CH624123A5

CH624123A5 -

Info

Publication number: CH624123A5
Application number: CH1094877A
Authority: CH
Inventors: Anne Mary Von Esch
Original assignee: Abbott Lab
Priority date: 1976-09-08
Filing date: 1977-09-07
Publication date: 1981-07-15
Also published as: NL7709639A; US4138432A; CA1108131A; US4087522A; DE2740354A1; FR2364224A1; GB1565025A; AU2809677A; AU511458B2; FR2364224B1; JPS5334726A

Description

L'invention permet de préparer un médicament pour traiter les infections provoquées par le virus de l'herpès de l'homme (c'est-à-dire les herpès virus des types 1 et 2) chez les animaux à sang chaud, qui consiste en un amide de l'acide phosphonoacétique de 15 formule dans laquelle R et R' ont les significations mentionnées ci-dessus et R" représente un radical alkyle, par l'acide bromhydrique dans l'acide acétique glacial.

2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on prépare des composés de formule I, dans laquelle R représente ch3(ch2)2 - , ch3(ch2)3 - ou ch3(ch2)7 - et R' représente un atome d'hydrogène.

3. Procédé de préparation de composés de formule I telle que définie à la revendication 1 et de leurs sels minéraux, caractérisé en ce qu'on fait réagir un phosphonate de diméthyle de formule:

O

î

hooc-ch2- p-och3

La présente invention concerne des procédés de préparation d'amides de l'acide phosphonoacétique utiles comme médicaments actifs notamment contre l'herpès de l'homme.

O

II

R-N-C-CH,

I

R'

0

î

P-OH

1

OH

(I)

20 où R représente un radical alkyle en C2-C10, cycloalkyle en C3-C8, benzyle ou adamantyle et R' représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle en C2-C10, et les sels minéraux correspondants.

Les amides précités sont efficaces contre le virus de l'herpès de l'homme in vivo lorsqu'on les administre sous la forme acide ou sous 25 la forme de sels de métaux alcalins, en particulier de sodium ou d'ammonium. On administre de préférence les composés par voie locale, mais on peut également les administrer par voie orale.

Comme la réplication des virus herpétiques dépend d'une ADN-polymérase particulière indépendante de l'ADN-polymérase 30 du mammifère hôte, on peut arrêter le développement du virus en inhibant cette enzyme indispensable.

Les amides de l'acide phosphonoacétique sont des inhibiteurs puissants de cette enzyme.

Conformément à l'invention, on prépare les amides de l'acide 35 phosphonoacétique de formule I selon deux procédés. Dans le premier procédé (procédé A), on met en suspension un (alkyl-carbamoyl)méthylphosphonate de monoalkyle dans de l'acide bromhydrique à 25% à la concentration de 1 g/10 ml dans l'acide acétique glacial. On laisse le mélange reposer à la température ordi-40 naire pendant une nuit, puis on le concentre sous pression réduite pour obtenir une huile visqueuse. Lorsqu'on ajoute un solvant approprié tel que le méthanol, le composé cristallise. On peut illustrer le procédé A (R représente un radical alkyle et R' représente un atome d'hydrogène) par l'équation suivante:

45 R. O O O O

\ I î HBR II t

,N- C-ŒL-P-OH ► R-N-C-CH,-P-OH

/ | Acide acetique | |

R' OR" R' OH

Dans le second procédé (procédé B), on dissout dans 100 ml de

50 chlorure de méthylène une amine appropriée et un (carboxyméthyl)

phosphonate de diméthyle approprié. En agitant la solution, on ajoute par portions du dicyclohexylcarbodiimide. On agite ensuite la solution pendant une nuit, puis on sépare par filtration la dicyclo-

hexylurée. Après filtration, on concentre le filtrat sous la forme

55 d'un solide que l'on traite par l'acide bromhydrique dans l'acide acétique, puis qu'on recristallise dans un solvant approprié tel que le méthanol. Le procédé B est illustré par le diagramme réactionnel suivant: O O O O

„ Il ' H DCG II II

60 R-NH+HO C-CH,-P-OCH, R-N-C-CH,-P-OCH

R'

OCH3 O

'CH2C12

o

R'

OCH,

R-N-C-CH,-P-OH

HBr-acide acétique

R' oh où F et R' ont la même définition que précédemment.

3

624 123

Parmi les amides de l'acide phosphonoacétique que l'on peut préparer selon le procédé A précédemment décrit, figurent:

II. Acide [(propylcarbamoyl)méthyï\phosphonique

CH,(CH2l O O

\ Il II

^N—C—CH. —P —OH

/ I

H OH

III. Acide [(butylcarbamoyï)méthyï\phosphonique

CH3(CH2):

\

O

N-C-CH,-P-OH

H OH

IV. Acide [(octylcarbamoyl)méthy{]phosphonique

CH3(CH2), O O

\ Il II

^N-C-CH2-P-OH

H OH

et, parmi ceux que l'on peut préparer selon le procédé B, figurent:

V. Acide [(cyclohexylcarbamoyl)méthyl~\phosphonique

C\:

0

II

'n-c-ch„-p-oh h/ m

VI. Acide \{benzylcarbamoyl)méthyï]phosphonique w ch.

-c-ch,-p-oh oh

VII. Acide [Jtert-butylcarbamoyï)méthy{]phosphonique ch.

0

h

0

n n-c-ch -p-oh

^ i oh

VIII. Acide [(adamantylcarbamoyl)méthyï]phosphonique

0

n c-ch9-p-oii oh

IX. Acide [(diéthylcarbamoyl)méthyf\phosphonique

CH3CH2

\ /

O

o

N-C-CH,-P-OH I

OH

L'invention est illustrée par les exemples suivants.

Exemple 1 :

Acide [(propylcarbamoyl)méthyï]phosphonique (II)

On met en suspension 1 g de (propylcarbamoylméthyl)-phosphonate de monométhyle dans 10 ml d'acide bromhydrique dans l'acide acétique glacial. On laisse la solution reposer pendant une nuit à la température ordinaire. On concentre ensuite la solution sous la forme d'une huile visqueuse, sous pression réduite. Lorsqu'on ajoute du méthanol, le composé cristallise; F 155-160°C; rendement 47%.

10

Analyse pour C5H12N04P:

Calculé: C 33,15 H 6,68 N7,73%

Trouvé: C 33,36 H 6,97 N7,87%.

15 Exemple 2:

Acide [(butylcarbamoyl)méthyl]phosphonique (III)

On obtient l'acide [(butylcarbamoyl)méthyl]phosphonique selon le mode opératoire décrit dans l'exemple 1 ci-dessus, si ce

20 n'est que l'on remplace le (propylcarbamoylméthyl)phosphonate de monométhyle par le (butylcarbamoylméthyl)phosphonate de monométhyle. Le produit a un point de fusion de 115-125°C; rendement 69%.

Analyse pour C6H14N04P:

25 Calculé: C 36,93 H 7,23 N7,18%

Trouvé: C 36,53 H 7,54 N 7,42%.

Exemple 3 :

Acide [(octylcarbamoyl)méthyf]phosphonique (IV)

On prépare l'acide [(octylcarbamoyl)méthyl]phosphonique selon le mode opératoire décrit dans l'exemple 1 ci-dessus, si ce n'est qu'on utilise l'(octylcarbamoylméthyl)phosphonate de monométhyle. On cristallise le composé dans l'acide chlor-hydrique IN. F 142-143°C; rendement 22%,

35

Analyse pour C10H22NO4P:

Calculé: C 47,80 H 8,82 N5,58%

Trouvé: C 47,52 H 9,00 N 5,56%.

40 Exemple 4:

Acide \{cyclohexylcarbamoyï)méthyï]phosphonique (V) On dissout 0,045 mol de cyclohexylamine et 0,04 mol de (carboxyméthyl)phosphonate de diméthyle dans 100 ml de chlorure de méthylène. On agite la solution et on ajoute par portions

45 0,045 mol de dicyclohexylcarbodiimide. On agite la solution pendant une nuit et on filtre le mélange. On concentre le filtrat et on le traite par l'acide bromhydrique dans l'acide acétique, pour obtenir un solide que l'on recristallise dans un solvant approprié tel que le méthanol. F 180-183°C; rendement 57%.

50

Analyse pour C8H16N04P:

Calculé: C 43,47 H 7,29 N 6,33%

Trouvé: C 43,19 H 7,64 N6,42%.

55 Exemple 5 :

Acide \jpenzylcarbamoyl)méthyï\phosphonique (VI)

On dissout 0,045 mol de benzylamine et 0,04 mol de (carboxyméthyl)phosphonate de diméthyle dans 100 ml de chlorure de méthylène. On agite la solution et on ajoute par portions du

60 dicyclohexylcarbodiimide. On agite la solution pendant une nuit et on filtre le mélange. On concentre le filtrat et on le traite par l'acide bromhydrique dans l'acide acétique, pour obtenir un solide que l'on cristallise dans un solvant approprié tel que le méthanol. F 130-134°C; rendement 76%.

Analyse pour C9H12N04P:

Calculé: C47,17 H 5,20 N6,ll%

Trouvé: C 47,50 H 5,59 N6,51%.

65

624 123

4

Exemple 6:

Acide [(tert-butylcarbamoyl)méthyQphosphonique (VII) On dissout dans 100 ml de chlorure de méthylène, 0,045 mol de tert-butylamine et 0,04 mol de (carboxyméthyl)phosphonate de diméthyle. On agite la solution et on ajoute par portions du dicyclohexylcarbodiimide. On agite la solution pendant une nuit et on filtre le mélange. On concentre le filtrat et on le traite par l'acide bromhydrique dans l'acide acétique, pour obtenir un solide. On recristallise dans un solvant approprié tel que le méthanol. F 163-165°C; rendement 61%.

Analyse pour C6H14N04P:

Calculé: C 35,46 H 7,25 N6,77%

Trouvé: C 35,30 H 7,04 N6,86%.

Exemple 7."

Acide [(adamantylcarbamoyl)méthyï\phosphonique (VIII) On dissout 0,045 mol d'adamantylamine et 0,04 mol de (carboxyméthyl)phosphonate dë diméthyle dans 100 ml de chlorure de méthylène. On agite la solution et on ajoute par portions du dicyclohexylcarbodiimide. On agite la solution pendant une nuit et on filtre le mélange. On concentre le filtrat et on le traite par l'acide bromhydrique dans l'acide acétique, pour obtenir un solide. On recristallise dans un solvant approprié tel que le méthanol. F 190-194°C; rendement 32%.

Analyse pour C12H20NO4P:

Calculé: C 52,35 H 8,06 N 5,09%

Trouvé: C 52,74 H 7,78 N5,09%.

Exemple 8:

Acide [(diéthylcarbamoyl)méthyl]phosphonique (IX)

On dissout dans 100 ml de chlorure de méthylène 0,045 mol de diéthylamine et 0,04 mol de (carboxyméthyl)phosphonate de diméthyle. On agite la solution et on ajoute par portions du dicyclohexylcarbodiimide. On agite la solution pendant une nuit et filtre le mélange. On concentre le filtrat et on le traite par l'acide bromhydrique dans l'acide acétique, pour obtenir un solide. On recristallise dans un solvant approprié tel que le méthanol.

Analyse pour C6H14N04P:

Calculé: C 36,09 H 7,23 N7,18%

Trouvé: C 36,92 H 7,53 N7,15%.

Herpès virus humain; isolement et purification de l'ADN-polymérase du virus de l'herpès humain de type 2

On cultive des cellules Wi-38 infectées par le virus de l'herpès humain et on les recueille lorsqu'on observe l'effet cy topathologique sur 25% des cellules. On isole l'ADN-polymérase selon le mode opératoire décrit par Smith et Gallo (1972) qui comporte une Chromatographie sur colonne de DEAE-cellulose et de phospho-cellulose. Cependant, on utilise un tampon renfermant 20% de glycérol au lieu de 10%. La préparation enzymatique finale a une activité spécifique de 313 unités/mg de l'herpès virus humain de

Détermination de l'ADN-polymérase virale

Le mélange réactionnel (0,2 ml) renferme 10 nM de désoxy-2' adénosine-5'-triphosphate, de désoxy-2' cytidine-5'-triphosphate, de désoxy-2' guanosine-5'-triphosphate et 2,5 (iM de thymidine-5'-triphosphate tritié que l'on a dilué de façon appropriée avec du dTTP non marqué pour obtenir 880 comptages/mn par picomole, 10 ng d'ADN de thymus de veau activé, 50 mM de tampon tris-HCl (pH 8,0), 3 mM de chlorure de magnésium, 100 mM de chlorure de potassium et 1 mM de dithiothritol. On choisit les quantités d'enzyme utilisées dans chaque réaction de façon à obtenir une vitesse linéaire pendant au moins 30 mn à 37° C. On arrête la réaction en ajoutant 3 ml d'un mélange froid de 5% d'acide tri-

chloroacétique 0,01 M en pyrophosphate de sodium. On recueille la matière insoluble en milieu acide, on la lave deux fois sur des disques filtrants en verre (Reeve Angel 984-H), puis on détermine le 3H-dTMP avec un compteur à scintillation liquide.

L'effet de chacun des composés sur l'inhibition de l'ADN-polymérase de l'herpès virus humain de type 2 figure dans le tableau I.

Tableau I

Composé

Concentration (ng/ml)

Inhibition (%)

II

>166

50

III

2

50

IV

>166

50

V

5,9

50

VI

>166

50

VII

>166

50

Vili

16,6

50

Test de l'herpès cutané chez la souris

Sous anesthésie légère à l'éther, on épile une zone de 20 mm de côté sur le dos de souris femelles CF pesant 20 g. On applique localement à la peau dénudée 0,05 ml de virus de l'herpès humain de type 2 (107'° DL50(TC)/ml) et on imprègne le derme avec une aiguille hypodermique stérile de 55/100.

Des lésions ou des vésicules herpétiques apparaissent en 3 à 5 j. Les lésions forment des bandes qui s'étendent sur la zone dénudée. Après 10 j, la souris présente une paralysie qui aboutit généralement à la mort. On laisse l'essai se poursuivre pendant au total 17 j.

On applique aux souris traitées par voie locale l'amide phosphonoacétique au point d'infection sous la forme d'une suspension aqueuse à 2%, 2 h après l'application du virus, puis deux fois par jour pendant 5 j consécutifs. On applique au total onze fois le composé. Une application unique d'une suspension à 2% de l'amide phosphonoacétique apporte environ 2 mg d'ingrédient actif. La dose totale administrée à une souris est donc de 2 mg x 11=22 mg.

Les souris traitées par voie orale reçoivent l'amide phosphonoacétique par gavage. On effectue la première administration 2 h après l'application du virus à la peau. On poursuit le traitement deux fois par jour pendant 6 j consécutifs. Les souris reçoivent donc au total onze administrations pendant l'expérience. La posologie habituelle est de 800 mg/kg/j, ce qui correspond à une dose totale de 96 mg par souris.

Efficacité des médicaments de formule I

On utilise le test U de Mann-Whitney (Siegal, S., «Non-Parametric Statistics for the Behavioral Sciences», McGraw Hill (1956), p. 116) pour effectuer l'analyse statistique de l'infection herpétique chez la souris par comparaison de groupes traités et de groupes témoins appariés. On considère comme actifs uniquement les groupes présentant des différences statistiques significatives (p s 0,10) par rapport aux groupes témoins infectés par le virus.

On effectue la classification en fonction de la gravité de l'infection selon une échelle de gravité (mort, paralysie, lésions) et le moment d'apparition des symptômes. Le score final d'un animal constitue son rang. On utilise le moment de l'apparition d'un symptôme pour éviter les égalités des scores finals.

Les résultats des essais figurent dans le tableau II.

(Tableau enfin de brevet)

5

10

15

20

25

30

35

.40

45

50

55

60

65

Tableau II:

Test de l'herpès de la souris

Composé

Voie d'administration

P

II

III

IV

Locale Locale | Locale 1 Orale

0,05 0,05 0,10 0,05

Claims

624 123

2

REVENDICATIONS

1. Procédé de préparation de composés de formule: R O

\ î

.N—CO—CH,—P-OH

/ I

R' OH

(I)

dans laquelle R représente un radical alkyle en C2-C10, cycloalkyle en C3-Cg, benzyle ou adamantyle, et R' représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle en C2-C10, et des sels minéraux correspondants, caractérisé en ce qu'on traite un phosphonate de monoalkyle de formule:

R

\ /

N-CO-CH,

R'

0

î

P-

1

OR"

OH

OCTL

et une amine de formule:

R

HN

/ \

R'

dans laquelle R et R' ont les significations mentionnées à la revendication 1, en présence de dicyclohexylcarbodiimide dans le chlorure de méthylène, puis on traite le phosphonate ainsi formé, de formule :

R

\

/

N-CO-CH,

O

t

P-

•OCH,

R'

OCH,

par l'acide bromhydrique dans l'acide acétique glacial.
4. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que l'on prépare des composés de formule I, dans laquelle R représente

O

ÏH3 CH-.-C- ou 3 i

CH3

et R»

représente un atome d'hydrogène ou R et R' représentent chacun

CH3CH2~.

Les infections provoquées par les virus herpétiques sont bien connues et difficiles à traiter en raison du manque de médicaments efficaces. On recherche un médicament efficace pour le traitement ou la prévention des dermatites herpétiques, de l'herpès génital, de la s kératite herpétique, de l'encéphalite herpétique et plus généralement des maladies provoquées par le virus de l'herpès de l'homme. L'herpès est chez l'homme une maladie très courante de gravité modérée dont le seul traitement fondamental que l'on connaisse à ce jour consiste en des applications d'iodo-5 désoxy-2' uridine io (iodoxuridine).