CN101175733A

CN101175733A - 一种酪氨酸激酶抑制剂、其制备方法及作为抗肿瘤药物的应用

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Publication number: CN101175733A
Application number: CNA2005800497600A
Authority: CN
Inventors: 黄文林; 周晓虹
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2005-05-12
Filing date: 2005-05-12
Publication date: 2008-05-07
Also published as: WO2006119674A1; US20080182985A1

Abstract

本发明公开了一种涉及化合物(I)的喹唑啉衍生物，及其制备方法和作为肿瘤生长抑制剂方面的药物应用。化合物(I)中的X、Y、Z、R₁、R₂、R₃、R₄各自具有说明书中所定义的任何含义。本发明化合物可特异性地抑制酪氨酸激酶活性，调节VEGF的分泌，从而达到治疗恶性肿瘤的目的。

Description

技术领域

本发明属于化学合成领域，涉及一类新型具抗肿瘤作用的酪氨酸激酶抑制剂及其制备方法，具体的说，本发明及喹唑啉衍生物的制备方法及用作制备治疗肿瘤疾病药物的应用。

背景技术

目前治疗癌症的传统方法放疗、化疗，对于某些局部实体瘤可釆用电疗的方法，这些传统方法有一定的疗效，但其毒副作相当大，在治疗的过程中，给病人带来极大的痛苦。

在肿瘤疾病中，实体肿瘤占绝大多数，而实体肿瘤的发生、发展以及复发、转移均有赖于肿瘤新生血管的形成。肿瘤血管生成是实体瘤生长和转移的必备条件。抑制肿瘤血管形成、阻断肿瘤组织血液供应的肿瘤 "饥饿疗法"，被认为是治疗实体瘤最有希望的新方法之一。

正常组织构建及功能的维持是由细胞体环境到细胞核的多步骤的细胞膜信号转导进行基因的转录及调控。癌症是一种由于失调的信号转导通路而导致的不正常的细胞行为，如细胞生长、存活、功能的改变、以及失去分化能力而形成肿瘤。肿瘤生长依赖于寄生宿主的能力，产生新生血管以利用宿主的营养及氧份。实体肿瘤的发展依赖于一种肿瘤产生的生长因子，刺激宿主内皮细胞信号反应并从已存的血管延伸肿瘤血管***（血管生成），成年期血管生成的速率相当缓慢，只有子宫内膜具有正常的增殖活性。因此利用这种以靶向性阻断血管生成的途径，是一种对肿瘤组织中病理性血管生成的有效治疗手段。

VEGF (Vascular Endothelial Growth Factor, 血管内皮细胞生长因子）是肿瘤血管生成过程中的一种血管生成因子，是内皮细胞分化的激素调节剂，实体瘤的发展与 VEGF的表达呈密切相关。已有的研究发现，包括恶性肿瘤在内的多种疾病都与血管生成有关（Fan， et al, 1995, Trends Pharmacol. Sci. 16， 57-66； Folkman, 1995， Nature Medicinel, 27-31 )。血管通透性的改变被认为在正常的和病变的生理过程中都起着一定的作用（Cullinan-Bove， et al, 1993 , Endocrinology 133， 829-837； Senger, et al, 1993， Cancer and Metastasis Reviews. 12, 303-324)。 VEGF是正常的和病变的血管发生及血管通透性改变的重要剌激因素（Jakeman, et al, 1993， Endocrinology 133， 848-859； Kolch, et al , 1995， Breast Cancer Research and Treatment, 36, 139-155； Connolly, et al, 1989， J. Biol. Chem. 264, 20017-20024 )₀ 釆用抗体与 VEGF多价螯合而产生的 VEGF拮抗作用能够抑制肿瘤生长（Kim, 1993， Nature 362, 841-844)。

VEGF的表达增加是多种因子刺激的结果，包括原癌基因的活化及低氧血症，因肿瘤病人的不适当的灌注可造成实体瘤的低氧血症， VEGF除促进新生血管生成的作用外，还有促进血管壁的通透性，使肿瘤与邻近组织的营养及代谢交换加速，并降低血管壁的自然屏障而使肿瘤进行远处转移。

VEGF具有酪氨酸激酶活性。 VEGF与其受体——酪氨酸激酶的结合，可激活相应的信号转导通路，促进肿瘤新生血管的形成与增殖。 VEGF与其受体结合后激活的酪氨酸激酶（RTKs)跨细胞原生质膜的生化信号转导通路中发挥着重要的作用，进而影响肿瘤的生长与转移。这些跨膜分子的特征是由通过原生质膜中片段连接胞内酪氨酸激酶区域的胞外配体结合域组成。配体与受体的结合激发了与受体关联的酪氨酸激酶活性，导致受体和其它细胞内分子上的酪氨酸残基磷酸化。这些酪氨酸磷酸化中的变化启动了信号链锁化，产生多种细胞反应。迄今为止已经鉴定出至少 19种不同的按照氨基酸序列同源性定义的 RTK亚科，其中一个亚科目前包括类似 fins的酪氨酸激酶受体 Fit或 Fltl、含激酶***域的受体 KDR (也称为 Flk-1 )和另一种类似 fms的酪氨酸激酶受体 Flt4。已经证明这些相关的 RTKs、 Fit和 KDR中的两个能以高度亲合性结合 VEGF(De Vries, et al, 1992, Science 255， 989-991； Terman, et al, 1992， Boichem. Biophys. Res. Comm. , 1992， 187， 1579-1586)。 VEGF与这些在异种细胞中表达的受体结合与细胞蛋白质的酪氨酸磷酸化水平和钙流的变化有关。

上述研究已经证实， VEGF是实体肿瘤新生血管形成过程中特异的、直接的关键性血管内皮细胞的正性调节因子， VEGF及其受体 KDR/Flk-1通路，已经成为抗肿瘤血管治疗的主要靶点之一。抑制酪氨酸激酶活性，是阻断肿瘤血管形成的重要途径。发明内容：

本发明的目的在于提供一种酪氨酸激酶抑制剂化合物（I) .作为一种内含激酶受体***域—— VEGF相关的内皮细胞受体的一种酪氨酸激酶抑制剂。

本发明的另一个目的在于提供酪氨酸激酶抑制剂的制备方法。

本发明公开了一种涉及化合物（I) 的喹唑啉衍生物，及其制备方法和作为肿瘤生长抑制剂方面的药物应用。

根据本发明提供的化合物（I):

其中的 X表示氢、甲基、 4烷基；优选氢、甲基，最优选氢。其中的 Y表示取代苯 ^Q^" (R₅)_n ， n是取代基数目 1、或 2、或 3、或 4，苯基可以分别被 1〜4个取代基 R₅同时取代， R₅可相同也可不同。 R₅ 表示氢、甲基、三氟甲垸、硝基、氰基、 C₂-₄垸基、 C₂-₄垸氧基、 N-(C₂-4)烷基胺、酶类、羟基、 NN-三氮（d-₄)烷基胺、 d-₄垸基硫、 d— 4烷基磺酰基; R₅优先选择 C₂-₄烷基、硝基、氰基、 C₂— ₄烷氧基、 N-(C₂— ₄)烷基胺、羟基、

₄垸基硫；更优选 C₂-₄垸基、 C₂— ₄垸氧基、 N-(C₂— 4)垸基胺。

其中的 Z表示一 C 、 0、 S、 NH;优选一 C 0、 S,最优选一 c ^。其中的表示甲基、 d— ₄垸基；最优选甲基。

其中的 R₂表示 — ₅烷基 -R₆、 C₂-₆烯基 -R₆、 C₂-₆炔基 - ， Re是 4-哌啶基或取代 4-哌啶基，在烷基、烯基、炔基和 4-哌啶基上可以有 1个或多个炔基、酶类、胺基作为取代基。优选 d-5烷基 - 、 C₂-₆烯基 - ， R₆是 4-哌啶基或取代 4-哌啶基，在烷基、烯基、炔基和 4-哌啶基上可以有 1个或多个炔基、酶类、胺基作为取代基， R₂更优选 -5烷基 -R₆, R6优先选择 4-哌啶基，最优选 4-乙基哌啶基。

其中的 R₃、表示氢、甲基、 — ₄烷基、 C₂-₆烯基、 C₂— ₆炔基、环烷基、异环烷基， .优选氢、甲基、 -4烷基、 C₂-₆烯基。 R₃优先选择 -₄垸基，最优选甲基。优先选择氢。本发明化合物 α) 和它的盐可以由化合物（in) 去保护而得。

其中， R、、 R₃、、 Z、 P²以及 X和 Y分别描述如下- 表示甲基、 C卜 ₄垸基；

R₂表示 — ₅烷基 -R₆、 C₂-₆烯基 - 、 C₂— ₆炔基 -R₆， 1 ₆是4-哌啶基或取代 4-哌啶基，在垸基、烯基、炔基和 4-哌啶基上可以有 1个或多个炔基、酶类、胺基作为取代基；

、表示氢、甲基、 — ₄烷基、 C₂-₆烯基、 C₂-₆炔基、环垸基、异环

Ζ表示 0、 ΝΗ、— 或 S;

P²表示一个或多个保护基团，如氨基甲酸酯等， P²的选择应在有机化学家的知识范围内，在专著 "Protective Groups in Organic Synthesis "(T.W. Greene and R.G Wuts, 2^nd Ed. Wiley 1991 ) 中也有记载； P²可以是叔 -丁氧羧基、叔- 戊氧羧基、环丁氧羧基、丙氧羧基、甲氧羧基、乙氧羧基、异丙氧羧基、烯丙氧羧基或苄氧羧基等，最好是叔 -丁氧羧基。

X表示氢、甲基、 ₄烷基；

Y表示取代苯基→Q ~(R₅)_n， n是 1〜4，苯基可以分别被 1〜4个取代基 R₅同时取代， R₅可相同也可不同。 R₅表示氢、甲基、三氟甲垸、硝基、氰基、 C₂— ₄烷基、 C₂-₄垸氧基、 N-(C₂-₄)垸基胺、酶类、羟基、 NN-三氮（

-4 >烷基胺、 Ci-₄烷基硫、 d-₄垸基磺酰基；

酸的存在有利于这个反应的完成。酸可以是 HCL、 HBr等无机酸，也可以是三氟乙酸、三氟甲磺酸等有机酸。

该反应可在二氯甲烷、三氯甲垸等惰性溶剂和痕量水存在下完成。

10〜100°C (特别是 20〜80°C ) 的温度有利于该反应的完成。

这个反应过程可以产生该发明化合物的自由碱或者它的盐（带有 H-L¹酸，其中 L¹见上文描述）。当希望从盐获得自由碱时，可将它的盐用上文所提到的碱按照传统方法处理。

本发明化合物（I)或它的盐还可以用已知的化学合成方法和步骤合成出来。例如，在公开号为 0520722、 0566226、 0602851和 0635498的欧洲专利和公开号为 W097122596、 W097 I 30035、 W097 I 32856和 W098 1 133541的国际专利申请中阐述的那些方法。这些方法正如下文所述，是这个专利进一步的特征。必需的起始原料可以按照标准有机化学程序合成，这些起始原料的合成方法将在随后的例子中描述（无限制）。另一些必需的起始原料可以按照有机化学手册中描述的类似的方法步骤合成。

本发明的进一步目的在于提供上述化合物用作制备***疾病药物的应用。本发明（一种酪氨酸激酶抑制剂）是一种化学合成物，它特异作用于酪氨酸激酶，抑制其活性，从而抑制 VEGF因子的两种高亲和性受体活性，进而调节 VEGF 的分泌。 VEGF是肿瘤血管组织中主要的血管形成因子，肿瘤 VEGF的表达与某些恶性实体肿瘤并发症有密切联系。临床前研究资料指出，建立的动物模型，以很好的耐受剂量经动物实验后，显示出明显的抗肿瘤效果。通过抑制 VEGF因子的分泌，可以间接抑制肿瘤的生长，达到治疗目的。相对癌症的传统疗法，本发明的治疗具有靶向性好、毒副作用小等优点。

已证实酪氨酸激酶受体（RTKs) 为细胞内重要的信号转导调节剂，这些蛋白质由一个细胞外配体结合部位通过跨膜基元与细胞内酪氨酸激酶位点连接组成或受体的结合形成受体、聚体和激活 RTK位点。这些酶活性催化 V磷酸盐簇由 ATP 转移到受体酶自身的酪氨酸与 KDP相联系的专一性抑制作用来阻止内皮细胞中的 VEGF调节信号。促使实体肿瘤的生长是血管不断生成的结果，血管的生成是所有实体瘤生长和形成转移瘤的必要条件，在此过程中， VEGF起关键行动作用，是 KDR酪氨酸激酶的一种蛋白抑制因子，用来抑制由 VEGF驱动的血管生成，从而抑制肿瘤生长，用来***，具有广泛的临床应用前景。

附图说明：

附图 1 本发明物使大鼠关节骺生长板产生剂量依赖性。

附图 2 本发明物对种植于裸鼠的 PC-3人***肿瘤的抑制作用。

附图 3 本发明化合物对结肠癌细胞 Lovo生长的抑制作用。附图 4 本发明化合物对结肠癌 LoVo肿瘤裸鼠移植模型中肿瘤的抑制作用。下面结合附图和具体实施例详细描述本发明。

具体实施例：

下面是本发明的实施例，所述的实施例用于描述本发明而不是限制本发明。本发明的化合物是一种固体物质，呈白色，粉末状。本化合物可溶于水，偏酸性， pH为 6.4左右。

实施例 1

由化合物（III) 去保护而得化合物（I)和它的盐。

其中：为甲基，为 4-乙基哌啶， R₃为甲基，为 H， Z为一 C ^， P² 为叔 -丁氧羧基， X为 H， Y为甲苯基。

反应在 0.1 moL/L的盐酸溶液中进行，将化合物（III)加入反应液中，反应液中含有占总反应液体积 15%的 0.1 moL/L三氯甲烷及 0.1 %的 H₂0，混合搅拌后在 70°C水浴中加热反应， 20分钟后过滤分离所产生的沉淀，干燥，即为产物。产物呈白色粉末状，可溶于水， pH为 6.4。

实施例 2

由化合物（III) 和化合物（IV)进行合成反应，制备化合物（I) 和它的盐。其中：为乙基，为 4-乙烯基哌啶， R₃为 H，为甲基， X为甲基， Y为乙基苯基， Z为一 C ， P²为环丁氧羧基。

反应在 0.2 moL/L的 HBr溶液中进行，将等摩尔数的化合物（III)和化合物 (IV)加入反应液中，反应液中含有占总反应液体积 8%的 0.05 mo!JL三氯甲垸及 0.05%的 H₂0，混合搅拌后在 50°C水浴中加热反应， 30分钟后过滤分离所产生的沉淀，干燥，即为产物。产物呈白色粉末状，可溶于水， pH为 6.4。

实施例 3

由化合物（III)和化合物（IV)进行合成反应，制备化合物（I)和它的盐。其中：为甲基，为 4-乙炔基哌啶， R₃为乙基，为氢， X为甲基， Y为甲基苯基， Z为 NH， P²为乙氧羧基。

反应在 0.1 moL/L的三氟乙酸溶液中进行，将等摩尔数的化合物（III)和化合物（IV)加入反应液中，反应液中含有占总反应液体积 15 %的 0.05 moL/L二氯甲烷及 0.2%的 ¾0，混合搅拌后在 100°C水浴中加热反应， 20分钟后过滤分离所产生的沉淀，干燥，即为产物。产物呈白色粉末状，可溶于水， pH为 6.4。

实施例 4

由化合物（III)和化合物（IV)进行合成反应，制备化合物（I)和它的盐。其中：为丁基，为 4-乙烯基哌啶，为戊炔基， R4为丙烯基， X为丙基， Y为硝基， Z为 NH， P²为苄氧羧基。

反应在 0.15 moL/L的三氟甲磺酸溶液中进行，将等摩尔数的化合物（III)和化合物（IV)加入反应液中，反应液中含有占总反应液体积 12%的 0.08 moL/L二氯甲烷及 0.1 %的 H₂0，混合搅拌后在 10°C水浴中加热反应， 60分钟后过滤分离所产生的沉淀，干燥，即为产物。产物呈白色粉末状，可溶于水， pH为 6.4。实施例 5

由化合物（ΠΙ)和化合物（IV)进行合成反应，制备化合物（I)和它的盐。其中： 1^为丙基， R₂为 4-乙烯基哌啶， R₃为 H， R4为甲基， X为甲基， Y为乙苯基， Z为 S， P²为烯丙氧羧基。

反应在 0.08 moL/L的 HCL溶液中进行，将等摩尔数的化合物（III)和化合物 (IV)加入反应液中，反应液中含有占总反应液体积 6%的 0.05 mo!JL四氢呋喃及 0.15 %的 H₂0，混合搅拌后在 60°C水浴中加热反应， 30分钟后过滤分离所产生的沉淀，干燥，即为产物。产物呈白色粉末状，可溶于水， pH为 6.4。

实施例 6

由化合物（III)和化合物（IV)进行合成反应，制备化合物（I)和它的盐。其中：为乙基，为 4-乙烯基哌啶， R₃为丁烯基，为甲基， X为甲基， Y为乙苯基， Z为一 _C ， P²为叔 -戊氧羧基。

反应在 0.2 moIJL的 HCL溶液中进行，将等摩尔数的化合物（III)和化合物 (IV)加入反应液中，反应液中含有占总反应液体积 5 %的 0.15 moL/L N，N-二甲乙酰胺及 0.02%的 H₂0，混合搅拌后在 800Ό水浴中加热反应， 30分钟后过滤分离所产生的沉淀，干燥，即为产物。产物呈白色粉末状，可溶于水， pH为 6.4。实施例 7-13是下述化合物的部分药效实验

其中：为甲基，为 4-乙基哌啶， R₃为甲基，为 H， X为 H， Y为甲苯基， z为 _c 。实施例 7

剂量依赖性使大鼠关节骺生长板生长实验。

方法： Alderley Park雌性幼鼠（4-8周龄， wostar-derived),连续 14天，按 0.25 mg/kg/天的剂量经皮下注射本发明物。实验鼠腿骺关节组织结构域利用苏木精和伊红染色，骺生长板结合位点使用形态影响分析测量。结果如附图 1 所示，大鼠的关节骺生长板的过度生长使软骨带剂量依赖性增加。当注射量为 50 或 100 mg/kg/天时，本发明物抑制 VEGF信号的能力和体内抗血管生成作用相一致。实施例 8

对裸鼠人类移植瘤的抑制作用实验。

方法：裸鼠（雄性， 6周齢），接种 PC-3人***肿瘤，待瘤体积达 0.2cm² 时，随机分为 5组，分别为对照组、 100mg/kg/天剂量组、 50mg/kg/天剂量组、 25mg/kg/ 天剂量组、 12.5mg/kg/天剂量组，连续给药 7天，瘤内注射本发明物，观察五周，结果如附图 2所示。

实施例 9

口服本发明物对裸鼠人类移植瘤抑制作用。

方法：按表 1所述，取雄性、 6周龄的裸鼠，在不同部位接种移植瘤，种瘤不同时间后口服给药，测定瘤重，结果如表 1所示。口服本发明物对裸鼠人类移植瘤的抑制作用

口服剂量试验种瘤时间服药抑瘤率统计学差异移植肿瘤 (mg/kg/d) 次数 (d) 次数 (%) (P值）

MDA-mb-231 胸部 100 1 16 25 99 <0篇

50 1 16 25 82 <0.001

25 1 16 25 64 <0.01

12.5 1 16 25 71 <0.001

SKOV-3 卵巢 100 1 18 28 100 <0.001

50 1 18 28 98 <0.001

25 1 18 28 50 NS

12.5 1 18 28 30 NS

LoVo 结肠 100 2 5 14〜！ 7 99〜>扇 <0.001

50 2 5 14〜17 77〜81 <0.01 -0.001

25 2 5 14〜17 55〜60 <0.05〜議 1

12.5 2 5 14〜17 5〜27 NS

A549 肺 100 1 14 25 >励 <0.001

50 1 14 25 >100 <0.001

25 1 14 25 88 <0.001

12.5 1 14 25 64 <0.001

12.5 1 14 21〜30 15〜46 lMS〜<0.05

A431 *** 100 1 14 21 >100 <0扁

50 2 14 ' 2卜 30 83〜>100 <0.001

25 2 14 21〜30 42〜80 <0.05〜<0.001

12.5 2 14 2卜 30 15〜46 NS〜<0.05

NS不显著

实施例 10

抑制 VEGF诱导的人脐胎血管内皮细胞增殖作用。

本发明化合物是抑制 VEGF诱导的人脐胎血管内皮细胞增殖 VEGFR酪氨酸激酶抑制因子，但对非 VEGF诱导的基细胞生长无影响。利用含 ³H标定的胸腺啶啶测评人脐胎血管内皮细胞（HUVEC)在存在或缺少 VEGF、 ECF或 bFGF时的分裂情况。

^S具体实施情况为：将含 ³H的胸腺啶啶（ΙΟμΟ/mL) 与细胞浓度为 1 X 10⁵/mL 的 HUVEC共培养，待 ³H标定的胸腺啶啶整合 HUVEC中，按 10'¹梯度（初始浓度 800m_g/L)稀释本发明化合物，加入含 ³H的胸腺啶啶整合后的 HUVEC中培养，观察在存在或缺少 VEGF、 EGF或 bFGF时 HUVEC的***情况，检测该化合物对 HUVEC的半数抑制剂量。

如表 2所示，本发明化合物强烈且选择性地抑制 VEGF诱导的人脐胎血管内皮细胞的增殖，在其 50倍浓度时对基部内皮细胞的生长仍无影响。本合成物酶分析、（抑制程度强弱排列 KDR〉EGFR>FGFR1 )和细胞组成分析（抑制程度强弱排列 VEGF>EGF>bFGF)，同样证明本化合物的这种抑制作用具选择性。

本发明化合物诱导生长因子能力及抑制基部内皮细胞***

平均数土误差

VEGF EGF FGF Basal

IC₅₀ (MM) 0.06 ±0.02 0.16±0.03 0.8±0.06 >3

试验次数 6 6 5 4

EGF: 内皮生长因子

FGF: 纤维组织母细胞生长因子

VEGF: 血管内皮生长因子

实施例 11

体外抑制肿瘤细胞***实验。

测试本发明物于体外直接抑制肿瘤细胞生长的能力，以弄清其在体内是如大多数人认为的直接抗肿瘤细胞***还是间接抗肿瘤生长（如：是抗血管形成或抑制肿瘤血管渗透力），通过含 ³H的胸腺嘧啶核甘评价细胞***。具体实施方法如下：通过含 ³H的胸腺嘧啶核甘（ΙΟμα/mL)标记肿瘤细胞，即将含 ³H的胸腺嘧啶核甘与肿瘤细胞共培养后，按 10'¹梯度（初始浓度 800mg/L)稀释本发明化合物，加入整合含 ³H的胸腺嘧啶核甘的肿瘤细胞，检测该化合物对肿瘤细胞的半数抑制剂量。 .

如表 3所示，本发明化合物抑制肿瘤细胞生长 IC₅Q范围为 0.8〜1.4mm (表 3)，其浓度为抑制 VEGF诱导的 HUVEC***的浓度的 13〜230倍（表 3)。以上数据表明该化合物体内抗肿瘤作用主要为抑制内皮细胞 VEGF信号因子，而不是直接抗肿瘤细胞***。

本发明化合物对体外肿瘤细胞***的影响（n=3)

肿瘤细胞系起源平均数（士误差） IC₅o (MM)

Calu-6 肺 1·30±0.05

MDA-MB-231 胸 6.00 ± 1.60

SKOV-3 卵巢 5.60±0.10

A431 *** 4.80±0·10

A549 肺 3.80±0·40

PC-3 *** ' 3.70 ± 1.40

LoVo 结肠 0.75 ±0.20

实施例 12

对结肠癌细胞 Lovo生长的抑制作用。

Lovo细胞增殖抑制实验采用 MTT法进行检测：将对数生长期的 Lovo细胞置 96孔培养板中培养， 48 h后实验组加入 0~10(^g/mL的本发明化合物，每个浓度设 6个复孔，对照孔加入相同体积不含本发明化合物的 RPMI 1640培养基，并设空白对照孔 (无细胞，仅含 RPMI 1640培养基）。培养 72h后，每孔加入 MTT(5g/L) 20μ 37°C反应 4h，吸去孔内培养液，再加入 150μ 二甲亚砜（DMSO).，充分溶解后， 570nm下测吸光度（A)值，计算细胞生长抑制率。结果如附图 3所示，本发明化合物对 Lovo细胞有明显的生长抑制作用，且呈现剂量依赖性：药物浓度 12.5ug/mL时，生长抑制率 50% ; 药物浓度 25 g/mL时生长抑制率达 90%以上。实施例 13

对结肠癌 Lovo裸鼠移植瘤模型中肿瘤生长的抑制作用。

建立结肠癌 Lovo裸鼠移植瘤模型，将裸鼠分成两组治疗组： 100mg/kg/day组及 50mg/kg/day组，腹腔注射，连续给药 30天；另设空白对照组，腹腔注射 0.5 %DMSO, 0.2mIJ只，连续给药 30天后处死动物，计算肿瘤体积 T/C比值，以 T/C 比值作为评价指标；肿瘤称重，计算抑瘤率，结果如附图 4所示，本发明化合物可选择性抑制 KDR酪氨酸激酶磷酸化，阻断酪氨酸激酶信号转导通路，因而具有抗肿瘤血管生成作用，对结肠癌 LoVo裸鼠移植瘤模型中肿瘤的生长具有明显抑制作用。 '

Claims

权利要求书

1. 一种化合物（I)及其盐的制备方法，其特征在于化合物（I) (喹唑啉衍生物) 如下列化学式：

其中的 X表示氢、甲基、 Q-₄烷基；

其中的 Y表示取代苯基 (R₅)_n， n是取代基数目 1、或 2、或 3、或 4，苯基可以分别被 1〜4个取代基 R₅同时取代， R₅可相同也可不同。 R₅ 表示氢、甲基、三氟甲垸、硝基、氰基、 C₂-₄垸基、 C₂— ₄烷氧基、 N-(C₂— ₄) 垸基胺、酶类、羟基、 NN-三氮 ₄)烷基胺、 Ci— 4垸基硫、 4烷基磺酰基； . 其中的 Z表示一 C 、 0、 S、 NH;

其中的表示甲基、 — ₄烷基；

其中的 R₂表示 d— ₅烷基 -R₆、 C₂— ₆烯基 -R₆、 C₂— ₆炔基 - ，是 4-哌啶基或取代 4-哌啶基，在垸基、烯基、炔基和 4-哌啶基上可以有 1个或多个炔基、酶类、胺基作为取代基；

其中的 R₃、表示氢、甲基、 — ₄烷基、 C₂-₆烯基、 C₂-₆炔基、环烷基、异环烷基；化合物（I) 由化合物（III) 去保护而得-

其中的 X表示氢、甲基、 d-₄烷基;

其中的 Y表示取代苯基 (R₅)_n， n是 1〜4，苯基可以分别被 1〜

4个取代基 R₅同时取代， R₅可相同也可不同。 R₅表示氢、甲基、三氟甲烷、硝基、氰基、 C₂-₄烷基、 C₂— 4垸氧基、 N-(C₂-4)烷基胺、酶类、羟基、 NN-三氮（ — 4 )烷基胺、 d-₄垸基硫、烷基磺酰基；

其中的 Z表示 Q、 NH、或 S;

其中的表示甲基、 d— ₄烷基；

其中的 R₂表示 d-₅烷基 -R₆、 C₂-₆烯基 -R₆、 C₂-₆炔基 - ， Rg是 4-哌啶基或取代 4-哌啶基，在垸基、烯基、炔基和 4-哌啶基上可以有 1个或多个炔基、酶类、胺基作为取代基；

其中的 R₃、表示氢、甲基、 -4烷基、 C₂— ₆烯基、 C₂-₆炔基、环烷基、异环院基；

其中的 P²表示一个或多个保护基团，如氨基甲酸酯等。

2. 权利要求 1所述的化合物（I)及其盐的制备方法，化合物（III)特征在于- 其中的 X优先选择氢；

其中的 Y为取代苯基，其中优先选择垸基；

其中的 Z优先选择一 c _;

其中的 ^优先选择甲基；

其中的优先选择 ₅垸基

其中的 R₃优先选择 ^垸基；

其中的优先选择氢；

其中的 P²优先选择叔 -丁氧羧基、叔 -戊氧羧基、环丁氧羧基、丙氧羧基、甲氧羧基、乙氧羧基、异丙氧羧基、烯丙氧羧基或苄氧羧基。

3. 权利要求 1所述的化合物（I)及其盐的制备方法，化合物（III)特征在于：其中的 X为氢；

其中的 Y为甲苯基；

其中的 z为一 c ；

其中的甲基；

其中的为 4-乙基哌啶基；

其中的 R₃为甲基；

其中的为氢；

其中的 P²为叔 -丁氧羧基。

4. 按权利要求 1、 2所述的化合物（I)及其盐的制备方法，其特征在于酸的存在有利于这个反应的完成。

5. 按权利要求 1、 2、 5所述的化合物（I)及其盐的制备方法，其特征在于酸可以是 HCL、 HBr等无机酸，也可以是三氟乙酸、三氟甲磺酸等有机酸。

6. 按权利要求 1、 2、 5、 6所述的化合物（I)及其盐的制备方法，其特征在于酸优先选择 HCL。

7. 按权利要求 1、 2所述的化合物（I)及其盐的制备方法，其特征在于该反应在惰性溶剂和痕量水存在时能更好地完成。

8. 按权利要求 1、 2、 8所述的化合物（I)及其盐的制备方法，其特征在于惰性溶剂可以是二氯甲垸、三氯甲垸等。

9. 按权利要求 1、 2、 8、 9所述的化合物（I)及其盐的制备方法，其特征在于惰性溶剂优先选择三氯甲垸。 '

10. 按权利要求 1、 2所述的化合物（I)及其盐的制备方法，其特征在于 10〜100 °C的反应温度有利于该反应的完成。

11. 按权利要求 1、 2、 11所述的化合物（I)及其盐的制备方法，其特征在于反应温度优先选择 20〜80°C。

12. 按权利要求 1、 2所述的化合物（I)及其盐及其制备方法，其特征在于该方法可以产生化合物（I) 的自由碱或者它的盐，并且可以用众所周知的传统方法处理后得到。