CN100448434C - 一种纯中药护肝保健食品 - Google Patents

Abstract

本发明涉及“一种纯中药护肝保健食品”，特征在于其有效成分中含有下列组分的提取物：姜黄8-15份，丹参3-8份，决明子3-8份和青皮2-5份。本产品是以姜黄、丹参、决明子、青皮为主要原料制成得保健食品，具有对化学性肝损伤有辅助保护作用的功能。动物实验证明，本发明保健食品能降低酒精性肝损伤模型大鼠的肝组织中的甘油三酯(TG)含量，提高其肝组织中的还原型谷胱甘肽(GSH)含量，减轻其肝组织的脂肪变性过程度，而且对大鼠的体重无明显影响。由此可见，该样品具有对酒精性肝损伤有辅助保护功能。

Description

一种纯中药护肝保健食品

技术领域

本发明涉及中药领域，特别是涉及一种护肝用中药保健食品。

背景技术

肝脏功能十分复杂、多样，在机体的物质代谢中占有极其重要的地位。化学性肝损伤，顾名思义，是由化学性肝毒性物质所造成的肝损伤。这些化学物质包括酒精、环境中的化学毒物及某些药物。作为人体的重要解毒器官的肝脏，化学物质可通过胃肠道门静脉或体循环进入肝脏进行转化，因此肝脏容易受到化学物中的毒性物质损害。大自然和人类工业生产过程中均存在一些对肝脏有毒性的物质，称为″亲肝毒物″，这些毒物在人群中普遍易感，潜伏期短，病变的过程与感染的剂量直接相关，可引起肝脏不同程度的肝细胞坏死、脂肪变形、肝硬化和肝癌。

我国是肝病大国，近年来病毒性肝炎、脂肪肝、酒精性肝病、药物性肝损害及肝癌等肝病已成为威胁人类健康的主要疾病之一。且由于生活习惯及社会风俗问题导致有些人长期饮酒甚至饮酒过量，酒精已成为仅次于病毒性肝炎的肝脏第二大杀手。有调查显示，我国一般人群的饮酒率为59.5％，男性嗜酒人群酒精肝患病率为21.77％，女性嗜酒人群为1.26％；重度饮酒者中80％以上有一定程度的脂肪肝，10％～35％可发展成酒精性肝炎，10％～20％将发展成肝硬化，且酒精性肝硬化预后较差，5年生存率约为23～50％。调查还指出，我国酒精性肝病在所有肝病中的比例有逐年增加趋势，但目前对酒精性肝病尚无特效治疗药物。

西医对酒精性肝病的研究大多集中在具体的发病机制上，而其发病机制尚不清楚，所以，目前尚无确切有效的治疗方法和药物。西医理论认为由于长期饮酒会导致原发性和继发性营养不良，患酒精性肝病的患者体内一般缺乏多种维生素，饮酒导致体内蛋氨酸代谢异常，使其转变成S-腺苷甲硫氨酸(SAME)减少，还影响肝脏谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)的合成，从而引起肝脏细胞膜受损；饮酒还导致磷脂和磷脂酰胆碱减少，最终引起肝脏纤维化和肝硬化的发生。依照此发病机制研制出一些相关治疗药物，如凯西莱(通用名硫普罗宁)、甘利欣(通用名甘草酸二铵)、易善复(又名肝得健，通用名多烯磷脂酰胆碱)、进口产品思美泰(通用名腺苷蛋氨酸)及阿拓莫兰(通用名谷胱甘肽)等，以上药物多为抗内毒素、抗氧化剂、糖皮质激素、对抗和改善乙醇代谢、以及其他如磷脂、己酮可可碱、秋水仙碱、S-腺苷蛋氨酸、熊去氧胆酸类药物，有些药物存在疗效低或不确定、不良反应大的缺点，有些药物还处于试验阶段，没有病理学的多年临床研究，其确切疗效还有待探讨。综上而论，以西医手段治疗酒精性肝病虽有一定疗效，但因其发病机制不清，治疗手段仅处于指标而非治本阶段。

虽然酒精性肝损伤的发病率持逐年上升趋势，人们逐渐认识到过量饮酒会对身体造成一定危害，但由于大多数人认为酒精引起的肝损伤或因此引起的轻、中度脂肪肝不属于严重疾病，也不影响日常生活，一般不用到医院专门治疗。然而随着饮酒人数的不断递增，人们希望减轻饮酒带来的负面影响也越来越迫切，这就造成了解酒、保肝、护肝类食品、保健食品市场的逐渐升温。一般欧美、日本畅销的解酒剂多为添加***、止痛剂、维生素和矿物质等类型的产品，只能暂时缓解宿醉引起的症状，但对于酒精引起的肝损伤并无确切疗效。从国内的***和药监局网站获悉，目前申报成功的护肝类保健食品为200余种(包括缓解化学性肝损伤)，但真正上市销售的产品寥寥无几，在市场上更多的为疗效不确定，质量无保证，未经过***、药监局鉴定的三无产品。而在市场上销售的正规产品，剂型比较单一，多为袋泡茶、冲剂、口服液等剂型，无论在产品的口感上，服用方法上还是产品的保存、携带上都无法满足广大消费者的需求。就目前来看，现今的缓解酒精性肝损伤的保健食品的种类与日益增长的需求人群之间存在着巨大的差距，因此，此类保健食品市场还有着相当大的发展空间。

发明内容

本发明针对上述领域的缺陷，提供一种纯中药护肝保健食品，对化学性肝损伤具有很好的辅助保护作用。

一种纯中药护肝保健食品，特征在于其有效成分中含有下列组分的提取物为：

姜黄8-15份，丹参3-8份，决明子3-8份和青皮2-5份。

优选姜黄10-15份，丹参4-7份，决明子4-7份和青皮2-3份。

更优选：姜黄12份，丹参6份，决明子6份和青皮3份。

所述保健食品的剂型为胶囊。

上述保健食品的制备方法，其特征在于姜黄用醇提取，丹参、决明子和青皮混合后用水提取，合并提取液浓缩制得浸膏，真空干燥后粉碎装胶囊。

所述醇为乙醇。

所述浸膏的相对密度为1.30。

所述真空干燥温度为60-80℃。

中医学认为，化学性肝损害的主要病机是外邪为患，导致脾虚肝郁，肝失舒泻，气侈血瘀，最终导致肝、脾、肾等脏腑功能失常和衰竭。

本产品是以姜黄、丹参、决明子、青皮为主要原料制成得保健食品，具有对化学性肝损伤有辅助保护作用的功能。

姜黄：姜黄为姜科植物Curcuma longa L.的干燥根茎，主产于日本、美国、非洲、中国等地。***世界卫生组织/食品药品管理局批准姜黄为天然食品添加剂。中医认为姜黄性味辛、苦，温。归脾、肝经。功能破血行气、通经止痛。用于胸胁刺痛，闭经，徵瘕等。

现代药理学研究表明，姜黄主要含精油(4.2％-14％)、脂肪油(4.4％-12.7％)等挥发油及姜黄素(curcumin，difesuloylmethane)类成分，此外还有树脂类、糖类、甾醇类、脂肪酸、多肽类、生物碱及微量元素，其中类姜黄素类(curcurninoids)是二苯基炔类成分，有酚性和非酚性成分，现已分离并鉴定出20多个类姜黄素化合物。姜黄的黄色物质为略带酸性的酚性物质，是姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素的混合体，称之为姜黄色素，是姜黄发挥药理作用的主要成分，而姜黄素是其中最重要的活性成分。姜黄素溶于乙醇、碱、醋酸、丙酮和氯仿等有机溶剂，不溶于水，其分子式为C₂₁H₂₀O₆，其主链为不饱和脂族及芳香族基团。

研究表明，姜黄具有抗炎、抗氧化、保肝、对抗纤维化、抗癌等作用。试验证明，姜黄和姜黄素在体内和体外对各种毒物如四氯化碳、黄曲霉素B1、对乙酰氨基酚、铁和环磷酰胺诱导的肝损伤都有保护作用，可抑制黄曲霉素B1诱导菌株thyphimurium沙门菌TA98和TA100的突变，抑制率超过80％。此外，姜黄素可显著降低酒精加多不饱和脂肪酸喂饲动物的血中碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转移酶及组织中胆固醇、TG和游离脂肪酸的含量，使肝和肾组织中的磷脂显著降低，与组织病理学结果一致。因此姜黄素具有防止实验性脂肪肝的作用。一般认为姜黄素的保肝作用是通过抗脂质过氧化而间接实现的。

在四氯化碳诱导的肝损害大鼠中，姜黄素可减少肝脏胶原沉积、α-平滑肌肌动蛋白阳性染色面积以及I型胶原mRNA的表达；在体外，姜黄素可减少星形细胞DNA的合成，下调α-平滑肌肌动蛋白、I型胶原蛋白及α1链mRNA的表达。无论在体内还是体外均提示姜黄素可能是一种抗纤维化制剂。

第一军医大学的刘永刚等人的研究结果证明，姜黄素对3种试验动物模型的肝损伤具有明显的保护作用。姜黄素可显著降低肝损伤所致血清ALT，AST，NO的升高，降低损伤肝组织MDA的含量。刘永刚的另一项试验证明，姜黄素能使升高的HA、LN、肝Hyp水平显著降低，且病理观察提示姜黄可以明显抑制胶原纤维的增生，说明姜黄素确能抑制肝脏胶原纤维的合成和沉降，具有抗肝纤维化的作用，其机制可能与抑制NO、MDA的产生有关。

丹参：丹参是唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge的干燥根及根茎，具有活血祛淤、安神宁心、止痛等功效，至今，已经从丹参中分离出30多种化学成份，丹参素、丹参酮是其主要药理成份。现代药理研究表明，丹参是天然的抗氧化剂，丹参具有清除毒性自由基、抑制正常及损伤肝细胞脂质过氧化的作用。丹参素、丹参酮对四氯化碳和D-氨基半乳糖诱导的小鼠急性肝损伤和四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化有保护作用。

南京医科大学的李菁等的试验证明，丹参素对能使正常肝细胞增殖，能消除活性氧自由基，增强肝细胞SOD活力，抑制膜的脂质过氧化反应，减轻肝细胞变性坏死。白求恩医科大学的叶红军等人的研究显示，丹参减轻肝细胞坏死、脂肪变性、促进肝细胞再生，改善肝脾血液循环及减轻其淤血及缺血状态作用均优于辅酶Q₁₀。辽宁中医学院附属医院的吴百灵的研究表明，丹参可抑制ALT、AST酶活性增高，其作用是因为丹参具有显著的抗脂质过氧化作用。山西医科大学郑晓宾等人的研究证明了丹参防治实验性肝损伤的途径之一可能是减少了TNF-α的释放，降低了TNF-α的毒性而发挥作用。南京铁道医学院附属医院的刘怡晟等人研究表明，丹参对CCl₄所致肝损伤有明显的保护作用。丹参能明显降低血清ALT、血清和肝匀浆MDA以及肝细胞的钙含量，也能减少血清及肝组织SOD活力的下降，光镜和电镜下肝组织病理病变明显减轻，同时发现丹参能明显降低血清TNF-α，表明丹参的作用机制是通过减轻肝细胞膜脂质过氧化，保持自由基清除能力，减轻钙超载，同时抑制TNF-α的释放，加速其灭活。

决明子：决明子为豆科植物决明Cassia obtusifolia L.或小决明C.tora L.的干燥成熟种子，始载于《神农本草经》，性味甘、苦、成、微寒，归肝、大肠经，具有清肝明目、润肠通便的作用。现代研究证明决明子具有降血压、降血脂、保肝及抑菌等活性。决明子主要含大黄素(Emodin)、大黄酸Rhein)、大黄酚(chrysophanol)、芦荟大黄素(Aloe-emodin)、大黄素葡萄糖甙(Emodin-b-monogl-ueoside)、大黄素蒽酮(Emodinanthrone)、大黄素甲醚(phy-Sseion)、决明子素(obtusifolin)，以及新月孢子菌玫瑰色素、决明松、决明内酯，尚含VA，还有糖类、蛋白质、脂肪、氨基酸、β胡萝卜素和人体必须的微量元素Fe、Zn、Mn、Cu等。现代药理研究表明，决明子具有保肝、抑菌、降压、通便、降血脂的作用。

研究表明，决明子具有保肝作用。据报道口服670mg/kg决明子水提取物对四氯化碳中毒的小鼠肝脏有弱的解毒作用。1989年德国学考证实小决明中含大黄酚为母核的一个三葡萄糖甙和一个四葡萄糖甙具有弱的保肝作用。同年该学者进一步证明决明子的抗肝毒的主要成分为萘并吡喃酮类成分，其中决明甙，红镰霉素-6-β-D-龙胆二糖甙和红镶男素-6-α-芹菜糖基-(1-6)-O-β-D-葡衙糖甙等萘并γ-吡喃酮甙具有显著的对抗半乳糖胺对肝脏损伤作用。

青皮：亦称青桔皮或青柑皮，为芸香科柑橘属植物橘Citrus reticulata Blanco及其栽培变种的干燥幼果或末成熟果实的果皮。青皮药材包括个青皮、四花青皮。除用桔类的未成熟果实外，其同属植物甜橙C.sinensis Osbeck、香橼C.wilsonii Tanaka以及茶枝柑C.chachiensis Hort等柑类未成熟果实亦作青皮用。青皮性味苦、辛，微温，归肝、胆、胃经。有舒肝破气、消积化滞之功效。中医用煎剂内服治疗胸肋胀痛、胃部痞满、疝气、食积、乳肿、乳核等症。现代药理研究表明，青皮的有效成分为左旋辛弗林乙酸盐，天门冬氨酸等多种氨基酸、挥发油和黄酮类化合物。对心血管、消化、呼吸***等有广泛的药理作用，使用安全有效。

研究表明，青皮挥发油对胃肠道有温和的刺激作用，能够促进消化液分泌和排除肠内气体，主要表现为调整胃肠功能的作用；青皮还有利胆作用，青皮注射液能显著增加大鼠的胆汁排出并能舒张豚鼠离体胆囊平滑肌，对抗氨甲酰胆碱引起的胆囊收缩。青皮水煎剂对正常及四氯化碳肝损伤大鼠均有较强的利胆作用，可促进胆汁分泌，提高胆汁量，并对肝细胞功能有保护作用。

中医理论认为过量饮酒之后，湿热毒邪蕴结体内，损伤肝脾，致肝之疏泄与脾之运化功能失职，肝郁脾虚，气血不和，痰浊内生，气血痰湿相互搏结，停于胁下，形成积块(酒癖)。迁延日久，肝脾肾三脏俱损而功能失调，气血水互结而成臌胀(酒臌)。其病机则可归纳为：脾胃气虚、痰湿内阻、水湿内停、气血不和、气滞血瘀等。其中，酒伤肝脾、聚湿生痰为发病之关键；而素体禀赋不足、脾胃虚弱为发病之本。因此调和肝脾、行气活血、利水化痰、清热解毒为治疗之关键所在，缺少任何一项都不能确保护肝效果，都不是完整意义上的缓解酒精性肝损伤的产品。本发明由姜黄、丹参、决明子、青皮等4味中药组成，姜黄是君药，丹参是臣药，决明子和青皮是佐使药物，姜黄调和肝脾、破血行气、健胃利胆；丹参活血化瘀、清热安神；青皮疏肝泻肺、破气散结、发汗解热、消痰下食；决明子清肝润肠，利水通便，诸药合用，补益调和、活血理气、利水化痰、清热解毒四效合一，保肝护肝更全面更彻底。从现代医学方面来看，姜黄、丹参都有比较明显的对抗化学性肝损伤的作用，决明子对化学性肝损伤有弱的解毒作用，而青皮通过温和刺激胃肠道，同时促进胆汁分泌，协助对抗化学性肝损伤出现的食欲下降、消化不良等临床症状，四者协同，对化学性肝损伤有很好的保护作用。

本发明四味中药提取物最终产物中每100g中含姜黄素约3.1g，制备成粒重为0.3g的胶囊，内容物为浅棕色粉末。推荐用量：口服每日2次，每次3粒。

动物实验分别以75、150、300mg/kg·BW(相当于人体推荐用量2.5、5、10倍)剂量给大鼠连续灌胃30天，能降低酒精性肝损伤模型大鼠的肝组织中的甘油三酯(TG)含量，提高其肝组织中的还原型谷胱甘肽(GSH)含量，减轻其肝组织的脂肪变性过程度，对大鼠的体重无明显影响。由此可见，该样品具有对酒精性肝损伤有辅助保护功能。

本发明还可以将上述四味中药提取物制备成药学上可接受的各种剂型，如片剂，颗粒剂，液体制剂等，还可以加入到其它常用食品中起到保肝护肝的作用。

本品是祖国传统医学理论对中草药保肝护肝的科学应用，所用原料源于天然中草药，不含有任何对人体产生副作用的西药成分。产品采用成熟先进提取生产工艺，摒弃了传统中药材需要长时间煎煮，服用剂量较大，服用不便，口感较差等因素，采用硬胶囊剂型，既保证了产品的品质及疗效，产品安全性高、密封性好，减少二次污染的风险；又遮盖了中药的苦涩气味，更易吞咽，使消费者服用时感觉更为舒适；且产品保存、携带十分方便，在适于消费者日常居家使用的同时，更适于人们在外出度假、旅游及野外工作时使用。

附图说明

图1：本发明生产工艺流程图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明。

实施例1：

1.1配料：1000粒胶囊(粒重0.3g)产品含有下列成分：

姜黄      1200g

丹参      600g

决明子    600g

青皮      300g

1.2制备方法：

1、将姜黄用75％乙醇回流提取两次，第一次8倍量乙醇回流1.5h，第二次6倍量乙醇回流1h，合并滤液；

2、将清洗后的丹参、决明子、青皮放入提取罐内，加水提取两次，第一次加水8倍量，煮沸2.5小时之后过滤，提取上清液；第二次加水6倍量，煮沸2小时之后过滤，提取上清液，合并滤液，减压浓缩至原药液的1/2量；

3、将1、2中的滤液合并，减压浓缩至相对密度1.30的稠膏；

4、所得浸膏60-80℃真空干燥；

5、粉碎，过80目筛得胶囊内容物；

6、装胶囊，检验，装瓶或铝塑板包装。

实施例2：

2.1配料：1000粒胶囊(粒重0.3g)产品含有下列成分：

姜黄        1500g

丹参        300g

决明子      700g

青皮        200g

2.2制备方法：方法同1.2。

实施例3：

3.1配料：1000粒胶囊(粒重0.3g)产品含有下列成分：

姜黄        800g

丹参        600g

决明子      800g

青皮        500g

3.2制备方法：方法同1.2。

实施例4：

4.1配料：1000粒胶囊(粒重0.3g)产品含有下列成分：

姜黄        1000g

丹参        800g

决明子     500g

青皮       400g

4.2制备方法：方法同1.2。

实验例1：对化学性肝损伤有辅助保护作用动物实验报告

1材料和方法

1.1样品及供试液制备：实施例1制备的胶囊(下面简称姜黄胶囊)人体推荐用量为每人(成人)每日2次，每次3粒，按60kg体重折算成30mg/kg·BW。室温保存。试验前用蒸馏水将样品分别配成7.5、15.0、30.0mg/ml的溶液供试验用。

1.2实验动物：选用广西医科大学医学实验动物中心(合格证号：桂动许字<2000>第001号)繁殖的SPF级(III级)SD种雄性大白鼠60只，体重190±12.4g。本中心SPF级实验动物房合格证号：桂医动字第23003号。动物室温度：22～25℃，相对湿度：55～70％。

1.3剂量选择与受试物给予方式：根据样品的人体推荐用量，设75、150、300mg/kg·BW3个剂量组(分别相当于推荐量的2.5、5、10倍)，另设一个酒精肝损伤模型组(模型对照组)和一个阴性对照组。每组12只动物。以经口方式给予受试溶液，灌胃量为1.0ml/100g BW。

1.4主要仪器与试剂：

仪器：半自动生化分析仪、冷冻切片机、754-紫外可见光光度计、电子分析天平、显微镜、离心机、组织均浆器、旋涡混匀器、水浴锅及微量加样器等。

试剂：无水乙醇、还原型GSH、磺基水杨酸、5，5’-二硫硝基甲酸、Na2HPO4、NaH2PO4、KH2PO4、NaN3、EDTA-Na2等；MDA试剂盒(南京建成生物工程研究所生产，批号：20030116)，TG试剂盒(中生北控科技股份有限公司生产，批号：222053)

1.5实验方法：依据《保健食品检验与评价技术规范-2003》中对化学性损伤有辅助保护作用试验方法，采用酒精肝损伤模型方案。大鼠在SPF级动物实验室内饲养观察5天后，根据体重分层随机分为5组，即3个剂量组和2个对照组，每组12只雄性大鼠。开始试验后，各剂量组大鼠灌胃给予相应浓度的样品溶液，肝损伤模型对照组和阴性对照组给予蒸馏水，灌胃量为1.0ml/100g BW。每天灌胃一次，每周称重两次，连续30天。试验至第30天时，肝损伤模型对照组及样品各剂量组动物一次灌胃给予50％乙醇溶液1.2ml/g BW，制造肝损伤模型；阴性对照组灌给等量蒸馏水。禁食16小时后处死大鼠，快速取出肝脏，其中一部分(左叶)用作冷冻切片，进行病理组织学检查，观察脂滴在肝脏中的分布、范围和面积并进行评分；另一部分用于制成匀浆分别测定丙二醛(MDA)、还原谷胱甘肽(GSH)及甘油三酯(TG)含量。

在模型成立的条件下，受试样品组各项指标与肝损伤模型对照组比较，MDA含量下降、GSH含量升高、TG含量降低、脂肪变性减轻，且与模型对照组差异有显著性，可判定其结果阴性。

1.6试验数据处理：用方差分析进行统计处理。

1.7结果判定：满足以下任一条件，可判定受试样品具有对化学性肝损伤有辅助作用。

1.7.1肝脏MDA、还原型GSH和TG三项检测指标阳性。

1.7.2肝脏MDA。还原型GSH和TG三项检测指标中任两项指标阳性和病理组织学检查结果阳性。

2.试验结果

2.1样品对大鼠体重的影响

表1试验前后各组大鼠体重变化(X±S)

注：表中各组间比较差异均无显著性(P＞0.05)。

由表1可见，试验前各组大鼠体重一致，试验过程各周大鼠的体重及试验结束时的增重量相互比较，差异均没有显著性(P＞0.05)，表明该样品对大鼠的体重增长满意明显影响作用。

2.2样品对酒精性肝损伤大鼠的肝组织过氧化脂降解产物丙二醛(MDA)含量的影响

表2各组大鼠肝组织匀浆丙二醛(MDA)含量(X±S)

注：表中P值为各组与模型对照组比较的统计结果

从表2可见，肝损伤模型对照组大鼠的肝组织MDA含量显高于阴性对照组，且两者的差异具有极显著性(P＜0.01)，说明肝损伤模型成立。样品各剂量组大鼠的肝组织MDA含量均低于肝损伤模型对照组，但各剂量组与肝损伤模型对照组的差异均无显著性(P＞0.05)，表明该样品对酒精性损伤的大鼠肝组织中的过氧化脂质含量具有一定降低作用，但不是很明显。

2.3样品对酒精肝损伤大鼠的肝组织甘油三酯(TG)含量的影响

表3各组大鼠肝组织匀浆TG含量(X±S)

注：表中P值为各组与模型对照组比较的统计结果

从表3可见，肝损伤模型对照组大鼠的肝组织TG含量明显高于阴性对照，两者的差异具有极显著性(P＜0.01)，说明肝损伤明显成立。样品各剂量组大鼠的肝组织TG含量均低于肝损伤模型对照组，且各剂量组与肝损伤模型对照组的差异均具有极显著性(P＜0.01)，说明该样品具有降低酒精性损伤的大鼠的肝组织甘油三酯(TG)含量的作用。

2.4样品对酒精性损伤的大鼠的肝组织还原型谷光甘肽(GSH)含量的影响

表4各组大鼠肝组织匀浆GSH含量(X±S)

注：表中P值为各组与模型对照组比较的统计结果

从表4可见，肝损伤模型对照组大鼠的肝组织GSH含量明显低于阴性对照组，两者的差异有极显著性(P＜0.01)，表明肝损伤模型成立。样品各剂量组大鼠的肝组织GSH含量均明显高于模型对照组，且各剂量组与模型对照组的差异均具有极显著性(P＜0.01)，表明该样品具有提高酒精性肝损伤的大鼠肝组织中GSH含量的作用。

2.5样品对酒精性肝损伤大鼠的肝组织脂肪变性的影响

表5各组大鼠肝组织脂肪变性检查结果(X±S)

注：表中P值为各组与模型对照组比较的统计结果

从表5可见，肝损模型对照组大鼠的肝组织脂肪变性评分值显著高于阴性对照组，两者的差异具有极显著性(P＜0.01)，表明肝损模型成立。样品各剂量组大鼠的肝组织脂肪变性评分值均低于肝损模型对照组，且各剂量组与模型对照组的差异均具有极显著性(P＜0.01)，表明该样品具有减轻酒精性肝损伤的大鼠肝组织脂肪变性的作用。

3.小结

分别以75、150、300mg/kgBW(相当于人体推荐用量2.5、5、10倍)剂量的姜黄胶囊给大鼠连续灌胃30天，能降低酒精性肝损伤模型大鼠的肝组织中的甘油三酯(TG)含量，提高其肝组织中还原型谷光甘肽(GSH)含量，减轻其肝组织的脂肪变性程度，对大鼠的体重无明显影响。由此可见，该样品具有对酒精性肝损伤有辅助保护功能。

实验例2：毒理学安全性评价试验报告

1材料和方法

1.1样品：姜黄胶囊人口服推荐为1.8g/天/人。

1.2试验动物与环境：湖南农业大学动物科技学院实验动物养殖场提供的清洁级SD大鼠、昆明种小鼠，实验动物生产许可证号为SCXK(湘)2003-0003。环境温度为23℃～25℃，湿度48％～64％，实验动物使用许可证号为SYXK(湘)2003-0002。

1.3小鼠急性毒理试验：选用体重为18g～22g的健康昆明种小鼠20只，雌雄各半。设计剂量为21500mg/kg·bw，取样品53.75g加蒸馏水定容至100ml，间隔4h经口灌胃两次，每次灌胃体积为0.2ml/10g·bw。灌胃前禁食16h，灌胃后连续观察两周，记录中毒表现及死亡情况。

1.4Ames试验：采用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四株菌株进行试验。五个试验剂量分别为5000、1000、200、40、8μg/皿，同时设自发回变、溶剂对照(蒸馏水)和阳性突变剂对照。样品配置时，取1.25g样品加蒸馏水定容至25ml，混匀，配成5000μg/皿浓度组受试液：从中取5.0ml加蒸馏水定容至25ml，混匀，配成1000μg/皿浓度组受试液：从1000μg/皿浓度组受试液中取5.0ml加蒸馏水定容至25ml，混匀，配成200μg/皿浓度组受试液：依次类推，配成40、8μg/皿浓度组受试液，灭菌后备用。试验采用多氯联苯(PCB)诱导的大鼠肝微粒体酶(S-9)作为体外代谢活化***(试验前鉴定合格)。在顶层琼脂中加入0.1ml试验菌株增菌液、0.1ml受试液和0.5ml S-9混合液(当需要代谢活化时)，混匀后倒入底层培养基平板上。37℃培养48小时，计数每皿菌落数。如果受试物的回变菌落数超过自发回变菌落数的2倍以上，并有剂量-反应关系者定为阳性。整套试验在相同试验条件下重复做两次。

1.5小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验：采用间隔24小时两次经口灌胃法进行试验。取体重为25g～30g的健康昆明种小鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半。以40mg/kg·bw剂量的环磷酰胺为阳性对照，蒸馏水为阴性对照。试验组3个剂量分别为10000、5000、2500mg/kg·bw，试验时分别取样品25.00g、12.50g、6.25g加蒸馏水定容至50ml，环磷酰胺阳性对照取100mg环磷酰胺加生理盐水定容至50ml，给小鼠按0.2ml/10g·bw体积间隔24小时灌胃2次。末次灌胃后6小时颈椎脱臼处死动物，取胸骨骨髓用小牛血清稀释涂片，甲醇固定，Giemsa染色。光学显微镜下，每只动物计数1000个嗜多染红细胞(PCE)，微核发生率以含微核的PCE千分率计，按Poisson分步处理。同时观察200个PCE，计算PCE与成熟红细胞(NCE)比值。

1.6小鼠***畸形试验：取体重25g～35g的雄性昆明种小鼠25只，随机分为5组，每组5只。以40mg/kg·bw剂量的环磷酰胺为阳性对照，蒸馏水为阴性对照。试验组三个剂量分别为10000mg/kg·bw、5000mg/kg·bw、2500mg/kg·bw，试验时分别取样品25.00g、12.50g、6.25g加蒸馏水定容至50ml，坏磷酰胺阳性对照取100mg环磷酰胺加生理盐水定容至50ml，给小鼠按0.2ml/10g·bw体积灌胃，每日灌胃一次，连续5天，于来次灌胃后的第30天处死动物，取副睾涂片，伊红染色，每只动物计数1000个结构完整的***，计算畸变***的发生率。按x²检验统计处理。

1.7 30天喂养试验：选择断乳的SD大鼠随机分为四组，即对照组及三个受试物组，每组20只，雌雄各半。按人体推荐剂量，设低、中、高三个受试组剂量分别为1.50g/kg·bw、2.25g/kg·bw、3.00g/kg·bw，约相当于人体推荐剂量的50、75、100倍，分别取样品30g、45g、60g加蒸馏水定容至200ml配至所需浓度，对照组予以等体积的蒸馏水。分别给以受试动物灌胃，每天观察一次，灌胃体积为1ml/100g·bw，连续30天。各组动物均喂以普通饲料，单笼喂养，自由饮食、饮水。每天观察动物的活动和生长情况，记录进、退食量，每周称一次体重，计算食物利用率。实验末，禁食14小时，摘眼球采血至抗凝管，抗凝管全血用雅培CD3700全自动血球计数仪测定血红蛋白(Hb)、红细胞压积(HCT)，进行红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血小板(PLT)计数及WBC分类；非抗凝管血分离血清后用OLYMPUSAU400全自动生化分析仪测定总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)和血糖(GLU)。颈椎脱臼处死动物作大体解剖，称肝、肾、脾、睾丸重量，计算脏/体比值，如大体解剖未见异常，只对高剂量组与对照组取肝、肾、脾、胃、十二指肠、睾丸、卵巢做病理切片检查，如发现病变，对其他剂量进行相应器官及组织进行检查。

1.8实验数据统计：用Excel、Spss软件进行数据转化和统计分析。用Spss软件统计比较时，先对数据进行方差齐性检验，若方差齐，采用单因素方差分析进行总体比较，发现差异再用Dunnett检验比较各剂量组与对照组。若方差不齐，则对原始数据进行适当的变量转换，满足方差齐性检验后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到方差齐的目的，改用秩和检验进行统计，发现总体比较有差异，则采用不要求方差齐性的Tamhane’sT2检验进行两两比较。

2结果

2.1急性经口毒性试验

见表6，以21500mg/kg·bw剂量的姜黄胶囊给两种性别的小鼠灌胃后，观察14天，未见明显的中毒症状，也无死亡。第15天处死动物，解剖检查，各主要脏器未见明显异常改变。姜黄胶囊对雌、雄小鼠的急性经口LD50大于21500mg/kg·bw。根据《保健食品检验与评价技术规范》中的急性毒性分级标准，该样品属无毒物。

表6姜黄胶囊对小鼠的急性毒性

2.2Ames试验

由表2、3可见，对TA97、TA98、TA100、TA102四株试验菌株，加与不加S-9，样品各剂量组回变菌落数均未超过自发回变菌落数的2倍，亦无剂量-反应关系，说明该受试物为诱变阴性。

表7姜黄胶囊Ames试验结果(第一次)

表8姜黄胶囊Ames试验结果(第二次)

注：表7、表8结果为3个平皿的均值±标准差

2.3小鼠骨髓嗜多染菌微核试验

表9姜黄胶囊对小鼠骨髓微核发生率的影响

由表9可见，样品各剂量组微核率与阴性对照组比较差异无显著性，而环磷酰胺组与阴性对照组比较差异有显著性(P＜0.05)，各剂量组与PCE与NCE比值在正常范围。样品对小鼠骨髓细胞未见损伤作用。

2.4小鼠***畸形试验：

由表10可见，样品对小鼠***畸形发生率未产生明显改变，样品各剂量组与阴性对照组比较差异无显著性(P＞0.05)，而环磷酰胺阳性对照组与阴性对照组比较差异有显著性(P＜0.05＝。姜黄胶囊对小鼠***不产生畸变作用。

表10姜黄胶囊对小鼠***畸变发生率的影响

2.5 30天喂养试验

2.5.1姜黄胶囊对大鼠体重、进食量及食物利用率的影响

见表11-13。以1.50g/kg·bw、2.25g/kg·bw、3.00g/kg·bw剂量的姜黄胶囊给大鼠灌胃30天，喂养期间，各剂量组雌、雄大鼠各时点体重、进食量、食物利用率及总计食物利用率与对照组比较无显著性差异(P＞0.05)。

表11姜黄胶囊对大鼠体重的影响(X±s)

表12姜黄胶囊对大鼠进食量的影响(X±s)

表13姜黄胶囊对大鼠食物利用率的影响(X±s)

2.5.2姜黄胶囊对大鼠血液学指标的影响

见表14-15。以1.50g/kg·bw、2.25g/kg·bw、3.00g/kg·bw剂量的姜黄胶囊给大鼠灌胃30天，各剂量组对雌雄大鼠的血红蛋白、红细胞总数、红细胞压积、血小板数、白细胞总数及分类与对照组比较，差异无显著性(P＞0.05)。

表14姜黄胶囊30天喂养试验血液学检查结果(X±s)

表15姜黄胶囊对大鼠WBC的影响(X±s)

2.5.3姜黄胶囊对大鼠生化指标的影响

见表16。以1.50g/kg·bw、2.25g/kg·bw、3.00g/kg·bw剂量的姜黄胶囊给大鼠灌胃30天，雌、雄鼠剂量组各项生化指标与对照组比较无明显差异(P＞0.05)。

表16姜黄胶囊30天喂养试验末期生化检验结果(X±s)

续表16姜黄胶囊30天喂养试验末期生化检验结果(X±s)

2.5.4姜黄胶囊对大鼠脏器重量的影响

表17-1姜黄胶囊对大鼠脏器重量的影响(X±s)

表17-2姜黄胶囊对大鼠脏体比的影响(X±s)

由表17见，以1.50g/kg·bw、2.25g/kg·bw、3.00g/kg·bw剂量的姜黄胶囊给大鼠灌胃30天，各剂量组大鼠的脏器重量、脏器/体重比值与对照组比较，差异无显著性(P＞0.05)。

2.5.5大体解剖及组织学检查结果

大体解剖肉眼观察各剂量组与对照组大鼠，未见异常，因此只对高剂量组与对照组进行组织病理切片检查，结果(见表18-24)显示剂量组肝、脾、肾、肠、胃、睾丸、卵巢与对照组比较均未见与样品有关的病理改变。

表18肝脏组织病理学检查结果

注：1/10表示10只动物中1只动物出现病变(余表类同)。

表19脾脏组织病理学检查结果

表20肾脏组织病理学检查结果

表21胃组织病理学检查结果

表22十二指肠组织病理学检查结果

表23雌鼠卵巢组织病理学检查结果

表24雄鼠睾丸组织病理学检查结果

3小结

样品姜黄胶囊根据《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)有关规定进行安全性毒理学评价，结果如下：

1.急性毒性试验：对雌、雄小鼠的急性经口LD50均大于21500mg/kg·bw。属无毒物。

2.三项遗传毒性试验：三项遗传毒性试验(Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠***畸形试验)结果均为阴性。

3.30天喂养试验：以1.50g/kg·bw、2.25g/kg·bw、3.00g/kg·bw剂量的姜黄胶囊给大鼠灌胃30天，试验期间，各剂量组大鼠体重增长、食物利用率与对照组比较无显著性差异(P＞0.05)。雌、雄鼠血生化指标、血常规指标及肝/体、脾/体、肾/体、雄鼠睾/体比值与对照组比较差异均无显著性(P＞0.05)。肝、脾、肾、胃、十二指肠、睾丸(卵巢)组织病理检查无明显损害。

Claims (7)

1.一种纯中药护肝保健食品，特征在于其有效成分由下列重量份的原料药的提取物组成：姜黄8-15份，丹参3-8份，决明子3-8份和青皮2-5份。

2.根据权利要求1所述的保健食品，其中姜黄10-15份，丹参4-7份，决明子4-7份和青皮2-3份。

3.根据权利要求2所述的保健食品，其中姜黄12份，丹参6份，决明子6份和青皮3份。

4.根据权利要求3所述的保健食品，所述保健食品的剂型为胶囊。

5.权利要求4所述的保健食品的制备方法，其特征在于姜黄用醇提取，丹参、决明子和青皮混合后用水提取，合并提取液浓缩制得浸膏，真空干燥后粉碎装胶囊。

6.根据权利要求5所述的制备方法，所述醇为乙醇。

7.根据权利要求5所述的制备方法，所述真空干燥温度为60-80℃。

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