CN100423753C - 从天然植物复方制剂中提取增强记忆制品药物的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及从一种复方制剂中提取增强记忆制品药物的方法，属于天然产物药理活性和分离与提纯天然产物方法。其处方是石菖蒲8.57%、地黄11.35%、麦冬11.35%、何首乌5.67%、丹参5.67%、三七3.53%、人参5.67%、茯苓5.67%、柏子仁5.67%、远志2.83%、五味子5.67%、山茱萸5.67%、杜仲5.67%、防风5.67%、川贝母5.67%、甘草5.67%。积极效果是复方制剂中提取增强记忆制品药物的方法采用先进的大孔树脂吸附有效成份并使用气相指痕光谱定量，保证药品的稳定性和高质量。
Description
(一)技术领域
本发明涉及一种复方制剂中提取增强记忆制品药物的方法，属于天然产物药理活性和分离与提纯天然产物方法。其商品名是“乌麦益智”。
(二)背景技术
人们常用的脑复康、安神健脑液及参茸王浆及脑白金等都是一种补脑的保健品，人们迫切希望一种提高记忆力的原料药问世，原料药的药效好，制取的产品就会提高一个层次。
(三)发明内容
技术方案包括处方新工艺、工艺流程图及各种毒理、药理综述。
技术解决方案是：
本发明的目的公开一种复方制剂中提取增强记忆制品药物的方法；通过该方法制备高纯度原料药。
石菖蒲8.57％、地黄11.35％、麦冬11.35％、何首乌5.67％、丹参5.67％、三七3.53％、人参5.67％、茯苓5.67％、柏子仁5.67％、远志2.83％、五味子5.67％、山茱萸5.67％、杜仲5.67％、防风5.67％、川贝母5.67％、甘草5.67％复方增强记忆制品，采用大孔树脂吸附、洗脱技术，在细心严格地条件下分离、纯化天然产物，用高效液相色谱仪进行指痕图谱成份定量测定，以保证制品的质量稳定性。药理活性实验表明，复方制品能够增强小白鼠记忆，减少小鼠在Y型迷宫出现的错误反应次数，对注射氢溴酸东莨蓉碱造成小白鼠记忆损伤后，可防止记忆损伤的程度，减少受损伤小鼠在Y型迷宫中错误反应的次数，复方制品能增强大白鼠学习记忆的能力，减少大白鼠学习记忆后出现错误行为的次数，药理实验表明，复方制品不仅对正常动物的学习记忆有促进作用，而且对东莨蓉碱所致小白鼠的记忆损伤障碍有改善作用，促进学习记忆，改善记忆损伤。复方制品能够增加大白鼠血浆中超氧化物歧化酶(SOD)的活性，降低大白鼠脑和肝脏的脂质过氧化物的生成，显著提高血浆中S0D活性，并呈现一定的量效关系。复方制品对小白鼠具有较好的镇静作用和催眠作用，并与戊巴比妥钠有协同催眠作用。
复方制剂中提取复方制剂中提取增强记忆制品药物的方法采用先进的大孔树脂吸附有效成份并使用液相指痕光谱定量，保证药品的稳定性和高质量。
本发明的创造性通过临床毒理、药理来体现，在实质审查时一并提供。
(四)附图说明
图1是本发明的工艺流程图。其工艺流程描述如下：
(1)本发明处方：石菖蒲60g、地黄80g、麦冬80g、何首乌40g、丹参40g、三七25g、人参40g、茯苓40g、柏子仁40g、远志20g、五味子40g、山茱萸40g、杜仲40g、防风40g、川贝母40g、甘草40g。
(2)溶剂：水。
(3)提取液：棕色水溶液。
(4)物理参数
水提取、树脂吸附、喷雾干燥的压力均为常压；其中，水提取的温度为100℃，树脂吸附的温度为常温，喷雾干燥的温度为80-85℃。
(5)操作过程
①16味药材加6倍量水煎煮3小时，滤过，得滤液(1)；药渣加4倍量水煎煮2小时，滤过，得滤液(2)；药渣再加2倍量水煎煮1小时，滤过，得滤液(3)。
②合并滤液(1)、(2)、(3)，静置，取上清液，得提取液(4)。
③提取液(4)用大孔树脂进行吸附。
④用65％乙醇洗脱吸附在树脂上的化学成分于乙醇中，得洗脱液(5)。
⑤减压回收洗脱液(5)，得浓缩液(6)。
⑥将浓缩液(6)进行喷雾干燥，得药粉。
将16种植物原料，每100kg加水600kg、400kg、200kg，在100℃条件下分别提取3小时，2小时、1小时，合并水提取滤液，通过大孔树脂填充的柱子，用大孔树脂吸附，用65％的乙醇，在常温下，将吸附在大孔树脂上的成份洗脱至乙醇中，在85℃条件下，喷雾干燥，用高效液相色谱测定仪进行指痕图谱成份定量测定后，制成标准原料药。
(五)具体实施方式
石菖蒲60g、地黄80g、麦冬80g、何首乌40g、丹参40g、三七25g、人参40g、茯苓40g、柏子仁40g、远志20g、五味子40g、山茱萸40g、杜仲40g、防风40g、川贝母40g、甘草40g。
将石菖蒲、地黄、麦冬、何首乌、丹参、三七、人参、茯苓、柏子仁、远志、五味子、山茱萸、杜仲、防风、川贝母、甘草植物原料，每100kg加水600kg、400kg、200kg，在100℃条件下分别提取3小时，2小时、1小时，合并水提取滤液，通过大孔树脂填充的柱子，用大孔树脂吸附，用65％的乙醇，在常温下，将吸附在大孔树脂上的成份洗脱至乙醇中，在85℃条件下，喷雾干燥，用高效液相色谱测定仪进行指痕图谱成份定量测定后，制成标准原料药。
本发明的创造性通过毒理、药理临床来体现，实审时补充提供现简介如下：
从天然植物复方制剂中提取增强记忆制品药物的方法药理作用
石菖蒲、地黄、麦冬、何首乌、丹参、三七、人参、茯苓、柏子仁、远志、五味子、山茱萸、杜仲、防风、川贝母、甘草植物复方增强记忆制品(简称：复方制品)，具有增强记忆、镇静、安神、催眠作用，药效学考察，复方制品具有如下药理活性。
石菖蒲、地黄、麦冬、何首乌、丹参、三七、人参、茯苓、柏子仁、远志、五味子、山茱萸、杜仲、防风、川贝母、甘草植物复方制品
硫代巴比妥酸、四乙氧基丙烷Flukd、氢溴酸东莨菪碱Adriok，SOD测定试剂盒，戊巴比妥纳Union.。
方法和结果
1.复方制品对小白鼠记忆的影响
取体重18～22g的小白鼠随机分组，每组10只，给药复方制品。末次给药后30分钟。按文献的方法略加修改将小白鼠放入Y型迷宫中进行训练。先将小白鼠放入Y型迷宫中适应5分钟后通36V电压，以连续刺激10次有9次反应正确者为合格小白鼠。24小时后将小白鼠重新放入Y型迷宫中，相同电压刺激10次，记录其出现错误反应的百分数，结果见表1。
表1复方制品对正常小白鼠记忆的影响
| 药物 | 剂量(ml/kg) | 给药时间 | n | 错误反应次数(X±SD) |
| NS | 等容 | Bid×7 | 10 | 0.425±0.114 |
| 复方制品 | 4 | Bid×7 | 10 | 0.293±0.126<sup>**</sup> |
| 复方制品 | 8 | Bid×7 | 10 | 0.211±0.093<sup>***</sup> |
**P＜0.05 ***P＜0.01与NS比较
2.复方制品对东莨菪碱记忆损伤小白鼠的影响
取体重18～20g小白鼠，随机分组，每组10只。给药复方制品，灌胃给予等容量生理盐水做记忆损伤病理模型用。末次给药后60分钟，除生理盐水空白对照组外，复方制品各组均皮下注射氢溴酸东莨菪碱3mg/kg，10分钟后按2.9的实验方法将小鼠放入Y型迷宫中，记录其出现错误反应百分率，观察复方制品对东莨菪碱致小白鼠记忆伤的影响，结果见表2。
表2复方制品对东莨菪碱记忆损伤小鼠的影响
| 药物 | 剂量(ml/kg) | 给药时间 | N | 错误反应次数(X±SD) |
| NS | 等容 | Bid×7 | 10 | 0.309±0.158 |
| NS+东莨菪碱 | 3mg/kg | Bid×7 | 10 | 0.538±0.140TT |
| 复方制品+东莨菪碱 | 48 | Bid×7Bid×7 | 1010 | 0.370±0.144***0.300±0.110*** |
TT P＜0.01模型组与NS比较***P＜0.01与模型对照组比较
3.复方制品对大白鼠学习记忆影响
取大白鼠，随机分组，每组10只。实验组灌胃给予复方制品4.8ml/kg，空白对照组同法给予等容量生理盐水，每天一次，连续7天。末次给药后1小时将大白鼠放入35×45×55cm3的条件反射箱内，箱底为一铜栅，铜栅上置一橡皮垫，底径为5.5cm、高5.5cm。
让大白鼠在箱适应5分钟后，将大白鼠放在橡皮垫上，通电25V，记录大白鼠能在平台上滞留3分钟前跳上平台的次数，做为学习指标。24小时后再次观察同样指标为记忆指标，其结果见表3。
表3复方制品对大白鼠学习记忆的影响
**P＜0.05 ***P＜0.01与NS比较
由表3可以看出，复方制品不仅对正常动物的学习记忆有促进作用，而且对东莨菪碱所致小白鼠的记忆损伤障碍有改善作用，促进学习记忆、改善记忆损伤。
4.复方制品对大白鼠超氧化物歧化酶的影响
取雄性大白鼠，随机分组，每组10只。实验组灌胃给予复方制品4、8ml/kg，另一组同法给予等容量生理盐水作空白对照，每天1次，连续用药15天。末次给药后1小时眶静脉取血，肝素抗凝制备血清，测定大白鼠血浆超氧化物歧化酶(SOD)的活性，结果见表4。
表4复方制品对大白鼠血浆中SOD的活性的影响
| 组别 | 剂量(ml/kg) | 给药时间 | n | SOD活性(X±SD nu/ml) |
| NS | 等容 | qd×15 | 10 | 19.8±3.1 |
| 复方制品 | 4 | qd×15 | 10 | 24.3±4.1<sup>**</sup> |
| 复方制品 | 8 | qd×15 | 10 | 27.1±2.9<sup>***</sup> |
**P＜0.05 ***P＜0.01与NS比较
5.复方制品对大白鼠脑和肝过氧化脂质的影响
用实验4的动物，取血后立即脱臼处死，冰浴环境中迅速取出脑和肝并制成5％的生理盐水均浆液，测定大白鼠脑和肝的脂质过氧化物(见表5)。
表5复方制品对大白鼠肝和脑脂质过氧化物的影响
**P＜0.05 ***P＜0.01与NS比较
由表4、5可以看出，复方制品可明显降低大白鼠脑和肝内脂质过氧化物的生成，显著提高血浆中SOD的活性，并呈现一定的量效关系。
6.复方制品的镇静作用
取体重18～21g的雄性小白鼠随机分组，每组10只。实验组灌胃给予复方制品0.1、0.2ml/10g，空白对照组同法给予等容量生理盐水，30分钟后将小白鼠放入GJ-7902型三光道小鼠活动记录仪内，适应5分钟后，记录小白鼠活动的次数，结果见表1。由表6可见，复方制品具有较好的镇静作用。
表6复方制品的镇静作用
| 组别 | 剂量(ml/kg) | n | 小鼠活动次数(X±SD) |
| NS | - | 10 | 45.6±26.4 |
| 复方制品 | 0.2 | 10 | 8.4±5.6<sup>***</sup>T |
| 复方制品 | 0.1 | 10 | 41.7±18.6<sup>*</sup> |
**P＞0.05 ***P＜0.01与NS比较
7.复方制品的催眠作用
取体重18～22g的小白鼠，随机分组，每组25只。分别灌胃给予复方制品0.08、0.3、0.4ml/10g，戊巴比妥钠30mg/kg，给等容量生理盐水作空白对照，然后将小白鼠放入37℃的恒温婴儿箱内，观察小白鼠的睡眠数，睡眠指标是以翻正反射消失持续30秒以上为准。结果如表7，由表7可见，复方制品高剂量组0.4ml/10g可使大部分动物出现睡眠，但睡眠较浅。30mg/kg戊巴比妥钠全部入睡，说明复方制品有催眠作用。
表7复方制品对小白鼠催眠作用的影响
*P＞0.05与戊巴比妥钠比较TT P＜0.01与NS比较
小结与讨论
药效学研究结果表明，石菖蒲、地黄、麦冬、何首乌、丹参、三七、人参、茯苓、柏子仁、远志、五味子、山茱萸、杜仲、防风、川贝母、甘草植物复方增强记忆制品具有镇静、催眠作用，促进大、小白鼠的学习记忆，明显改善东莨菪碱所致记忆损伤障碍。
复方制品能降低肝、脑的脂质过氧化物的生成，提高机体SOD的活性，具有清除自由基，保护细胞免遭过氧化脂质的损害，起到抗衰老的作用。
植物复方增强记忆制品的临床观察：人们随着年龄的增长，特别进入中、老年期功能衰退或失调，常出现健忘、不寐、心悸、多梦、腰膝酸软、眩晕、耳鸣耳聋。***减退等症状，严重影响中、老年人生活质量和工作效率。石菖蒲、地黄、麦冬、何首乌、丹参、三七、人参、茯苓、柏子仁、远志、五味子、山茱萸、杜仲、防风、川贝母、甘草植物复方增强记忆制品(简称：复方制品)，具有增强记忆治疗失眠的药理活性，为验证其临床疗效，对100例患者进行临床疗效观察，报告如下：
观测指标：
(一)疗效性观测：观察治疗前后临床症状客观指征和脑电图、过氧化脂质(LPO)等理化指标的改善及变化情况。
(二)安全性观测：通过观察治疗前后血常规、尿常规、肝功等项目的变化情况以了解药物的安全性。
治疗结果：
(一)两组临床疗效的比较
从表1可见，复方制品和对照组显效以上百分率分别为45％、15％，总有效率分别为89％、73.3％，经X2检验，P值分别＜0.01和0.05，有非常显著和显著差异。
表1两组临床疗效的比较
| 组别 | 例数 | 临床痊愈 | 显效 | 有效 | 无效 | 显效以上百分率 | 总有效率 |
| 复方制品 | 100 | 4 | 41 | 44 | 11 | 45％ | 29％ |
| 对照组 | 60 | 0 | 9 | 35 | 16 | 15％ | 73.3％ |
(二)主要症状与疗程、疗效的关系
1.失眠与疗程、疗效的关系
从表2可见，复方制品组用药2周后症状积分值下降138分，下降率为29.9％，4周后下降396分，下降率85.9％，经X2检验，P＜0.01，有非常显著差异。治疗4周后积分下降率超过2/3。提示该复方制品对失眠症状有明显的疗效，服食复方制品4周后疗效明显优于2周的疗效。
表2失眠与疗程、疗效的关系
2.腰膝酸软与疗程、疗效的关系
从表3可见，复方制品组用药2周、4周后下降分数和下降率分别为64分、17.6％；219分、60.2％，经X2检验，P＜0.01，有非常显著差异，提示对该症状服食复方制品4周后的疗效优于2周的疗效，且用药4周后下降率大于总积分的1/3，说明对该症状的疗效是肯定的。
表3腰膝酸软与疗程、疗效的关系
3.健忘与疗程、疗效的关系
从表4可见，复方制品组用药2周、4周后下降分数和下降率分别为52分、11％；125分、27％，经X2检验，P＜0.01，有非常显著差异，提示对该症状服食复方制品4周后的疗效优于2周的疗效。
表4健忘与疗程、疗效的关系
(三)主要理化指标及常规检查治疗前后的变化
复方制品组治疗前后检查脑电图均为正常脑电图，血清过氧化脂质检测(LPO)，治疗前为18.56±4.43nmol/ml，高于正常值，服食复方制品治疗后下降至10.47±4.06nmol/ml，降至正常范围。经T检验，P＜0.001，有非常显著差异，复方制品有明显降低血中LPO的作用。服食复方制品后，血常规、尿常规及肝功，治疗前后均无改变。治疗期未出现任何毒副反应。
讨论与小结
1.石菖蒲、地黄、麦冬、何首乌、丹参、三七、人参、茯苓、柏子仁、远志、五味子、山茱萸、杜仲、防风、川贝母、甘草植物复方增强记忆制品临床治疗100例患者，其总有效率和显效以上百分率分别为89％、45％，有增强记忆、减轻和改善健忘的作用。
2.复方制品组对不寐、腰膝酸软等主症，心悸、多梦、耳聋耳鸣等常见次要症状有显著的疗效。对疲倦乏力等次要症状亦有一定疗效。
3.通过健忘、失眠、腰膝酸软三个主证治疗2周与治疗4周后疗效的比较，可以看出复方制品4周后的疗效优于2周的疗效。为复方制品服用的疗程提供一定的临床依据。
4.复方制品有降低血中过氧化脂质的作用，提示该药有一定的抗氧化、抗自由基及抗衰老作用。
5.复方制品在观察疗程期间，血、尿、肝功等常规指标未见明显改变，亦未发现任何毒副作用。复方制品疗效较好，服用方便、口感好。
从天然植物复方制剂中提取增强记忆制品药物的方法药效学试验资料
复方制品由石昌蒲、柏子仁、人参等十几种中药组成，临床试用具有镇静、安神、催眠、增强记忆、延年益寿等功效。本文对其主要药效学进行了考察。
一、实验材料
复方制品：沈阳飞龙保健品有限公司提供，批号930228
腹复康：购自东北制药总厂
参茸王浆：吉林通化白山制药二厂，批号：920421
安神健脑液：北京同仁堂中药提炼厂，批号：921231
硫代巴比妥酸：北京化学二厂
四乙氧基丙烷Flukd、氢澳酸东莨菪碱Adrlck
SOD测定试剂盒，购自海军军区总医院分子生物实验室
戊巴比妥钠Union进口分装，上海化学试剂采购供应站分装厂。
实验中所用其它试剂均为市售分析纯。
二、方法与结果
(1)复方制品的镇静作用
取体重18～21g的雄性小白鼠随机分4组，每组10只。实验组灌胃给予复方制品0.1、0.2ml/10g，阳性对照组同法给予安神健脑液0.2ml/10g，空白对照组同法给予等容量生理盐水，30分钟后将小白鼠放入GJ-7902型三光道小鼠活动记录仪内，适应5分钟后，记录小白鼠活动的次数，结果见表1。由表1可见，复方制品具有较好的镇静作用，镇静效果与安神健脑液相当。
表1复方制品的镇静作用
*P＞0.05 ***P＜0.01与NS比较T P＞0.05与安神健脑液比较
2.复方制品与戊巴比妥钠的协同作用
取体重18～22g的小白鼠，随机分为6组，每组25只，前2组分别灌胃给予复方制品和安神健脑液各0.2mlg/10g，后4组分别灌胃给予复方制品0.1、0.2ml/10g、安神健脑液0.2ml/10g及等量生理盐水，5分钟后，均腹腔注射戊巴比妥钠15mg/10g，给药后将小白鼠放入37℃的恒温婴儿箱内，观察小白鼠的睡眠反应数。睡眠指标是以小白鼠翻正反射消失持续1分钟以上为准。结果见表2。由表2可见，两药与戊巴比妥钠阈下催眠量15mg/kg均有协同作用，补心健脑液起效快，维持时间长，间接说明了补心健脑液的作用快、作用强。
表2复方制品与戊巴比妥钠睡眠协同作用
**P＜0.05 **P＜0.01与NS比较TT P＜0.05与安神健脑液比较
3.复方制品的催眠作用
取体重18～22g的小白鼠，随机分成7组，每组25只。分别灌胃给予复方制品0.08、0.3、0.4ml/10g，戊巴比妥钠30mg/kg，第七组给等容量生理盐水作空白对照，然后将小白鼠放入37℃的恒温婴儿箱内，观察小白鼠的睡眠数，睡眠指标是以翻正反射消失持续30秒以上为准。结果如表3，由表3可见，复方制品高剂量组0.4ml/10g可使大部分动物出现睡眠，但睡眠较浅。安神健脑液小剂量、大剂量均无睡眠动物，30mg/kg戊巴比妥钠全部入睡。说明复方制品有催眠作用，而市售安神健脑液40ml/kg无催眠作用。
表3复方制品对小白鼠催眠作用的影响
*P＞0.05与戊巴比妥钠比较TT P＜0.01与NS比较
4.复方制品对小白鼠急性脑缺血的影响
取体重18～22g的小白鼠随机分成5组，每组10只。实验组灌胃给予补心健脑液4、8ml/kg，参茸王浆8ml/kg、脑复康300mg/kg，另一组同法给予等容量生理盐水作对照，每天给药2次，连续用药7天。末次给药后40分钟从小白鼠双耳后颈部断头，观察小白鼠从断头开始至最后一次喘气终止的时间做为断头喘气的维持时间，结果见表4。由表4可见，复方制品可明显延长小白鼠断头喘气时间，剂量加大，作用时间延长，呈现一定的量效关系。其作用相当于临床等效量的参茸王浆组，而明显优于脑复康组。
表4复方制品对小白鼠断头喘气时间的影响
**P＞0.05 **P＜0.05与NS比较
T P＞0.05与参茸王浆口服液比较
ZZ P＜0.01与脑复康比较
5.复方制品对结扎双侧颈总动脉小鼠存活时间的影响
末次给药后40分钟，将小白鼠用***浅麻醉，迅速分离双侧颈总动脉，连同迷走神经一起结扎，观察小白鼠的存活时间，结果见表5。由表5可见，复方制品可明显延长结扎双侧颈总动脉的存活时间，高剂量组明显高于参茸王浆组和脑复康组，说明其对脑缺血及对迷走神经兴奋所致血压下降引起的脑缺血均有较强的保护作用。
表5复方制品对结扎双侧颈总动脉小白鼠存活时间的影响
**P＞0.05 **P＜0.05 ***P＜0.01与NS比较
TT P＜0.05与脑复康比较
6.复方制品对小白鼠常压耐缺氧的影响
末次给药后30分钟将小白鼠放入盛有10g碱石灰250ml的广口瓶内，密封后观察小白鼠的存活时间，结果如表6。复方制品明显延长小白鼠常压缺氧条件下的存活时间，延长百分率与参茸王浆组相近似，较300mg/kg脑复康组延长了17.8％。
表6复方制品对常压缺氧小白鼠存活时间的影响
**P＜0.05 ***P＜0.01与NS比较
7.复方制品对小白鼠游泳时间的影响
末次给药后30分钟，每只小白鼠按20g体重加0.5g负荷，然后将小白鼠放入39±1℃的恒温水浴槽内，水中加入适量的表面活性剂，水的体积为60×65×50cm3。小白鼠在较高温度的热应激环境中游泳，观察其游泳时间。游泳时间是以小白鼠沉入水底不再上游为游泳时间，结果见表7。由表7可见，复方制品可明显延长小白鼠高温应激环境中的游泳时间，其延长作用与参茸王浆相似，而长于300mg/kg脑复康。说明复方制品具有较强的抗疲劳、抗应激作用。
表7复方制品对小白鼠游泳时间的影响
**P＜0.05与NS比较*P＞0.05
8.复方制品对小白鼠游泳时间的影响
取雄性大白鼠，随机分为5组，每组10只。实验组分别灌胃给予复方制品4、8ml/kg，阳性对照组灌胃给予参茸王浆8ml/kg，脑复康200mg/kg。每天一次，连续7天。末次给药后每只大鼠按每100g加4g负荷，然后放入39±1℃的恒温水浴中，浴槽水体积为60×65×50cm3，并加入适当的表面活性剂，每次放大鼠10只。按实验7的方法记录大白鼠在高温应激环境中的游泳时间，结果见表8。复方制品明显延长大白鼠在高温应激环境中的游泳时间，高剂量组作用明显，其游泳时间最长，明显长于脑复康组28.96％。
表8复方制品对小白鼠游泳时间的影响
*P＞0.05 **P＜0.05 ***P＜0.01与NS比较
9.复方制品对小白鼠记忆的影响
按实验4的方法分组，给药。末次给药后30分钟。将小白鼠放入Y型迷宫中进行训练。先将小白鼠放入Y型迷宫中适应5分钟后通36V电压，以连续刺激10次有9次反应正确合格小白鼠。24小时后将小白鼠重新放入Y型迷宫中，相同电压刺激10次，。记录其出现错误反应的百分数，结果见表9。
表9复方制品对正常小白鼠记忆的影响
**P＜0.05 ***P＜0.01与NS比较
10.复方制品对东莨菪碱记忆损伤小白鼠的影响
取体重18～22g小白鼠，随机分为6组，每组10只。前五组按实验4的方法给药，第六组灌胃给予等容量生理盐水做记忆损伤病理模型用。末次给药后60分钟，除生理盐水空白对照组外，其余各组均皮下注射氢溴酸东莨菪碱3mg/kg，10分钟后按2g的实验方法将小鼠放入Y型迷宫中，记录其出现错误反应百分率，观察药物对东莨菪碱致小白鼠记忆损伤的影响，结果见表10。
表10复方制品对东莨菪碱记忆损伤小鼠的影响
TT＜0.01模型组与NS比较 ***P＜0.01与模型对照组比较
11.复方制品对大白鼠学习记忆的影响
取大白鼠，随机分为5组，每组10只。实验组分别灌胃给予复方制品4.8ml/kg，参茸王浆8ml/kg，脑复康200mg/kg，空白对照组同法给予等容量生理盐水，每天一次，连续7天。末次给药后1小时将大白鼠放入35×45×55cm3的条件反射箱内，箱底为一铜栅，铜栅上置一橡皮垫，底径为5.5cm、高5.5cm。让大白鼠在箱适应5分钟后，将大白鼠放在橡皮垫上，通电25V，记录大白鼠能在平台上滞留3分钟前跳上平台的次数，做为学习指标。24小时后再次观察同样指标为记忆指标，其结果见表11。
表11复方制品对大白鼠学习记忆的影响
**P＜0.05 ***P＜0.01与NS比较
由表11可以看出，复方制品不仅对正常动物、学习记忆有促进作用，而且对东莨菪碱所致小白鼠的记忆损伤障碍有改善作用。其促进学习记忆、改善记忆损伤作用与市售参茸王浆相似，但对小鼠的促进记忆作用不如脑复康。
12.复方制品对大白鼠超氧化物歧化酶的影响
取雄性大白鼠，随机分为5组，每组10只。实验组灌胃给予复方制品4、8ml/kg，阳性对照组灌胃给予参茸王浆和脑复康各8ml/kg和200mg/kg。另一组同法给予等容量生理盐水作空白对照，每天1次，连续用药15天。末次给药后1小时眶静脉取血，肝素抗凝制备血清，测定大白鼠血浆超氧化物歧化酶(SOD)的活性，结果见表12。
表12复方制品对大白鼠血浆中SOD的活性的影响
**P＜0.05 ***P＜0.01与NS比较
13.复方制品对大白鼠脑和肝过氧化脂质的影响
取血后立即脱臼处死，冰浴环境中迅速取出脑和肝并制成5％的生理盐水均浆液，测定大白鼠脑和肝的脂质过氧化物，结果见表12。
表13复方制品对大白鼠肝和脑脂质过氧化物的影响
**P＜0.05 ***P＜0.01与NS比较
由表12、13可以看出，复方制品可明显降低大白鼠脑和肝内脂质过氧化物的生成，显著提高血浆中SOD的活性，并呈现一定的量效关系。其抑制脂质过氧化物的生成和增强SOD活性的作用，明显优于市售参茸王浆和脑复康组。
小结与讨论
药效学研究结果表明，复方制品具有镇静、催眠及与戊巴比妥钠的协同作用，其作用优于市售安神健脑液。对急性脑缺血、缺氧具有保护作用，提高机体对全身缺氧的耐受能力，延长大、小白鼠在高温应激环境中的游泳时间，增强机体的抗应激能力和机体的耐力，促进大、小白鼠的学习记忆，明显改善东莨菪碱所致记忆损伤障碍，除记忆方面弱于脑复康外，其它各项药理作用或与市售参茸王浆相似，或强于参茸王浆的多项药理作用均优于脑复康。
复方制品尚能降低肝、脑的脂质过氧化物的生成，提高机体SOD的活性，这两方面作用均强于参茸王浆和脑复康组。提示该药具有清除自由基，保护细胞免遭过氧化脂质的损害，起到抗衰老的作用。
Claims (2)
1. 从天然植物复方制剂中提取增强记忆制品药物的方法，其特征在于将以下16位天然产物石菖蒲、地黄、麦冬、何首乌、丹参、三七、人参、茯苓、柏子仁、远志、五味子、山茱萸、杜仲、防风、川贝母、甘草，采用先进的大孔树脂吸附有效成份，并使用气相指痕光谱定量；其重量百分比为石菖蒲8.57％、地黄11.35％、麦冬11.35％、何首乌5.67％、丹参5.67％、三七3.53％、人参5.67％、茯苓5.67％、柏子仁5.67％、远志2.83％、五味子5.67％、山茱萸5.67％、杜仲5.67％、防风5.67％、川贝母5.67％、甘草5.67％；将石菖蒲、地黄、麦冬、何首乌、丹参、三七、人参、茯苓、柏子仁、远志、五味子、山茱萸、杜仲、防风、川贝母、甘草植物原料，每100kg加水600kg、400kg、200kg，在100℃条件下分别提取3小时，2小时、1小时，合并水提取滤液，通过大孔树脂填充的柱子，用大孔树脂吸附，用65％的乙醇，在常温下，将吸附在大孔树脂上的成份洗脱至乙醇中，在85℃条件下，喷雾干燥，用高效液相色谱测定仪进行指痕图谱成份定量测定后，制成标准原料药。
2. 按照权利要求1所述从天然植物复方制剂中提取增强记忆制品药物的方法，其特征在于所述的原料药可以制备成片剂、丸剂、胶囊、口服液、合剂、颗粒剂及针剂。
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