CN100428960C - 纳米肝靶向生物降解药物载体材料的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种生物降解药物载体材料的构成及其制备方法，特别是涉及将纳米肝靶向生物降解药物修饰到可降解并具有生物相容性的聚合物(壳聚糖，聚赖氨酸，葡聚糖，琼脂，聚谷氨酸苄酯，聚丙氨酸)上，通过离子交联或超声乳化方法制备纳米肝靶向生物降解药物载体材料的方法。本发明的有益效果：肝靶向纳米粒子溶液对肝脏有很好的靶向能力，药物肝脏富集率达75%，缓释给药可达15天以上；靶向物质是具有明确肝靶向性的小分子化合物，对人体没有副作用；靶向材料具有良好的血液相容性，高效率的实现肝脏疾病的靶向缓释治疗；同时具有高的肝靶向性和缓释给药的功能，提高治疗效果和生存质量，降低了治疗成本。

Description

纳米肝靶向生物降解药物载体材料的制备方法

技术领域

本发明涉及一种生物降解药物载体材料和载药纳米粒子的构成及其制备方法，特别是涉及将肝靶向化合物修饰到可降解并具有生物相容性的聚合物上制备生物降解药物载体材料，并通过离子交联或超声乳化方法包裹药物制备肝靶向载药纳米粒子的方法。

背景技术

肝癌，尤其是原发性肝癌，是临床常见病和多发病。原发性肝癌死亡率在恶性肿瘤中居第三位，仅次于胃癌和食管癌。我国是肝癌的高发地区，发病率占全球的50％以上。对肝癌的治疗，目前首推肝移植，但是供体难求。抗癌药物治疗(环磷酰胺，盐酸阿糖胸苷)由于药物全身分布，在病灶部位药物浓度不够大，但对其他脏器伤害较大，一些病人往往死于化疗药物对其他脏器的伤害。

肝靶向给药***(Hepatic targeted drug delivery System，HTDDS)是药剂学研究领域的热点之一，可将药物有效地输送至肝脏的病变部位，提高药物的治疗效果，减轻对其它脏器的损害，减少用药剂量和给药次数，因此，HTDDS对肝脏疾病的治疗具有积极的推动作用。在肝靶向研究中，常采用两种不同的方法：1被动靶向(passive targeting)，50～200 nm的粒子可以被巨噬细胞吞噬，部分在肝脏和肺部网状内皮***聚集，有部分肝靶向性；2主动靶向(active targeting)，纳米粒子连接有特定的配体，可与肝部靶细胞上受体结合，实现肝靶向治疗，因此主动靶向的靶向性明显，效果更好。

1978年，Paul Ehrlich提出，将抗肿瘤药物与单克隆抗体共价连接，能使药物导向肿瘤组织。以单克隆抗体为靶向基团，连接药物、放射性核素、免疫分子和酶类进行肝脏疾病的治疗，是目前国际上研究肝靶向材料的主要方法。单克隆抗体作为靶向物质最大的优点是靶向性强，转运率高，但目前的抗体主要是鼠源性抗体，安全性成为其首要问题。人源性抗体则由于价格昂贵，难以大规模应用。

国内目前肝脏疾病的研究主要集中在将脂质体和其他一些合成高分子材料制备为纳米粒子包裹药物或基因方面。但脂质体等纳米粒子对组织细胞的特异识别性较低，转运率比较低，靶向性不强，在很大程度上制约了如基因、核素治疗等方法在肝脏疾病治疗中的应用。国内也有部分课题组采用受体介导设计方法，用半乳糖修饰聚合物，制备肝靶向材料。但由于半乳糖对肝脏表面受体特异识别作用不够强，纳米粒子需要磁性物质或者抗体修饰，使材料的制造和使用带来很多不便，成本也很高。

目前尚未开发出对肝癌同时具有特异靶向性和缓释给药治疗的药物体系。通过受体介导，将化疗药物或基因物质载于可体内降解的高分子载体上，就可将药物或基因物质送至肝细胞，实现肝靶向缓释给药治疗肝癌的目的。将具有高肝靶向性的小分子物质如甘草次酸、甘草酸、胆酸等引入可降解并具有良好生物相容性的多糖和聚氨基酸上的肝靶向材料目前尚未见报道。本发明的目的是为了解决以上技术问题。

发明内容

本发明目的是提供一种纳米肝靶向生物降解药物载体材料和载药纳米粒子的制备方法。

本发明提供的纳米肝靶向生物降解药物载体材料，其特点在于它包括下列成分：

肝靶向化合物，

聚合物；

靶向基团的取代度为0.5-1mmol/g；

所述的肝靶向化合物是甘草次酸、甘草酸、胆酸中的任意一种，

所述的聚合物是壳聚糖、聚赖氨酸、葡聚糖、琼脂、聚谷氨酸苄酯、聚丙氨酸中的一种。

聚合物中壳聚糖、琼脂、葡聚糖的分子量为6000-20000，聚谷氨酸苄酯、聚丙氨酸、聚赖氨酸的分子量为2000～40000。

本发明提供的肝靶向载药纳米粒子，其特点在于它包括下列成分：

以上所述的纳米肝靶向生物降解药物载体材料，

离子交联剂，

治疗肝脏疾病的药物；

所述的离子交联剂是聚苹果酸钠，聚苹果酸、三聚磷酸钠中的任意一种。

离子交联剂中聚苹果酸、聚苹果酸钠的分子量为2000～6000。

一种以上所述的纳米肝靶向生物降解药物载体材料的制备方法，其特点在于：将肝靶向化合物修饰到可降解并具有生物相容性的聚合物上，它包括下述制备步骤：

1)肝靶向化合物修饰壳聚糖的制备：

在2～10％的壳聚糖水溶液中，加入肝靶向化合物和1-乙基-3-(3-二甲氨基异丙基)碳二亚胺EDC的N，N-二甲基甲酰胺DMF的溶液，在60～100℃反应4～6小时，冷却后，浓缩反应液，将浓缩液倾入乙醇中沉淀，过滤，将沉淀干燥，作为肝靶向药物载体材料；

2)肝靶向化合物修饰聚赖氨酸的制备：

在2～10％的聚赖氨酸水溶液中，加入肝靶向化合物和EDC的DMF的溶液，在60～100℃反应4～6小时，冷却后，浓缩反应液，将浓缩液倾入乙醇中沉淀，过滤，将沉淀干燥，作为肝靶向药物载体材料；

3)肝靶向化合物修饰琼脂或葡聚糖的制备：

在2～10％的琼脂或葡聚糖的DMF水溶液中，加入肝靶向化合物和4-二甲氨基吡啶DMAP的DMF的溶液，加热至40～80℃反应4～6小时，冷却后，浓缩反应液，将浓缩液倾入乙醇中沉淀，过滤，将沉淀干燥，作为肝靶向药物载体材料；

4)肝靶向化合物修饰聚谷氨酸苄酯或聚丙氨酸的制备：

将肝靶向化合物溶于四氢呋喃THF中，冷却，加入N，N-二环己基碳二亚胺DCC，搅拌后加入N-羟基琥珀酰亚胺SuOH，在室温下搅拌反应，将反应混合物滤去二环己基脲后所得溶液倾入无水***中，收集白色固体，用少量无水乙醇洗涤，再用无水***洗涤，真空干燥，得活性酯；

将活性酯的DMF溶液滴加到大过量的二元胺的溶液中反应，将胆酸或甘草次酸的衍生物倾入水中，甘草酸的衍生物倾入四氢呋喃中，在3℃放置。将沉淀过滤，用少量乙醇、水、***洗涤，干燥，将所得沉淀在DMF中溶解，用***沉淀，真空干燥，得到胺基修饰的肝靶向化合物；称取N-羧酸酐-谷氨酸苄酯-N-羧酸酐或丙氨酸-N-羧酸酐、胺基修饰的肝靶向化合物于反应瓶中，加DMF，然后在氮气保护下室温搅拌反应，反应液在剧烈搅拌下滴加到无水***中沉淀，沉淀过滤，用***洗涤，干燥得白色固体产物，作为靶向药物载体材料。

以上所述的制备方法，在1)步肝靶向化合物修饰壳聚糖的制备中，其物料摩尔比为，

壳聚糖∶肝靶向化合物∶EDC为1∶0.2～0.4∶0.2～0.4；

在2)步肝靶向化合物修饰聚赖氨酸的制备中，其物料摩尔比为，

聚赖氨酸∶肝靶向化合物∶EDC为1∶0.1～0.7∶0.2～0.4；

在3)步肝靶向化合物修饰琼脂或葡聚糖的制备中，其物料摩尔比为，

琼脂或葡聚糖∶肝靶向化合物∶DMAP为1∶0.5～2.0∶0.2～0.4；

在4)步肝靶向化合物修饰聚谷氨酸苄酯或聚丙氨酸的制备中，其物料摩尔比为，

肝靶向化合物∶DCC∶SuOH为1∶1.0～1.5∶1.0～1.5；

活性酯∶二元胺为1∶30～100；

N-羧酸酐∶胺基修饰的肝靶向化合物为50～300∶1。

所述的二元胺是乙二胺、己二胺的任意一种，乙二胺用DMF做溶剂，己二胺用二甲基亚砜做溶剂。

一种以上所述的肝靶向载药纳米粒子的制备方法，其特点在于：通过离子交联或超声乳化方法，以肝靶向药物载体材料来包裹药物，制备载药纳米粒子，包括下述制备步骤：

1)壳聚糖或聚赖氨酸基载药纳米粒子的制备：

将5％肝靶向药物载体材料的水溶液滴加到含治疗肝脏疾病的药物和离子交联剂是三聚磷酸钠、聚苹果酸钠、聚苹果酸中的任意一种pH值为7.4的磷酸缓冲液中，超声振荡，得到分散均匀的肝靶向载药纳米粒子；

2)琼脂或葡聚糖基药物载体材料给药***的制备：

向含5％肝靶向药物载体材料的DMF溶液中滴加含治疗肝脏疾病的药物水溶液，超声振荡，得到分散均匀的肝靶向载药纳米粒子；

3)聚谷氨酸苄酯或聚丙氨酸基载药纳米粒子的制备：

向含5％肝靶向药物载体材料的乙醇、异丙醇、己醇中任意一种醇溶液中滴加含治疗肝脏疾病的药物水溶液，超声振荡，得到分散均匀的肝靶向载药纳米粒子。

以上所述的制备方法，

在1)步壳聚糖或聚赖氨酸基载药纳米粒子的制备中，其物料摩尔比为，

壳聚糖∶离子交联剂为100∶1～7；

在2)步琼脂或葡聚糖基载药纳米粒子的制备中，其物料体积比为，

琼脂或葡聚糖的DMF溶液∶药物水溶液为1∶1～10；

在3)步聚谷氨酸苄酯或聚丙氨酸基载药纳米粒子的制备中，其物料体积比为，

靶向药物载体材料的醇溶液∶药物水溶液为1∶1～30。

本发明的有益效果：用于静脉注射靶向缓释治疗肝脏疾病，肝靶向纳米粒子溶液对肝脏有很好的靶向能力，药物肝脏富集率达75％，缓释给药可达15天以上；靶向物质是具有明确肝靶向性的小分子化合物，对人体没有副作用。靶向材料具有良好的血液相容性，高效率的实现肝脏疾病的靶向缓释治疗，同时具有高的肝靶向性和缓释给药的功能，提高治疗效果和生存质量，降低了治疗成本。

附图说明

图1、纳米肝靶向生物降解药物载体材料制备过程示意图，

图2、纳米粒子在大鼠体内的分布图，

图3、修饰甘草次酸的壳聚糖纳米粒子包封5-氟脲嘧啶体外释放曲线图，

图中

A壳聚糖纳米粒子             30min检测  肾脏代谢        肝区检测不到

B甘草次酸修饰壳聚糖纳米粒子 30min检测  双肾  14％      肝脏积聚≥76％。

具体实施方式

为了进一步了解本发明的内容、特点及功效，并配合附图1、2、3详细说明如下：

实施例1、修饰甘草次酸的壳聚糖纳米肝靶向生物降解药物载体材料及纳米粒子的制备：

1.甘草次酸修饰壳聚糖的制备：

称取2g甘草次酸和1g EDC置于200mL烧杯内，向瓶内加入70mL DMF，磁力搅拌溶解。

在将500mL三口瓶内加入5g壳聚糖，加入100mL蒸馏水磁力搅拌至溶解。然后将上边配制好的甘草次酸溶液倒入壳聚糖溶液中，继续搅拌，加热至60℃反应6小时。将反应液冷却至40℃，用旋转蒸发仪浓缩至50mL左右。将浓缩液倾入盛有800mL乙醇的烧杯中沉淀，过滤，沉淀分别用50mL乙醇、50mL***洗涤，真空干燥(40℃，5mmHg)24小时，产物含甘草次酸5％。

2.甘草次酸修饰壳聚糖水溶液和离子交联剂水溶液的配制：

将1.0g修饰甘草次酸的壳聚糖溶解在50mL二次蒸馏水中，备用。将0.3g离子交联剂(聚苹果酸钠，聚苹果酸，三聚磷酸钠)溶解在30mL二次蒸馏水中，备用。

3甘草次酸修饰壳聚糖肝靶向纳米粒子的制备：

3.1于10mL修饰甘草次酸的壳聚糖溶液中加入2mL聚苹果酸钠溶液，超声振荡30min，得到含靶向基团的纳米粒子。

3.2于10mL修饰甘草次酸的壳聚糖溶液中加入2mL聚苹果酸溶液，超声振荡30min，得到含靶向基团的纳米粒子。

3.3于10mL修饰甘草次酸的壳聚糖溶液中加入2mL三聚磷酸钠溶液，超声振荡30min，得到含靶向基团的纳米粒子。

实施例2、修饰甘草次酸的聚赖氨酸纳米肝靶向生物降解药物载体材料及纳米粒子的制备：

1.甘草次酸修饰聚赖氨酸的制备：

称取2g甘草次酸和1 gEDC置于200mL烧杯内，向瓶内加入70mLDMF，磁力搅拌溶解。

在将500mL三口瓶内加入5g聚赖氨酸，加入100mL蒸馏水磁力搅拌至溶解。然后将上边配制好的甘草次酸溶液倒入聚赖氨酸溶液中，继续搅拌，加热至60℃反应6小时。将反应液冷却至40℃，用旋转蒸发仪浓缩至50mL左右。将浓缩液倾入盛有800mL乙醇的烧杯中沉淀，过滤，沉淀分别用50mL乙醇、50mL***洗涤，真空干燥(40℃，5mmHg)24小时，产物含甘草次酸8％。

2.甘草次酸修饰聚赖氨酸水溶液和离子交联剂水溶液的配制：

将1.0g修饰甘草次酸的聚赖氨酸溶解在50mL二次蒸馏水中，备用。将0.3g离子交联剂(聚苹果酸钠，聚苹果酸，三聚磷酸钠)溶解在30mL二次蒸馏水中，备用。

3.甘草次酸修饰聚赖氨酸肝靶向纳米粒子的制备：

3.1于10mL修饰甘草次酸的聚赖氨酸溶液中加入2mL聚苹果酸钠溶液，超声振荡30min，得到含靶向基团的纳米粒子。

3.2于10mL修饰甘草次酸的聚赖氨酸溶液中加入2mL聚苹果酸溶液，超声振荡30min，得到含靶向基团的纳米粒子。

3.3于10mL修饰甘草次酸的聚赖氨酸溶液中加入2mL三聚磷酸钠溶液，超声振荡30min，得到含靶向基团的纳米粒子。

实施例3、修饰甘草次酸的琼脂纳米肝靶向生物降解药物载体材料及载药纳米粒子的制备：

1.甘草次酸修饰琼脂的制备：

称取2g甘草次酸和1 gEDC置于200mL烧杯内，向瓶内加入70mLDMF，磁力搅拌溶解。

在500mL三口瓶内加入7g琼脂，加入100mL DMF磁力搅拌至溶解。然后将上边配制好的甘草次酸溶液倒入琼脂溶液中，继续搅拌，加热至60℃反应6小时。将反应液冷却至40℃，用旋转蒸发仪浓缩至50mL左右。将浓缩液倾入盛有800mL乙醇的烧杯中沉淀，过滤，沉淀分别用50mL乙醇、50mL***洗涤，真空干燥(40℃，5mmHg)24小时，产物含甘草次酸4％。

2.甘草次酸修饰琼脂肝靶向载药纳米粒子的制备：

向含5％靶向药物载体材料的DMF溶液中滴加含治疗肝脏疾病的药物水溶液，超声振荡，得到分散均匀的肝靶向载药纳米粒子。

实施例4、由N-羧酸酐制备纳米肝靶向生物降解药物载体材料及载药纳米粒子：

1.将2mmol甘草次酸溶于四氢呋喃中，冷却至-10℃，加入DCC 2.54g(12.3mmol)，搅拌30min后，加入SuOH 1.42g(12.3mmol)，继续搅拌3小时，在室温下搅拌8～18h，将反应混合物滤去二环己基脲后所得溶液倾入无水***中，收集白色固体，用少量无水乙醇洗涤，再用无水***洗涤，真空干燥，得活性酯。

2.将活性酯的DMF溶液滴加到70mL的乙二胺的溶液中，于30～60℃反应5～10h。将胆酸和甘草次酸的衍生物倾入水中(甘草酸的衍生物倾入四氢呋喃中)，在3℃放置24h。将沉淀过滤，用少量乙醇，水，***洗涤，干燥。将所得沉淀在DMF中溶解，用***沉淀，真空干燥，得到胺基修饰的肝靶向化合物。

3.胺基修饰的肝靶向化合物引发谷氨酸苄酯-N-羧酸酐聚合制备靶向材料：

称取谷氨酸苄酯-N-羧酸酐100mmol、胺基修饰的肝靶向化合物1mmol于反应瓶中，加入80-100mL DMF，氮气保护下室温搅拌反应48h。剧烈搅拌下将反应液滴加至过量无水***中沉淀。沉淀过滤，***洗涤，干燥得白色固体产物，作为肝靶向药物载体材料。

4.聚谷氨酸苄酯载药纳米粒子的制备：

于10mL聚谷氨酸苄酯醇溶液中滴加入2mL含盐酸阿糖胸苷的水溶液，超声振荡30min，得到含靶向基团的载药纳米粒子。

实施例5修饰甘草次酸的壳聚糖肝靶向纳米粒子在大鼠体内分布实验：

利用放射性元素标记结合SPECT技术检测纳米粒子在动物体内的分布是一种快速准确定量的分析检测方法。我们采用这种方法研究了修饰甘草次酸的壳聚糖肝靶向纳米粒子在大鼠体内的分布。

1.纳米粒子的配制：

壳聚糖和修饰甘草次酸的壳聚糖的纳米粒子溶液配制同1-3。

2.纳米粒子的cDTPA偶联：

分别取4mL0.1g/L壳聚糖(CTS)和修饰甘草次酸的壳聚糖(GA-CTS)纳米粒子溶液与80mg二乙烯三胺五乙酸二环酐(cDTPA)混合，在室温下反应1h完成偶联。混合液用Sephadex G75常规凝胶色谱分离，去除游离的二乙烯三胺五乙酸(DTPA)，淋洗液为蒸馏水，紫外检测甘草次酸基团的含量，得到CTS-DTPA和GA-CTS-DTPA的纳米粒子溶液。

3.纳米粒子的标记：

取上述化合物(CTS-DTPA和GA-CTS-DTPA，1mg/1mL)的纳米粒子溶液1mL，亚甲基二磷酸锡盐(MDP-Sn)试剂盒加入1mL生理盐水，每个样品取100μL，分别加入1mCi^99mTc和50μL MDP溶液反应10min.标记好的溶液用生理盐水稀释到3mL供小鼠体内分布实验使用。

4.大鼠动物体内分布实验结果，见图2。

实施例6、药物体外释放特征

1.载5-氟脲嘧啶纳米粒子的制备：

室温磁力搅拌下滴加2.5mg/mL三聚磷酸钠溶液8mL于含不同浓度5-氟脲嘧啶的5mg/mL修饰甘草次酸的壳聚糖溶液20mL中，保持超声振荡10min。

2.纳米粒载5-氟脲嘧啶率和包封率的计算：

于4℃条件下，16000r/min高速离心分离载5-氟脲嘧啶纳米粒30min，在紫外可见分光光度计上于波长266nm处检测上清液中5-氟脲嘧啶含量。纳米粒子冷冻干燥称重后置于真空干燥器中低温保存备用。纳米粒载5-氟脲嘧啶率(LC)和包封率(EE)的计算公式分别如式(1)，式(2)所示：

修饰甘草次酸的壳聚糖纳米粒子载5-氟脲嘧啶率(LC)达37％，包封率(EE)达82％。

3.纳米粒子体外控释5-氟脲嘧啶性能：

4mL载5-氟脲嘧啶纳米粒子悬浮液置于透析袋中，透析袋放于20mL PBS(pH＝7.4)溶液中，37℃保温磁搅拌。每隔一定时间间隔取2mL PBS溶液分析其中5-氟脲嘧啶含量，补加2mL新鲜PBS溶液。

制备的载5-氟脲嘧啶纳米粒子无明显突释，体外缓释可达15天以上，其实验结果见附图3。

Claims (9)

1.一种纳米肝靶向生物降解药物载体材料，其特征在于它包括下列成分：

肝靶向化合物，

聚合物；

靶向基团的取代度为0.5-1mmol/g；

所述的肝靶向化合物是甘草次酸、甘草酸、胆酸中的任意一种，

所述的聚合物是壳聚糖、聚赖氨酸、葡聚糖、琼脂、聚谷氨酸苄酯、聚丙氨酸中的一种。

2.根据权利要求1所述的纳米肝靶向生物降解药物载体材料，其特征在于：聚合物中壳聚糖、琼脂、葡聚糖的分子量为6000-20000，聚谷氨酸苄酯、聚丙氨酸、聚赖氨酸的分子量为2000～40000。

3.一种肝靶向载药纳米粒子，其特征在于它包括下列成分：

权利要求1所述的纳米肝靶向生物降解药物载体材料，

离子交联剂，

治疗肝脏疾病的药物；

所述的离子交联剂是聚苹果酸钠，聚苹果酸、三聚磷酸钠中的任意一种。

4.根据权利要求3所述的肝靶向载药纳米粒子，其特征在于：离子交联剂中聚苹果酸、聚苹果酸钠的分子量为2000～6000。

5.一种权利要求1所述的纳米肝靶向生物降解药物载体材料的制备方法，其特征在于：将肝靶向化合物修饰到可降解并具有生物相容性的聚合物上，它包括下述制备步骤：

1)肝靶向化合物修饰壳聚糖的制备：

在2～10％的壳聚糖水溶液中，加入肝靶向化合物和1-乙基-3-(3-二甲氨基异丙基)碳二亚胺EDC的N，N-二甲基甲酰胺DMF的溶液，在60～100℃反应4～6小时，冷却后，浓缩反应液，将浓缩液倾入乙醇中沉淀，过滤，将沉淀干燥，作为肝靶向药物载体材料；

2)肝靶向化合物修饰聚赖氨酸的制备：

在2～10％的聚赖氨酸水溶液中，加入肝靶向化合物和EDC的DMF的溶液，在60～100℃反应4～6小时，冷却后，浓缩反应液，将浓缩液倾入乙醇中沉淀，过滤，将沉淀干燥，作为肝靶向药物载体材料；

3)肝靶向化合物修饰琼脂或葡聚糖的制备：

在2～10％的琼脂或葡聚糖的DMF水溶液中，加入肝靶向化合物和4-二甲氨基吡啶DMAP的DMF的溶液，加热至40～80℃反应4～6小时，冷却后，浓缩反应液，将浓缩液倾入乙醇中沉淀，过滤，将沉淀干燥，作为肝靶向药物载体材料；

4)肝靶向化合物修饰聚谷氨酸苄酯或聚丙氨酸的制备：

将肝靶向化合物溶于四氢呋喃THF中，冷却，加入N，N-二环己基碳二亚胺DCC，搅拌后加入N-羟基琥珀酰亚胺SuOH，在室温下搅拌反应，将反应混合物滤去二环己基脲后所得溶液倾入无水***中，收集白色固体，用少量无水乙醇洗涤，再用无水***洗涤，真空干燥，得活性酯；

将活性酯的DMF溶液滴加到大过量的二元胺的溶液中反应，将胆酸或甘草次酸的衍生物倾入水中，甘草酸的衍生物倾入四氢呋喃中，在3℃放置，将沉淀过滤，用少量乙醇、水、***洗涤，干燥，将所得沉淀在DMF中溶解，用***沉淀，真空干燥，得到胺基修饰的肝靶向化合物；称取N-羧酸酐-谷氨酸苄酯-N-羧酸酐或丙氨酸-N-羧酸酐、胺基修饰的肝靶向化合物于反应瓶中，加DMF，然后在氮气保护下室温搅拌反应，反应液在剧烈搅拌下滴加到无水***中沉淀，沉淀过滤，用***洗涤，干燥得白色固体产物，作为靶向药物载体材料。

6、根据权利要求5所述的纳米肝靶向生物降解药物载体材料的制备方法，其特征在于：在1)步肝靶向化合物修饰壳聚糖的制备中，其物料摩尔比为，

壳聚糖∶肝靶向化合物∶EDC为1∶0.2～0.4∶0.2～0.4；

在2)步肝靶向化合物修饰聚赖氨酸的制备中，其物料摩尔比为，

聚赖氨酸∶肝靶向化合物∶EDC为1∶0.1～0.7∶0.2～0.4；

在3)步肝靶向化合物修饰琼脂或葡聚糖的制备中，其物料摩尔比为，

琼脂或葡聚糖∶肝靶向化合物∶DMAP为1∶0.5～2.0∶0.2～0.4；

在4)步肝靶向化合物修饰聚谷氨酸苄酯或聚丙氨酸的制备中，其物料摩尔比为，

肝靶向化合物∶DCC∶SuOH为1∶1.0～1.5∶1.0～1.5；

活性酯∶二元胺为1∶30～100；

N-羧酸酐∶胺基修饰的肝靶向化合物为50～300∶1。

7.根据权利要求5所述的纳米肝靶向生物降解药物载体材料，其特征在于：二元胺是乙二胺、己二胺的任意一种，乙二胺用DMF做溶剂，己二胺用二甲基亚砜做溶剂。

8、一种权利要求3所述的肝靶向载药纳米粒子的制备方法，其特征在于：通过离子交联或超声乳化方法，以肝靶向药物载体材料来包裹药物，制备载药纳米粒子，包括下述制备步骤：

1)壳聚糖或聚赖氨酸基药物载体材料载药纳米粒子的制备：

将5％肝靶向药物载体材料的水溶液滴加到含治疗肝脏疾病的药物和离子交联剂是三聚磷酸钠、聚苹果酸钠、聚苹果酸中的任意一种pH值为7.4的磷酸缓冲液中，超声振荡，得到分散均匀的肝靶向载药纳米粒子；

2)琼脂或葡聚糖基药物载体材料载药纳米粒子的制备：

向含5％肝靶向药物载体材料的DMF溶液中滴加含治疗肝脏疾病的药物水溶液，超声振荡，得到分散均匀的肝靶向载药纳米粒子；

3)聚谷氨酸苄酯或聚丙氨酸基药物载体材料载药纳米粒子的制备：

向含5％肝靶向药物载体材料的乙醇、异丙醇、己醇中任意一种醇溶液中滴加含治疗肝脏疾病的药物水溶液，超声振荡，得到分散均匀的肝靶向载药纳米粒子。

9、根据权利要求8所述的肝靶向载药纳米粒子的制备方法，其特征在于：

在1)步壳聚糖或聚赖氨酸基药物载体材料载药纳米粒子的制备中，其物料摩尔比为，壳聚糖∶离子交联剂为100∶1～7；

在2)步琼脂或葡聚糖基药物载体材料载药纳米粒子的制备中，其物料体积比为，琼脂或葡聚糖的DMF溶液∶药物水溶液为1∶1～10；

在3)步聚谷氨酸苄酯或聚丙氨酸基药物载体材料给药***的制备中，其物料体积比为，靶向药物载体材料的醇溶液∶药物水溶液为1∶1～30。

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