发酵培养基(g/dl)为：葡萄糖8，KH2PO40.25，MgSO4·7H2O 0.04，(NH4)2SO42.0，MnSO4·4H2O 0.001，FeSO4·4H2O 0.001，生物素50mu g/l，维生素B15mu g/l。培养基中分别添加0.05-0.3g/dl的甜菜碱磷酸盐，调整pH至7.0。在114℃下，蒸汽灭菌15分钟。按1％的接种量将上述培养好的种子液接入10L发酵罐中，发酵培养36h，L-苏氨酸的产量见表4。
表4
  甜菜碱磷酸盐的添加量(g/dl)   L-苏氨酸的量(g/dl)
  0   10.9
  0.05   11.1
  0.1   11.2
  0.15   11.8
  0.2   11.6
  0.25   11.0
  0.3   10.5
实施例5：种子培养基(g/dl)：葡萄糖2.5，(NH4)2SO40.5，玉米浆3，KH2PO40.1，MgSO4·7H2O 0.05，CaCO31，调整pH至7.0，灭菌。将谷氨酸棒杆菌FERM-P 7274接种于5L种子罐中，在30℃下培养24h。
L-精氨酸的发酵培养基(g/dl)为：葡萄糖12.5，(NH4)2SO43.0，KH2PO40.15，MgSO4·7H2O 0.05，玉米浆1，CaCO3 3.0。培养基中分别添加0.05-0.3g/dl的甜菜碱磷酸盐，调整pH至7.0。在114℃下，蒸汽灭菌15分钟。按10％的接种量将上述培养好的种子液接入10L发酵罐中，发酵培养96h，L-精氨酸的产量见表5。
表5
  甜菜碱磷酸盐的添加量(g/dl)   L-精氨酸的量(g/dl)
  0   3.81
  0.05   3.89
  0.1   4.05
  0.15   4.20
  0.2   4.11
  0.25   3.98
  0.3   3.78
实施例6：种子培养基(g/dl)：蔗糖3.0，KH2PO40.15，MgSO4·7H2O 0.04，FeSO4·7H2O 0.001，MnSO4·4H2O 0.001，醋酸铵0.3，尿素0.2，豆饼水解液0.2，VH 0.2mg，VB1 0.3mg，调整pH至7.0，在每个500ml的三角瓶中装入55ml培养基，0.075Mpa压力下灭菌20min。将黄色短杆菌FERM-P 3672接种于三角瓶中，在31℃下振荡培养45h。
L-异亮氨酸的发酵培养基(g/dl)为：葡萄糖14.5，(NH4)2SO42.5，KH2PO40.22，K2HPO40.1，MgSO4·7H2O 0.04，FeSO4·7H2O 0.0015，MnSO4·4H2O 0.0015，豆饼水解液0.2，VH 0.01mg，VB1 0.25mg，Met 3mg，培养基中分别添加0.05-0.3g/dl的甜菜碱磷酸盐，调整pH至7.1。在0.075Mpa压力下，蒸汽灭菌20分钟。按10％的接种量将上述培养好的种子液接入5L发酵罐中，发酵培养80h，L-异亮氨酸的产量见表6。
表6
  甜菜碱磷酸盐的添加量(g/dl)   L-异亮氨酸的量(g/dl)
  0   2.21
  0.05   2.25
  0.1   2.33
  0.15   2.51
  0.2   2.39
  0.25   2.30
  0.3   2.23
实施例7：种子培养基(g/dl)：葡萄糖3.0，玉米浆3，酵母粉0.5，KH2PO40.1，MgSO4·7H2O 0.04，MnSO4·4H2O 0.001，VH 0.01mg，VB1 0.02mg，调整pH至7.0，在每个500ml的三角瓶中装入30ml培养基，0.1Mpa压力下灭菌15min。将黄色短杆菌FERM-P 512接种于三角瓶中，在32℃下振荡培养16h。
L-缬氨酸的发酵培养基(g/dl)为：葡萄糖8，(NH4)2SO40.6，KH2PO40.12，MgSO4·7H2O 0.04，MnSO4·4H2O 0.001，蛋氨酸0.05，豆饼水解液2，玉米浆2.5，VH0.01mg，VB1 0.02mg，培养基中分别添加0.05-0.3g/dl的甜菜碱磷酸盐，调整pH至7.0。在0.075Mpa压力下，蒸汽灭菌15分钟。按10％的接种量将上述培养好的种子液接入10L发酵罐中，发酵培养72h，L-缬氨酸的产量见表7。
表7
  甜菜碱磷酸盐的添加量(g/dl)   L-缬氨酸的量(g/dl)
  0   5.02
  0.05   5.09
  0.1   5.16
  0.15   5.35
  0.2   5.30
  0.25   5.21
  0.3   5.04
实施例8：种子培养基(g/dl)：葡萄糖3.0，(NH4)2SO40.5，玉米浆4.0，豆饼水解液2.0，KH2PO40.1，MgSO4·7H2O 0.04，FeSO4·7H2O 0.001，MnSO4·4H2O 0.001，VH 0.02mg，VB1 0.03mg，调整pH至7.0，0.075Mpa压力下灭菌15min。将谷氨酸棒杆菌FERM-P 7128接种于500ml三角瓶中，在32℃下振荡培养16h。
L-色氨酸的发酵培养基(g/dl)为：葡萄糖13，(NH4)2SO44，KH2PO41.0，MgSO4·7H2O 0.04，MnSO4·4H2O 0.001，FeSO4·7H2O 0.001，豆饼水解液2.5，玉米浆2.2，VH 0.005mg，VB1 0.01mg，培养基中分别添加0.05-0.3g/dl的甜菜碱磷酸盐，调整pH至7.0。在0.075Mpa压力下，蒸汽灭菌15分钟。按10％的接种量将上述培养好的种子液接入5L发酵罐中，发酵培养，L-色氨酸的产量见表8。
表8
  甜菜碱磷酸盐的添加量(g/dl)   L-色氨酸的量(g/dl)
  0   1.01
  0.05   1.12
  0.1   1.18
  0.15   1.29
  0.2   1.20
  0.25   1.08
  0.3   0.98

Claims (10)

1. 一种发酵制备L-氨基酸的方法，其特征在于该方法包括下列步骤：
(1)种子培养：
种子培养基g/dl：
葡萄糖3，玉米浆3，豆浓2，K2HPO4 0.15，MgSO4·7H2O 0.04，尿素0.2，pH7.0-7.2；
将种子培养基放入种子罐中，在115℃下灭菌15分钟，降温后接入黄色短杆菌ATCC14067，于32℃下通气培养9小时；
(2)发酵培养：
发酵培养基g/dl：
葡萄糖14，糖蜜0.1，Na2HPO4 0-0.1，KCl 0.12，MgSO4 7H2O 0.08，FeSO4 4H2O0.0002，MnSO4 0.0002，维生素B1 20mu g/l；
在上述发酵培养基中添加0.05-0.3g/dl的甜菜碱磷酸盐，调节pH为7.0-7.2，该培养基放于发酵罐中，于115℃加热15分钟灭菌后备用；
将步骤(1)得到的种子接于发酵罐中，34℃通气发酵培养；在培养过程中，采用氨水调节pH维持在7.0-7.2，同时，持续补加70％的葡萄糖水溶液，使糖浓度控制在1-2g/dl；在发酵结束前的2小时，停止持续补加葡萄糖，并且分别在发酵培养0、3、8、14和18小时时，添加0.15g/dl的甜菜碱磷酸盐，进行发酵培养。
2. 根据权利要求1所述的一种发酵制备L-氨基酸的方法，其特征在于该方法使用了下列结构和性能的发酵助剂甜菜碱磷酸盐，
Figure A2007100370900002C1
分子式：C5H14NO6P
分子量：215.14
物理性能：白色至微黄色结晶性粉末，无气味，味酸涩，具吸潮性，极易溶于水，溶于乙醇。
3. 根据权利要求1所述的一种发酵制备L-氨基酸的方法，其特征在于其中所述发酵助剂甜菜碱磷酸盐在发酵液中的浓度为0.01％-5％，优选范围为0.05％-1.0％。
4. 一种如权利要求1所述的一种发酵制备L-氨基酸的方法，其特征在于发酵在有氧条件下，进行搅拌或振荡，发酵时间范围在1-7天。
5. 根据权利要求1所述的一种发酵制备L-氨基酸的方法，其特征在于所述L-氨基酸为L-谷氨酸，L-赖氨酸，L-精氨酸，L-异亮氨酸，L-缬氨酸，L-苏氨酸，L-组氨酸，L-苯基丙氨酸，L-色氨酸，L-丝氨酸，L-鸟氨酸，L-瓜氨酸，L-酪氨酸或L-亮氨酸。
6. 根据权利要求1所述的一种发酵制备L-氨基酸的方法，其特征在于该方法中使用的碳源糖类为葡萄糖、蔗糖、果糖、麦芽糖、糖蜜、粗糖或糖化的淀粉液；脂肪酸为乙酸、丙酸、苯甲酸；有机酸，丙酮酸、柠檬酸、琥珀酸、富马酸或苹果酸；醇为乙醇或丁醇。
7. 根据权利要求1所述的一种发酵制备L-氨基酸的方法，其特征在于该方法中培养基的氮源为有机氮源豆浓、玉米浆、尿素、酵母粉或豆饼水解液或无机氮源为硫酸铵、氯化铵、硝酸铵、醋酸铵、液氨或氨水。
8. 根据权利要求1所述的一种发酵制备L-氨基酸的方法，其特征在于该方法中的发酵培养基使用的无机盐为磷酸盐、镁盐、钙盐、钾盐、钠盐、铁盐、锰盐或微量金属盐。
9. 根据权利要求1所述的一种发酵制备L-氨基酸的方法，其特征在于该方法中的发酵培养基使用的维生素为生物素、硫胺素或烟酰胺。
10. 根据权利要求1所述的一种发酵制备L-氨基酸的方法，其特征在于该方法使用相应于氨基酸的发酵菌为L-谷氨酸发酵菌为双歧杆菌ATCC 14020、黄色短杆菌ATCC 14067、乳酸发酵短杆菌ATCC 13869、乳酸发酵短杆菌FERM-P 5012、嗜乙酰乙酸棒杆菌ATCC13870或谷氨酸棒杆菌ATCC13032；L-赖氨酸发酵菌黄色短杆菌ATCC 14067、黄色短杆菌FERM-P 1708、谷氨酸棒杆菌FERM-P 1709、乳酸发酵短杆菌FERM-P 1712、乳酸发酵短杆菌FERM-P 1711、黄色短杆菌ATCC21475、谷氨酸棒杆菌ATCC 12416、乳酸发酵短杆菌ATCC 1470或醋麸酸棒状杆菌ATCC 11472；L-谷氨酸盐发酵菌为黄色短杆菌FERM-P 4272、嗜乙酰乙酸棒杆菌ATCC 13870、黄色短杆菌FERM-BP 662、醋麸酸棒状杆菌ATCC 13870或谷氨酸棒杆菌FERM-BP 663；L-精氨酸发酵菌为黄色短杆菌FERM-P 4948、谷氨酸棒杆菌FERM-P 7274、黄色短杆菌NRRL 12235或醋麸酸棒状杆菌NRRL 12239；L-苯基丙氨酸发酵菌为乳酸发酵短杆菌FERM-P 5417、黄色短杆菌FERM-P 1916、谷氨酸棒杆菌ATCC 21670、柠檬酸节杆菌ATCC 21422、乳酸发酵短杆菌ATCC21420、嗜乙酰乙酸棒杆菌ATCC21421、黄色短杆菌NRRL 12269或谷氨酸棒杆菌ATCC 21670；L-苏氨酸发酵菌为大肠埃希氏菌FERM-P 4900、谷氨酸棒杆菌FERM-P 5835、黄色短杆菌FERM-P 4164、乳酸发酵短杆菌FERM-P 4180、黄色短杆菌ATCC 21269或嗜乙酰乙酸棒杆菌ATCC 21270；L-异亮氨酸发酵菌为黄色短杆菌FERM-P 3672、乳酸发酵短杆菌FERM-P 4192、谷氨酸棒杆菌FERM-P 756、谷氨酸棒杆菌FERM-P 757、谷氨酸棒杆菌FERM-P 758、黄色短杆菌FERM-BP 759或黄色短杆菌FERM-BP 760；L-组氨酸发酵菌为黄色短杆菌FERM-P 2317、乳酸发酵短杆菌FERM-P 1565、谷氨酸棒杆菌ATCC 14297、乳酸发酵短杆菌ATCC21086、嗜乙酰乙酸棒杆菌ATCC 21407、黄色短杆菌ATCC 21406、枯草芽孢杆菌FERM-BP 217或柠檬酸节杆菌ATCC 21412；L-缬氨酸发酵菌为乳酸发酵短杆菌FERM-P 1845、黄色短杆菌FERM-P 512、乳酸发酵短杆菌FERM-P 1968或大肠杆菌NRRL 12285；L-丝氨酸发酵菌为乳酸发酵短杆菌FERM-P 1371；L-鸟氨酸发酵菌为乳酸发酵短杆菌FERM-P 5936、谷氨酸棒杆菌FERM-P 5644、柠檬酸节杆菌ATCC 21040或谷氨酸棒杆菌ATCC 13232；L-瓜氨酸发酵菌为谷氨酸棒杆菌FERM-P 5643或黄色短杆菌FERM-P 1645；L-酪氨酸发酵菌为谷氨酸棒杆菌FERM-P 5836、黄色短杆菌FERM-P 7914或枯草芽孢杆菌FERM-P 6758；L-色氨酸发酵菌枯草芽孢杆菌FERM-P 5286、乳酸发酵短杆菌FERM-P 7127、黄色短杆菌FERM-P 2551、谷氨酸棒杆菌FERM-P 7128、黄色短杆菌ATCC 21427、黄色短杆菌FERM-BP 114、枯草芽孢杆菌FERM-BP208、黄色短杆菌FERM-BP475、谷氨酸棒杆菌或枯草芽孢杆菌FERM-BP 200；L-亮氨酸发酵菌为乳酸发酵短杆菌FERM-P 1769、黄色短杆菌FERM-P 420、谷氨酸棒杆菌FERM-P 1966、黄色短杆菌FERM-BP 755、谷氨酸棒杆菌FERM-BP 756、谷氨酸棒杆菌FERM-P 757或黄色短杆菌FERM-BP 759。
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