CN101005865A - 胶原海绵的制造方法、人造皮肤的制造方法、人造皮肤及细胞组织培养基质 - Google Patents

胶原海绵的制造方法、人造皮肤的制造方法、人造皮肤及细胞组织培养基质 Download PDF

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Abstract

本发明的目的是提供以简易工艺避免最终所得胶原海绵、人造皮肤产生不合格品，达到高合格率的胶原海绵的制造方法和人造皮肤的制造方法，以及具有采用上述胶原海绵的制造方法制造的胶原海绵的人造皮肤和细胞组织培养基质。本发明是采用用乙酸调节了pH值的胶原稀释溶液的胶原海绵的制造方法。

Description

胶原海绵的制造方法、人造皮肤的制造方法、人造皮肤及细胞组织培养基质
技术领域
本发明涉及以简易工艺达到高合格率的胶原海绵的制造方法和人造皮肤的制造方法，以及采用上述胶原海绵的制造方法制造的具有胶原海绵的人造皮肤和细胞组织培养基质。
背景技术
已知，将胶原海绵用作人造皮肤植埋在烫伤等的患处，提供由其多孔质结构产生的适于纤维芽细胞繁殖的大量孔(空间)，具有通过助长纤维芽细胞繁殖从而促进患处治愈的作用。另外，在该胶原海绵上层积着硅酮膜等形成的透水调节层的制品，可抑制水分从患处蒸发或遏止微生物等从患处浸入等，因此可用作优质的人造皮肤。
这类人造皮肤有，例如，专利文献1所揭示的在透水性高分子物质薄膜形成的透水调节层上层积着具有大量微细小孔的胶原海绵层，两层之间具有由生物体吸收性高分子物质纤维材料形成的中间层的人造皮肤。而这类人造皮肤的制造方法有，例如，专利文献2所揭示的在亲水性有机溶剂的水溶液中润湿后，进行冷冻干燥处理的胶原海绵的干燥方法；专利文献3所揭示的在胶原溶液中添加脂溶性有机溶剂，均化、发泡的胶原海绵的制造方法。
迄今为止所公开的胶原海绵的制造方法或具有由透水性高分子物质薄膜形成的透水调节层和胶原海绵层的人造皮肤的制造方法可举出例如非专利文献1所揭示的技术方案。其概略图如图1和图2所示。
图1的胶原海绵的制造方法包括对胶原溶液的pH值、浓度进行调节的胶原稀释溶液调制工序；胶原发泡后进行冷冻干燥的初级胶原海绵的制造工序；用戊二醛(GA)对未交联胶原海绵实施交联的GA交联工序；以及对交联胶原海绵进行冷冻干燥的二级胶原海绵的制造工序。
而图2的人造皮肤的制造方法包括对胶原溶液的pH值、浓度进行调节的胶原稀释溶液调制工序；胶原发泡后进行冷冻干燥的初级胶原海绵的制造工序；在未交联胶原海绵表面层积硅酮等透水调节层的制膜工序；用戊二醛(GA)对未交联胶原海绵实施交联的GA交联工序；以及对交联胶原海绵进行冷冻干燥的二级胶原海绵的制造工序。
然而，如上所述的现有的胶原海绵的制造方法或人造皮肤的制造方法存在着不仅工艺复杂，而且因最终所得的胶原海绵、人造皮肤的胶原海绵层等的表面之上出现裂痕、裂缝，或人造皮肤的透水调节层上产生褶皱，而出现不合格品，导致合格率降低等问题。
专利文献1：日本专利第2987464号公报
专利文献2：日本特公平7-100号公报
专利文献3：日本专利第2997823号公报
非专利文献1：Biomaterials 14,1030(1993)
发明内容
发明要解决的技术问题
本发明鉴于上述现状，目的是提供以简易工艺达到高合格率的胶原海绵的制造方法和人造皮肤的制造方法，以及采用上述胶原海绵的制造方法制造的具有胶原海绵的人造皮肤和细胞组织培养基质。
解决问题的技术方案
本发明涉及采用用乙酸调节了pH值的胶原稀释溶液的胶原海绵的制造方法。
本发明还涉及具有将未交联胶原海绵在戊二醛挥发气体中实施交联的工序的胶原海绵的制造方法。
本发明还涉及具有在胶原稀释溶液中添加戊二醛，冷冻干燥，调制交联胶原海绵的工序的胶原海绵的制造方法。
本发明还涉及至少具有透水性高分子物质薄膜形成的透水调节层和胶原海绵层的人造皮肤的制造方法，它除了对未交联的胶原海绵实施戊二醛交联处理之外，还进行冷冻干燥，调制交联胶原海绵，然后，在上述交联胶原海绵上，层积上述透水调节层。
下面，详细说明本发明。
在本发明的胶原海绵的制造方法中，采用用乙酸调节了pH值的胶原稀释溶液(下文也称为胶原稀释溶液调制方法的改良)。
作为形成胶原海绵的原料的胶原，优选采用胶原末端经过酶处理而消除了抗原性的胶原。这类胶原可广泛采用现有的公知的胶原海绵的原料，例如，可溶于酸的胶原、可溶于中性盐的胶原、可溶于酶的胶原等可溶性胶原；天然的或经过化学修饰的胶原纤维；使可溶胶原变得不溶的再生胶原纤维等。
用作上述胶原海绵的原料的胶原是在将胶原溶解，使用酸将溶液的pH值调节到3左右，以胶原稀释溶液的状态使用。在现有的胶原海绵的制造方法中，调节pH值可使用盐酸。
在与胶原稀释溶液调制方法的改良相关的本发明的胶原海绵的制造方法中，通过使用乙酸调节pH值，就能遏制最终所得的胶原海绵产生裂痕、裂缝等，提高合格率。另外，由于仅使用乙酸会使乙酸用量过多，导致乙酸浓度过高，在此情况下，也可与盐酸等并用。
尽管其原因尚不明了，但发明人认为，在利用乙酸调节pH值的情况下，即使省略发泡步骤直接进行冷冻来实施冷冻干燥，也可以得到孔径均匀的胶原海绵，因此，如果使用乙酸，使所得胶原海绵的孔径均匀，就可以提高机械物性，遏制裂痕、裂缝的产生。并且在如上所述的与胶原稀释溶液调制方法的改良相关的本发明的胶原海绵的制造方法中，即使省略发泡步骤也能得到均匀孔径的胶原海绵，因此可简化工艺。
图3为与胶原稀释溶液调制方法的改良相关的本发明的胶原海绵的制造方法的一例的概略图。在图3中，除了与胶原稀释溶液调制方法的改良相关的特征部分之外，也记载了现有的胶原海绵的制造方法，但根据需要也可以组合本说明书中所述的其它本发明的胶原海绵的制造方法。
本发明的胶原海绵的制造方法具有将未交联的胶原海绵在戊二醛挥发气体中进行交联的工序(下文也称为气相交联法的改良)。在现有的胶原海绵的制造方法中，将未交联胶原海绵浸渍在戊二醛水溶液中，放置一段时间，以实施GA交联。在此情况下，由于通常戊二醛毒性较高，因此，为用于临床用途，就需要充分除去残留的戊二醛。然而，从高亲水性胶原海绵中完全清除戊二醛比较困难，在现有技术中，采用的是使用蒸馏水等进行多次洗涤的方案，然而，该方案不仅操作复杂，而且在水洗时会损坏质地软弱的胶原海绵，成为在最终所得的胶原海绵上产生裂痕、裂缝等的成因。
本发明人等注意到戊二醛具有挥发性，并发现：通过在醛已挥发的戊二醛挥发气体中实施胶原海绵的交联，或通过实施真空加热处理，就可以省略以除去残留的戊二醛为目的的洗涤操作，从而可以遏制因胶原海绵的裂痕、裂缝等导致的合格率的降低，从而完成本发明。
对上述在戊二醛挥发气体中实施胶原海绵交联的方法并无特别限定，可举出例如，在密闭容器内放置戊二醛水溶液和呈不与该戊二醛水溶液直接接触状态的未交联胶原海绵，并放置一定时间等方法。在此情况下，上述戊二醛水溶液浓度的优选下限为1mM，优选上限为2.5M。当低于1mM时，气相中的戊二醛浓度低，有可能不能实现交联，或者需要较长时间才能实现交联；而当高于2.5M时，则有可能很难对溶液进行处理。
另外，根据与对气相交联法的改良相关的本发明的胶原海绵的制造方法，可直接用戊二醛将干燥状态的胶原海绵交联，因此无需如现有的胶原海绵的制造方法那样，在液相中实施戊二醛交联之后再次进行冷冻干燥以形成二级胶原海绵，因此可大幅度简化工艺。
图4为与对气相交联法的改良相关的本发明的胶原海绵的制造方法的一例概略图。在图4中，除了与对气相交联法的改良相关的特征部分之外，还记载了现有的胶原海绵的制造方法，但根据需要也可以组合本说明书中所述的其它本发明的胶原海绵的制造方法。
本发明的胶原海绵的制造方法具有向胶原稀释溶液中添加戊二醛，冷冻干燥，调制交联胶原海绵的工序(下文也称为溶液交联法的改良)。
如图1所示，在现有的胶原海绵的制造方法中，在初级胶原海绵上层积透水调节层后，实施戊二醛交联。然而在该方法中，需要如上所述的复杂的除去残留戊二醛的操作，且因该操作会导致合格率降低。
本发明人等深入研究后，结果发现：在将胶原稀释溶液冷冻，实施真空干燥，以制作胶原海绵时，通过预先向上述胶原稀释溶液添加戊二醛，得到交联的胶原海绵，从而完成本发明。
一般认为，在现有技术中，由于水溶液中的胶原浓度低，因此即使直接向胶原稀释溶液中添加戊二醛，也不会形成交联。然而，在对添加了戊二醛的胶原稀释溶液实施冷冻干燥的情况下，由于在冷冻干燥过程中，溶液浓缩提高了胶原浓度，因此形成了交联。且由于戊二醛具有挥发性，在冷冻干燥过程中，有气体挥发，因此，也可避免所得交联胶原体海绵中残留戊二醛。另外，如现有的胶原海绵的制造方法那样，一旦制得的未交联胶原海绵在液相中经戊二醛交联后，无需再次冷冻干燥制成二级胶原海绵，从而能大幅度简化工艺。
另外，尽管原因未定，但还是可知，利用与对溶液交联法的改良相关的本发明的胶原海绵的制造方法得到的胶原海绵比利用现有方法制造的胶原海绵的吸水性优良，且细胞附着性也很优良。因此，使用由与对溶液交联法的改良相关的本发明胶原海绵的制造方法制造的胶原海绵，不仅纤维芽细胞浸入性好，可以有效促进治愈，而且在皮肤、骨骼、血管、神经等的再生医疗等方面，在将该胶原海绵用作细胞播种的立足点的情况下，因其在细胞附着方面具有优异性能，因此效能也非常好。
在与对溶液交联法的改良相关的本发明胶原海绵的制造方法中，添加到胶原稀释溶液中的戊二醛浓度的优选下限为0.01mM，优选上限为1M。当低于0.01mM时，有时不能形成充分的交联；而当高于1M时，又会因交联程度过高，使胶原海绵层的亲水性减弱，纤维芽细胞的浸入性降低，延缓治愈。
图5为与对溶液交联法的改良相关的本发明胶原海绵的制造方法的一例概略图。在图5中，除了与对溶液交联法的改良相关的特征部分之外，还记载了现有的胶原海绵的制造方法，但根据需要也可以组合本说明书中所述的其它本发明胶原海绵的制造方法。
通过本发明的胶原海绵的制造方法制造的胶原海绵是具有大量微细小孔的制品，其孔径的优选下限为5μm，优选上限为1000μm。当低于5μm时，有时纤维芽细胞难以浸入，延缓了治愈；而当高于1000μm时，不是胶原海绵强度不足，就是反而会花费较多时间才能治愈。更优选下限为50μm，更优选上限为130μm。
采用本发明的胶原海绵的制造方法制造的胶原海绵可适用作播种细胞构建组织的、用于所谓再生医疗的细胞组织培养基质。
使用根据本发明的胶原海绵的制造方法制造的胶原海绵形成的细胞组织培养基质也是本发明内容之一。
本发明的细胞组织培养基质优选为还具有出于增强强度或调整需再生组织的形状目的的增强材料。
对上述增强材料没有特别限定，可举出例如生物体吸收性高分子物质的纤维材料等。
上述生物体吸收性高分子物质可举出例如乙醇酸、乳酸、二氧杂环己酮(dioxanone)、己内酯单聚物或共聚物等。
而上述纤维材料包括将例如高分子物质中的一种或两种以上，例如纺丝的丝线等编成、织成、交错编织成、制成无纺布等或者将碎料、短纤维材料制成片料而得到的编织物、纺织品、无纺布及其它片状纤维材料。
对利用上述增强材料进行增强的方法没有特别限定，既可以例如在胶原海绵其中的一面或两面上进行层积，也可以在制造胶原海绵时，使得增强材料形成于胶原海绵中。
利用本发明的胶原海绵的制造方法制造的胶原海绵通过层积透水性高分子物质薄膜形成的透水调节层，而可适用于人造皮肤。
具有本发明的胶原海绵的制造方法制造的胶原海绵和透水性高分子物质薄膜形成的透水调节层的人造皮肤也是本发明内容之一。
上述透水调节层可举出例如硅酮、聚氨酯、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯等透水性高分子物质的薄膜形成的透水调节层。其中还由于成膜性、生物体适应性优异，而优选硅酮。
上述透水调节层的透水性优选下限为0.1mg/hr·cm2、优选上限为2mg/hr·cm2。当低于0.1mg/hr·cm2时，有时会使水分滞留在患处，导致延迟治愈；而当高于2mg/hr·cm2时，有时又会使水分从患处蒸发过多，导致患者负担增大。更优选下限为0.9mg/hr·cm2、更优选上限为1.7mg/hr·cm2。
上述透水调节层的厚度可酌情调节至能实现每种材质的上述透水性的厚度，除此无特别限定。例如，在硅酮材质的情况下，优选下限为12.5μm、优选上限为200μm；更优选下限为25μm、更优选上限为100μm，进一步优选上限为50μm。
上述人造皮肤在其中的一面或上述透水调节层与胶原海绵层的中间，可具有由用作增强材料的生物体吸收性高分子物质的纤维材料形成的中间层。
上述生物体吸收性高分子物质可举出例如乙醇酸、乳酸、二氧杂环己酮、己内酯等的单聚物或共聚物等。
而上述纤维材料包括将例如高分子物质中的一种或两种以上，例如纺丝的丝线等编成、织成、交编织成、制成无纺布等或将碎料、短纤维材料制成片料而得到的编物、织物、无纺布及其它片状纤维材料。
本发明涉及至少具有透水性高分子物质薄膜形成的透水调节层和胶原海绵层的人造皮肤的制造方法。
作为形成胶原海绵层的原料的胶原，优选采用胶原末端经过酶处理而消除了抗原性的胶原。这类胶原可广泛采用现有的公知的胶原海绵的原料，例如，可溶于酸的胶原、可溶于中性盐的胶原、可溶于酶的胶原等可溶性胶原；天然的或经过化学修饰的胶原纤维；使可溶胶原变得不溶的再生胶原纤维等。
上述胶原海绵层具有大量的微细小孔，其孔径的优选下限为5μm，优选上限为1000μm。当低于5μm时，有时纤维芽细胞难以浸入而延缓治愈；而当高于1000μm时，不是胶原海绵强度不足，就是反而会花费较多时间才能治愈。更优选下限为50μm，更优选上限为130μm。
上述胶原海绵层的厚度优选为1mm以上。当低于1mm时，不能适用于重度烧伤。更优选下限为2mm，优选上限为4mm。
上述透水调节层可使用与构成上述本发明的人造皮肤的透水调节层同样的制品，其透水性、厚度也与构成本发明的人造皮肤的透水调节层一样。
另外，上述人造皮肤在其中的一面或上述透水调节层与胶原海绵层的中间，可具有由用作增强材料的生物体吸收性高分子物质的纤维材料形成的中间层。
上述生物体吸收性高分子物质可使用与用于上述本发明的细胞组织培养基质的生物体吸收性高分子物质同样的物质。
这类人造皮肤可按照图2所示的现有人造皮肤的制造方法制造，本发明人等深入研究后，结果发现，通过制造方法的改良，能遏制因胶原层的裂痕、裂缝，或透水调节层的褶皱导致产生不合格品，实现高合格率，且还可以简化工艺。
在本发明的人造皮肤的制造方法中，对未交联胶原海绵实施戊二醛交联处理，冷冻干燥，调制交联胶原海绵，然后，在交联胶原海绵之上，层积透水调节层(下文也称为工艺改良)。
如图2所示，在现有的人造皮肤的制造方法中，实施制膜工序后，实施GA交联工序，进行冷冻干燥，制造二级胶原海绵。这是为了通过在未交联胶原海绵上预先制成高强度透水调节层薄膜，避免在GA交联中或GA交联后的洗涤中，导致质地软弱的胶原海绵的破损。
但是，本发明人等在研究后得知，由于从GA交联经洗涤、冷冻干燥的工序，引起胶原海绵的收缩，因此，一旦预先制成膜，将胶原海绵固定，则胶原海绵不能承受这种收缩，会使海绵产生裂痕、裂缝，或使透水调节层产生褶皱。
在与工艺改良相关的本发明的人造皮肤的制造方法中，对未实施制膜的未交联胶原海绵实施戊二醛交联，冷冻干燥，然后层积透水调节层，由于这样就使胶原海绵收缩时未被固定，因此可以遏制因海绵的收缩导致的海绵产生裂痕、裂缝，或透水调节层产生褶皱的情况。
图6为与工艺改良相关的本发明的人造皮肤制造方法的一例概略图。在图6中，除了与工艺改良相关的特征部分之外，还记载了现有的人造皮肤的制造方法，但根据需要也可以组合本说明书中所述的其它本发明的人造皮肤制造方法。
发明效果
根据本发明，可提供以简易工艺达到高合格率的胶原海绵的制造方法和人造皮肤的制造方法，以及具有采用上述胶原海绵的制造方法制造的胶原海绵的人造皮肤和细胞组织培养基质。
附图说明
图1为现有胶原海绵的制造方法的一例概略图。
图2为现有人造皮肤制造方法的一例概略图。
图3为与胶原稀释溶液调制方法的改良相关的本发明胶原海绵的制造方法的一例概略图。
图4为与气相交联法的改良相关的本发明的胶原海绵的制造方法的一例概略图。
图5为与溶液交联法的改良相关的本发明胶原海绵的制造方法的一例概略图。
图6为与工艺改良相关的本发明的人造皮肤制造方法的一例概略图。
具体实施方式
下面给出实施例，进一步具体说明本发明，但本发明并不仅限于下述实施例。
实施例1
以胶原溶液(Nitta Gelatin公司制，“Atelo-collagen”)为原料，使用纯化水、5N的乙酸以及1N的盐酸，调制成浓度3mg/mL、pH3.0的胶原稀释溶液。
使所得胶原稀释溶液50g流入冷冻干燥用不锈钢制框体(11cm×8.5cm)内。将不锈钢制框体冷却到-40℃，冷冻胶原发泡液，在真空减压下(0.01mmHg)，在30℃实施24小时的冷冻干燥。再于真空减压下(0.01mmHg)，在105℃实施24小时的加热干燥，得到初级胶原海绵。
然后，在0.2重量％的戊二醛/乙酸溶液中，在5℃实施24小时的交联反应。用离子交换水充分洗涤所得交联胶原海绵，然后用15％乙醇水溶液置换。
然后，在-110℃下冷冻，在真空减压下(0.01mmHg)，在30℃实施24小时的冷冻干燥。得到胶原海绵。
在所得胶原海绵上粘贴厚100μm的硅酮膜，干燥后，在胶原海绵层上，层积硅酮膜，得到人造皮肤。
实施例2
以胶原溶液(Nitta Gelatin公司制，“Atelo-collagen”)为原料，使用纯化水、5N的乙酸以及1N的盐酸，调制成浓度3mg/mL、pH3.0的胶原稀释溶液。
向所得胶原稀释溶液50g中添加氯仿0.5g。使所得乳状发泡液流入冷冻干燥用不锈钢制框体(11cm×8.5cm)内。将不锈钢制框体冷却到-40℃，冷冻胶原发泡液，在真空减压下(0.01 mmHg)，在30℃实施24小时的冷冻干燥，得到胶原海绵。
将所得胶原海绵加入体积8000mL的密闭容器中，另行加入调制完毕的2重量％的戊二醛/乙酸溶液50mL，且避免该溶液与胶原海绵直接接触。将该密闭容器在40℃下静置3小时，使胶原海绵交联，得到交联胶原海绵。
再于真空减压下(0.01mmHg)，在105℃对所得交联胶原海绵实施24小时的加热干燥，再粘贴厚100μm的硅酮膜，得到胶原海绵层上层积了硅酮膜的人造皮肤。
实施例3
以胶原溶液(Nitta Gelatin公司制，“Atelo-collagen”)为原料，使用纯化水、5N的乙酸以及1N的盐酸，调制到胶原浓度3mg/mL、pH3.0后，再添加戊二醛，使戊二醛的最终浓度为0.05mM。
使所得含有戊二醛的胶原稀释溶液50g流入冷冻干燥用不锈钢制框体(11cm×8.5cm)内。将不锈钢制框体冷却到-40℃，冷冻胶原发泡液，在真空减压下(0.01mmHg)，在30℃实施24小时的冷冻干燥。再于真空减压下(0.01mmHg)，在105℃实施24小时的加热干燥，得到交联胶原海绵。
在所得交联胶原海绵上粘贴厚100μm的硅酮膜，干燥后，得到了在胶原海绵层上层积有硅酮膜的人造皮肤。
实施例4
以胶原溶液(Nitta Gelatin公司制，“Atelo-collagen”)为原料，使用纯化水以及1N的盐酸，调制成浓度3mg/mL、pH 3.0的胶原稀释溶液。
向所得胶原稀释溶液50g中添加氯仿0.5g，使用均化器(日本精机公司制，“EXCEL AUTO HOMOGENIZER”)，以6000rpm的转速进行1分钟的均化。使所得发泡液流入冷冻干燥用不锈钢制框体(11cm×8.5cm)内。将不锈钢制框体冷却到-40℃，冷冻胶原发泡液，在真空减压下(0.01mmHg)，在30℃实施24小时的冷冻干燥。再于真空减压下(0.01mmHg)，在105℃实施24小时的加热干燥，得到初级胶原海绵。
然后，将所得初级胶原海绵浸渍在0.2重量％的戊二醛/乙酸溶液中，在5℃下实施24小时的交联反应。用离子交换水充分洗涤所得交联胶原海绵，然后用15％乙醇水溶液置换。
在-110℃下冷冻，在真空减压下(0.01mmHg)，在30℃实施24小时的冷冻干燥，制作二级胶原海绵，在该二级胶原海绵上粘贴厚100μm的硅酮膜，在胶原海绵层上层积硅酮膜，干燥后得到人造皮肤。
比较例1
以胶原溶液(Nitta Gelatin公司制，“Atelo-collagen”)为原料，使用纯化水和1N的盐酸，调制成浓度3mg/mL、pH3.0的胶原稀释溶液。
向所得胶原稀释溶液50g中添加氯仿0.5g，使用均化器(日本精机公司制，“EXCEL AUTO HOMOGENIZER”)，以6000rpm的转速进行1分钟的均化。使所得乳状发泡液流入冷冻干燥用不锈钢制框体(11cm×8.5cm)内。将不锈钢制框体冷却到-40℃，冷冻胶原发泡液，在真空减压下(0.01mmHg)，在30℃实施24小时的冷冻干燥。再于真空减压下(0.01mmHg)，在105℃实施24小时的加热干燥，得到初级胶原海绵。在所得初级胶原海绵上粘贴厚100μm的硅酮膜并干燥。
然后，在0.2重量％的戊二醛/乙酸溶液中，在5℃下实施24小时的交联反应。用离子交换水充分洗涤所得交联胶原海绵，然后用15％乙醇水溶液置换。
在-80℃下冷冻，在真空减压下(0.01mmHg)，在30℃实施24小时的冷冻干燥，得到在胶原海绵层上层积有硅酮膜的人造皮肤。
评价
肉眼观察按照实施例1～4和比较例1制作的人造皮肤各100张的胶原海绵层是否存在裂痕、硅酮膜是否有剥落、以及硅酮膜是否起褶，刨除不合格品之后，求取合格率。予以说明，在计算合格率时，将重复出现胶原海绵层裂痕、硅酮膜剥落、以及硅酮膜起褶的人造皮肤计为1张。
表1
胶原海绵层裂痕     硅酮层剥落     硅酮层起褶   合格率(％)
实施例1 5     2     1   85
实施例2 1     0     0   93
实施例3 1     0     0   97
实施例4 6     0     0   85
比较例1 15     8     3   70
产业实用性
根据本发明，可提供以简易工艺达到高合格率的胶原海绵的制造方法和人造皮肤的制造方法，以及具有采用上述胶原海绵的制造方法制造的胶原海绵的人造皮肤和细胞组织培养基质。

Claims (7)

1.胶原海绵的制造方法，其特征在于，采用用乙酸调节了pH的胶原稀释溶液。
2.胶原海绵的制造方法，其特征在于，具有将未交联胶原海绵在戊二醛挥发气体中进行交联的工序。
3.胶原海绵的制造方法，其特征在于，具有在胶原稀释溶液中添加戊二醛，冷冻干燥，调制交联胶原海绵的工序。
4.人造皮肤，其特征在于，具有如权利要求1、2或3所述的胶原海绵的制造方法制造的胶原海绵和透水性高分子物质薄膜形成的透水调节层。
5.细胞组织培养基质，其特征在于，使用如权利要求1、2或3所述的胶原海绵的制造方法制造的胶原海绵制造而成。
6.如权利要求5所述的细胞组织培养基质，其特征在于，具有增强材料。
7.人造皮肤的制造方法，用于制造至少具有透水性高分子物质薄膜形成的透水调节层和胶原海绵层的人造皮肤，其特征在于，对未交联的胶原海绵实施戊二醛交联处理，进行冷冻干燥，调制交联胶原海绵，然后，在上述交联胶原海绵上层积上述透水调节层。
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