CA2705838A1

CA2705838A1 - Compositions de derives polyphenoliques flavonoidiques et leurs applications pour lutter contre les pathologies et le vieillissement des organismes vivants

Info

Publication number: CA2705838A1
Application number: CA2705838A
Authority: CA
Inventors: Joseph Vercauteren
Original assignee: Individual
Current assignee: Caudalie
Priority date: 2007-11-15
Filing date: 2008-11-17
Publication date: 2009-05-22
Also published as: EP2219641A1; CN101909618A; JP2011503171A; RU2010123791A; US20100266523A1; FR2923718B1; JP2014141519A; WO2009063439A1; RU2499596C2; FR2923718A1

Abstract

L'invention a pour objet des compositions de dérivés de polyphénols, caractérisées en ce que lesdits polyphénols renferment des monomères, des oligomères ou des polymères d'unités répondant à la formule (I) : ces unités étant caractérisées par la présence simultanée d'un noyau de type phloroglucinol (noyau A) et d'un noyau de type catéchol (noyau B), reliés entre eux par un segment à 3 carbones tel que C, lesdits dérivés étant suractivés, en ce qui concerne leur pouvoir nucléophile, par alkylation d'au moins une fonction phénolique de chaque unité monomérique constitutive et stabilisés par estérification par des mélanges d'acides gras en proportions reflétant celles d'huiles végétales majoritairement constituées d'AGI, de toutes les autres. Application desdites compositions notamment en cosmétique, diététique et thérapeutique.

Description

Compositions de dérivés polyphénoliques flavonoïdiques et leurs applications pour lutter contre les pathologies et le vieillissement des organismes vivants L'invention a pour objet des compositions de dérivés polyphénoliques flavonoïdiques pour prévenir et lutter contre la plupart des pathologies et le vieillissement des tissus et des organismes vivants. Elle concerne également un procédé de préparation de ces compositions ainsi que leurs applications, notamment, dans les domaines cosmétique, diététique et thérapeutique.

Depuis plus d'un demi-siècle, s'est développée l'hypothèse selon laquelle le vieillissement de l'organisme humain résulte de l'accumulation de multiples dégâts causés aux tissus par des espèces radicalaires ou de réactivités chimiques oxydantes.

Au milieu des années 50, après de nombreux travaux sur le caoutchouc, le chimiste Harman constatait qu'empêcher la formation de radicaux libres était le moyen le plus sûr de lutter contre sa dégradation et son craquèlement. Par analogie, il suggère alors que le vieillissement des tissus chez l'homme (apparition de rides sur la peau, par exemple) serait dû à la formation anormale au sein des cellules, d'espèces chimiques très réactives, et notamment, de radicaux libres et aux suites de réactions qu'elles déclenchent.

Des espèces oxygénées réactives (EOR) sont formées au niveau mitochondrial par transfert incontrôlé d'électron(s) à
l'oxygène (EOR : anion superoxyde, peroxydes, peroxynitrites, radicaux libres, ...) .

2 PCT/IB2008/054814 Ces EOR se propagent ensuite aux autres compartiments cellulaires ou au cytoplasme, en fonction de leur hydro/liposolubilité, où elles créent des dégâts considérables.

Dans un tel contexte, la recherche de substances actives pour lutter contre le vieillissement s'est faite, durant ces dernières décennies, sur la base de leur capacité à briser les réactions d'oxydation en chaîne, c'est-à-dire à prévenir le stress oxydant. Effectivement, toute substance capable d'interagir avec les EOR, en diminue les effets délétères et, sur le plus long terme, aura un impact positif sur la santé
et, pour les mêmes raisons, ralentira le vieillissement comme le développement des principales pathologies. Il s'agit de piégeurs de radicaux libres (aptitude à délivrer un seul électron à la fois) et/ou antioxydants (transfert de deux électrons en même temps) tels que les vitamines (E et C) et les polyphénols.

Toutefois, les dégâts qui provoquent le vieillissement de l'organisme ou qui accompagnent les principales pathologies, ne seraient pas seulement la conséquence d'un mauvais contrôle du flux d'électrons dus aux fuites du métabolisme mitochondrial et des EOR intracellulaires, mais impliqueraient également d'autres sources d'effets délétères potentiels faisant intervenir la réaction de Maillard et le stress carbonylé.

Dans le stress carbonylé, la fonction carbonyle (aldéhyde) du glucose exerce ses propriétés électrophiles vis à vis des résidus nucléophiles des protéines (amines, thiols, ...) : c'est le point de départ du stress carbonylé qui s'amplifie par formation de propagateurs.

3 PCT/IB2008/054814 Les espèces chimiques créées, ou produits de glycation, sont considérées comme des produits de fins : ce sont des AGEs pour Advanced Glycated End-Products , dans lesquels, le glucose ou ses fragments sont liés aux résidus aminoacides de manière irréversible.

Les réactions de Maillard qui se produisent augmentent dans le même temps, la capacité réductrice des sucres et de leurs dérivés. Les composés dicarbonylés qui se forment, acquièrent une oxydabilité bien plus forte encore que leurs précurseurs et transfèrent facilement leurs électrons à l'oxygène, par exemple. A partir de l'anion superoxyde formé initialement, une même suite d'EOR que dans le cas du stress intracellulaire est produite. Ainsi, le stress carbonylé se double-t-il d'un second type de stress oxydant.

A la différence des mécanismes évoqués précédemment pour les EOR d'origine mitochondriale, ce nouveau stress oxydant se produit à l'extérieur des cellules, au sein de la matrice extracellulaire. Il concerne donc les aminoacides ou les résidus des protéines de cette matrice, et notamment, les fibres de collagène et d'élastine. Ce stress oxydant, particulièrement important du fait que les systèmes de protection enzymatiques ne sont pas aussi efficaces que ceux situés dans la cellule, débouche sur une augmentation des phénomènes d'alkylation qui s'additionnent aux produits de glycation et de glycoxydation, issus du stress carbonylé.
Ainsi, le stress carbonylé, doublé d'un stress oxydant extracellulaire est au moins aussi important que le stress oxydant intracellulaire dans le développement du vieillissement et la mise en place des altérations tissulaires accompagnant les principales pathologies.

4 PCT/IB2008/054814 L'étude par les inventeurs des phénomènes conduisant au vieillissement des tissus les ont ainsi amenés à une prise en compte plus étendue des mécanismes biochimiques qui en sont responsables et à dégager de nouveaux concepts permettant de définir de nouvelles cibles biologiques d'actions complémentaires pour les combattre plus efficacement.

Leurs recherches ont alors conduit à modifier la structure de polyphénols à propriétés anti-oxydantes et piégeuse de radicaux libres, tels que ceux constitutifs d'extraits végétaux, pour leur conférer de plus grandes aptitudes à
piéger également les stresseurs carbonylés.

L'invention a donc pour but de fournir de nouvelles compositions de dérivés de polyphénols constituant des polyphénols suractivés qui sont à la fois capables d'agir avec une grande efficacité sur un plus grand nombre de cibles biologiques et sont stabilisés.

L'invention a également pour but de fournir un procédé
permettant d'obtenir de tels dérivés polyphénoliques à partir de polyphénols d'extraits végétaux.

Selon encore un autre aspect, l'invention vise la mise à
profit des propriétés de ces compositions polyphénoliques de type flavonoïdique, en cosmétologie, diététique et en thérapeutique.

Les compositions de dérivés de polyphénols de l'invention sont caractérisées en ce que lesdits polyphénols renferment des monomères, des oligomères ou des polymères d'unités répondant à la formule (I) .

5 PCT/IB2008/054814 OH
phloroglucinol B
HO OH
A C b OH
catéchol c a OH
(I) Ces unités se caractérisent par la présence simultanée d'un noyau de type phloroglucinol (noyau A) et d'un noyau de type catéchol (noyau B), reliés entre eux par un lien à 3 carbones tel que C.

Dans le cas le plus fréquent, dans ces unités, le noyau A est accolé à un hétérocycle oxygéné supplémentaire par formation d'une liaison d'un de ses oxygènes avec le carbone b du segment C (cas du squelette flavonoïde) de formule (II) cycle OH
pyrane B catéchol HO O
A C :b OH
c phloroglucinol a OH
flavonoïde (II) Les 3 carbones du segment C peuvent être hybridés sp2 (double liaison entre b et c et carbonyle en a) comme c'est le cas de la quercétine de formule (III), cycle OH
*pyrane B catéchol HO A OH
phlo roglucinol OH
OH O
quercétine (III) ou comportent une double liaison entre a et c et carbonyle en b, comme dans le cyanidol de formule (IV),

6 PCT/IB2008/054814 cycle OH
pyrylium B catéchol HO O b OH
A C
phloroglucinol â OH
OH
cyanidol (IV) ou son carbone a peut être seul hybridé sp3, ou enfin, être tous les 3 hybridés sp3, comme dans le cas de la catéchise de formule (V).

cycle OH
pyrane g catéchol HO O b /
A C OH
phloroglucinol a OH

OH
catéchine (V) Le carbone a du segment C sert alors la plus souvent de point d'attachement avec les noyaux A des autres unités pour former les oligomères ou les polymères.

Lesdits dérivés sont suractivés, en ce qui concerne leur pouvoir nucléophile, par alkylation d'au moins une fonction phénolique de chaque unité et stabilisés par estérification par des mélanges d'acides gras, majoritairement insaturés (AGI), de toutes les autres restées libres.

De manière générale, les substitutions spécifiques des dérivés des compositions de l'invention conduisent à une modulation de leur activité et les rendent capables d'inhiber en même temps et spécifiquement les mécanismes principaux impliqués dans les pathologies majeures et le vieillissement évoqués ci-dessus.

7 PCT/IB2008/054814 Avantageusement, le nombre de groupes -O-alkyles par molécule n'égale pas le nombre d'hydroxyles présents en moyenne par unité et, de préférence, il est de 1 ou 2, plus spécialement égal à 1.

Le ou les groupes alkyles sont plus particulièrement des groupes méthyles, isopropyles ou tert-butyles.

La stabilisation efficace est obtenue par formation d'esters d'AG entre les fonctions hydroxyles (alcooliques et phénoliques), restées libres après alkylation (de 2 à 3, de préférence 3), et des acides gras issus d'huiles végétales caractérisées par leur richesse particulière en acides gras majoritairement insaturés (AGI). Les huiles sont choisies pour leur impact favorable sur la santé. Avantageusement, les actifs obtenus renferment alors des proportions d'acides gras insaturés identiques à celles des huiles dont ils proviennent.
Lesdits esters comprennent de préférence les mélanges de radicaux acyles R des acides gras d'huile d'olive (Olea europea) ou d'huile de pépins de raisin (Vitis vinifera).

Il s'agit plus spécialement de radicaux R d'acides gras saturés (AGS = ac. stéarique ; 7-8%), d'acides gras monoinsaturés (AGMI = acide oléique ; 55-75%) et d'acides gras polyinsaturés essentiels (AGPI ; 15-18%) : diinsaturés (ac.
linoléiques) et triinsaturés (ac. linoléniques) des séries 0)-6 et 0)-3, présents dans les dérivés de l'invention dans des proportions identiques à celles des huiles qui exercent un bénéfice maximal sur la santé, selon les données issues de l'épidémiologie.

Cette stabilisation permet par ailleurs de protéger les polyphénols flavonoïdiques suractivés d'une destruction

8 PCT/IB2008/054814 prématurée certaine (oxydation à l'air ou à la lumière), tout en leur donnant un caractère lipophile afin d'augmenter leurs chances d'être résorbés et d'agir.

Avantageusement, cette stabilisation est cependant temporaire, et n'est plus efficace quand les dérivés sont placés en situation d'agir, afin de leur restituer tout leur pouvoir antioxydant. Elle doit donc être réversible par simple action des systèmes biologiques auxquels les groupes stabilisants sont alors exposés, et notamment, les enzymes telles que lipases, estérases ou protéases.

Plus spécifiquement, l'invention vise des compositions caractérisées en ce que lesdits dérivés unitaires répondent à
la formule (VI) R=
t 4r .ti . R
Fi, R' I u (VI) dans laquelle - R1 est un hydrogène ou le point de jonction en R7 d'une même unité

- R2 est un hydrogène, ou un radical 0-acyle d'un acide gras d'une huile végétale, représenté par R tel que défini ci-dessus.

- R3 est un hydrogène, un carbonyle ou le point de jonction en R5 ou en R6 d'une autre unité, - R4 est un radical alkyle, ou un radical acyle d'un acide gras d'une huile végétale, représenté par R tel que défini ci-dessus

9 PCT/IB2008/054814 - R5 est un hydrogène ou le point de jonction en R3 d'une autre unité, directement, ou à travers une entité
carbonée (méthylène, méthylméthyne,...) - R6 est un hydrogène ou le point de jonction en R3 d'une autre unité, directement, ou à travers une entité
carbonée (méthylène, méthylméthyne, ...), - R7 est un radical alkyle, ou un radical acyle d'un acide gras d'une huile végétale, représenté par R tel que défini ci-dessus, ou le point de jonction en R1 d'une même unité, et les diastéréoisomères et les régioisomères de ces motifs.

A titre d'exemple, on peut donner les dérivés du dimère de catéchise (B3) et du trimère d'épicatéchine (C2), de formules (VII) et (VIII) H
H

A2 O \ 2 1 le, C I A C

H O-AGI H O-AGI

dérivé du dimère B3 dérivé du trimère C2 (VII) (VIII) Selon une disposition préférée de l'invention, les dérivés définis ci-dessus correspondent à des dérivés alkylés puis stabilisés d'extraits végétaux. Ils présentent donc les structures des polyphénols présents en mélange dans ces extraits végétaux.

10 PCT/IB2008/054814 Il s'agit notamment, d'extraits végétaux de vigne, de thé vert ou fermenté, de fèves fraîches ou torréfiées de cacao ou de pin.

Les extraits de vigne sont obtenus à partir de pépins ou de marcs de raisins.

Conformément à l'invention, les compositions de dérivés de polyphénols définies ci-dessus sont obtenues en faisant réagir les compositions de polyphénols correspondantes - dans une première étape, avec un agent d'alkylation dans des conditions permettant de substituer l'hydrogène d'au moins 1 groupe OH phénolique par unité monomèrique constitutive de chaque molécule, de préférence de 1 à 2, par un groupe alkyle, et - dans une deuxième étape, avec un agent d'acylation, notamment, un anhydride ou un chlorure d'acide, dans des conditions permettant de substituer l'hydrogène des groupes -OH, encore libres après alkylation, par un mélange de radicaux acyles -COR libérés par l'agent d'acylation, R étant tel que défini ci-dessus.

La réaction d'alkylation fait appel à des réactifs disponibles commercialement, tels que des halogénures (idodures, bromures, ...), ou des esters sulfuriques à raison d'un et demi équivalent chimique) Ils sont additionnés lentement à une solution de l'extrait polyphénolique dans un solvant aprotique (acétone anhydre, par exemple), et en présence d'une base minérale (carbonate de potassium, ...), portée au reflux, sous agitation et atmosphère inerte (azote, argon, idéalement).

La réaction d'alkylation est arrêtée, après refroidissement, par ajout d'un acide dilué (chlorhydrique, par exemple) jusqu'à obtention d'un pH acide. L'agitation est poursuivie

11 PCT/IB2008/054814 pendant 45 min supplémentaires, environ. Le milieu réactionnel est concentré sous vide (évaporation du solvant) . La phase aqueuse est extraite par un égal volume de solvant non miscible (tel que acétate d'éthyle, dichlorométhane, ...), qui est lui-même lavé par deux volumes équivalents d'eau distillée (jusqu'à neutralité) . Cette phase organique est séchée sur sulfate de sodium anhydre, puis filtrée et évaporée sous pression réduite pour abandonner le résidu des polyphénols alkylés.

L'agent d'acylation est préparé à partir d'une huile végétale selon un procédé comprenant :

- la saponification des glycérides d'une huile végétale, suivie d'une acidification, - une activation par déshydratation dans le cas où l'agent d'acylation est un anhydride d'acide, ou par chloruration, dans le cas où il s'agit d'un chlorure d'acide, mais d'autres dérivés conférant le même effet d'activation peuvent être utilisés (transestérification, acylation enzymatique, selon les cas).

La réaction de saponification est effectuée en phase aqueuse en présence d'un agent alcalin comme l'hydroxyde de potassium en quantité au moins stoechiométrique, de préférence à la température de reflux. La solution est alors amenée à pH acide par addition d'acide minéral, puis extraite par un solvant organique afin d'isoler le mélange des acides libres formés lors de la réaction.

La réaction de déshydratation se déroule à reflux, en présence de solvant capable de créer un azéotrope avec l'eau, afin de permettre son élimination, au fur et à mesure de sa formation.

12 PCT/IB2008/054814 On utilise par exemple le toluène et on piège l'eau par un système type Dean Stark .

La réaction de chloruration est menée en présence de solvant capable de dissoudre les acides gras libres. Elle est catalysée par une base de Lewis et réalisée par addition lente de l'agent de chloruration, à température contrôlée, proche de 0 C. Quand l'addition est terminée, l'agitation est prolongée à la température ambiante, puis le milieu réactionnel est concentré par évaporation sous vide, et les chlorures sont purifiés par distillation.

Avantageusement:
- on utilise comme solvant de la chloruration, du dichlorométhane ou du chloroforme, par exemple, à

condition qu'il ne soit pas stabilisé par un alcool, - l'agent de chloruration est, par exemple, le chlorure de thionyle ou le chlorure d'oxalyle, - le catalyseur peut être le diméthylformamide, - la purification des chlorures d'acyles a lieu par distillation sous vide poussé, dans un four à boules (Kugelrohr).

La réaction d'acylation est le plus souvent effectuée en présence d'un solvant permettant une solubilisation, même partielle, des composés polyphénoliques alkylés résultant de la réaction d'alkylation décrite ci-dessus.

Des solvants appropriés sont choisis parmi des dérivés halogénés comme le dichlorométhane, le chloroforme ou le 1,2-dichloroéthane, ou des dérivés azotés comme la pyridine, ou même, l'hexane, selon les composés alkylés à dissoudre.

Les dérivés polyphénoliques alkylés, en solution dans le solvant de réaction choisi et avantageusement additionnés d'un

13 PCT/IB2008/054814 agent de catalyse basique (par exemple, la triéthylamine ou la pyridine), sont placés sous agitation et atmosphère inerte (argon, azote).

Quatre équivalents d'anhydrides ou de chlorures d'AG, tels que préparés ci-dessus, sont utilisés comme agents d'acylation.
Ils sont additionnés goute à goutte, en solution dans le solvant de la réaction, s'il ne s'agit pas de pyridine seule.
Dans le cas où la pyridine est à la fois le solvant et le catalyseur basique, on procède à une addition inverse .
C'est la solution des dérivés polyphénoliques qui est additionnée goutte à goutte aux acylpyridiniums préformés.

Une alternative qui peut s'appliquer, consiste à ajouter sous agitation énergique, une phase aqueuse basique (Na3PO4r K3P04) à
la solution organique (CHC131 CH2C12) des dérivés polyphénoliques alkylés et des agents d'acylation, réalisant ainsi les conditions de Schotten-Baumann.

Quelle que soit la procédure adoptée, la réaction est réalisée de préférence à température ambiante, sur une durée d'environ 7 à 8 heures.

Les dérivés estérifiés ainsi formés sont purifiés par addition d'eau acidulée (HC1, qs pH acide), puis par plusieurs lavages de la phase organique à l'eau distillée. Après séchage sur sulfate de sodium, la solution est filtrée, puis évaporée à
siccité pour livrer les actifs flavonoïdiques alkylés et stabilisés.

Les actifs à double potentialité de l'invention, capables de piéger à la fois les EOR, quelle que soit leur origine intra ou extracellulaire, et les composés dicarbonylés (anti-glycation et anti-AGEs), présentent un grand intérêt comme

14 PCT/IB2008/054814 moyens de lutte les plus complets et les plus efficaces à ce jour contre le vieillissement cutané.

Les compositions de l'invention sont donc particulièrement appropriées pour l'élaboration de préparations cosmétiques.
Dans ces préparations, les compositions sont associées à des véhicules appropriés pour un usage externe. De manière avantageuse, leur caractère liposoluble favorise leur incorporation dans les formes galéniques habituellement utilisées en cosmétique.

L'invention vise donc des compositions cosmétiques caractérisées en ce qu'elles renferment une quantité efficace pour lutter contre le vieillissement de la peau, d'une ou plusieurs compositions de dérivés de polyphénols flavonoïdiques telles que définies ci-dessus en association avec des véhicules inertes appropriés pour un usage externe.

Ces compositions se présentent sous une forme appropriée pour une administration par voie topique telle que crème, pommade, émulsion, gel, liposomes, lotion.

Elles renferment de 0,5 à 5 % de produit actif, de préférence de 2 à 3 %.

L'invention concerne également une méthode pour prévenir le vieillissement de la peau, caractérisée par l'application sur la peau ou l'ingestion d'une ou plusieurs compositions cosmétiques telles que définies ci-dessus.

Selon un autre aspect de grand intérêt, les compositions de l'invention sont utilisables en diététique. Grâce notamment à
leurs propriétés anti-radicalaires et piégeuses de composés

15 PCT/IB2008/054814 carbonylés, elles assurent une meilleure conservation des aliments. De plus, elles constituent généralement un apport de facteur vitaminique. Elles sont donc ajoutées avec avantage aux boissons, par exemple aux jus de fruits, boissons toniques, aux produits laitiers et dérivés comme le beurre.

Elles sont également utilisables telles quelles sous forme liquide, ou encore en granulés ou analogues, gels ou sous forme de pâte, par exemple incorporées dans des confiseries comme les pâtes de fruits, bonbons, pâtes à mâcher.

Les propriétés des compositions de l'invention sont également avantageusement mises à profit pour une utilisation comme médicaments.

L'invention vise ainsi des compositions pharmaceutiques, caractérisées en ce qu'elles renferment une quantité
thérapeutiquement efficace d'au moins une composition telle que définie ci-dessus, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable.

Ces compositions se présentent avantageusement sous une forme appropriée pour une administration notamment par voie orale, topique ou parentérale.

Ainsi, pour une administration par voie orale, les compositions se présentent plus particulièrement sous forme de solutions, comprimés, gélules, ou sirops.

Pour une administration par voie topique, les compositions se présentent sous forme de crème, pommades, gels, lotions ou patchs.

16 PCT/IB2008/054814 Pour une administration par voie parentérale, les compositions se présentent sous forme de solution injectable stérile ou stérilisable.

D'autres caractéristiques et avantages de l'invention sont donnés, à titre illustratif, dans les exemples qui suivent dans lesquels il est fait référence aux figures 1 à 11, qui représentent, respectivement:

- Figure 1 : le chromatogramme de CLHP-ESI-MS (TIC) des catéchines O-méthylées, - Figure 2 : le spectre IR-FT en mode ATR, des polyphénols flavanoliques de pépin de raisin alkylés (méthylés), - Figure 3: le spectre RMN 2D HMBC 1H-13C (500 MHz) des polyphénols flavanoliques de pépin de raisin alkylés par le diméthylsulfate, - Figure 4 : le spectre IR-FT des acides gras issus de la saponification d'une huile d'olive vierge , en mode ATR, - Figure 5 : le chromatogramme en phase gazeuse, détecté
par spectrométrie de masse (GC-DSQ2) des esters méthyliques préparés à partir des chlorures d'AG
d' olive, - Figure 6 : le spectre IR-FT des chlorures d'AG d'olive (en mode ATR), - Figure 7 : le spectre RMN du proton à 500 MHz (CDC13) des chlorures d'AG d'olive, - Figure 8 : le spectre IRFT des polyphénols flavanoliques de pépin de raisin alkylés et stabilisés par des AG d'huile d'olive, - Figure 9 : la partie à champs faibles du spectre de RMN du 1H (500 MHz, CDC13) des polyphénols flavanoliques

17 PCT/IB2008/054814 de pépin de raisin alkylés et stabilisés par des AG
d'huile d'olive et courbes d'intégration, - Figure 10 : la partie à champs forts du spectre de RMN
du 1H (500 MHz, CDC13) des polyphénols flavanoliques de pépin de raisin alkylés et stabilisés par des AG d'huile d'olive et courbes d'intégration, - Figure 11 : le spectre de RMN 2D HMBC 1H-13C (500 MHz, CDC13) des polyphénols flavanoliques de pépin de raisin alkylés et stabilisés par des AG d'huile d'olive.

Exemple 1 : Étape d'O-alkylation de la catéchine 50 mg (0,172mmol) de catéchise sont dissous dans 5 mL
d'acétone anhydre, dans un bicol surmonté d'un réfrigérant.
Sous agitation et atmosphère d'argon, en présence de 23,8 mg (0,172mmol, 2 éq. chimiques) de carbonate de potassium (K2CO3), on ajoute 8,3 pL (0,086 mmole = 2 éq. chimiques) de diméthylsulfate (DMS). La réaction est portée au reflux, pendant 27h.

Le milieu réactionnel est filtré sur fritté n 4, pour éliminer le K2CO3 et l'acétone est évaporée. Le résidu est repris dans 20 mL d'acétate d'éthyle. La phase organique, lavée par 2 fois 20 mL d'eau, séchée sur sulfate de sodium, filtrée et évaporée à siccité, abandonne un résidu de 48 mg (rendement brut = 91,6 %, sur la base de dérivés monométhylés, pm = 304).

Le mélange obtenu est analysé par Chromatographie Liquide Haute Performance sur colonne phase inverse (C18), avec détection en spectrométrie de masse à pression atmosphérique et ionisation par électrospray (CLHP-ESI-MS), présenté en figure 1. On observe des courants d'ions, les plus intenses, de masse caractéristique des catéchines monométhylées ([M+H]+
= 305), aux temps de rétention (TR) = 15,79 ; 15,95 ; 17,75 et 17,84 minutes, et minoritaires, de masse ([M+H]+ = 319), aux TR

18 PCT/IB2008/054814 21,66 ; 23,66 ; 24,67 ; 26,02 et 27,34 minutes, correspondant aux diverses catéchines diméthylées.

Exemple 2 : Étape d'O-alkylation de polyphénols flavonoïdiques 31,18 g ( 108 mmoles , exprimé en unités catéchiques ) d'extrait polyphénolique de pépins de raisins, sont placés en solution dans 120 mL de solvant aprotique (acétone anhydre), en présence de 6 équivalents chimiques de carbonate de potassium (44,64 g = 646 mmoles). La suspension résultante est portée au reflux, sous agitation et sous atmosphère d'argon, dans un ballon tricols d'un litre, muni d'un réfrigérant.

A l'aide d'une ampoule à brome, on ajoute goutte à goutte, sur une durée de 15 minutes, 7,65 mL du donneur de méthyle (diméthyl sulfate, 81,5 mmoles ; chaque mole de DMS libérant 2 moles de méthyle = 2x81,5 = 163 équivalents, soit = 1,5 équivalent chimique / masse d'extrait polyphénolique mise en jeu), ou d'iso-propyle (2-iodopropane).

Le calcul des équivalents chimiques se fait en comptant une moyenne maximale de 4 résidus hydroxyles phénoliques alkylables par unité flavanolique . Ainsi, on considère que chaque tranche de 290 g d'extrait correspond à 1 mole de catéchise, qui possède quatre fonctions phénoliques dont une seule, voire deux, doi(ven)t être transformée(s) en éther(s) méthylique(s), ou iso-propylique(s). L'équivalent chimique du réactif d'alkylation est donc égal au quart du nombre de moles de catéchise présentes dans l'extrait mis en oeuvre.

Après huit heures au reflux, sous atmosphère d'argon, la réaction est refroidie. Après addition d'une solution d'acide chlorhydrique au dixième, jusqu'à obtention d'un pH acide (540 mL), l'agitation est poursuivie pendant 45 min supplémentaires. Le milieu réactionnel est concentré sous vide

19 PCT/IB2008/054814 (évaporation de l'acétone). La phase aqueuse résiduelle est extraite par un égal volume d'acétate d'éthyle, qui est lavé
par deux fois 400 mL d'eau distillée (jusqu'à neutralité de l'eau de lavage). Cette phase organique est ensuite séchée sur sulfate de sodium anhydre, filtrée et évaporée sous pression réduite pour abandonner le résidu des polyphénols alkylés (20,88 g ; rendement brut = 63,9%).

Dans le cas préféré, où chaque molécule de l'extrait initial, subit une seule méthylation par unité flavanolique ( catéchise ), on obtient un mélange des différents régio-et stéréo-isomères possibles, tels que les monomères et dimères figurés ci-dessous, dans les formules IX à XXVI

OH
0~0cH / O CHOCH3 OCHHO O HO O \ HO O HO \ O OH
OH I OH

OH "'OH / '==,OH / "OH / OH
OH
OH (IX) OH (X) OH (XI) OH
/ OH OH / OH HO O \ OH
HO O \ OCH3 HO O .: \ OCH3 HO O \ OCH: (XXI) OH

OCH3 C~:OH
OH 'OH OH HCo O OH (XII) OH (XIII) OH (XIV) OH

OH
OH OH / OH ,1 1 H'CO I \ O .: OH H'CO O .: \ OH HICO O OH OH 'OH C:C

HC0 / OH "OH 'OH
OH (XV) OH (XVI) OH (XVII) OH OH
OH OH OH (XXII) OH OH
HO I O OH HO O OH HO I \ O :~OH
HO O C~:OH
OH OH OH OCH3 "OH OH
OCH3 (XVIII) OH OCH3 (XIX) / OH OCH3 (XX) OCHTO Hs "'OH 01OCHHCO O HO O OOH
OH
OH OH OH
OH
"OH OH "OH OH OH "OH OH
el 1 OH (XXIII) OH OH OH
H3CO O \ OH H3C0 I \ O .: \ OH HO I \ O .: \ OH

(XXIV) OH (XXV) OCH3 (XXVI) OH
O_1_~ O-1:1111~ O__1_~
OH OH OH

20 PCT/IB2008/054814 Comme pour l'exemple précédent, les structures alkylées (méthylées), de ces composés flavonoïdiques, sont déduites de l'analyse de leurs différents spectres :

- La présence d'éthers méthyliques phénoliques se traduit en IR (Fig.2), notamment, par l'apparition de bandes d'absorption entre 2974 et 2836 cm-1 caractéristiques des C-H de méthyles (élongation) et, entre 1064 et 1035 cm-1, celles caractéristiques des fonctions (C-0) éthers.

- Le spectre RMN 2D HMBC montre des corrélations entre des carbones aromatiques oxygénés (de 148 à 160 ppm) et les protons des éthers méthyliques, résonnant de 3,7 à 3,94 ppm. Une expansion de cette zone est insérée dans le spectre global montré en Fig.3.

Exemple 3 : Préparation des agents acylants Étape n 1 : saponification de l'huile d'olive 50,46 g d'huile d'olive vierge (57 mmoles, = "171 eq") placés dans un ballon équipé d'un condenseur, sont additionnés de 16,08 g d'hydroxyde de potassium (285 mmol, 1,67 eq), en solution dans 2,5 mL d'éthanol et 50 mL d'eau. La réaction est portée au reflux pendant 5 heures. Elle est agitée encore pendant 14 h, à température ambiante.

Après avoir étendu la solution résultante par 300 mL d'eau, on ajoute de l'acide chlorhydrique au dixième (3,7% ; p/v), jusqu'à obtenir un pH acide de la phase aqueuse (250 mL
environ). Le contenu du ballon, qui comporte un insoluble pâteux en surface, est alors transféré en ampoule à décanter et extrait par 700 mL d'hexane. La phase organique est séparée puis lavée par 2 fois 300 mL d'eau distillée (obtention d'un pH neutre de cette phase aqueuse).

21 PCT/IB2008/054814 La phase organique est séchée sur sulfate de sodium, filtrée sur fritté n 4, puis évaporée pour livrer un résidu de 42,9 g (rendement brut = 88,8%).

Le spectre infrarouge enregistré en mode ATR avec transformée de Fourier (Fig.4) montre une bande caractéristique des acides organiques libres à 1709 cm-1, en même temps que la disparition des bandes esters de l'huile de départ.

Étape n 2 : Activation des acides gras issus de la saponification de l'huile d'olive par formation de chlorures :
La solution de 41,5 g d'acides gras libres (147,1 mmoles) issus de l'étape n 1, dans 232 ml de chloroforme (stabilisé
sur amylène), est agitée, sous atmosphère d'argon, dans un ballon refroidi par un bain de glace. Par le biais d'une ampoule à brome, on introduit goutte à goutte 13,8 mL de chlorure d'oxalyle (162 mM = 1,1 eq), sur une période de 30 minutes. On introduit 1 mL de diméthylformamide (DMF), et l'agitation est poursuivie sur bain de glace pendant 5 minutes. La concentration sous pression réduite du mélange réactionnel (chloroforme et chlorure d'oxalyle en excès), fournit alors 44,3 g de résidu huileux, légèrement coloré en jaune (Rdt brut = 100%).

Par distillation dans un four à boules (kugelrhor), sous vide important (2 mm Hg), ce résidu est débarrassé de sa coloration (liquide incolore), en collectant les fractions qui distillent de 178 à 195 C.

Dans le but d'analyser la composition du mélange de chlorures d'acides gras obtenus, quelques microlitres de distillat sont exposés à du méthanol. Le totum est alors injecté sur un chromatographe en phase gazeuse équipé d'une colonne de type FAME (Fatty Acid Methyl Ester) et d'un détecteur de masse

22 PCT/IB2008/054814 en ligne (DSQ-II) . Dans le chromatogramme présenté en Fig. 5, le pic à 17,8 min correspond au stéarate (M+* = 298), celui à
18,07 min à l'oléate (M+* = 296), celui à 18,08 min à un linoléate (M+- = 294) et celui à 19,38 min au linolénate (M+- =

292). Leurs intensités relatives sont une bonne indication de leurs proportions respectives.

Les spectres IR-FT (Fig. 6) et de RMN du proton (Fig. 7) sont en parfait accord avec la formation exclusive de ces chlorures .

Une bande à 1798 cm-1, caractéristique des chlorures d'acyles.

Les protons en alpha du carbonyle (t, J= 7,5 Hz), présentent un déplacement chimique à 2,9 ppm, caractéristique de la transformation des carboxyles en chlorures d'acides.

Exemple 4 : acylation de l'extrait flavonoïdique alkylé de pépins de raisin 21,93 g (72 mmoles = 288 eq. chimiques) d'extrait flavonoïdique de pépins de raisin alkylé (méthylé), selon l'exemple n 2, sont partiellement dissous dans 270 mL de chloroforme (stabilisé par l'amylène), et placés sous atmosphère d'argon. Ils sont additionnés de l'agent basique, la triéthylamine (40,56 mL = 29,45 g (d= 0,726) = 291,5 mmoles = 1 eq. chimique), et la solution est soumise aux ultrasons pendant 5 minutes. Sous agitation magnétique et à
température ambiante, à l'aide d'une ampoule à brome, sur une période de 20 minutes, on ajoute goutte à goutte 87,55 g d'agents d'acylation tels que préparés dans l'exemple n 3 (chlorures d'AG d'huile d'olive = 288 mmoles = 1 eq. chimique) dilués dans 60 mL de chloroforme. Un dégagement gazeux se produit à chaque tombée de goutte,

23 PCT/IB2008/054814 La réaction est laissée encore sept heures sous agitation à
température ambiante, avant d'être placée en ampoule à
décanter et lavée par 190 mL d'acide chlorhydrique au dixième, 90 mL d'une solution de NaHCO3 à 10% (p/v) dans l'eau, et enfin, par de l'eau distillée jusqu'à neutralité (trois fois 90 mL) . La phase organique est séchée sur sulfate de sodium, filtrée, puis évaporée à siccité, sous pression réduite. Elle abandonne un résidu de 67,27 g d'actifs flavonoïdiques de pépins de raisin alkylés et stabilisés (= 49,68 mmoles ;
rendement brut = 69 %, pm moyen = 1354).

Dans le but d'obtenir des moyens d'identification de ces actifs, le totum est alors soumis au maximum de mesures spectrales .

- Le spectre infrarouge par transformée de Fourier acquis en mode ATR (), montre l'apparition d'une bande intense à 1764 cm-1, caractéristique des carboxyles d'esters phénoliques, concomitante de la disparition de la bande large centrée sur 3350 cm-1, qui correspondait aux hydroxyles phénoliques libres.

- Le spectre de RMN du proton (500 MHz, CDC13) est présenté
avec ses courbes intégrales, en 2 parties. A champs faibles (Fig. 9), il permet de dénombrer la proportion des protons aromatiques = 5,5 (région de 7,95 à 5,90 ppm), par rapport aux protons oléfiniques :
massif centré sur 5,35 ppm, calibré à 8 protons (en cohérence avec une moyenne de quatre oléfines par unité
catéchique). A champ forts (Fig. 10), il permet d'observer les signaux singulets des méthoxyles d'éthers aromatiques (de 4,05 à 3,58 ppm) et le massif des signaux caractéristiques des protons méthyléniques en alpha des carboxyles d'esters aromatiques, centré sur b =
2,49 ppm.

24 PCT/IB2008/054814 - Le spectre de RMN bidimensionnelle hétéronucléaire 1H-13C
à longue distance à 500 MHz (Fig. 11), obtenu en mode inverse (HMBC), fait apparaître nettement, les corrélations qui sont en parfait accord avec les structures diversifiées de polyphénols flavanoliques alkylés (éthers méthyliques d'oxygènes aromatiques) et estérifiés (esters d'acides gras majoritairement insaturés, en mélange statistique tel que résultant de l'huile d'olive utilisée pour préparer les agents d'acylation, de phénols et d'alcools alicycliques).

Dans le cas préféré, où chaque molécule de l'extrait initial n'a subi qu'une méthylation par unité flavanolique ( catéchise ), et où les fonctions phénoliques résiduelles et l'alcool flavanolique sont tous acylés par le mélange d'AG
d'huile d'olive, on obtient un mélange des différents régio-et stéréo-isomères possibles de monomères et dimères figurés ci-dessous, dans les formules XXVII à XXXI

25 PCT/IB2008/054814 O

O o O
(XXVII) O
O

O
O
O O
(XXVIII) OCH3 O
O

O
O

O
O O O
O
O O

O
(XXIX) OCH3 O O
O
X) O

_ OCH3 o O
O
O

(XXXI) OH O

26 PCT/IB2008/054814 Exemple 5 : Formulations cosmétiques FORMULE A
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101 Eau 80,8000 102 EDTA Tétrasodique 0,0500 103 Glycérine 5,0000 104 Carbomère 0,3500 201 Cétéaryl Glycosides de blé 0,7500 202 Cétéaryl Glycosides d'orge 1,7500 203 Alcool Cétéarylique 2,5000 204 Composition de l'invention 0,05 à 1 205 Butyrospermum Parkii 2,5000 206 Acétate de tocophéryle 0,5000 207 Huile de pépins de raisin (Vitis Vinifera) 3,0000 208 Alcool cétylique 1,0000 209 Cétyl phosphate de potassium 1,0000 301 Conservateurs 0,6000 Fragrance Hydroxyde de sodium qsp pH 6,00 0,2000 - FORMULE B
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..............................................
...............................................................................
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a .
101 ;:;:;: Eau :;:;:;: ;:
79,40000 102 EDTA Tétrasodique 0,05000 103 Acide Citrique qsp pH final 5,5 0,15000 201 Gomme Xanthique 0,30000 202 Butylène Glycol 5,00000 301 Cétéareth-20 1,50000 302 Stéarate de glycéryle 2,00000 303 Composition de l'invention 0,05 à 1 304 beurre de Butyrospermum Parkii 1,00000 305 Laurate d'hexyle 4,00000 306 Diméthicone 3,00000 307 Squalane 2,00000 308 Acétate de tocophéryle 0,50000 401 Conservateurs 0,60000 Fragrance 501 0,50000

Claims

1 REVENDICATIONS

1. Compositions de dérivés de polyphénols, caractérisées en ce qu'il s'agit de dérivés de polyphénols renfermant des monomères, des oligomères ou des polymères d'unités répondant à la formule (I) ces unités étant caractérisées par la présence simultanée d'un noyau de type phloroglucinol (noyau A) et d'un noyau de type catéchol (noyau B), reliés entre eux par un segment à 3 carbones tel que C, lesdits dérivés étant suractivés, en ce qui concerne leur pouvoir nucléophile, par alkylation d'au moins une fonction phénolique de chaque unité et stabilisés par estérification par des mélanges d'acides gras majoritairement insaturés (AGI) de toutes les autres fonctions hydroxyles (phénoliques et alcooliques).

2. Compositions selon la revendication 1, caractérisée en ce que dans lesdites unités le noyau A des polyphénols est accolé
à un hétérocycle oxygéné supplémentaire par formation d'une liaison d'un de ses oxygène avec le carbone b du segment C, comme dans le cas du squelette flavonoïde de formule (II)

3. Compositions selon la revendication 1, caractérisées en ce que dans lesdites unités les 3 carbones du segment C desdits polyphénols sont hybridés sp2 (double liaison entre b et c et carbonyle en a) comme pour la quercétine de formule (III) ou une double liaison est formée entre a et c et carbonyle en b, comme pour le cyanidol de formule (IV), ou le carbone a est seul hybridé sp3, ou tous les 3 sont hybridés sp3, comme dans le cas de la catéchine de formule (V) le carbone ~ du segment C pouvant alors servir de point d'attachement avec les noyaux A des autres unités pour former les oligomères ou les polymères.

4. Compositions selon l'une quelconque des revendications 1 à
3, caractérisées en ce que le nombre de groupes -O-alkyles par motif n'égale pas le nombre d'hydroxyles présents en moyenne par unité.

5. Compositions selon la revendication 4, caractérisées en ce que le nombre d'hydroxyles présents en moyenne par unité est, égal à 1 ou 2.

6. Compositions selon l'une quelconque des revendications 1 à
5, caractérisées en ce que le ou les groupes alkyles sont des groupes méthyles, isopropyles ou tert-butyles.

7. Compositions selon l'une quelconque des revendications 1 à
6, caractérisées en ce que lesdits esters sont des esters d'acides gras d'huiles végétales.

8. Compositions selon la revendication 7, caractérisées en ce que ces esters comprennent les radicaux R correspondant aux acides gras saturés, comme l'acide stéarique, aux acides gras monoinsaturés, comme l'acide oléique, et aux acides gras polyinsaturés essentiels, comme les acides linoléiques et linoléniques.

9. Compositions selon la revendication 7 ou 8, caractérisées en ce que les huiles végétales sont choisies parmi l'huile d'olive ou de pépins de raisin.

10. Compositions selon l'une quelconque des revendications 1,2, 4 à 5, caractérisées en ce que lesdits dérivés unitaires répondent à la formule (VI) dans laquelle - R1 est un hydrogène ou le point de jonction en R7 d'une même unité

- R2 est un hydrogène, ou un radical O-acyle d'un acide gras insaturé d'une huile végétale, --R3 est un hydrogène, un carbonyle ou le point de jonction en R5 ou en R6 d'une autre unité, - R4 est un radical alkyle, ou un radical acyle d'un acide gras insaturé d'une huile végétale, représenté par R tel que défini ci-dessus, - R5 est un hydrogène ou le point de jonction en R3 d'une autre unité, directement, ou à travers une entité
carbonée (méthylène, méthylméthyne, ...), - R6 est un hydrogène ou le point de jonction en R3 d'une autre unité, directement, ou à travers une entité
carbonée (méthylène, méthylméthyne, ...), - R7 est un radical alkyle, ou un radical acyle d'un acide gras d'une huile végétale, représenté par R tel que défini dans la revendication 8, ou le point de jonction en R1 d'une même unité, et les diastéréoisomères et les régioisomères de ces motifs.

11. Compositions selon la revendication 10, caractérisées en ce que lesdits dérivés sont des dérivés du dimère de catéchine (B3) et du trimère d'épicatéchine (C2), de formules (VII) et (VIII):

12. Compositions selon l'une quelconque des revendications 1 à
11, caractérisées en ce que lesdits dérivés correspondent à
des dérivés stabilisés et alkylés d'extraits végétaux.

13. Compositions selon la revendication 12, caractérisées en ce que lesdits extraits végétaux sont des extraits de vigne, thé vert ou fermenté, fèves fraîches ou torréfiées de cacao ou de pin.

14. Compositions selon la revendication 13, caractérisées en que lesdits extraits de vigne sont obtenus à partir de pépins ou des mares de raisin.

15. Procédé de préparation de compositions selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, caractérisé en ce qu'il comprend la réaction des compositions de polyphénols formés d'unités telles que définies dans l'une quelconque des revendications 1 à 3, - dans une première étape, avec un agent d'alkylation dans des conditions permettant de substituer l'hydrogène d'au moins 1 groupe OH phénolique par unité monomèrique constitutive de chaque molécule, de préférence de 1 à 2, par un groupe alkyle, et - dans une deuxième étape, avec un agent d'acylation, notamment, un anhydride ou un chlorure d'acide, dans des conditions permettant de substituer l'hydrogène des groupes -OH, encore libres après alkylation, par un mélange de radicaux acyles -COR libérés par l'agent d'acylation, R étant tel que défini dans la revendication 8.

16. Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce que l'agent d'acylation est obtenu à partir d'une huile végétale selon un procédé comprenant :

- la saponification des glycérides d'une huile végétale, suivie d'une acidification, - une activation par déshydratation dans le cas où
l'agent d'acylation est un anhydride d'acide, ou par chloruration, dans le cas où il s'agit d'un chlorure d' acide

17. Compositions cosmétiques, caractérisées en ce qu'elles renferment une quantité efficace pour lutter contre le vieillissement de la peau, d'une ou plusieurs compositions de dérivés de polyphénols selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, en association avec des véhicules inertes appropriés pour un usage externe.

18. Compositions selon la revendication 17, caractérisées en ce qu'elles se présentent sous une forme appropriée pour une administration par voie topique telle que crème, pommade, émulsion, gel, liposomes, lotion.

19. Compositions selon la revendication 17 ou 18, caractérisées en ce qu'elles renferment de 0,5 à 5 % de produit actif, de préférence de 2 à 3%.

20. Application des compositions selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, en diététique.

21. Application selon la revendication 20, caractérisée en ce que lesdites compositions sont ajoutées aux boissons, par exemple aux jus de fruits, boissons toniques, aux produits laitiers et dérivés comme le beurre, sous forme liquide, ou encore en granulés ou analogues, gels ou sous forme de pâte, par exemple incorporées dans des confiseries comme les pâtes de fruits, bonbons, pâtes à mâcher.

22. Compositions selon l'une quelconque des revendications 1 à
14, pour une utilisation comme médicaments.

23. Compositions pharmaceutiques, caractérisées en ce qu'elles renferment une quantité thérapeutiquement efficace d'au moins une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à
14, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable.

24. Compositions selon la revendication 22 ou 23, caractérisées en ce qu'elles se présentent sous une forme appropriée pour une administration par voie orale, topique ou parentérale.

25. Compositions selon la revendication 24, caractérisées en ce qu'elles se présentent sous une forme pour une administration par voie orale, telle que solution, comprimé, gélule ou sirop.

26. Compositions selon la revendication 24, caractérisée en ce qu'elle se présente sous une forme pour une administration par voie topique, telle que crème, pommade, gels, lotions ou patch.

27. Compositions selon la revendication 24, caractérisée en ce qu'elle se présente sous une forme pour une administration par voie parentérale, telle qu'une solution injectable stérile ou stérilisable.